CN115184481B - 一种检测n-叔丁基甘氨酰氯含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种柱前衍生‑高效液相色谱法检测N‑叔丁基甘氨酸盐酸盐含量的方法，包括以下步骤：样品前处理：将N‑叔丁基甘氨酰氯盐酸盐对照品或样品与三乙胺溶液室温下混合均匀，再加入苯胺溶液，水浴下继续混匀进行衍生化反应；再加入稀释剂稀释定容，微孔滤膜过滤，分别得到衍生化对照品溶液和衍生化样品溶液。与现有技术相比本发明通过柱前衍生反应规避了现有高效液相色谱方法检测N‑叔丁基甘氨酰氯盐酸盐发生分解导致检测结果不准确的缺陷，生成的衍生物稳定性高，避免了化合物分子因不稳定分解导致检测结果不准或损伤色谱柱和仪器。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体地涉及一种高效液相色谱法检测替加环素合成原料N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐含量的方法。
背景技术
N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐，又称2-[(叔丁基)氨基]乙酰氯盐酸盐，可以和9-氨基米诺环素进行缩合反应生产替加环素，是替加环素合成过程中的重要原料。N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐作为酰氯化合物，化学性质较为活泼。在储存过程中易吸潮并与水发生水解反应生成羧酸和氯化氢，导致其含量大幅降低，质量水平下降，检测时也不可以用含水溶剂进行溶解或稀释。易与醇发生醇解反应，生成对应的酯和氯化氢，因此检测时所用溶剂不可以为醇类。由于其与水或醇反应均或生成氯化氢，氯化氢会腐蚀仪器管路和零件并且损伤色谱柱，因此直接进行高效液相色谱法检测所用流动相也不可以为含醇或水的体系。作为替加环素合成过程中的重要原料，N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的质量决定了替加环素合成过程中的投料比，直接影响替加环素的合成收率和最终产品的质量。因此建立切实可行的检测方法对提高N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的质量，间接提高替加环素的合成收率水平和质量有重大意义。
高效液相色谱法（HPLC）因具有分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高等特点被广泛应用于药物分析领域。CN201310039263.9中N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐是作为替加环素中的杂质进行控制，不是作为主成分进行含量测定，忽略了在乙腈中溶解的N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐会与流动相中的甲醇和异丙醇发生醇解反应生成对应的酯和氯化氢，导致检测结果不准；CN201310038696.2中N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐虽然是检测样品的主成分物质，但同样忽略了N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐会与流动相中的甲醇和异丙醇发生醇解反应生成对应的酯和氯化氢，导致检测结果不准。
发明内容
鉴于以上问题，为克服现有方法技术的不足，本发明对样品的衍生化过程进行了开发与优化，提供了一种柱前衍生-高效液相色谱法用于检测N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐的含量。
本发明采用的技术方案为：
一种柱前衍生-高效液相色谱法检测N-叔丁基甘氨酰氯含量的方法，包括以下步骤：
样品前处理：将N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐对照品或样品与三乙胺溶液室温下混合均匀，再加入苯胺溶液，水浴下继续混匀进行衍生化反应；再加入稀释剂稀释定容，微孔滤膜过滤，分别得到衍生化对照品溶液和衍生化样品溶液；衍生反应式如下：
；
HPLC检测与结果计算：将衍生化对照品溶液和衍生化样品溶液分别注入HPLC，记录峰面积，采用外标法计算样品中N-叔丁基甘氨酰氯的含量。
进一步地，所述样品前处理步骤中，三乙胺溶液的浓度为体积分数10%~20%的乙腈溶液，加量按摩尔比为N-叔丁基甘氨酰氯：三乙胺=1:5~10；所述苯胺溶液的浓度为体积分数2~3%的乙腈溶液，浓度为2.5%；加量按摩尔比为N-叔丁基甘氨酰氯：苯胺=1:4~6。
进一步地，所述样品前处理步骤中，按摩尔比为N-叔丁基甘氨酰氯：三乙胺：苯胺=1:7.5:5。
进一步地，所述N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐对照品或样品与三乙胺溶液室温下混合均匀的时间为10~20min。
进一步地，所述衍生化反应时水浴温度为0~10℃，时间为20~40min。
进一步地，所述样品前处理步骤中，稀释剂为30%~70%的乙腈水溶液。
进一步地，所述样品前处理步骤中，稀释剂为50%的乙腈水溶液。
进一步地，所述HPLC检测条件为，采用规格为250×4.6mm×5μm 的WatersAtlantis T3柱，柱温25~35℃，样品池温度10℃，流速0.8~1.2ml/min，检测波长为210-230nm；流动相为0.03%~0.08%三氟乙酸溶液：乙腈=90~98：10~2。
进一步地，所述HPLC检测条件为，柱温30℃，流速1.0ml/min，检测波长为221nm；流动相为0.05%三氟乙酸溶液：乙腈=95：5。
本发明获得的有益效果为：
（1）与现有技术相比本发明通过柱前衍生反应规避了现有高效液相色谱方法检测N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐发生分解导致检测结果不准确的缺陷，生成的衍生物稳定性高，避免了化合物分子因不稳定分解导致检测结果不准或损伤色谱柱和仪器。
（2）采用优选的T3色谱柱，方法适用于低有机相、低pH的流动相，增强了对大极性化合物的保留。
（3）采用优选的流动相，选用优选的波长，从而提高了色谱峰的对称性，提高了检测的灵敏度和准确性。
（4）本发明能够对N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐进行定量检测，进而实现对该关键中间体在储存过程中的质量变化情况进行监控，在药物研发和生产的质量控制中具有极大应用价值。
附图说明
图1为本发明对照品溶液的色谱图；
图2为本发明中对照品溶液色谱图中主峰的吸收光谱图；
图3为实施例2中供试品溶液色谱图；
图4为实施例3中供试品溶液色谱图；
图5为实施例1中供试品线性关系图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
实施例
1．色谱条件
色谱柱：Waters Atlantis T3 250×4.6mm×5μm；
流动相：0.5%三氟乙酸：乙腈=95：5； 流速：1.0ml/min；
柱温：30℃； 样品池温度：10℃； 波长：221nm ；
2．溶液的制备
对照品溶液制备：分别精密称定30、40、50、60、70mgN-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐自制对照品于容量瓶中，称取完成后立即分别加入15%三乙胺溶液10ml，室温条件下震荡10min；再加入2.5%苯胺溶液5ml，在0~10℃下低温水浴震荡30min。完成上述衍生过程后，用50%乙腈溶清上述溶液并定容至50ml，摇匀，制得线性系列溶液。
供试品溶液制备：按照上述对照品溶液制备过程，精密称定50mg待测样品于容量瓶中，称取完成后立即加入15%三乙胺溶液10ml，室温条件下震荡10min；再加入2.5%苯胺溶液10ml，在0~10℃下低温水浴震荡30min。完成上述衍生过程后，用50%乙腈溶清上述溶液并定容至50ml，摇匀备用。
3.方法学考察
系统适用性考察：将上述称重50mg自制对照品所得的对照品溶液进样检测，主峰与两侧杂峰均可实现良好分离，如图1。
精密度考察：将上述称重50mg自制对照品所得的对照溶液连续进样6针，主峰面积的RSD为2.0%。
稳定性考察：将上述对照品溶液和供试品溶液，在样品池温度设置为10℃的条件下，每隔2h进样一次，统计主峰面积变化；结论为第8h相对于0h，对照品溶液主峰面积变化RAD值为1.2%，供试品溶液主峰面积变化RAD值为1.6%。说明对照品溶液和供试品溶液在8h内均稳定性良好。
线性关系考察
将上述线性系列溶液依次进样检测，以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，回归方程为y=5325.3x+70536（R2=0.9993），说明线性相关性良好，如图5。
准确度考察
采用上述对照品溶液和供试品溶液进行加标回收率实验，在80%~120%范围内，回收率均在95%~105%之内，说明方法准确度良好，见表1。
表1.加标回收率结果
实施例
1．色谱条件
色谱柱：Waters Atlantis T3 250×4.6mm×5μm；
流动相：0.5%三氟乙酸：乙腈=95：5； 流速：1.0ml/min；
柱温：30℃； 样品池温度：10℃； 波长：221nm ；
2．溶液的制备
对照品溶液制备：精密称定50mgN-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐自制对照品于容量瓶中，称取完成后立即加入15%三乙胺溶液10ml，室温条件下震荡10min；再加入2.5%苯胺溶液5ml，在0~10℃下低温水浴震荡30min。完成上述衍生过程后，用50%乙腈溶清上述溶液并定容至50ml，摇匀备用。
供试品溶液制备：按照上述对照品溶液制备过程，精密称定50mg待测样品于容量瓶中，称取完成后立即加入15%三乙胺溶液10ml，室温条件下震荡10min；再加入2.5%苯胺溶液10ml，在0~10℃下低温水浴震荡30min。完成上述衍生过程后，用50%乙腈溶清上述溶液并定容至50ml，摇匀备用。
3.样品检测
分别精密量取上述对照品溶液和供试品溶液20μl进入液相色谱仪，进行分离测定，对照品溶液平行进样3针，供试品溶液进样1针，并按照外标法计算供试品含量。对照品溶液色谱图如图1，供试品色谱图如图3，待测样品含量结果为83.2%（未折干）。
实施例
1．色谱条件：
色谱柱：Waters Atlantis T3 250×4.6mm×5μm；
流动相：0.5%三氟乙酸：乙腈=95：5； 流速：1.0ml/min；
柱温：30℃； 波长：221nm ；
2．溶液的制备
对照品溶液制备：精密称定50mgN-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐自制对照品于容量瓶中，称取完成后立即加入15%三乙胺溶液10ml，室温条件下震荡10min；再加入2.5%苯胺溶液5ml，在0~10℃下低温水浴震荡30min。完成上述衍生过程后，用50%乙腈溶清上述溶液并定容至50ml，摇匀备用。
供试品溶液制备：按照上述对照品溶液制备过程，精密称定50mg放置2个月后的实施例1中待测样品于容量瓶中，称取完成后立即加入15%三乙胺溶液10ml，室温条件下震荡10min；再加入2.5%苯胺溶液10ml，在0~10℃下低温水浴震荡30min。完成上述衍生过程后，用50%乙腈溶清上述溶液并定容至50ml，摇匀备用。
3.样品检测
分别精密量取上述对照品溶液和供试品溶液20μl进入液相色谱仪，进行分离测定，对照品溶液平行进样3针，供试品溶液进样1针，并按照外标法计算供试品含量。供试品色谱图如图4，放置2个月后待测样品含量结果为44.3%（未折干）。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (5)
1.一种柱前衍生-高效液相色谱法检测N-叔丁基甘氨酰氯含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
样品前处理：将N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐对照品或待测样品与三乙胺溶液室温下混合均匀，再加入苯胺溶液，水浴下继续混匀进行衍生化反应；再加入稀释剂稀释定容，微孔滤膜过滤，分别得到衍生化对照品溶液和衍生化样品溶液；衍生反应式如下：HPLC检测与结果计算：将衍生化对照品溶液和衍生化样品溶液分别注入HPLC，记录峰面积，采用外标法计算样品中N-叔丁基甘氨酰氯的含量；
所述样品前处理步骤中，三乙胺溶液的浓度为体积分数10%~20%的乙腈溶液，加量按摩尔比为N-叔丁基甘氨酰氯：三乙胺=1:5~10；所述苯胺溶液的浓度为体积分数2~3%的乙腈溶液，浓度为2.5%；苯胺加量按摩尔比为N-叔丁基甘氨酰氯：苯胺=1:4~6；
所述HPLC检测条件为，采用规格为250×4.6mm×5μm 的Waters Atlantis T3柱，样品池温度10℃，
所述样品前处理步骤中，稀释剂为30%~70%的乙腈水溶液；
所述HPLC检测条件为，柱温30℃，流速1.0ml/min，检测波长为221nm；流动相为0.05%三氟乙酸溶液：乙腈=95：5。
2.根据权利要求1所述一种柱前衍生-高效液相色谱法检测N-叔丁基甘氨酰氯含量的方法，其特征在于：所述样品前处理步骤中，按摩尔比为N-叔丁基甘氨酰氯：三乙胺：苯胺=1:7.5:5。
3.根据权利要求1所述一种柱前衍生-高效液相色谱法检测N-叔丁基甘氨酰氯含量的方法，其特征在于：所述N-叔丁基甘氨酰氯盐酸盐对照品或待测样品与三乙胺溶液室温下混合均匀的时间为10~20min。
4.根据权利要求1所述一种柱前衍生-高效液相色谱法检测N-叔丁基甘氨酰氯含量的方法，其特征在于：所述衍生化反应时水浴温度为0~10℃，时间为20~40min。
5.根据权利要求1所述一种柱前衍生-高效液相色谱法检测N-叔丁基甘氨酰氯含量的方法，其特征在于：所述样品前处理步骤中，稀释剂为50%的乙腈水溶液。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009222466A (ja) * | 2008-03-14 | 2009-10-01 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 蛍光システイン誘導体を用いる感作性検定方法及び蛍光システイン誘導体 |
| CN101726552A (zh) * | 2009-12-14 | 2010-06-09 | 中国农业大学 | 一种氨基化合物高效液相色谱柱前衍生化试剂及其检测方法 |
| CN102288707A (zh) * | 2011-05-16 | 2011-12-21 | 南京工业大学 | 二甲氧基苯磺酰氯柱前衍生法分析胺基化合物 |
| CN102323341A (zh) * | 2011-06-09 | 2012-01-18 | 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 奶粉中18种蛋白水解氨基酸的高效液相色谱检测方法 |
| CN104820056A (zh) * | 2015-05-14 | 2015-08-05 | 吉林化工学院 | 一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法 |
| CN109425666A (zh) * | 2017-08-28 | 2019-03-05 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种酰氯衍生物的lc-ms分析方法 |
| CN109836378A (zh) * | 2017-11-25 | 2019-06-04 | 上海华汇拓医药科技有限公司 | 一类鞘磷脂合酶抑制剂、其制备方法及其应用 |
| JP2020106494A (ja) * | 2018-12-28 | 2020-07-09 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | 生体試料中のエチルアミン定量法 |
| CN114236022A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-25 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法 |
-
2022
- 2022-05-31 CN CN202210614373.2A patent/CN115184481B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009222466A (ja) * | 2008-03-14 | 2009-10-01 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 蛍光システイン誘導体を用いる感作性検定方法及び蛍光システイン誘導体 |
| CN101726552A (zh) * | 2009-12-14 | 2010-06-09 | 中国农业大学 | 一种氨基化合物高效液相色谱柱前衍生化试剂及其检测方法 |
| CN102288707A (zh) * | 2011-05-16 | 2011-12-21 | 南京工业大学 | 二甲氧基苯磺酰氯柱前衍生法分析胺基化合物 |
| CN102323341A (zh) * | 2011-06-09 | 2012-01-18 | 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 奶粉中18种蛋白水解氨基酸的高效液相色谱检测方法 |
| CN104820056A (zh) * | 2015-05-14 | 2015-08-05 | 吉林化工学院 | 一种柱前衍生化-高效液相色谱法测定叔丁基肼盐酸盐的方法 |
| CN109425666A (zh) * | 2017-08-28 | 2019-03-05 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种酰氯衍生物的lc-ms分析方法 |
| CN109836378A (zh) * | 2017-11-25 | 2019-06-04 | 上海华汇拓医药科技有限公司 | 一类鞘磷脂合酶抑制剂、其制备方法及其应用 |
| JP2020106494A (ja) * | 2018-12-28 | 2020-07-09 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | 生体試料中のエチルアミン定量法 |
| CN114236022A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-25 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 柱前衍生-hplc检测发酵液中卡那霉素含量的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 柱前衍生化 HPLC 法测定盐酸美金刚的含量;楼姝含等;《中国新药杂志》;第25卷(第19期);摘要及第1-4节 * |
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