CN115261241B - 一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用 - Google Patents

一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115261241B
CN115261241B CN202211083689.XA CN202211083689A CN115261241B CN 115261241 B CN115261241 B CN 115261241B CN 202211083689 A CN202211083689 A CN 202211083689A CN 115261241 B CN115261241 B CN 115261241B
Authority
CN
China
Prior art keywords
trichoderma
parts
invasive
spore suspension
microbial
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211083689.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN115261241A (zh
Inventor
郝志敏
孙东辉
申珅
董金皋
曾凡力
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Agricultural University
Original Assignee
Hebei Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Agricultural University filed Critical Hebei Agricultural University
Priority to CN202211083689.XA priority Critical patent/CN115261241B/zh
Publication of CN115261241A publication Critical patent/CN115261241A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115261241B publication Critical patent/CN115261241B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/38—Trichoderma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/885—Trichoderma
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用，涉及微生物和生物肥料领域。该侵占木霉于2022年7月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.40239。该侵占木霉分离自玉米根际土壤，对植物真菌病害具有良好的防治效果，同时还能够显著促进植物生长。本发明还利用该侵占木霉，通过发酵工艺优化及应用方式探索和改进，得到了一种多功能微生物菌剂，具有良好防治植物真菌病害功能，同时还可以显著促进植物生长。

Description

一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物和生物肥料领域，特别是涉及一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用。
背景技术
植物病害对农业生产造成了严重的损失，农药的出现对防治植物病害起到了很大作用，但也带来了更严重的问题，比如污染土壤、水源，危害有益生物，病虫害产生耐药性等等，严重影响生态平衡和人类健康。而利用生物防治的手段来防治植物病害的方法很好地解决了这些问题，其中研制微生物菌剂来防病抗病，更是成为了生物防治的首选方法，得到了相关专业人士的大力推崇和大众的一致认可。
木霉菌属于真菌门，知菌亚门的丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，其有性阶段一般为子囊菌亚门，肉座目，肉座科的肉座菌属。菌落生长很快，菌落初始颜色为白色，形状为规则的圆形，呈辐射状向四周扩展，产孢量大，从菌落中心开始产生绿色或黄绿色孢子，逐渐向外扩散，最后整个菌落全部变成绿色，呈现不定形棉絮状或者致密丛束状。菌丝纤细，透明有隔，多分枝，分生孢子梗呈松塔状，末端有瓶梗结构，是木霉属形态学鉴定的重要特征。木霉菌对环境的适应能力极强，在自然环境中分布广泛，普遍存在于土壤中，是土壤中不可或缺的一类微生物。对多种植物病原菌具有明显的拮抗作用，能够有效降低其危害程度，提高植物抗逆性，并促进植物生长。且经研究发现，木霉菌能够防治多种作物病害，比如，由禾谷镰孢(Fusarium graminearum)引起的玉米茎腐病，由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的纹枯病，由稻梨孢(Magnaporthe grisea)引起的稻瘟病，以及在蔬菜水果等经济作物上，由尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)引起的西瓜枯萎病，由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的草莓灰霉病等。木霉可通过营养竞争、重寄生、分泌抗菌物质、诱导植物抗性等多种机制，甚至多个机制协同作用达到抗病效果。
木霉菌已成为绿色防治植物真菌病害的首选方式之一，但现有木霉菌产品，大多功能单一，适用范围小。
发明内容
本发明的目的是提供一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明筛选得到一株侵占木霉菌株，兼具植物促生长和防治多种真菌病害的功能。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一株侵占木霉(Trichoderma aggressivum)，于2022年7月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40239。
本发明还提供一种微生物发酵剂，包括上述的侵占木霉。
本发明还提供一种上述的侵占木霉或微生物发酵剂在植物促生长和/或防治真菌病害中的应用。
进一步地，所述真菌病害的病原菌为尖孢镰孢、禾谷镰孢和拟轮枝镰孢中的至少一种。
本发明还提供上述的微生物发酵剂的制备方法包括以下步骤：
(1)上述的侵占木霉经固体发酵后，收集孢子，制备得到孢子悬浮液；
(2)所述孢子悬浮液稀释后，与豆粕粉混合均匀，烘干后得到所述微生物发酵剂。
进一步地，在步骤(1)中，固体发酵的培养基以质量份数计，包括以下组分：稻壳80份，玉米秸秆粉10份，玉米粉4份，豆粕4份，MgSO4 2份，水120份。
进一步地，所述固体发酵的培养温度为28℃，培养时间为7d。
进一步地，在步骤(2)中，所述孢子悬浮液稀释至2×107/mL。
进一步地，在步骤(2)中，稀释后的孢子悬浮液与豆粕粉的体积质量比为1：1。
本发明公开了以下技术效果：
本发明从玉米根际土壤中分离得到一株侵占木霉，该侵占木霉对植物真菌病害具有良好的防治效果，同时还能够显著促进植物生长。本发明还利用该侵占木霉，通过发酵工艺优化及应用方式探索和改进，得到了一种多功能微生物菌剂，具有良好防治植物真菌病害功能，同时还可以显著促进植物生长。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例2构建的HD2112的系统发育树。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1土样采集和菌株的分离
1、样品采集
样品采集自河北邯郸田间郑单958玉米植株根际土壤。
用铲子拨开田间10cm的表土层，用取土器将土壤连同植物的根系一起挖出，用自封袋装好，带回实验室分离。
2、侵占木霉菌株HD2112的分离获取
将紧贴玉米根系的根际土用小刷子轻轻刷下，收集起来，用无菌水梯度稀释，分别吸取0.1mL稀释液涂布于孟加拉红培养基平板基(蛋白胨5g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，葡萄糖10g，氯霉素0.1g，孟加拉红0.033g，琼脂18.5g，蒸馏水1000mL，pH6.8～7.0)上，置于25℃的恒温培养箱中培养3天。挑取形态似木霉菌的单菌落转接到PDA平板上进行纯化培养，得到一个菌株，命名为HD2112。
实施例2菌株的鉴定
1、根据《真菌鉴定手册》、《木霉分类与鉴定》等方法，使用PDA培养基培养真菌，观察菌落特征，测量菌落生长速度，光学显微镜下观察菌丝粗细和形状以及及是否有横隔、孢子大小、形状等特征。通过观察，发现HD2112菌株在PDA培养基上，经过25℃恒温培养2天后，菌丝呈辐射状扩展，且菌落扩展速度较快，3天即可长满整个培养皿，5天后菌丝层变厚，呈致密绒毛状，菌落初期为白色，后期因产生孢子而由中间向外逐渐变绿。在显微镜下观察，菌丝透明，有隔。分生孢子梗由菌丝分枝产生对生二至三级分枝，分生孢子梗顶端有有瓶型小梗结构，尖端产生分生孢子，表面光滑，产孢量大。根据《真菌鉴定手册》、《木霉分类与鉴定》等方法初步鉴定菌株HD2112为木霉属(Trichoderma)。
2、分子生物学鉴定
ITS鉴定：将HD2112菌株在PDA平板上培养5天后，将培养基表面菌丝刮下，提取真菌基因组DNA。以提取的真菌DNA作为模板，以通用引物ITS1和ITS4引物对其进行ITS片段PCR扩增。PCR反应体系为720μL，反应体系为：模板DNA 1μL，ddH2O 7μL，ITS1引物1μL，ITS4引物1μL，Taq酶10μL。反应条件为：95℃10min，94℃30s，5℃30s，72℃50s；循环35次；72℃5min。PCR扩增产物送上海生工生物技术有限公司测序后，将获得的DNA序列，输入NCBI，用Blast程序与数据库中的所有序列进行比较分析，结果见表1。利用DNA MAN进行系统发育树的构建(图1)。经过序列分析显示，本发明所分离的菌株HD2112属于木霉属侵占木霉。
表1 HD2112菌株ITS序列同源比对结果
序列ID 菌株 同源性
MF952664.1 Trichoderma aggressivum strain ACCC32930 100.00％
MF632118.1 Trichoderma aggressivum strain CTCCSJ-A-XM31763 100.00％
MF541435.1 Trichoderma aureoviride strain ACCC32830 100.00％
MF541428.1 Trichoderma aureoviride strain ACCC32823 100.00％
MF541425.1 Trichoderma harzianum strain ACCC32820 100.00％
MK322688.1 Trichoderma aggressivum isolate PAN12-64 99.83％
KC662233.1 Trichoderma sp.724AI-2013 99.83％
MF780842.1 Trichoderma aureoviride strain ACCC32830 99.65％
MF669739.1 Trichoderma harzianum strain ACCC32820 99.65％
MF541427.1 Trichoderma aureoviride strain ACCC32822 99.63％
3、菌种保藏
2022年7月6日，将HD2112保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40239。
实施例2侵占木霉HD2112的抑菌效果
采用对峙培养法，将侵占木霉HD2112菌株与病原真菌尖孢镰孢(Fusariumoxysporum)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)和拟轮枝镰孢(Fusariumverticillioides)分别在PDA培养基中培养5d，再利用圆形切片打孔器(直径为0.7cm)进行切割，分别将侵占木霉与病原菌的菌盘接种在PDA培养基平板中相距5cm的两点上，只接种病原菌的PDA平板作为空白对照，实验设置3个平行，25℃恒温培养3天、5天和7天测量病原菌菌落朝向木霉菌一侧的半径，以及对照组同时期病原菌菌落半径，计算抑菌率。抑菌率＝(对照处理的病原菌菌落半径-木霉菌处理的病原菌相向半径)/对照处理的病原菌菌落半径×100％。结果如表2所示。
表2不同培养时间侵占木霉HD2112对各病原菌的抑菌率(％)
实施例3侵占木霉HD2112的产生长素能力
制备侵占木霉HD2112的孢子悬浮液，以1×107/mL的浓度1％的接种量接种到含有1‰L-色氨酸溶液的马铃薯葡萄糖液体培养基中，25℃、220rpm摇床中培养5d，取发酵液5mL用于产生长素能力检测。将培养液在8000×g下离心10min，取1mL上清于10mLEP管中，同时向其中加入等体积的Salkowski比色液，充分摇匀使溶液混合均匀，以等体积的马铃薯葡萄糖液体培养基作为对照。阴暗放置30min，测定OD530值，同时分别测量0mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL和50mg/mL的吲哚乙酸溶液吸光值，绘制标准曲线，发酵液样本所测得的OD530在标准曲线上找到对应的生长素的浓度。实验设置3次生物学重复。计算生长素产量。
吲哚乙酸标准液的配制：用天平称100mg吲哚乙酸，再倒入10mL离心管中，加入2mL无水乙醇混合摇匀，即为50mg/mL吲哚乙酸母液，将母液进行稀释，得到0mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL和50mg/mL吲哚乙酸溶液。
L-赖氨酸溶液：用天平称取L-赖氨酸100mg倒入10mL离心管中，向其中加入1mLHCl溶解即可。按照1:1000的体积比与培养基混合备用。
Salkowski比色液：用天平称氯化铁4.5g倒入，倒入盛有300mL蒸馏水的烧杯内，慢慢向烧杯中加入587.4mL98％硫酸，待冷后蒸馏水定容1000mL。
侵占木霉菌株HD2112发酵液中的生长素含量达到38.44μg/mL。
实施例4侵占木霉HD2112微生物菌剂的制备
1、种子液的制备
从侵占木霉HD2112菌种保藏管中挑取少量菌丝，接种于PDA培养基平板进行复苏，25℃培养7天，待菌苔长满，产生大量分生孢子，用40mL的无菌生理盐水冲洗下来，调节孢子浓度至1×107/mL，即为种子液；
2、孢子悬浮液的制备
将上述制备的侵占木霉种子液以3％的接种量接种至装有2kg无菌固体发酵培养基的容积为20L无菌容器中，每48小时搅拌一次，防止培养基结块，28℃培养7天后，加入10L无菌水微波振荡30min，即得到孢子悬浮液，孢子浓度可达8×108/mL以上；
其中，侵占木霉固体发酵培养基，以质量份数计，由以下组分组成：稻壳80份，玉米秸秆粉10份，玉米粉4份，豆粕4份，MgSO4 2份，水120份；培养基灭菌的条件为：121℃高压灭菌20分钟。
3、菌剂制备
将上一步得到的侵占木霉孢子悬浮液浓度调整为2×107/mL，按照1:1的质量比与豆粕粉混合均匀，40℃烘干10h，即得侵占木霉HD2112微生物菌剂，常温保存待用。
实施例5侵占木霉HD2112微生物菌剂的促生及抑菌效果
1、促生效果
将实施例4制备的侵占木霉HD2112微生物菌剂以每株植株3g的量，均匀撒至盆中土壤表层，分别种植玉米、西瓜、花生，以未添加菌剂的植株为对照(CK)，待处理组植株与对照组长势差别明显后，观察对植株生长的影响。
结果如表3、4、5所示。
表3玉米农艺性状
株高(cm) 茎粗(周长/cm) 叶宽(cm) 根长(cm)
CK 91.07 3.02 4.05 77.93
菌剂处理 112.43 4.08 4.92 92.20
表4西瓜农艺性状
株高(cm) 茎粗(周长/cm) 叶宽(cm) 根长(cm)
CK 9.83 0.47 1.27 7.12
菌剂处理 14.2 0.68 1.29 8.93
表5花生农艺性状
株高(cm) 茎粗(周长/cm) 叶宽(cm) 根长(cm)
CK 11.22 0.64 1.49 9.55
菌剂处理 19.21 0.98 2.10 13.71
2、抗玉米茎腐病效果
将实施例4制备的侵占木霉HD2112微生物菌剂以每株植株3g的量，均匀撒至盆中土壤表层，种植玉米，以未添加菌剂的植株为对照(CK)，待玉米生长至茎粗约1cm时接种禾谷镰孢孢悬液(浓度为105个/mL)，用注射器吸取1mL禾谷镰孢孢悬液，在玉米茎基部距地面2cm处，以斜向下45度的方向扎入，将孢悬液缓慢注入其中。接种5d后，于接种处上下2cm处截取玉米茎秆，从注射孔处纵向剖成两半，观察病斑面积，统计防效。
病情分级标准如表6所示。
表6病情分级标准
病情等级 级别判断依据
1级 在接种茎节、中毒线长占25％以下
2级 在接种茎节、中毒线长占26％～50％
3级 在接种茎节、中毒线长占51％～75％
4级 在接种茎节、中毒线长占76％～100％
病情指数＝[∑(病情级数×对应发病数)/(调查总数×最高病情级数)]×100％，
防治效果(％)＝[(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数]×100％。
结果如表7所示。
表7玉米茎腐病病情指数及防效
CK 菌剂处理
病情指数(％) 41.25 24.25
防治效果(％) / 41.21
3、抗花生根腐病效果
将实施例4制备的侵占木霉HD2112微生物菌剂以每株植株3g的量，均匀撒至盆中土壤表层，种植花生，以未添加菌剂的植株为对照(CK)，待花生植株生长至主茎达到十节，接种拟轮枝镰孢孢悬液，调整浓度至105个/mL，用注射器吸取1mL注入根围土壤，接种孢子悬浮液10天后调查发病率并计算病情指数，病情分级标准见表8。
表8病情分级标准
病情指数＝[∑(病情级数×各级病株数)/(调查总数×最高病情级数)]×100％，
防治效果(％)＝[(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数]×100％。
结果如表9所示。
表9花生根腐病病情指数及防效
CK 菌剂处理
病情指数(％) 35.56 24.44
防治效果(％) / 31.27
4、抗西瓜枯萎病效果
将实施例4制备的侵占木霉HD2112微生物菌剂以每株植株3g的量，均匀撒至盆中土壤表层，种植西瓜种子，以未施用菌剂的植株为对照(CK)，待西瓜植株生长至两叶一心时期，接种尖孢镰孢孢悬液，调整浓度为105个/mL，用注射器吸取1mL注入西瓜苗茎基处，接种孢子悬浮液5天后调查发病率并计算病情指数，病情分级标准见表10。
表10病情分级标准
病情指数＝[∑(病情级数×各级病株数)/(调查总数×最高病情级数)]×100％，
防治效果(％)＝[(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数]×100％。
结果如表11所示。
表11西瓜枯萎病病情指数及防效
CK 菌剂处理
病情指数(％) 55 35
防治效果(％) / 36.36
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (8)

1.一株侵占木霉（Trichoderma aggressivum），其特征在于，于2022年7月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40239。
2.一种微生物发酵剂，其特征在于，包括权利要求1所述的侵占木霉。
3.一种如权利要求1所述的侵占木霉或权利要求2所述的微生物发酵剂在植物促生长和/或防治真菌病害中的应用；
所述真菌病害的病原菌为尖孢镰孢、禾谷镰孢和拟轮枝镰孢中的至少一种。
4.一种如权利要求2所述的微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）如权利要求1所述的侵占木霉经固体发酵后，收集孢子，制备得到孢子悬浮液；
（2）所述孢子悬浮液稀释后，与豆粕粉混合均匀，烘干后得到所述微生物发酵剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，固体发酵的培养基以质量份数计，包括以下组分：稻壳80份，玉米秸秆粉10份，玉米粉4份，豆粕4份，MgSO4 2份，水120份。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述固体发酵的培养温度为28℃，培养时间为7d。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述孢子悬浮液稀释至2×107/mL。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，稀释后的孢子悬浮液与豆粕粉的体积质量比为1：1。
CN202211083689.XA 2022-09-06 2022-09-06 一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用 Active CN115261241B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211083689.XA CN115261241B (zh) 2022-09-06 2022-09-06 一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211083689.XA CN115261241B (zh) 2022-09-06 2022-09-06 一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115261241A CN115261241A (zh) 2022-11-01
CN115261241B true CN115261241B (zh) 2023-08-01

Family

ID=83756003

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211083689.XA Active CN115261241B (zh) 2022-09-06 2022-09-06 一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115261241B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101575574A (zh) * 2009-06-11 2009-11-11 刘和现 一种哈茨木霉类复合菌培养物及其在植保方面的应用
CN103451112A (zh) * 2013-09-02 2013-12-18 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一株耐盐碱长枝木霉及其应用
CN106332905A (zh) * 2016-08-29 2017-01-18 佛山市艳晖生物科技有限公司 一种防治木薯褐斑病的复合微生物制剂及其制备方法
WO2019063865A1 (es) * 2017-09-27 2019-04-04 Universidad De Almería Nueva cepa de trichoderma aggresivum fsp europaeum, composiciones y aplicaciones de la misma

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT201800020869A1 (it) * 2018-12-21 2020-06-21 Green Innovation Gmbh A plant growth promoter composition, processes for preparing the same and uses thereof / composizione promotrice di crescita vegetale, processi per la sua preparazione e suoi usi

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101575574A (zh) * 2009-06-11 2009-11-11 刘和现 一种哈茨木霉类复合菌培养物及其在植保方面的应用
CN103451112A (zh) * 2013-09-02 2013-12-18 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一株耐盐碱长枝木霉及其应用
CN106332905A (zh) * 2016-08-29 2017-01-18 佛山市艳晖生物科技有限公司 一种防治木薯褐斑病的复合微生物制剂及其制备方法
WO2019063865A1 (es) * 2017-09-27 2019-04-04 Universidad De Almería Nueva cepa de trichoderma aggresivum fsp europaeum, composiciones y aplicaciones de la misma

Also Published As

Publication number Publication date
CN115261241A (zh) 2022-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108315267B (zh) 短密木霉gsaamlshu-1及其应用
CN106399178B (zh) 具有降解无机磷和抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN103146586A (zh) 一种防治植物真菌病害的哈茨木霉菌株及其应用
CN109456921B (zh) 一种多粘类芽孢杆菌、应用及微生物菌剂、粉剂和颗粒剂
CN110292051B (zh) 一种果蔬病害抑制剂及其应用
CN106497831A (zh) 一种防治烟草疫霉病复合菌剂及其制备方法和应用
CN110616156B (zh) 哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用
CN106399129A (zh) 一株哈茨木霉菌株及其应用
CN112342173B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN110093283B (zh) 球孢白僵菌菌株及其培养方法
CN109749953B (zh) 蜡样芽孢杆菌、菌剂及其制备方法和应用
CN101942403B (zh) 短小芽孢杆菌及其培养方法和用途
CN110343621A (zh) 一种棘孢木霉菌株及其应用
CN116463220B (zh) 一株促进蓝莓生长的深色有隔dse真菌及其应用
CN105695342B (zh) 康氏木霉菌tg-72及其在黄曲霉菌生物防治中的应用
Türkölmez et al. Clonostachys rosea Strain ST1140: An Endophytic Plant-Growth-Promoting Fungus, and Its Potential Use in Seedbeds with Wheat-Grain Substrate
CN111373899A (zh) 一种利用深色有隔内生真菌浸种促进植物幼苗生长发育的方法
CN115261241B (zh) 一株侵占木霉及其微生物菌剂、制备方法和应用
CN110184197B (zh) 一种球孢白僵菌油悬浮剂
CN111909863B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其用途
CN111321094A (zh) 一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂m1及其应用
CN105754909B (zh) 凤凰单丛茶树内生拮抗假单胞菌zf02及在生防中应用
CN113881575B (zh) 一株普通青霉及其在减轻苹果连作障碍中的应用
CN117363489B (zh) 一株具备黄瓜促生和抗病功能的长尾柄孢壳菌及其应用
CN113249266B (zh) 一株高效溶磷、促进甘蔗发芽的枯草芽孢杆菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant