CN115227724A - 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了缓慢葡萄球菌在制备组合物中应用，特别是该组合物用于防治胰岛素抵抗症状或2型糖尿病的组合物，该组合物可以制备为食品或生物医药。本发明所述的缓慢葡萄球菌可显著降低高脂饮食诱导的体重增加，改善糖耐量，促进胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗，并且能明显提高免疫力、改善炎症。本发明提供的缓慢葡萄球菌能够有效防治胰岛素抵抗症状，且未发现明显的不良反应，安全性好，具有广阔的前景。
Description
技术领域
本发明属于食品和生物医药领域，具体的说，涉及缓慢葡萄球菌在制备用于防治胰岛素抵抗症状和2型糖尿病的组合物中的应用。
背景技术
胰岛素抵抗是2型糖尿病的显著特征和发病机制的基本环节之一。2型糖尿病的发病率逐年增加，且2型糖尿病是难以痊愈的疾病。而胰岛素抵抗通过早期干预治疗，严格控制饮食、加强锻炼等生活方式干预后，是可治愈的。有效防治胰岛素抵抗，降低其向2型糖尿病的转变率，可以降低2型糖尿病的患病率。胰岛素抵抗或者2型糖尿病常伴有体重增加、糖耐量异常、免疫降低与低度炎症。因此，改善体重增加、糖耐量异常、免疫与炎症是一种防治胰岛素抵抗或2型糖尿病方法。
肠道微生物与胰岛素抵抗或2型糖尿病发生、发展关系紧密。其中，在众多的肠道微生物中，缓慢葡萄球菌（Staphylococcus lentus）伴随着胰岛素抵抗或2型糖尿病的发生、发展而丰度降低 [Gut bacteria responding to dietary change encodesialidases that exhibit preference for red meat-associated carbohydrates. NatMicrobiol. 2019, 4:2082-2089; Effects of oral sialic acid on gut development,liver function and gut microbiota in mice. Lett Appl Microbiol. 2021, 73:20-25]，但目前尚不清楚缓慢葡萄球菌是否具有抵抗胰岛素的生物学功能。
因鉴于此，特提出此发明。
发明内容
本发明目的在于提供缓慢葡萄球菌在制备用于防治胰岛素抵抗症状的组合物中的应用。
为实现上述目的，采用以下技术方案：
本发明提供了一种缓慢葡萄球菌在制备组合物中应用，所述组合物是食品、保健品或药物，所述组合物用于预防或治疗胰岛素抵抗或2型糖尿病
可选的，所述产品是食品、保健品或药物。
可选的，如上所述的应用，所述缓慢葡萄球菌为缓慢葡萄球菌Staphylococcus lentus，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 1.247。
可选的，如上所述的应用，所述缓慢葡萄球菌为活细胞形式。
可选的，如上所述的应用，所述药物以缓慢葡萄球菌作为主要活性成分。
可选的，所述2型糖尿病是由所述胰岛素抵抗症状引发的。
可选的，所述胰岛素抵抗症状是由高脂饮食引起的。
可选的，如上所述的应用还包括改善体重增加、糖耐量异常、免疫力低下、炎症等症状的一种或两种以上。
进一步的，上述症状是由于高脂饮食引起的。
进一步的，所述改善免疫力降低是指增加个体的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和γ干扰素；
进一步的，所述改善炎症是指降低高脂饮食个体的促炎因子浓度和增加其抗炎因子浓度。在一个具体实施方式中，所述改善炎症是指降低高脂饮食个体的脂多糖分泌和促进白介素10的合成与分泌。
可选的，如上所述的应用，所述保健品或药物是液体制剂或固体制剂。
可选的，所述药物为口服药物。可选的，所述药物基于胃肠道给药。可选的，所述胃肠道给药可以在食管、胃、小肠、结肠、直肠等部位给药。可选的，所述药物为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等。例如在一个具体实施方式中，所述药物为溶液剂，通过灌胃的方式给药；在一些实施方式中，所述药物为胶囊剂，通过口服给药；在一些实施方式中，所述药物为溶液剂或混悬剂，通过小肠、结肠或直肠给药。
本发明的有益效果为：
本发明所述的缓慢葡萄球菌可显著降低高脂饮食诱导的体重增加，改善糖耐量，促进胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗，并且能显著提高免疫力、改善炎症。本发明提供的缓慢葡萄球菌能够有效防治胰岛素抵抗症状，且未发现明显的不良反应，安全性好，具有广阔的前景。
附图说明
图1是干预6周小鼠的体重；
图2是干预后小鼠口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果图；
图3是干预后小鼠餐后2小时的血糖值；
图4是干预后小鼠胰岛素耐量试验（ITT）结果图；
图5是干预后小鼠ITT曲线下面积（AUC of ITT）对血糖反应累积变化的量化结果；
图6是干预后小鼠的胰岛素浓度；
图7是干预后小鼠的稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；
图8是干预后小鼠的丙氨酸氨基转移酶浓度；
图9是干预后小鼠的天门冬氨酸氨基转移酶浓度；
图10是干预后小鼠的总胆固醇浓度；
图11是干预后小鼠的高密度脂蛋白胆固醇浓度；
图12是干预后小鼠的免疫球蛋白A浓度；
图13是干预后小鼠的免疫球蛋白G浓度；
图14是干预后小鼠的血清γ干扰素浓度；
图15是干预后小鼠的血清白介素1β浓度；
图16是干预后小鼠的血清脂多糖浓度；
图17是干预后小鼠的血清白介素10浓度。
其中，图1-15中HFD、HSL分别表示高脂饮食、高脂饮食+缓慢葡萄球菌，每组8只小鼠，*P < 0.05、**P < 0.01、***P < 0.001、****P < 0.0001表示与HFD组相比差异具有统计学意义。
具体实施方式
为进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及结果，以下以较佳实施例，对依据本发明申请的具体实施方式、技术方案及特征，详细说明如后。下述说明中的多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。
本发明以下实施例选用的主要材料及来源分别如下：
缓慢葡萄球菌为保藏于广东省微生物菌种保藏中心的缓慢葡萄球菌（Staphylococcus lentus），其保藏编号为GDMCC 1.247，购自宁波泰斯拓生物技术有限责任公司；营养肉汤培养基（货号：N8300）、葡萄糖（货号：G8150）购自北京索莱宝科技有限公司。基础饲料（批号：21103313）购自北京科澳协力饲料有限公司；高脂饲料（货号：D12492，60%卡路里来自脂肪）购自美国Research diet公司；胰岛素注射液购自江苏万邦生化医药集团有限责任公司；总胆固醇检测试剂盒（货号：A111-1-1）、高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒（货号：A112-1-1）、丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（货号：C009-2-1）、天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒（货号：C010-2-1）、葡萄糖检测试剂盒（货号：A154-1-1）均购自南京建成生物工程研究所；胰岛素ELISA试剂盒（货号：F5618B）、脂多糖ELISA试剂盒（货号：F10621B）、白介素1β ELISA试剂盒（货号：F5079B）、白介素10 ELISA试剂盒（货号：F5215B）、免疫球蛋白A ELISA试剂盒（货号：F5094B）、免疫球蛋白G ELISA试剂盒（货号：F5096B）、γ干扰素ELISA试剂盒（货号：F5221B）均购自江苏酶免实业有限公司；1.5 mL离心管（美国Axygen公司）；血糖仪（上海罗氏诊断产品有限公司）；多用途旋涡混合器（Vortex Genie 2，美国Scientific Industries公司）；冷冻高速离心机（德国Sigma公司）、生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）、多功能酶标仪（美国BioTek公司）。
实施例1：灌胃用缓慢葡萄球菌菌液的制备
称取营养肉汤18.0 g，加入1000 mL超纯水中，加热煮沸溶解，分装，用滤菌膜封口，高压灭菌30分钟备用。
从冻存于-80°C冰箱中取出由甘油保存的菌种，立即放置在37°C-45°C水浴中快速融化并适当摇动，直至管内甘油菌液全部溶解。无菌操作下打开甘油管，用无菌滴管将菌种转移到新配制的培养基上进行培养。将菌液进行2次传代后使用。
取营养肉汤培养基15 mL，接种缓慢葡萄球菌菌液50 μL，于生化培养箱中以37°C、250 rpm振荡培养5小时。使用酶标仪检测菌液OD625在0.30-0.39之间，即菌液相当于4.5×108 CFU/mL（CFU，Colony-forming Unit，为菌落形成单位）。
实施例2：缓慢葡萄球菌能够降低高脂饮食诱导的体重增加
6周龄的16只雄性C57BL/6J小鼠[实验动物许可证号：SCXK（京）2019-0009]购自北京维通利华实验动物技术有限公司。饲养条件：无特定病原体Specific Pathogen Free（SPF）级洁净度，室温20°C-22°C，湿度60 ± 5%，12小时明暗交替，自由饮食饮水。本实验中所有动物方案经北京迈德康纳动物伦理委员会批准，并在实验动物保护协会规定的指导下进行动物实验操作。
小鼠以基础饲料适应性喂养7天后称重，采用随机分组设计按体重（克，g）将小鼠分为高脂饮食组（High-fat Diet, HFD）和高脂饮食+缓慢葡萄球菌组（High-fat diet +Staphylococcus lentus, HSL），每组8只小鼠。均以高脂饲料喂养，共6周，期间HFD组按0.20 mL/只每日灌胃营养肉汤培养基，HSL组按0.20 mL/只每日灌胃缓慢葡萄球菌菌液（即9×107 CFU/d缓慢葡萄球菌）。期间每周监测小鼠体重。
结果如图1所示，HSL组小鼠体重从干预后第3周开始就明显低于HFD组，表明缓慢葡萄球菌处理后能够显著降低HFD诱导的体重增加。
实施例3：缓慢葡萄球菌能够改善HFD诱导的糖耐量异常与胰岛素敏感性
HFD组和HSL组小鼠干预6周后进行口服葡萄糖耐量试验（Oral GlucoseTolerance Test，OGTT）考察缓慢葡萄球菌对HFD诱导小鼠的糖耐量的影响。给药后第6周，各组小鼠禁食不禁水12小时，称重、尾部滴血测量空腹血糖值（葡萄糖负荷之前），然后按照2.0 g/kg的剂量灌胃给予20%的葡萄糖溶液，于30、60、90和120 min（葡萄糖负荷之后）的时候，用血糖试纸和血糖仪检测实验小鼠尾尖血、检测血糖。
结果如图2-图3所示，虽然OGTT的曲线下面积没有差异（图2），但是HSL组餐后2小时血糖值显著低于HFD组（图3），表明缓慢葡萄球菌能够改善HFD诱导的糖耐量异常。
此外，进行胰岛素耐量试验（Insulin Tolerance Test，ITT）考察缓慢葡萄球菌对HFD诱导小鼠的胰岛素敏感性的影响。灌胃后第6周，各组小鼠禁食不禁水6小时，称重、尾部滴血测量空腹血糖值（胰岛素注射前），腹腔注射胰岛素（0.5 U/kg）。然后于30、60、90和120min（胰岛素注射后），用血糖试纸和血糖仪检测小鼠尾尖血、检测血糖值。
结果如图4-图5所示，HSL组小鼠ITT的曲线下面积明显低于HFD组（P < 0.01），表明缓慢葡萄球菌能够改善HFD诱导的小鼠的胰岛素敏感性。
实施例4：缓慢葡萄球菌能够促进胰岛素分泌、改善胰岛素抵抗
干预6周后，各组小鼠禁食不禁水12小时，眼眶静脉丛取血，收集的血液在室温下静置30-60 min，4ºC、16,200 g离心10 min，收集上清并分装至聚丙烯EP管，−80ºC保存，用于后续观察指标的检测。
根据ELISA试剂盒步骤检测小鼠血清胰岛素浓度，结果如图6所示，HSL组小鼠胰岛素浓度显著高于HFD组小鼠（P < 0.01），表明缓慢葡萄球菌能够促进胰岛素分泌。
采用葡萄糖试剂盒检测各组小鼠血清葡萄糖浓度，根据计算稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）：HOMA-IR =血糖（mmol/L）× 胰岛素（mIU/L）/22.5。HOMA-IR常被用来评估个体的胰岛素抵抗程度。结果如图7所示，HFD组小鼠HOMA-IR明显比HSL组高（P <0.001），表明缓慢葡萄球菌能够有效改善HFD诱导的胰岛素抵抗。
实施例5：缓慢葡萄球菌对小鼠肝功能与脂代谢的影响
根据试剂盒步骤检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶与天门冬氨酸氨基转移酶浓度，以此考察缓慢葡萄球菌对小鼠肝功能的影响。结果如图8-图9所示，HFD组与HSL组的丙氨酸氨基转移酶（图8）与天门冬氨酸氨基转移酶（图9）浓度无差异，且在正常范围内，表明缓慢葡萄球菌对小鼠肝功能无影响。
根据试剂盒步骤检测小鼠血清总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇浓度，以此考察缓慢葡萄球菌对小鼠脂代谢的影响。结果如图10-图11所示，HSL组小鼠的总胆固醇（图10）与高密度脂蛋白胆固醇（图11）浓度显著低于HFD组的，表明缓慢葡萄球菌能调节HFD诱导引起的脂代谢紊乱。
实施例6：缓慢葡萄球菌能够提高小鼠免疫力、改善炎症
免疫球蛋白A不仅是一种重要的免疫调节因子，而且是血糖稳态的重要调节因子。γ干扰素是一种具有广泛免疫调节作用的淋巴因子。根据ELISA试剂盒步骤检测小鼠免疫球蛋白A、免疫球蛋白G与γ干扰素，以此考察缓慢葡萄球菌对小鼠免疫力（包括体液免疫和细胞免疫）的影响。结果如图12-图14所示，HSL组小鼠免疫球蛋白A（图12）、免疫球蛋白G（图13）与γ干扰素（图14）浓度均显著高于HFD组，表明缓慢葡萄球菌能够增强HFD诱导小鼠的体液免疫与细胞免疫，从而提高小鼠免疫力。
根据ELISA试剂盒步骤检测小鼠血清促炎因子白介素1β和脂多糖、抗炎因子白介素10，以此考察缓慢葡萄球菌对HFD诱导小鼠炎症的影响。结果如图15-图17所示，虽然缓慢葡萄球菌对促炎因子白介素1β无作用（图15），但是其能抑制促炎因子脂多糖的释放（P <0.05）（图16），且其能促进抗炎因子白介素10合成与分泌（图17）。综上所述，对比HFD组，缓慢葡萄球菌加入后，导致促炎因子浓度降低，抗炎因子浓度增加，表明其能改善由HFD诱导的炎症。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式；但本发明的保护范围并不局限于此。任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种缓慢葡萄球菌在制备组合物中应用，其特征在于，所述组合物是食品、保健品或药物，所述组合物用于预防或治疗胰岛素抵抗或2型糖尿病。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述缓慢葡萄球菌为缓慢葡萄球菌Staphylococcus lentus，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 1.247。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述缓慢葡萄球菌为活细胞形式。
4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物以缓慢葡萄球菌作为主要活性成分。
5.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述2型糖尿病是由所述胰岛素抵抗症状引起的。
6.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述胰岛素抵抗症状是由高脂饮食引起的。
7.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用还包括改善体重增加、糖耐量异常、免疫力降低、炎症症状的一种或两种以上。
8.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物的剂型是液体制剂或固体制剂。
9.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物为口服药。
10.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物采用胃肠道给药方式。
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116531410A (zh) * | 2023-07-06 | 2023-08-04 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 白色葡萄球菌在制备组合物中的应用 |
| CN117045686A (zh) * | 2023-10-08 | 2023-11-14 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 解纤维素拟杆菌在制备药物中的应用 |
| WO2024060698A1 (zh) * | 2022-09-21 | 2024-03-28 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1771052A (zh) * | 2003-02-03 | 2006-05-10 | N·巴拉班 | 治疗和预防葡萄球菌及其它细菌感染的方法和组合物 |
| JP2010252710A (ja) * | 2009-04-27 | 2010-11-11 | Kao Corp | アポクリン臭抑制剤のスクリーニング方法及びアポクリン臭の評価方法 |
| CN102083458A (zh) * | 2008-04-28 | 2011-06-01 | 哈洛齐梅公司 | 超速效胰岛素组合物 |
| CN103446385A (zh) * | 2013-08-26 | 2013-12-18 | 山西康禾农业有限责任公司 | 一种治疗糖尿病并发症的中药制剂 |
| CN106749498A (zh) * | 2016-11-17 | 2017-05-31 | 吉林农业大学 | 一种具有抗菌效果的梅花鹿角盘抗菌肽/蛋白及其应用 |
| CN106908605A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-06-30 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | eLtaS蛋白作为预防和治疗胰岛素抵抗相关疾病的药物靶点的应用 |
| CN111971056A (zh) * | 2018-02-13 | 2020-11-20 | 普罗维瓦制药公司 | 用于治疗和缓解代谢及氧化应激、炎症和神经退行性变的益生菌制剂 |
| CN112023031A (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-04 | 中国药科大学 | SNase在制备促进糖尿病伤口愈合药物中的应用 |
| KR20210037292A (ko) * | 2019-09-27 | 2021-04-06 | 코스맥스 주식회사 | 스타필로코커스 렌투스 st-2 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 |
| CN113755409A (zh) * | 2021-10-28 | 2021-12-07 | 南昌大学 | 一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11045538B2 (en) * | 2018-10-23 | 2021-06-29 | Mei-Nan Tuan | Method and composition for treatment of hyperglycemia |
| CA3197953A1 (en) * | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Paul Joseph Giannasca | Compositions and methods using at least one strain of staphylococcus carnosus therapeutically or prophylactically |
| CN114317353B (zh) * | 2021-12-30 | 2023-09-15 | 浙江大学 | 一种植物乳杆菌zjufyj7及其应用 |
| CN115227724B (zh) * | 2022-09-21 | 2023-03-24 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用 |
-
2022
- 2022-09-21 CN CN202211146734.1A patent/CN115227724B/zh active Active
-
2023
- 2023-06-09 WO PCT/CN2023/099382 patent/WO2024060698A1/zh unknown
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1771052A (zh) * | 2003-02-03 | 2006-05-10 | N·巴拉班 | 治疗和预防葡萄球菌及其它细菌感染的方法和组合物 |
| CN102083458A (zh) * | 2008-04-28 | 2011-06-01 | 哈洛齐梅公司 | 超速效胰岛素组合物 |
| JP2010252710A (ja) * | 2009-04-27 | 2010-11-11 | Kao Corp | アポクリン臭抑制剤のスクリーニング方法及びアポクリン臭の評価方法 |
| CN103446385A (zh) * | 2013-08-26 | 2013-12-18 | 山西康禾农业有限责任公司 | 一种治疗糖尿病并发症的中药制剂 |
| CN106749498A (zh) * | 2016-11-17 | 2017-05-31 | 吉林农业大学 | 一种具有抗菌效果的梅花鹿角盘抗菌肽/蛋白及其应用 |
| CN106908605A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-06-30 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | eLtaS蛋白作为预防和治疗胰岛素抵抗相关疾病的药物靶点的应用 |
| CN111971056A (zh) * | 2018-02-13 | 2020-11-20 | 普罗维瓦制药公司 | 用于治疗和缓解代谢及氧化应激、炎症和神经退行性变的益生菌制剂 |
| KR20210037292A (ko) * | 2019-09-27 | 2021-04-06 | 코스맥스 주식회사 | 스타필로코커스 렌투스 st-2 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 |
| CN112023031A (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-04 | 中国药科大学 | SNase在制备促进糖尿病伤口愈合药物中的应用 |
| CN113755409A (zh) * | 2021-10-28 | 2021-12-07 | 南昌大学 | 一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HEGAZY,WAEL A.H等: "Anti-diabetics and antimicrobials:Harmony of interplay", 《WORLD JOURNAL OF DIABETES》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024060698A1 (zh) * | 2022-09-21 | 2024-03-28 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用 |
| CN116531410A (zh) * | 2023-07-06 | 2023-08-04 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 白色葡萄球菌在制备组合物中的应用 |
| CN116531410B (zh) * | 2023-07-06 | 2023-10-03 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 白色葡萄球菌在制备组合物中的应用 |
| CN117045686A (zh) * | 2023-10-08 | 2023-11-14 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 解纤维素拟杆菌在制备药物中的应用 |
| CN117045686B (zh) * | 2023-10-08 | 2024-02-13 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 解纤维素拟杆菌在制备药物中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2024060698A1 (zh) | 2024-03-28 |
| CN115227724B (zh) | 2023-03-24 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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