CN115154534A - 防治胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

防治胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115154534A
CN115154534A CN202110353781.2A CN202110353781A CN115154534A CN 115154534 A CN115154534 A CN 115154534A CN 202110353781 A CN202110353781 A CN 202110353781A CN 115154534 A CN115154534 A CN 115154534A
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
chinese medicine
traditional chinese
less
gastric cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110353781.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115154534B (zh
Inventor
赵爱光
李朝燕
张光涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Original Assignee
Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM filed Critical Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of TCM
Priority to CN202110353781.2A priority Critical patent/CN115154534B/zh
Publication of CN115154534A publication Critical patent/CN115154534A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115154534B publication Critical patent/CN115154534B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/36—Caryophyllaceae (Pink family), e.g. babysbreath or soapwort
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/076—Poria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A61K36/536—Prunella or Brunella (selfheal)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
    • A61K36/638—Ligustrum, e.g. Chinese privet
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/736—Prunus, e.g. plum, cherry, peach, apricot or almond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/888—Araceae (Arum family), e.g. caladium, calla lily or skunk cabbage
    • A61K36/8888—Pinellia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其由如下重量份的原料药制备而成：太子参10‑15，茯苓25‑35，半夏6‑12，大血藤25‑35，夏枯草6‑12，白梅花6‑12，女贞子6‑12。本发明公开的另一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其由如下重量份的原料药制备而成：太子参10‑15，茯苓25‑35，半夏6‑12，大血藤25‑35，夏枯草6‑12，白梅花6‑12，淫羊藿6‑12。本发明中药组合物在体外和体内实验中显示出具有明显抑制胃癌、结直肠癌细胞生长增殖的作用，且体外抑制肿瘤细胞生长作用优于经验方胃肠安。本发明还公开了前述中药组合物的制备方法。

Description

防治胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，此外，本发明还涉及前述中药组合物的制备方法。
背景技术
我国是世界上胃癌高发国家之一[1]，结直肠癌发病近年也节节攀升[2]。胃肠恶性肿瘤死亡率高达24.49％，超过肺癌21.68％，严重威胁我国人民健康。随着以内窥镜的广泛应用，胃肠恶性肿瘤早期诊断率不断提高，但仍有相当比例的胃肠恶性肿瘤初始诊断时即为中晚期。胃癌根治术后仍有40％-60％的患者出现复发转移，有80％以上患者最后进入晚期阶段，预后极差[3-4]。而结肠癌患者即使采用标准的辅助化疗，术后3年内仍有复发或转移,预后较差[5]。
在我国，中医中药防治胃、肠恶性肿瘤历史悠久，自《内经》等二千余年来历代的中医学著作对“胃癌”、“结直肠癌”分别有“胃脘痛”、“噎膈”、“反胃”、“伏梁”，“肠擗”、“肠覃”、“肠毒”、“便血”、“下痢”、“锁肛痔”、“积聚”等类似病症的描述，以整体观和辨证论治为原则，扶正与祛邪结合，有针对性地、个体化使用中药复方治疗为主要治疗方法。尤其是二十世纪五十年代以后开展了一系列中西医结合的探索，使中医药在胃肠癌的综合治疗中发挥了独特的作用，潜在的优势领域包括：晚期肿瘤延长生存，改善症状；化疗、放疗时减毒增效；术后预防复发和转移等方面，中医药复方治疗还有一个明显的特点是不良反应相对较少，适合于绝大多数胃肠肿瘤病人群。
然而由于中药复方的组成药物复杂，往往还包含有动物药、地域性使用的药物等，临床上制作及质控难度大，此外，药物成分复杂，机制研究存在瓶颈，极大限制了的临床推广应用。
本发明秉承全国名老中医药专家传承工作室指导老师、上海市名中医邱佳信教授“脾虚为胃、结直肠等消化道恶性肿瘤发生与发展基本因素之一”的学术思想，经过多年的中医药防治消化道恶性肿瘤的临床与实验研究[6-8]，形成胃癌和结直肠癌中医辨证规范化诊疗方案。2019中国中西医结合学会科学技术奖二等奖、2019年度上海市科技进步奖三等奖、2012中华医学科技奖叁等奖、2011年上海市科技进步奖三等奖以及2009年上海中西医结合科学技术奖一等奖等多项科技成果以及近二十余年来的多项临床研究显示，健脾为主的中药复方辨证治疗，在延长晚期胃癌、结直肠癌患者的生存期，降低术后复发转移以及改善症状，提高生活质量，降低化疗不良反应等方面具有一定的疗效。例如：对3806例进展期胃癌的总生存期(OS)和无病生存期(DFS)分别进行比较，证实健脾法为主的中医治疗无论对II期-III期胃癌根治术后还是在晚期胃癌不同人群(年龄、性别、并发症、治疗耐受性等)都有明确延长生存作用和改善相关脾虚症状。中药联合化疗治疗进展期胃癌初治病例的中位生存期(OS)达到17.9个月[9]；II期-III期胃癌根治术后中药联合化疗的一、二、三年无病生存率分别为87％、84％和80％[10]；根治术后复发转移高危的IIIc期病例中医联合化疗的一、二、三年无病生存率分别为84％、59％和49％，疗效优于同期标准治疗对照[11]。
参考文献：
【1】GBD 2017 Stomach Cancer Collaborators.The global,regional,andnational burden of stomach cancer in 195countries,1990–2017:a systematicanalysis for the global burden of disease study 2017.Lancet GastroenterolHepatol.2020；5(1):42–54.
【2】Bray F,Ferlay J,Soerjomataram I,et al.Global cancer statistics2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in185 countries[J].CA Cancer J Clin,2018,68(6):394-424.
【3】Al-Batran SE,Hofheinz RD,Pauligk C3,et al.Histopathologicalregression after neoadjuvant docetaxel,oxaliplatin,fluorouracil,andleucovorin versus epirubicin,cisplatin,and fluorouracil or capecitabine inpatients with resectable gastric or gastro-oesophageal junctionadenocarcinoma(FLOT4-AIO):results from the phase 2 part of a multicentre,open-label,randomised phase 2/3 trial[J].Lancet Oncol,2016,17(12):1697-1708.
【4】Peng J,Wei Y,Zhou F,et al.D2-resected stage IIIc gastric cancerpatients benefit from adjuvant chemoradiotherapy[J].Cancer Med,2016,5(10):2773-2780.
【5】Grothey A,Sobrero AF,Shields AF,et al.Duration of AdjuvantChemotherapy for Stage III Colon Cancer[J].N Engl J Med,2018,378(13):1177–88.
【6】邱佳信，贾药生，杨金坤，等.健脾法为主治疗晚期胃癌的探讨[J].中医杂志，1992，33(8)：23-25.
【7】邱佳信，杨金坤，唐莱娣，等.中药的反突变作用研究[J].中国中西医结合杂志，1994，14(5):268.
【8】赵爱光.邱佳信治疗胃癌学术思想初探[J].江苏中医药，2004，07：12-15.
【9】Xu Y,Zhao A G,Li Z Y,et al.Survival Benefit of Traditional ChineseHerbal Medicine(a Herbal Formula for Invigorating Spleen)for Patients WithAdvanced Gastric Cancer[J].Integrative Cancer Therapies,2012,12(5):414-422.
【10】孙姗姗，赵爱光，杨金坤，等.健脾为基础的复方辨证治疗对胃癌根治术后无病生存期的影响[J].世界华人消化杂志，2011，19(6)：581-587.
【11】朱晓虹，赵爱光，李宏伟，等.基于健脾为基础的辨证治疗方案对ⅢC期胃癌根治术后患者无病生存期的影响[J].中国肿瘤，2016，25(7)：569-574.
发明内容
针对现有技术的上述不足，根据本发明的实施例，希望提供一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其具有明显抑制胃癌、结直肠癌细胞生长增殖的作用，且体外抑制肿瘤细胞生长作用优于经验方胃肠安。此外，还希望提出该中药组合物的制备方法。
根据实施例，本发明提供的一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其由如下重量份的原料药制备而成：太子参10-15，茯苓25-35，半夏6-12，大血藤25-35，夏枯草6-12，白梅花6-12，女贞子6-12。根据一个实施例，原料药的优选重量份分别为：太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，女贞子9。
根据实施例，本发明提供的另一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其特征是，其由如下重量份的原料药制备而成，太子参10-15，茯苓25-35，半夏6-12，大血藤25-35，夏枯草6-12，白梅花6-12，淫羊藿6-12。根据一个实施例，原料药的优选重量份分别为：太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，淫羊藿9。
在中医理论看来，胃肠道肿瘤病本在“脾”，病因病机与“虚”“痰”“瘀”“毒”有关，是以脾虚为本，兼见热毒、湿阻、痰凝、气滞、血瘀等证为标的本虚标实之病。本发明防治胃癌、结直肠癌的中药组合物中，太子参和茯苓补气健脾、生津润肺，起到扶正固本的作用，茯苓还具有利水渗湿的功效，女贞子，甘，苦，凉，滋补肾阴，淫羊藿辛、甘、温，滋补肾阳。大血藤清热解毒起佐使作用；夏枯草清热泻火，散结消肿，姜半夏燥湿化痰，消痞散结，白梅花疏肝解郁，和胃理气，起到辅助作用，诸药配伍，全方共奏健脾补肾疏肝理气、清热解毒、软坚化痰之效，纠正胃肠恶性肿瘤发生发展过程中各种异常病理生理过程，恢复机体的阴阳平衡状态，从而达到缓解症状、提高生活质量、延长生存时间的治疗目标。
根据实施例，本发明提供的前述防治胃癌、结直肠癌的中药组合物颗粒剂的制备方法，包括如下工艺步骤：将中药饮片按处方量称取，加水两煎，第一次12倍，煎煮120分钟，第二次10倍，煎煮60分钟；提取液进行浓缩，真空度为-0.03～-0.07MPa，浓缩温度为70～90℃，得相对密度为1.14-1.15的清膏；清膏进行喷雾干燥，进风温度(135～165)℃，出风温度(90～110)℃，蒸汽压力≤0.45Mpa、雾化器频率≤350hz、蠕动泵频率≤20hz，产出细粉；所得细粉干法制粒，筛网目数12目，挤压压力≤150kg(约15Mpa)，侧封压力＜30kg(约3Mpa)，挤压速度≤35rad/min，进料速度≤64rad/min，制粒速度≤129rad/min，冷却温度控制在≤16℃，上10目、下60目整粒，制得颗粒剂。【检查】通则(0104)，水分：不得过8.0％(通则0832第二法)。粒度：不得过15％(通则0982第二法双筛分法)。溶化性：应符合规定。
相对于现有技术，本发明不仅采用了现代技术，针对疾病作用靶标(机制)和中药作用结构筛选、优化了临床经验方，同时组方也体现了中医理论对胃肠恶性肿瘤临床治疗的指导价值。本发明防治胃癌、结直肠癌的中药组合物以调补阴阳的侧重不同，分为小复方F3(以下简称F3，组成：太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，女贞子9)和小复方F5(以下简称F3，组成：太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，淫羊藿9)。随后的试验例将证明，在体外和体内实验中显示出具有明显抑制胃癌、结直肠癌细胞生长增殖的作用，且体外抑制肿瘤细胞生长作用优于经验方胃肠安。
附图说明
图1胃癌MKN45、MGC803和肠癌HCT116、HT29细胞IC50。
图2胃癌MKN45细胞裸鼠皮下瘤F3干预后瘤体、瘤重、肿瘤生长体重及裸鼠体重。
图3胃癌MKN45细胞裸鼠皮下瘤F5干预后瘤体、瘤重、肿瘤生长体重及裸鼠体重。
图4肠癌HCT116细胞裸鼠皮下瘤F3干预后瘤体、瘤重、肿瘤生长体重及裸鼠体重。
图5肠癌HCT116细胞裸鼠皮下瘤F5干预后瘤体、瘤重、肿瘤生长体重及裸鼠体重。
图6肠癌HCT116细胞裸鼠皮下瘤胃肠安干预后瘤体、瘤重、肿瘤生长体重及裸鼠体重。
图7胃癌MKN45细胞裸鼠皮下瘤HE染色(20×)。
图8肠癌HCT116细胞裸鼠皮下瘤HE染色(20×)。
图9 MKN45细胞裸鼠皮下瘤IHC染色BCL2(20×)。
图10 MKN45细胞裸鼠皮下瘤IHC染色E-cadherin(20×)。
图11 MKN45细胞裸鼠皮下瘤IHC染色Ki67(20×)。
图12胃癌MKN45细胞皮下瘤western blot。
图13肠癌MGC803细胞皮下瘤western blot。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修改同样落入本发明权利要求所限定的范围。
本发明以下实施例中，胃肠安【成分：太子参12、炒白术12、茯苓30、半夏9、青皮4.5、陈皮4.5、白扁豆30、绿萼梅9、红藤30、菝葜30、藤梨根30、野葡萄藤30、生牡蛎30、夏枯草9、天龙3条】上述饮片及冻干粉制备、质量控制等均由江苏江阴天江药业有限公司提供(批号：1507342)，PBS溶解、0.22μm微孔滤器过滤后使用。
本发明以下实施例中的体外实验和体内实验，适用如下一至八的实验方法。
一、细胞培养。
胃癌细胞系MKN45、MGC803由华东理工大学刘建文教授惠赠；肠癌细胞。细胞系HCT116和HT29由上海中医药大学附季光教授惠赠。MKN45、MGC803和HCT116在RPMI-1640培养基中培养，HT29在DMEM培养基中培养。包含10％胎牛血清和1％青霉素、链霉素，细胞培养箱设定为37℃，5％CO2的湿化环境。
二、细胞增殖实验。
对数生长期的MKN45、MGC803、HCT116和HT29细胞，计数后均匀接种至96孔板，每孔3×103细胞。细胞贴壁后加入从0-4000mg/L不同浓度的F3、F5、胃肠安，每组设置5个复孔。中药干预24、48、72小时后，每孔加入10μl的CCK8溶液孵育1-2h，测450nm处OD值，计算肿瘤细胞存活率。
三、动物实验。
3.1构建人胃癌、肠癌裸鼠皮下移植瘤模型
取对数生长期的细胞，胰酶消化1-2min，终止消化，离心1000rpm、5min，去除上清后PBS重悬、细胞计数，PBS洗涤3次。然后PBS重悬细胞，调整细胞密度至1×107/ml。置于冰上转移细胞。
3.2分组与模型构建
每组裸鼠(4周龄，雄性)共6只。接种细胞时，裸鼠右侧背部消毒，取200ul细胞(约2×106/只)，用1ml注射器沿皮下进针0.5-1cm后缓慢注入细胞悬液，拔出后用酒精棉球按压，观察是否沿针尖处有液体流出。
3.3观察指标
观察裸鼠的饮食、精神、活动情况、体重、瘤体等指标；于实验第8天起，每周对裸鼠进行称重、测量瘤体频率为3-4次；设瘤体长径为a，短径b，计算瘤体体积公式为1/2×a×b2。
3.4动物临终处理
于实验第28天，颈椎脱臼处死后剥离瘤体，称取瘤块质量，进行大体和瘤体拍照，将瘤块分为两份保存，一部分制作石蜡，另一部分液氮冻存。
四、Western blot。
提取组织蛋白，测浓度后按照30μg/孔上样；电泳时设置浓缩胶电压为80V，当溴酚蓝进入分离胶时调整电压为120V；转膜电流为300mA，100min；10％脱脂奶粉封闭1h；一抗浓度多为1∶1000,4℃摇床过夜；TBST洗3次，10min/次，孵育二抗，浓度为1∶5000，TBST洗3次后曝光。
五、组织石蜡包埋、切片。
5.1取材固定
将新鲜组织切成小而薄的材料(一般厚度不超过4mm，大小不超过5×5mm2)，立即放入4％的多聚甲醛中固定12-48h。
5.2脱水
从75％的乙醇中取出，分别放大80％，90％，100％(I)的乙醇中1小时，在放入100％乙醇中1h。
5.3透明
乙醇+二甲苯(1:1)2h；二甲苯(I)，二甲苯(II)各40min。
5.4浸蜡
二甲苯+石蜡(1：1)2h；石蜡(I)1h；石蜡(II)2h。
5.5包埋
在冰盒上进行，将融好的纯蜡倒入蜡盒，待蜡块完全凝固。
5.6切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机上，切出3-5um的蜡带，放于漂片机中展开，再将切片捞于用多聚赖氨酸处理过的防脱载玻片上，65度烤片2h。
六、HE染色。
6.1将石蜡切片置于烘箱中60℃烤1～2h，石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水；
6.2苏木素染10分钟，流水冲洗，去除余色，0.7％盐酸乙醇分化数秒钟，流水冲洗，切片变蓝约15分钟，95％乙醇30秒钟，酒精伊红染30秒；
6.3 I 95％乙醇30秒钟，II 95％乙醇30秒钟，I 100％乙醇30秒钟，II 100％乙醇30秒钟；
6.4石碳酸二甲苯30秒钟(1：4石碳酸1-二甲苯4)，I二甲苯30秒钟，II二甲苯30秒钟；
6.5中性树胶封片，显微镜下观察拍照。
七、免疫组化染色。
7.1将石蜡切片置于烘箱中62℃烤1～2h，切片置于二甲苯中浸泡20分钟，更换二甲苯后再浸泡20分钟，更换二甲苯后再浸泡20分钟；
7.2水化无水乙醇中浸泡1min；无水乙醇中浸泡1min；95％乙醇中浸泡1min；95％乙醇中浸泡1min；70％乙醇中浸泡1min；自来水水洗5分钟；蒸馏水清洗；
7.3每片加入一滴或是100ul的过氧化氢阻断溶液室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS洗涤3次，每次5min；
7.4热抗原修复将洗涤的片子放入到塑料的架子上面，置于煮沸的抗原修复液中，煮沸维持15min后，保温15min，关闭电源后自然冷却。
7.5 PBS洗涤3次，每次5min，除去PBS，每张片子加一滴或是100ul的非免疫动物血清，37℃孵育20min，去除血清，每张片子加入1滴或是50ul的一抗稀释液稀释的一抗，4℃过夜反应；
7.6第二天去除湿盒，常温下放置1h或是37℃放置30min，PBS洗涤3次，每次5min，除去BS，每张片子加入一滴或是50ul标记的二抗，37℃下孵育30min；
7.7 PBS洗涤3次，每次5min，除去PBS，每张片子加入DAB显色，在显微镜下掌握染色程度(当出现黄色颗粒或是片状沉淀时，立即终止染色)；
7.8自来水冲洗干净DAB残留液，苏木素复染30s，自来水冲洗5min，盐酸酒精分化1s，自来水冲洗返蓝10min；
7.9用70％乙醇中浸泡3分钟；95％乙醇中浸泡3分钟；95％乙醇中浸泡3分钟；无水乙醇中浸泡3分钟两次；组织置于二甲苯中浸泡5分钟三次；
7.10中性树胶封片，加盖玻片，正置显微镜拍照。每张切片随机选择三个代表性视野拍照(20×)。
八、统计分析。
采用SPSS19.0软件进行统计学分析。两组数据比较若符合正态分布，采用独立样本T检验，若不符合正态分布，则采用非参数秩和检验。数据处理采用GraphPad prism5软件进行统计画图，显著性水准为α＝0.05，P<0.05为差异具有统计学意义。
实施例1-小复方F3颗粒剂的制备。
分别称取各重量份的原料药(太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，女贞子9)，加水两煎，第一次12倍，煎煮120分钟，第二次10倍，煎煮60分钟；提取液进行浓缩，真空度为-0.03～-0.07MPa，浓缩温度为70～90℃，得相对密度为1.14-1.15的清膏；清膏进行喷雾干燥，进风温度(135～165)℃，出风温度(90～110)℃，蒸汽压力≤0.45Mpa、雾化器频率≤350hz、蠕动泵频率≤20hz，产出细粉；所得细粉干法制粒，筛网目数12目，挤压压力≤150kg(约15Mpa)，侧封压力＜30kg(约3Mpa)，挤压速度≤35rad/min，进料速度≤64rad/min，制粒速度≤129rad/min，冷却温度控制在≤16℃，上10目、下60目整粒，制得小复方F3颗粒。
实施例2-小复方F5颗粒剂的制备。
分别称取各重量份的原料药(太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，淫羊藿9)，加水两煎，第一次12倍，煎煮120分钟，第二次10倍，煎煮60分钟；提取液进行浓缩，真空度为-0.03～-0.07MPa，浓缩温度为70～90℃，得相对密度为1.14-1.15的清膏；清膏进行喷雾干燥，进风温度(135～165)℃，出风温度(90～110)℃，蒸汽压力≤0.45Mpa、雾化器频率≤350hz、蠕动泵频率≤20hz，产出细粉；所得细粉干法制粒，筛网目数12目，挤压压力≤150kg(约15Mpa)，侧封压力＜30kg(约3Mpa)，挤压速度≤35rad/min，进料速度≤64rad/min，制粒速度≤129rad/min，冷却温度控制在≤16℃，上10目、下60目整粒，制得小复方F5颗粒。
试验例1-体外实验：探讨F3和F5对胃癌MKN45、MGC803和肠癌HCT116、HT29细胞增殖的影响。
设置空白对照组、F3组、F5组、胃肠安组，浓度为从0到5000μg/ml的梯度，检测24、48、72的OD值。如图1所示，F3作用于MKN45、MGC803、HCT116、HT29细胞的IC50分别为715、690、1725、982μg/ml；F5为788、750、1558、970μg/ml；胃肠安为1200、900、1825、1352μg/ml。因此，F3、F5对胃癌MKN45、MGC803和肠癌HCT116、HT29细胞均有较强的抑制作用，且体外效果优于胃肠安。
试验例2-体内实验
为进一步研究F3和F5在体内的疗效，采用人胃癌MKN45细胞和人肠癌HCT116细胞的裸小鼠皮下瘤模型。分为对照组、F3组、F5组、胃肠安组。成瘤后，分别用生理盐水、F3、F5、胃肠安灌胃处理，最大肿瘤体积大于1800mm3时终止实验。分别从肿瘤体积、瘤重、裸鼠体重等方面比对各组间的差异。图2所示，胃癌F3组瘤体较生理盐水组明显减小，瘤重较低，差异有统计学意义(P＜0.05)。虽然F3组裸鼠体重较生理盐水组轻，差异无统计学意义。F5组可见同样的效果(图3)。图4至图6显示出F3、F5、胃肠安对裸鼠肠癌HCT116细胞皮下瘤的抑制作用，F3、F5效果较胃肠安更加显著。该实验证明F3、F5可以显著控制裸鼠皮下瘤的生长。
试验例3
为探讨F3、F5抑制胃癌、肠癌的作用机制，我们首先观察裸鼠皮下瘤的病理形态。胃癌MKN45细胞裸鼠皮下瘤如图7所示：生理盐水对照组肿瘤细胞异型性较明显，部分区域见肿瘤细胞围小血管分布，核分裂相常见，间质内小血管、淋巴管分布较多，结缔组织较少，淋巴细胞、巨噬细胞浸润较少；F3组肿瘤细胞异型性相对较小，间质内炎细胞浸润、纤维结缔组织较多，可见片灶状坏死区域；F5组肿瘤细胞异型性较小，间质内可见纤维组织增生、炎细胞浸润，并可见坏死灶；胃肠安组可见细胞异型性小，间质内炎细胞浸润、纤维结缔组织增生，仍可见血管周肿瘤细胞聚集，实质内可见坏死区域。图8为肠癌HCT116细胞裸鼠皮下瘤：对照组肿瘤细胞异型性明显，排列紊乱(呈旋涡状)，可见瘤巨细胞，间质内炎性反应小，小血管密度较高，坏死灶较少；F3组肿瘤细胞异型性明显较对照组小，瘤巨细胞少见，间质内见炎细胞浸润、纤维组织增生，坏死区域较多；F5组肿瘤细胞异型性较小，间质内纤维组织增生、见炎细胞浸润，另可见片灶状坏死区域；胃肠安组肿瘤细胞异型性较小，可见部分旋涡状结构，间质内炎细胞浸润，灶状坏死区域可见。
试验例4
免疫组化结果显示(图9、图10、图11)，对照组BCL2表达阳性，F3、F5、WCA组均为阴性表达；对照组仅个别肿瘤细胞的细胞膜表达E-cadherin，相比之下，F3组表达量最高，F5组次之，胃肠安组最少(比对照组略多)；对照组、F3、F5、WCA组Ki67指数分别为：80％(+)、30％(+)、40％(+)、40％(+)。
结果表明，F3、F5抑制肿瘤生长可能与促进凋亡作用相关，并且F3、F5具有抑制肿瘤细胞侵袭迁移的潜在作用。
试验例5
为验证F3、F5与肿瘤细胞凋亡、侵袭转移的关系，我们对皮下瘤组织进行westernblot检测。图12所示，胃癌MKN45细胞裸鼠皮下瘤经干预后，F3组N-cadherin、vimentin表达量较对照组少；F5组BCL2、N-cadherin较对照组少；WCA组BCL2较对照组少，余差异较小。
图13提示，肠癌HCT116细胞裸鼠皮下瘤经干预后，F3组MMP9、vimentin表达量较对照组少，E-cadherin升高；F5组BCL2、MMP9、vimentin较对照组少，E-cherin较对照组多；WCA组MMP9较对照组少，余差异小。Western blot结果提示，F3、F5控制肿瘤细胞与促进凋亡、抑制侵袭转移相关。

Claims (5)

1.一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其特征是，其由如下重量份的原料药制备而成：太子参10-15，茯苓25-35，半夏6-12，大血藤25-35，夏枯草6-12，白梅花6-12，女贞子6-12。
2.根据权利要求1所述的防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其特征是，其由如下重量份的原料药制备而成：太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，女贞子9。
3.一种防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其特征是，其由如下重量份的原料药制备而成，太子参10-15，茯苓25-35，半夏6-12，大血藤25-35，夏枯草6-12，白梅花6-12，淫羊藿6-12。
4.根据权利要求3所述的防治胃癌、结直肠癌的中药组合物，其特征是，其由如下重量份的原料药制备而成：太子参12，茯苓30，半夏9，大血藤30，夏枯草9，白梅花9，淫羊藿9。
5.权利要求1-4中任何一项所述的防治胃癌、结直肠癌的中药组合物颗粒剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：分别称取各重量份的原料药，加水两煎，第一次12倍，煎煮120分钟，第二次10倍，煎煮60分钟；提取液进行浓缩，真空度为-0.03～-0.07MPa，浓缩温度为70～90℃，得相对密度为1.14-1.15的清膏；清膏进行喷雾干燥，进风温度(135～165)℃，出风温度(90～110)℃，蒸汽压力≤0.45Mpa、雾化器频率≤350hz、蠕动泵频率≤20hz，产出细粉；所得细粉干法制粒，筛网目数12目，挤压压力≤150kg(约15Mpa)，侧封压力＜30kg(约3Mpa)，挤压速度≤35rad/min，进料速度≤64rad/min，制粒速度≤129rad/min，冷却温度控制在≤16℃，上10目、下60目整粒，制得颗粒剂。
CN202110353781.2A 2021-04-01 2021-04-01 治疗胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法 Active CN115154534B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110353781.2A CN115154534B (zh) 2021-04-01 2021-04-01 治疗胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110353781.2A CN115154534B (zh) 2021-04-01 2021-04-01 治疗胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115154534A true CN115154534A (zh) 2022-10-11
CN115154534B CN115154534B (zh) 2023-06-06

Family

ID=83475722

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110353781.2A Active CN115154534B (zh) 2021-04-01 2021-04-01 治疗胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115154534B (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103585514A (zh) * 2013-10-18 2014-02-19 浙江省立同德医院 一种用于治疗胃癌的中药组合物、应用及制剂
CN105770263A (zh) * 2016-04-19 2016-07-20 青岛市肿瘤医院 一种肿瘤辅助治疗的中药制剂及其制备方法
CN107308292A (zh) * 2017-07-19 2017-11-03 范玉强 中药复方胃肠安的新用途
CN107335013A (zh) * 2017-07-19 2017-11-10 范玉强 一种用于治疗结肠癌的组合物及其制备方法与应用
CN109908302A (zh) * 2019-04-09 2019-06-21 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） 一种抑制肿瘤转移的中药组合物、其制备方法及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103585514A (zh) * 2013-10-18 2014-02-19 浙江省立同德医院 一种用于治疗胃癌的中药组合物、应用及制剂
CN105770263A (zh) * 2016-04-19 2016-07-20 青岛市肿瘤医院 一种肿瘤辅助治疗的中药制剂及其制备方法
CN107308292A (zh) * 2017-07-19 2017-11-03 范玉强 中药复方胃肠安的新用途
CN107335013A (zh) * 2017-07-19 2017-11-10 范玉强 一种用于治疗结肠癌的组合物及其制备方法与应用
CN109908302A (zh) * 2019-04-09 2019-06-21 广东省中医院（广州中医药大学第二附属医院、广州中医药大学第二临床医学院、广东省中医药科学院） 一种抑制肿瘤转移的中药组合物、其制备方法及应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周浩;: ""胃肠安"对胃癌模型裸鼠肿瘤的抑制作用及其机理的初步研究", 江苏中医药, vol. 39, no. 10, pages 70 - 72 *
沈国双;: "升血汤在进展期胃癌综合治疗中的作用", 四川中医, vol. 29, no. 08, pages 67 - 69 *
祝利民;沈克平;周浩;潘传芳;姚琼;: "胃肠安及四藤方对人结肠癌细胞株干细胞CD133~+的影响", 上海交通大学学报(医学版), vol. 36, no. 02, pages 161 - 165 *
赵爱光;杨金坤;尤圣富;李婷;赵海磊;顾缨;唐莱娣;邱佳信;: "中药胃肠安诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡的途径及基因调控的研究", 中西医结合学报, vol. 05, no. 03, pages 287 - 297 *
陈伟霞;牛垚飞;邹煜明;陈彬;丁亚杰;唐亚荣;赵爱光;: "胃肠安对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用", 中国实验方剂学杂志, vol. 24, no. 01, pages 91 - 95 *
陶丽;顾缨;吴斌;陈彬;赵爱光;杨金坤;: "复方胃肠安对人大肠癌裸鼠原位移植瘤生长和肝转移的影响", 上海中医药杂志, vol. 47, no. 04, pages 79 - 84 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115154534B (zh) 2023-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111166837B (zh) 一种治疗大肠癌的中药组合物及其用途
CN105213974A (zh) 一种治疗淋巴瘤的中药组合物及其应用
CN102940808A (zh) 一种用于治疗肺癌的组方药物及制备方法
CN115154534A (zh) 防治胃癌、结直肠癌的中药组合物及其制备方法
CN110279780B (zh) 一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液
CN101549025B (zh) 一种治疗癌症的中药
CN106728908A (zh) 一种治疗大肠癌的中药复方制剂及其制备方法
CN108403941B (zh) 一种治疗胰腺癌的中药组合物及其制备方法和应用
CN108452240B (zh) 一种抗肿瘤的中药组合物及其应用
CN101732547A (zh) 除癖安乳胶囊
CN102008697B (zh) 治疗肾病的药酒及其制备方法
CN104288489A (zh) 一种用于治疗乳腺肿瘤的药物及其制备方法
CN104587300A (zh) 用于治疗急性白血病的中药组合物及其制备方法
CN114949160B (zh) 一种用于结直肠腺瘤肠镜术后治疗的中药组合物
CN113274453B (zh) 一种治疗阴虚热盛型非酒精性脂肪肝的含引经药牛膝的中药组合物及其制备方法和应用
CN116920066B (zh) 一种治疗肺结节及肺癌的中药组合物及其制剂和应用
CN103800890B (zh) 一种治疗月经失调的药物及制备方法
CN105663446A (zh) 一种治疗肾癌的药物及制备方法
CN112316049A (zh) 一种中药汤剂及其制备方法
CN105194429A (zh) 一种治疗支气管哮喘病的中药制剂
CN116531476A (zh) 一种治疗解痉多肽表达化生的中药组合物和应用
CN104922525A (zh) 一种治疗肺痈的中药组合物
CN114366800A (zh) 一种治疗结直肠癌的中药及其制备方法
CN117379519A (zh) 一种生血中药组合物及其制备方法
CN113633732A (zh) 一种治疗肺癌的中药组合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant