CN115068544A - 一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法 - Google Patents

一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115068544A
CN115068544A CN202210783818.XA CN202210783818A CN115068544A CN 115068544 A CN115068544 A CN 115068544A CN 202210783818 A CN202210783818 A CN 202210783818A CN 115068544 A CN115068544 A CN 115068544A
Authority
CN
China
Prior art keywords
resin
solution
eluent
macroporous adsorption
macroporous
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210783818.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN115068544B (zh
Inventor
杨静
张思瑶
武力扬
段安邦
李娜娜
刘永平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanxi Jingxi Biotechnology Co ltd
North University of China
Original Assignee
Shanxi Jingxi Biotechnology Co ltd
North University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanxi Jingxi Biotechnology Co ltd, North University of China filed Critical Shanxi Jingxi Biotechnology Co ltd
Priority to CN202210783818.XA priority Critical patent/CN115068544B/zh
Publication of CN115068544A publication Critical patent/CN115068544A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115068544B publication Critical patent/CN115068544B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/889—Arecaceae, Palmae or Palmaceae (Palm family), e.g. date or coconut palm or palmetto
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法，属于分离提纯技术领域。本发明以AB‑8大孔吸附树脂作为吸附剂进行动态吸附，其对椰衣中的酚类化合物的选择性高，利用乙醇水溶液作为洗脱剂，能够有效地将酚类化合物分离。实施例结果表明，在吸附柱高径比为15：3的条件下，原液以5BV/h的速度上样，用60％乙醇洗脱，洗脱速度为0.5BV/h时，蒸馏水洗脱杂质用量为2BV，洗脱液用量为4BV时，纯化后的椰衣总酚含量达到757.84±10mgGAE/gdw，为纯化前的2.9倍；黄酮含量达到1255.41±42.49mgRutin/gdw，为纯化前的2.1倍。

Description

一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法
技术领域
本发明涉及分离提纯技术领域，特别涉及一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法。
背景技术
酚类化合物是存在于植物食用和非食用部位的主要次生代谢物，包含黄酮、单宁、花青素等化合物。它们具有抗氧化、抗肿瘤和抗衰老的特性。目前从植物材料中提取天然酚类化合物的重要性正在引起科学家、食品制造商和消费者的兴趣。研究表明椰衣、椰壳等废弃物中含有酚类化合物，但分离、提纯的难度较高。
现有技术CN113350434B公开了一种从椰衣中提取酚类化合物的方法，采用超声-均质辅助法进行提取，以丙酮作为提取溶剂，其对总黄酮的提取含量达551.99±12.69mgRutin/g dw，其活性成分的含量还有待进一步提高。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法，本发明方法能够有效提取并纯化椰衣酚类化合物，所得椰衣酚类化合物纯化物具有高总酚含量和总黄酮含量。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法，包括以下步骤：
(1)将椰衣与提取溶剂混合，依次进行超声、均质处理和固液分离，得到提取液；所述提取溶剂包括有机溶剂和水，所述提取溶剂中有机溶剂的体积分数为50～70％；
(2)将所述提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％，得到上样液；
(3)使用大孔吸附树脂柱对所述上样液进行动态吸附，待饱和吸附后依次进行水洗和洗脱剂解吸，得到解吸液；
所述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂；
所述洗脱剂为乙醇水溶液；
(4)去除所述解吸液中的洗脱剂，得到椰衣酚类化合物纯化物。
优选的，所述AB-8大孔吸附树脂的比表面积≥500m2/g，粒径为0.315～1.25mm。
优选的，所述大孔吸附树脂柱的高径比为10～20:3。
优选的，所述动态吸附时，所述上样液的上样速度为4～6BV/h。
优选的，所述乙醇水溶液的体积浓度为50～70％。
优选的，所述水洗的速率为0.5～4BV/h，所述水的用量为1～2BV；
所述洗脱剂解吸的速率为0.5～4BV/h，所述洗脱剂的用量为4～5BV。
优选的，得到所述上样液后，还包括对所述上样液进行稀释，所述稀释的倍数为2～4倍。
优选的，所述动态吸附前，还包括对大孔吸附树脂进行预处理，所述预处理包括以下步骤：
将大孔吸附树脂依次进行乙醇浸泡和水洗，得到醇处理树脂；
将所述醇处理树脂依次进行HCl溶液浸泡和水洗，得到酸处理树脂；
将所述酸处理树脂依次进行NaOH溶液浸泡、水洗和干燥。
优选的，所述提取溶剂中的有机溶剂为丙酮、甲醇和乙醇中的一种或几种。
优选的，所述超声的功率为220～230W，时间为75～85min；
所述均质处理的转速为8000～12000rpm，时间为4～6min。
本发明提供了一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法，包括以下步骤：(1)将椰衣与提取溶剂混合，依次进行超声、均质处理和固液分离，得到提取液；所述提取溶剂包括有机溶剂和水，所述提取溶剂中有机溶剂的体积分数为50～70％；(2)将所述提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％，得到上样液；(3)使用大孔吸附树脂柱对所述上样液进行动态吸附，待饱和吸附后依次进行水洗和洗脱剂解吸，得到解吸液；所述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂；所述洗脱剂为乙醇水溶液；(4)去除所述解吸液中的洗脱剂，得到椰衣酚类化合物纯化物。本发明以有机溶剂和水作为提取剂，通过超声和均质处理，能够对椰衣中的酚类化合物进行粗提；通过将提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％，可以保证原液直接使用大孔树脂纯化。本发明以AB-8大孔吸附树脂作为吸附剂进行动态吸附，其对椰衣中的酚类化合物的选择性高，利用乙醇水溶液作为洗脱剂，能够有效地将酚类化合物分离。实施例结果表明，本发明经大孔吸附树脂纯化后的椰衣(CMP)总酚含量达到757.84±10mg GAE/gdw，为纯化前(CME)263.44±25.71mg GAE/gdw的2.9倍；黄酮含量达到1255.41±42.49mgRutin/g dw，为纯化前593.15±17.66mg Rutin/g dw的2.1倍。且经大孔吸附树脂纯化后，所得椰衣酚类化合物纯化物相比纯化前抗氧化能力更高。
附图说明
图1为上样液浓度对CMP中TFC和TPC含量的影响；
图2为上样液浓度对CMP中TFC和TPC含量的影响；
图3为大孔吸附树脂柱高径比对CMP中TFC和TPC含量的影响；
图4为洗脱速度对CMP中TFC和TPC含量的影响；
图5为大孔吸附树脂纯化前后的TPC、TFC含量测定结果。
具体实施方式
本发明提供了一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法，包括以下步骤：
(1)将椰衣与提取溶剂混合，依次进行超声、均质处理和固液分离，得到提取液；所述提取溶剂包括有机溶剂和水，所述提取溶剂中有机溶剂的体积分数为50～70％；
(2)将所述提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％，得到上样液；
(3)使用大孔吸附树脂柱对所述上样液进行动态吸附，待饱和吸附后依次进行水洗和洗脱剂解吸，得到解吸液；
所述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂；
所述洗脱剂为乙醇水溶液；
(4)去除所述解吸液中的洗脱剂，得到椰衣酚类化合物纯化物。
本发明将椰衣与提取溶剂混合，依次进行超声、均质处理和固液分离，得到提取液。本发明对所述椰衣的品种与来源没有特殊的要求，任何品种的椰衣均适用于本发明提供的方法。作为本发明的一个具体实施例，所述椰衣由中国热带农业科学院橡胶研究所提供。
在本发明中，所述椰衣优选以粉末的形式提供，椰衣粉末的粒径优选≤0.25mm。
在本发明中，所述椰衣粉末的制备方法，优选包括以下步骤：
对椰衣进行干燥、粉碎和过筛，得到椰衣粉末。
在本发明中，所述干燥的温度优选为103℃；本发明对所述粉碎的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的粉碎方式即可。在本发明中，所述过筛优选为过65目筛。在本发明中，所述椰衣粉末优选在4℃下保存。
在本发明中，所述提取溶剂包括有机溶剂和水，所述提取溶剂中有机溶剂的体积分数为50～70％，优选为55～65％，更优选为60％。在本发明中，所述提取溶剂中的有机溶剂优选为丙酮、甲醇和乙醇中的一种或几种。
在本发明中，所述椰衣的质量与提取溶剂的体积比优选为1：(4.5～5.5)g/mL，更优选为1：5.0g/mL。
在本发明中，所述超声的功率优选为220～230W，更优选为225W；时间优选为75～85min，更优选为80min。在本发明中，所述超声的温度优选为75～85℃，更优选为80℃。所述超声后，本发明优选将超声后的液体降温至室温，再进行均质处理。
在本发明中，所述均质处理的转速优选为8000～12000rpm，更优选为9000～11000rpm；时间优选为4～6min，更优选为5min。在本发明中，所述均质处理的温度优选为室温。
所述均质处理后，本发明优选将均质处理后的液体进行固液分离，得到提取液。在本发明中，所述固液分离的方式优选为离心分离，所述离心分离的转速优选为3500～4500rpm，更优选为4000rpm；时间优选为4～6min，更优选为5min。
在本发明中，以一次超声和均质处理作为一个提取周期计，本发明的提取周期优选为3次。本发明优选将第一次提取后的提取体系进行固液分离后，所得滤渣进行第二次提取，所得提取体系进行固液分离后，将所得滤渣进行第三次提取，所得提取体系进行固液分离，得到滤渣和提取液；合并所有的提取液进行后续操作。
得到所述提取液后，本发明将所述提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％，得到上样液。在本发明中，所述蒸发优选为旋蒸。在本发明中，所述旋蒸的速率优选为65～75rpm，更优选为70rpm；温度优选为45～48℃，更优选为46～47℃。本发明对所述旋蒸的时间没有特殊的要求，能够将提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％即可。
得到所述上样液后，本发明使用大孔吸附树脂柱对所述上样液进行动态吸附，待饱和吸附后依次进行水洗和洗脱剂解吸，得到解吸液。在本发明中，得到所述上样液后，本发明还有限包括对所述上样液进行稀释，所述稀释的倍数为2～4倍。在本发明中，所述稀释使用的稀释剂优选为水。也就是说，在本发明中，所述动态吸附的样品溶液为提取后的上样液原液或稀释液。
在本发明中，所述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂，在本发明中，所述AB-8大孔吸附树脂优选为乳白色半透明球状颗粒；所述AB-8大孔吸附树脂的水分含量优选为60～70wt％，更优选为65wt％；所述AB-8大孔吸附树脂的湿真密度优选为1～1.1g/mL，更优选为1.05g/mL。在本发明中，所述AB-8大孔吸附树脂的来源优选为市售，作为本发明的一个具体实施例，所述AB-8大孔吸附树脂购自安徽三星树脂科技有限公司。
在本发明中，所述AB-8大孔吸附树脂的比表面积优选≥500m2/g，更优选为600～800m2/g；粒径优选为0.315～1.25mm，进一步优选为0.5～1mm。
在本发明中，所述动态吸附前，还优选包括对大孔吸附树大孔吸附树脂脂进行预处理，所述预处理包括以下步骤：
将大孔吸附树脂依次进行乙醇浸泡和水洗，得到醇处理树脂；
将所述醇处理树脂依次进行HCl溶液浸泡和水洗，得到酸处理树脂；
将所述酸处理树脂依次进行NaOH溶液浸泡、水洗和干燥。
本发明优选将大孔吸附树脂依次进行乙醇浸泡和水洗，得到醇处理树脂。在本发明中，所述乙醇的体积浓度优选为95～100％，更优选为97～98％；所述乙醇浸泡的时间优选为24～36h，更优选为28～32h。在本发明中，所述水洗优选为蒸馏水洗涤，本发明优选用蒸馏水洗涤大孔吸附树脂直至大孔吸附树脂无乙醇味。
本发明优选将所述醇处理树脂依次进行HCl溶液浸泡和水洗，得到酸处理树脂。在本发明中，所述HCl溶液的质量浓度优选为5～6％；所述HCl溶液浸泡的时间优选为4～6h，更优选为5h。在本发明中，所述水洗优选为蒸馏水洗涤，本发明优选用蒸馏水洗涤大孔吸附树脂直至中性。
本发明优选将所述酸处理树脂依次进行NaOH溶液浸泡、水洗和干燥。在本发明中，所述NaOH溶液的质量浓度优选为5～6％；所述NaOH溶液浸泡的时间优选为4～6h，更优选为5h。在本发明中，所述水洗优选为蒸馏水洗涤，本发明优选用蒸馏水洗涤大孔吸附树脂直至中性。本发明对所述干燥的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的干燥方式即可。
在本发明中，所述大孔吸附树脂柱的高径比优选为10～20:3，更优选为12～18:3，更优选为15:3。在本发明中，所述高径比为柱高与柱直径的比值。
在本发明中，所述动态吸附时，所述上样液的上样速度优选为4～6BV/h，更优选为5BV/h。
在本发明中，所述饱和吸附的判断标准为：当洗脱溶液的总酚含量(TPC)为样品溶液的1/10，洗脱溶液的总体积为树脂的动态处理容量时，定义树脂处于饱和吸附状态。
在本发明中，所述水洗优选为去离子水洗涤。在本发明中，所述水洗的速率优选为0.5～4BV/h，更优选为1～2BV/h。在本发明中，所述水洗时水的用量优选为1～2BV。本发明通过所述水洗，能够去除大孔吸附树脂柱中的水溶性杂质。
在本发明中，所述洗脱剂为乙醇水溶液。在本发明中，所述乙醇水溶液的体积浓度优选为40～80％，更优选为50～60％。在本发明中，所述洗脱剂解吸的速率优选为0.5～4BV/h，更优选为1～2BV/h。在本发明中，所述洗脱剂解吸时洗脱剂的用量优选为4～5BV。
得到所述解吸液后，本发明去除所述解吸液中的洗脱剂，得到椰衣酚类化合物纯化物。在本发明中，所述去除所述解吸液中的洗脱剂的方式优选为旋蒸。在本发明中，所述旋蒸的速率优选为65～75rpm，更优选为70rpm；温度优选为45～48℃，更优选为46～47℃。本发明优选旋蒸至解吸液中乙醇含量＜5％。
在本发明中，除去所述解吸液中的洗脱剂后，本发明还优选进行干燥。在本发明中，所述干燥的方式优选为烘干。在本发明中，所述烘干的温度优选为80℃，本发明对所述烘干的温度没有特殊的要求，将固体烘干至恒重即可。
下面结合实施例对本发明提供的大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)椰衣中酚类化合物的提取
将椰衣在103℃电热鼓风干燥箱中干燥后，用粉碎机研磨成粉，通过65目筛(0.25mm)，然后置于4℃下备用。
椰衣中的酚类化合物采用超声-均质辅助法进行提取，体积分数为60％的丙酮水溶液作为提取溶剂，以料液比1:5g/mL，在超声温度为80℃，超声功率为225W的条件下超声80min，再以5000r/min均质5min，最后以5000rpm离心5min进行提取。收集所得到的提取液，旋蒸至丙酮含量<5％，得到上样液。
将所得上样液一部分冷藏保存用于后续纯化，一部分干燥成粉末保存，记为椰衣提取物(CME)，作为对比例。
(2)大孔树脂纯化椰衣中酚类化合物
先用95％乙醇，将AB-8大孔树脂浸泡24h，用蒸馏水洗涤树脂直到无乙醇味；再用5％HCL溶液浸泡5h，蒸馏水洗至中性。最后用5％NaOH溶液浸泡5h，蒸馏水洗至中性，将树脂抽干备用。
将所得椰衣上样液，在大孔吸附树脂柱上进行动态吸附，待饱和吸附(当洗脱溶液的TPC为初始样品溶液的1/10，洗脱溶液的总体积为树脂的动态处理容量时，定义树脂处于吸附平衡状态。)用乙醇进行动态解吸得到解吸液，最后将收集到的解吸液旋蒸、干燥得到椰衣纯化物(CMP)。
设计单因素实验探讨上样液浓度、洗脱液浓度、柱子高径比、洗脱速度4个影响因素对椰衣中总酚含量(TFC)和总黄酮含量(TPC)的影响，单因素实验设计方案见表1。
表1单因素试验设计方案
Figure BDA0003717670110000071
Figure BDA0003717670110000081
所述单因素试验过程如下：
①上样液浓度的确定
首先准备3根层析柱，各填充树脂体积为25mL的AB-8大孔吸附树脂，柱子高径比为10：3。分别选择由步骤(1)得到的上样液原液、原液稀释2倍、原液稀释4倍10mL进行大孔树脂吸附，控制上样速度为5BV/h，用去离子水洗去杂质，再用60％乙醇进行洗脱，两者速度皆为1BV/h。随后对三种不同上样液浓度的洗脱液进行收集，并将洗脱液旋蒸、干燥得到CMP，后将其用60％丙酮配成浓度为5mg/mL的溶液比较三者的TPC、TFC含量，进而得出最佳上样液浓度。
②洗脱剂乙醇浓度的确定
根据①结果，取最佳浓度的上样液上样，方法同上，分别用40％、60％、80％乙醇各100mL(4BV)进行洗脱，比较三种不同乙醇浓度下CMP的TPC、TFC含量，得出最佳洗脱剂浓度。
③洗脱速度的确定
根据②结果，用最佳浓度的乙醇洗脱，方法同上，分别以0.5BV/h、1BV/h、4BV/h的速度进行洗脱，比较三种不同洗脱速度下CMP的TPC、TFC含量，确定最佳洗脱速度。
④柱子高径比的确定
根据③结果，用最佳速度进行洗脱，方法同上，分别以10：3、15：3、20：3的高径比进行纯化，比较三种不同高径比下CMP的TPC、TFC含量，确定最佳高径比。
其中，总酚含量的测定方法为：
参照Chen等(Chen J,Yang J,Ma L,et al.Structure-antioxidant activityrelationship of methoxy,phenolic hydroxyl,and carboxylic acid groups ofphenolic acids[J].Scientific Reports,2020,10(1):2611)的方法：用没食子酸作为对照品，绘制的回归方程为Y＝1.8089X+0.0056，R＝0.9938。测定待测样品的吸光度，利用标准曲线计算TPC，单位用mg GAE/g干重(dw)表示。其中：Y代表吸光度；X代表TPC的含量。
总黄酮含量的测定方法为：
参照Chen等(Chen J,Yang J,Ma L,et al.Structure-antioxidant activityrelationship of methoxy,phenolic hydroxyl,and carboxylic acid groups ofphenolic acids[J].Scientific Reports,2020,10(1):2611)的方法：对照品为芦丁(Rutin)，绘制的回归方程为Y＝13.434X+0.002，R＝0.999，测定待测样品的吸光度，利用标准曲线计算TFC，单位用mg Rutin/g dw表示。其中：Y代表吸光度；X代表TFC的含量。
单因素试验测试结果如表2所示。
表2单因素试验测试结果
Figure BDA0003717670110000091
表2中，同一列中不同大写字母(A～C)表示有统计学意义的差异(p<0.05)；A表示同系中最优条件，B表示次之，C表示最差条件。
由表2可以看出：
(1)在上样液浓度为原液的条件下经纯化后，CMP的TPC、TFC含量分别达到了671.02±0.78mg GAE/g dw、1061.63±11.45mg Rutin/g dw均高于稀释2倍与稀释4倍两个水平下的TPC、TFC含量，并具有显著性差异。
上样液浓度对CMP中TFC和TPC含量的影响如图1所示。由图1可以看出，TPC、TFC浓度随着上样液浓度的增高而增高，这是因为与多酚有关的活性位点数量增加；然而，随着上样液浓度的增大的进一步增加，可能更多的杂质被吸附在AB-8树脂上，导致酚类活性物质与杂质竞争活性位点，吸附容量略有下降。
(2)在乙醇洗脱液浓度为60％的条件下经纯化后，CMP的TPC、TFC含量分别达到了725.19±8.59mg GAE/g dw、957.17±7.94mg Rutin/g dw均高于浓度为40％与60％两个水平下的TPC、TFC含量，并具有显著性差异。
洗脱液浓度对CMP中TFC和TPC含量的影响如图2所示。由图2可以看出，洗脱剂乙醇浓度过高过低都会导致TPC、TFC含量降低，这可能是因为在低浓度的乙醇中酚类物质溶解度较低，而在高浓度的乙醇中一些杂质反而解吸。故选择60％乙醇为最佳的洗脱液浓度。
(3)在高径比为15：3的条件下经纯化后，CMP的TPC、TFC含量分别达到了748.96±15.67mg GAE/g dw、1040.54±9.27mg Rutin/g dw均高于柱高为10：3与20：3两个水平下的TFC、TPC含量，并具有显著性差异。
高径比对CMP中TFC和TPC含量的影响如图3所示。由图3可以看出，装柱过高过低都会导致TPC、TFC含量降低，这可能是因为柱子过低时多酚在大孔树脂上吸附不饱和，装柱过高时控制变量导致洗脱液体积相对较少不能完全将活性成分洗脱下来。故选择15：3为最佳的装柱高度。
(4)在洗脱速度为0.5BV/h的条件下经纯化后，CMP的TPC、TFC含量分别达到了740.12±25.01mg GAE/g dw、1157.64±2.64mg Rutin/g dw均高于为1BV/h与4BV/h两个水平下的TPC、TFC含量，并具有显著性差异。
洗脱速度对CMP中TFC和TPC含量的影响如图4所示。由图4可以看出，随着洗脱速度的增大，椰衣TPC、TFC的含量降低，说明多酚在较低的洗脱速度下解吸更完全。可能的原因是乙醇进入树脂微孔，化合物溶解和洗脱更彻底。故选择0.5BV/h为最佳的洗脱速度。
实施例2
确定大孔吸附树脂纯化椰衣中酚类化合物的参数为：在高径比为15：3的条件下，原液以5BV/h的速度上样，2BV的蒸馏水进行杂质洗脱，用4BV60％乙醇洗脱，洗脱速度为0.5BV/h。
对大孔吸附树脂纯化前后的TPC、TFC含量进行测定表征，所得结果如表3和图5所示。
表3大孔吸附树脂纯化前后的TPC、TFC含量
Figure BDA0003717670110000111
表3中，同一列中不同大写字母(A～C)表示有统计学意义的差异(p<0.05)；A表示同系中最优条件，B表示次之，C表示最差条件。
由表3和图5可以看出，CMP的TPC达到757.84±10mg GAE/g dw，为CME 263.44±25.71mg GAE/g dw的2.9倍；CMP的TFC达到1255.41±42.49mg Rutin/g dw，为CME 593.15±17.66mg Rutin/g dw的2.1倍。表明由于AB-8大孔树脂合适的表面积和核孔大小，是纯化椰衣多酚大孔吸附树脂的最佳候选者。该纯化工艺更有利于椰衣中酚类、黄酮类化合物的释放，在最佳提取工艺下的高多酚椰衣经纯化后这些活性物质得到进一步富集。
实施例3纯化前后抗氧化性能
对纯化前后椰衣多酚应用两种经典的抗氧化性能方法(FRAP，DPPH)进行测定，并通过DPPH自由基清除率的IC50进一步表征椰衣的酚类化合物纯化前后的抗氧化能力，所得结果如表4所示。
其中，FRAP测定方法参考Chen等(Chen J,Yang J,Ma L,et al.Structure-antioxidant activity relationship of methoxy,phenolic hydroxyl,and carboxylicacid groups of phenolic acids[J].Scientific Reports,2020,10(1):2611)的方法，标准品为硫酸亚铁，绘制的回归方程为Y＝5.114X+0.1402，R＝0.999。将待测液(0.5mL)和FRAP(4mL)工作液混合放于试管中，在37℃下避光反应30min，测定反应吸光度，利用标曲计算其抗氧化能力，单位为：μmol。
DPPH自由基清除率，参考Chen等(Chen J,Yang J,Ma L,et al.Structure-antioxidant activity relationship of methoxy,phenolic hydroxyl,and carboxylicacid groups of phenolic acids[J].Scientific Reports,2020,10(1):2611)的方法，按照公式(1)来计算：
Figure BDA0003717670110000121
公式(1)中：A1为待测样品溶液与DPPH反应液混合溶剂的吸光度值；A2为除DPPH反应液外混合溶剂的吸光度值；A3为除样品溶液外混合溶剂的吸光度值。
表4纯化前后抗氧化性能测试结果
Figure BDA0003717670110000122
表4中，同一列中不同大写字母(A～C)表示有统计学意义的差异(p<0.05)；A表示同系中最优条件，B表示次之，C表示最差条件。
FRAP测得数值越高，样品还原亚铁离子的数量越多，抗氧化能力越强。由4可以得出CMP的FRAP 6.41±0.05μmol，为CME 12.16±1.02μmol的2倍。证明纯化后的FRAP大幅度提升，间接证明了椰衣多酚含量与其抗氧化能力呈正相关。
DPPH抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，则抗氧化性越强。经测定1mg/mL的CME与CMP对DPPH的清除率均达到80％以上，抗氧化能力较强但无显著性差异。故通过对不同浓度CME和CMP进行DPPH自由基清除率IC50的测定，IC50测定值越小，抗氧化能力越好。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法，包括以下步骤：
(1)将椰衣与提取溶剂混合，依次进行超声、均质处理和固液分离，得到提取液；所述提取溶剂包括有机溶剂和水，所述提取溶剂中有机溶剂的体积分数为50～70％；
(2)将所述提取液蒸发至有机溶剂体积分数≤5％，得到上样液；
(3)使用大孔吸附树脂柱对所述上样液进行动态吸附，待饱和吸附后依次进行水洗和洗脱剂解吸，得到解吸液；
所述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂；
所述洗脱剂为乙醇水溶液；
(4)去除所述解吸液中的洗脱剂，得到椰衣酚类化合物纯化物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AB-8大孔吸附树脂的比表面积≥500m2/g，粒径为0.315～1.25mm。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂柱的高径比为10～20:3。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动态吸附时，所述上样液的上样速度为4～6BV/h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的体积浓度为50～70％。
6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述水洗的速率为0.5～4BV/h，所述水的用量为1～2BV；
所述洗脱剂解吸的速率为0.5～4BV/h，所述洗脱剂的用量为4～5BV。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，得到所述上样液后，还包括对所述上样液进行稀释，所述稀释的倍数为2～4倍。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动态吸附前，还包括对大孔吸附树脂进行预处理，所述预处理包括以下步骤：
将大孔吸附树脂依次进行乙醇浸泡和水洗，得到醇处理树脂；
将所述醇处理树脂依次进行HCl溶液浸泡和水洗，得到酸处理树脂；
将所述酸处理树脂依次进行NaOH溶液浸泡、水洗和干燥。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取溶剂中的有机溶剂为丙酮、甲醇和乙醇中的一种或几种。
10.根据权利要求1或9所述的方法，其特征在于，所述超声的功率为220～230W，时间为75～85min；
所述均质处理的转速为8000～12000rpm，时间为4～6min。
CN202210783818.XA 2022-06-28 2022-06-28 一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法 Active CN115068544B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210783818.XA CN115068544B (zh) 2022-06-28 2022-06-28 一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210783818.XA CN115068544B (zh) 2022-06-28 2022-06-28 一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115068544A true CN115068544A (zh) 2022-09-20
CN115068544B CN115068544B (zh) 2023-05-12

Family

ID=83258605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210783818.XA Active CN115068544B (zh) 2022-06-28 2022-06-28 一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115068544B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107550822A (zh) * 2017-10-23 2018-01-09 深圳碳希生物科技有限公司 一种椰糠提取物及其在协同抗氧化中的应用
CN107693652A (zh) * 2017-10-23 2018-02-16 深圳碳希生物科技有限公司 一种椰糠提取物及其在协同抗过敏中的应用
CN113350434A (zh) * 2021-07-07 2021-09-07 中北大学 一种从椰衣中提取酚类化合物的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107550822A (zh) * 2017-10-23 2018-01-09 深圳碳希生物科技有限公司 一种椰糠提取物及其在协同抗氧化中的应用
CN107693652A (zh) * 2017-10-23 2018-02-16 深圳碳希生物科技有限公司 一种椰糠提取物及其在协同抗过敏中的应用
CN113350434A (zh) * 2021-07-07 2021-09-07 中北大学 一种从椰衣中提取酚类化合物的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴周新等: "椰衣粉中多酚类物质提取工艺的优化" *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115068544B (zh) 2023-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105193863B (zh) 一种高纯度海藻多酚的制备方法
JP2010120939A (ja) フコキサンチン含有抽出物の製造方法
CN102614834B (zh) 利用柿单宁金属吸附剂吸附和回收重金属铅和铜的方法
Wang et al. Separation and purification of amygdalin from thinned bayberry kernels by macroporous adsorption resins
CN101904877B (zh) 一种低酚酸银杏黄酮提取物的制备方法
CN109053821B (zh) 从罗汉果叶中提取茶多酚、总氨基酸、黄酮化合物的方法
CN106349324B (zh) 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法
CN108553527B (zh) 一种青刺果仁总黄酮提取物的制备方法
CN103058871B (zh) 一种烟草绿原酸的分离纯化方法
CN1517343A (zh) 越桔花青素的提取方法
CN110092772B (zh) 一种蓝莓花青素高选择性分离方法和分离材料
CN105566409B (zh) 一种从西兰花种子中提取分离萝卜硫苷的方法
CN113577165B (zh) 一种用于山茶花多酚的提取方法
CN104356105B (zh) 一种egcg的制备方法
CN115068544A (zh) 一种大孔吸附树脂纯化椰衣酚类化合物的方法
CN101619062A (zh) 天然黄藤素结晶物及其大孔吸附树脂制备方法
CN110917240A (zh) 一种从青钱柳中分离多种有效成分的连续化方法
CN107375537B (zh) 西南山茶花中茶多酚的制备方法
CN102766554B (zh) 酿酒废弃物尾水资源化利用的方法
CN106336440B (zh) 从油橄榄叶中提取分离齐墩果酸的方法
CN106727743B (zh) 一种利用萃取废液制备高含量银杏总黄酮的方法
CN106397529A (zh) 从油橄榄果渣中提取分离山楂酸的方法
CN109180485B (zh) 一种分离绿原酸的方法
CN110585339A (zh) 一种白芨多个有效成分的分离制备方法
CN108384276B (zh) 一种紫甘薯色素及其生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant