CN113755409A - 一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008能在不影响摄食量的前提下，抑制胰岛素抵抗小鼠体重和体脂肪增加；改善胰岛素抵抗小鼠葡萄糖耐量的同时，降低小鼠血糖、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数；调节胰岛素抵抗小鼠肝脏甘油三酯和炎症水平，缓解肝脏组织损伤；改善肠道菌群结构，促进肠道益生菌的生长。本发明所述的长双歧杆菌NSP008用于制备缓解胰岛素抵抗的药物组合物与发酵食品，具有非常广泛的应用前景。

Description

一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
胰岛素抵抗(Insulin resistance，IR)是指机体在正常剂量的胰岛素作用下，靶组织发生的生物学效应较健康人偏低的情况，也有“胰素敏感性下降”之称。胰岛素抵抗IR是Ⅱ型糖尿病主要的病理生理特征之一，胰岛素抵抗IR广泛存在于肥胖、非酒精性脂肪肝、高脂血症等代谢性疾病中。胰岛素抵抗IR所导致的疾病如Ⅱ型糖尿病和肥胖在世界范围内广泛流行，已成为全球共同关注的重大公共健康问题。目前主要通过药物二甲双胍的干预来缓解胰岛素抵抗IR，药物治疗存在不易维持血糖稳态、药效时间短、易引起消化道不良反应等缺点，长期的治疗会给患者带来沉重的经济负担。
肠道不仅是人体消化吸收的重要场所，同时也是人体最大的免疫器官，肠道在维持宿主正常生理功能中发挥着极其重要的作用，人体肠道中有数量高达100万亿的肠道微生物，肠道菌群不仅能够在宿主肠道内实现肠道菌之间的信息交流和物质代谢，还能参与宿主代谢。肠道菌群的结构和功能的变化与IR的发展密切相关。IR患者通常会出现肠道菌群的失调，与健康人相比，IR患者体内双歧杆菌、乳杆菌等益生菌数量明显减少，有害菌数量显著增加。
有研究通过动物实验发现双歧杆菌属中的许多菌种(两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、动物双歧杆菌、短双歧杆菌)对提高宿主糖耐量有有益作用。长双歧杆菌是成人肠道中双歧杆菌属的主要类型，具有抑制肠道致病菌的益生功能，目前已被纳入卫生部下发的《可用于食品的菌种名单》及欧洲食品安全局(European Food Safety Agency)安全资格认定清单。长双歧杆菌在宿主肠道内具有良好的定植能力，能在定植后发挥其益生功能，在各种疾病治疗中具有良好的效果。
公开号为CN113293113A记载了一株长双歧杆菌MI-186及其减少脂肪细胞，降低血脂血糖，调节炎症因子方面的应用；公开号为CN109593678B记载了一株长双歧杆菌YH295及在降低腹型肥胖风险产品中的应用；公开号为CN112672749A记载了一株新型长双歧杆菌DS0956及其预防或治疗肥胖的应用。公开号为CN110452829B记载了一株长双歧杆菌菌株LTBL16及其调节人和动物的肠道菌群、提高机体免疫力的应用；公开号为CN108410763B记载了一种长双歧杆菌TC01及其抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等有害菌的应用；公开号为CN109055269B记载了一株长双歧杆菌CCFM687及其发酵食品在治疗抑郁、自闭、肥胖、及糖尿病等方面的应用；因此，大部分对长双歧杆菌益生作用的应用限于其能够减轻肥胖或仅仅调节宿主肠道菌群，而肥胖引起的胰岛素抵抗与宿主肠道菌群紊乱密切相关。
因此，急需一种对高脂饮食引起的胰岛素抵抗伴随的肠道菌群紊乱，及伴随的糖代谢紊乱、肝脏损伤等缓解作用的益生菌。
发明内容
为了缓解对高脂饮食引起的胰岛素抵抗伴随的肠道菌群紊乱，及伴随的糖代谢紊乱、肝脏损伤，本发明筛选出了一种具有缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌，并证明其在不同肠道菌群背景下均可缓解胰岛素抵抗，同时还能够进一步预防或胰岛素抵抗伴随的机体代谢紊乱。在糖尿病前期的膳食干预方面具有重要意义和广阔前景。
本发明提供了一株长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008，已于2021年8月25日保藏于广东省科学院微生物研究所，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No:61889。
所述长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008是从来源于河南地区的Ⅱ型糖尿病病人体粪便样本发酵液中分离得到的，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQID NO.1所示，并将测序得到的序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示与长双歧杆菌的核酸序列相似度高达99.59％，将其命名为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008，同时，需要指出的是，生物材料保藏证明上的Bifidobacterium longum BL41与长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008是同一株菌的不同命名方式，本发明正文采用长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008的命名。
所述的长双歧杆菌NSP008具有下列性质：菌体特征：革兰氏染色阳性杆状细菌，有时呈Y型或V型，无孢子，无鞭毛，菌体约0.5-1.5μm宽，1.3-8μm长。菌落特征：在培养基上形成明显地菌落，直径在0.3-2mm之间，正面形态圆形，中间凸起，边缘整齐，微白，不透明，表面湿润光滑。生长特性：该菌株为专性厌氧菌，最适生长温度是36℃-38℃，最适生长pH值为6.6-7.0，在含有葡萄糖的培养基中生长良好，16-24h可进入对数后期或稳定前期。
本发明还提供了一种微生物菌剂，所述微生物菌剂含有上述长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂中，长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)NSP008的活菌数不低于1×1010CFU/mL或1×1010CFU/g。
本发明还提供了一种产品，所述产品中含有上述长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)NSP008。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)NSP008的活菌数不低于1×1010CFU/mL或1×1010CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述产品为食品、药品或保健品。
在本发明的一种实施方式中，所述食品包括饮料、奶制品或其他含有上述长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008的食品。
在本发明的一种实施方式中，所述药品包含长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)NSP008、药物载体和/或药用辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述药品或保健品的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液等剂型。
在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料是药学上可接受的辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述可接受的辅料包括一种或多种通常使用的增稠剂、抗氧化剂、酸碱调节剂、乳化剂、防腐剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂及矫味剂等。
本发明的一种实施方式中，所述填充剂为淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙和/或微晶纤维素。
在本发明的一种实施方式中，所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮。
在本发明的一种实施方式中，所述润湿剂为水、乙醇、淀粉和/或糖浆。
在本发明的一种实施方式中，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠。
在本发明的一种实施方式中，所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶和/或聚乙二醇。
在本发明的一种实施方式中，所述矫味剂为单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、樱桃糖浆、柠檬、茴香、薄荷油、海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、柠檬酸、酒石酸和/或碳酸氢钠。
本发明还提供了上述长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008，或上述微生物菌剂在制备用于预防和/或治疗胰岛素抵抗的产品的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述产品包括药品或保健品。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，长双歧杆菌NSP008的活菌数不低于1×1010CFU/mL或1×1010CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述药品包含长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)NSP008、药物载体和/或药用辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述药品或保健品的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液等剂型。
在本发明的一种实施方式中，所述药品或保健品的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液等剂型。
在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料是药学上可接受的辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述可接受的辅料包括一种或多种通常使用的增稠剂、抗氧化剂、酸碱调节剂、乳化剂、防腐剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂及矫味剂等。
本发明的一种实施方式中，所述填充剂为淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙和/或微晶纤维素。
在本发明的一种实施方式中，所述粘合剂为纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和/或聚乙烯吡咯烷酮。
在本发明的一种实施方式中，所述润湿剂为水、乙醇、淀粉和/或糖浆。
在本发明的一种实施方式中，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、羧丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和/或碳酸氢钠。
在本发明的一种实施方式中，所述润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶和/或聚乙二醇。
在本发明的一种实施方式中，所述矫味剂为单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、樱桃糖浆、柠檬、茴香、薄荷油、海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、柠檬酸、酒石酸和/或碳酸氢钠。
有益效果
1、本发明筛选出了一株长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008，具有缓解胰岛素抵抗的作用，具体体现在：
1)能够在不影响小鼠摄食量的前提下，降低胰岛素抵抗小鼠的体脂，抑制小鼠体重的增加；
2)能够改善高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠的葡萄糖耐量；
3)能够降低高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠的血糖、血清胰岛素，减轻胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，改善小鼠糖代谢紊乱；
4)能够减轻高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏重量的增加，降低肝脏甘油三酯和炎症水平，缓解肝脏组织损伤；
5)能够改善胰岛素抵抗小鼠肠道菌群的组成，增加益生菌如：乳球菌，乳杆菌，双歧杆菌的相对丰度。
2、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)是益生菌的一种，目前已被纳入卫生部下发的《可用于食品的菌种名单》。因此，本发明筛选得到的长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)NSP008对人体无副作用，可用于制备能够缓解胰岛素抵抗的药物组合物与发酵食品，具有非常广泛的应用前景。
生物材料保藏
一株长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008，已于2021年8月25日保藏于广东省科学院微生物研究所，分类学命名为：Bifidobacterium longum，保藏编号为GDMCCNo:61889，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所。
附图说明
图1：长双歧杆菌NSP008干预胰岛素抵抗小鼠期间小鼠的体重变化趋势、第15周实验结束时小鼠体重及附睾脂肪重量图；其中A为干预期间各组小鼠体重变化趋势图；B为第15周试验结束时小鼠体重；C为第15周实验结束时小鼠附睾脂肪重量。
图2：长双歧杆菌NSP008干预胰岛素抵抗小鼠最后一周进行口服葡萄糖耐量测试曲线及葡萄糖耐量测试曲线下面积；其中，A为葡萄糖耐量测试曲线；B为葡萄糖耐量测试曲线下面积。
图3：长双歧杆菌NSP008干预胰岛素抵抗小鼠最后一周小鼠空腹血糖浓度、干预后血清胰岛素浓度及胰岛素抵抗指数；其中，A为空腹血糖浓度；B为干预后血清胰岛素浓度；C为胰岛素抵抗指数。
图4：长双歧杆菌NSP008干预胰岛素抵抗小鼠后肝功能指标变化图、肝脏照片、肝组织染色图及附睾脂肪染色图；其中，A为谷丙转氨酶水平；B为谷草转氨酶水平；C为肝脏甘油三酯水平；D为肿瘤坏死因子α水平；E为干预后肝脏重量，F为肝脏照片，G为肝组织H&E染色结果；H为油红O染色结果；I为附睾脂肪H&E染色结果。
图5：长双歧杆菌NSP008干预胰岛素抵抗小鼠后的粪便中肠道菌群的多样性；其中A为的Chao1指数；B为OTU值；C为β多样性。
图6：长双歧杆菌NSP008干预胰岛素抵抗小鼠后的粪便中丰度发生显著变化的6组肠道菌属；A～F分别为异杆菌属(Allobaculum)、小鼠肠道拟杆菌属(Bacteroides)、乳球菌属(Lactococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)；
其中，N为正常组，M为高脂饮食的胰岛素抵抗组(模型组)，Met为高脂饮食+阳性药物二甲双胍(治疗组)，B为高脂饮食+长双歧杆菌NSP008组(长双歧杆菌组)；
“*”表示与模型组(M)具有显著性差异(*：p<0.05；**：p<0.01；***：p<0.001；****：p<0.0001)；部分表格中的数据结果表示为平均值，数据分析通过SPSS 24进行单因素方差分析及Tukey’s HSD事后检验，同列中不同字母“a，b，c等”代表组间具有显著性差异(p<0.05)。
具体实施方式
下述实施例中涉及到的小鼠购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，饲养于25±2℃、恒湿50±5％、光照12小时(8:00-20:00)，隔音，自由摄食、饮水，适应性喂养一周后开始实验。下述实施例中所涉及的胰岛素试剂盒(购自crystal chem，货号：90080)、血糖试纸和血糖仪购自罗氏公司；所涉及的TNF-α炎症因子试剂盒(FMS-ELM028)购自南京福麦斯生物技术有限公司；所涉及的甘油三酯TG试剂盒(A110-1-1)购自南京建成生物工程研究所。所涉及的粪便DNA提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司(DP328)；下述实施例中所涉及的二甲双胍购自美国Sigma公司(D150959)。下述实施例中所涉及的培养基成分均购买自上海源叶公司。下述实施例中所涉及的高脂饲料购自美国Research Diets公司(D12492)。
下述实施例中所涉及的正常饲料购自武汉斯莱克公司(大小鼠繁殖饲料)。
下述实施例中涉及培养基：
活化培养基的制备(g/L)：成分包括了碳源：果胶0.047，木聚糖0.047，阿拉伯半乳聚糖，支链淀粉0.04，可溶性淀粉0.392；氮源：细菌蛋白胨24，胰蛋白胨24；无机盐：七水硫酸镁0.5，磷酸二氢钾2.5，氯化钠4.5，二水合氯化钙0.45，七水合硫酸铁0.005；胆盐0.4，厌氧剂半胱氨酸盐酸盐0.2和酸碱缓冲液(MES)19.52。首先将以上成分配制完成，并调节pH至6后进行除氧和灭菌(121℃，15min)。灭菌结束后将培养基转移至厌氧手套箱中，将不耐高温的血红素1μg、维生素K3(VK3)1μg和维生素混合液(Wolfe's Vitamin Solution)0.1mL过0.22μm滤膜添加至1L培养基，在厌氧手套箱中过夜除氧，即得到所述活化液体培养基。
富集培养基的制备：每升富集培养基由350mL A液，150mL B液，500mL C液，1mL D液和0.08mL维生素混合物(Wolfe's Vitamin Solution)混合而成，配方(g/L)包括：A液：细菌蛋白胨68.57，胰蛋白胨68.57，胆盐1.14，厌氧剂半胱氨酸盐酸盐1.43，硫酸镁1.14，磷酸一氢钾5.48，氯化钠12.86，氯化钙0.97，七水合硫酸铁0.014；B液：酸碱缓冲剂(MES)130，C液：阿拉伯半乳聚糖10，D液：血红素10mg、维生素K3(VK3)8mg。首先将可高压灭菌成分(A-C液)配制完成，调节pH至6后进行除氧，而后进行灭菌(121℃，15min)。灭菌结束后将培养基转移至厌氧手套箱中过夜。最后将D液和Wolfe's Vitamin Solution过0.22μm滤膜后的按比例加入培养基中，即得到所述富集培养基。
MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉浸粉8.0，酵母浸粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二铵2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.04，吐温1.0，，溶解于1L蒸馏水中，并加入半胱氨酸盐酸盐0.5-1g/L，混合均匀，然后调整其pH为6.6-7.0，115-121℃灭菌15-20min后，即得到所述MRS液体培养基。
MRS固体培养基的制备：在MRS液体培养基的基础上添加1.5-2％琼脂。混合均匀，然后调整其pH为6.6-7.0，115-121℃灭菌15-20min后，即得到所述MRS固体培养基。
MRS选择性培养基(g/L)：将蛋白胨10.0，牛肉浸粉8.0，酵母浸粉4.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二铵2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.04，吐温1.0，阿拉伯半乳聚糖10.0溶解于蒸馏水中，并加入半胱氨酸盐酸盐0.5-1g/L，混合均匀，然后调整其pH为6.6-7.0，115-121℃灭菌15-20min后，即得到所述液体培养基。
下述实施例中所涉及的检测方法如下：
小鼠肝功能的测定：第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死。从小鼠眼眶取血，收集血液，3000rpm离心15min，获得的小鼠血清。采用血生化仪测定小鼠血清中反映肝功能的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平。
小鼠附睾脂肪、肝脏组织的重量测定：第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死，分离出小鼠完整的附睾脂肪和肝脏，称重并记录。
小鼠附睾脂肪、肝脏的组织形态观察：
(1)H&E染色：将组织包埋于石蜡中，冰冻后切割成切片，染色前将石蜡切片脱蜡，分别用苏木素和伊红染色，脱水后的切片封片后显微观察；
(2)油红O染色：将组织包埋于石蜡中，冰冻后切割成切片，切片入油红染液浸染后用用苏木素复染，使用甘油明胶封片后显微观察。
口服葡萄糖耐量测试(OGTT)：第14周实验结束后，各组小鼠禁食5h后灌胃葡萄糖溶液(2.0g/kg)，使用血糖仪和配套试纸通过小鼠尾静脉采血测定各组小鼠灌胃前0min，灌胃后30，60，90，120min血糖。
口服葡萄糖耐受量曲线下面积计算公式如下：
Figure BDA0003325793060000071
其中，BG0，BG30，BG60，BG90和BG120是在0min，30min，60min，90min和120min测得的血糖值。
空腹血糖(FBG)的测定：第14周实验结束后，各组小鼠禁食6h后，使用血糖仪和配套试纸通过小鼠尾静脉采血测定各组小鼠血糖。
血清胰岛素的测定：第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死，获取血清，参照试剂盒说明书测定其血清中胰岛素含量。
胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的计算方法：
Figure BDA0003325793060000081
胰岛素敏感指数(ISI)的计算方法：
胰岛素敏感指数＝ln(空腹血糖(mg/dL)×空腹胰岛素(mIU/L))-1
肝脏中甘油三酯和炎症因子的测定：使用甘油三酯试剂盒和TNF-α炎症因子试剂盒测定。
肝脏炎症因子的测定：第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死，获取肝脏，参照试剂盒说明书测定其肝脏中炎症因子的含量。
粪便中肠道菌群的测定：第14周实验结束后，收集各组小鼠粪便，获取粪便中总DNA，采用16S rDNAV4区引物对其进行扩增，采用Illumina MiSeq测序仪进行测序，采用QIIME1.9对测序数据进行分析。
实施例1：长双歧杆菌NSP008的分离筛选
1、样品采集
采集河南商丘地区的Ⅱ型糖尿病人体粪便样本，样本置于保藏管中，加入5倍重量的保护液(保护剂的制备：称取半胱氨酸盐酸盐1g/L，甘油200-300g/L，均匀溶解于PBS(1×)中，115-121℃灭菌15-20min)保存于装有干冰的保温盒中，带回实验室后迅速置于-80℃冰箱待分离筛选。
2、粪菌的富集
将上述粪菌液从-80℃冰箱取出，解冻后低速低温离心(500g，5min，4℃)获得上清，然后过100μm滤膜除去上清中杂质，将上清粪菌液接种至活化培养基中(粪菌液：活化培养基＝1:9，(v/v))，37℃下，140rpm培养16h，然后将其接种至富集培养基中，接种比例为10％(v/v)，37℃下，140rpm培养24h。获得用阿拉伯半乳聚糖富集后的粪菌液。以上操作在无菌厌氧环境中进行。
3、双歧杆菌的分离纯化
(1)粪菌液梯度稀释：在无菌厌氧环境中，取上述富集后的粪菌液，加入到9mL生理盐水，得到第一梯度稀释液，吸取1mL第一梯度稀释液于9mL生理盐水，得到第二梯度稀释液，以此类推，共配制5个梯度稀释液；
(2)涂布培养：分别吸取100μL上述所有梯度稀释液分别置于MRS固定培养基上，涂布后至于37℃厌氧条件下培养48h，得到稀释涂布平板；
(3)纯化培养：挑取固体培养基上边缘整齐，微白，不透明，表面湿润光滑，且形态一致的纯的单菌落接种于5mL液体MRS选择性培养基中，至于37℃厌氧条件下培养24h，得到纯化培养液。
4、菌种保藏与鉴定
将步骤3获得的长势最好的纯化培养液8000r/min离心10min，弃上清得菌体。用细菌16S rDNA PCR特异性引物(见表1)进行PCR，PCR产物经核酸电泳分析确认后，扩增产物送至公司进行测序，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，测序结果与NCBI数据库中序列进行比对分析；结果显示与长双歧杆菌的核酸序列相似度高达99.59％，将其命名为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008。
表1引物名称
Figure BDA0003325793060000091
实施例2：长双歧杆菌NSP008对高脂饮食的胰岛素抵抗小鼠体重、体脂和饮食的影响
具体步骤如下：
1、长双歧杆菌NSP008冻存剂的制备：
(1)培养方法：在无菌厌氧环境中，将长双歧杆菌NSP008菌种在MRS固体培养基上划线，在厌氧条件下培养48h，形成单菌落后，挑取单菌落，并将其接种至MRS液体培养基，在37℃下厌氧培养16-24h，达到稳定期，此时的OD值为：1.0～1.4，制备得到种子液。
(2)保护剂的制备：称取半胱氨酸盐酸盐1g/L，甘油200-300g/L，均匀溶解于蒸馏水中，115-121℃灭菌15-20min。
(3)冷冻剂的制备：将步骤(1)培养至稳定期的长双歧杆菌NSP008种子液离心(8000rpm，10min，4℃)后，用无菌的磷酸盐缓冲液(pH 7.2)清洗1-2次后，用步骤(2)制备的保护剂重悬菌液，即得长双歧杆菌NSP008冻存剂，于-80℃保存备用。
2、长双歧杆菌NSP008菌剂的制备：
(1)活化菌株：将步骤1制备得到的长双歧杆菌NSP008冻存剂在MRS固体培养基上划线，在厌氧条件下培养48h，形成单菌落后，将单菌接种至MRS液体培养基，在37℃下厌氧培养16-24h，达到稳定期(OD值为：1.0-1.4)。
(2)菌剂的制备：取100μL不同稀释倍数的步骤(1)获得的培养液涂布于MRS固体培养基，对MRS固体平板上的菌落数进行计数，计算步骤(1)液体培养基中的活菌数。用无菌磷酸盐缓冲液(pH 7.2)清洗1-2次后，将菌液制备成浓度为1×1010CFU/mL的制剂，灌胃体积为0.1mL。
3、实验方法：
本发明采用高脂饲料喂养的方法诱导小鼠产生胰岛素抵抗。6周龄健康雌性C57BL/6J小鼠32只，随机分为四组(每组8只)：正常组(为描述方便，以N表示)、高脂饮食胰岛素抵抗组(模型组，以M表示)、高脂饮食+二甲双胍组(治疗组，以Met表示)、高脂饮食+长双歧杆菌NSP008组(长双歧杆菌组，以B表示)。
二甲双胍制剂的制备：将20mg二甲双胍添加至1mL无菌蒸馏水中，配制成浓度为20mg/mL的二甲双胍制剂，灌胃剂量为200mg/kg/天，现配现用。
实验流程如表3所示，经一周适应期后；
正常组(N)：第0～10周饲喂正常饲料并自由饮水，第11～15周继续饲喂正常饲料，每天灌胃一次0.1mL无菌磷酸盐缓冲液，自由饮水；
造模过程：第0～10周分别给予模型组(M)、治疗组(Met)、长双歧杆菌组(B)高脂饲料喂养。经过10周的高脂饮食，测定各高脂饮食组小鼠空腹血糖、空腹血清胰岛素水平并计算口服葡萄糖耐受量曲线下面积和胰岛素敏感指数，结果显示，上述指标高脂饮食组小鼠均显著高于正常组小鼠，认为高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠模型造模成功(每组10只)；具体指标如表2所示：
表2高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠模型造模成功指标
Figure BDA0003325793060000101
Figure BDA0003325793060000111
干预治疗实验过程：
模型组(M)：干预期间(第11～15周)继续饲喂高脂饲料，每天灌胃一次0.1mL无菌磷酸盐缓冲液，自由饮水；
治疗组(Met)：干预期间(第11～15周)继续饲喂高脂饲料，每天灌胃一次0.1mL二甲双胍水溶液(200mg/kg体重/day)，自由饮水；
长双歧杆菌组(B)：干预期间(第11～15周)继续饲喂高脂饲料，每天灌胃一次0.1mL长双歧杆菌NSP008菌液(菌浓度为1×1010CFU/mL)，自由饮水；
第0～15周，实验期间各组小鼠自由饮食饮水，每3日监测记录各组小鼠的状态。
第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死。从小鼠眼眶取血，收集血液，3000rpm离心15min，获得的小鼠血清。血清、附睾脂肪和肝脏保存于-80℃用于后续分析。
表3实验流程
Figure BDA0003325793060000112
4、长双歧杆菌NSP008对高脂饮食的胰岛素抵抗小鼠体重、体脂和饮食的影响
具体实验过程同步骤1～3，区别在于，在经过10周高脂诱导后，每3天对各组小鼠称重；干预5周后，将小鼠麻醉后处死。
一、长双歧杆菌NSP008对高脂饮食的胰岛素抵抗小鼠体重和饮食的影响
(1)实验结果如图1所示，在治疗前模型组(M)和治疗组(Met)、长双歧杆菌组(B)小鼠体重之间无显著差异(p>0.05)，经过5周的干预治疗后，各组小鼠体重趋势如图1A所示：与模型组(M)相比，长双歧杆菌组(B)小鼠体重增长得到了抑制，B组小鼠体重显著性降低(p<0.001)；结果显示，经过长双歧杆菌NSP008的干预，长双歧杆菌组(B)小鼠体重介于正常组(N)和模型组(M)之间。
如图1B所示，第15周实验结束后各组小鼠体重直观地反映了各组小鼠经过治疗后体重的差异情况：模型组(M)小鼠体重为40.98g，经过阳性药二甲双胍治疗后小鼠体重为35.88g；经过长双歧杆菌NSP008的治疗小鼠体重为33.79g，与模型组(M)相比，经过长双歧杆菌NSP008的治疗小鼠体重极显著降低(p<0.001)。长双歧杆菌NSP008对小鼠的减重效果比阳性药二甲双胍治疗效果更好。
(2)干预期间(第11～15周)小鼠饮食变化如表4所示，与正常小鼠相比，高脂饮食小鼠饮食量相对较少，可能是高脂饲料口味不受小鼠喜爱或是高脂饲料能量过高，导致高脂饮食小鼠摄食量比正常饲料饮食小鼠更低。但尽管如此，直至灌胃开始时高脂饮食小鼠体重仍然显著高于正常组小鼠(p<0.01，如图1A所示)。
从二甲双胍，长双歧杆菌NSP008灌胃治疗的第15天起，各高脂饮食组小鼠摄食量之间没有显著性差异(p>0.05)，说明二甲双胍、长双歧杆菌NSP008对小鼠体重的影响并不是通过影响小鼠摄食量而引起的。
表4干预期间(第11～15周)各组小鼠饲料摄入量(g/天/小鼠)
Figure BDA0003325793060000121
以上结果表明，本发明长双歧杆菌NSP008能够抑制高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠体重的增加，并且这种对体重的控制不是通过减少小鼠的摄食量来引起的。
二、长双歧杆菌NSP008对高脂饮食的胰岛素抵抗小鼠体脂的影响
对处死后的小鼠的附睾脂肪进行称重，小鼠的附睾脂肪重量可用于衡量动物的肥胖程度；结果如图1C。结果显示，模型组(M)小鼠附睾脂肪重量(2.45g)极显著高于正常组(N)(p<0.0001)，说明高脂饮食的模型组(M)小鼠体内脂肪明显蓄积；
而经过长双歧杆菌NSP008的干预后，长双歧杆菌组(B)小鼠附睾脂肪重量为1.46g，模型组(M)小鼠附睾脂肪重量为2.45g。经过长双歧杆菌NSP008的干预，小鼠附睾脂肪重量与模型组(M)相比显著减低(p<0.0001)，降低了40.4％。
将附睾脂肪进行染色后，结果如图4I所示，结果显示，正常组(N)小鼠附睾脂肪细胞大小均匀，排列整齐紧密，整体细胞大小相当，细胞边界十分清晰；而模型组(M)小鼠组织中脂肪细胞增生明显，细胞大小不均匀，绝大多数细胞体积变大，排列也不规则；而长双歧NSP008的能有效抑制脂肪细胞体积的增加。
可见，长双歧杆菌NSP008的干预能有效控制附睾脂肪细胞体积和数量。因此，长双歧杆菌NSP008的干预能显著抑制因高脂饮食导致的胰岛素抵抗小鼠体重和体脂的上升，并且对胰岛素抵抗小鼠体重的控制效果优于阳性药二甲双胍。
实施例3：长双歧杆菌NSP008对高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠葡萄糖耐量的影响
具体步骤如下：
具体实验方法同实施例2，区别在于，在第14周结束时，对各组小鼠进行口服葡萄糖耐量测试(OGTT)，第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死。结果如图2A～B所示。
结果显示，如图2A和表5所示，灌胃葡萄糖溶液后各组小鼠血糖均快速升高，在灌胃后的30min时，模型组(M)小鼠血糖(17.16mmol/L)升高的程度明显大于正常组(N)(9.51mmol/L)、治疗(Met)(11.21mmol/L)和长双歧杆菌组(B)(13.26mmol/L)。
如图2B所示，用OGTT的曲线下面积(AUC)评价各组小鼠对血糖的调节能力，模型组(M)的OGTT的曲线下面积(24.88)明显高于正常组(N)的OGTT的曲线下面积(16.03)(p<0.0001)，这反映了M组小鼠的胰岛素抵抗程度；
治疗组(Met)和长双歧杆菌组(B)小鼠AUC水平(分别是19.56和20.88)，与M组相比均有不同程度的下降(图2B)。与模型组(M)相比，长双歧杆菌NSP008的干预显著降低了胰岛素抵抗小鼠的AUC值(p<0.01)，接近于治疗组。
以上结果表明，本发明长双歧杆菌NSP008能够提高胰岛素抵抗小鼠的葡萄糖耐量，并恢复小鼠对血糖的调节能力。
表5各组小鼠进行口服葡萄糖耐量测试(OGTT)结果
Figure BDA0003325793060000131
Figure BDA0003325793060000141
实施例4：长双歧杆菌NSP008对高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠空腹血糖、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数的影响
具体步骤如下：
具体实验方法同实施例2，区别在于，在第14周结束时，对各组小鼠进行空腹血糖(FBG)的测定，第15周实验结束后，将小鼠麻醉后处死；处死小鼠后测定各组小鼠血清中胰岛素水平，并通过FBG和血清胰岛素水平计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果如图3A～3C所示。
结果显示，如图3A所示，模型组(M)血清FBG水平(9.98mmol/L)显著高于正常组(N)(6.59mmol/L)(p<0.0001)；经过长双歧杆菌NSP008的干预，长双歧杆菌组(B)小鼠血糖为8.55mmol/L，与M组相比显著降低(p<0.05)。
如图3B所示，模型组(M)小鼠血清胰岛素水平(1.84ng/mL)显著高于正常组(N)(0.44ng/mL)(p<0.0001)，表明模型组(M)小鼠存在明显的胰岛素抵抗。经过长双歧杆菌NSP008的干预，与模型组(M)相比，长双歧杆菌组(B)小鼠血清胰岛素水平(1.13ng/mL)显著降低(p<0.05)。
如图3C所示，胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)可以反映各组小鼠的胰岛素抵抗程度，长双歧杆菌组(B)小鼠胰岛素HOMA-IR(10.92)明显低于M组(19.53)，降低了44.09％。
以上结果表明，本发明长双歧杆菌NSP008在能够降低胰岛素抵抗小鼠血糖、血清胰岛素水平，减小HOMA-IR，改善由高脂饮食引起的胰岛素抵抗小鼠的糖代谢紊乱。
实施例5：长双歧杆菌NSP008对高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠肝脏损伤的影响
具体实验方法同实施例2，在实验结束(第15周)后收集小鼠血清，测定小鼠血清中ALT和AST水平；对小鼠肝脏进行称量、拍照、染色，观察各组小鼠肝脏的形态学变化。采用试剂盒测定肝脏组织中甘油三酯(TG)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；结果如图4所示。
如图4A～4B所示，高脂饮食引起的胰岛素抵抗升高了模型组(M)小鼠血清中ALT，AST水平(分别是68.29U/L和196.90U/L)，经长双歧杆菌NSP008干预后，与模型组(M)相比，长双歧杆菌组(B)小鼠血清ALT和AST水平(分别是29.66U/L和133.80U/L)，分别降低了56.6％和32.0％。
如图4C所示，模型组(M)小鼠肝脏TG水平最高，为1.31mmol/gprot，长双歧杆菌组(B)小鼠肝脏TG水平为0.74mmol/gprot。与模型组(M)相比，长双歧杆菌NSP008干预后极显著降低了胰岛素抵抗小鼠肝脏TG水平(p<0.001)，降低了43.5％。
如图4D所示，促炎因子TNF-α(肿瘤坏死因子α)在模型组(M)中含量高于正常组(N)及各个治疗组；经长双歧杆菌NSP008干预，与模型组(M)TNF-α水平(35.12ng/g)相比，长双歧杆菌组(B)组TNF-α水平(8.41ng/g)极显著降低(p<0.0001)，降低了76.1％。
如图4E所示，结果显示，与模型组(M)相比，正常组(N)和长双歧杆菌组(B)小鼠肝脏重量(分别是0.88g和0.84g)都极显著低于模型组(M)(1.14g)(p<0.01)，表明经长双歧杆菌NSP008干预，可以减少高脂饮食引起的小鼠肝脏重量增加。
如图4F～4H所示，正常组(N)小鼠肝脏颜色鲜艳，表面光滑；而模型组(M)小鼠肝脏暗淡，体积增大明显；从切片来看，模型组(M)肝脏存在明显的弥漫性脂肪变性(空泡化)和纤维化；经过长双歧杆菌NSP008的治疗，长双歧杆菌组(B)小鼠肝脏形态、大小及结构与模型组(M)相比得到明显的改善。
以上结果表明，本发明长双歧杆菌NSP008在能够减轻胰岛素抵抗小鼠肝脏重量，降低肝脏甘油三酯和炎症水平，改善肝脏组织结构形态，对缓解胰岛素抵抗小鼠的肝损伤有明显作用。
实施例6：长双歧杆菌NSP008对高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠肠道菌群的影响
具体实验方法同实施例2，在干预实验结束后(第15周)，收集各组小鼠粪便，粪便中肠道菌群组成进行测定。
本实验分析比较了各组小鼠肠道菌的Chao1指数和OTU值以评价各组微生物群落的α多样性。Chao1指数越高，表明样本中物种丰富度越高；OTU值越高，表明样本中物种数越高。
实验结果如图5A～5B所示，长双歧杆菌组(B)小鼠的Chao1指数和OTU值高于模型组(M)，说明经过长双歧杆菌NSP008的干预，可以增加胰岛素抵抗小鼠的肠道菌物种丰富度和物种数。
如图5C所示，模型组(M)与正常组(N)小鼠的肠道菌群在β多样性上存在明显差异，长双歧杆菌NSP008的干预使小鼠肠道菌群β多样性发生了一定的变化。
对本实验中各组小鼠肠道菌群门及属水平上所匹配的微生物进行比较，实验结果如表6～7所示，在门水平上，正常组中拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度最高，其次是厚壁菌门(Firmicutes)，而各高脂饮食组小鼠肠道中相对丰度最高的是厚壁菌门。
表6各组小鼠肠道菌门水平上所匹配的微生物的相对丰度(％)
Figure BDA0003325793060000161
表7各组小鼠肠道菌属水平上所匹配的微生物的相对丰度(％)
Figure BDA0003325793060000162
结果显示，在属水平上，高脂饮食的模型组(M)小鼠优势菌属为瘤胃球菌属(Ruminococcus)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)等，表明高脂饮食改变了小鼠肠道菌属结构。
在属水平上比较了6组经过长双歧杆菌NSP008治疗后丰度明显变化的肠道菌属(结果如图6所示)。长双歧杆菌NSP008治疗后部分肠道菌属的相对丰度增加：
如图6A所示，模型组(M)小鼠肠道异杆菌属(Allobaculum)相对丰度为7.80％，长双歧杆菌组(B)小鼠相对丰度为27.92％，比模型组(M)高接近4倍；
如图6F所示，模型组(M)小鼠肠道双歧杆菌属(Bifidobacterium)几乎未检出，长双歧杆菌组(B)小鼠肠道双歧杆菌属相对丰度(0.60％)极显著高于模型组(M)(p<0.0001)；
如图6C～6D所示，乳球菌属(Lactococcus)和乳杆菌属(Lactobacillus)作为公认的益生菌，在长双歧杆菌组(B)小鼠肠道中相对丰度分别是7.00％和6.61％，显著高于其在模型组(M)中的相对丰度(分别是1.55％和1.23％)。
如图6B和图6E所示，治疗后部分肠道菌属丰度降低：长双歧杆菌组(B)小鼠肠道拟杆菌属(Bacteroides)和瘤胃球菌属(Ruminococcus)的相对丰度分别是和1.81％和1.42％，在模型组(M)中相对丰度分别为6.24％和3.32％，与模型组(M)相比，经过长双歧杆菌NSP008治疗拟杆菌属和瘤胃球菌属肠道菌的相对丰度显著降低(p<0.05)。
以上结果表明，本发明长双歧杆菌NSP008能够改善胰岛素抵抗小鼠肠道菌群结构，增加肠道益生菌，如：双歧杆菌、乳球菌和乳杆菌的丰度。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 南昌大学
<120> 一种缓解胰岛素抵抗的长双歧杆菌及其应用
<130> BAA211351A
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ccacaagggg ttaggccacc ggcttcgggt gctgcccact ttcatgactt gacgggcggt 60
gtgtacaagg cccgggaacg cattcaccgc gacgttgctg attcgcgatt actagcgact 120
ccgccttcac gcagtcgagt tgcagactgc gatccgaact gagaccggtt ttcaggaatc 180
cgctccgcgt cgccgcgtcg catcccgttg taccggccat tgtagcatgc gtgaagccct 240
ggacgtaagg ggcatgatga tctgacgtca tccccacctt cctccgagtt aaccccggcg 300
gtcccccgtg agttcccggc ataatccgct ggcaacacgg ggcgagggtt gcgctcgttg 360
cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgacg accatgcacc acctgtgaac 420
ccgccccgaa gggaagccgt atctctacga ccgtcgggaa catgtcaagc ccaggtaagg 480
ttcttcgcgt tgcatcgaat taatccgcat gctccgccgc ttgtgcgggc ccccgtcaat 540
ttctttgagt tttagccttg cggccgtact ccccaggcgg gatgcttaac gcgttagctc 600
cgacacggaa cccgtggaac gggccccaca tccagcatcc accgtttacg gcgtggacta 660
ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc ctcagcgtca gtaacggacc 720
agagac 726

Claims (10)

1.一株长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NSP008，已于2021年8月25日保藏于广东省科学院微生物研究所，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No:61889。
2.一种微生物菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的长双歧杆菌。
3.如权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中，长双歧杆菌NSP008的活菌数不低于1×1010CFU/mL或1×1010CFU/g。
4.一种产品，其特征在于，所述产品中含有权利要求1所述的长双歧杆菌。
5.如权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品中，长双歧杆菌的活菌数不低于1×1010CFU/mL或1×1010CFU/g。
6.如权利要求4或5所述的产品，其特征在于，所述产品为食品、药品或保健品。
7.如权利要求6所述的产品，其特征在于，所述食品包括饮料、奶制品或其他含有权利要求1所述的长双歧杆菌的食品。
8.如权利要求6所述的产品，其特征在于，所述药品包含长双歧杆菌，还含有药物载体和/或药用辅料。
9.权利要求1所述的长双歧杆菌，或权利要求2或3所述的微生物菌剂在制备预防和/或治疗胰岛素抵抗的产品中的应用。
10.如权利要求9所述的产品，其特征在于，所述产品为药品或保健品。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN114381390A (zh) * 2021-12-20 2022-04-22 美益添生物医药(武汉)有限公司 长双歧杆菌me-875及其应用
CN114933994A (zh) * 2022-06-02 2022-08-23 南昌大学 具有缓解溃疡性结肠炎功能的组合物及其应用
CN115227724A (zh) * 2022-09-21 2022-10-25 首都医科大学附属北京友谊医院 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109576176A (zh) * 2018-12-07 2019-04-05 江苏靶标生物医药研究所有限公司 一种纳米硒长双歧杆菌及其制备方法和应用
CN110638840A (zh) * 2018-06-26 2020-01-03 上海立龙生物科技有限公司 一种缓解术后胰岛素抵抗的组合物
CN113018319A (zh) * 2021-01-21 2021-06-25 中南大学 一种用于缓解因长期低剂量辐射暴露所致胰岛素抵抗的复合菌剂及其应用
CN113234640A (zh) * 2021-06-21 2021-08-10 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mf-269及其应用
CN113293113A (zh) * 2021-06-21 2021-08-24 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mi-186及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110638840A (zh) * 2018-06-26 2020-01-03 上海立龙生物科技有限公司 一种缓解术后胰岛素抵抗的组合物
CN109576176A (zh) * 2018-12-07 2019-04-05 江苏靶标生物医药研究所有限公司 一种纳米硒长双歧杆菌及其制备方法和应用
CN113018319A (zh) * 2021-01-21 2021-06-25 中南大学 一种用于缓解因长期低剂量辐射暴露所致胰岛素抵抗的复合菌剂及其应用
CN113234640A (zh) * 2021-06-21 2021-08-10 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mf-269及其应用
CN113293113A (zh) * 2021-06-21 2021-08-24 美益添生物医药(武汉)有限公司 一株长双歧杆菌mi-186及其应用

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114381390A (zh) * 2021-12-20 2022-04-22 美益添生物医药(武汉)有限公司 长双歧杆菌me-875及其应用
CN114381390B (zh) * 2021-12-20 2023-11-17 美益添生物医药(武汉)有限公司 长双歧杆菌me-875及其应用
CN114933994A (zh) * 2022-06-02 2022-08-23 南昌大学 具有缓解溃疡性结肠炎功能的组合物及其应用
CN114933994B (zh) * 2022-06-02 2023-12-12 南昌大学 具有缓解溃疡性结肠炎功能的组合物及其应用
CN115227724A (zh) * 2022-09-21 2022-10-25 首都医科大学附属北京友谊医院 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用
CN115227724B (zh) * 2022-09-21 2023-03-24 首都医科大学附属北京友谊医院 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用
WO2024060698A1 (zh) * 2022-09-21 2024-03-28 首都医科大学附属北京友谊医院 缓慢葡萄球菌在制备组合物中的应用

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