CN109851685A - 一种复合菌多糖及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食药用两用的复合菌多糖，尤其涉及一种复合菌多糖及其制备方法和应用，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括10％‑80％绣球菌提取物、10％‑80％灵芝提取物、和10％‑80％灰树花多糖提取物。本发明制备的食药用菌的复合菌多糖，是一种非常有效的抗肿瘤活性物质，具有较高的抗肿瘤功效，其抑制肿瘤的功效比传统方法获得的单一提取物质明显提高，副作用小。
Description
技术领域
本发明涉及一种食药用两用的复合菌多糖，尤其涉及一种复合菌多糖及其制备方法和应用。
背景技术
食药两用真菌是较早被人类利用的微生物，我国早在东汉时期便有关于食药用真菌的记录。此类真菌营养丰富，几乎无毒副作用，因此被广泛用于食品和药品领域。
多糖作为食药用真菌中最重要的活性成分近年来被广泛关注。多糖不仅是生物体内能量的主要来源，也是生物体的组成成分。大量的研究表明，多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤作用。但是，虽然作用广泛，但是作用的强度通常不足以发挥足够的药用价值，因此，这种作用更多地用于保健或者养生领域中。并且，目前对食用菌多糖的抗肿瘤作用主要是以研究单一多糖的抗肿瘤作用为主，对复合多糖的抗肿瘤作用的研究较少。
因此，需要研究效果更加显著的复合菌多糖。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种以特定比例复合的复合菌多糖，其抗肿瘤效果显著增强，并且仍然保持了很低的副作用。
发明人发现，对绣球菌、灵芝与灰树花多糖以一定比例复合后的复合菌多糖，与单独的菌多糖相比，具有更加显著的抗肿瘤作用并维持低的副作用。
本发明通过以下方案达到上述目的：
在第一方面，提供一种复合菌多糖，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括10％-80％绣球菌提取物、10％-80％灵芝提取物、和10％-80％灰树花多糖提取物。
优选的，一种复合菌多糖，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括40％-50％绣球菌提取物、30％-40％灵芝提取物、和20％-30％灰树花多糖提取物。
更优选的，一种复合菌多糖，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括40％绣球菌提取物、40％灵芝提取物、和20％灰树花多糖提取物。
更优选的，一种复合菌多糖，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括50％绣球菌提取物、30％灵芝提取物、和20％灰树花多糖提取物。
更优选的，一种复合菌多糖，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括40％绣球菌提取物、30％灵芝提取物、和30％灰树花多糖提取物。
优选的，所述绣球菌提取物是通过以下方法制备得到：将绣球菌子实体经水提取后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用乙醇沉淀粉末，干燥后得到的粉末为绣球菌提取物。
更优选的，所述绣球菌提取物是通过以下方法制备得到：将绣球菌子实体低温脱水粉粹，经水在60-80℃提取2-6h后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用2-10倍体积的乙醇对粉末进行沉淀8-12h，将沉淀浓缩并冷冻干燥后得到的粉末为绣球菌提取物。
优选的，所述灵芝提取物是通过以下方法制备得到：将灵芝子实体经水提取后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用乙醇沉淀粉末，干燥后得到的粉末为灵芝提取物。
更优选的，所述灵芝提取物是通过以下方法制备得到：将灵芝子实体低温脱水粉粹，经水在60-20℃提取2-6h后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用2-10倍体积的乙醇对粉末进行沉淀8-12h，将沉淀浓缩并冷冻干燥后得到的粉末为灵芝提取物。
优选的，所述灰树花多糖提取物是通过以下方法制备得到：将灰树花多糖子实体经水提取后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用乙醇沉淀粉末，干燥后得到的粉末为灰树花多糖提取物。
更优选的，所述灰树花多糖提取物是通过以下方法制备得到：将灰树花子实体低温脱水粉粹，经水在60-80℃提取2-6h后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用2-10倍体积的乙醇对粉末进行沉淀8-12h，将沉淀浓缩并冷冻干燥后得到的粉末为灰树花提取物。
在上述复合菌多糖的研发过程中，发明人发现，不同菌多糖之间的复合、以及不同配比之间的菌多糖之间的配比，对于抗肿瘤特性的增加具有显著且不同的作用。
在第二方面，提供一种上述复合菌多糖的制备方法，包括：
(1)将绣球菌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(2)加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，60-80℃提取2-6h，离心后收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末A；
(3)向粉末A加入2-10倍体积的乙醇沉淀8-12h，离心后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到粉末B；
(4)将灰树花子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(5)加入灰树花子实体2-20倍体积的水，60-80℃提取2-6h，离心后收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末C；
(6)向粉末C加入2-10倍体积的乙醇沉淀8-12h，离心后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到粉末D；
(7)将灵芝子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(8)加入灵芝子实体2-20倍体积的水，60-80℃提取2-6h，离心后收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末E；
(9)向粉末E加入2-10倍体积的乙醇沉淀8-12h，离心后收集沉淀，并将沉淀进行抽滤浓缩冷冻干燥得到粉末F；
(10)将粉末B、粉末D、粉末F以：10％-80％∶10％-80％∶10％-80％的重量百分比混合。
优选的，步骤(2)中，加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，80℃浸提1-3次，每次1-2h。
优选的，步骤(5)中，加入灰树花子实体2-20倍体积的水，80℃浸提1-3次，每次1-2h。
优选的，步骤(8)中，加入灵芝子实体2-20倍体积的水，80℃浸提1-3次，每次1-2h。
优选的，步骤(2)中，5500g离心30min。
优选的，步骤(5)中，5500g离心30min。
优选的，步骤(8)中，5500g离心30min。
优选的，步骤(3)中，向粉末A加入4倍体积的90％乙醇过夜。
优选的，步骤(6)中，向粉末C加入4倍体积的90％乙醇过夜。
优选的，步骤(9)中，向粉末E加入4倍体积的90％乙醇过夜。
优选的，步骤(3)中，向粉末A加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀。
优选的，步骤(6)中，向粉末C加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀。
优选的，步骤(9)中，向粉末E加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀。
在一个优选的实施例中，本发明所述的一种复合菌多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)将绣球菌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(2)加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末A；
(3)向粉末A加入4倍体积的90％乙醇沉淀8-12h，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到绣球菌提取物即粉末B；
(4)将灰树花子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(5)加入灰树花子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末C；
(6)向粉末C加入4倍体积的90％乙醇沉淀8-12h，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到灰树花提取物即粉末D；
(7)将灵芝子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(8)加入灵芝子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末E；
(9)向粉末E加入4倍体积的90％乙醇沉淀8-12h，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行抽滤浓缩冷冻干燥得到灵芝提取物即粉末F；
(10)将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：10％-80％∶10％-80％∶10％-80％的重量百分比混合。
优选的，步骤(10)中，将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：40％-50％∶30％-40％∶20％-30％的重量百分比混合。
更优选的，步骤(10)中，将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：40％∶40％∶20％的重量百分比混合。
更优选的，步骤(10)中，将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：50％∶30％∶20％的重量百分比混合。
更优选的，步骤(10)中，将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：40％∶30％∶30％的重量百分比混合。
在上述复合菌多糖的制备过程中，发明人发现，水提过程中的温度以及提取参数的选择(一次性长时间提取或者分次短时间提取)，对于抗肿瘤特性的增加具有显著不同的作用，因此，本发明通过反复试验验证，采用60-80℃的水提温度并且优选采用3次的短时提取，得到更好抗肿瘤性质的多糖提取物。
在第三方面，提供一种上述复合菌多糖在抗肿瘤方面的应用。
在第四方面，提供一种上述复合菌多糖在制备抗肿瘤药物方面的应用。
发明人通过研究发现，本发明的复合菌多糖之间三种组分通过合适配比，具有显著的复合以及协同作用，并且，本发明的提取方法可以尽可能地保留提取物的菌多糖的包括抗肿瘤在内的活性。
通过实验验证上述制备得到的菌多糖，发现它们副作用低，对多种肿瘤具有良好的抑制效果，且无耐药性的产生。
本发明制备的食药用菌的复合菌多糖，是一种非常有效的抗肿瘤活性物质，具有较高的抗肿瘤功效，其抑制肿瘤的功效比传统方法获得的单一提取物质明显提高，副作用小。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
(1)将绣球菌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(2)加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末A；
(3)向粉末A加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到绣球菌提取物即粉末B；
(4)将灰树花子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(5)加入灰树花子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末C；
(6)向粉末C加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到灰树花提取物即粉末D；
(7)将灵芝子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(8)加入灵芝子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末E；
(9)向粉末E加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行抽滤浓缩冷冻干燥得到灵芝提取物即粉末F；
(10)将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：40％∶40％∶20％的重量百分比混合。
实施例2
(1)将绣球菌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(2)加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末A；
(3)向粉末A加入4倍体积的90％乙醇沉淀8-12h，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到绣球菌提取物即粉末B；
(4)将灰树花子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(5)加入灰树花子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末C；
(6)向粉末C加入4倍体积的90％乙醇沉淀8-12h，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到灰树花提取物即粉末D；
(7)将灵芝子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(8)加入灵芝子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末E；
(9)向粉末E加入4倍体积的90％乙醇沉淀8-12h，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行抽滤浓缩冷冻干燥得到灵芝提取物即粉末F；
(10)将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：50％∶30％∶20％的重量百分比混合。
实施例3
(1)将绣球菌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(2)加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末A；
(3)向粉末A加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到绣球菌提取物即粉末B；
(4)将灰树花子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(5)加入灰树花子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末C；
(6)向粉末C加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到灰树花提取物即粉末D；
(7)将灵芝子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(8)加入灵芝子实体2-20倍体积的水，80℃浸提3次，每次2h，5500g离心30min，收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末E；
(9)向粉末E加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀，并将沉淀进行抽滤浓缩冷冻干燥得到灵芝提取物即粉末F；
(10)将绣球菌提取物(粉末B)、灰树花提取物(粉末D)、灵芝提取物(粉末F)以：40％∶30％∶30％的重量百分比混合。
效果实施例1
根据实施例1的提取方法，采用硫酸苯酚法测定得到的粉末B、D、F以及复合菌多糖的多糖含量，分别为61％、32％、39％、45％。
效果实施例2
复合菌多糖抑制乳腺癌细胞(MB-231)增殖实验
将实施例1制备得到的多糖粉末，用水配制为不同浓度的溶液加入乳腺癌细胞，每个梯度有3个重复。作用48小时后，观察并计算MTT检测细胞增殖程度，如表1所示。
表1：
表1的结果表明：复合多糖和单组分多糖对乳腺癌细胞(MB-231)的抑制率随浓度的增高而增强。在相同浓度情况下，复合多糖抑制率比单一组分的抑制率明显增强。结果表明，复合多糖抑制肿瘤细胞的效果比单一多糖抑制效果好，具有协同效果。
发明人还通过其他试验证明了本发明实施例制备的复合菌多糖的低副作用，与单一多糖相比，副作用没有明显增加。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种复合菌多糖，其特征在于，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括10％-80％绣球菌提取物、10％-80％灵芝提取物、和10％-80％灰树花多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的一种复合菌多糖，其特征在于，以重量百分比计，所述复合菌多糖包括40％-50％绣球菌提取物、30％-40％灵芝提取物、和20％-30％灰树花多糖提取物；优选的，所述复合菌多糖包括40％绣球菌提取物、40％灵芝提取物、和20％灰树花多糖提取物，或，所述复合菌多糖包括50％绣球菌提取物、30％灵芝提取物、和20％灰树花多糖提取物，或，所述复合菌多糖包括40％绣球菌提取物、30％灵芝提取物、和30％灰树花多糖提取物。
3.根据权利要求1所述的一种复合菌多糖，其特征在于，所述绣球菌提取物是通过以下方法制备得到：将绣球菌子实体经水提取后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用乙醇沉淀粉末，干燥后得到的粉末为绣球菌提取物；优选的，所述绣球菌提取物是通过以下方法制备得到：将绣球菌子实体低温脱水粉粹，经水在60-80℃提取2-6h后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用2-10倍体积的乙醇对粉末进行沉淀8-12h，将沉淀浓缩并冷冻干燥后得到的粉末为绣球菌提取物。
4.根据权利要求1所述的一种复合菌多糖，其特征在于，所述灵芝提取物是通过以下方法制备得到：将灵芝子实体经水提取后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用乙醇沉淀粉末，干燥后得到的粉末为灵芝提取物；优选的，所述灵芝提取物是通过以下方法制备得到：将灵芝子实体低温脱水粉粹，经水在60-20℃提取2-6h后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用2-10倍体积的乙醇对粉末进行沉淀8-12h，将沉淀浓缩并冷冻干燥后得到的粉末为灵芝提取物。
5.根据权利要求1所述的一种复合菌多糖，其特征在于，所述灰树花多糖提取物是通过以下方法制备得到：将灰树花多糖子实体经水提取后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用乙醇沉淀粉末，干燥后得到的粉末为灰树花多糖提取物；优选的，所述灰树花多糖提取物是通过以下方法制备得到：将灰树花子实体低温脱水粉粹，经水在60-80℃提取2-6h后得到上清液，上清液经冷冻得到粉末，再利用2-10倍体积的乙醇对粉末进行沉淀8-12h，将沉淀浓缩并冷冻干燥后得到的粉末为灰树花提取物。
6.一种复合菌多糖的制备方法，其特征在于，包括：
(1)将绣球菌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(2)加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，60-80℃提取2-6h，离心后收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末A；
(3)向粉末A加入2-10倍体积的乙醇沉淀8-12h，离心后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到粉末B；
(4)将灰树花子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(5)加入灰树花子实体2-20倍体积的水，60-80℃提取2-6h，离心后收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末C；
(6)向粉末C加入2-10倍体积的乙醇沉淀8-12h，离心后收集沉淀，并将沉淀进行浓缩冷冻干燥得到粉末D；
(7)将灵芝子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎；
(8)加入灵芝子实体2-20倍体积的水，60-80℃提取2-6h，离心后收集上清液，将上清液浓缩冷冻干燥成粉末E；
(9)向粉末E加入2-10倍体积的乙醇沉淀8-12h，离心后收集沉淀，并将沉淀进行抽滤浓缩冷冻干燥得到粉末F；
(10)将粉末B、粉末D、粉末F以：10％-80％∶10％-80％∶10％-80％的重量百分比混合。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，加入绣球菌子实体2-20倍体积的水，80℃浸提1-3次，每次1-2h；或，步骤(5)中，加入灰树花子实体2-20倍体积的水，80℃浸提1-3次，每次1-2h；或，步骤(8)中，加入灵芝子实体2-20倍体积的水，80℃浸提1-3次，每次1-2h。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，5500g离心30min；或，步骤(5)中，5500g离心30min；或，步骤(8)中，5500g离心30min。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，向粉末A加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀；或，步骤(6)中，向粉末C加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀；或，步骤(9)中，向粉末E加入4倍体积的90％乙醇过夜，5500g离心30min后收集沉淀。
10.一种权利要求1至5中任一所述的复合菌多糖或权利要求6至9中任一所述的制备方法制备得到的复合菌多糖在制备抗肿瘤药物方面的应用。
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