CN115282339A - 一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料、制备方法及应用 - Google Patents

一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料、制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，包括以下步骤：步骤1：将甲基丙烯酸酐滴加至透明质酸溶液中，充分反应，得到HAMA；步骤2：将羟基磷灰石和聚乙二醇混合，加入溶剂，搅拌溶解，充分反应；离心，冷冻干燥即可得到HAP‑PEG；步骤3：将HAMA和含蓝光引发剂的溶液充分混合得到溶液A；将HAP‑PEG和溶液A混合得到混悬液，脱泡后蓝光照射条件下固化，即得到光交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料；本发明得到的复合凝胶兼具交联透明质酸凝胶和HAP颗粒填充剂的特性，注射后不仅可以即刻填充塑形维持短期的疗效，还可以通过凝胶颗粒间的空隙促进细胞的浸润和组织的长入。HAP颗粒也可刺激机体胶原纤维的再生，从而达到长期塑形的效果。

Description

一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料、制备方法及应用
技术领域
本发明涉及生物医用材料技术领域，具体涉及一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料、制备方法及应用。
背景技术
透明质酸(HA)是广泛存在于动物和微生物体内的一种高分子多糖，因其无种属差异和免疫原性以及良好的生物安全性，常被作为化妆品的主要成分，也用于一些美容手术，尤其是用于填充皱纹、修正面部轮廓等。然而，透明质酸容易发生酶促降解和水解，体内稳定性差、维持时间较短。因此，各种交联透明质酸及其复合材料发展起来以解决透明质酸体内稳定性差的问题。
羟基磷灰石(HAP)是人体骨骼的主要无机组分，良好的生物相容性和生物活性使其成为广泛应用的骨替代和修复产品。同时，HAP与其他一些高分子形成的复合材料已被广泛应用于软/硬组织的填充和修复。如美国MERZ公司生产的
Figure BDA0003770882040000011
由30％大小在25～40μm的HAP微球悬浮于70％羧甲基纤维素凝胶中组成，当注射进入组织间，HAP微球可以形成一个骨架。进而促进胶原蛋白的生成，因此广泛用于隆鼻、隆下巴、抚平法令纹等。此外，HAP与交联透明质酸形成的可注射填充材料，也广泛用于软组织的填充。
如公开号为CN104853742A和CN104703582A提供了一种用于治疗和化妆品用途的基于交联透明质酸和羟基磷灰石的可注射无菌水性制剂的制备方法。首先制备出交联透明质酸凝胶，然后在搅拌混合机中均质化凝胶，再加入羟基磷灰石微球混合搅拌均匀，脱气后130度高压蒸汽灭菌3分钟制得粘弹性混合凝胶。该混合凝胶可以避免羟基磷灰石颗粒在容器中随时间而沉降，也可避免产品在注射后于注射部位分相从而在治疗部位产生异质区。然而，通过搅拌混合交联透明质酸凝胶与羟基磷灰石颗粒，获得的混合凝胶中羟基磷灰石颗粒难以均匀分布，且注射过程中羟基磷灰石颗粒容易发生移位和堆积，影响注射。
如公开号为CN109906073A提供了一种包含交联透明质酸和羟基磷灰石的可注射凝胶及其制造方法，首先将透明质酸和1wt.％～20wt.％的羟基磷灰石混合，加入交联剂在pH＞12的条件下进行交联反应。然后将所得凝胶中和至pH＝7，继续加入5wt.％～70wt.％的羟基磷灰石，混合均匀后脱气。121度蒸汽高压灭菌20分钟后，得粘弹性凝胶。该凝胶中包含两种与透明质酸基质不同缔合程度的羟基磷灰石，一种包含在交联透明质酸凝胶中分散的羟基磷灰石颗粒即紧密缔合羟基磷灰石。另一种是分布在凝胶之间、松散缔合的羟基磷灰石。该方法在交联透明质酸以及中和过程中引入了交联剂和大量的盐，制备过程无洗涤或透析步骤，凝胶中大量的盐成分以及残存的交联剂可能引起渗透压偏高以及毒副作用。同时，制备过程繁琐，且混合凝胶中与透明质酸松散缔合的羟基磷灰石微球容易与凝胶分离，在进行组织填充注射时可能导致微球堆积，堵塞注射器针头。公开号为CN106421929B提供一种可注射磷酸钙/天然高分子复合材料及其制备方法，该方法通过交联或未交联的透明质酸溶液与磷酸钙陶瓷颗粒混合，即得膏状可注射材料。该方法制备的材料不能长期将羟基磷灰石颗粒保持在基质中，存放过程中颗粒在容器中会随时间而沉积，甚至出现分相现象。体内注射后，可能导致治疗部位效果的丧失以及可能的并发症。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题提供一种HAP颗粒稳定分散于凝胶中，注射过程中不易发生HAP颗粒的移位和堆积的交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料、制备方法及应用。
本发明采用的技术方案是：
一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将甲基丙烯酸酐滴加至透明质酸溶液中，充分反应，依次进行沉淀、透析后冻干得到干燥海绵状的HAMA；滴加和反应过程中控制pH值为8.0～8.5；其中甲基丙烯酸酐和透明质酸的物质的量比为5～2:1；
步骤2：将羟基磷灰石和聚乙二醇混合，加入溶剂，搅拌溶解，充分反应；离心沉淀后洗涤，冷冻干燥即可得到HAP-PEG；其中羟基磷灰石和聚乙二醇的质量比为1:1～2；
步骤3：将步骤1得到的HAMA和含蓝光引发剂的溶液充分混合得到溶液A；将HAP-PEG和溶液A混合得到混悬液，蓝光照射条件下固化，即得到交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料；其中HAMA和HAP-PEG的质量比为1:15～30。
进一步的，所述步骤1中反应温度为4℃，反应直至pH值无变化即结束；反应过程中，用5M的NaOH溶液调节pH值；甲基丙烯酸酐滴加完成后，第1个小时内，每5min滴加一次NaOH调节溶液pH；第2～3小时内，每15min滴加一次NaOH调节pH值；接下来每30min滴加一次NaOH调节溶液pH值，直至溶液pH值无变化。
进一步的，所述步骤1中采用冰乙醇进行沉淀，然后首先采用乙醇透析液进行透析，然后采用去离子水进行透析。
进一步的，所述步骤2中的羟基磷灰石首先进行以下预处理：
羟基磷灰石颗粒在800～1200℃条件下烧结2h，然后筛分；取粒径为25～40μm和25～70μm的部分。
进一步的，所述步骤3中蓝光引发剂采用苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂。
一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料，可注射材料经过破碎、灌装、灭菌后使用；采用筛网进行破碎处理，破碎后的复合凝胶与透明质酸溶液混合后进行灌装；灌装后通过高压蒸汽灭菌器在121℃条件下高压蒸汽灭菌30分钟。
一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的应用，所述交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料用作软/硬组织填充材料；还可以作为尿道填充剂。
本发明的有益效果是：
(1)本发明通过将HAP颗粒均匀分散在HAMA溶液中制成悬浊液后进行交联，降低了HAP颗粒在交联透明质酸凝胶中的混匀难度，缩短了混匀时间，提高了分散性；交联后不用透析凝胶，既简化了复合凝胶的制备工艺，也确保了凝胶中组份浓度的精确控制。HAMA的交联可在较低引发剂浓度下进行，不使用任何交联剂，提高了产品的安全性；
(2)本发明通过光交联反应将HAP颗粒固定在交联透明质酸凝胶内部，同时PEG对HAP的修饰提高了HAP颗粒与交联透明质酸之间的界面结合，使HAP颗粒不易发生移位和团聚，在注射过程中，减少了因HAP颗粒在凝胶间活动造成针头堵塞的情况；
(3)本发明所得复合凝胶兼具交联透明质酸凝胶和HAP颗粒填充剂的特性，注射后不仅可以即刻填充塑形维持短期的疗效，还可以通过凝胶颗粒间的空隙促进细胞的浸润和组织的长入。HAP颗粒也可刺激机体胶原纤维的再生，从而达到长期塑形的效果。同时纤维组织的长入有利于将HAP颗粒维持在原位，避免其在组织中发生迁移等现象。
附图说明
图1为本发明实施例1得到的复合材料注射到大鼠皮下7、30天的HE染色照片。
图2为本发明实施例1得到的复合材料注射到压力性尿失禁大鼠尿道周7天后的HE染色照片。
图3为本发明实施例1得到的复合材料注射到压力性尿失禁大鼠尿道周7天后的腹压漏尿点压(ALPP)测试结果示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。
一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将甲基丙烯酸酐滴加至透明质酸溶液中，充分反应，依次进行沉淀、透析后冻干得到干燥海绵状的HAMA；滴加和反应过程中控制pH值为8.0～8.5；其中其中甲基丙烯酸酐和透明质酸的物质的量比为5～2:1；反应温度为4℃，反应直至pH值无变化即结束；反应过程中，用5M的NaOH溶液调节pH值；甲基丙烯酸酐滴加完成后，第1个小时内，每5min滴加一次NaOH调节溶液pH；第2～3小时内，每15min滴加一次NaOH调节pH值；接下来每30min滴加一次NaOH调节溶液pH值，直至溶液pH值无变化。采用冰乙醇进行沉淀，然后首先采用乙醇透析液进行透析，然后采用去离子水进行透析。
步骤2：将羟基磷灰石和聚乙二醇混合，加入溶剂，搅拌溶解，充分反应；离心沉淀后洗涤，冷冻干燥即可得到HAP-PEG；其中羟基磷灰石和聚乙二醇的质量比为1:1～2；
羟基磷灰石首先进行以下预处理：
羟基磷灰石颗粒在800～1200℃条件下烧结2h，然后筛分；取粒径25～40μm和25～70μm的部分。
步骤3：将步骤1得到的HAMA和含蓝光引发剂的溶液充分混合得到溶液A；将HAP-PEG和溶液A混合得到混悬液，蓝光照射条件下固化，即得到交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料；其中HAMA和HAP-PEG的质量比为1:15～30。蓝光引发剂采用苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂。
一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料，可注射材料经过破碎、灌装、灭菌后使用；采用筛网进行破碎处理，破碎后的复合凝胶与透明质酸溶液混合后进行灌装；灌装后通过高压蒸汽灭菌器在121℃条件下高压蒸汽灭菌30分钟。
一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的应用，所述交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料用作软/硬组织填充材料；还可以作为尿道填充剂。
实施例1
按照以下方法制备一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料，
步骤1：制备甲基丙烯酸化透明质酸HAMA
准确称取1.00g透明质酸(HA，分子量1000kDa)粉末于烧杯中，加入200mL去离子水室温下搅拌至完全溶解。
将完全溶解后的透明质酸溶液，转移至恒温4℃的低温冷却液循环泵上。用移液枪吸取甲基丙烯酸酐MA液体(密度1.035g/cm3)1.6mL，匀速缓慢的滴加至搅拌中的HA溶液中，滴加过程中用5M NaOH溶液调节反应体系的pH为8.0～8.5，直至MA滴加完毕。
MA滴加完后的1h内，继续用5M NaOH溶液调节反应体系的pH为8.0～8.5，每5min一次，接下来的2h，每15min一次，之后每30min一次，直到溶液pH基本无变化，反应过夜。
将反应结束的溶液缓慢向体积4～5倍的冰乙醇中倾倒，并不断搅拌，将析出的HAMA沉淀转移至干净的烧杯中，再用适量的冰乙醇洗涤3次。
将HAMA沉淀用适量去离子水溶解(使HAMA溶液浓度约为0.5％)，转移至透析袋中，用25％乙醇透析4～6h后，继续用去离子水透析；每天更换去离子水3～4次，透析三天后。
将HAMA溶液用低温冷冻干燥机冻干，得到干燥海绵状态的HAMA，密封保存于-20℃备用。
步骤2：制备HAP-PEG
羟基磷灰石颗粒，在烧结炉1100℃烧结2小时，用筛子筛分得到25～70μm的部分。
准确称取聚乙二醇(PEG-4000)50g，加入500mL去离子水搅拌溶解，然后在该溶液中加入50g HAP，搅拌24小时后。
静置，等待HAP-PEG沉降至烧杯底部，倒掉上清液，加入大量去离子水离心洗涤，重复洗涤5次，低温冷冻干燥机冻干备用。
步骤3：制备HAMA-HAP复合凝胶
配制0.05％LAP溶液：精确称量5mg苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂LAP蓝光引发剂加入10mL PBS缓冲溶液(pH＝7.4)使LAP完全溶解，避光保存。
配制2％HAMA溶液：精确称量200mg HAMA海绵，加入10ml LAP溶液，避光静置过夜后搅拌，得2％HAMA溶液备用。
配制2％HA溶液：准确称量60mg 1.44MDa HA粉末，加入3ml PBS缓冲溶液(pH＝7.4)溶解备用。
准确称量6.0g HAP-PEG，加入到10mL 2％的HAMA溶液中，搅拌均匀后脱泡并转移至培养皿中，使用蓝光灯照射，得到固化凝胶，将凝胶翻面再次蓝光照射，得到复合凝胶。
使用时，将复合凝胶破碎、灌装、灭菌
破碎和灌装：将得到的复合凝胶放置在筛网上进行破碎处理。取破碎后的复合凝胶颗粒10mL，加入2％HA溶液2mL，搅拌均匀后灌装到1mL螺口注射器中，备用。
灭菌：将装有复合凝胶的注射器置于高压蒸汽灭菌器中，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，灭菌器自然降温后取出样品，得到可注射复合凝胶。
将本实施例得到的可注射复合材料，灭菌后通过23G针头将材料注射到SD大鼠皮下，形成局部隆起，观察植入期部位有无明显炎症反应。植入7天、30天后处死动物取材，样品固定、脱钙后包埋，进行组织切片HE染色分析，结果如图1所示，a为植入7天后结果，b为植入30天后结果。
整个植入期内植入部位无明显炎症反应，大鼠活动度良好。HE染色结果图可以看出，植入7天后能观察到少量炎性细胞浸润，凝胶颗粒间有明显的组织长入。植入30天后，无明显的炎性细胞，有更致密的组织长入到凝胶颗粒间。同时HAP颗粒被包裹在凝胶颗粒中，无明显的游走现象。
采用阴道扩张术建立压力性尿失禁SD大鼠模型。将本实施例得到的可注射复合材料，灭菌后通过23G针头将材料注射到大鼠尿道周。植入7天后处死部分动物取材，样品固定、包埋后，进行组织切片HE染色分析。另一部分动物，进行腹压漏尿点压ALPP测试。
HE染色结果如图2显示，植入7天后既有大量的组织长入到材料中。腹压漏尿点压ALPP测试结果如图3所示。尿道周注射复合材料后，明显提高了大鼠的腹压漏尿点压力。其中对照组为阴道扩张造模组，复合材料组为阴道扩张造模后尿道周注射材料组。
实施例2
按照以下方法制备一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料，
步骤1：制备甲基丙烯酸化透明质酸HAMA
准确称取1.00g透明质酸(HA，分子量1000kDa)粉末于烧杯中，加入200mL去离子水室温下搅拌至完全溶解。
将完全溶解后的透明质酸溶液，转移至恒温4℃的低温冷却液循环泵上。用移液枪吸取甲基丙烯酸酐MA液体(密度1.035g/cm3)1.6mL，匀速缓慢的滴加至搅拌中的HA溶液中，滴加过程中用5M NaOH溶液调节反应体系的pH为8.0～8.5，直至MA滴加完毕。
MA滴加完后的1h内，继续用5M NaOH溶液调节反应体系的pH为8.0～8.5，每5min一次，接下来的2h，每15min一次，之后每30min一次，直到溶液pH基本无变化，反应过夜。
将反应结束的溶液缓慢向体积4～5倍的冰乙醇中倾倒，并不断搅拌，将析出的HAMA沉淀转移至干净的烧杯中，再用适量的冰乙醇洗涤3次。
将HAMA沉淀用适量去离子水溶解(使HAMA溶液浓度约为0.5％)，转移至透析袋中，用25％乙醇透析4～6h后，继续用去离子水透析；每天更换去离子水3～4次，透析三天后。
将HAMA溶液用低温冷冻干燥机冻干，得到干燥海绵状态的HAMA，密封保存于-20℃备用。
步骤2：制备HAP-PEG
羟基磷灰石颗粒，在烧结炉800℃烧结2小时，用筛子筛分得到25～40μm的部分。
准确称取聚乙二醇(PEG-4000)50g，加入500mL去离子水搅拌溶解，然后在该溶液中加入50g HAP，搅拌24小时后。
静置，等待HAP-PEG沉降至烧杯底部，倒掉上清液，加入大量去离子水离心洗涤，重复洗涤5次，低温冷冻干燥机冻干备用。
步骤3：制备HAMA-HAP复合凝胶
配制0.05％LAP溶液：精确称量5mg苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂LAP蓝光引发剂加入10mL PBS缓冲溶液(pH＝7.4)使LAP完全溶解，避光保存。
配制2％HAMA溶液：精确称量200mg HAMA海绵，加入10ml LAP溶液，避光静置过夜后搅拌，得2％HAMA溶液备用。
配制2％HA溶液：准确称量60mg 1.44MDa HA粉末，加入3ml PBS缓冲溶液(pH＝7.4)溶解备用。
准确称量4.0g HAP-PEG，加入到10mL 2％的HAMA溶液中，搅拌均匀后脱泡并转移至培养皿中，使用蓝光灯照射，得到固化凝胶，将凝胶翻面再次蓝光照射，得到复合凝胶。
使用时，将复合凝胶破碎、灌装、灭菌
破碎和灌装：将得到的复合凝胶放置在筛网上进行破碎处理。取破碎后的复合凝胶颗粒10mL，加入2％HA溶液2mL，搅拌均匀后灌装到1mL螺口注射器中，备用。
灭菌：将装有复合凝胶的注射器置于高压蒸汽灭菌器中，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，灭菌器自然降温后取出样品，得到可注射复合凝胶。
实施例3
按照以下方法制备一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料，
步骤1：制备甲基丙烯酸化透明质酸HAMA
准确称取1.00g透明质酸(HA，分子量1000kDa)粉末于烧杯中，加入200mL去离子水室温下搅拌至完全溶解。
将完全溶解后的透明质酸溶液，转移至恒温4℃的低温冷却液循环泵上。用移液枪吸取甲基丙烯酸酐MA液体(密度1.035g/cm3)1.6mL，匀速缓慢的滴加至搅拌中的HA溶液中，滴加过程中用5M NaOH溶液调节反应体系的pH为8.0～8.5，直至MA滴加完毕。
MA滴加完后的1h内，继续用5M NaOH溶液调节反应体系的pH为8.0～8.5，每5min一次，接下来的2h，每15min一次，之后每30min一次，直到溶液pH基本无变化，反应过夜。
将反应结束的溶液缓慢向体积4～5倍的冰乙醇中倾倒，并不断搅拌，将析出的HAMA沉淀转移至干净的烧杯中，再用适量的冰乙醇洗涤3次。
将HAMA沉淀用适量去离子水溶解(使HAMA溶液浓度约为0.5％)，转移至透析袋中，用25％乙醇透析4～6h后，继续用去离子水透析；每天更换去离子水3～4次，透析三天后。
将HAMA溶液用低温冷冻干燥机冻干，得到干燥海绵状态的HAMA，密封保存于-20℃备用。
步骤2：制备HAP-PEG
羟基磷灰石颗粒，在烧结炉1200℃烧结2小时，用筛子筛分得到25～70μm的部分。
准确称取聚乙二醇(PEG-4000)50g，加入500mL去离子水搅拌溶解，然后在该溶液中加入50g HAP，搅拌24小时后。
静置，等待HAP-PEG沉降至烧杯底部，倒掉上清液，加入大量去离子水离心洗涤，重复洗涤5次，低温冷冻干燥机冻干备用。
步骤3：制备HAMA-HAP复合凝胶
配制0.05％LAP溶液：精确称量5mg苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂LAP蓝光引发剂加入10mL PBS缓冲溶液(pH＝7.4)使LAP完全溶解，避光保存。
配制2％HAMA溶液：精确称量200mg HAMA海绵，加入10ml LAP溶液，避光静置过夜后搅拌，得2％HAMA溶液备用。
配制2％HA溶液：准确称量60mg 1.44MDa HA粉末，加入3ml PBS缓冲溶液(pH＝7.4)溶解备用。
准确称量5.0g HAP-PEG，加入到10mL 2％的HAMA溶液中，搅拌均匀后脱泡并转移至培养皿中，使用蓝光灯照射，得到固化凝胶，将凝胶翻面再次蓝光照射，得到复合凝胶。
使用时，将复合凝胶破碎、灌装、灭菌
破碎和灌装：将得到的复合凝胶放置在筛网上进行破碎处理。取破碎后的复合凝胶颗粒10mL，加入2％HA溶液2mL，搅拌均匀后灌装到1mL螺口注射器中，备用。
灭菌：将装有复合凝胶的注射器置于高压蒸汽灭菌器中，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，灭菌器自然降温后取出样品，得到可注射复合凝胶。
从上述测试结果可以看出，本发明得到的可注射复合材料，植入体内后有利于组织的长入，随着天然高分子的逐渐降解，有更多的组织长入材料中，可将HAP颗粒固定在注射部位，起到持久塑形的效果，具有广阔的临床应用前景。

Claims (7)

1.一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将甲基丙烯酸酐滴加至透明质酸溶液中，充分反应，依次进行沉淀、透析后冻干得到干燥海绵状的HAMA；滴加和反应过程中控制pH值为8.0～8.5；其中甲基丙烯酸酐和透明质酸的物质的量比为5～2:1；
步骤2：将羟基磷灰石和聚乙二醇混合，加入溶剂，搅拌溶解，充分反应；离心沉淀后洗涤，冷冻干燥即可得到HAP-PEG；其中羟基磷灰石和聚乙二醇的质量比为1:1～2；
步骤3：将步骤1得到的HAMA和含蓝光引发剂的溶液充分混合得到溶液A；将HAP-PEG和溶液A混合得到混悬液，脱泡后蓝光照射条件下固化，即得到交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料；其中HAMA和HAP-PEG的质量比为1:15～30。
2.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，其特征在于，所述步骤1中反应温度为4℃，反应直至pH值无变化即结束；反应过程中，用5M的NaOH溶液调节pH值；甲基丙烯酸酐滴加完成后，第1个小时内，每5min滴加一次NaOH调节溶液pH；第2～3小时内，每15min滴加一次NaOH调节pH值；接下来每30min滴加一次NaOH调节溶液pH值，直至溶液pH值无变化。
3.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，其特征在于，所述步骤1中采用冰乙醇进行沉淀，然后首先采用乙醇透析液进行透析，然后采用去离子水进行透析。
4.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的羟基磷灰石首先进行以下预处理：
羟基磷灰石颗粒在800～1200℃条件下烧结2h，然后筛分；取粒径为25～40μm和25～70μm的部分。
5.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的制备方法，其特征在于，所述步骤3中蓝光引发剂采用苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂。
6.采用如权利要求1～5所述任一种制备方法得到的交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料，其特征在于，可注射材料经过破碎、灌装、灭菌后使用；采用筛网进行破碎处理，破碎后的复合凝胶与透明质酸溶液混合后进行灌装；灌装后通过高压蒸汽灭菌器在121℃条件下高压蒸汽灭菌30分钟。
7.如权利要求6所述一种交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料的应用，其特征在于，所述交联透明质酸/羟基磷灰石可注射材料用作软/硬组织填充材料；还可以作为尿道填充剂。
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