CN115226718A

CN115226718A - 一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN115226718A
Application number: CN202210519612.6A
Authority: CN
Inventors: 沈运河; 熊国银; 祝玉超; 余正莲; 张腾飞
Original assignee: Anhui Jiuyi Agriculture Co ltd
Current assignee: Anhui Jiuyi Agriculture Co ltd
Priority date: 2022-05-13
Filing date: 2022-05-13
Publication date: 2022-10-25

Abstract

本发明涉及一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用，属于农药技术领域，所述杀菌组合物的剂型为可分散油悬浮剂，所述杀菌组合物的组分包括枯草芽孢杆菌1‑60％、丙硫菌唑1‑60％、乳化剂5‑20％、增稠剂1‑5％、载体1‑10％，其余为油性分散介质。本发明提供一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用，杀菌剂与有益微生物可以在可分散油悬浮剂中共存，由于两者发挥作用机理存在时间差，可以延长共存体系对作物的保护时间，减少用药次数，降低用药成本，减轻环境承载压力，提高作物品质和产量。

Description

一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于农药技术领域，具体涉及一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用。

背景技术

伴随着国内作物高产的持续压力，作物种植强度以及复种指数增高成为了中国农业种植的主要特点。针对土地透支的困境，微生物肥料和制剂成为这一问题的有效解决方案，但纯有益微生物制剂的短板——如定植需要特殊环境和一定时间(7-15d)，以及治疗效果与效率与化学农药相比也有一定差距等，也客观的反映出来。

枯草芽孢杆菌，是一种产芽孢杆状细菌，其特点为：好氧以及嗜温，分布广泛，极易分离培养。该菌在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和霉，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆性能力。枯草芽孢杆菌通过定植在植物根际、体表或体内，与病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御体系抵御病原菌入侵，从而达到生物防治的目的。

丙硫菌唑作为拜耳作物科学公司发现、开发并生产的三唑硫酮类杀菌剂，在近几年以来，已经成为全球领先杀菌剂中的第三大产品，谷物用杀菌剂的第一大产品，大豆用杀菌剂的第四大产品。

基于上述内容，提出一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，所述杀菌组合物的剂型为可分散油悬浮剂，所述杀菌组合物的组分包括枯草芽孢杆菌1-60％、丙硫菌唑1-60％、乳化剂5-20％、增稠剂1-5％、载体1-10％，其余为油性分散介质。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌5-25％、丙硫菌唑10-20％。

进一步地，所述杀菌组合物的组分包括枯草芽孢杆菌15％、丙硫菌唑 15.5％、乳化剂10％、增稠剂1.2％、载体3％，其余为油性分散介质。

进一步地，所述载体或填料为气相白炭黑、白炭黑、高岭土、硅藻土、膨润土、玉米淀粉、轻质碳酸钙中的一种或多种。

进一步地，所述乳化剂为农乳602、农乳505或两者混合物。

进一步地，所述增稠剂为有机膨润土、白炭黑、黄原胶、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、甲基纤维素、硅酸铝镁、改性聚乙烯蜡中一种或多种。

进一步地，所述的油性分散介质为二甲苯、生物柴油、机油、甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、松脂基植物油代号为ND-45、溶剂油S-150、溶剂油S-200、二甲基甲酰胺、油酸甲酯代号1192、大豆油中的至少一种。

本发明还提供了一种上述含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向混合釜内加入丙硫菌唑原药、枯草芽孢杆菌、乳化剂、增稠剂、载体、油性分散介质，在高剪切搅拌下，使物料充分混合均匀；

(2)将混合物料打入砂磨机中研磨，砂磨1-2h，即获得所述杀菌组合物的可分散油悬浮剂。

本发明还提供了一种上述含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物在提高小麦产量中的应用。

进一步地，利用所述杀菌组合物作为小麦用药，在小麦始花期进行第一遍用药，在小麦灌浆期进行第二遍用药。

本发明的有益效果在于：本发明提供一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物及其制备方法和应用，在丙硫菌唑的特殊剂型下，枯草芽孢杆菌孢子可以稳定存活模型；并在进行作物处理后，枯草芽孢杆菌孢子仍能在施用作物植株上有效定值的模型，从而达到增长丙硫菌唑保护时间，减少用药次数，降低用药成本，减轻环境承载压力，提高作物品质和产量的目的。

具体实施方式

下面对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。

一、材料

本发明所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。

二、方法

1、选择不同组份的原料，具体如表1所示，并按照下述制备方法制备含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物：

(1)向混合釜内加入丙硫菌唑原药、枯草芽孢杆菌、乳化剂农乳602、乳化剂农乳505、增稠剂有机土SK-04、载体白炭黑、油性分散介质油酸甲酯1192，在高剪切搅拌下，使物料充分混合均匀；

表1原料组份表

对1-5制备而成的杀菌组合物的杀菌效果以及热稳定性行测定，结果如表2所示：

表2 1-5杀菌组合物性能参数

项目	杀菌效果	热稳定性
			1	2.9	15.4
2	3.1	15.3
			3	4.9	15.4
4	5.0	15.2
			5	5.0	15.1

通过上表可以看出，枯草芽孢杆菌含量加到15％时即可达到最优杀菌效果，因此选用项目3作为最优配比。

2、选用最优配比3中除油性分散介质外的其它组分的用量，测试不同种类油性分散介质(松脂基植物油代号为ND-45、溶剂油S-150、油酸甲酯代号1192、大豆油)对杀菌组合物的影响，并按照下述制备方法制备含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物：

向混合釜内加入丙硫菌唑原药15.5％、枯草芽孢杆菌15％、乳化剂505 5.5％、6024.5％、增稠剂有机土SK-04 1.2％、载体白炭黑3％、油性分散介质(松脂基植物油代号为ND-45、溶剂油S-150、油酸甲酯代号1192、大豆油)补至100％，在高剪切搅拌下，使物料充分混合均匀；将混合物料打入砂磨机中研磨，砂磨1-2h，即获得所述杀菌组合物的可分散油悬浮剂。

分别对制备而成的杀菌组合物进行杀菌效果以及热稳定性进行测定，结果如表3所示：

表3 1-3杀菌组合物性能参数

通过上表可看出实施例1的杀菌效果以及热稳定性最好，实施例5、6、 7的杀菌效果以及热稳定性都不理想。

3、将最优配比15.5％丙硫菌唑+15％枯草芽孢杆菌以及最佳的油性分散介质油酸甲酯1192按照实施例1制备方法制备而成的杀菌组合物分为3 份：

Ⅰ、15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂500ml实验室新制

Ⅱ、15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂500ml 15天热贮后样品；

Ⅲ、15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂500ml 15天低温冷贮样品。

自制基础培养基(牛肉膏3g、蛋白陈10g、琼脂16g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml、调至PH7.2，121℃灭菌30min)。

分别从Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种样品中精确争取10.00试样，分别加入已灭菌的带玻璃珠(玻璃珠在80个左右)的500ml锥形瓶中，加入90ml已灭菌的无菌水，在摇床200r/min摇动60min，即成母液的菌悬液。

用1ml无菌吸管吸取上述母液的菌悬液，加入9ml无菌水混匀成1：1× 102稀释的菌悬液，这样依次稀释，直到得到1：106；1:107；1：108；1： 109等浓度(每个浓度次序更换无菌吸管)向每个灭菌培养平皿倒入12ml 培养基，混合均匀，戴凝固后备用。

用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液0.2ml，加至已凝固好的培养基中，用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置30min后，倒置于37℃的恒温培养箱内培养18h-24h。每个样品取3个连续适宜稀释浓度，每个稀释浓度重复3次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取5个到10个菌落的菌体，图片染色，显微镜观察识别后计数菌落。

菌落计数：以平板上出现20个-200个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。当只有一个稀释度，其平均菌落数在20个-200个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。若有两个稀释度，其平均菌落数在20 个-200个之间时，应按两者菌落数之比值来决定。

结果统计与计算：根据菌落数特征判定，分别数出平板中的枯草芽孢杆菌菌落数及杂菌落数(杂菌是指除枯草芽孢杆菌外的其他菌种)。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数和杂菌率。

有效活菌总数按下式计算：

A＝10×B×C×5

式中：A---有效活菌总数，cfu/g；B---菌落活菌数；C---稀释倍数；

杂菌率按下式计算：

D＝E/(E+A)×100％

式中：D---杂菌率，％；E---杂菌落数；

平板计数法检测中，每个样品3个连续的稀释成梯度时，选一个适宜稀释浓度(菌数在20～200个之间的平板计数)，同一稀释度的重复平板上菌落允许差按下列公式计算，并应符合下列公式的规定，见表4。

式中：

SD(σn-1)—第一标准差；

x—同一稀释度任一个平板测定值；

—同一稀释平板测定的平均值；

n—同一稀释平板重复次数；

表4活菌测定原始数据

表5活菌含量统计

根据上述数据分析15.5％丙硫菌唑.枯草芽孢杆菌OD新制与冷热储后的活菌含量变化在±0.1亿/克之间，可以基本确认冷热储对活菌含量的影响不大，符合两年正常保质期的稳定要求。

4、应用

小麦赤霉病是由禾谷镰刀菌引起的真菌性病害，也是我国小麦生产中的主要病害，在不同的国家地区其分布和危害有所不同。小麦赤霉病流行年份，病穗率达30％-50％，减产5％-15％，严重时病穗率甚至可达50％-100％, 减产10％-40％，并造成小麦食用品质急剧下降。

通常的化学防治过程中一般推广的技术为：在小麦齐穗至初花期 (5％-10％)用药防治一遍，间隔10天左右，处理第二遍保证防治效果。

采用不同的杀菌组合物，具体如表6所示，使用6个药剂分别用药1次和 2次对试验田进行处理，试验田设置12个处理和空白对照，如表7所示，以 180g/亩的用量分别使用6个药剂对试验田进行喷洒。试验在安徽省淮南市凤台县朱马店镇进行；供试小麦品种为烟农12号；播种方式为机播；其他按常规栽培进行，试验面积设置为667m²，中间设对照隔离带。

表6不同剂型杀菌组合物

15.5％丙硫菌唑可湿性粉剂	①	180g/亩
			15.5％丙硫菌唑.枯草芽孢杆菌可湿性粉剂	②	180g/亩
15.5％丙硫菌唑水分散颗粒剂	③	180g/亩
			15.5％丙硫菌唑.枯草芽孢杆菌水分散颗粒剂	④	180g/亩
15.5％丙硫菌唑可分散油悬浮剂	⑤	180g/亩
			15.5％丙硫菌唑.枯草芽孢杆菌可分散油悬浮剂	⑥	180g/亩

其中，可湿性粉剂的原料组分包括：湿润剂K₁₂1-5份；分散剂NNO1-10 份；载体白炭黑1-10；填料高岭土补足100％。该可湿性粉剂的具体生产步骤为：按上述配方将有效成分枯草芽孢杆菌或丙硫菌唑以及分散剂、润湿剂、载体和填料混合，在搅拌釜中充分混合粉碎后，搅拌均匀，经气流粉碎机粉碎后在混合均匀，即可制成丙硫菌唑或丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌的可湿性粉剂。

水分散粒剂的原料组分包括：湿润剂烷基酯钠盐YUS-LXC 1-10份；分散剂聚羧酸盐2700 4-10份；助分散剂萘磺酸盐2020 5-10份；崩解剂尿素1-5 份；载体白炭黑1-10份，填料高岭土补足100％。该水分散粒剂的具体生产步骤为：按上述配方将有效成分枯草芽孢杆菌或丙硫菌唑和分散剂、润湿剂、崩解剂以及填料混合均匀，在搅拌釜中充分混合粉碎后，搅拌均匀，经气流粉碎机粉碎后在混合均匀，然后在挤压机上进行造粒，最后在沸腾干燥机上干燥，筛分后经取样分析，即可制成丙硫菌唑或丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌的水分散粒剂。

表7

A：一遍用药：小麦始花期，即4月27日；

B：二遍用药：小麦始花期，即4月27日；第二遍用药小麦灌浆期，即5 月2日。

于小麦赤霉病显病期间调查小麦赤霉病发生情况，时间为5月24日。于小麦收获前(5月30日)取样测产。

赤霉病防除调查：每处理区随机取3点，每点0.25m²，以枯穗面积占整个面积的百分率来分级，记录各级病穗数和总病穗。

0级：全穗无病

1级：枯穗面积占全穗面积的25％以下；

2级：枯穗面积占全穗面积的25％～50％以下；

3级：枯穗面积占全穗面积的50％～75％以下；

5级：枯穗面积占全穗面积的50％～75％；

7级：枯穗面积占全穗面积的75％以上。

药效计算方法：

病穗率％＝病穗数/调查总穗数×100％

病情指数＝Σ(各级病穗数×相对级数值)/调查总穗数×7

防治效果(％)＝(空白对照区病情指数-药剂处理区病情指数)/空白对照区病情指数×100％

小麦收获前每个处理随机取3点，每点0.25m²，调查总穗数，同时每点取20穗，共计60穗，带回室内调查穗粒数，称取千粒重，计算亩产量。

产量计算：实测产量(kg/亩)＝有效穗/亩×总粒数/穗×千粒重×10^-6×85％增产率＝(药剂处理区产量-空白对照区产量)/空白对照区产量×100％

表8对小麦赤霉病试验结果(2020年)

表9对小麦产量的影响结果(2020)

从对小麦赤霉病的防效来看，丙硫菌唑作为小麦赤霉病防治家族的新成员，其总体表现优异。15.5％丙硫菌唑处理，一遍防效为83.82％，两遍防效可以达到95.79％；15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌处理，一遍防效为91.91％, 两遍防效与单剂两遍防效基本相同。都可以达到实际生产对于防效的要求。从统计数据上也可以验证，丙硫菌唑与枯草芽孢杆菌共存体系在对小麦赤霉病防效上有模型中药效延长现象。

从对小麦品质和产量的影响来看，通过表9分析：

通过田间直观表现来看，丙硫菌唑防治区小麦色泽鲜亮，小麦落黄性好，其处理后的增产幅度为：15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌处理2遍＞ 15.5％丙硫菌唑处理2遍＞15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌处理1遍＞15.5％丙硫菌唑处理1遍。

上述结论也验证了模型中丙硫菌唑与枯草芽孢杆菌共存体系对小麦品质提升可观察；小麦增产为丙硫菌唑与枯草芽孢杆菌共同作用。

综合考虑用药成本，劳动强度以及后期抗药性管理和环境承载压力等因素，15.5％丙硫菌唑-枯草芽孢杆菌于小麦始花期180g/亩一遍处理，就可以达到实际生产所需的防除效果。

上述两部分试验，为本模型提供了有力的试验依据，即有益微生物与化合物在可分散油悬浮剂中可以建立共存体系，并能形成类似药效接力的长效作用机制，达到提高作物品质和产量的目的。这种存在于化学农药和生物农药之间的共存体系，暂不能完全定性。

根据上述描述，我们把这种共存体系的模型初步整理如下：

杀菌剂与有益微生物可以在可分散油悬浮剂中共存，由于两者发挥作用机理存在时间差，可以延长共存体系对作物的保护时间，减少用药次数，降低用药成本，减轻环境承载压力，提高作物品质和产量。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物的剂型为可分散油悬浮剂，所述杀菌组合物的组分包括枯草芽孢杆菌1-60％、丙硫菌唑1-60％、乳化剂5-20％、增稠剂1-5％、载体1-10％，其余为油性分散介质。

2.根据权利要求1所述的一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌5-25％、丙硫菌唑10-20％。

3.根据权利要求1所述的一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物的组分包括枯草芽孢杆菌15％、丙硫菌唑15.5％、乳化剂10％、增稠剂1.2％、载体3％，其余为油性分散介质。

4.根据权利要求1所述的一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述载体或填料为气相白炭黑、沉淀白炭黑、高岭土、硅藻土、膨润土、玉米淀粉、轻质碳酸钙中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述乳化剂为农乳602、农乳505或两者混合物。

6.根据权利要求1所述的一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述增稠剂为有机膨润土、白炭黑、黄原胶、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、甲基纤维素、硅酸铝镁、改性聚乙烯蜡中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的一种含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物，其特征在于，所述的油性分散介质为二甲苯、生物柴油、机油、甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、松脂基植物油代号为ND-45、溶剂油S-150、溶剂油S-200、二甲基甲酰胺、油酸甲酯代号1192、大豆油中的至少一种。

8.一种如权利要求1-7任一所述含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.如权利要求1-7任一所述含有枯草芽孢杆菌与丙硫菌唑的杀菌组合物在提高小麦产量中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，利用所述杀菌组合物作为小麦用药，在小麦始花期进行第一遍用药，在小麦灌浆期进行第二遍用药。