CN115304652A - 一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法 - Google Patents
一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115304652A CN115304652A CN202210876309.1A CN202210876309A CN115304652A CN 115304652 A CN115304652 A CN 115304652A CN 202210876309 A CN202210876309 A CN 202210876309A CN 115304652 A CN115304652 A CN 115304652A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sesamoside
- methanol
- preparing
- silica gel
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- XZVXEPPPQBLGMQ-HISQCTEXSA-N methyl (1ar,1bs,2s,5ar,6r,6as)-5a,6-dihydroxy-1a-methyl-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-1b,2,6,6a-tetrahydrooxireno[1,2]cyclopenta[4,5-c]pyran-5-carboxylate Chemical compound O([C@@H]1OC=C([C@]2([C@H](O)[C@@H]3O[C@]3(C)[C@H]21)O)C(=O)OC)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O XZVXEPPPQBLGMQ-HISQCTEXSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- XZVXEPPPQBLGMQ-UHFFFAOYSA-N sesamoside Natural products C12C3(C)OC3C(O)C2(O)C(C(=O)OC)=COC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O XZVXEPPPQBLGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- 241000209046 Pennisetum Species 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 144
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 72
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 39
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims abstract description 34
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 32
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 32
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 24
- PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N (+)-sesamin Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@H]2OC[C@H]3[C@@H]2CO[C@@H]3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N 0.000 claims abstract description 21
- PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N epiasarinin Natural products C1=C2OCOC2=CC(C2OCC3C2COC3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- VRMHCMWQHAXTOR-CMOCDZPBSA-N sesamin Natural products C1=C2OCOC2=CC([C@@H]2OC[C@@]3(C)[C@H](C=4C=C5OCOC5=CC=4)OC[C@]32C)=C1 VRMHCMWQHAXTOR-CMOCDZPBSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 14
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 244000150738 Sesamum radiatum Species 0.000 abstract description 7
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 4
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 abstract description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- LUSZGTFNYDARNI-UHFFFAOYSA-N Sesamol Natural products OC1=CC=C2OCOC2=C1 LUSZGTFNYDARNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- UIOFUWFRIANQPC-JKIFEVAISA-N Floxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=C(F)C=CC=C1Cl UIOFUWFRIANQPC-JKIFEVAISA-N 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- -1 iridoid glycoside compound Chemical class 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 241000157862 Dicamptodontidae Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 2
- 229930182489 iridoid glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000008145 iridoid glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000208421 Ericaceae Species 0.000 description 1
- 241001071804 Gentianaceae Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000207834 Oleaceae Species 0.000 description 1
- 241000013557 Plantaginaceae Species 0.000 description 1
- 241001107098 Rubiaceae Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 238000010248 power generation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
- C07H1/08—Separation; Purification from natural products
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明提供了一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，包括如下步骤：S1、将巨菌草烘干，粉碎，得到巨菌草颗粒；S2、向巨菌草颗粒中加入乙醇，浸泡，过滤；滤液减压浓缩；S3、向步骤S2得到的提取物中加入正丁醇，反复萃取2‑4次，收集后萃取液，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状样品；S4、取步骤S3所得的少量粘稠状样品进行TLC分析；S5、将样品溶于甲醇后，加入硅胶，作为干法上样的硅胶样品；S6、将步骤S5所得的硅胶样品用洗脱剂洗脱；S7、HPLC分析与制备野芝麻新甙；该方法以巨菌草为原料，能够将巨菌草中的野芝麻新甙提取出来，得率≥0.004g/Kg，制得的野芝麻新甙纯度高≥85％。
Description
技术领域
本发明涉及巨菌草技术领域，尤其是涉及一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法。
背景技术
野芝麻新甙是环烯醚萜苷类化合物。环烯醚萜苷类化合物以游离或结合状态存在存在于双子叶植物中，如茜草科、鹿蹄草科、水晶兰科、玄参科、唇形科、龙胆科和木犀科等植物。该类化合物具有广泛的生物活性，具有抗病毒、消炎、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、助消化、增强免疫等功能。。
巨菌草是系多年生禾本科直立丛生型植物，根系发达，生长迅速，已知其富含有机酸、多酚类、蛋白质、纤维素、糖类等生物物质。巨菌草适应能力强，在我国各地区被广泛种植。目前巨菌草多用于饲料、沼气发酵生产、燃烧发电、生物质乙醇制造等传统领域上，缺乏从巨菌草中提取生物活性物质的技术途径。
目前，还未见过利用巨菌草制备野芝麻新甙的报道。因此，从巨菌草中分离提取以野芝麻新甙为主的环烯醚萜苷类化合物，不仅能够丰富野芝麻新甙的来源，而且对于巨菌草的高附加值利用具有重要意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法。该方法以巨菌草为原料，能够将巨菌草中的野芝麻新甙提取出来，得率≥0.004g/Kg，制得的野芝麻新甙纯度高≥85％，提高了巨菌草的高价值化利用。
为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，包括如下步骤：
S1、将巨菌草烘干，用粉碎机将巨菌草粉碎，得到巨菌草颗粒；
S2、向巨菌草颗粒中加入乙醇，室温下浸泡6-8天，过滤后获得滤液；滤液减压浓缩后除去乙醇，获得绿色水溶性提取物；再重复提取1-2次，将提取物合并；
S3、向步骤S2得到的提取物中加入正丁醇，反复萃取2-4次，收集后萃取液，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状样品；
S4、取步骤S3所得的少量粘稠状样品进行TLC分析，用展开剂在玻璃板上展开，然后滴加10％硫酸乙醇溶液进行显色，点样后，观察是否有某个点的物质移动的相对距离与野芝麻新甙标准品一致；如果有，进行下一步；
S5、将步骤S3所得的粘稠状样品溶于甲醇后，加入硅胶，待溶剂自然挥发后作为干法上样的硅胶样品；
S6、将步骤S5所得的硅胶样品用氯仿搅拌后装柱，待硅胶沉降完全后上样并用洗脱剂洗脱；收集与野芝麻新甙标准品移动距离一致的组分；
S7、HPLC分析与制备野芝麻新甙，
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 column(250mm×4.6mm i.d.,5μm)，波长232nm，洗脱条件：0min，10％甲醇；20min，50％甲醇；25min，100％甲醇，30min，100％甲醇，35min，10％甲醇；流速1ml/min，柱温35℃；收集野芝麻新甙组分，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状后，加入水溶解，冷冻干燥为野芝麻新甙粉末。
作为优选的实施方式，步骤S1中，所述巨菌草颗粒目数为20-40目。
作为优选的实施方式，步骤S2中，所述乙醇为65-75wt％乙醇。
作为优选的实施方式，步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:9-11。
作为优选的实施方式，步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:2-4。
作为优选的实施方式，步骤S4中，所述展开剂为氯仿、甲醇和乙酸的混合溶液。
作为优选的实施方式，步骤S4中，所述氯仿：甲醇：乙酸重量比为2:1:0.1-5:1:0.1。
作为优选的实施方式，步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为20-40:1。
作为优选的实施方式，步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为20-50:1。
作为优选的实施方式，步骤S6中，所述硅胶样品和氯仿的重量比为1:1-2。
作为优选的实施方式，步骤S6中，所述洗脱剂为氯仿和甲醇的混合溶液。
作为优选的实施方式，步骤S6中，所述进行洗脱是指用氯仿:甲醇体积比＝8:1、5:1、3:1和1:1的混合溶液，每个梯度洗脱体积为250mL，每管收集30mL；利用步骤S4的TLC条件对每一管组分进行分析，收集与Ipolamiide标准品移动距离一致的组分。
本发明所记载的任何范围包括端值以及端值之间的任何数值以及端值或者端值之间的任意数值所构成的任意子范围。
如无特殊说明，本发明中的各原料均可通过市售购买获得，本发明中所用的设备可采用所属领域中的常规设备或参照所属领域的现有技术进行。
本发明的有益效果
与现有技术相比，本发明以巨菌草为原料，能够将巨菌草中的野芝麻新甙提取出来，得率≥0.004g/Kg，制得的野芝麻新甙纯度高≥85％，提高了巨菌草的高价值化利用。
附图说明
图1为本发明实施例1产物野芝麻新甙的提取离子流图(EIC)；
图2为本发明实施例1产物野芝麻新甙的LC-MS质谱图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
除非另有说明，本文中所用的所有百分比和比率均以总组合物重量计。除非另有说明，本文提及的所有成分的百分数、比例和含量均基于该成分的实际含量，并不包括在市售产品找那个可以与这些成分组合的溶剂、填料或其它物质。
本文中的术语“包含/包括”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。
本文中的术语“优选地”和它的变体是指在特定环境下能够提供特定有益效果的本发明的实施方案。然而，其它的实施方案在相同或其它的环境下也可以是优选的。此外，一个或多个优选实施方案的详细描述并不表示其它实施方案是无用的，并且不旨在本发明的范畴中排除其它的实施方案。
本发明实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
作为本发明的一个方面，本发明一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，包括如下步骤：
S1、将巨菌草烘干，用粉碎机将巨菌草粉碎，得到巨菌草颗粒；
S2、向巨菌草颗粒中加入乙醇，室温下浸泡6-8天，过滤后获得滤液；滤液减压浓缩后除去乙醇，获得绿色水溶性提取物；再重复提取1-2次，将提取物合并；
S3、向步骤S2得到的提取物中加入正丁醇，反复萃取2-4次，收集后萃取液，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状样品；
S4、取步骤S3所得的少量粘稠状样品进行TLC分析，用展开剂在玻璃板上展开，然后滴加10％硫酸乙醇溶液进行显色，点样后，观察是否有某个点的物质移动的相对距离与野芝麻新甙标准品一致；如果有，进行下一步；
S5、将步骤S3所得的粘稠状样品溶于甲醇后，加入硅胶，待溶剂自然挥发后作为干法上样的硅胶样品；
S6、将步骤S5所得的硅胶样品用氯仿搅拌后装柱，待硅胶沉降完全后上样并用洗脱剂洗脱；收集与野芝麻新甙标准品移动距离一致的组分；
S7、HPLC分析与制备野芝麻新甙，
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 column(250mm×4.6mm i.d.,5μm)，波长232nm，洗脱条件：0min，10％甲醇；20min，50％甲醇；25min，100％甲醇，30min，100％甲醇，35min，10％甲醇；流速1ml/min，柱温35℃；收集野芝麻新甙组分，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状后，加入水溶解，冷冻干燥为野芝麻新甙粉末。
本申请意外的从巨菌草中检测并提取出野芝麻新甙；这在现有公开的文献中均未有报道。而且，通过本申请的制备方法，能够将巨菌草中的野芝麻新甙提取出来，得率≥0.004g/Kg，制得的野芝麻新甙纯度≥85％。
作为优选的实施方式，步骤S1中，所述巨菌草颗粒目数为20-40目。
作为优选的实施方式，步骤S2中，所述乙醇为65-75wt％乙醇。
作为优选的实施方式，步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:9-11。
作为优选的实施方式，步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:2-4。
作为优选的实施方式，步骤S4中，所述展开剂为氯仿、甲醇和乙酸的混合溶液。
作为优选的实施方式，步骤S4中，所述氯仿：甲醇：乙酸重量比为2:1:0.1-5:1:0.1。
作为优选的实施方式，步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为20-40:1。
作为优选的实施方式，步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为20-50:1。
作为优选的实施方式，步骤S6中，所述硅胶样品和氯仿的重量比为1:1-2。
作为优选的实施方式，步骤S6中，所述洗脱剂为氯仿和甲醇的混合溶液。
作为优选的实施方式，步骤S6中，所述进行洗脱是指用氯仿:甲醇体积比＝8:1、5:1、3:1和1:1的混合溶液，每个梯度洗脱体积为250mL，每管收集30mL；利用步骤S4的TLC条件对每一管组分进行分析，收集与Ipolamiide标准品移动距离一致的组分。
实施例1
一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，包括如下步骤：
S1、将巨菌草烘干，用粉碎机将巨菌草粉碎，得到巨菌草颗粒；
S2、向巨菌草颗粒中加入乙醇，室温下浸泡6-8天，过滤后获得滤液；滤液减压浓缩后除去乙醇，获得绿色水溶性提取物；再重复提取1-2次，将提取物合并；
S3、向步骤S2得到的提取物中加入正丁醇，反复萃取2-4次，收集后萃取液，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状样品；
S4、取步骤S3所得的少量粘稠状样品进行TLC分析，用展开剂在玻璃板上展开，然后滴加10％硫酸乙醇溶液进行显色，点样后，观察是否有某个点的物质移动的相对距离与野芝麻新甙标准品一致；如果有，进行下一步；
S5、将步骤S3所得的粘稠状样品溶于甲醇后，加入硅胶，待溶剂自然挥发后作为干法上样的硅胶样品；
S6、将步骤S5所得的硅胶样品用氯仿搅拌后装柱，待硅胶沉降完全后上样并用洗脱剂洗脱；洗脱剂配比为氯仿:甲醇＝8:1、5:1、3:1和1：1，每个梯度洗脱体积为250mL，每管收集30mL。利用上述TLC条件对每一管组分进行分析，收集与Ipolamiide标准品移动距离一致的组分；
S7、HPLC分析与制备野芝麻新甙，
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 column(250mm×4.6mm i.d.,5μm)，波长232nm，洗脱条件：0min，10％甲醇；20min，50％甲醇；25min，100％甲醇，30min，100％甲醇，35min，10％甲醇；流速1ml/min，柱温35℃；收集野芝麻新甙组分，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状后，加入水溶解，冷冻干燥为野芝麻新甙粉末。
步骤S1中，所述巨菌草颗粒目数为30目。
步骤S2中，所述乙醇为70wt％乙醇。
步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:10。
步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:3。
步骤S4中，所述展开剂为氯仿、甲醇和乙酸的混合溶液。
步骤S4中，所述氯仿：甲醇：乙酸重量比为3.5:1:0.1。
步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为30:1。
步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为35:1
步骤S6中，所述硅胶样品和氯仿的重量比为1:1.5。
经检测，本实施例野芝麻新甙的得率为0.0045g/Kg；野芝麻新甙纯度为88.1％。
图1为本发明实施例1产物野芝麻新甙的提取离子流图(EIC)；
图2为本发明实施例1产物野芝麻新甙的LC-MS质谱图。
实施例2
重复实施例1，其不同之处仅在于：
步骤S1中，所述巨菌草颗粒目数为20目。
步骤S2中，所述乙醇为65wt％乙醇。
步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:9。
步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:2。
步骤S4中，所述氯仿：甲醇：乙酸重量比为2:1:0.1。
步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为20:1。
步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为20:1。
步骤S6中，所述硅胶样品和氯仿的重量比为1:1。
经检测，本实施例野芝麻新甙的得率为0.0042g/Kg；野芝麻新甙纯度为86.3％。
实施例3
重复实施例1，其不同之处仅在于：
步骤S1中，所述巨菌草颗粒目数为40目。
步骤S2中，所述乙醇为75wt％乙醇。
步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:11。
步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:4。
步骤S4中，所述展开剂为氯仿、甲醇和乙酸的混合溶液。
步骤S4中，所述氯仿：甲醇：乙酸重量比为5:1:0.1。
步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为40:1。
步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为50:1。
步骤S6中，所述硅胶样品和氯仿的重量比为1:2。
步骤S6中，所述洗脱剂为氯仿和甲醇的混合溶液。
经检测，本实施例野芝麻新甙的得率为0.0051g/Kg；野芝麻新甙纯度为89.3％。
对比例1
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，所述乙醇的重量百分浓度为30％。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例2
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，所述乙醇的重量百分浓度为50％。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例3
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，用溶剂石油醚代替乙醇。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例4
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，用溶剂氯仿代替乙醇。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例5
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，用溶剂丙三醇代替乙醇。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例6
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，用溶剂乙醚代替乙醇。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例7
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:6。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例8
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:15。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例9
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:1。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例10
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为5:1。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
对比例11
重复实施例1，其不同之处仅在于，步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为5:1。
经TLC分析，无法检测到提取液中有野芝麻新甙。
本发明意外地以巨菌草为原料，制备获得了野芝麻新甙，得率≥0.004g/Kg，制得的野芝麻新甙纯度高≥85％，提高了巨菌草的高价值化利用。
综上所述，本发明的制备方法条件比较苛刻，只有在本申请的方法范围内才能检测并制得野芝麻新甙，任何条件的逾越均无法得到本发明的产品。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (10)
1.一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将巨菌草烘干，用粉碎机将巨菌草粉碎，得到巨菌草颗粒；
S2、向巨菌草颗粒中加入乙醇，室温下浸泡6-8天，过滤后获得滤液；滤液减压浓缩后除去乙醇，获得绿色水溶性提取物；再重复提取1-2次，将提取物合并；
S3、向步骤S2得到的提取物中加入正丁醇，反复萃取2-4次，收集后萃取液，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状样品；
S4、取步骤S3所得的少量粘稠状样品进行TLC分析，用展开剂在玻璃板上展开，然后滴加10％硫酸乙醇溶液进行显色，点样后，观察是否有某个点的物质移动的相对距离与野芝麻新甙标准品一致；如果有，进行下一步；
S5、将步骤S3所得的粘稠状样品溶于甲醇后，加入硅胶，待溶剂自然挥发后作为干法上样的硅胶样品；
S6、将步骤S5所得的硅胶样品用氯仿搅拌后装柱，待硅胶沉降完全后上样并用洗脱剂洗脱；收集与野芝麻新甙标准品移动距离一致的组分；
S7、HPLC分析与制备野芝麻新甙，
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 column(250mm×4.6mm i.d.,5μm)，波长232nm，洗脱条件：0min，10％甲醇；20min，50％甲醇；25min，100％甲醇，30min，100％甲醇，35min，10％甲醇；流速1ml/min，柱温35℃；收集野芝麻新甙组分，于40℃真空旋转浓缩至粘稠状后，加入水溶解，冷冻干燥为野芝麻新甙粉末。
2.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S1中，所述巨菌草颗粒目数为20-40目。
3.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S2中，所述乙醇为65-75wt％乙醇。
4.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S2中，所述巨菌草颗粒和乙醇的料液比1:9-11。
5.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S3中，所述提取物和正丁醇的料液比为1:2-4。
6.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S4中，所述展开剂为氯仿、甲醇和乙酸的混合溶液。
7.根据权利要求6所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S4中，所述氯仿：甲醇：乙酸重量比为2:1:0.1-5:1:0.1。
8.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S5中，所述粘稠状样品和甲醇的料液比为20-40:1。
9.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S5中，所述硅胶和粘稠状样品的重量比为20-50:1。
10.根据权利要求1所述利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法，其特征在于：步骤S6中，所述硅胶样品和氯仿的重量比为1:1-2；
优选的，步骤S6中，所述洗脱剂为氯仿和甲醇的混合溶液；
优选的，步骤S6中，所述进行洗脱是指用氯仿:甲醇体积比＝8:1、5:1、3:1和1:1的混合溶液，每个梯度洗脱体积为250mL，每管收集30mL；利用步骤S4的TLC条件对每一管组分进行分析，收集与Ipolamiide标准品移动距离一致的组分。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210876309.1A CN115304652A (zh) | 2022-07-25 | 2022-07-25 | 一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210876309.1A CN115304652A (zh) | 2022-07-25 | 2022-07-25 | 一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115304652A true CN115304652A (zh) | 2022-11-08 |
Family
ID=83859209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210876309.1A Pending CN115304652A (zh) | 2022-07-25 | 2022-07-25 | 一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115304652A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110475768A (zh) * | 2017-02-17 | 2019-11-19 | 疼痛制药实验室股份有限公司 | 作为免疫抑制剂治疗免疫疾病的富含去羟野芝麻新苷衍生物的植物提取物 |
-
2022
- 2022-07-25 CN CN202210876309.1A patent/CN115304652A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110475768A (zh) * | 2017-02-17 | 2019-11-19 | 疼痛制药实验室股份有限公司 | 作为免疫抑制剂治疗免疫疾病的富含去羟野芝麻新苷衍生物的植物提取物 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| ADEBAJO, A. C.，等: "Hypoglycaemic constituents of Stachytarpheta cayennensis leaf", 《PLANTA MEDICA》, vol. 73, no. 3, pages 241 - 250, XP002780026, DOI: 10.1055/s-2007-967125 * |
| GILDA GUIMARÃES LEITAO: "Step-Gradient CCC Separation of Phenylpropanoid and Iridoid Glycosides from Roots of Stachytarpheta cayennensis (Rich.) Vahl", 《JOURNAL OF LIQUID CHROMATOGRAPHY & RELATED TECHNOLOGIES》, vol. 28, pages 2053 - 2060, XP009134981 * |
| GILSANE LINO VON POSER，等: "Chemotaxonomic features of iridoids occurring in Verbenoxylum reitzii (Verbenaceae)", 《PLANT SYSTEMATICS AND EVOLUTION》, vol. 198, pages 287 - 290 * |
| LYDERSON F. VICCINI，等: "Ipolamiide and fulvoipolamiide from Stachytarpheta glabra (Verbenaceae): A structural and spectroscopic characterization", 《JOURNAL OF MOLECULAR STRUCTURE》, vol. 875, pages 27 - 31, XP022508309, DOI: 10.1016/j.molstruc.2007.03.056 * |
| MIAO YE，等: "Antibiofilm Phenylethanoid Glycosides from Penstemon centranthifolius", 《PHYTOTHERAPY RESEARCH》, vol. 24, pages 778 - 781 * |
| RETNO WIDYOWATI，等: "Alkaline Phosphatase (ALP) Enhancing Iridoid Glucosides from the Indonesian Medicinal Plant Barleria lupulina", 《NATURAL PRODUCT COMMUNICATIONS》, vol. 5, no. 11, pages 1711 - 1716 * |
| YALCIN, FUNDA NURAY，等: "New iridoid glycosides from Lamium eriocephalum subsp. eriocephalum", 《HELVETICA CHIMICA ACTA》, vol. 90, no. 2, pages 332 - 336, XP071269620, DOI: 10.1002/hlca.200790038 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109568389A (zh) | 一种高纯大麻酚类提取物的制备方法 | |
| CN105111255A (zh) | 一种肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取分离方法 | |
| CN102552239B (zh) | 从甘草药渣中制备抗炎、抗肿瘤有效成分组的方法及其应用 | |
| CN110283226A (zh) | 一种提取迷迭香中抗氧化成分的方法 | |
| CN103540640B (zh) | 知母皂苷aⅲ的制备方法 | |
| CN1302003C (zh) | 苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法 | |
| CN104829474B (zh) | 一种从枸杞叶中制备甜菜碱化学对照品的方法 | |
| CN103540405A (zh) | 一种用亚临界co2流体萃取技术制备芳香植物精油的方法 | |
| CN1803827A (zh) | 植物甾体配糖体的制备方法 | |
| CN101104010A (zh) | 山楂黄酮类成分的提取纯化工艺 | |
| CN115304652A (zh) | 一种利用巨菌草制备野芝麻新甙的方法 | |
| CN114414701B (zh) | 一种诃子肉中诃子酸制备方法及其含量测定方法 | |
| CN115779001A (zh) | 一种地不容提取生物碱的方法 | |
| CN114414702A (zh) | 一种诃子肉中诃黎勒酸制备方法及其含量测定方法 | |
| Marston et al. | Analysis and isolation of saponins from plant material | |
| CN103524574B (zh) | 一种从列当科植物中制备类叶升麻苷的方法 | |
| CN113440551A (zh) | 一种具有抗氧化活性的丹参药渣提取物及其应用 | |
| CN113209155A (zh) | 一种排钱草总生物碱提取物及其应用 | |
| Yan et al. | Medicinal herb extraction strategy-a solvent selection and extraction method study | |
| CN111848356A (zh) | 一种大麻二酚的制备方法 | |
| CN1074249C (zh) | 含竹红菌甲素的生物农药杀虫剂原药的制法 | |
| CN117362367A (zh) | 一种利用巨菌草制备马鞭草苷的方法 | |
| CN102690263B (zh) | 一种苦马豆素的酶法提取工艺 | |
| CN115260268B (zh) | 孕甾烷型c21甾体化合物及其制备方法及用途 | |
| CN106916859A (zh) | 一种从甘草废渣中快速提取甘草素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |