CN115259202B - 镍-氧化铈纳米棒的制备与在α-葡萄糖苷酶检测及其天然产物抑制剂筛选中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有类氧化酶活性的Ni‑CeO2纳米棒的制备，是将六水合硝酸镍和氢氧化钠加入L‑脯氨酸和六水合硝酸铈组成的低共熔溶剂中反应得到，将其用于定量检测α‑葡萄糖苷酶，根据不同浓度的α‑葡萄糖苷酶溶液吸光度值不同，构建吸光度的变化值与α‑葡萄糖苷酶浓度之间的线性关系，即可实现定量检测。但如果α‑葡萄糖苷酶的活性受到抑制，吸光度值将会恢复，据此可实现α‑葡萄糖苷酶抑制剂的筛选，以阿卡波糖作为对照，对天然产物中分离得到的萜类化合物进行筛选，熊果酸和齐墩果酸具有较好的抑制效果。本发明能快速、灵敏、高选择性地实现α‑葡萄糖苷酶检测及天然产物抑制剂筛选，对糖尿病的临床治疗具有重要指导意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒的制备方法，同时涉及利用该具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒用于α-葡萄糖苷酶检测和α-葡萄糖苷酶的天然产物抑制剂筛选，属于纳米传感领域。
背景技术
糖尿病是世界上最常见且最复杂的疾病之一，根据世界卫生组织的数据，全球有超过4.2亿人患有糖尿病。严重的糖尿病会导致并发症，如心血管疾病、糖尿病视网膜病变、肾病和情绪障碍等。II型糖尿病是所有类型糖尿病中最常见的，占所有糖尿病患者的90%。α-葡萄糖苷酶是一种位于小肠上皮的膜结合酶，能够将二糖/寡糖水解为葡萄糖，被认为是治疗II型糖尿病的最关键靶点之一。α-葡萄糖苷酶的抑制剂会抑制其酶活性，减慢碳水化合物的水解过程从而避免餐后血糖水平升高，因此α-葡萄糖苷酶抑制剂可用于控制血糖水平。科研工作者已对α-葡萄糖苷酶抑制剂的探索做出了许多努力，包括合成药物（米格列醇和伏格列波糖）以及从微生物和植物中提取的天然产物（阿卡波糖、木犀草素、芦丁等）。与合成药物相比，天然的抑制剂成本低、副作用小、降血糖效果好等优势。因此，构建简单、快速、灵敏的α-葡萄糖苷酶活性检测新方法并将其用于α-葡萄糖苷酶的新型天然产物抑制剂的筛选对糖尿病的临床治疗具有重要指导意义。
到目前为止，已有多种方法应用α-葡萄糖苷酶的活性测定及其抑制剂的筛选，如毛细管电泳法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、比色分析法、荧光光谱法、电化学分析等。与经典的检测方法（毛细管电泳法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱法）相比，比色、荧光、电化学等新兴的检测手段因操作简单，不需要复杂的仪器和熟练的操作人员，备受关注。
据调研，目前还没有使用具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒通过紫外-可见分光光谱仪检测α-葡萄糖苷酶及其天然产物抑制剂的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒的制备方法；
本发明的另一个目的是提供利用该具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒在α-葡萄糖苷酶检测和α-葡萄糖苷酶的天然产物抑制剂筛选中的应用。
一、具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒的制备
本发明中具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒的制备，是将六水合硝酸镍和氢氧化钠依次加入L-脯氨酸和六水合硝酸铈组成的低共熔溶剂中，在室温~100℃下反应0.5~5.0 h，再经离心、洗涤、干燥即得。其中，所述六水合硝酸镍和氢氧化钠的摩尔比为1:3~1:5；所述六水合硝酸镍和低共熔溶剂的质量比为1:1~1:8。
图1为本发明得到的具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒的X射线衍射（XRD）图。从图中可知，Ni-CeO2纳米棒的XRD图与CeO2（PDF No. 4-593）的标准XRD图相似。同时，我们在相同条件下制备了不含Ni的CeO2，其XRD图谱与标准图谱吻合良好。（111）、（200）、（220）和（311）晶面的衍射峰可以在Ni-CeO2和CeO2中找到，表明产物的结晶度良好。没有发现来自其他化合物如Ce(OH)CO3、NiO和Ni(OH)2的峰，表明了该方法制备Ni-CeO2的可行性。与CeO2相比，Ni-CeO2的XRD峰略微向较低角度偏移，这表明原子半径较小的Ni2+掺入到CeO2中，引起了晶格畸变。
图2为本发明得到的Ni-CeO2纳米棒的选区电子衍射（SAED）图。图像显示出清晰的衍射环，分别对应CeO2的（111）、（200）、（220）和（311）晶面，这与XRD图中的强峰相对应。
图3为本发明制备的Ni-CeO2纳米棒的扫描电镜（SEM）图。可以看出，该材料为棒状结构。
图4为本发明得到的Ni-CeO2纳米棒的EDX图。从能谱图中可以看出，该材料由Ce、O、Ni三种元素组成。
图5为本发明得到的Ni-CeO2纳米棒的暗场STEM图（A）及材料中相应元素的元素地图（B-G）。其中B：O-K；C：Ni-K；D：Ni-L；E：Ce-K; F: Ce-L; G: Ce-M。从图B-G可以得出，该材料主要包括Ce、Ni、O三种元素，这一结果与图4完全吻合。
将800 μL HAc-NaAc缓冲液（100 mM，pH=4.0）、100 μL 2.0 mg/mL的Ni-CeO2分散液和100 μL 10 mM的3，3'，5，5'-四甲基联苯胺（TMB），混合均匀，在室温下反应后测定652nm处的吸光度。图6为本发明得到的Ni-CeO2与TMB（a）、Ni-CeO2纳米棒（b）以及TMB（c）的可见光谱图。结果表明Ni-CeO2纳米棒可催化TMB，生成氧化态的TMB，导致体系在652 nm处的吸光度值显著增加，表明Ni-CeO2纳米棒具有优异的类氧化酶催化性能。
二、具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒用于α-葡萄糖苷酶检测
将2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸与不同浓度的α-葡萄糖苷酶涡旋混匀，在室温~37 ℃下反应10~30 min。随后依次加入醋酸盐缓冲液、Ni-CeO2纳米棒分散液以及3，3'，5，5'-四甲基联苯胺，混匀后在室温~37 ℃下反应30~60 min后，测定体系在652 nm处的吸光度值，记为A1；对照组使用相同体积的磷酸盐缓冲溶液代替α-葡萄糖苷酶，其他条件不变，测定体系在652 nm处的吸光度值，记为A2；由于不同浓度的α-葡萄糖苷酶溶液导致体系在652 nm处的吸光度值不同，构建体系在652 nm处的吸光度的变化值Y=A2-A1与α-葡萄糖苷酶溶液的浓度对数值之间的线性关系，即可定量检测α-葡萄糖苷酶活性。
醋酸盐缓冲溶液（由醋酸和醋酸钠组成）的浓度为100 M，pH值范围为3.5~5.0；磷酸盐缓冲溶液（由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠组成）的浓度为100 mM，pH值范围为7.0~8.0。
图7为体系加入不同浓度的α-葡萄糖苷酶后体系的可见吸收光谱图。从图中可以看出，随着α-葡萄糖苷酶浓度的增加（从上至下乙酰胆碱酯酶的浓度依次为0.1、1、5、10、50、100、500 mU/mL），体系在652 nm处的吸光度值逐渐降低。
图8为加入不同浓度的α-葡萄糖苷酶后体系的吸光度值的变化值与α-葡萄糖苷酶浓度的对数值之间的线性关系图。从图8可知，体系在652 nm处的吸光度强度变化值与α-葡萄糖苷酶浓度（浓度区间为0.1~500 mU/mL）之间存在良好的线性关系，线性回归方程为：Y= 0.1121X+ 0.3785，R2 = 0.9758（其中Y为体系在652 nm处的吸光度强度变化值，X为α-葡萄糖苷酶浓度的对数值）。
以空白溶液10次测定结果的标准偏差的3倍为信噪比，计算该方法的检测限为0.05 mU/mL，表明该方法具有较宽的线性范围和较低的检测限。
图9为体系在加入α-葡萄糖苷酶或其它干扰物后的吸光度强度图。图中数字1到12依次为：5 mU/mL α-葡萄糖苷酶、50 mU/mL乙酰胆碱酯酶、50 mU/mL葡萄糖氧化酶、50 mU/mL尿酸酶、50 mU/mL胆碱氧化酶、50 mU/mL黄嘌呤氧化酶、1 M甘氨酸、1 M KCl、1 M CaCl2、1 M MgCl2、0.1 M 葡萄糖、对照组。从图中可以看出只有在α-葡萄糖苷酶存在的情况下，体系的吸光度值才会明显降低，其它干扰物均不会影响α-葡萄糖苷酶的检测。表明本发明在检测α-葡萄糖苷酶时具有良好的选择性。
三、具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒用于α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选
阳性组：将α-葡萄糖苷酶与商品化的阿卡波糖或从天然产物中分离得到的萜类化合物（熊果酸、齐墩果酸、甘草次酸）混匀后在室温~37 ℃下孵育15~30 min，再加入2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸于室温~37 ℃下反应10~30 min。随后依次加入醋酸盐缓冲溶液、Ni-CeO2纳米棒分散液以及3，3'，5，5'-四甲基联苯胺，混匀后在室温~37 ℃下反应30~60 min后，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为Ai。
空白组：使用相同体积的磷酸盐缓冲溶液代替阿卡波糖或萜类化合物，其它实验条件与阳性组完全一致，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为A。
阴性组：使用磷酸盐缓冲溶液代替α-葡萄糖苷酶与阿卡波糖或α-葡萄糖苷酶与萜类化合物，其它实验条件与阳性组完全一致，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为A0。
计算阿卡波糖和三种萜类化合物的抑制率（抑制率=）及半数抑制浓度（IC50）。
表1为阿卡波糖和三种萜类化合物的抑制率。从表中可以看出商品化的抑制剂—阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制效果；三种萜类化合物中熊果酸和齐墩果酸的抑制效果较好，而甘草次酸的抑制效果较弱。
图10为不同浓度的阿卡波糖对应的抑制曲线。其中抑制作用百分数为50%时所对应的浓度阿卡波糖的半数抑制浓度（IC50），计算得到阿卡波糖的IC50值为268 μM，这与文献报道的数值相近（Biosensors & Bioelectronics, 2021, 182: 113198），进一步验证了该方法用于抑制剂筛选的可靠性。
图11为不同浓度的熊果酸对应的抑制曲线，计算得到熊果酸的IC50值为620 μM。
图12为不同浓度的齐墩果酸对应的抑制曲线，计算得到齐墩果酸的IC50值为702 μM。
根据α-葡萄糖苷酶的活性受到抑制，吸光度值将会恢复，可实现α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选，该方法以阿卡波糖作为对照，对天然产物中分离得到的三种萜类化合物（以熊果酸、齐墩果酸和甘草次酸为例）进行筛选，结果表明熊果酸和齐墩果酸具有较好的抑制效果。
四、α-葡萄糖苷酶活性检测及α-葡萄糖苷酶的天然产物抑制剂筛选机理
Ni-CeO2纳米棒可催化3，3'，5，5'-四甲基联苯胺生成氧化态的TMB（ox-TMB），表现出类氧化酶活性。当体系中引入底物2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸和目标分析物α-葡萄糖苷酶后，由于α-葡萄糖苷酶可水解2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸产生抗坏血酸，抗坏血酸可作为抗氧化剂和自由基清除剂，有效抑制Ni-CeO2纳米棒的类氧化酶活性，导致ox-TMB被还原为TMB，体系在652 nm处的吸光度值降低。因此，可构建α-葡萄糖苷酶的传感器，通过测定反应溶液在652 nm处吸光度的降低值，实现α-葡萄糖苷酶的定量检测。然而当α-葡萄糖苷酶的活性受到抑制时产生的抗坏血酸会减少，表现为ox-TMB的还原程度减弱，体系在652 nm处的吸光度值增加，因此可以实现α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选。
综上所述，本发明的有益效果及优点：
本发明建立的检测方法能快速、灵敏、高选择性地实现α-葡萄糖苷酶检测及α-葡萄糖苷酶的天然产物抑制剂筛选，对糖尿病的临床治疗具有重要指导意义。另外，本发明操作简单、经济高效、应用性强。
附图说明
图1为Ni-CeO2纳米棒的XRD图。
图2为Ni-CeO2纳米棒的SAED图。
图3为Ni-CeO2纳米棒的SEM图。
图4为Ni-CeO2纳米棒的EDX图。
图5为Ni-CeO2纳米棒的暗场STEM图（A）及材料中相应元素的元素地图（B-G）。
图6为本发明得到的Ni-CeO2与3，3'，5，5'-四甲基联苯胺（a）、Ni-CeO2纳米棒（b）以及3，3'，5，5'-四甲基联苯胺（c）的可见吸收光谱图。
图7为体系加入不同浓度的α-葡萄糖苷酶后体系的可见吸收光谱图。
图8为加入不同浓度的α-葡萄糖苷酶后体系的吸光度值的变化值与α-葡萄糖苷酶浓度的对数值之间的线性关系图。
图9为体系在加入α-葡萄糖苷酶或其它干扰物后的吸光度强度柱状图。
图10为不同浓度的阿卡波糖对应的抑制曲线。
图11为不同浓度的熊果酸对应的抑制曲线。
图12为不同浓度的齐墩果酸对应的抑制曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明利用具有类氧化酶活性的Ni-CeO2纳米棒检测α-葡萄糖苷酶及天然产物抑制剂作进一步详细的说明。
实施例1 Ni-CeO2纳米棒的制备
首先将1.5 g六水合硝酸镍和氢氧化钠（5.0 mL、5 mol/L）依次加入12 g由L-脯氨酸和六水合硝酸铈按照摩尔比1:1组成的低共熔溶剂中，在100 ℃下反应0.5 h，再经离心、洗涤、干燥即得Ni-CeO2纳米棒。表征结果显示，材料的XRD、SAED、SEM、EDX、STEM等表征结果与图1至图5完全吻合。
实施例2 Ni-CeO2纳米棒的制备
首先将0.97 g六水合硝酸镍和氢氧化钠（2.0 mL、5 mol/L）依次加入4.85 g由L-脯氨酸和六水合硝酸铈按照摩尔比1:1组成的低共熔溶剂中，在室温下反应5.0 h，再经离心、洗涤、干燥即得Ni-CeO2纳米棒。表征结果显示，材料的XRD、SAED、SEM、EDX、STEM等表征结果与图1至图5类似。
实施例3 Ni-CeO2纳米棒的制备
首先将20 g六水合硝酸镍和氢氧化钠（27.5 mL、10 mol/L）依次加入20 g由L-脯氨酸和六水合硝酸铈按照摩尔比1:1组成的低共熔溶剂中，在70 ℃下反应2.5 h，再经离心、洗涤、干燥即得Ni-CeO2纳米棒。表征结果显示，材料的XRD、SAED、SEM、EDX、STEM等表征结果与图1至图5完全吻合。
实施例4 Ni-CeO2纳米棒的制备
首先将15 g六水合硝酸镍和氢氧化钠（2.1 mL、10 mol/L）依次加入90 g由L-脯氨酸和六水合硝酸铈按照摩尔比1:1组成的低共熔溶剂中，在37 ℃下反应4.0 h，再经离心、洗涤、干燥即得Ni-CeO2纳米棒。表征结果显示，材料的XRD、SAED、SEM、EDX、STEM等表征结果与图1至图5完全吻合。
实施例5 α-葡萄糖苷酶的检测
1、α-葡萄糖苷酶的检测
测试组：首先，将2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸溶于磷酸盐缓冲液，取40 μL、2.0 M的2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸和100 μL不同浓度的α-葡萄糖苷酶（0.1、1、5、10、50、100、500 mU/mL）混匀，在37 ℃下反应30 min。随后依次加入660 μL HAc-NaAc缓冲液（100 mM，pH=4.0）、100 μL Ni-CeO2分散液（2.0 mg/mL）和3,3',5,5'-四甲基联苯胺（100 μL、10 mM）涡旋混匀后，在室温下反应60 min，测定溶液在652 nm处的吸光度值，记为A1。可以看到随着α-葡萄糖苷酶浓度的增加，溶液在652 nm处的吸光度值逐渐降低（图7）。
对照组：采用相同体积的磷酸盐缓冲溶液代替α-葡萄糖苷酶，其它条件与测试组一致，测定溶液在652 nm处的吸光度值，记为A2。
通过绘制线性曲线（图8），可知体系在652 nm处的吸光度强度变化值（Y=A2-A1）与α-葡萄糖苷酶浓度对数值（浓度区间为0.1~500 mU/mL）之间存在良好线性关系，线性回归方程为：Y = 0.1121X+ 0.3785，R2 = 0.9758（其中Y为体系在652 nm处的吸光度强度变化值，X为α-葡萄糖苷酶浓度的对数值）。以空白溶液10次测定结果的标准偏差的3倍为信噪比，得出该方法的检测限为0.05 mU/mL，结果表明本发明方法具有较宽的线性范围和较低的检测限。
2、α-葡萄糖苷酶的选择性测试
首先，将2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸溶于磷酸盐缓冲液，取40 μL、2.0 M的2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸和100 μL、5 mU/mL的α-葡萄糖苷酶或100 μL干扰物（100 mU/mL乙酰胆碱酯酶、50 mU/mL 葡萄糖氧化酶、50 mU/mL尿酸酶、50 mU/mL胆碱氧化酶、50 mU/mL黄嘌呤氧化酶、1 M甘氨酸、1 M KCl、1 M CaCl2、1 M MgCl2、0.1 M 葡萄糖）混匀，在37 ℃下反应30 min。随后依次加入660 μL HAc-NaAc缓冲液（100 mM，pH=4.0）、100 μL Ni-CeO2分散液（2.0 mg/mL）和3,3',5,5'-四甲基联苯胺（100 μL、10 mM）涡旋混匀后，在室温下反应60 min，测定溶液在652 nm处的吸光度值。对照组使用100 μL的磷酸盐缓冲溶液代替α-葡萄糖苷酶，测定溶液在652 nm处的吸光度值。结果如图9所示，表明本发明建立的方法具有好的选择性。
实施例6 α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选
1、阿卡波糖和三种萜类化合物的抑制率
阳性组：将100 μL α-葡萄糖苷酶（100 mU/mL）和10 μL、1 mM的阿卡波糖或10 μL、1 mM从天然产物中分离得到的三种萜类化合物（熊果酸、齐墩果酸、甘草次酸）涡旋混匀，于37 ℃下孵育15 min后，加入40 µL、2 M的2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸于37 ℃下反应10 min。随后依次加入650 μL HAc-NaAc缓冲液（100 mM，pH=4.0）、100 μL Ni-CeO2纳米棒分散液（2.0 mg/mL）、100 μL 3，3'，5，5'-四甲基联苯胺（10 mM），混匀后在室温下反应30min后，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为Ai
空白组：使用10 μL的磷酸盐缓冲溶液代替阿卡波糖或萜类化合物，其它实验条件与阳性组完全一致，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为A。
阴性组：使用110 μL的α-葡萄糖苷酶与阿卡波糖或α-葡萄糖苷酶与萜类化合物，其它实验条件与阳性组完全一致，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为A0。
根据公式：抑制率= ，计算阿卡波糖和三种萜类化合物的抑制率，如表1所示，商品化的抑制剂—阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶具有明显的抑制效果；三种萜类化合物中熊果酸和齐墩果酸的抑制效果较好，而甘草次酸的抑制效果较弱。
2、阿卡波糖、熊果酸及齐墩果酸的抑制曲线
阳性组：将100 μL α-葡萄糖苷酶（100 mU/mL）和10 μL不同浓度的阿卡波糖或10μL从天然产物中分离得到的不同浓度的萜类化合物（熊果酸、齐墩果酸、甘草次酸）涡旋混匀，于37 ℃下孵育15 min后，加入40 µL、2 M的2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸于37℃下反应10 min。随后依次加入650 μL HAc-NaAc缓冲液（100 mM，pH=4.0）、100 μL Ni-CeO2纳米棒分散液（2.0 mg/mL）、100 μL 3，3'，5，5'-四甲基联苯胺（10 mM），混匀后在室温下反应30 min后，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为Ai
空白组：使用10 μL的磷酸盐缓冲溶液代替阿卡波糖或萜类化合物，其它实验条件与阳性组完全一致，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为A。
阴性组：使用110 μL的α-葡萄糖苷酶与阿卡波糖或α-葡萄糖苷酶与萜类化合物，其它实验条件与阳性组完全一致，测试溶液在652 nm处的吸光度值，记为A0。
其中阿卡波糖的浓度依次为0.001、0.01、0.1、1、10、50、100、200、400、500、800、1000 µM；熊果酸的浓度依次为0.01、0.1、1、10、100、200、400、500、600、800、1000、1200、1600、2000、3000 µM；齐墩果酸的浓度依次为20、50、80、100、200、300、400、500、600、800、1000 µM。
计算不同浓度下阿卡波糖、熊果酸及齐墩果酸的抑制率，绘制不同浓度下的阿卡波糖、熊果酸及齐墩果酸对应的抑制曲线（图10至图12）。其中抑制作用百分数为50%时所对应的浓度即为阿卡波糖、熊果酸及齐墩果酸的半数抑制浓度（IC50），求得溴化新斯的明与盐酸小檗碱的IC50分别为268 μM、620 μM和702 μM。
Claims (6)
1.一种具有类氧化酶活性的镍-氧化铈纳米棒的制备方法，是将六水合硝酸镍和氢氧化钠依次加入L-脯氨酸和六水合硝酸铈按照摩尔比1:1组成的低共熔溶剂中，在室温~100℃下反应0.5~5.0 h，再经离心、洗涤、干燥即得；所述六水合硝酸镍和氢氧化钠的摩尔比为1:3~1:5；所述六水合硝酸镍和低共熔溶剂的质量比为1:1~1:8。
2.一种基于权利要求1所述方法制备的镍-氧化铈纳米棒在α-葡萄糖苷酶检测中的应用，其特征在于：将2-O-α-D-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸与不同浓度的α-葡萄糖苷酶涡旋混匀，在室温~37 ℃下反应10~30 min，随后依次加入醋酸盐缓冲液、Ni-CeO2纳米棒分散液以及3，3'，5，5'-四甲基联苯胺，混匀后在室温~37 ℃下反应30~60 min后，测定体系在652 nm处的吸光度值，记为A1；对照组使用相同体积的磷酸盐缓冲溶液代替α-葡萄糖苷酶，其他条件不变，测定体系在652 nm处的吸光度值，记为A2；由于不同浓度的α-葡萄糖苷酶溶液导致体系在652 nm处的吸光度值不同，构建体系在652 nm处的吸光度的变化值Y=A2-A1与α-葡萄糖苷酶溶液的浓度对数值之间的线性关系，即可定量检测α-葡萄糖苷酶活性。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：α-葡萄糖苷酶浓度在0.1~500 mU/mL内，体系在652 nm处的吸光度强度变化值与α-葡萄糖苷酶浓度的对数值之间存在以下线性关系：Y= 0.1121X+ 0.3785，R2 = 0.9758，其中Y为体系在652 nm处的吸光度强度变化值，X为α-葡萄糖苷酶浓度的对数值。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述醋酸盐缓冲液由醋酸和醋酸钠组成，浓度为100 M，pH值范围为3.5~5.0；所述磷酸盐缓冲溶液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠组成，浓度为100 mM，pH值范围为7.0~8.0。
5.一种基于权利要求1所述方法制备的镍-氧化铈纳米棒在α-葡萄糖苷酶的天然产物抑制剂筛选中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：α-葡萄糖苷酶的天然产物抑制剂包括熊果酸和齐墩果酸。
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