CN115252459A - 一种口腔抗糖组合物及在口腔护理产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种口腔抗糖组合物及在口腔护理产品中的应用，属于口腔护理技术领域。该组合物包括生物酶、生物多糖、抑菌剂、氟化物；按重量百分比计，所述生物酶在口腔护理产品中的含量为0.001％‑0.1％，所述生物多糖在口腔护理产品中的含量为0.05％‑2％，所述抑菌剂在口腔护理产品中的含量为0.001％‑0.1％，所述氟化物在口腔护理产品中的含量为0.005％‑0.2％。本发明提供的抗糖组合物中的生物酶可分解菌斑生物膜，去除已生成生物膜，防止菌斑生物膜形成，减少代谢产酸；生物多糖在预防菌斑生物膜形成同时，延长活性物在牙齿表面停留，增强抵抗产酸功效；从多角度多途径实现抗糖。

Description

一种口腔抗糖组合物及在口腔护理产品中的应用

技术领域

本发明涉及口腔护理技术领域，具体涉及一种口腔抗糖组合物及 在口腔护理产品中的应用。

背景技术

当今膳食含有越来越多的发酵性碳水化合物，包括精制的淀粉食 物、含有新型合成碳水化合物(例如寡果糖、葡萄糖浆、麦芽糖糊精) 的饮料和食物。随着各种甜味饮料的流行，居民对于食品饮料中糖类 物质的健康关注度日益增高，减糖抗糖产品成为新的流行趋势。口腔 中，饮食中糖类物质的影响主要与龋病相关，众多研究证实发酵性碳 水化合物的大量摄入与龋病的流行有关，主要是饮食中的糖。

清洁后的牙齿在口腔环境中初期形成获得性膜，细菌在获得性膜 上进行定植聚集。一方面这些细菌利用饮食中的蔗糖等物质作为底物 在葡糖基转移酶的作用下合成多糖，形成由葡聚糖、果聚糖和-d、部 分杂多糖组成的胞外多糖，这些胞外多糖是生物膜形成的重要部分， 随着细菌生物膜、细菌及其他细菌沉积物增多，牙菌斑结构逐渐形成。 另一方面，在形成的菌斑生物膜内细菌具有迅速转运可发酵蔗糖的能 力，并将蔗糖代谢转化产酸，引起牙齿表面和菌斑界面间pH频繁的 波动。当pH下降时，引起牙齿表面矿物质丧失，相反当PH升高则 发生矿物质沉积。当脱矿大于再矿化时，这种脱矿和再矿化的累积性 结果将导致矿物质的净丧失，最终使得牙齿硬组织溶解，形成龋损(《龋病学：疾病及其临床处理》。

根据龋齿形成机理，当前关于防龋的研究主要集中在以下几个方 面：(1)针对口腔细菌，通过抑菌作用，从源头上减少细菌代谢引 起产酸；(2)针对细菌生物膜或牙菌斑，预防或减少菌斑形成；(3) 针对牙釉质，防止牙齿表面脱矿。

专利《一种抗糖牙膏及其制备方法》(CN113576942A)在牙膏 中添加以葡萄糖氧化酶、益生菌和氯化钠为芯材的双层微胶囊结构， 酶制剂分解口腔中的糖类，降低口腔中糖类物质的含量。实施例中测 试了含酶胶囊结果牙膏对葡萄糖分解率以及牙膏抗菌性能。

专利《一种含酶牙膏及其制备方法》(CN200810027924.5)公布 了一种含酶牙膏及其制备方法，用于去除牙齿附着的葡聚糖和蛋白质 物质，防止细菌滋生，从而达到美白牙齿的目的。

专利《一种清除细菌生物被膜的组合物及其应用》 (CN113025447A)公开的清楚生物背膜组合物包括右旋糖酐酶、抗 右旋糖酐单克隆抗体以及缓冲液，应用于清除制糖工业设备表面细菌 生物被膜。

专利《一种含酶制剂的牙膏及其制备方法》(CN107693392A) 公开一种去垢酶和抑/杀菌酶构成的酶制剂组合物，能够有效分解牙 垢中的水溶性葡聚糖，预防牙垢的形成，并有效去除牙垢，同时可明 显杀灭口腔中的有害细菌，预防龋齿、牙龈炎及牙周炎等口腔疾病， 从而保持口腔健康。

公开号为CN 104666112 A的中国专利公开了一种生物活性透明 质酸牙膏，用于牙龈炎和口咽腔粘膜炎的抗炎作用。公开号为CN 103462847 A的中国专利申请文献公开了一种口腔护理用漱口水，该 漱口水含有透明质酸0.5～1.5％,用于口腔溃疡等口腔疾病的抑菌与 消除口腔异味。公开号为CN 105250332 A的中国专利申请文献公开 了一种护龈固齿多效口腔治疗物及其应用，该多效口腔治疗物含有透 明质酸钠0.1～1.5份，用于防治牙齿敏感、牙龈出血、口腔溃疡等口 腔疾病的效果。公开号为CN 105213298 A的中国专利申请文献公开 了一种口腔护理凝胶及其制方法，其中，透明质酸钠重量占凝胶总重 量的0.1％-2％，用于预防和缓解口腔问题，达到抗炎抑菌，促进口 腔黏膜和组织的修复和再生，减低发炎和伤口渗出的效果。公开号为 CN 106176690 A的中国专利申请文献公开了透明质酸口腔护理膜及 制备方法和应用，该口腔护理膜含透明质酸钠10％～50％，透明质酸锌10％～40％，水解透明质酸钠10％～40％，具有抑菌、修复细 胞损伤等功效。公开号为CN 106344450 A的中国专利申请文献公开 了一种透明质酸刷牙牙片及制备方法，其中结合透明质酸的抗炎活性 与甘草和抗坏血酸来防止牙龈出血，消除红肿，全面解决牙齿过敏， 防治牙龈炎、牙周炎和口咽腔粘膜炎等口腔炎症问题。

上述专利在抵抗糖酵解产酸对牙齿酸蚀研究中，多从单一路径出 发，主要集中在氟化物防龋研究，而关于酶制剂、生物多糖的应用主 要在美白、护龈、牙周疾病、口气清新相关领域，关于其在抗糖酵解 酸蚀作用研究较少，尤其是生物多糖在生物膜形成中抑制作用尚无相 关专利。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种口腔抗糖组合物及在 口腔护理产品中的应用，从实际应用出发，以抵抗糖酵解产酸对牙齿 酸蚀作用为目的，具体的通过抑菌、抑制生物膜形成以及抵抗细菌糖 酵解酸蚀相结合，起到抵抗糖酵解产酸对牙齿酸蚀作用的目的。同时， 在对组合体外功效验证方案进行设计，采用细菌糖酵解产物进行牙齿 样本酸蚀处理，更客观反映组合物抗糖功效。

本发明的提供的技术方案如下：

本发明提供的一种口腔抗糖组合物，包括生物酶、生物多糖、抑 菌剂、氟化物；按重量百分比计，所述生物酶在口腔护理产品中的含 量为0.001％-0.1％，所述生物多糖在口腔护理产品中的含量为 0.05％-2％，所述抑菌剂在口腔护理产品中的含量为0.001％-0.1％，所 述氟化物在口腔护理产品中的含量为0.005％-0.2％。

生物酶可分解菌斑生物膜；生物多糖可降低细菌在牙齿表面黏附、 增强活性物质驻留量；抑菌剂可抑制口腔致病菌生长；氟化物可增强 牙釉质硬度，预防牙釉质脱矿。

优选地，所述生物酶包括右旋糖酐酶、变聚糖酶中的任意一种； 所述生物多糖包括透明质酸钠、小核菌胶中的任意一种；所述抑菌剂 包括西吡氯铵、厚朴提取物中的任意一种；所述氟化物包括氟化钠、 单氟磷酸钠中的任意一种。

更为优选地，所述生物酶为右旋糖酐酶；所述生物多糖为透明质 酸钠；所述抑菌剂为西吡氯铵；所述氟化物为氟化钠。

一种口腔护理产品，所述口腔护理产品包括牙膏、牙粉、漱口水、 口清新中的任意一种，包括：上述的一种口腔抗糖组合物。

优选地，按重量百分比计，其原料组分包括：生物酶0.005％-0.05％、 生物多糖0.1％-1％、抑菌剂0.01％-0.07％、氟化物0.04％-0.1％。

一种漱口水，按重量百分比计，其原料组分包括：生物酶 0.001％-0.1％、生物多糖0.05％-2％、抑菌剂0.001％-0.1％、氟化物 0.005％-0.2％、山梨醇15％-25％、甘油5％-15％、丙二醇4％-6％、泊 洛沙姆407 0.5％-1.5％、香精0.08％-0.12％、糖精钠0.01-0.03％、西吡 氯铵0.04-0.06％，余量为水。

一种上述漱口水的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将泊洛沙姆407加入去离子水中，搅拌至完全溶解；加入 糖精钠、氟化钠、西吡氯铵，搅拌至完全溶解；加入山梨醇、甘油， 搅拌均匀后再加入抗糖组合物，搅拌5min制成水相；

(2)将香精加入丙二醇中搅拌均匀，制成油相；

(3)搅拌条件下，将油相加入水相，搅拌15min。最后加入透 明质酸钠，搅拌15min至完全溶解。

本发明技术方案具有如下优点：

1、优选出可分别水解水溶性葡聚糖及非水溶性葡聚糖的生物酶， 分解菌斑生物膜，去除已生成生物膜，防止菌斑生物膜形成，减少代 谢产酸。

2、优选出可降低细菌在牙齿表面黏附、增强活性物质驻留量的 生物多糖，预防菌斑生物膜形成同时，延长活性物在牙齿表面停留， 增强抵抗产酸功效。

3、组合物包含抑菌剂、氟化物、生物酶、生物多糖组合，从多 角度多途径实现抗糖。

4、所述漱口水产品配方通过成分选择、添加量控制，实现生物 酶、生物多糖在体系中稳定，保证功效活性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方 案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简 单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式， 对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可 以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的第一种实施方式中提供的活塞组结构的结构示 意图。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显 然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。 基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动 前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明所涉及的试剂如无特殊说明，均为普通市售产品。

本发明的包含抗糖组合物的漱口水产品，所含各组分的种类百分 比见表1。

表1包含抗糖组合物的漱口水产品实施例

制备工艺：表1中各实施例制备工艺采用以下方案：(1)将泊 洛沙姆407加入去离子水中，搅拌至完全溶解；加入糖精钠、氟化钠、 西吡氯铵，搅拌至完全溶解；加入山梨醇、甘油，搅拌均匀后再加入 右旋糖酐酶，搅拌5min制成水相；(2)将香精加入丙二醇中搅拌均匀，制成油相；(3)搅拌条件下，将油相加入水相，搅拌15min。 最后加入透明质酸钠，搅拌15min至完全溶解。

表2对比例各组分含量

性能测试

1去除菌斑生物膜，减少细菌代谢产酸

1.1测试方法

将变异链球菌接入BHI液体培养基中37℃恒温培养18-24h。取 24孔板，每孔加入1.8ml已灭菌的含5％蔗糖BHI液体培养基，再每 孔加入0.2ml的变异链球菌菌液，培养24小时，生成牙菌斑生物膜 模型，去除每孔上清液，洗去浮游菌。每孔加入0.5mL表1中所列实施例样品，空白对照组为0.5mL无菌水，再加入1.5mL液体培养基， 空白对照组加入无菌水，37℃培养24h后。培养完成后，吸取上清液 测试pH值，每孔采用无菌水清洗三次，洗去残留液。每孔加入 0.5mol/L的氢氧化钠溶液2mL溶解生物膜，用枪头轻轻吹散混匀后 在OD600下测量吸光值。

1.2测试结果

实验各组OD值测试结果取平均值，根据以下公式计算原料对牙 菌斑生物膜去除率：去除率(％)＝[(空白对照OD值－实验组OD 值)/空白对照OD值]×100

表3口腔护理组合物生物膜去除率及减少细菌产酸测试结果

由表3可知，在减少细菌代谢产酸测试中，实施例中抗糖组合物 具有协同增效效果，可以有效减少细菌代谢产酸。对比例中仅添加一 种组分时，减少细菌代谢产酸作用有限。西吡氯铵作为抑菌剂可有效 抑制细菌代谢，但对生物膜包覆的细菌无法实现到高效抑制；氟化物、 透明质酸钠、右旋糖酐酶抑菌效果较弱，在无抑菌剂条件下，结合生 物膜去除率数据分析，生物酶有效分解生物膜中多糖，同时透明质酸 钠的添加在一定程度上减少细菌黏附，抑制细菌生长，从而减少细菌 代谢产酸，但作用有限。

通过生物膜去除率数据分析，生物酶的添加有显著的去除生物膜 效果。

2抑制菌斑生物膜形成，减少细菌代谢产酸

2.1测试方法

将变异链球菌接入BHI液体培养基中37℃恒温培养18-24h。取 24孔板，每孔加入BHI培养液1.4ml、0.1ml变异链球菌菌液以及 0.5mL样品，每个样品平行3孔。空白对照组为1.4ml含5％蔗糖BHI 培养液+0.1mL变异链球菌菌液+0.5mL生理盐水，好氧状态下37℃培养24h。培养完成后，移取孔中培养液并测试pH值，培养孔用无菌 水清洗三次，最后加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液2mL溶解生物膜， 用枪头轻轻吹散混匀后在OD600下测量吸光值。

2.2测试结果

实验各组OD值测试结果取平均值，根据以下公式计算样品对牙 菌斑生物膜抑制率：抑制率(％)＝[(空白对照OD值－实验组OD 值)/空白对照OD值]×100

表4口腔护理组合物生物膜生成抑制率及减少细菌产酸测试结 果

	上清液pH值	生物膜抑制率(％)
			实施例1	5.45	27
实施例2	5.61	75
			实施例3	7.19	100
实施例4	7.23	100
			实施例5	7.21	100
对比例1	4.59	4
			对比例2	7.19	100
对比例3	4.91	5
			对比例4	5.01	21
对比例5	6.12	45
			空白对照组	4.56	0

从表4结果可以看出，在抑制菌斑生物膜形成测试中，实施例中 抗糖组合物具有协同增效效果。对比例2添加西吡氯铵有明显抑菌杀 菌效果，一定添加量下可达到100％抑菌率，从而生物膜抑制率可达 到100％。对比例4、5中仅添加右旋糖酐酶及透明质酸钠，对生物膜 形成抑制效果有限。

3增强牙釉质抵抗糖酵解酸蚀能力

3.1测试方法

3.1.1糖酵解酸液制备

将6gBBL胰酪大豆肉胨，20g蔗糖，溶于160.8g去离子水灭菌 冷却。收集3-4人新鲜唾液，将已加入唾液的培养基放入37℃培养箱 培养18h，测定PH值在4左右高温高压灭菌备用。

3.1.2牙釉质样本处理

按照表4中方法采用实施例1、实施例2、实施例5、实施例6 样品处理牙釉质样本，每组8个牙釉质样，循环完毕测试每组牙釉质 硬度值SMH，每组测试结果取平均值。

表5牙釉质样循环处理方式

3.1.3牙釉质酸蚀处理

对进行过牙釉质修复处理后的牙块采用3.1.1制备的酸液进行酸 蚀处理，10min后取出牙块用DI water充分清洗，并用吸水纸吸干牙 块表面的水进行SMH测试。

3.2测试结果

牙釉质样SMH测试结果采用独立样本t检验。如果样品组的Δ HV值小于对照组ΔHV值，且两组ΔHV值比较有统计学意义(P＜ 0.05)，可以认为样品组能够抵抗口腔中糖产酸引起的牙釉质侵蚀。

实施例中随着氟化物含量增加抗酸蚀效果增强，氟含量达到一定 添加量后抗酸蚀效果达到最大值。酸蚀10min后添加氟化物组与未添 加组硬度变化有显著性差异，组合物中氟化物添加能够抵抗口腔中糖 产酸引起的牙釉质酸蚀。

表6经糖酵解液酸蚀后牙釉质样本硬度变化

4、生物多糖增加活性物驻留

4.1测试方法

将HAP片在37℃下人工唾液中浸泡4h，然后放入测试样品溶液 中浸泡5min，对照组采用去离子水浸泡，取出在去离子水中清洗， 放入24孔板中。将变异链球菌接入BHI液体培养基中37℃恒温培养 18h。取放有HAP片的24孔板，每孔加入1.8ml已灭菌的含5％蔗糖BHI液体培养基，再每孔加入0.2ml的变异链球菌菌液，培养24h。 吸取孔板培养基测试PH，培养孔用无菌水清洗三次，最后加入 0.5mol/L的氢氧化钠溶液2mL，用枪头轻轻吹散混匀后在OD600下 测量吸光值。每组平行测试3个HAP片，实验结果取平均值。

4.2测试结果

实验各组OD值测试结果取平均值，根据以下公式计算样品对牙 菌斑生物膜抑制率：抑制率(％)＝[(空白对照OD值－实验组OD 值)/空白对照OD值]×100。结合生物膜抑制率与pH值结果，综 合分析生物多糖对活性成分保留效果。

表7各实施例样品处理后pH值及生物膜抑制率结果

从表7测试结果分析可知，在无生物多糖添加情况下，HAP上 吸附活性物质较少，对变异链球菌生长抑制效果较弱，细菌代谢产酸 较多。添加生物多糖实施例5，增强活性物质保留，有效抑制细菌生 长，从而减少细菌产酸及生物膜形成。

5、稳定性考察

按上述工艺制备的包含生物酶、生物多糖、抑菌剂、氟化物组合 物的口腔产品，在45℃的温度下加速老化3个月后，检测产品相关 各项指标。检测结果显示正常，含该组合物的漱口水产品整体稳定性 良好，质量优异。

6、毒理性分析

1、右旋糖酐酶。即葡聚糖酶，该原料LD50＞2200mg/kg，毒性 分级为微毒。无急性眼刺激性，无急性皮肤刺激性，未见皮肤变态反 应试验结果，未见皮肤光毒性试验结果。

2、西吡氯铵。欧洲消费者安全科学委员(SCCS)评估结果显示， 浓度不高于0.1％时，该原料在漱口水产品中的使用是安全的。该原 料的添加量为0.05％，在本产品中的应用风险在可接受范围之内。

3、氟化钠。该原料已列入欧盟化妆品法则附录Ⅲ，可在口腔产 品中添加。最大允许浓度为0.15％(以F计)，当与其他氟化物混合 时，总氟浓度不超过0.15％。该原料在产品中的添加量为0.05％，总 氟浓度为0.023％，在本产品中的应用风险在可接受范围之内。

4、透明质酸钠。该原料已列入《化妆品原料已使用目录》(2021 版)中，其在淋洗类产品最高历史使用量为74.993％。其LD50＞ 5000mg/kg，为无毒物质。

显然，上述具体实施方式仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并 非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说 明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法 对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变 动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (6)

1.一种口腔抗糖组合物，其特征在于，包括生物酶、生物多糖、抑菌剂、氟化物；按重量百分比计，所述生物酶在口腔护理产品中的含量为0.001％-0.1％，所述生物多糖在口腔护理产品中的含量为0.05％-2％，所述抑菌剂在口腔护理产品中的含量为0.001％-0.1％，所述氟化物在口腔护理产品中的含量为0.005％-0.2％。

2.权利要求1所述的一种口腔抗糖组合物，其特征在于，所述生物酶包括右旋糖酐酶、变聚糖酶中的任意一种；所述生物多糖包括透明质酸钠、小核菌胶中的任意一种；所述抑菌剂包括西吡氯铵、厚朴提取物中的任意一种；所述氟化物包括氟化钠、单氟磷酸钠中的任意一种。

3.一种口腔护理产品，所述口腔护理产品包括牙膏、牙粉、漱口水、口清新中的任意一种，其特征在于，包括：权利要求1-2任一项所述的一种口腔抗糖组合物。

4.根据权利要求3所述的一种口腔护理产品，其特征在于，按重量百分比计，其原料组分包括：生物酶0.005％-0.05％、生物多糖0.1％-1％、抑菌剂0.01％-0.07％、氟化物0.04％-0.1％。

5.一种漱口水，其特征在于，按重量百分比计，其原料组分包括：生物酶0.001％-0.1％、生物多糖0.05％-2％、抑菌剂0.001％-0.1％、氟化物0.005％-0.2％、山梨醇15％-25％、甘油5％-15％、丙二醇4％-6％、泊洛沙姆407 0.5％-1.5％、香精0.08％-0.12％、糖精钠0.01-0.03％、西吡氯铵0.04-0.06％，余量为水。

6.根据权利要求5所述的一种漱口水的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将泊洛沙姆407加入去离子水中，搅拌至完全溶解；加入糖精钠、氟化钠、西吡氯铵，搅拌至完全溶解；加入山梨醇、甘油，搅拌均匀后再加入抗糖组合物，搅拌5min制成水相；

(2)将香精加入丙二醇中搅拌均匀，制成油相；

(3)搅拌条件下，将油相加入水相，搅拌15min。最后加入透明质酸钠，搅拌15min至完全溶解。

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