CN115304653A - 从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物及其制备方法与应用，可有效解决2型糖尿病的用药问题，其解决的技术方案是，从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物，分别为新的化合物环烯醚萜苷cornuofficinaliside F（1）、cornuofficinaliside H（2）、cornuofficinaliside L（3）和cornuofficinaliside O（4），本发明制备方法简单易行，产品纯度高，药理活性研究结果显示这四种新型环烯醚萜苷类化合物可显著提高胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量，并可显著促进HepG2细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖摄取量，表明这四种新型环烯醚萜苷类化合物具有潜在的治疗糖尿病的作用，在抗糖尿病药物开发中具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物及其制备方法与应用。
背景技术
糖尿病不止是一种医疗健康问题，也是一种全球性社会灾难，如何预防和治疗糖尿病已成为目前医药界重点关注的一大课题。因为其慢性病属性，糖尿病导致了巨大的病患痛苦，并导致大量患者家庭因病致贫。根据国际糖尿病联合会(International DiabetesFederation，IDF)的统计，2019年全球20-79岁人群患糖尿病的人数为4.63亿，预计到2030年糖尿病患者将达5.78亿；预计到2045年，糖尿病患者将达7.00亿，比2019年增加51％。2019年全球在糖尿病及其并发症的医疗花费达7603亿美元。
近年来，随着对糖尿病发病机制研究的深入，针对不同作用靶点的抗糖尿病新药的研发逐渐增多。现有治疗药物存在严重副反应，例如促进胰岛素分泌剂磺酰脲类易发生低血糖、过敏反应及肝肾功能损伤；双胍类轻者有胃肠道反应，重者乳酸性酸中毒；α-葡萄糖苷酶抑制剂不宜用于胃肠道功能紊乱者；胰岛素增敏剂有增加心血管事件发生和膀胱癌的风险。因此，疗效更好、副作用更低的抗糖尿病药物创制仍然是药学研究的一个重大课题。
山茱萸(Cornus officinalis)是我国最具特色的中药材大品种，主要分布于河南、浙江、陕西、安徽等地，资源丰富，被国家列为用量较大的重点药材之一。山茱萸传统上以干燥成熟果肉入药，又称山萸肉、山芋肉、山于肉、枣皮等，在我国已有2000多年的药用历史。其具有补益肝肾、收涩固脱之功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等症。化学成分研究表明，山茱萸中分得的主要成分为环烯醚萜类、鞣质类和黄酮类，尚含少量挥发油类、有机酸类、三萜类等成分(Dong Y,Feng Z,ChenH,et al.Corni Fructus:a review of chemical constituents and pharmacologicalactivities[J].Chin Med-UK,2018,13:34)。药理研究表明其具有降血糖、改善骨质疏松、免疫调节、抗炎、抗心律失常、抗衰老等作用。糖尿病在中医药理论中属于消渴病范畴，山茱萸治疗消渴病历史悠久，疗效确切，宋代《全生指迷方》中茱萸丸，以山茱萸配伍肉苁蓉、五味子和山药，治疗消渴症；明代《普济方》中载苁蓉丸，取肉苁蓉、五味子、山茱萸各等份，可补肾益精，生津止渴，主治消渴；清末民初《医学衷中参西录》中载滋粹饮，山茱萸和黄芪、山药同用，治疗脾肾两虚，精亏液耗之消渴证。现代药理学研究亦证明山茱萸及其中的部分化学成分具有显著的降血糖及治疗糖尿病并发症作用。Han及He的研究表明，山茱萸提取物(300mg kg-1 2day-1和400mg kg-1day-1)及从山茱萸中分离得到的马钱苷、莫诺苷和乌苏酸(200mg kg-1day-1)灌胃给药可显著降低SZT诱导的糖尿病大鼠模型的空腹血糖，并减轻糖尿病引起的多饮、多食、多尿及体重减轻症状。此外，马钱苷、莫诺苷、乌苏酸和丁基莫诺苷(100μmol L-1)可以保护胰腺β细胞免受高血糖导致的过度氧化应激及细胞凋亡，且增加胰岛素的释放。杨勇等研究表明，山茱萸醇提取物可显著提高血清胰岛素水平。山茱萸提取物及有效部位抗DM作用明确，但对单体化合物的抗DM活性研究较少，本发明涉及的四个新型环烯醚萜苷关于其制备方法及抗糖尿病的研究尚未见报道。
发明内容
针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物及其制备方法与应用，可有效解决2型糖尿病的用药问题。
本发明解决的技术方案是，从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物，分别为新的化合物环烯醚萜苷cornuofficinaliside F(1)、cornuofficinaliside H(2)、cornuofficinaliside L(3)和cornuofficinaliside O(4)，化学结构式分别为：
其制备方法为：
1)将山茱萸果肉10–100kg，用2–10倍量去离子水在80–100℃下回流提取1–3次，每次1–3小时，提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3–10次，正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O(0:100,20:80,30:70,40:60,95:5；v/v)梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位(BF1–BF5)；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O(0:100,20:80,40:60,60:40,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位(BF2a–BF2e)，BF2b部位过ToyopearlHW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位(BF2b1–BF2b3)，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)；
4)将步骤3)得到的BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分(BF2b1a1–BF2b1a5)，BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)，BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，得到5个部位(BF2b1a1–BF2b1a5)。
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离(17％MeCN,3mL/min)，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离(COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；20％MeCN，3mL/min)，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
本发明所述的四个环烯醚萜苷化合物在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。
本发明还提供一种药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的甾体，所述的活性成分包括权利要求1所述的环烯醚萜苷化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、溶剂化物、前药分子、代谢物或混合物。
本发明所述的4个新型环烯醚萜苷类化合物cornuofficinaliside F(1)、cornuofficinaliside H(2)、cornuofficinaliside L(3)和cornuofficinaliside O(4)，采用山茱萸果肉，经过溶剂提取，大孔吸附树脂层析、硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、MCI柱层析、Toyopearl HW-40凝胶柱层析、制备液相分离等步骤获得，制备方法简单易行，产品纯度高。药理活性研究结果显示这四种新型环烯醚萜苷类化合物可显著提高胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量，并可显著促进HepG2细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖摄取量，表明这四种新型环烯醚萜苷类化合物具有潜在的治疗糖尿病的作用，在抗糖尿病药物开发中具有重要的意义。
附图说明
图1为本发明新型环烯醚萜苷1的1H-NMR图谱。
图2为本发明新型环烯醚萜苷1的13C-NMR图谱。
图3为本发明新型环烯醚萜苷2的1H-NMR图谱。
图4为本发明新型环烯醚萜苷2的13C-NMR图谱。
图5为本发明新型环烯醚萜苷3的1H-NMR图谱。
图6为本发明新型环烯醚萜苷3的13C-NMR图谱。
图7为本发明新型环烯醚萜苷4的1H-NMR图谱。
图8为本发明新型环烯醚萜苷4的13C-NMR图谱。
图9为本发明化合物1–4对胰岛素诱导的HepG2细胞葡萄糖摄取量的影响流式图。
图10为本发明化合物1–4对胰岛素诱导的HepG2细胞葡萄糖摄取量的影响柱状图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1：
本发明在具体实施时，四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)由山茱萸果肉15kg为原料，用5倍量去离子水在90℃下回流提取2次，每次1小时。提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取5次。正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O(0:100,20:80,30:70,40:60,95:5；v/v)梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位(BF1–BF5)。
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O(0:100,20:80,40:60,60:40,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位(BF2a–BF2e)，BF2b部位过ToyopearlHW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位(BF2b1–BF2b3)，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)；
4)将步骤3)得到的BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分(BF2b1a1–BF2b1a5)，BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)，BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，得到5个部位(BF2b1a1–BF2b1a5)；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离(17％MeCN,3mL/min)，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离(COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；20％MeCN，3mL/min)，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
实施例2：
本发明在具体实施时，四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)由山茱萸果肉50kg为原料，用8倍量去离子水在80℃下回流提取1次，每次2小时。提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取8次。正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O(0:100,20:80,30:70,40:60,95:5；v/v)梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位(BF1–BF5)；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O(0:100,20:80,40:60,60:40,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位(BF2a–BF2e)，BF2b部位过ToyopearlHW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位(BF2b1–BF2b3)，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)；
4)将步骤3)得到的BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分(BF2b1a1–BF2b1a5)，BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)。BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，得到5个部位(BF2b1a1–BF2b1a5)；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离(17％MeCN,3mL/min)，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离(COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；20％MeCN，3mL/min)，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
实施例3：
本发明在具体实施时，四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)由山茱萸果肉80kg为原料，用10倍量去离子水在100℃下回流提取3次，每次3小时，提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取10次。正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O(0:100,20:80,30:70,40:60,95:5；v/v)梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位(BF1–BF5)；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O(0:100,20:80,40:60,60:40,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位(BF2a–BF2e)，BF2b部位过ToyopearlHW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位(BF2b1–BF2b3)，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)。BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分(BF2b1a1–BF2b1a5)；
4)将步骤3)得到的BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O(20:80,50:50,70:30,100:0；v/v)梯度洗脱，得7个部位(BF2b1a–BF2b1g)。BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O(10:1:0.1；v/v)梯度洗脱，得到5个部位(BF2b1a1–BF2b1a5)；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离(17％MeCN,3mL/min)，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离(COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；20％MeCN，3mL/min)，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
本发明制备的新的4个环烯醚萜苷化合物药理活性结果显示可显著提高胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量，可作为治疗2型糖尿病的药物使用，相关实验资料如下：
一、本发明化合物的结构鉴定：
化合物1–4的1H-NMR及13C-NMR图谱数据见表1和2。
表1.化合物1–4的1H-NMR(500MHz，CD3OD)谱数据
a在同列数据中信号可能翻转。
表2.化合物1–4的13C-NMR(125MHz，CD3OD)谱数据
a,b,c,d,e,f在同列数据中信号可能翻转。
二、本发明环烯醚萜苷类化合物的抗糖尿病作用
1)HepG2细胞的培养
从-80℃冰箱中取出冻存管，迅速置入37℃水浴中振摇使细胞快速融化，1000r/min离心10min。用75％酒精擦拭消毒后，在超净台中操作，弃去上清，重复用培养基稀释漂洗，再转入培养瓶，置于CO2培养箱中培养，次日更换一次培养基后，再继续培养。
当细胞超过培养皿贴壁面的80％以上表面面积时，需进行传代培养。具体方法为：倾去旧的培养基，用PBS缓冲液洗2次，加入1～2mL0.25％的胰蛋白酶，使细胞贴壁面朝下，来回轻轻晃动，使胰蛋白酶与细胞充分的接触，在倒置显微镜下观察，消化约2min后细胞突起回缩、细胞之间间隙增大、细胞缩成圆形，此时倾弃胰酶，加入新鲜含体积分数为10％小牛血清的高糖DMEM培养基，反复吹打培养皿底壁，使已经消化的细胞脱离培养皿底壁，吹打过程须有序进行，即从一边开始到另一边结束。经吹打后得到细胞悬液，放入CO2培养箱中继续培养。每3天按1:3比例传代1次。
2)细胞造模与给药
选取最佳生长期的细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，终止消化后，用含15％的胎牛血清的DMEM配置成细胞浓度5×104，接种于96孔板上，每孔100μL细胞悬液，放入培养箱中，待细胞贴壁后，将培养基换为不含血清的培养基，饥饿24h后，加入含胰岛素(20μM)的培养基，培养24h后，弃去培养基后，用0.01mol/LPBS洗涤后，对照组与模型组加入无血清培养基，给药组加入相应浓度的含药培养基，孵育24h。
3)细胞活力检测
给药24h后，每孔更换100μL无血清培养基，并加入10μL CCK-8，放入37℃恒温箱中，反应1h后，取出置于酶标仪中检测，波长设定为450nm，测定吸光度值，记录数值并进行相应的统计学分析。
4)葡萄糖消耗实验
给药24h后，收集培养基上清液，使用葡萄糖含量检测试剂盒测定葡萄糖含量。未接种细胞培养液中葡萄糖含量减去各组细胞上清液中葡萄糖含量即可得到葡萄糖消耗量(GC)。相对葡萄糖消耗量(RGC)用以下公式计算：RGC＝GC/OD。
5)葡萄糖摄取实验
用2-NBDG测定化合物的葡萄糖摄取率。HepG2细胞(1×105cells/mL)接种于6孔板，在37℃、5％CO2条件下孵育24h。细胞和不同浓度(5,10and 20μM)的化合物培养24h后，加入2-NBDG(25μM)继续培养1h。收集细胞后，用PBS清洗，重悬于PBS中。488nm激发光和530nm发射光下用流式细胞仪检测荧光强度。实验结果用FlowJo 10.8软件分析。
6)实验结果
CCK-8测试结果表明化合物1–4均未对HepG2细胞胰岛素抵抗模型表现出显著的细胞毒活性。和胰岛素抵抗模型组相比，化合物1-4均表现出显著的增加葡萄糖消耗量的作用，结果显示于表3。
表3化合物1–4对胰岛素诱导的HepG细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量(
n＝4).
##P<0.01,versus control group；*P<0.05or**P<0.01,versus insulin group.
另外，葡萄糖摄取实验结果表明化合物1–4均显著促进了HepG2胰岛素抵抗模型的葡萄糖摄取，结果如图9和图10所示。
本发明采用山茱萸科山茱萸属植物山茱萸的果肉，经过溶剂提取，大孔吸附树脂柱层析、MCI gel、Toyopearl HW-40柱层析、硅胶柱层析、制备高效液相分离等步骤获得四种新型环烯醚萜苷cornuofficinaliside F(1)、cornuofficinaliside H(2)、cornuofficinaliside L(3)和cornuofficinaliside O(4)，药理活性结果显示这四种化合物可显著提高胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量，并可显著促进HepG2细胞胰岛素抵抗模型的摄取，可作为治疗2型糖尿病的药物使用，是新型环烯醚萜苷及其用途上的创新，具有良好的应用和推广价值。
Claims (7)
1.从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物，其特征在于，分别为新的化合物环烯醚萜苷cornuofficinaliside F(1)、cornuofficinaliside H(2)、cornuofficinaliside L(3)和cornuofficinaliside O(4)，化学结构式分别为：
2.权利要求1所述的从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将山茱萸果肉10–100kg，用2–10倍量去离子水在80–100℃下回流提取1–3次，每次1–3小时，提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3–10次，正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O按体积比0:100、20:80、30:70、40:60、95:5梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位BF1–BF5；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O按体积比0:100、20:80、40:60、60:40、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位BF2a–BF2e，BF2b部位过Toyopearl HW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位BF2b1–BF2b3，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位BF2b1a–BF2b1g；
4)将步骤3)得到的BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分BF2b1a1–BF2b1a5，BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，得7个部位BF2b1a–BF2b1g，BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1洗脱，得到5个部位BF2b1a1–BF2b1a5；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离，分离条件17％MeCN,3mL/min，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离，分离条件COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；20％MeCN，3mL/min，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
3.根据权利要求2所述的从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)由山茱萸果肉15kg为原料，用5倍量去离子水在90℃下回流提取2次，每次1小时，提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取5次，正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O按体积比0:100、20:80、30:70、40:60、95:5梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位BF1–BF5；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O按体积比0:100、20:80、40:60、60:40、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位BF2a–BF2e，BF2b部位过Toyopearl HW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位BF2b1–BF2b3，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位BF2b1a–BF2b1g；
4)将步骤3)得到的BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分BF2b1a1–BF2b1a5，BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，得7个部位BF2b1a–BF2b1g，BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1洗脱，得到5个部位BF2b1a1–BF2b1a5；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离，分离条件17％MeCN,3mL/min，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离，分离条件COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；20％MeCN，3mL/min，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
4.根据权利要求2所述的从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)由山茱萸果肉50kg为原料，用8倍量去离子水在80℃下回流提取1次，每次2小时，提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取8次，正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O按体积比0:100、20:80、30:70、40:60、95:5梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位BF1–BF5；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O按体积比0:100、20:80、40:60、60:40、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位BF2a–BF2e，BF2b部位过Toyopearl HW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位BF2b1–BF2b3，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位BF2b1a–BF2b1g；
4)将步骤3)得到的BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1洗脱，合并相似流分，得5个部分BF2b1a1–BF2b1a5，BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，得7个部位BF2b1a–BF2b1g，BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1洗脱，得到5个部位BF2b1a1–BF2b1a5；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离，分离条件17％MeCN,3mL/min，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离，分离条件COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；20％MeCN，3mL/min，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH,3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
5.根据权利要求2所述的从山茱萸中提取的四个环烯醚萜苷化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)由山茱萸果肉80kg为原料，用10倍量去离子水在100℃下回流提取3次，每次3小时，提取液减压浓缩成浸膏，该浸膏用水溶解后通过D-101大孔吸附树脂柱，先用超纯水洗脱，然后用95％乙醇洗脱；
2)95％乙醇洗脱部位用水溶解后，依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取10次。正丁醇萃取部位减压浓缩成浸膏后，用水溶解，过Diaion HP-20大孔吸附树脂，分别以EtOH-H2O按体积比0:100、20:80、30:70、40:60、95:5梯度洗脱，各流分用硅胶GF254薄层板检识，以体积比为4:1–1:1的二氯甲烷-甲醇做展开剂，10％硫酸乙醇液做显色剂，合并相似流分，得到5个部位BF1–BF5；
3)将步骤2)得到的BF2部位过MCI柱，以MeOH-H2O按体积比0:100、20:80、40:60、60:40、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得到5个部位BF2a–BF2e，BF2b部位过Toyopearl HW-40gel柱，以甲醇洗脱，合并相似流分，得3个部位BF2b1–BF2b3，BF2b1再次通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，合并相似流分，得7个部位BF2b1a–BF2b1g，BF2b1a通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1梯度洗脱，合并相似流分，得5个部分BF2b1a1–BF2b1a5；
4)将步骤3)得到的BF2b1部位通过Toyopearl HW-40柱，以MeOH-H2O按体积比20:80、50:50、70:30、100:0梯度洗脱，得7个部位BF2b1a–BF2b1g，BF2b1a部位经硅胶柱层析，用CH2Cl2-MeOH-H2O按体积比10:1:0.1洗脱，得到5个部位BF2b1a1–BF2b1a5；
5)将步骤4)得到的BF2b1a4部位进行半制备液相分离，分离条件17％MeCN,3mL/min，收集保留时间50min和60min之间的峰，再次进行半制备液相分离，分离条件COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；20％MeCN，3mL/min，得到化合物2和3；
6)将步骤3)得到的BF2c部位通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1梯度洗脱，得5个部位BF2c1–BF2c5，BF2c2通过硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH按体积比20:1、15:1、10:1、5:1梯度洗脱，得9个部位BF2c2a–BF2c2i；
7)将步骤6)得到的BF2c2g部位经半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm,10×250mm；42％MeOH，3mL/min，得化合物1；
8)将步骤6)得到的BF2c3部位用Sephadex LH-20柱层析，以CH2Cl2-MeOH按体积比1:1洗脱，得到3个部位BF2c3a–BF2c3c，BF2c3b部位用半制备HPLC纯化，上COSMOSIL C18-MS-II柱，5μm，10×250mm；19％MeCN；3mL/min，得到化合物4。
6.一种药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的甾体，其特征在于，所述的活性成分包括权利要求1所述的环烯醚萜苷化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、溶剂化物、前药分子、代谢物或混合物。
7.权利要求1所述的四个环烯醚萜苷化合物在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116333015A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-06-27 | 河南中医药大学 | 一种从山茱萸叶中制备山茱萸新萜a的方法及其应用 |
| CN116574144A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-08-11 | 河南中医药大学 | 一种从山茱萸叶中制备山茱萸新苷f的方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103110651A (zh) * | 2013-02-06 | 2013-05-22 | 南京中医药大学 | 山茱萸中有效成分马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用 |
| CN114702536A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-07-05 | 河南中医药大学 | 一种新型环烯醚萜苷二聚体的制备方法及其应用 |
-
2022
- 2022-08-16 CN CN202210980491.5A patent/CN115304653B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103110651A (zh) * | 2013-02-06 | 2013-05-22 | 南京中医药大学 | 山茱萸中有效成分马钱苷在制备治疗糖尿病药物中的应用 |
| CN114702536A (zh) * | 2022-04-15 | 2022-07-05 | 河南中医药大学 | 一种新型环烯醚萜苷二聚体的制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| XIAN-SHENG YE等: "Cornusides A–O, Bioactive Iridoid Glucoside Dimers from the Fruit of Cornus officinalis", JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS, vol. 80, no. 12, pages 3081 - 3330 * |
| 叶贤胜: "中药山茱萸的化学成分和生物活性研究", 硕士学位论文, no. 08, pages 1 - 293 * |
| 崔永霞等: "山茱萸环烯醚萜苷类成分的研究进展", 中华中医药杂志(原中国医药学报), vol. 36, no. 5, pages 2869 - 2874 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116333015A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-06-27 | 河南中医药大学 | 一种从山茱萸叶中制备山茱萸新萜a的方法及其应用 |
| CN116574144A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-08-11 | 河南中医药大学 | 一种从山茱萸叶中制备山茱萸新苷f的方法及其应用 |
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| CN115304653B (zh) | 2024-05-28 |
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