CN115089629B - 一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液及其制备方法，包括：将新鲜采集的五指毛桃果实预冷处理后在真空冻干机中冻干，接着将五指毛桃果实研磨、过筛，得到五指毛桃冻干果实粉；然后以乙醇为溶剂，对五指毛桃冻干果实粉进行超声提取、离心，得到五指毛桃冻干果实黄酮提取液。本发明选用五指毛桃的果实作为黄酮提取的原料，其在黄酮种类和含量上均高于药用部位五指毛桃的根，从而可实现对五指毛桃非药用部位的有效开发与利用。采用冻干技术能防止黄酮的醛基基团在高温中发生的结构转变，进而避免黄酮等活性成分的大量损失。超声辅助提取技术能破坏细胞膜，加快活性成分在溶剂的扩散速度，从而有效提高五指毛桃果实黄酮的提取效率。

Description

一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液及其制备方法
技术领域
本发明涉及黄酮提取技术领域，且特别涉及一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液及其制备方法。
背景技术
五指毛桃是广东岭南地区的地道中药材，又名五爪龙、亚桠木、五爪毛桃、五爪牛奶、土黄芪、南芪等，具有很好的益气健脾功效，有“广东人参”之美誉。五指毛桃为岭南常用草药，以桑科榕属植物粗叶榕的根入药，其性平，味甘、辛，有健脾补肺、利湿舒筋之功，用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿痹痛、产后无乳等症，在广东民间使用历史悠久。
目前对五指毛桃的开发多集中在根部，对其果实的利用极少，也没有相关的报道。如能对其果实等非药用部分进行有效开发和利用，对于五指毛桃实现高值化利用以及深入研究五指毛桃的功效等具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液，该五指毛桃冻干果实黄酮提取液的黄酮种类和含量均高于五指毛桃根的黄酮提取液，是对其非药用部位的有效开发和利用。
本发明的另一目的在于提供一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液的制备方法，该方法以五指毛桃果实作为黄酮提取原料，并采用冻干技术和超声辅助提取技术，从而最大限度保留其活性成分以及有效提高五指毛桃果实中黄酮的提取效率，操作简单且参数可控，适用于工业化大规模生产。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液的制备方法，包括以下步骤：
S1、五指毛桃冻干果实预处理：将新鲜采集的五指毛桃果实预冷处理后在真空冻干机中冻干，然后将所述五指毛桃果实研磨、过筛，得到五指毛桃冻干果实粉；
S2、以乙醇为溶剂，对所述五指毛桃冻干果实粉进行超声提取、离心，得到五指毛桃冻干果实黄酮提取液。
本发明提出一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液，其根据上述的制备方法制得。
本发明实施例的五指毛桃冻干果实黄酮提取液及其制备方法的有益效果是：
本发明选用五指毛桃的果实作为黄酮提取的原料，其在黄酮种类和含量上均高于药用部位五指毛桃的根，从而实现对五指毛桃非药用部位的有效开发与利用。本发明采用冻干技术和超声波辅助提取技术对五指毛桃果实内的黄酮进行提取。其中，冻干技术能防止黄酮的醛基基团在高温中发生的结构转变，进而避免黄酮等活性成分在干制过程中的大量损失。超声辅助提取技术能破坏细胞膜，加快活性成分在溶剂的扩散速度，从而有效提高五指毛桃果实黄酮的提取效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为芦丁标准曲线图；
图2为本发明实施例1的五指毛桃冻干果实黄酮提取液、对比例1的五指毛桃冻干根黄酮提取液和对比例2的五指毛桃冻干茎黄酮提取液的总黄酮含量对比图；
图3为五指毛桃根和果实中含有的黄酮化合物的集合图；
图4为实施例1的五指毛桃冻干果实和对比例1的五指毛桃冻干根中提取的黄酮类化合物种类对比图；
图5为本发明的五指毛桃冻干果实黄酮提取液的制备流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
参照图5所示，本发明实施例提供的一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液的制备方法，包括以下步骤：
S1、五指毛桃冻干果实预处理：将新鲜采集的五指毛桃果实在超低温冰箱中预冷，再使用真空冻干机中冻干，然后将所述五指毛桃果实研磨、过筛，得到五指毛桃冻干果实粉。具体地，将五指毛桃果实研磨后过60目筛，即可得到五指毛桃冻干果实粉。目前，对五指毛桃的开发多集中在根部，对果实的利用极少。本发明以五指毛桃果实为黄酮提取的主要部位，从而开发五指毛桃果实冻干提取产品，以为五指毛桃果实中黄酮的研究提供基础。
传统的高温烘干方式会使黄酮物质氧化、分解，而使用冻干技术能防止黄酮的醛基基团在高温中发生的结构转变，进而避免黄酮在干制过程中的大量损失。因此，与采用烘干或风干的处理方式相比，采取冻干方式处理五指毛桃果实可以减少活性成分的损失，能最大限度地保留材料原有的形态结构、色泽和有效成分。
进一步地，在本发明较佳实施例中，所述预冷处理的温度为-75～-85℃，预冷处理时间为1.5～2.5h。
进一步地，在本发明较佳实施例中，所述真空冻干机的最低温度为-40～-50℃，冻干时间为8～12h。优选地，经过-80℃预冷处理2h后，真空冻干机的最低温度为-45℃，冻干时间为10h。
S2、以乙醇为溶剂，对所述五指毛桃冻干果实粉进行超声提取、离心，得到五指毛桃冻干果实黄酮提取液。采用超声提取能够有效提高黄酮的提取效率。
进一步地，在本发明较佳实施例中，所述乙醇的质量百分比为55～65％。
进一步地，在本发明较佳实施例中，所述五指毛桃冻干果实粉与所述乙醇的料液比为1：12～17(g/mL)。优选地，料液比为1:15。
进一步地，在本发明较佳实施例中，超声提取的温度为65～75℃，提取时间为20～40min。优选地，提取温度为70℃，提取时间为30min。
进一步地，在本发明较佳实施例中，所述离心的具体步骤包括：在转速为11000～13000rpm、温度为3.5～4.5℃下离心10～20min。优选地，转速为12000rpm、温度为4℃下离心15min。
本发明选用五指毛桃的果实作为黄酮提取的原料，其在黄酮种类和含量上均高于药用部位五指毛桃的根，从而实现对五指毛桃非药用部位的有效开发与利用。本发明采用冻干技术和超声波辅助提取技术对黄酮进行提取。其中，冻干技术能防止黄酮的醛基基团在高温中发生的结构转变，进而避免黄酮等活性成分在干制过程中的大量损失。超声辅助提取技术能破坏细胞膜，加快活性成分在溶剂的扩散速度，从而有效提高五指毛桃果实黄酮的提取效率。
本发明还提供了一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液，其根据上述的制备方法制得。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供的一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液，其根据以下方法制备得到：
(1)将新鲜采集的五指毛桃果实使用超低温冰箱，-80℃预冷处理2h后，再使用真空冻干机在最低温为-45℃条件下冻干10h，然后磨成细粉过60目筛备用，得到五指毛桃冻干果实粉。
(2)采用超声辅助乙醇提取法，以60％乙醇为溶剂，取五指毛桃冻干果实粉1g，料液比为1:15，在70℃下超声提取30min，然后在转速为12000rpm、温度为4℃条件下离心15min，得到五指毛桃冻干果实黄酮提取液。
对比例1
本实施例中提供了一种五指毛桃冻干根黄酮提取液，其根据以下方法制备得到：
(1)将新鲜采集的五指毛桃根使用超低温冰箱，-80℃预冷处理2h后，再使用真空冻干机在最低温为-45℃条件下冻干10h，然后磨成细粉过60目筛备用，得到五指毛桃冻干根粉。
(2)采用超声辅助乙醇提取法，以60％乙醇为溶剂，取五指毛桃冻干根粉1g，料液比为1:15，在70℃下超声提取30min，然后在转速为12000rpm、温度为4℃条件下离心15min，得到五指毛桃冻干根黄酮提取液。
对比例2
本实施例中提供了一种五指毛桃冻干茎黄酮提取液，其根据以下方法制备得到：
(1)将新鲜采集的五指毛桃茎使用超低温冰箱，-80℃预冷处理2h后，再使用真空冻干机在最低温为-45℃条件下冻干10h，然后磨成细粉过60目筛备用，得到五指毛桃冻干茎粉。
(2)采用超声辅助乙醇提取法，以60％乙醇为溶剂，取五指毛桃冻干茎粉1g，料液比为1:15，在70℃下超声提取30min，然后在转速为12000rpm、温度为4℃条件下离心15min，得到五指毛桃冻干茎黄酮提取液。
试验例1
本试验例分别对实施例1的五指毛桃冻干果实黄酮提取液、对比例1的五指毛桃冻干根黄酮提取液和对比例2的五指毛桃冻干茎黄酮提取液的黄酮含量进行测定，具体步骤包括：
(1)芦丁标准曲线绘制：精密称量芦丁标准品0.0200g，加入一定量60％乙醇溶解，制成浓度为0.2mg/mL的芦丁标准溶液100mL，摇匀备用。取8只容量为20mL的试管标号1-8。采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法，按照下表1处理每只试管。以60％乙醇做以上处理作为空白对照组，在最大吸收波长为510nm处测定吸光值。以芦丁浓度(mg/mL)为横坐标，吸光值为纵坐标做标准曲线。结果如图1所示。
表1芦丁标准曲线试剂添加表
(2)根据NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法处理样品，然后采用紫外分光法测定五指毛桃冻干果实黄酮提取液、五指毛桃冻干根黄酮提取液和五指毛桃冻干茎黄酮提取液在最大吸收波长为510nm处的吸光值。最后根据标准曲线计算得出黄酮浓度C以及根据公式计算得出总黄酮含量。以上步骤均有三个生物学重复。
式中C——被测样品黄酮浓度(mg/mL)
D——稀释倍数
V——被测样品最初被定容的体积(mL)
m——样品质量(g)
如图2所示为实施例1的五指毛桃冻干果实黄酮提取液、对比例1的五指毛桃冻干根黄酮提取液和对比例2的五指毛桃冻干茎黄酮提取液的总黄酮含量对比图。从图2可以看出，根、茎、果实中总黄酮含量分别为:6.829mg/g、2.496mg/g、8.990mg/g。三个不同部位总黄酮含量的结果显示，果实中的总黄酮含量最高，且显著高于根与茎(P＜0.05)，分别为根的1.3倍、茎的3.6倍。根中的总黄酮含量显著高于茎(P＜0.05)，为茎总黄酮的2.7倍。
试验例2
本试验例采用色谱质谱采集对实施例1的五指毛桃冻干果实黄酮提取液以及对比例1的五指毛桃冻干根黄酮提取液进行黄酮种类测定。如表2所示为五指毛桃冻干根中的黄酮化合物种类。表3所示为五指毛桃冻干果实中的黄酮化合物种类
表2五指毛桃根中黄酮类化合物种类
表3五指毛桃果实中黄酮类化合物种类
从表2可以看出，五指毛桃根中检测到71种黄酮类化合物。其中，查尔酮3种，二氢黄酮7种，二氢黄酮醇5种，花青素1种，黄酮21种，黄酮醇15种，黄铜碳糖苷10种，黄烷醇类6种，异黄酮3种。根中未检测到的黄酮类化合物包括：查尔酮1种，橙黄酮1种，二氢黄酮3种，二氢异黄酮2种，花青素4种，黄酮20种，黄酮醇19种，黄铜碳糖苷4种，异黄酮10种。
从表3可以看出，五指毛桃果实中检测到132种黄酮类化合物。其中，查尔酮5种，橙黄酮1种，二氢黄酮10种，二氢黄酮醇5种，二氢异黄酮2种，花青素5种，黄酮40种，黄酮醇32种，黄铜碳糖苷14种，黄烷醇类5种，异黄酮13种。果实中未检测到的黄酮类化合物(4种)包括：二氢黄酮1种，黄酮1种，黄酮醇1种，黄烷醇类1种。
综上，五指毛桃根和果实中共有136种黄酮类化合物被检测。如图3所示为五指毛桃根和果实中含有的黄酮化合物的集合图。其中，同时存在于根和果实中的黄酮类化合物有68种(图3所示的A)，仅存在于果实中的有64种(图3所示的C)，仅存在于根中的有3种(图3所示的C)。由此可知，果实中可检测到更多种类的黄酮类化合物。
如图4所示为实施例1的五指毛桃冻干果实和对比例1的五指毛桃冻干根中黄酮类化合物种类对比图。从图4可以看出，五指毛桃根中的查尔酮、橙黄酮、二氢黄酮、二氢异黄酮、花青素、黄酮、黄酮醇、黄酮碳糖苷、异黄酮种类较果实中少，二氢黄酮醇种类相等，黄烷醇类物质的种类较果实中多。
从色谱质谱采集结果还可得知：五指毛桃根中有19种黄酮类物质的表达高于果实，包括查尔酮2种，二氢黄酮1种，二氢黄酮醇1种，花青素1种，黄酮9种，黄酮醇2种，黄烷醇类2种，异黄酮1种。49种黄酮类化合物的表达量低于果实，包括查尔酮1种，二氢黄酮5种，二氢黄酮醇4种，黄酮11种，黄酮醇13种，黄铜碳糖苷10种，黄烷醇类3种，异黄酮2种。
在五指毛桃根和果实表达差异的黄酮类化合物中，22种物质表达差异极显著(P<0.01)，其中，二氢黄酮1种，二氢黄酮醇3种，黄酮6种，黄酮醇7种，黄酮碳糖苷3种，异黄酮2种。19种物质表达差异显著(P<0.05)，其中，查尔酮1种，二氢黄酮1种，黄酮5种，黄酮醇5种，黄酮碳糖苷6种，黄烷醇类1种。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (5)

1.一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、五指毛桃冻干果实预处理：将新鲜采集的五指毛桃果实预冷处理后在真空冻干机中冻干，然后将所述五指毛桃果实研磨、过筛，得到五指毛桃冻干果实粉；
S2、以乙醇为溶剂，对所述五指毛桃冻干果实粉进行超声提取、离心，得到五指毛桃冻干果实黄酮提取液；
其中，步骤S1中，所述预冷处理的温度为-75～-85℃，预冷处理时间为1.5～2.5h；
所述真空冻干机的最低温度为-40～-50℃，冻干时间为8～12h；
步骤S2中，所述乙醇的质量百分比为55～65％。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述五指毛桃冻干果实粉与所述乙醇的料液比为1：12～17(g/mL)。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，超声提取的温度为65～75℃，提取时间为20～40min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述离心的具体步骤包括：在转速为11000～13000rpm、温度为3.5～4.5℃下离心10～20min。
5.一种五指毛桃冻干果实黄酮提取液，其特征在于，根据权利要求1～4任意一项所述的制备方法制得。
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