CN115191641B - 一种具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法，包括如下步骤：选取雪茄烟叶表面优势微生物；培养该微生物；喷洒于烤烟烟叶发酵；将发酵液提取浓缩；将得到浓缩物浓缩得到烤烟浸膏；即为具有雪茄风味的烤烟提取物。本发明还公开了所述制备方法得到的具有雪茄风味的烤烟提取物用于烟草加香的用途。
Description
技术领域
本发明属于烟叶提取物技术领域，尤其涉及一种具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法及用途。
背景技术
烟叶发酵是改善烟草外观质量、物理特性、内在成分、吸食品质的重要工序，是烟叶生产过程中的核心步骤。氧化作用、微生物作用及酶作用是烟叶发酵的三大机理，且随着科技发展及研究的深入，发现微生物在烟叶发酵中起着重要作用，表现为微生物自身利用烟叶、微生物代谢产物作用于烟叶。
雪茄烟叶在采收后的调制过程中，烟叶内部和表面存在大量的微生物，微生物作用贯穿雪茄生产的全过程，微生物对改善雪茄烟叶品质具有十分重要的作用。雪茄的烟草香气浓烈、原始，没有任何化学添加物质与香料的味道，同时口感比较丰富，层次感明显，除烟草香以外，还富有果香、咖啡香、坚果香、奶香等丰富的香气特征。应用雪茄烟叶或雪茄烟叶表面微生物开展烤烟烟叶发酵，有助于改变烤烟烟叶发酵过程中微生物的种群、类型及数量，进而在一定程度上改变或丰富烤烟的香气特征。
为此提出本发明。
发明内容
本发明公开了一种具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法及用途。本发明的具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法，为首次筛选堆积发酵过程中变色阶段的雪茄烟叶表面优势微生物，并将雪茄烟叶表面优势微生物在雪茄烟叶培养基中进行富集，然后培养后接种到烤烟烟叶表面发酵制备得到烟草提取物，即为具有雪茄风味的烤烟提取物。得到的具有雪茄风味的烤烟提取物用于用于烟草加香效果明显。
本发明的技术方案如下：
本发明第一方面公开了一种具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)选取堆积发酵过程中变色阶段的雪茄原料，高压粉碎然后称取雪茄烟末样品放入盛有无菌生理盐水中，混合摇匀，制备出雪茄烟末悬液；然后稀释制成涂布液；
(2)用牛肉膏蛋白胨培养基进行雪茄烟叶表面微生物的筛选；使用步骤(1)的雪茄烟末悬液，在一定条件下培养一段时间后，将微生物菌株进行纯化分离，得到雪茄烟叶表面优势微生物；
(3)将得到的雪茄烟叶表面优势微生物点接至雪茄烟叶培养基中，在一定温度下培养一段时间；
(4)件步骤(3)得到的菌落稀释后得到雪茄菌液；
(5)将步骤(4)得到的雪茄菌液喷洒于烤烟烟叶上，在一定环境下发酵一段时间；
(6)将发酵后的烤烟烟叶粉碎后高温灭菌处理，然后加入水，混合均匀；在一定条件下发酵一段时间；然后将发酵液高温灭酶；然后使用第一溶剂提取多次，将提取液混合过滤后真空减压浓缩；
(7)将步骤(6)得到浓缩物冷却静置一段时间后，再用第二溶剂混合溶解，过滤后滤液再真空减压浓缩至浓缩物相对密度为1.3000±0.008、折光指数为1.4000±0.008结束，得到烤烟浸膏；即为具有雪茄风味的烤烟提取物。
优选地，步骤(1)的生理盐水为0.85wt％；涂布液为梯度稀释获得，浓度为原雪茄烟末悬液的1.0、10-1、10-2、10-3和10-4。
优选地，步骤(2)的雪茄烟叶表面微生物的筛选步骤为：将牛肉膏蛋白胨培养基制成无菌平板，待充分冷却凝固后，取步骤(1)的涂布液涂在平板表面，使菌液均匀分散在整个平板表面，在37±3℃下培养48-72h。
优选地，步骤(3)的雪茄烟叶培养基组成为：烟叶粉末10g和琼脂8g；将其在沸水中煮20min，然后在115℃高压灭菌30min。
优选地，步骤(4)菌落稀释采用0.85wt％的无菌生理盐水；稀释倍数为100倍。
优选地，步骤(5)雪茄菌液与烤烟烟叶的比例为1ml菌液洒于1kg烤烟烟叶上；发酵条件为在40℃环境中发酵15天。
优选地，步骤(6)高温灭菌处理温度为80-100℃；发酵的条件为：密封、37±3℃、pH值7.0±0.5、微氧，发酵30d；高温灭酶温度为60-80℃；提取液第一溶剂为80wt％酒精溶液，提取次数为三次以上。
优选地，步骤(7)所述第二溶剂为95wt％的酒精溶液。
本发明第二方面公开了所述的制备方法制备得到的具有雪茄风味的烤烟提取物用于烟草加香的用途。
优选地，将所述具有雪茄风味的烤烟提取物用75wt％酒精稀释后得到的稀释液喷洒到烟丝上。
本发明的有益效果：
本发明的具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法为首次筛选堆积发酵过程中变色阶段的雪茄烟叶表面优势微生物，并将雪茄烟叶表面优势微生物在雪茄烟叶培养基中进行富集，然后培养后接种到烤烟烟叶表面发酵制备得到烟草提取物，即为具有雪茄风味的烤烟提取物。得到的具有雪茄风味的烤烟提取物用于烟草加香效果明显。烟气风格特征较明显；烟气香韵以干草香、焦烤香为主，辅以烤甜、雪茄特征香气，香气较复合，香气量中等，浓度中等，香气质细腻柔绵，烟气蓬松流畅，刺激较小。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：具有雪茄风味的烤烟提取物的制备，步骤如下：
(1)将堆积发酵过程中变色(棕色)阶段的雪茄烟叶高压粉碎，称取雪茄烟末样品1g，放入盛有50ml的0.85wt％的无菌生理盐水的三角瓶中，置于37℃恒温摇床震荡60分钟充分摇匀，制备出雪茄外包皮烟末悬液；将得到的雪茄烟末悬液用无菌水梯度稀释，获得涂布液：浓度为原雪茄外包皮烟末悬液的1.0、10-1、10-2、10-3和10-4；
(2)将已熔化并冷却至50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入无菌培养皿中，制成无菌平板；待充分冷却凝固后，取步骤(1)的10-4涂布液1ml涂在平板表面，再用三角形无菌玻璃涂棒涂布，使菌液均匀分散在整个平板表面，倒置37℃温箱培养48h；根据培养48小时后的菌落形态，接种环将菌株划线至LB固体培养基中进行纯化分离，得到雪茄烟叶表面优势微生物；
(3)取高压粉碎的雪茄烟叶粉末10g和琼脂8g，将其在500ml沸水中煮20min，在自然pH值下115℃高压灭菌30min，得到雪茄烟叶培养基；将步骤(2)得到的雪茄烟叶表面优势微生物点接至充分冷却凝固的雪茄烟叶培养基中，设置3个平行样，每个平板点接3个菌落，倒置37℃温箱培养48h；
(4)挑取一定量的菌落加入10ml的0.85wt％的无菌生理盐水中，稀释100倍得到雪茄菌液；
(5)将1ml步骤(4)的雪茄菌液喷洒于1kg烤烟烟叶上，在40℃环境中发酵15天；
(6)将步骤(5)得到的发酵后的烤烟烟叶粉碎至20目的粗粒，加温至80℃作灭菌处理，搅拌均匀，冷却至40℃保温；加入1倍水，充分搅拌均匀；密封、恒温37℃、pH值7.0、微氧下发酵30d；将发酵液转入提取罐，加温至80℃灭酶；采用10倍重量比的80wt％酒精提取3次、提取温度60℃、每次提取时间2小时，将3次提取液混合用200目的滤网过滤，真空减压浓缩至浓缩物，冷却静置24小时；
(7)用6倍重量比的95wt％酒精醇沉24小时，用400目的滤网过滤，滤液真空减压浓缩至无水状态得到烤烟浸膏，烤烟浸膏的相对密度为1.3000±0.008、折光指数为1.4000±0.008；即为具有雪茄风味的烤烟提取物。
实施例2：将得到的具有雪茄风味的烤烟提取物用于烟草加香。
将实施例1得到的具有雪茄风味的烤烟提取物用75wt％酒精稀释后得到的稀释液喷洒到烟丝上，在室温下平衡2h，请专家评吸。并将空白(不含有具有雪茄风味的烤烟提取物)的烟丝为对照样进行对比，结果如下表：
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (4)
1.一种具有雪茄风味的烤烟提取物用于烟草加香的用途，其特征在于，所述具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法包括如下步骤：
（1）选取堆积发酵过程中变色阶段的雪茄原料，高压粉碎然后称取雪茄烟末样品放入盛有无菌生理盐水中，混合摇匀，制备出雪茄烟末悬液；然后稀释制成涂布液；
（2）用牛肉膏蛋白胨培养基进行雪茄烟叶表面微生物的筛选，雪茄烟叶表面微生物的筛选步骤为：将牛肉膏蛋白胨培养基制成无菌平板，待充分冷却凝固后，取步骤（1）的涂布液涂在平板表面，使菌液均匀分散在整个平板表面，在37±3℃下培养48-72h，根据培养后的菌落形态，接种环将菌株划线至LB固体培养基中进行纯化分离，得到雪茄烟叶表面优势微生物；
（3）将步骤（2）得到的雪茄烟叶表面优势微生物点接至雪茄烟叶培养基中，在一定温度下培养一段时间；其中，雪茄烟叶培养基组成为：烟叶粉末10g和琼脂8g，将其在沸水中煮20min，在自然pH值下115 ℃高压灭菌 30 min，得到雪茄烟叶培养基；
（4）将步骤（3）得到的菌落稀释后得到雪茄菌液；
（5）将步骤（4）得到的雪茄菌液喷洒于烤烟烟叶上，在一定环境下发酵一段时间；雪茄菌液与烤烟烟叶的比例为1ml菌液洒于1kg烤烟烟叶上；发酵条件为在40℃环境中发酵15天；
（6）将发酵后的烤烟烟叶粉碎后在80-100℃下灭菌处理，然后加入水，混合均匀，在密封、37±3℃、pH值7.0±0.5、微氧条件下发酵30d，将发酵液在60-80℃下灭酶，然后使用第一溶剂80wt%酒精溶液提取三次以上，将提取液混合过滤后真空减压浓缩；
（7）将步骤（6）得到浓缩物冷却静置一段时间后，再用第二溶剂混合溶解，过滤后滤液再真空减压浓缩至浓缩物相对密度为1.3000±0.008、折光指数为1.4000±0.008结束，得到烤烟浸膏；即为具有雪茄风味的烤烟提取物；所述第二溶剂为95wt%的酒精溶液。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（1）的生理盐水为0.85wt%；涂布液为梯度稀释获得，浓度为原雪茄烟末悬液的1.0、10-1、10-2、10-3和10-4。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（4）菌落稀释采用0.85wt%的无菌生理盐水；稀释倍数为100倍。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，将所述具有雪茄风味的烤烟提取物用75wt%酒精稀释后得到的稀释液喷洒到烟丝上。
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