CN115267000B - 一种检测阿卡地新兴奋剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：(1)对样本进行萃取；(2)采用“液相色谱‑氧化接口‑同位素比值测定仪”检测，获得AICAR的δ13C值；(3)检测参照物的δ13C值；(4)根据AICAR的δ13C值与参照物的δ13C值的差值判断样本中阿卡地新兴奋剂的检测结果是否为阳性。该方法无需衍生化，克服了现有技术中因硅烷化产生副反应产物影响检测的技术缺陷，可以用于竞技体育的兴奋剂检测，简便易行，灵敏准确。
Description
技术领域
本发明属于医学检测技术领域，尤其涉及一种检测阿卡地新兴奋剂的方法。
背景技术
阿卡地新(AICAR)，别名；Acadesine；AICAR，分子式：C9H14N4O5，结构式如式1所示。
AICAR是人体内自身产生的内源性物质。化学合成的AICAR可能被运动员作为药物服用，可以增加运动耐力。自2009年，AICAR被确定为兴奋剂。有报道测定尿中AICAR浓度。但是，由于AICAR既可以是药物又可以是人体内可以自然产生的内源性物质，测定其浓度并不能判定尿中AICAR是来源于药物(即兴奋剂)还是体内自然产生的，不能从根本上判定是否使用了该兴奋剂。此类既可以是自然产生的物质也可以是化学合成的药物的物质被称为“内源性兴奋剂”。
除AICAR外，还有其它的“内源性兴奋剂”，如睾酮。世界反兴奋剂机构(为国际兴奋剂检测权威机构)对此类兴奋剂所颁布的检测方法采用稳定同位素分析方法。其原理是：化学合成药物与内源性物质中的碳元素同位素比值(13C/12C，以δ13C值表示，单位：‰)不同，依据此差异检测内源性兴奋剂。判定标准是：被测定物质(为兴奋剂或其代谢物)的δ13C值与参照物的δ13C差值大于4‰为阳性。参照物是指某类物质其δ13C值不因服用兴奋剂而改变，如孕烷二醇。δ13C值被定义为：δ13C＝(R样品-R标品)/R标品，其中R＝13C/12C。
目前，测定兴奋剂碳元素同位素比值的仪器均采用“气相色谱-燃烧-同位素比值测定仪”。在此测定中，被测定物质是可挥发的。但是AICAR难挥发(沸点726.3℃)，不能直接进行气相色谱分析。有报道采用衍生化及“气相色谱-燃烧-同位素比值测定仪”测定AICAR的δ13C值。该报道对样本进行了硅烷化，同时指出硅烷化产生副反应产物会影响检测。此方法不能直接得到AICAR的δ13C值，需要对衍生化产物进行δ13C值校正，增加了数据误差来源。由于已报道的方法存在诸多问题，在兴奋剂检测领域没有得到广泛认可。
由于测定AICAR的碳元素同位素比值难度很大，自2009年禁用至今，在世界反兴奋剂机构所颁布的检测方法中，没有检测AICAR的方法。因此，急需建立新方法以解决测定AICAR的碳元素同位素比值的问题。
发明内容
鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，该方法无需衍生化，克服了现有技术中因硅烷化产生副反应产物影响检测的技术缺陷，可以用于竞技体育的兴奋剂检测，简便易行，灵敏准确。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
本发明提供一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：
(1)对样本进行萃取；
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测，获得AICAR的δ13C值；
(3)检测并获得参照物的δ13C值；
(4)根据AICAR的δ13C值与参照物的δ13C值的差值判断样本中阿卡地新兴奋剂的检测结果是否为阳性。
采用上述技术方案的有益效果包括：本发明提供一种检测人尿中阿卡地新兴奋剂的方法，主要是采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测阿卡地新兴奋剂，尤其适用于内源性兴奋剂的检测，例如可以检测阿卡地新兴奋剂的来源是否是外源的。本发明提供的方法无需衍生化，操作简便，灵敏准确。由于无需硅烷化，克服了现有技术中因硅烷化产生副反应产物影响检测的技术缺陷。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤(2)中，色谱柱为Zorbax SB-Aq色谱柱或等效柱，柱温25-55℃，优选地，柱温30-45℃。
采用上述技术方案的有益效果包括：采用上述方法有利于分离水溶性化合物；有利于接续氧化接口的氧化反应及同位素的测定。
进一步，步骤(2)中，输送氧化剂的条件包括：0.3-0.9M过二硫酸钠，流速0.01-0.05ml/min；1-2M磷酸，流速0.01-0.05ml/min；氧化反应温度为99.9℃。
优选地，0.7M过二硫酸钠，流速0.02-0.03ml/min；1.5M磷酸，流速0.02ml/min。
采用上述技术方案的有益效果包括：采用上述条件有利于反应体系中化合物的氧化，使被测定物质充分转化为二氧化碳。
进一步，步骤(2)中，以含有金属离子的水溶液为催化剂，金属离子的浓度为500ppm，所述金属离子选自Ag+、Fe2+、Fe3+中的一种或几种，催化剂加入到流动相由流动相带入反应体系。
优选地，以AgNO3水溶液为催化剂，AgNO3水溶液中AgNO3浓度为500ppm。
采用上述技术方案的有益效果包括：
在仪器原有的硬件设计中，如需使用催化剂，则是将固定浓度的催化剂随磷酸直接加入到氧化反应器中，这样的设计极不易于灵活改变操作条件。
本发明提供的应用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”测定难氧化物质的碳同位素比值的方法中，将催化过二硫酸钠的Ag+加入在流动相中，可以灵活调节其分析过程中浓度和进入氧化反应接口的时间，可以适应分析中不同组分的不同要求，从而克服了上述技术缺陷。
进一步，步骤(2)中，加入了催化剂的流动相包括：0.01-1％硫酸水溶液(A)、含0.01-1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)；加入了催化剂的流动相流速0.1-0.4ml/min，优选地为0.18-0.2ml/min；反应程序包括：起始100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束。
优选地，A液可以为0.1％硫酸水溶液，B液为含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液。
采用上述技术方案的有益效果包括：采用上述条件有利于灵活调控催化剂的加入。
进一步，步骤(1)中，采用Oasis HLB小柱对样本进行固相微萃取。
采用上述技术方案的有益效果包括：通过固相微萃取提取被测物质，有利于后续的检测步骤，可以避免大量的杂质干扰的问题。
进一步，采用Oasis HLB小柱对样本进行固相微萃取，包括以下步骤：乙醇处理Oasis HLB小柱，水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，合并洗脱液；加热挥干溶剂，残留物用超纯水复溶，离心，取上清液注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
采用上述技术方案的有益效果包括：采用上述方法有利于提取含被测定物的组分，并富集该组分。
进一步，步骤(1)中，所述样本为尿样。
采用上述技术方案的有益效果包括：本发明提供的方法可以检测尿样中的阿卡地新兴奋剂，该方法无需衍生化，克服了现有技术中因硅烷化产生副反应产物影响检测的技术缺陷，可以用于竞技体育的兴奋剂检测，简便易行，灵敏准确。
进一步，步骤(3)中，所述参照物为孕烷二醇。
采用上述技术方案的有益效果包括：选择上述参照物有利于保证检测的结果的准确性。
进一步，步骤(4)中，如果AICAR的δ13C值与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值大于4‰，判定为阳性样本；否则，判定为阴性。
采用上述技术方案的有益效果包括：通过上述标准以判断样本中是否存在外源的AICAR。
附图说明
图1为实施例4中采用第一种操作条件检测AICAR的色谱图。
图2为实施例4中采用第二种操作条件检测AICAR的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
仪器设备及实验材料：
Oasis HLB固相微萃取柱：Waters公司。
Milli-Q超纯水制备仪：MILLIPORE公司。
离心机：Thermo Scientific公司。
“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”：Thermo Fisher公司，型号为Accela600。
孕烷二醇购自sigma公司。
若未经特殊说明，本发明中涉及的实验材料可以通过常规方法制备或市购获得。
若未经特殊说明，本发明中采用的实验方法均为本领域常规的实验方法。
本发明提供一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：
(1)取尿样后采用Oasis HLB小柱进行固相微萃取。先用乙醇处理Oasis HLB小柱，再用水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，合并洗脱液。加热挥干溶剂，残留物用超纯水复溶，离心，取上清液注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测，获得AICAR的δ13C值。
检测条件包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱或等效柱，柱温25-55℃，优选地，柱温30-45℃；进样体积为10μL至15μL；流动相可以含有Ag+、Fe2+、Fe3+等过渡金属离子，例如，流动相可以包括：0.01-1％硫酸水溶液(A)、含0.01-1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)，即B液中硫酸的含量为0.01-1％、AgNO3的含量为500ppm，使用前超声脱气；流动相流速0.1-0.4ml/min，优选地，流动相流速0.18-0.2ml/min；程序：起始(0min)100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束；输送氧化剂的条件：0.3-0.9M过二硫酸钠，流速0.01-0.05ml/min；1-2M磷酸，流速0.01-0.05ml/min。氧化反应温度为99.9℃。
上述中的百分比均为体积百分比。
优选地，0.7M过二硫酸钠，流速0.02-0.03ml/min；1.5M磷酸，流速0.02ml/min。A液为0.1％硫酸水溶液；B液为含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液。
(3)参照物孕烷二醇的碳同位素比值可以依照已有常规方法测定。例如：各实施例中,检测孕烷二醇的碳同位素比值可以参照文献：Rodrigo Aguilera，er al.Drug testingdata from the 2007 Pan American Games:delta13C values of urinaryandrosterone,etiocholanolone and androstanediols determined by GC/C/IRMS.JSteroid Biochem Mol Biol.2009Jul；115(3-5):107-14.
(4)计算AICAR的δ13C值与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值。依据对于内源性兴奋剂的阳性判定标准进行判定，如果AICAR的δ13C值与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值大于4‰，判定为阳性样本(即AICAR检测结果阳性)；否则，判定为阴性样本(即AICAR检测结果为阴性)。
本发明中仪器测定过程中可以使用标准品,用于标定碳同位素比值。
各实施例中,采用的同位素标准物质:蔗糖IAEA-CH6(δ13CVPDB＝－10.449‰±0.033‰，美国International Atomic Energy Agency公司)。
各实施例中，同位素比值测定仪在测定样品之前,可以用已知δ13C值的标品进行δ13C值校正，包括以下步骤：将0.1mg/ml的蔗糖IAEA-CH6(δ13CVPDB＝－10.449‰±0.033‰)水溶液以与检测样品相同的操作条件进行测定，进样10ul，测得的δ13C值在－10.45‰±0.5‰即可进行后续样品测定。如果不在此范围内，需调节仪器参数，以使标品δ13C值在此范围内，完成仪器δ13C值校正。
本发明提供了一种基于“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测人尿中阿卡地新兴奋剂的方法，该方法可以用于阿卡地新兴奋剂的检测。简单工作原理如下：样本中的水溶性待测物被注入仪器中的液相色谱，用不含有机溶剂的水做为流动相进行分离后，进入仪器的氧化接口进行化学氧化，待测物转化成二氧化碳，进入同位素比分析器，得到待测物的δ13C值。在氧化接口中，过二硫酸钠(Na2S2O8)与磷酸被仪器的氧化泵送入其中，过二硫酸钠在酸性条件下具有强氧化性，与进入氧化接口的待测物反应，将待测物氧化成二氧化碳。在氧化反应过程中，以AgNO3等作为催化剂由流动相带入反应体系中，其进入氧化接口中的浓度和时间灵活可控。本发明采用该仪器测定尿样中AICAR的碳同位素比值，再计算其与参照物(孕烷二醇)的δ13C值的差值，用于判别样本中AICAR的来源是药物来源还是体内自身来源。这个检测AICAR兴奋剂的过程不需要衍生化，因此从根本上解决了衍生化带来的难以克服的问题。本方法无需衍生化步骤，无需δ13C值校正，简便准确。
下面通过具体的实施例进行介绍。
实施例1
本发明提供一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：
(1)取服用药物后尿样(采自30岁健康男性志愿者服用AICAR后4小时的尿样)1mL,采用Oasis HLB小柱进行固相微萃取。先用1mL乙醇处理Oasis HLB小柱，再用2mL水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，每次2mL乙醇，洗脱2次，合并洗脱液。于70℃加热挥干溶剂，残留物用50μL超纯水复溶，10000r/min离心10分钟，取上述离心后的上清液10μL，注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测，获得AICAR的δ13C值。
检测条件包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱，柱温30℃；流动相为：0.1％硫酸水溶液(A)、含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)，即B液中硫酸含量为0.1％且AgNO3含量为500ppm，使用前超声脱气30分钟；流动相流速0.2ml/min；程序：起始(0min)100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min 50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束；输送氧化剂的条件：0.7M过二硫酸钠，流速0.03ml/min,1.5M磷酸，流速0.02ml/min。氧化反应温度为99.9℃。
(3)参照物孕烷二醇的碳同位素比值依照已有常规方法测定。
(4)计算AICAR与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值为11.3‰。依据对于内源性兴奋剂的阳性判定标准，由于AICAR的δ13C值与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值大于4‰，判定此样本为阳性，该检测结果与实际情况一致，证明采用本发明提供的方法可以准确检测出是否服用阿卡地新兴奋剂。
实施例2
验证本发明采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”测定AICAR的δ13C方法的重复性。
选择实施例1中的服药后尿样6份，采用实施例1记载的方法在相同的操作条件下测定每个样本的AICAR的δ13C值，并计算其标准偏差，结果表明标准偏差为0.49‰。说明采用本发明提供的方法检测AICAR重复性比较好。
实施例3
验证本发明采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”测定AICAR的δ13C方法的灵敏性。
取含有2600ng/mL AICAR的阳性尿样6份,采用实施例1记载的方法在相同的操作条件下测定每个样本的AICAR的δ13C值，并计算其标准偏差，结果表明标准偏差0.57‰。说明采用该方法可检测到浓度低至2600ng/mL AICAR，采用本发明提供的方法检测AICAR灵敏性比较好。
实施例4
一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：
(1)取尿样2mL,采用Oasis HLB小柱进行固相微萃取。每一个小柱处理1mL样本。先用1mL乙醇Oasis HLB小柱，再用2mL水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，每次2mL乙醇，洗脱2次，合并2个小柱的洗脱液。于70℃加热挥干溶剂，残留物用50μL超纯水复溶，10000r/min离心10分钟，取上述离心后的上清液10μL，注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”进行检测，分别采用两种操作条件检测阿卡地新兴奋剂。
第一种操作条件包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；柱温45℃。流动相为：0.1％硫酸水溶液(A)、含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)，使用前超声脱气30分钟；流动相流速0.18ml/min,程序：起始(0min)100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束。输送氧化剂的条件：0.7M过二硫酸钠，流速0.02ml/min；1.5M磷酸，流速0.02ml/min。氧化反应温度为99.9℃。色谱图结果如图1所示。
第二种操作条件包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；柱温45℃。流动相为：0.1％硫酸水溶液，使用前超声脱气30分钟；流动相流速0.18ml/min,运行时间60min。输送氧化剂的条件：0.7M过二硫酸钠，流速0.02ml/min；含500ppm AgNO3的磷酸(1.5M)，流速0.02ml/min。氧化反应温度为99.9℃。色谱图结果如图2所示。
图1中显示6号干扰峰较小，7号AICAR峰形较好。图2显示6号干扰峰较大，影响到7号AICAR峰的峰形变差。因此，采用第一种操作条件检测要优于第二种操作条件检测。因此，催化剂可以由流动相带入反应体系中，其进入氧化接口中的浓度和时间灵活可控。
实施例5
一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：
(1)取尿样2mL,采用Oasis HLB小柱进行固相微萃取。每一个小柱处理1mL样本。先用1mL乙醇处理Oasis HLB小柱，再用2mL水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，每次2mL乙醇，洗脱2次，合并2个小柱的洗脱液。于70℃加热挥干溶剂，残留物用50μL超纯水复溶，10000r/min离心10分钟，取上述离心后的上清液10μL，注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”进行检测，获得AICAR的δ13C值。检测条件包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱，柱温45℃；流动相为：0.1％硫酸水溶液(A)、含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)，使用前超声脱气30分钟；流动相流速0.18ml/min；程序：起始(0min)100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束；输送氧化剂的条件：0.7M过二硫酸钠，流速0.02ml/min,1.5M磷酸，流速0.02ml/min。氧化反应温度为99.9℃。
经测定，尿样中AICAR的δ13C值为-9.6‰。
(3)参照物孕烷二醇的碳同位素比值依照已有常规方法测定。其δ13C值为-19.7‰。
(4)计算AICAR与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值为10.1‰。依据对于内源性兴奋剂的阳性判定标准，AICAR的δ13C值与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值大于4‰，此样本为阳性。
实施例6
本发明提供一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，包括以下步骤：
(1)取阴性尿样(采自30岁健康男性志愿者未服用药物的尿样)1mL,采用OasisHLB小柱进行固相微萃取。先用1mL乙醇处理Oasis HLB小柱，再用2mL水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，每次2mL乙醇，洗脱2次，合并洗脱液。于70℃加热挥干溶剂，残留物用50μL超纯水复溶，10000r/min离心10分钟，取上述离心后的上清液10μL，注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测，获得AICAR的δ13C值。
检测条件包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱，柱温30℃；流动相为：0.1％硫酸水溶液(A)、含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)，使用前超声脱气30分钟；流动相流速0.2ml/min；程序：起始(0min)100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束；输送氧化剂的条件：0.7M过二硫酸钠，流速0.03ml/min,1.5M磷酸，流速0.02ml/min。氧化反应温度为99.9℃。
通过上述方法获得尿样中的AICAR的δ13C值。
(3)参照物孕烷二醇的碳同位素比值依照已有常规方法测定。
(4)计算AICAR的δ13C值与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值为1.3‰。依据对于内源性兴奋剂的阳性判定标准，AICAR与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值小于4‰，判定此样本为阴性样本。
实施例7
在实施例1的基础上，色谱柱为等效柱，柱温为25℃；进样体积为15μL；流动相流速0.1mL/min,流动相组成包括：0.01％硫酸水溶液,并含有Fe2+；过二硫酸钠0.3M，磷酸浓度1M，过二硫酸钠和磷酸泵流速0.01mL/min,其他操作均与实施例1相同。
实施例8
在实施例1的基础上，色谱柱为Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)，柱温为55℃；进样体积为10μL；流动相流速0.4mL/min,流动相组成包括：1％硫酸水溶液,并含有Fe3+；过二硫酸钠0.9M，磷酸浓度2M，过二硫酸钠和磷酸泵流速0.05mL/min,其他操作均与实施例1相同。
本发明人在经过大量试验后发现采用下面的检测条件效果更好。例如，“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”液相色谱条件可以包括：Zorbax SB-Aq(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；柱温30℃。流动相为：0.1％硫酸水溶液(A)、含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液(B)，使用前超声脱气30分钟；流动相流速0.2ml/min,程序：起始(0min)100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min 50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束。输送氧化剂的条件：0.7M过二硫酸钠，流速0.03ml/min,1.5M磷酸，流速0.02ml/min。氧化反应温度为99.9℃。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对样本进行萃取；
(2)采用“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”检测，获得AICAR的δ13C值；色谱柱为Zorbax SB-Aq色谱柱，柱温25-55℃；输送氧化剂的条件包括：0.3-0.9M过二硫酸钠，流速0.01-0.05ml/min；1-2M磷酸，流速0.01-0.05ml/min；氧化反应温度为99.9℃；加入了催化剂的流动相包括：0.01-1％硫酸水溶液A、含0.1％硫酸和500ppm AgNO3水溶液B；加入了催化剂的流动相流速0.1-0.4ml/min；反应程序包括：起始100％A，保持至38min,之后在2min内达到50％A+50％B,在40min 50％A+50％B，保持至50min,之后在2min内达到100％A,保持至60min结束；
(3)检测参照物的δ13C值；
(4)根据AICAR的δ13C值与参照物的δ13C值的差值判断样本中阿卡地新兴奋剂的检测结果是否为阳性。
2.根据权利要求1所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，其特征在于，步骤(1)中，采用Oasis HLB小柱对样本进行固相微萃取。
3.根据权利要求2所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，其特征在于，采用Oasis HLB小柱对样本进行固相微萃取，包括以下步骤：乙醇处理Oasis HLB小柱，水冲洗小柱，上样，用乙醇洗脱，合并洗脱液；加热挥干溶剂，残留物用超纯水复溶，离心，取上清液注入“液相色谱-氧化接口-同位素比值测定仪”。
4.根据权利要求1所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样本为尿样。
5.根据权利要求1所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述参照物为孕烷二醇。
6.根据权利要求5所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法，其特征在于，步骤(4)中，如果AICAR与参照物孕烷二醇的δ13C值的差值大于4‰，判定为阳性样本；否则，判定为阴性。
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