CN115245482A - 一种去除皮下疤痕组合物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及A61K8/18领域,具体为一种去除皮下疤痕组合物的制备方法及其应用。本发明以天然动物源组织为多肽来源,包含I型胶原蛋白、III型胶原蛋白及IV型胶原蛋白等,用其制备的低分子量多肽序列活性成分丰富,代谢周期长,活性维持时间久,且成本较低,通过配合电动微针、点阵激光仪、点阵射频仪等光电设备联合治疗用于眼角皱纹、痤疮引起的凹陷性疤痕、妊娠过程造成的妊娠纹以及用于治疗医美整形注射透明质酸、肉毒素、高分子可吸收材料引起的皮下纤维化、凹陷性疤痕,可以诱导成纤维细胞合成新生胶原,重塑受损组织,实现凹陷性组织再生修复,淡化去除皮下疤痕。
Description
技术领域
本发明涉及A61K8/18领域,具体为一种去除皮下疤痕组合物的制备方法及其应用。
背景技术
随着人们对容貌的关注程度日益增加,医美逐渐成为一种广泛的容貌改善手段,但是医美整形过程中注射透明质酸、肉毒素及其他高分子可吸收材料会引起皮下纤维化并产生凹陷性疤痕,然而这种凹陷性疤痕无法完全自行正常修复到和周围皮肤相同的状态,尤其是由于痤疮导致的凹陷性疤痕,严重影响皮肤美观和皮肤局部功能。
目前,针对凹陷性疤痕、眼角真性皱纹以及妊娠纹仍未有一种全面有效的方法,传统激光、植皮等方式修复效率较低且费用较高,后续影响较大,因此技术人员针对性的进行研究,以期提供一种有效去除皮下疤痕的方法,中国专利CN111281940B公开了一种祛疤痕组合物及其制备方法与应用,组合物以威灵仙、白蔹、丹参、紫草等中药为活性成分,提供一种外用的去除疤痕的组合物,但是应用于痤疮和医美整形导致的凹陷性疤痕时,有效性不足。中国专利CN111920719B公开了一种可改善痘印及疤痕的组合物及其制备方法,将纤细老鹳草提取物、黑柄炭角菌应用于改善痘印及疤痕,但是未能针对凹陷性疤痕、眼角真性皱纹以及妊娠纹仍提供一种全面有效的方法。
因此,提供一种去除皮下疤痕组合物制作方法,经该方法制备得到的组合物配合光电设备联合有效治疗眼角皱纹、痤疮引起的凹陷性疤痕、妊娠过程造成的妊娠纹以及医美整形导致的皮下纤维化和凹陷性疤痕,为皮下疤痕去除提供一种低成本且有效的治疗方式,具有很高的市场推广应用价值。
发明内容
为了解决上述问题,本发明一方面提供了一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,至少包括以下步骤:
(1)将小分子动物源细胞外基质提取物、水以质量比为(5-10):10000的比例混合;
(2)将复合氨基酸、水以质量比为(1.5-2.2):100的比例混合;
(3)将透明质酸钠、水以质量比为(1-5):1000的比例混合;
(4)将复合植物提取物水以质量比为(5-15):1000的比例混合;
(5)将步骤(1)-(4)中的各原料与辅料加入乳化锅中,控制温度为40-80℃,转速为90-150rpm,搅拌混合30-60min即得。
作为一种优选的技术方案,所述步骤(1)中小分子动物源细胞外基质提取物的制备方法至少包括前处理、病毒灭活、酶法脱细胞处理、高温处理、组织松解、高速匀浆、酶解和精处理、冷冻干燥成型步骤;
作为一种优选的技术方案,所述步骤(1)中小分子动物源细胞外基质提取物的制备方法,至少包括以下步骤:
S1、前处理:膀胱粘膜下层基质、小肠粘膜下层基质、羊膜、胎盘等动物源性组织清洗、分割得到一定形状的组织;
S2、病毒灭活:将步骤S1中前处理后的组织进行病毒灭活,分别用PBS溶液,纯化水清洗数次;
S3、酶法脱细胞处理:将步骤S2中病毒灭活后的组织用蛋白酶进行脱细胞处理,在20~85kHz的超声波功率下,使用超声波清洗剂作为辅助,进行超声波清洗,然后分别用PBS溶液,纯化水清洗数次;
S4、高温处理:将步骤S3中酶法脱细胞处理后的组织样品在80~120℃进行高温处理;
S5、组织松解:将步骤S4中处理过的组织进行组织松解,得到组织短纤维;
S6、高速匀浆:将步骤S5中得到的组织短纤维与PBS溶液按一定比例混合,在8000~25000rad/min下,高速搅拌匀浆10~60min,得到浆液;
S7、酶解:将步骤S6高速匀浆后得到的浆液,按一定比例加入蛋白酶进行酶解,得到酶解液;
S8、精处理:将步骤S7酶解后得到的酶解液在80~120℃下加热处理20-40min,冷却后离心、收集上清液,采用透析膜获得精制液;
S9、冷冻干燥成型:将步骤S8精处理后得到的精制液通过冷冻干燥即得。
作为一种优选的技术方案,所述步骤S6中组织纤维与PBS溶液的重量比为(1~20):100;
作为一种优选的技术方案,所述步骤S7中浆液与蛋白酶的重量比为(90~110):(0.5~4);
本申请中以天然动物源组织为多肽来源,通过采用上述特定工艺制备得到小分子动物源细胞外基质提取物,包含I型胶原蛋白、III型胶原蛋白及IV型胶原蛋白,使使提供的低分子量多肽序列活性成分丰富,代谢周期长,活性维持时间久,且成本较低,配合体系中的复合氨基酸、透明质酸钠、复合植物提取物,使提供的组合物有效诱导成纤维细胞合成新生胶原,重塑受损组织,实现凹陷性组织再生修复,淡化去除皮下疤痕。
作为一种优选的技术方案,所述步骤(2)中复合氨基酸包括丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸中的至少两种;优选的,所述步骤(2)中复合氨基酸包括丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸;所述丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸的重量比为(3.2-4.3):(1.2-1.8):1.5:(0.8-1.2):0.5:0.5:0.5:0.5:0.4:0.3:0.2。
所述复合氨基酸购买自上海百好博化工有限公司。
作为一种优选的技术方案,所述步骤(3)中透明质酸钠的平均分子量为5K-150K道尔顿;所述透明质酸钠的含量大于93wt%;优选的,所述步骤(3)中透明质酸钠包含透明质酸钠A和透明质酸钠B,所述透明质酸钠A和透明质酸钠B的质量比为(0.8-1.2):1;所述透明质酸钠A的平均分子量为8000,所述透明质酸钠B的平均分子量为130万;所述透明质酸钠A、B均购买自华熙生物科技股份有限公司。
作为一种优选的技术方案,所述步骤(4)中复合植物提取物包括积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物中的至少三种;优选的,所述步骤(4)中复合植物提取物包括积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物;优选的,所述积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物的质量比为(5-10):(1-5):(1-5):(0.1-1):(0.1-1):(0.1-1):(0.1-1)。
所述复合植物提取物购买自广州奥雪生物科技有限公司
作为一种优选的技术方案,所述步骤(5)中辅料至少包括甘油、丁二醇、乙二醇、对羟基苯乙酮;优选的,所述甘油、丁二醇、乙二醇、对羟基苯乙酮的质量比为(3-5):(2-3):0.5:0.5。
本发明另一方面提供了一种去除皮下疤痕组合物的制备方法的应用,应用于制备去除皮下疤痕组合物。
优选的,所述去除皮下疤痕组合物配合光电设备电动微针、点阵激光仪、点阵射频仪联合治疗皮下疤痕。
有益效果
1、本发明提供了提供一种去除皮下疤痕组合物制作方法,经该方法制备得到的组合物配合光电设备联合有效治疗眼角皱纹、痤疮引起的凹陷性疤痕、妊娠过程造成的妊娠纹以及医美整形导致的皮下纤维化和凹陷性疤痕,为皮下疤痕去除提供一种低成本且有效的治疗方式,具有很高的市场推广应用价值。
2、本申请中以天然动物源组织为多肽来源,通过采用上述特定工艺制备得到小分子动物源细胞外基质提取物,包含I型胶原蛋白、III型胶原蛋白及IV型胶原蛋白,使使提供的低分子量多肽序列活性成分丰富,代谢周期长,活性维持时间久,且成本较低,配合体系中的复合氨基酸、透明质酸钠、复合植物提取物,使提供的组合物有效诱导成纤维细胞合成新生胶原,重塑受损组织,实现凹陷性组织再生修复,淡化去除皮下疤痕。
附图说明:
图1为采用本申请实施例1提供的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法制备得到的去除皮下疤痕组合物配合点阵激光仪治疗眼角皱纹前后对比图,其中图1上面为治疗前,下面为治疗后。
图2为采用本申请实施例1提供的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法制备得到的去除皮下疤痕组合物配合点阵激光仪治疗抬头纹前后对比图,其中图2上面为治疗前,下面为治疗后。
图3为采用本申请实施例1提供的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法制备得到的去除皮下疤痕组合物配合点阵激光仪治疗痤疮引起的凹陷性疤痕前后对比图,其中图3左边为治疗前,右边为治疗后。
图4为采用本申请实施例1提供的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法制备得到的去除皮下疤痕组合物配合点阵激光仪治疗创伤引起的凹陷性疤痕前后对比图,其中图4左边为治疗前,右边为治疗后。
图5为采用本申请实施例1提供的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法制备得到的去除皮下疤痕组合物配合点阵激光仪治疗妊娠纹引起的凹陷性疤痕前后对比图,其中图5左边为治疗前,右边圈出部分为治疗后。
具体实施方式
实施例1
本发明一方面提供了一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将小分子动物源细胞外基质提取物、水以质量比为8:10000的比例混合;
(2)将复合氨基酸、水以质量比为2:100的比例混合;
(3)将透明质酸钠、水以质量比为5:1000的比例混合;
(4)将复合植物提取物水以质量比为15:1000的比例混合;
(5)将步骤(1)-(4)中的各原料与辅料加入乳化锅中,控制温度为55℃,转速为120rpm,搅拌混合40min即得。
所述步骤(1)中小分子动物源细胞外基质提取物的制备方法,包括以下步骤:
S1、前处理:膀胱粘膜下层基质、小肠粘膜下层基质、羊膜、胎盘等动物源性组织清洗、分割得到一定形状的组织;
S2、病毒灭活:将步骤S1中前处理后的组织进行病毒灭活,分别用PBS溶液,纯化水清洗6次;
S3、酶法脱细胞处理:将步骤S2中病毒灭活后的组织用蛋白酶进行脱细胞处理,在60kHz的超声波功率下,使用超声波清洗剂作为辅助,进行超声波清洗,然后分别用PBS溶液,纯化水清洗6次;
S4、高温处理:将步骤S3中酶法脱细胞处理后的组织样品在100℃进行高温处理;
S5、组织松解:将步骤S4中处理过的组织进行组织松解,得到组织短纤维;
S6、高速匀浆:将步骤S5中得到的组织短纤维与PBS溶液按一定比例混合,在10000rad/min下,高速搅拌匀浆30min,得到浆液;
S7、酶解:将步骤S6高速匀浆后得到的浆液,按一定比例加入蛋白酶进行酶解,得到酶解液;
S8、精处理:将步骤S7酶解后得到的酶解液在100℃下加热处理30min,冷却后离心、收集上清液,采用透析膜获得精制液;
S9、冷冻干燥成型:将步骤S8精处理后得到的精制液通过冷冻干燥即得。
所述步骤S6中组织纤维与PBS溶液的重量比为10:100;
所述步骤S7中浆液与蛋白酶的重量比为100:2;
所述步骤(2)中复合氨基酸包括丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸;所述丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸的重量比为4:1.5:1.5:1:0.5:0.5:0.5:0.5:0.4:0.3:0.2。
所述复合氨基酸购买自上海百好博化工有限公司。
所述步骤(3)中透明质酸钠包含透明质酸钠A和透明质酸钠B,所述透明质酸钠A和透明质酸钠B的质量比为1:1;所述透明质酸钠A的平均分子量为8000,所述透明质酸钠B的平均分子量为130万;所述透明质酸钠A、B均购买自华熙生物科技股份有限公司。
所述步骤(4)中复合植物提取物包括积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物;所述积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物的质量比为8:2:1:0.5:0.5:0.5:0.5。
所述复合植物提取物购买自广州奥雪生物科技有限公司。
所述步骤(5)中辅料包括甘油、丁二醇、乙二醇、对羟基苯乙酮;所述甘油、丁二醇、乙二醇、对羟基苯乙酮的质量比为3:2:0.5:0.5。
本发明的实施例1另一方面提供了一种去除皮下疤痕组合物的制备方法的应用,应用于制备去除皮下疤痕组合物。
所述除皮下疤痕组合物配合光电设备电动微针、点阵激光仪、点阵射频仪联合治疗皮下疤痕。
性能测试方法
1、功效测试:将实施例1制备得到的去除皮下疤痕组合物用于眼角真性皱纹治疗,治疗后眼角真性皱纹明显改善,治疗前后对比图参见附图1。
2、功效测试:将实施例1制备得到的去除皮下疤痕组合物用于抬头纹治疗,治疗后抬头纹明显改善,治疗前后对比图参见附图2。
3、功效测试:将实施例1制备得到的去除皮下疤痕组合物用于痤疮引起的凹陷性疤痕治疗,治疗后痤疮引起的凹陷性疤痕明显改善,治疗前后对比图参见附图3。
4、功效测试:将实施例1制备得到的去除皮下疤痕组合物用于创伤引起的凹陷性疤痕治疗,治疗后创伤引起的凹陷性疤痕明显改善,治疗前后对比图参见附图4。
5、功效测试:将实施例1制备得到的去除皮下疤痕组合物用于妊娠纹引起的凹陷性疤痕治疗,治疗后妊娠纹引起的凹陷性疤痕明显改善,治疗前后对比图参见附图5。
Claims (10)
1.一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,至少包括以下步骤:
(1)将小分子动物源细胞外基质提取物、水以质量比为(5-10):10000的比例混合;
(2)将复合氨基酸、水以质量比为(1.5-2.2):100的比例混合;
(3)将透明质酸钠、水以质量比为(1-5):1000的比例混合;
(4)将复合植物提取物水以质量比为(5-15):1000的比例混合;
(5)将步骤(1)-(4)中的各原料与辅料加入乳化锅中,控制温度为40-80℃,转速为90-150rpm,搅拌混合30-60min即得。
2.根据权利要求1所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中小分子动物源细胞外基质提取物的制备方法至少包括前处理、病毒灭活、酶法脱细胞处理、高温处理、组织松解、高速匀浆、酶解和精处理、冷冻干燥成型步骤。
3.根据权利要求2所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中小分子动物源细胞外基质提取物的制备方法,至少包括以下步骤:
S1、前处理:膀胱粘膜下层基质、小肠粘膜下层基质、羊膜、胎盘等动物源性组织清洗、分割得到一定形状的组织;
S2、病毒灭活:将步骤S1中前处理后的组织进行病毒灭活,分别用PBS溶液,纯化水清洗数次;
S3、酶法脱细胞处理:将步骤S2中病毒灭活后的组织用蛋白酶进行脱细胞处理,在20~85kHz的超声波功率下,使用超声波清洗剂作为辅助,进行超声波清洗,然后分别用PBS溶液,纯化水清洗数次;
S4、高温处理:将步骤S3中酶法脱细胞处理后的组织样品在80~120℃进行高温处理;
S5、组织松解:将步骤S4中处理过的组织进行组织松解,得到组织短纤维;
S6、高速匀浆:将步骤S5中得到的组织短纤维与PBS溶液按一定比例混合,在8000~25000rad/min下,高速搅拌匀浆10~60min,得到浆液;
S7、酶解:将步骤S6高速匀浆后得到的浆液,按一定比例加入蛋白酶进行酶解,得到酶解液;
S8、精处理:将步骤S7酶解后得到的酶解液在80~120℃下加热处理20-40min,冷却后离心、收集上清液,采用透析膜获得精制液;
S9、冷冻干燥成型:将步骤S8精处理后得到的精制液通过冷冻干燥即得。
4.根据权利要求3所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S7中浆液与蛋白酶的重量比为(90~110):(0.5~4)。
5.根据权利要求1所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中复合氨基酸包括丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸中的至少两种。
6.根据权利要求1所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中透明质酸钠的分子量为5K-150K道尔顿。
7.根据权利要求1所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中复合植物提取物包括积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物中的至少三种。
8.根据权利要求7所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中复合植物提取物包括积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物,所述积雪草提取物、虎杖根提取物、黄芩根提取物、茶叶提取物、光果甘草提取物、母菊花提取物、迷迭香叶提取物的质量比为(5-10):(1-5):(1-5):(0.1-1):(0.1-1):(0.1-1):(0.1-1)。
9.根据权利要求1所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中辅料至少包括甘油、丁二醇、乙二醇、对羟基苯乙酮。
10.一种根据权利要求1-9任一项所述的一种去除皮下疤痕组合物的制备方法的应用,其特征在于,应用于制备去除皮下疤痕组合物。
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2022
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