CN115300424B - 含红花山茶提取物的多重抗皱组合物及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种含红花山茶提取物的多重抗皱途径组合物及制备方法和应用，具有抗糖化、抗氧化和抗皱的功效。本发明所述组合物含有的四氢姜黄素可促进细胞Ⅰ型胶原蛋白的生成，而丹皮酚可抑制NF‑κB信号途径，减少炎症因子对皮肤光老化的影响，棓酸、提取自红花山茶的山茶花提取物和山茶叶提取物具有较强的抗氧化功效，可清除自由基，咖啡提取物可抑制基质金属蛋白酶(MMP‑1)的生成，从而降低胶原蛋白的降解，茶多酚可抑制糖基化反应，避免终末产物AGEs的生成，通过多重途径达到抗皱功效。本发明所述组合物可作为功效成分应用于多种类型的化妆品中。

Description

含红花山茶提取物的多重抗皱组合物及制备方法和应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及含红花山茶提取物的多重抗皱组合物及制备方法和应用。

背景技术

皮肤衰老是指构成皮肤组织器官基本成分--细胞与细胞外基质的损失与功能衰退。造成皮肤衰老的主要原因为机体的非酶糖基化(Non-enzymaticglycation，NEG)反应和紫外线照射导致的光老化。NEG反应又称为美拉德(Maillard)反应，是在还原糖的羰基和蛋白质的游离氨基上进行的非酶性缩合反应，产生的晚期糖基化终产物(AGEs) 会使胶原产生褐变、荧光和交联损伤，改变各种生物酶的活性，影响信号转导途径，还会与细胞表面的特异性受体结合，引发一系列病理效应。光老化即为外源性因素紫外线照射皮肤引发一系列细胞信号转导致使皮肤胶原成分降解的衰老现象。

皮肤衰老的主要特征为皮肤皱纹增多加深，干燥，粗糙，松弛下垂，失去弹性，色素沉着等，皮肤的真皮层由成纤维细胞、胶原蛋白、弹力蛋白及其他细胞外基质组成。胶原蛋白是细胞外基质最基本的成分之一，约占70％左右，纤维状的胶原蛋白交联形成网状结构，维持皮肤的张力和弹性。

随着年龄的增长，胶原蛋白持续与细胞外基质的还原糖发生NEG反应，AGEs进行性增加，AGEs具有不断交联的能力，与胶原蛋白和弹性蛋白形成交联，降低了结缔组织的通透性，使细胞外基质的养分和废物扩散减弱，又降低了胶原蛋白的可溶性且使得胶原难以被水解，降低了胶原的活力和新陈代谢，以上因素使得胶原和弹性蛋白的流失，导致皮肤弹性下降，变薄，含水量减少，皮肤萎缩，皱纹生成。另一方面，AGEs与细胞表面的特异性蛋白受体结合，诱导细胞产生氧化应激反应，生成大量的氧自由基，激活NF-κB信号转导通路，刺激白细胞介素I(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等炎症因子的释放和表达，诱导皮肤组织中基质金属蛋白酶(MMPs)表达增高从而降解胶原蛋白。

紫外线辐射主要通过影响以下三类细胞信号途径而使皮肤出现光老化损伤：

(1)紫外线激活MAPK信号途径，诱导AP-1表达，进而促进MMPs表达，在MMPs作用下降解胶原蛋白；MMPs是胶原蛋白降解过程中起关键作用的酶，其MMP 家族中，MMP-1(间质胶原酶)是最有效的胶原酶，可降解Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅶ型等胶原。 MAPK是一类重要的信号转导分子，是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者，分属于细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 MAPK和c-Jun N端激酶(JNK)等信号转导通路。ERK、p38 MAPK、JNK均在相似的磷酸化的三级酶促级联反应下被激活，但它们各自又形成一个信号模块而构成3条相对独立的信号转导通路。皮肤角质细胞和成纤维细胞在紫外线照射下产生大量的ROS，激活MAPK信号途径，调控c-Jun和c-Fos 的表达，增高的c-Jun与c-Fos结合形成转录因子AP-1，后者与MMPs基因的结合元件结合从而促进MMPs的转录表达。

(2)紫外线影响TGF-β/Smads信号通路，减少胶原蛋白的合成，降低体内胶原蛋白的水平；TGF-β为转化生长因子，能调节多种靶基因的表达，细胞增殖和分化，细胞外基质形成等，在皮肤组织中，TGF-β能刺激成纤维细胞增殖，增加包括胶原蛋白在内的细胞外基质蛋白的合成和分泌。许多组织细胞表面有TGF-βⅠ型(TβRⅠ)和Ⅱ型 (TβⅡ)受体，起信号转导作用，TGF-β与两个受体结合后，TβRⅠ被激活，进而磷酸化Smad2和Smad3(信号转导分子)，两者与Smad4结合后转移至细胞核内，在细胞核内，Smads蛋白与特异DNA序列结合，调控胶原蛋白的表达。

(3)紫外线影响NF-κB信号途径，提高TNF-α、IL-1\IL-6等炎症因子的表达，诱导皮肤组织中MMPs表达增高从而调控胶原蛋白的含量；NF-κB是免疫炎症应答的关键因子，参与各类皮肤疾病和皮肤老化，紫外线辐射能激活NF-κB信号通路，使角质形成细胞和成纤维细胞中基质IL-1、IL-6和TNF-α等细胞因子表达增加，激活MAPK信号途径，降解胶原蛋白。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供含红花山茶提取物的多重抗皱组合物及制备方法和应用，其同时具有抗糖化、抗氧化和抗皱的功效。本发明涉及化妆品领域，具体涉及含红花山茶提取物的多重抗皱组合物及制备方法和应用，具有抗糖化、抗氧化和抗皱的功效。本发明所述组合物含有的四氢姜黄素可促进细胞Ⅰ型胶原蛋白的生成，而丹皮酚可抑制NF-κB信号途径，减少炎症因子对皮肤光老化的影响，棓酸、提取自红花山茶的山茶花提取物和山茶叶提取物具有较强的抗氧化功效，可清除自由基，咖啡提取物可抑制基质金属蛋白酶(MMP-1)的生成，从而降低胶原蛋白的降解，茶多酚可抑制糖基化反应，避免终末产物AGEs的生成，通过多重途径达到抗皱功效。本发明所述组合物可作为功效成分应用于多种类型的化妆品中。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供含红花山茶提取物的多重抗皱组合物，包括四氢姜黄素、丹皮酚、棓酸、红花山茶提取物、茶多酚、咖啡提取物。

所述红花山茶提取物包括山茶花提取物、山茶叶提取物。

所述组合物包括A相和B相；按质量百分比计，A相包括：

按质量百分比计，B相包括：

所述C3-C8二元醇包括丙二醇、1,3-丙二醇、丁二醇、甲基丙二醇、异戊二醇、1,2-戊二醇中的一种或多种。

所述聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯包括：聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-21、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-61、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-81、聚山梨醇酯-85、PEG-20失水山梨醇三异硬脂酸酯、PEG-20失水山梨醇椰油酸酯、PEG-20失水山梨醇异硬脂酸酯、PEG-20失水山梨醇油酸酯中的一种或几种。

所述的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物的制备方法，包括如下步骤：

1)A相制备，将组分1，组分2和组分3混合，加热搅拌均匀，然后依次加入四氢姜黄素，丹皮酚和棓酸，各组分加入时均保证完全溶解，混合均匀得液体A相；

2)B相制备：将组分7-10混合均匀，制备成混合液，然后在混合液中加入组分11，搅拌均匀后，依次加入茶多酚和咖啡提取物，搅拌均匀后制备成B相；

搅拌在室温下进行，每加入一个原料，均需保证该原料溶解完全，无深棕色颗粒物，最终B相混合料体呈深红棕色半透明液体；

3)组合物制备

将B相滴加入A相中，边滴加边搅拌，制得所述含红花山茶提取物的多重抗皱组合物。

步骤1)中，所述加热的方式为水浴加热，加热的温度为60-65℃。

步骤3)具体为：在60-65℃，缓慢将所述B相滴加入所述A相中，边滴加边搅拌，直至半透明深红棕色混合料体，制得所述含红花山茶提取物的多重抗皱组合物。

所述的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物在化妆品制备中的应用也属于本发明的保护范围。

如上所述的制备方法制得的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物在化妆品制备中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)在皮肤糖基化衰老机理和光老化细胞信号通路研究的基础上，寻找具有抗糖化和阻断相应细胞通路的活性物，进行设计搭配，两个层面五重途径作用皮肤抵抗糖基化和光老化，做到科学合理设计，尽可能全面作用，安全有效地达到抗皱功效；

2)通过实验发现和验证了7个活性物之间具有协同增强抗糖化能力的效果，属本发明的创新点；

3)四氢姜黄素是姜黄根提取物中的主要活性成分，具有极好的化学稳定性，而且外观为白色粉末，克服了普通姜黄提取物化学不稳定易使皮肤染色的缺陷，普通的姜黄提取物为黄色，化学稳定性差，具有光敏性，在光照下，容易和皮肤发生化学反应而使皮肤染色；

4)山茶花提取物和山茶叶提取物采用超临界CO₂萃取，结合超声和酶解工艺，所含黄酮、多酚等活性物比常规提取工艺高，抗氧化功效更好；

5)七种抗皱活性物的溶解性各不相同：

四氢姜黄素可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有机溶剂，但不溶于水和油；

丹皮酚易溶于甲醇，乙醇，溶于乙醚，丙酮，氯仿及二硫化碳，稍溶于水，溶解于热水，不溶于冷水；

棓酸溶于热水、乙醚、乙醇、丙酮和甘油，难溶于冷水，不溶于苯和氯仿；

山茶花提取物、山茶叶提取物、茶多酚和咖啡提取物可溶于水；

将这些抗皱活性物同时应用于化妆品配方中具有较大难度，容易不稳定和析出，其中四氢姜黄素不溶于水和油，在化妆品配方应用中的普遍添加方式是分散而不是溶解，这使得四氢姜黄素的功效无法发挥，且四氢姜黄素，丹皮酚和棓酸所溶的甲醇或乙醇不适用于化妆品，为解决配方应用难题，结合各抗皱活性物的化学结构。

本发明设计使用了适用于化妆品领域的安全溶剂组合，所使用的C3-C8二元醇和甘油为化妆品配方常用的保湿润肤剂成分，所使用的聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯为化妆品和食品行业常用的安全成分，将七种活性物组合成醇水混合稳定体系，经稳定性考察显示，此抗皱组合物均一稳定，无物质析出沉淀，且配方应用简单，可直接低温加于配方体系。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。

实施例1-3

实施例1-3涉及含红花山茶提取物的多重抗皱组合物及其制备方法。

1、实施例1-3所述的组合物的组分及用量如表1所示：

表1

2、实施例1-3所述的组合物的制备方法如下：

1)A相制备

按表1称取甲基丙二醇，甘油和聚山梨醇酯-60于容器中，放入65℃水浴锅中加热搅拌均匀，搅拌速度为100rpm，依次加入四氢姜黄素，丹皮酚和棓酸，每加入一个原料，均需保证该原料溶解透明，完全，无白色颗粒物，最终A相混合料体呈透明至半透明淡黄色液体。

2)B相制备

按表1称取称取去离子水a、山茶花提取物、山茶叶叶提取物、1,3-丙二醇于容器中，室温下搅拌均匀，搅拌速度为50rpm，依次加入茶多酚和咖啡提取物，每加入一个原料，均需保证该原料溶解完全，无深棕色颗粒物，最终B相混合料体呈深红棕色半透明液体。

3)组合物制备

在65℃下，缓慢将B相混合料体滴加入A相混合料体，边滴加边搅拌，搅拌速度为100rpm，直至最后呈现半透明深红棕色混合料体，制备获得可流动，具有一定稠度的组合物。

实施例1-3制备的组合物可应用于化妆品各剂型，如膏霜乳、液体(露、液、水、油、油水分离)、凝胶、泥、蜡基、喷雾、贴、膜、含基材等中的一种。组合物添加于配方中的方法也较为简单，直接称取组合物，在45℃下加入配方中，搅拌均匀，必要时可进行均质。

对比例1

与实施例1的区别在于，不添加茶多酚。

对比例2

与实施例1的区别在于，不添加咖啡提取物。

对比例3

与实施例1区别在于，将甲基丙二醇替换为甘油，结果A相首先无法溶解四氢姜黄素，进而无法形成组合物。

对比例4

与实施例1区别在于，将甲基丙二醇和甘油替换为辛酸/癸酸甘油三酯，结果A相首先无法溶解四氢姜黄素，进而无法形成组合物。

对比例5

与实施例1区别在于，所有成分依次添加进行配制，而不是先制备成A相和B相然后进行混合，结果表明在添加茶多酚和咖啡提取物时，不溶解，进而无法形成组合物。

性能测试

实施例1-3和对比例1-2进行了体外功效测试，分别从DPPH自由基清除能力，抗糖化能力评价抗皱组合物的功效。

1)DPPH自由基清除测试

实验原理：

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(简称DPPH)是一种稳定的长寿命自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在520nm附近有强吸收。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使DPPH乙醇溶液光吸收减弱。DPPH乙醇溶液褪色程度与其接受的电子数呈线性关系，由此可评价试验样品清除自由基的能力，即抗氧化活性的大小。

实验依据：

1.T/SHRH 006-2018，化妆品-自由基(DPPH)清除实验方法.上海日用化妆品行业协会,2018.

2.Chen,H.,S.Qiu,J.Gan,Z.Li,S.Nirasawa and L.Yin(2016)."New insightsinto the antioxidant activity and components in crude oat oil and soybeanoil."J Food Sci Technol53(1):808-815.

实验结果：

实施例1-3制备的组合物均具有良好的自由基清除能力。

表2

2)抗糖化能力测试

实验原理：

晚期糖基化终产物有两处来源：1.伴随氧化的糖基化反应；2.脂质过氧化产物和蛋白质反应。人体含有葡萄糖和相当数量的果糖，果糖与蛋白质的反应速度比葡萄糖快10倍。晚期糖基化终产物众多，大多数具有荧光，吸收峰在370nm，发射峰在445nm。利用这一特点可以通过荧光法测试晚期糖基化终产物。

实验依据：

1.Anti-Glycation Activities of Phenolic Constituents from Silybummarianum(Milk Thistle) Flower in Vitro and on Human Explants

2.Isoferulic acid,a new anti-glycation agent,inhibits fructose-andglucose-mediated protein glycation in vitro(Meeprom,Sompong et al.2013)

实验结果：

表3

上表中，实施例1中，四氢姜黄素占2.28ug/ml，丹皮酚4.54ug/ml，棓酸2.28ug/ml，山茶花提取物0.56ug/ml，山茶叶提取物0.56ug/ml，茶多酚4.54ug/ml，咖啡提取物4.54ug/ml；实施例2中，四氢姜黄素占2.28ug/ml，丹皮酚4.54ug/ml，棓酸2.28ug/ml，山茶花提取物1.14ug/ml，山茶叶提取物1.14ug/ml，茶多酚9.10ug/ml，咖啡提取物9.10ug/ml；实施例3中，四氢姜黄素占4.54ug/ml，丹皮酚9.10ug/ml，棓酸4.54ug/ml，山茶花提取物1.14ug/ml，山茶叶提取物1.14ug/ml，茶多酚9.10ug/ml，咖啡提取物9.10ug/ml；由上表可知，抗皱组合物7个活性物之间存在协同增效，以更低的用量达到了更好的抗糖化能力，其抗衰老功效更强。

3)皮肤刺激安全性测试

实验方法：

参照《2015化妆品安全技术规范》中的人体皮肤斑贴试验。皮肤封闭型斑贴试验的方法为：选择年龄为18-60周岁的人员30名，选用面积不超过50mm²、深度约1mm的合格斑试器材，取用0.020mL上述实施例制备的组合物放入斑试器小室内，对照孔为空白对照(不置任何物质)，将加有组合物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。分别于去除含组合物斑试器后 30min(待压痕消失后)、24h和48h按表4标准观察皮肤反应，并记录观察结果。组合物的斑贴测试结果见表5。

表4皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准

表5人体安全性测试结果

样品编号	30min	24h	48h	总结果
					空白对照	0	0	0	30人均无阳性反应
组合物1	0	0	0	30人均无阳性反应
					组合物2	0	0	0	30人均无阳性反应
组合物3	0	0	0	30人均无阳性反应

实验结果表明，本实施例1-3制备的组合物通过人体斑贴安全性测试。

本发明所述组合物含有的四氢姜黄素可促进细胞Ⅰ型胶原蛋白的生成，而丹皮酚可抑制NF-κB信号途径，减少炎症因子对皮肤光老化的影响，棓酸、提取自红花山茶的山茶花提取物和山茶叶提取物具有较强的抗氧化功效，可清除自由基，咖啡提取物可抑制基质金属蛋白酶(MMP-1)的生成，从而降低胶原蛋白的降解，茶多酚可抑制糖基化反应，避免终末产物AGEs的生成，通过多重途径达到抗皱功效。本发明所述组合物可作为功效成分应用于多种类型的化妆品中。

以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (5)

1.一种含红花山茶提取物的多重抗皱组合物，其特征在于，所述组合物包括A相和B相；

按质量百分比计，A相包括：

按质量百分比计，B相包括：

所述C3-C8二元醇为甲基丙二醇；

所述含红花山茶提取物的多重抗皱组合物的制备方法，包括如下步骤：

1）A相制备：将组分1、组分2和组分3混合，加热搅拌均匀，然后依次加入四氢姜黄素，丹皮酚和棓酸，各组分加入时均保证完全溶解，混合均匀得液体A相；

2）B相制备：将组分7-10混合均匀，制备成混合液，然后在混合液中加入组分11，搅拌均匀后，依次加入茶多酚、咖啡提取物，搅拌均匀后制备成B相；

3）组合物制备：将B相滴加入A相中，边滴加边搅拌，制得所述含红花山茶提取物的多重抗皱组合物。

2.根据权利要求1所述的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物，其特征在于，所述聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯包括：

聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-21、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-61、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-81、聚山梨醇酯-85、PEG-20 失水山梨醇三异硬脂酸酯、PEG-20 失水山梨醇椰油酸酯、PEG-20 失水山梨醇异硬脂酸酯、PEG-20 失水山梨醇油酸酯中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物，其特征在于，步骤1）中，所述加热的方式为水浴加热，加热的温度为60-65℃。

4.根据权利要求1所述的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物，其特征在于，步骤3）具体为：在60-65℃，将所述B相滴加入所述A相中，边滴加边搅拌，直至半透明深红棕色混合料体，制得所述含红花山茶提取物的多重抗皱组合物。

5.一种如权利要求1-4中任一项所述的含红花山茶提取物的多重抗皱组合物在化妆品制备中的应用。