CN115252657B - 哈露巴露口服液在制备抗肿瘤产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了哈露巴露口服液在制备抗肿瘤产品中的应用。本发明哈露巴露口服液应用于制备抗肿瘤产品中。本发明组合物的提取物应用于制备抗肿瘤产品中；所述组合物的提取物包括质量比为40:5:1:1的绣球菌、香菇、猴头菇和黑木耳的提取物。本发明哈露巴露口服液对肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人骨肉瘤HOS细胞及人胃癌SGC‑7901细胞四种肿瘤细胞均有一定的抑制作用。
Description
技术领域
本发明属于食品新用途领域，具体涉及哈露巴露口服液在制备抗肿瘤产品中的应用。
背景技术
肿瘤(tumour)是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物(neogrowth)，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物(neoplasm)。研究发现，肿瘤细胞会出现不同于正常细胞的代谢变化，同时肿瘤细胞自身可通过糖酵解和氧化磷酸化(OXPHOS)之间的转换来适应代谢环境的改变。癌症是导致人类死亡的重要原因之一。癌症泛指恶性肿瘤，包括癌、肉瘤和癌肉瘤三类。集体受到多重因素的共同作用，发生基因异常改变，包括原癌基因激活、抑癌基因失活、多种基因异常的累计等，最终形成癌症。对于癌症的治疗，原则是早发现早治疗。
肿瘤微环境主要是由肿瘤细胞、免疫细胞、细胞因子、炎症因子等相互作用而形成的，受多阶段、多因素调控。IL-1β与肿瘤发生发展关系最为密切，是机体调控炎症反应与免疫应答的重要因子。近年来研究发现，IL-1β作为肿瘤免疫重要因子之一，其在肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌等多种恶性肿瘤中高水平表达。IL-1β可能通过启动肿瘤增殖和抗凋亡等途径参与多种恶性肿瘤的疾病进程。
免疫机制的失能是肿瘤形成的重要因素。其中Th1/Th2细胞的平衡向Th2细胞漂移是肿瘤免疫机制失能的主要表现之一。Thl类细胞分泌IL-2、INF-γ和TNF-β等细胞因子，是机体抗癌、抗病毒的主要参与者；Th2类细胞分泌IL-4、IL-6等细胞因子，在体内可抑制免疫应答。而肿瘤宿主处于Th2细胞因子优势状态是肿瘤免疫逃逸的机理之一。IL-6是一种多效应的细胞因子，也是重要的免疫抑制因子，主要由淋巴细胞、激活的巨噬细胞和血管内皮细胞产生。IL-6与多种肿瘤发生、发展关系密切，通过干预细胞的黏附性、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增值从而影响肿瘤的进展。INF-γ能活化中性粒细胞、NK细胞，刺激血管内皮细胞和白细胞合成的粘附分子，促进Th1细胞发育和抑制细胞活化与增殖。TNF-α是一种由激活的巨噬细胞产生的能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子，是迄今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一。TGF-β已被证实为一种强效免疫抑制物质，是抑制T细胞增殖及其细胞毒活性的主要介导者，因而也被称为T细胞抑制因子。TGF-β可直接或间接地作用于免疫细胞，从而诱导其功能丧失，帮助肿瘤细胞逃避机体的免疫监视，促进肿瘤的发展。在肿瘤环境中，IL-10能下调肿瘤细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)类分子的表达，消除对后者对NK细胞的抑制作用，激活NK细胞，杀伤肿瘤细胞。
哈露巴露口服液是广州拜泉香虎贸易有限公司主导，经多年研发在韩国生成的人体营养补充剂，公司利用自主研发的先进的绣球菌提取技术与人体一天所需营养物质的科学计算，以绣球菌提取物为主，同时复配以香菇、猴头菇、黑木耳提取物等组成。目前世界上绣球菌为主的深加工产品较少。绣球菌(Sparasis crispa)隶属担子菌亚门、异隔担子菌纲、无(非)褶菌目、绣球菌科、绣球菌属。绣球菌子实体含有39.3％～43.6％的多糖。绣球菌具有很高的营养保健价值，研究表明绣球菌多糖在0.25～4mg/mL范围内，对DPPH、OH和O-2自由基的最高清除率分别为75％、80％与30％，还原力吸光度为0.18。绣球菌多糖SCP-Ⅱ对DPPH、OH和O-2自由基的清除率分别为85.63％、85.36％和40.86％，还原力吸光度为0.38。绣球菌菌丝体多糖能对抗甲硝唑处理的转基因斑马鱼体内的氧化作用，具有抗氧化能力，150μg/mL多糖的抗氧化能力与100μg/mL维生素C相当。香菇、猴头菇、黑木耳都为药食同源物质，其营养价值和食用价值丰富，并且具有多种药理作用。香菇多糖具有抗氧化能力。猴头菇为药食两用型真菌，其营养价值高。黑木耳为真菌类木耳科植物木耳的子实体，现代药理研究显示：木耳具有抗氧化、补血、降糖、调节血脂、增强免疫功能等多种药理作用。
发明内容
本发明的目的是提供哈露巴露口服液在制备抗肿瘤产品中的应用。本发明哈露巴露口服液对肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人骨肉瘤HOS细胞及人胃癌SGC-7901细胞四种肿瘤细胞均有一定的抑制作用。
本发明提供了哈露巴露口服液在制备抗肿瘤产品中的应用。
本发明哈露巴露口服液应用于制备抗肺癌产品中。
本发明哈露巴露口服液应用于制备抗肝癌产品中。
本发明哈露巴露口服液应用于制备抗骨肉瘤产品中。
本发明哈露巴露口服液应用于制备抗胃癌产品中。
本发明中，所述哈露巴露口服液的使用浓度为30μl/ml～100μl/ml。
本发明还提供了一种组合物的提取物在制备抗肿瘤产品中的应用；
所述组合物的提取物包括质量比为40:5:1:1的绣球菌、香菇、猴头菇和黑木耳的提取物。
上述的应用中，所述组合物的提取物的制备方法包括如下步骤：将所述绣球菌、香菇、猴头菇和黑木耳磨成粉末后与水混合，加热提取，然后离心分离提取上清液，加入质量百分含量80％乙醇沉淀多糖体后干燥，即得到所述组合物的提取物。
上述的应用中，所述加热提取的条件如下：110～130℃℃，2.5～4小时；
所述离心的条件如下：8000rpm、4℃离心分离15～30分钟；
所述干燥的条件如下：50～60℃干燥10～15小时；
所述热提取后还包括对热液萃取的β-葡聚糖样品用α-淀粉酶(英文名α-amylase)、蛋白酶(英文名称为protease)、淀粉葡萄糖苷酶(英文名称为amyloglucosi-dase)进行酶解，所述β-葡聚糖以外的α-葡聚糖和蛋白质进行降解，然后用乙醇沉淀，回收未酶解的β-葡聚糖和其他营养进行加工的步骤。
本发明中，所述组合物的提取物的制备方法具体包括如下步骤：绣球菌、猴头菇、黑木耳、香菇100克磨成粉末后加水5L，在121℃下进行3小时热水提取；随后在8000rpm、4℃离心分离20分钟后回收上清液，加入80％乙醇沉淀多糖体，在55℃干燥12小时，即得到组合物的提取物；对热液提取物用α-amylase、protease、amyloglucosi-dase进行酶解，将β-葡聚糖以外的α-葡聚糖和蛋白质等进行降解，然后用乙醇沉淀，回收未酶解的β-葡聚糖和其他营养进行加工。
上述的应用中，所述抗肿瘤产品包括抗肺癌、抗肝癌、抗骨肉瘤和抗胃癌中至少一种产品。
本发明还提供了一种抗肿瘤药物，其活性成分为上述的应用中的所述的组合物的提取物。
上述抗肿瘤药物中，其的辅料为药学上可接受的辅料。
本发明进一步提供了一种抗肺癌、抗肝癌、抗骨肉瘤或抗胃癌的药物，其活性成分为上述的应用中的所述的组合物的提取物。
上述的抗肺癌、抗肝癌、抗骨肉瘤或抗胃癌的药物中，其辅料为药学上可接受的辅料。
本发明具有以下有益效果：
本研究体外采用CCK8法检测了哈露巴露口服液作用24h对人肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人骨肉瘤HOS细胞及人胃癌SGC-7901细胞活力的影响，并分别测定了其对4种不同肿瘤细胞的IC50，体外细胞水平探讨了哈露巴露口服液的抗肿瘤作用；同时利用S180肉瘤小鼠模型，通过抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数、血清IL-1β、IL-6、TGF-β、INF-γ、IL-10等细胞因子检测，得到哈露巴露口服液具有体内抗肿瘤作用；并比较了哈露巴露口服液与其组分黑木耳提取液组、香菇提取液组、猴头菇提取液组的抑瘤效果，证实本发明哈露巴露口服液抗肿瘤的效果好。
附图说明
图1为本发明实施例1中哈露巴露口服液对A549细胞增殖的抑制作用。
图2为本发明实施例1中哈露巴露口服液对HepG2细胞增殖的抑制作用。
图3为本发明实施例1中哈露巴露口服液对HOS细胞增殖的抑制作用。
图4为本发明实施例1中哈露巴露口服液对SGC-7901细胞增殖的抑制作用。
图5为本发明实施例2中哈露巴露口服液对S180肉瘤的抑瘤作用。
图6为本发明实施例2中哈露巴露口服液对血清IL-1β的影响。
图7为本发明实施例2中哈露巴露口服液对S180荷瘤小鼠血清IL-6的影响。
图8为本发明实施例2中哈露巴露口服液对S180荷瘤小鼠血清IL-10的影响。
图9为本发明实施例2中哈露巴露口服液对S180荷瘤小鼠血清TGF-β的影响。
图10为本发明实施例2中哈露巴露口服液对S180荷瘤小鼠血清TNF-α的影响。
图11为本发明实施例2中哈露巴露口服液对S180荷瘤小鼠血清INF-γ的影响。
图12为本发明实施例3中各组对S180肉瘤小鼠的抑瘤作用。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、哈露巴露口服液对四种肿瘤细胞的抑制作用
1.实验材料
1.1试药与试剂
哈露巴露口服液(规格20g/18ml，拜泉香虎贸易有限公司)，CCK8(北京依珊汇通科技有限公司)。DMEM培养基(美国Gibco公司)，进口胎牛血清(美国Gibco公司)，胰酶细胞消化液(0.25％)(Beyotime公司)
1.2仪器与设备
(1)台式低速大容量离心机L550 德国Eppendorf公司
(2)多功能酶标仪 TECAN公司
(3)二氧化碳培养箱 美国Thermo Scientific公司
(4)超净工作台 上海力申科学仪器有限公司
(5)25cm2塑料培养瓶 美国Corning公司
(6)96孔板 美国Corning公司
1.3实验细胞
人肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人骨肉瘤HOS细胞及人胃癌SGC-7901细胞购于中国医学科学院基础医学研究所。
2.实验方法
2.1：培养基的配制：在超净台中量取45mlDMEM培养基，加入5ml胎牛血清，混匀，封口膜封口，4℃保存。
2.2：磷酸缓冲液(PBS)的配制：一袋PBS粉末加入900ml超纯水，待其全部溶解后定容至1000ml，置于高压灭菌器中，121℃，30min高压灭菌，冷却后封口膜封口，4℃保存。
2.3：药物配制：将哈露巴露口服液用DMEM培养基配成30μl/ml、40μl/ml、50μl/ml、60μl/ml、70μl/ml、80μl/ml、90μl/ml、100μl/ml待用。
2.4实验方法：0.25％胰酶消化并收集对数生长期的H9C2细胞，用含10％胎牛血清的DMEM培养液混悬细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100μl细胞悬液铺板，(边缘孔用无菌PBS填充，防止边缘效应)，5％CO2，37℃培养。24小时后细胞达到70～80％融合率时，弃旧培养液，依次加入以上浓度的药物作用24小时，避光加入CCK-8，每孔10μL。1.5h后，在酶联免疫检测仪上450nm波长处测定吸光度值，计算每孔细胞活力和IC50，并利用GraphPadPrism5绘制柱状图。
3.实验结果
3.1哈露巴露口服液对A549细胞增殖的抑制作用
结果如图1所示，由图1中可知，哈露巴露口服液作用24h对A549细胞的IC50为67.80μl/ml。
3.2哈露巴露口服液对HepG2细胞增殖的抑制作用
结果如图2所示，由图2中可知，哈露巴露口服液作用24h对HepG2细胞的IC50为45.29μl/ml。
3.3哈露巴露口服液对HOS细胞增殖的抑制作用
结果如图3所示，由图3中可知，哈露巴露口服液作用24h对HOS细胞的IC50为51.51μl/ml。
3.4：哈露巴露口服液对SGC-7901细胞增殖的抑制作用
结果如图4所示，由图4中可知，哈露巴露口服液作用24h对SGC-7901细胞的IC50为35.85μl/ml。
结论：
由上述实验可知，哈露巴露口服液30μl/ml～100μl/ml对A549细胞、HepG2细胞、HOS细胞、SGC-7901细胞均有一定的抑制作用，IC50分别为67.80μl/ml、45.29μl/ml、51.51μl/ml、35.85μl/ml。
实施例2、哈露巴露口服液对S180肉瘤小鼠的抗肿瘤作用
1.实验材料
1.1试药与试剂
哈露巴露口服液(规格20g/18ml)由拜泉香虎贸易有限公司提供；IL-6、IL-10、IL-1β、TGF-β、TNF-α、INF-γELISA检测试剂盒购自武汉爱博泰克生物科技有限公司。
1.2仪器与设备
多功能微孔检测仪(Synergy H1)，高速冷冻离心机(Multifuge X1R)电子天平(BSA224S-CW)
1.3实验动物
SPF级ICR小鼠55只，雄性，6周龄，体重20±2g，由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号:SYXK京2019-0010。实验前置动物于实验室适应环境3d，室温20～25℃，标准颗粒饲料喂养，自由饮水。
2.实验方法
2.1药物配制
哈露巴露口服液每支规格为20g/18ml。
哈露巴露高剂量组：哈露巴露口服液原液，浓度为1.11g/ml。
哈露巴露中剂量组：取高剂量组20ml，蒸馏水稀释至40ml，浓度为0.56g/ml。
哈露巴露低剂量组：取中剂量组20ml，蒸馏水稀释至40ml，浓度为0.28g/ml。
各组给药体积均为5ml/kg，即各组给药剂量分别为高剂量5.56g/kg，中剂量组2.78g/kg，低剂量组1.39g/kg。
2.2S180肉瘤小鼠肉瘤模型的建立
取小鼠55只，按体重随机分为哈露巴露口服液高剂量组(5.56g/kg、n＝11)、哈露巴露口服液中剂量组(2.78g/kg、n＝11)、哈露巴露口服液低剂量组(1.39g/kg、n＝11)、模型组(n＝11)、空白对照组(n＝11)。除模型对照组和空白组外,每组按相应给药剂量每天灌胃给药1次，给药体积为0.05ml/g，连续14d，模型对照组和空白组以同样方法给予等体积的生理盐水。第十四天取传代第8天的S180腹水小鼠,脱颈椎处死，无菌抽取腹水,以生理盐水调至瘤细胞浓度为2×106个/mL混悬液，接种模型组，高、中、低剂量组小鼠，用1mL的一次性注射器吸取S180肿瘤细胞悬液0.2mL，右前肢腋窝部皮下注射。再连续给药14d。
2.3抑瘤率和脏器指数计算
末次给药24h，颈椎脱臼处死，剥离瘤组织称重、取脾、胸腺、脾脏。
抑瘤率(％)＝(模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100％
胸腺指数＝胸腺重(g)/体重(kg)
脾脏指数＝脾重(g)/体重(kg)
2.4S180肉瘤小鼠血清细胞因子水平的测定
末次给药1h后，小鼠眼球取血，采用ELISA法检测血清中TNF-α，INF-γ，TGF-β，IL-1β，IL-6，IL-10含量。
3.实验结果
3.1抑瘤作用
实验结果如图5和表1所示。
表1各组S180肉瘤小鼠瘤质量及抑瘤率比较
由图5和表1中结果可知，各给药组均对肿瘤生长具有一定的抑制作用。高，中，低剂量组抑瘤率分别为57.3％，28.7％，19.6％，具有明显的量效关系。
3.2对脾脏指数和胸腺指数的影响
结果如表2所示。
表2各组S180荷瘤鼠脾脏指数和胸腺指数的比较
由表2中结果可知，与模型组相比，高剂量组降低脾脏指数(11.21％)，中剂量、低剂量有提高小鼠脾脏指数(0.7％、30.98％)的趋势，但均无显著性差异；高、中、低剂量组有提高胸腺指数(26.15％、24.33％、18.84％)的趋势，但均无显著性差异。
3.3哈露巴露口服液对血清细胞因子水平的影响
3.3.1哈露巴露口服液对血清IL-1β的影响
结果如图6所示。
由图6中结果可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中IL-1β含量显著提高，与模型组相比，哈露巴露口服液高、中、低剂量组均能显著降低小鼠血清中IL-1β的含量，分别降低了41.06％、31.96％、22.83％，且具有明显的剂量依赖性。
3.3.2哈露巴露口服液对血清IL-6的影响
结果如图7所示。
由图7中结果可知，与空白组相比，模型组小鼠血清IL-6含量显著提高，与模型组相比，哈露巴露口服液高、中、低剂量组可显著降低小鼠血清IL-6的含量，分别降低了37.36％、28.88％、22.27％，且具有明显的剂量依赖性。
3.3.3哈露巴露口服液对血清IL-10的影响
结果如图8所示。
由图8中结果可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中IL-10含量显著降低，与模型组相比，哈露巴露口服液高剂量组能显著提高小鼠血清中的IL-10含量，提高了57.80％，哈露巴露口服液中、低剂量组小鼠血清IL-10含量分别提高了20.21％、11.18％，但无统计学差异。
3.3.4哈露巴露口服液对血清TGF-β的影响
结果如图9所示。
由图9中结果可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中TGF-β含量显著提高。与模型组相比，哈露巴露口服液高、中剂量组均能显著降低小鼠血清中的TGF-β含量，分别降低了27.27％、19.91％，且具有剂量依赖性。
3.3.5哈露巴露口服液对血清TNF-α的影响
结果如图10所示。
由图10中结果可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中的TNF-α含量显著降低。与模型组相比，哈露巴露口服液高、中、低剂量组均能显著提高小鼠血清中的TNF-α含量，分别提高了53.34％、37.04％、25.36％，且具有剂量依赖性。
3.3.6哈露巴露口服液对血清INF-γ的影响
结果如图11所示。
由图11中结果可知，与模型组相比，哈露巴露口服液高、中、低剂量组均能显著提高小鼠血清中的INF-γ含量，分别提高了48.22％、31.72％、21.14％，且具有剂量依赖性。
4.讨论
上述实验利用小鼠移植性S180肉瘤模型考察了哈露巴露口服液对荷瘤小鼠的抑瘤作用，实验结果表明本发明哈露巴露口服液高、中剂量抑瘤率分别为57.3％、28,7％、19.6％；高剂量组具有显著的抑瘤效果。
上述试验表明哈露巴露口服液高、中、低剂量组均能显著降低小鼠血清中IL-1β和IL-6的含量、提高INF-γ的含量。哈露巴露口服液哈高、中、低剂量组均能提高小鼠血清中的TNF-α的含量，增强机体免疫功能。
上述试验表明哈露巴露口服液高、中剂量组均能显著降低小鼠血清中的TGF-β含量。
上述实验表明哈露巴露口服液高剂量组(5ml/kg)能显著提高小鼠血清中的IL-10含量。
以上研究结果提示，哈露巴露口服液高剂量组可显著抑制肿瘤生长，可能通过调控肿瘤微环境中多种肿瘤相关炎症因子的表达，增强机体的免疫功能发挥抗肿瘤作用。
实施例3、哈露巴露口服液及其组分抗肿瘤作用
1.实验材料
1.1试药与试剂
哈露巴露口服液(规格20g/18ml)，灵芝孢子油，黑木耳提取液，香菇提取液，猴头菇提取液均由拜泉香虎贸易有限公司提供。
2.2仪器与设备
多功能微孔检测仪(Synergy H1)，高速冷冻离心机(Multifuge X1R)电子天平(BSA224S-CW)
2.3动物
SPF级ICR小鼠64只，雄性，6周龄，体重20±2g，由维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：SYXK京2016-006。实验前置动物于实验室适应环境3d，室温20～25℃，标准颗粒饲料喂养，自由饮水。
2.实验方法
2.1药物配制
哈露巴露口服液每支规格为20g/18ml。
哈露巴露口服液高剂量组：哈露巴露口服液原液，浓度为1.11g/ml，给药体积为5ml/kg，即高剂量组为5.56g/kg。
黑木耳提取液组：取2ml黑木耳提取液(哈露巴露口服液中含有的同等原浓度黑木耳提取液)，蒸馏水稀释至20ml。
香菇提取液组(哈露巴露口服液中含有的同等原浓度香菇提取液)：取2ml香菇提取液，蒸馏水稀释至20ml。
猴头菇提取液组(哈露巴露口服液中含有的同等原浓度猴头菇提取液)：取2ml猴头菇提取液，蒸馏水稀释至20ml。
灵芝孢子油组：取灵芝孢子油1g，加蒸馏水38ml溶解，所得灵芝孢子油浓度为26.3mg/ml。
顺铂组：取顺铂注射液0.5ml，生理盐水稀释至5ml。
2.2S180肉瘤小鼠肉瘤模型的建立
取小鼠64只，按体重随机分为空白组(n＝8)、模型对照组(n＝8)、哈露巴露口服液高剂量组(5.56g/kg；n＝8)、黑木耳提取液组(n＝8)、香菇提取液组(n＝8)、猴头菇提取液组(n＝8)、灵芝孢子油组(n＝8)、顺铂组(n＝8)。除模型对照组和空白组外，每组按相应给药剂量每天灌胃给药1次，给药体积为0.05ml/g，连续14d,模型对照组和空白组以同样方法给予等体积的生理盐水。第十四天取传代第8天的S180腹水小鼠，脱颈椎处死，无菌抽取腹水，以生理盐水调至瘤细胞浓度为2×106个/mL混悬液，接种模型组，哈露巴露口服液组、黑木耳提取液组、香菇提取液组、猴头菇提取液组和顺铂组小鼠，用1mL的一次性注射器吸取S180肿瘤细胞悬液0.2mL,右前肢腋窝部皮下注射，再连续给药14d。
2.3抑瘤率和脏器指数计算
末次给药24h，颈椎脱臼处死，剥离瘤组织称重、取脾、胸腺、脾脏。
抑瘤率(％)＝(模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100％
胸腺指数＝胸腺重(g)/体重(kg)
脾脏指数＝脾重(g)/体重(kg)
3.实验结果
3.1抑瘤作用
结果如图12和表3所示。
表3各组S180肉瘤小鼠瘤质量及抑瘤率比较
注:与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01。
由图12和表3中结果可知，与模型组相比，哈露巴露口服液组和顺铂组瘤重均有显著减小。哈露巴露口服液组肿瘤抑制率为54.91％，灵芝孢子粉组肿瘤抑制率为53.60％，顺铂组肿瘤抑制率为72.62％。因此，本发明哈露巴露口服液抑瘤作用较其中单一组分的抑瘤作用显著。
3.2对脾脏指数和胸腺指数的影响
表4各组S180肉瘤鼠脾脏指数和胸腺指数的比较
由图4中结果可知，与模型组相比，哈露巴露口服液组、顺铂组均可降低脾脏指数(13.91％、35.26％)和胸腺指数(21.76％、25.97％)，但均无显著性差异。
4.讨论
本发明中利用ICR小鼠S180肉瘤模型考察了哈露巴露口服液对荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用，实验结果发现哈露巴露口服液高剂量组对S180肉瘤具有抑制作用，抑瘤率为54.91％。哈露巴露口服液高剂量组与哈露巴露口服液中同等含量的黑木耳提取液组、香菇提取液组、猴头菇提取液组相比具有显著的抗肿瘤作用。但是，同等含量的黑木耳提取液组、香菇提取液组、猴头菇提取液组无抑瘤效果。
实施例4一种组合物的提取物及其制备方法
组合物的提取物的制备方法具体包括如下步骤：绣球菌、猴头菇、黑木耳、香菇100克磨成粉末后加水5L，在121℃下进行3小时热水提取；随后在8000rpm、4℃离心分离20分钟后回收上清液，加入80％乙醇沉淀多糖体，在55℃干燥12小时，即得到组合物的提取物；对热液提取物用α-amylase、protease、amyloglucosi-dase进行酶解，将β-葡聚糖以外的α-葡聚糖和蛋白质等进行降解，然后用乙醇沉淀，回收未酶解的β-葡聚糖和其他营养进行加工。
经实验验证，上述组合物的提取物与哈露巴露口服液的对四种肿瘤细胞的抑制作用一致。
Claims (1)
1.一种组合物的提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；
所述组合物的提取物由质量比为40:5:1:1的绣球菌、香菇、猴头菇和黑木耳的提取物组成；
所述组合物的提取物的制备方法包括如下步骤：将所述绣球菌、香菇、猴头菇和黑木耳磨成粉末后与水混合，加热提取，然后离心分离提取上清液，加入质量百分含量80%乙醇沉淀多糖体后干燥，即得到所述组合物的提取物；
所述加热提取的条件如下：110~130°C，2.5~4小时；
所述离心的条件如下：8000rpm、4°C离心分离15~30分钟；
所述干燥的条件如下：50~60°C干燥10~15小时；
所述热提取后还包括对热液萃取的β-葡聚糖样品用α-淀粉酶、蛋白酶、淀粉葡萄糖苷酶进行酶解，所述β-葡聚糖以外的α-葡聚糖和蛋白质进行降解，然后用乙醇沉淀，回收未酶解的β-葡聚糖和其他营养进行加工的步骤；
所述抗肿瘤药物包括抗肺癌、抗骨肉瘤和抗胃癌中至少一种药物。
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