CN110279780B - 一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液 - Google Patents
一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液,由海藻、淫羊藿、疣柄魔芋、夏枯草、冰糖草、大枣和杞子按下述方法制备:所述原料粉碎为粗粒,加水浸泡,加热提取3次,过滤得滤液,浓缩得到浓缩液,对浓缩液调配,调整至每毫升药液含生药量为0.6‑1克,分装为50毫升/瓶即得。本发明通过体内裸鼠移植瘤试验和免疫低下小鼠试验研究,试验结果表明本发明能抑制NCI‑H460细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与清除自由基、提高TNF‑α和IL‑6的分泌、并通过上调Bax、Caspase‑3、Caspase‑9蛋白及基因的表达,下调Bcl‑2和VEGF的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。本发明具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用,其抗肿瘤作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡和提高机体免疫功能有关。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液,本发明在试验实施例中的名称为海金花二号,属于药物制备技术领域。
背景技术
目前,肿瘤的病因病理还处于探索阶段,在临床上采取的治疗手段以手术为主,通过切除肿瘤达到治疗的目的,然而,肿瘤的特殊性在于肿瘤细胞具有转移性,能够在机体内转移,这就是肿瘤对人体的最大危害性,为了防止肿瘤细胞的转移,临床上在手术切除肿瘤后,还要配合进行放疗、化疗,以求完全清除肿瘤细胞,降低肿瘤细胞转移的机率。放疗、化疗虽能杀灭癌细胞,但由于肿瘤与正常组织器官并存,甚至共同构成一个复杂的整体,在放疗、化疗的同时,使正常组织细胞受到损害,诱发肠胃反应、骨髓抑制和肝肾心脏功能损害,使病人身体更加虚弱,对人体免疫系统造成伤害,有时甚至得不偿失。在西医临床上排除手术只使用药物,有效率并不高,不良反应巨大,肿瘤复杂的发病机理,使得目前选择化学药物治疗肿瘤还不是最理想的手段。或者说化学药物在治疗肿瘤中还是存在着令人尴尬的状况。常规的化学药品治疗方法难以阻止肿瘤细胞转移并且有很大的毒副作用,这是目前对肿瘤治疗中存在的主要问题。中医药是一巨大宝库,长期以来中医理论的发展为治疗肿瘤打下了基础,中医理论所阐述的瘰疬,瘿瘤,乳痈、痈疽,症瘕,痰凝瘀血阻滞形成的痰核,都是引发肿瘤的原因,中医对上述病症有有效的治疗方法及药物,众所周知,每一味中草药中都含有复杂的成分 ,少则十几种,多则几百种,筛选合理的中药制备成抗肿瘤药物,是值得努力的方向,事实上目前许多中药制备的药物,在治疗肿瘤中发挥了重要的作用。通过筛选具有抗肿瘤作用的中药,制备成适合口服的溶液剂,对于肿瘤的治疗是一种新的探索。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液,以海藻、淫羊藿、冰糖草、夏枯草和疣柄摩芋为主要原料,制备成中药溶液,以抑制人体肿瘤细胞的生长。
为了实现上述目的,本发明采取了下述具体技术方案,一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液,由下述重量份原料制备:
(一)配方:
海藻 4-6重量份 淫羊藿5-7重量份 疣柄魔芋15-18重量份
夏枯草3-5重量份 冰糖草2-5重量份 大枣1-3重量份
杞子1-3重量份
(二)制备方法:
(1)提取有效成分:海藻、淫羊藿、疣柄魔芋、夏枯草、大枣、杞子粉碎为粒径为5-10毫米的粗粒,加8-10倍量水浸泡1小时,加热至沸提取2小时,过滤得滤液,药渣如前述重复煎煮二次,过滤,得滤液,合并三次滤液备用的;
(3)滤液浓缩:取上述滤液浓缩,至80℃热测相对密度是1.05-1.08得到浓缩液备用;
(4)配液:对上述浓缩液调配,调整至每毫升药液含生药量为0.6-1克,分装为50毫升/瓶即得。
所述海藻、淫羊藿、夏枯草、大枣、杞子都是中国药典收载的品种,均指的是饮片;
所述疣柄魔芋Amorphophallusvirosus N. E. Brown,指的是天南星科魔芋属植物疣柄摩芋的干燥茎叶;
所述冰糖草Gamcaujdoz指的是玄参属植物冰糖草的干燥全草。
采取上述措施的本发明,原料的性味、功能主治是:
海藻
性味:性寒,味苦、咸。
功效与作用:软坚散结、消痰、利水。属化痰止咳平喘药下属分类的清化热痰药。
淫羊藿
性味:辛、温。
功能主治:补肝肾,强筋骨,助阳益精,祛风湿。
疣柄摩芋
性味:味辛;苦;性寒;有毒;功能主治:化痰消积;解毒散结;行瘀止痛;主痰嗽;积滞;疟疾;瘰疬;症瘕;跌打损伤;痈肿;疔疮;丹毒;烫火伤;蛇咬伤。
冰糖草
性味:甘,凉
功能主治:清热利湿,疏风止痒。用于感冒发热,肺热咳嗽,肠炎,细菌性痢疾,小便不利;外用治痱子,皮肤湿疹。
夏枯草
性味:苦辛,寒
功能主治:清肝,散结。治瘰疬,瘿瘤,乳痈,乳癌,目珠夜痛,羞明流泪,头目眩晕,口眼歪斜,筋骨疼痛,肺结核,急性黄疸型传染性肝炎,血崩,带下。
上述原料一起制备成溶液剂后,主治痰凝瘀血阻滞之病症,本发明中的淫羊藿是中国传统补肾壮阳药,随着当代药理研究的深入开展,发现其具有广泛的药理活性。目前淫羊藿常常用于生殖系统、骨骼系统、抗肿瘤等方面。夏枯草也具有上千年的用药史对视力模糊,头疼头晕,结节肿胀等症状具有较好治疗作用。疣柄摩芋能化痰消积、解毒散结、行瘀止痛;用于治疗瘰疬、症瘕,而中医所述的瘰疬、症瘕指的就是现代医学所指的肿瘤。大枣和杞子具有补益作用。上述七种原料的合理配伍,具有了散结,消除瘰疬痰核、治疗痈疽疮毒的作用。
本发明通过体内裸鼠移植瘤试验和免疫低下小鼠试验研究,探究了本发明对人肺癌细胞和对免疫低下小鼠的作用,所述试验研究由广西医科大学药学院完成,在试验结果中本发明的试验号为海金花2号。经试验得到了如下结果:
1、成功建立NCI-H460肺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率100%。
2、CTX组和海金花2号高、中剂量组裸鼠移植瘤的体积和瘤重均明显比模型组小(P<0.01或P<0.05);CTX组和高中低3个剂量的海金花2号组的抑瘤率分别达到59.77%、58.12%、48.21%、40.56%。
3、CXT组和海金花2号各给药组荷瘤裸鼠血清中的TNF-α含量显著比模型组高(P<0.05或P<0.01), IL-6水平明显比模型组高(P<0.01)。
4、各给药组的瘤组织中MDA含量与模型组相比显著降低(P<0.05或P<0.01);SOD活力比模型组显著增高(P<0.05或P<0.01)。
5、免疫组化结果显示:相比模型组,CXT组和高、中剂量组均能明显提高瘤组织中的Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白的表达(P<0.01),且能能明显降低Bcl-2蛋白在瘤组织中的表达(P<0.05或P<0.01),并且存在剂量依赖型关系;CXT组的P53蛋白表达量较模型组有显著的提高(P<0.01),海金花2号各给药组与模型组相比均没有明显差异(P>0.05)。
6、RT-PCR结果显示:CXT组和高、中剂量组的caspase-3基因、caspase-9、Bax基因的表达较模型组均有明显上调(P<0.05或P<0.01),并且对Bcl-2、VEGF的表达具有明显下调的作用(P<0.05或P<0.01)。低剂量组P53、VEGF基因的表达量较模型组有明显的下调(P<0.05或P<0.01)。
7、海金花2号低剂量组对小鼠免疫器官指数、迟发性变态反应、单核-巨噬细胞功能、血清溶血素水平和细胞因子的作用无明显影响;中剂量组对小鼠的迟发性变态反应和血清溶血素水平有明显影响(P<0.05或P<0.01);高剂量组对小鼠免疫器官指数、迟发性变态反应、单核-巨噬细胞功能、血清溶血素水平均有显著影响(P<0.05或P<0.01),也可以显著提高免疫低下小鼠的IgG、IL-2水平(P<0.05或P<0.01)。
8、海金花2号具有提高免疫低下小鼠免疫功能的作用。
结论:海金花2号能抑制NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与清除自由基、提高TNF-α和IL-6的分泌、并通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表达,下调Bcl-2和VEGF的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。海金花2号具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用,其抗肿瘤作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡和提高机体免疫功能有关。
具体实施方式
实施例1
(一)配方:
海藻 4公斤 淫羊藿5公斤 疣柄魔芋15公斤
夏枯草3公斤 冰糖草2公斤 大枣1公斤
杞子1公斤
(二)制备方法:
(1)提取有效成分:海藻、淫羊藿、疣柄魔芋、夏枯草、大枣、杞子粉碎为粒径为5-10毫米的粗粒,加入240公斤水浸泡1小时,加热至沸提取2小时,过滤得滤液,药渣如前述重复煎煮二次,过滤,得滤液,合并三次滤液备用的;
(3)滤液浓缩:取上述滤液浓缩,至80℃热测相对密度是1.05-1.08得到浓缩液备用;
(4)配液:取上述浓缩液加水加热调配,调配好后使得溶液量为51000-52000毫升,这样得到每毫升药液含生药量为0.6克,分装为50毫升/瓶即得。
实施例2
(一)配方:
海藻 6公斤 淫羊藿7公斤 疣柄魔芋18公斤
夏枯草5公斤 冰糖草5公斤 大枣3公斤
杞子3公斤
(二)制备方法:
(1)提取有效成分:海藻、淫羊藿、疣柄魔芋、夏枯草、大枣、杞子粉碎为粒径为5-10毫米的粗粒,加470公斤水浸泡1小时,加热至沸提取2小时,过滤得滤液,药渣如前述重复煎煮二次,过滤,得滤液,合并三次滤液备用的;
(3)滤液浓缩:取上述滤液浓缩,至80℃热测相对密度是1.05-1.08得到浓缩液备用;
(4)配液:取上述浓缩液加水加热调配,调配好后使得溶液量为47000毫升,这样得到每毫升药液含生药量为1克,分装为50毫升/瓶即得。
实施例3
(一)配方:
海藻5公斤 淫羊藿6公斤 疣柄魔芋17公斤
夏枯草4公斤 冰糖草4公斤 大枣2公斤
杞子2公斤
(二)制备方法:
(1)提取有效成分:海藻、淫羊藿、疣柄魔芋、夏枯草、大枣、杞子粉碎为粒径为5-10毫米的粗粒,加360公斤水浸泡1小时,加热至沸提取2小时,过滤得滤液,药渣如前述重复煎煮二次,过滤,得滤液,合并三次滤液备用的;
(3)滤液浓缩:取上述滤液浓缩,至80℃热测相对密度是1.05-1.08得到浓缩液备用;
(4)配液:取上述浓缩液加水加热调配,调配好后使得溶液量为45000毫升,这样得到每毫升药液含生药量为0.8克,分装为50毫升/瓶即得。
试验实施例1
本发明在本实施例中的试验号为海金花2号,本实施例由广西医科大学药学院实施,本实施例进行了海金花2号对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的抑制作用研究,采取空白对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,CTX组注射剂量为0.025 g/ kg的环磷酰胺,海金花2号的三个剂量组分别以9.6 g/ kg、4.8g/ kg、2.4 g/ kg的剂量灌胃。CTX阳性组隔天给药一次,其他组每天一次。给药13天后,处死裸鼠,剥离瘤体待用。肿瘤体积计算公式: V=ab2/2其中a为长径,b为短径。
本实施例试验了海金花2号对裸鼠移植瘤生长情况的影响;
试验了海金花2号对对荷瘤裸鼠血清IL-6、TNF-α含量的影响;
试验了海金花2号对对荷瘤裸鼠瘤组织中MDA含量、SOD活力的影响;
试验了海金花2号对对荷瘤裸鼠瘤组织病理形态的影响;
试验了海金花2号对荷瘤裸鼠瘤组织中Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、P53等蛋白表达的影响;
试验了海金花2号对对荷瘤裸鼠瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的影响;
试验了海金花2号对对荷瘤裸鼠瘤组织中P53蛋白的影响;
试验了海金花2号对荷瘤裸鼠瘤组织中Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、P53、以及VEGF基因的影响。
上述试验的具体实施过程按常规试验方法进行,不再赘述。本实施例采用适龄裸鼠来建立肺癌移植瘤模型,当裸鼠被接种部位的肿胀褪去后,开始长出明显的硬结,且每天都在以肉眼可见的速度变大时,提示造模成功。给药结束后,通过剥离瘤组织称重,计算抑瘤率。结果显示,CXT组和海金花2号高、中、低剂量组的抑瘤率分别达到59.77%、58.12%、48.21%、40.56%。根据《现代肿瘤治疗药物学》关于抗肿瘤中药有效的标准:抑瘤率>30%为有效,可初步得出结论:高、中剂量的海金花2号对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用。
我们通过ELISA法检测了裸鼠血清的TNF-α和IL-6含量。结果显示,CXT组和海金花2号各给药组荷瘤裸鼠血清中的TNF-α含量显著比模型组高(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。提示海金花2号是通过增加TNF-α分泌来达到抑制肿瘤生长的作用。裸鼠作为无胸腺的裸小鼠,它仍然拥有来自于骨髓的巨噬细胞并且可以正常分泌B淋巴细胞,在实验过程中,我们发现CXT组和海金花2号各给药组荷瘤裸鼠血清中的IL-6水平较模型组均有提高(P<0.01或P<0.001),我们推测这可能是海金花2号触发了裸鼠的以B淋巴细胞介导的体液免疫反应,由此来通过提高自身的免疫功能来间接达到抑制肿瘤细胞生长的作用。
各给药组的瘤组织中MDA含量与模型组相比显著降低(P<0.01或P<0.05);CTX组和复方淫羊藿高、中剂量组肿瘤组织中SOD活力比模型组显著增高(P<0.05或P<0.001)。提示海金花2号对NCI-H460肺癌细胞的抑制作用机制可能与清除裸鼠体内的自由基含量有关。
免疫组化结果表明:相比模型组,CXT组和高、中剂量组均能明显提高瘤组织中的Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达(P<0.01或P<0.001)。CXT组和给药高、中剂量组的BAX蛋白的表达均显著高于模型组(P<0.001),且能能明显降低Bcl-2蛋白在瘤组织中的表达(P<0.05、P<0.01或P<0.001),并且存在剂量依赖型关系。CXT组的P53蛋白表达量较模型组有显著的提高(P<0.001),海金花2号各给药组与模型组相比均没有明显差异(P>0.05)。
RT-PCR结果显示:CXT组和高、中剂量组的Caspase-3基因和Caspase-9基因的表达较模型组均有明显上调(P<0.05或P<0.01)。环磷酰胺组和高、中剂量组Bax基因的表达较模型组均有明显上调,并且对Bcl-2的表达具有明显下调的作用(P<0.05或P<0.01)。低剂量组P53基因的表达量叫模型组有明显的下调(P<0.05),其它各组对P53基因表达的作用无统计学意义(P>0.05)。提示海金花2号通过上调Caspase-3、Caspase-9、Bax并且下调Bcl-2的蛋白以及基因来促进NCI-H460肺癌细胞的凋亡。
采用RT-PCR来检测VEGF基因在瘤组织中的含量,结果显示:CXT组和各给药组VEGF基因的表达较模型组均有下调,且下调具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。提示海金花2号通过抑制VEGF的表达来达到抗肿瘤的作用。
综上所述,海金花2号能抑制对NCI- H460细胞裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能与清除自由基、提高TNF-α和IL-6的分泌、并通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表达,下调Bcl-2和VEGF的表达来诱导肿瘤细胞凋亡有关。
试验实施例2
本发明在本实施例中的试验号为海金花2号,本实施例由广西医科大学药学院实施,本实施例进行了海金花2号增强免疫低下小鼠免疫功能的作用研究,
采取腹腔注射环磷酰胺(50mg/kg)造模,于造模后一周,随机分为4组:模型组、海金花2号高(9.6g/kg)、中(4.8g/kg)、低剂量组(2.4g/kg),灌胃给药,每天1次。另取8只不做处理,做为空白对照组。
本实施例试验了海金花2号对免疫功能低下小鼠体重和免疫器官指数的影响;
试验了海金花2号对免疫功能低下小鼠单核-巨噬细胞功能的影响;
试验了海金花2号对免疫功能低下小鼠迟发性变态反应所致足趾增厚的影响;
试验了海金花2号对免疫功能低下小鼠血清溶血素水平的影响。
上述试验的具体实施过程按常规试验方法进行,不再赘述。本实施例采用环磷酰胺来建立免疫低下小鼠模型,通过测定实验小鼠的胸腺指数和脾脏指数来判定模型是否建立成功。结果显示注射环磷酰胺的各组小鼠胸腺指数较空白组相比均明显降低(P<0.01),提示造模成功。但在比较各组小鼠的脾脏指数高低水平时发现,注射环磷酰胺的各组小鼠的脾脏指数均明显高于空白组(P<0.01)。
细胞免疫实验结果表明,海金花2号高中低剂量组对迟发型变态反应所致足趾厚度均有一定程度增加的作用,其中高剂量组有统计学意义(P<0.05),说明海金花2号对T淋巴细胞的增殖能力具有促进作用。
碳廓清实验结果表明,说明海金花2号对单核-巨噬细胞功能有一定的提高作用。
体液免疫实验结果发现海金花2号高中低剂量组小鼠的溶血素水平较模型组有一定的提高,其中高、中剂量组有统计学意义(P<0.01),说明海金花2号对体液免疫亦有一定的提高作用。
采用ELISA法测定了小鼠血清的IL-2、IgG和IFN-γ的含量,结果显示,海金花2号的高剂量组能显著提高免疫低下小鼠的IgG、IL -2水平(P<0.05或P<0.01)。模型组小鼠的IFN-γ含量与空白组和各给药组均没有明显的差别(P>0.05)。提示海金花2号可以提高小鼠的IgG、IL-2水平。
根据《保健食品检验与评价技术规范》规定,增强免疫力功能判定方法如下:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核一巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性,可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用,若只进行以上四个方面的其中一个实验,则需要至少两个剂量组有效即判为阳性。
由于本次实验只分别在以上四个方面中选了其中的一个实验来进行检测,结果发现在迟发性变态反应试验和溶血素测定试验中均有高、中两个剂量组呈现阳性结果,因此可认为海金花2号具有增强免疫功能的作用。
由上述两个试验实施例的结果表明:
1、本实验成功建立了NCI-H460细胞裸鼠移植瘤模型,证实了海金花2号可抑制NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的生长。
2、海金花2号抑制NCI-H460细胞裸鼠移植瘤生长的机制可能与清除自由基、提高TNF-α和IL-6的分泌、并通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表达,下调BCL-2和VEGF的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。
3、海金花2号具有增强免疫功能的作用。
4、海金花2号的抗肿瘤作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡和提高机体免疫功能有关。
Claims (1)
1.一种具有抑制肿瘤细胞生长的中药溶液,其特征在于所述中药溶液由下述重量份原料及方法制备:
(一)配方:
海藻 4-6重量份 淫羊藿5-7重量份 疣柄魔芋15-18重量份
夏枯草3-5重量份 冰糖草2-5重量份 大枣1-3重量份
杞子1-3重量份
(二)制备方法:
(1)提取有效成分:海藻、淫羊藿、疣柄魔芋、夏枯草、冰糖草、大枣、杞子粉碎为粒径为5-10毫米的粗粒,加8-10倍量水浸泡1小时,加热至沸提取2小时,过滤得滤液,药渣如前述重复煎煮二次,过滤,得滤液,合并三次滤液备用的;
(2)滤液浓缩:取上述滤液浓缩,至80℃热测相对密度是1.05-1.08得到浓缩液备用;
(3)配液:对上述浓缩液调配,调整至每毫升药液含生药量为0.6-1克,分装为50毫升/瓶即得。
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复方淫羊藿制剂对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对免疫低下小鼠的作用研究;梁丽莉;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20190815(第8期);全文 * |
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