CN115252607B - 一种组合物及在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种组合物及在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的应用。本发明基于本领域常用的高脂饮食构建高糖、胰岛素抵抗疾病模型，发现盐酸小檗碱和染料木素组合物可以有效降血糖、改善胰岛素抵抗。本领域技术人员知道，在盐酸小檗碱或染料木素单体和组合物给药总剂量一致的前提下，盐酸小檗碱和染料木素组合物的药效显著优于盐酸小檗碱或染料木素单体，说明盐酸小檗碱和染料木素必然存在协同作用。由此可见，盐酸小檗碱和染料木素组合物具有协同降血糖、协同改善胰岛素抵抗的活性，该组合物可以用于制备降血糖、改善胰岛素抵抗的药物。

Description

一种组合物及在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的 应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及组合物及应用，具体涉及一种组合物及在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的应用。

背景技术

胰岛素抵抗(IR)是指在正常剂量的胰岛素作用下，靶组织发生的生物学效应较健康人偏低的情况，也有“胰素敏感性下降”之称。IR是2型糖尿病(T2DM)主要的病理生理特征之一，广泛存在于肥胖、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、高血压、高脂血症、多囊卵巢综合征(PCOS)等代谢性疾病中。胰岛素主要作用于外周组织(肌肉、脂肪)和肝脏，在外周能促进骨骼肌和脂肪组织摄取、利用葡萄糖；在肝脏主要促进糖原合成，抑制肝糖异生。流行病学研究表明，超过80％的T2DM患者存在IR(肖娟等，胰岛素抵抗与胰岛素信号通路异常研究进展，现代医药卫生2020年11月第36卷第21期)。

小檗碱和染料木素是两种常见的天然产物。贺云等公开小檗碱可以通过改善胰岛素抵抗(小檗碱治疗2型糖尿病作用机制研究进展，中医研究.，2020年12期)。李博等公开染料木素及其衍生物具有降血糖活性(鹰嘴豆中鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素、染料木素衍生物的合成及其对胰岛素抵抗HepG2细胞降糖活性筛选研究，北京中医药大学硕士学位论文，2017)。

目前没有小檗碱和染料木素具有协同改善胰岛素抵抗、降血糖的活性报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种组合物及在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的应用。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种组合物，由盐酸小檗碱和染料木素组成。

优选地，所述盐酸小檗碱和染料木素的质量比为3:4。

上述组合物在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的应用。

进一步地，所述药物以所述组合物为活性成分，经药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。

更进一步地，所述辅料包括固体、液体和半固体辅料。

更进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊、滴丸和注射剂。

有益效果：

本发明基于本领域常用的高脂饮食构建高糖、胰岛素抵抗疾病模型，发现盐酸小檗碱和染料木素组合物(质量比为3:4)可以有效降血糖、改善胰岛素抵抗。本领域技术人员知道，在盐酸小檗碱或染料木素单体和组合物给药总剂量一致的前提下，盐酸小檗碱和染料木素组合物(质量比为3:4)的药效显著优于盐酸小檗碱或染料木素单体，说明盐酸小檗碱和染料木素必然存在协同作用；否则，组合物的药效应该介于两种单体药效之间(相加)，或不及两种单体各自的药效(拮抗)。由此可见，质量比为3:4的盐酸小檗碱和染料木素具有协同降血糖、协同改善胰岛素抵抗的活性，实现1+1＞2的效果，二者形成的组合物可以用于制备降血糖、改善胰岛素抵抗的药物。

附图说明

图1为各组小鼠体重与摄食量曲线比较；

图2为各组小鼠口服糖耐量比较；

图3为各组小鼠胰岛素耐量比价；

图4为各组小鼠血脂TC、TG、LDL含量比较；

图5为各组小鼠血清DAG含量比较；

图6为各组小鼠血清肝损伤指标AST、ALT含量比较。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料与试剂

1、实验动物

雄性C57BL/6J小鼠，7-8周龄，体重约为18-22g，来源：南京大学模型动物研究所。

2、动物饲料

普通饲料购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司；高脂饲料(美国ResearchDiets，货号D12492，脂肪含量60％)。

3、实验试剂

盐酸小檗碱(成都曼斯特生物科技有限公司，货号A0151，纯度≥98％，Berberinehydrochloride 633-65-8)；染料木素(成都曼斯特生物科技有限公司，货号A0009，纯度≥98％，Genistein446-72-0)；二甲双胍(MCE公司，货号HY-17471A，Lot#29902)；D-Glucose(美国Amresco公司，货号0188-1Kg，Lot#3277C100)；牛胰岛素粉末(Biosharp，货号BS901,Lot#69116301)，氯化钠注射液(双鹤药业)。

4、实验仪器设备

欧姆龙血糖仪(HGM-114)及配套试纸(AS1)

分析天平(sartorius)

电子秤(长协电子)

恒温水浴锅(昆山禾创)

涡旋仪(其林贝尔仪器)

二、实验方法

1、溶液配制

(1)动物用药配制：分别称取盐酸小檗碱90mg，染料木素90mg，二甲双胍600mg，盐酸小檗碱38.6mg及染料木素51.4mg入4个50mL离心管中，加入氯化钠注射液定容至30mL，涡旋混匀，25℃水浴超声约2h，配制成3mg·mL^-1的盐酸小檗碱混悬液和染料木素混悬液，20mg·mL^-1的二甲双胍溶液和3mg·mL^-1的染料木素/盐酸小檗碱混合液,4℃保存，每两周配制一次。

(2)葡萄糖溶液的配制：称取4g D-葡萄糖，溶于20mL纯水中，涡旋以充分溶解，配制成0.2g·mL^-1的溶液，用于小鼠糖耐量测试。

(3)胰岛素母液的配制：称取1mg牛胰岛素粉末，溶于1mL纯水中，涡旋混匀，于冰上水浴超声约10min，配制成1mg·mL^-1的胰岛素母液，分装保存于-20℃备用。

(4)胰岛素使用液配制：使用前，取40μL 1mg·mL^-1的胰岛素母液加入21.56mL氯化钠注射液，稀释540倍，得0.05u·mL^-1胰岛素稀释液，用于小鼠胰岛素耐量测试。

2、动物饲养

小鼠饲养于中国药科大学实验动物中心，控制环境条件，保持12小时光照/12小时黑暗周期，温度23±3℃，相对湿度55±15％，小鼠自由获取食物和水，每三天更换饮用水及垫料。

3、动物分组及给药

小鼠适应环境一周后，按照体重分笼，随机分成6组，每组7-9只。六组分别为：空白对照组(ND)；模型组(HFD)；二甲双胍200mg·kg^-1给药组(Met)；盐酸小檗碱30mg·kg^-1给药组(BBR)；染料木素30mg·kg^-1给药组(GEN)；染料木素/盐酸小檗碱30mg·kg^-1联合给药组(质量比G:B＝4:3)。六组的饮食及给药方案如下：

ND组：普通饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃氯化钠注射液。

HFD组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃氯化钠注射液。

BBR组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃盐酸小檗碱混悬液，剂量为30mg·kg^-1。

GEN组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃染料木素混悬液，剂量为30mg·kg^-1。

G+B组：高脂饲料喂养，正常饮水，每天上午灌胃盐酸小檗碱/异甘草素混合液，剂量为30mg·kg^-1。

给药期间每周记录各组小鼠的体重、摄食量，用作后期数据统计。

4、小鼠空腹血糖(FBG)测定

实验前小鼠禁食约4或15h，正常饮水，每组随机选取4-14只小鼠进行检测，检测前每只小鼠用马克笔做好标记，用剪刀剪切鼠尾尖约1-2mm，用手从近心端开始轻柔往尾尖捋，将提前插好试纸的血糖仪靠近尾尖的血滴，试纸自动吸取血滴，并显示读数，记录每只小鼠的空腹血糖。检测过程中保持安静。

5、小鼠口服糖耐量(OGTT)测定

实验前小鼠禁食约15h，正常饮水，每组随机选取6只小鼠进行检测，检测前每只小鼠标记、称重。先测定空腹血糖(同上所述)，记录每只小鼠的空腹血糖。然后用0.2g·mL^-1的葡萄糖溶液灌胃，剂量为2g·kg^-1，从第一只鼠灌胃结束后开始计时，匀速灌完所有小鼠，约20s/只，在开始计时后的15，30，60，90，120min时间点用血糖仪按灌胃的时间间隔测定每只小鼠的血糖值，确保时间点精确，并记录。检测过程中保持安静。

6、小鼠胰岛素耐量测定

实验前小鼠禁食约4h，正常饮水，每组随机选取6-9只小鼠进行检测，检测前每只小鼠标记、称重。先测定空腹血糖(同上所述)，记录每只小鼠的空腹血糖。然后用0.05u·mL^-1的胰岛素溶液腹腔注射，剂量为0.5u·kg^-1，从第一只鼠注射结束后开始计时，匀速注射完所有小鼠，约20s/只，在开始计时后的15，30，60，90，120min时间点用血糖仪按注射的时间间隔测定每只小鼠的血糖值，确保时间点精确，并记录。检测过程中保持安静。

7、血脂生化指标检测

按照常规方法检测小鼠血液中TG、TC和LDL-c的含量。协同药对小鼠血液中TC和LDL-c影响如图所示，血脂水平在药对治疗后得到改善。

8、小鼠血清DAG含量测定

按照常规方法检测小鼠血液中DAG的含量。协同药对小鼠血液中DAG影响如图所示。

9、小鼠血清肝损伤指标

按照常规方法检测小鼠血液中ALT和AST的含量。协同药对小鼠血液中ALT和AST的影响如图所示，小鼠肝损伤得到改善。

10、数据处理

所有作图及统计都通过GraphPadPrism8.0进行，数据均表示为平均值标准误差(SE)。通过t检验进行统计学分析，p<0.05的差异被认为具有统计学意义(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001；ns，无显著性)。

三、实验结果

1、小鼠体重与摄食量

结果如图1所示。从图中可以看出小鼠高脂饮食后摄食量明显低于正常组小鼠，但高脂饮食后小鼠的体重较正常组高，并且与高脂模型组相比，单给药和联合给药后对小鼠体重及摄食量没有明显影响。

2、小鼠空腹血糖

结果如下表所示。结果显示，小鼠高脂饮食5周后，空腹血糖即可显著升高，并且二甲双胍在4h禁食后可以显著降低空腹血糖，BBR和ISL在第5周15h禁食或4h禁食都有明显药效，联合给药组在第5周即可降低空腹血糖，在禁食4h联合给药组降低空腹血糖的效果更明显，但二者的药效不具备统计学差异。

3、小鼠口服糖耐量

结果如图2和下表所示。小鼠高脂饮食6周后，模型组OGTT-AUC显著升高，即糖耐量明显下降，二甲双胍和单给药组及联合给药组都能显著改善糖耐量，且以4:3组效果最好，并且联合用药组药效显著优于单给药组。

4、小鼠胰岛素耐量

结果如图3和下表所示。小鼠高脂饮食6周后，模型组ITT-AUC显著升高，即胰岛素耐量明显下降，二甲双胍和单给药组及联合给药组都能显著改善糖耐量，且以4:3组效果最好，并且联合用药组药效显著优于单给药组。

5、血脂生化指标

结果如图4所示。GEN、BBR单独使用及二者联用均能显著抑制高脂饮食诱导的小鼠血脂紊乱，且二者联用可协同改善高脂饮食小鼠脂质代谢中TC、TG和LDL-C的水平。

6、血清DAG含量测定

结果如图5所示。GEN、BBR单独使用及二者联用均能显著抑制高脂饮食诱导的小鼠脂质代谢，且二者联用可协同改善高脂饮食小鼠脂质代谢中DAG含量水平。

7、血清肝损伤指标

结果如图6所示。GEN、BBR联用可协同降低ALT与AST水平，协同改善高脂饮食小鼠肝损伤指标，且二者联用效果尤为显著。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims (5)

1.一种组合物，其特征在于：由盐酸小檗碱和染料木素组成；所述盐酸小檗碱和染料木素的质量比为3:4。

2.权利要求1所述的组合物在制备改善胰岛素抵抗、降血糖的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述药物以所述组合物为活性成分，经药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述辅料包括固体、液体和半固体辅料。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述剂型包括片剂、胶囊、滴丸和注射剂。