CN115038719A

CN115038719A - 与cd300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体

Info

Publication number: CN115038719A
Application number: CN202080094897.2A
Authority: CN
Inventors: 全在原; 李秀仁; 金天空
Original assignee: Shancuikesi Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shancuikesi Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-11-28
Filing date: 2020-11-30
Publication date: 2022-09-09
Also published as: EP4067379A4; AU2020394279A1; EP4067379A1; CA3159889A1; WO2021107726A1; JP2023504149A

Abstract

本发明涉及与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体、表达其的免疫细胞等，本发明的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体不但可以特异性地识别表达CD300c抗原或CD300c受体的癌细胞并直接有效地抑制癌症的生长、转移等，还可以在体内通过抑制CD300c激活T细胞等来减少副作用，不仅如此，还可以通过增加癌症的治疗效果来有望在多种癌症的免疫治疗中有效使用。

Description

与CD300C抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体

技术领域

本发明涉及与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体、表达其的免疫细胞以及其用途等。

背景技术

癌症是现代人死亡原因中占最大比重的疾病之一，是由多种原因引起的基因突变导致正常细胞发生变化的疾病，是指不遵循正常细胞的分化、增殖、生长形态等的肿瘤中的恶性肿瘤。癌症，以“不受控制的细胞生长”为特征，这种不正常的细胞生长形成了被称为肿瘤(tumor)的细胞团，并渗透到周围组织，严重时还会转移到身体的其他器官。癌症是一种难治性慢性疾病，即使通过手术、放射线及药物疗法等进行治疗，癌症在很多情况下无法根治，给患者带来痛苦，最终导致死亡。尤其，近年来由于老年人口的增加、环境恶化等原因，世界上癌症发病率呈每年增加5％以上的趋势，据世界卫生组织(WHO)的报告，此后25年内癌症的发病人口将到达3000万人，其中将有2000万人死于癌症。

癌症的药物治疗，即抗癌药物通常为具有细胞毒性的化合物，通过攻击癌细胞并凋亡癌细胞来治疗癌症，它不仅杀灭癌细胞，还损伤正常细胞，因此显出高副作用。因此，为了减少副作用，开发出了靶向抗癌药物。然而，这种靶向抗癌药物虽然可以降低副作用，但也具有产生耐药性的概率高的局限性。因此，近来对利用体内免疫系统来减少因毒性及耐药性造成的问题的免疫抗癌药物的关注呈剧增趋势。作为此类免疫抗癌药物的一例，已开发出免疫检查点抑制剂，它与癌细胞表面的PD-L1特异性结合来抑制与T细胞的PD-1的结合从而激活T细胞并使其攻击癌细胞。但即使是这种免疫检查点抑制剂，能够产生效果的癌症的种类并不多，因此迫切需要开发一种对多种癌症都能产生同样治疗效果的新型免疫检查点抑制剂(韩国公开专利第10-2016-0016725号)。

另一方面，嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor；CAR)是为向T细胞传递抗原特异性而设计的人造受体，上述嵌合抗原受体由为激活T细胞并提供特异性免疫性而选择的抗原特异性结构要素、跨膜结构要素、细胞内结构要素等构成。最近，利用导入编码上述嵌合抗原受体的基因的细胞的癌症免疫疗法，即，从患者采取T细胞，向上述T细胞导入编码嵌合抗原受体的基因并扩增，重新注入患者的治疗方法，有关通过这种治疗方法治疗癌症的研究正在活跃地进行着。

发明内容

技术问题

本发明即为解决如上所述的以往技术的问题而提出，本发明的目的在于，提供与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体、表达其的免疫细胞以及利用其的用于预防或治疗癌症的组合物等。

但是，本发明所要解决的技术问题不限定于上述提及的问题，本发明所属技术领域的普通技术人员可以通过下述记载的内容明确理解未提及的其他技术问题。

技术方案

本发明提供与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体。

在本发明的一具体例中，优选地，上述嵌合抗原受体可以包含与CD300c抗原特异性结合的抗体(antibody)、单域抗体(single domain antibody)、单链可变片段(singlechain variable fragment；scFv)等，或者包含CD300c抗原(antigen)，可以特异性地识别CD300c抗原或其受体并与之结合。上述CD300c抗原为了与受体结合，可以包含CD300c抗原全部序列，也可以只包含CD300c抗原序列中的胞外结构域(extracellular domain；ECD)。上述CD300c抗原的胞外结构域序列可以包含由序列14表示的氨基酸序列，优选地，可以包含与上述序列14具有90％以上的序列同源性的氨基酸序列，更优选地，可以包含与上述序列14具有95％以上的序列同源性的氨基酸序列，最优选地，可以包含与上述序列14具有98％以上的序列同源性的氨基酸序列。并且，上述抗体、单域抗体、单链可变片段等为了与CD300c抗原结合，可以包含序列4、6、8、10或12表示的氨基酸序列，优选地，可以包含与上述序列4、6、8、10或12表示的氨基酸序列具有90％以上的序列同源性的氨基酸序列，更优选地，可以包含与上述序列4、6、8、10或12表示的氨基酸序列具有95％以上的序列同源性的氨基酸序列，最优选地，可以包含与上述序列4、6、8、10或12表示的氨基酸序列具有98％以上的序列同源性的氨基酸序列。有关氨基酸序列的“序列同源性的％”通过与以最佳方式排列的序列比较比较区域来确认，在比较区域中，与对序列的最佳排列的参考序列(不包括追加或删除)相比，氨基酸序列的一部分还可以包含追加或删除(即，缺口)。但只要是能够与CD300c抗原或其受体特异性结合的序列则不限于此。

在本发明的再一具体例中，优选地，上述嵌合抗原受体还可以包含信号肽(signalpeptide)、GS接头、跨膜结构域(transmembrane domain)、胞质内结构域(intracytoplasmic domain)等，但只要是通常已知的嵌合抗原受体的结构要素则不限于此

在本发明的还有一具体例中，优选地，上述信号肽可以CD8α信号肽序列，上述跨膜结构域可以包含CD8铰链(白细胞分化抗原8的铰链(hinge of cluster ofdifferentiation 8))、CD28跨膜结构域(CD28 transmembrane domain)等序列，上述胞质内结构域可以包含CD28胞内结构域(CD28 intracellular domain)、CD3ζ胞内结构域(CD3ζintracellular domain)等序列。

在本发明的另一具体例中，上述嵌合抗原受体可通过特异性地识别和/或结合CD300c抗原或其受体来用作治疗在表面表达CD300c抗原的癌症的用途。

并且，本发明提供表达上述嵌合抗原受体的重组载体。

并且，本发明提供由上述重组载体转化而成的免疫细胞。

在本发明的一具体例中，优选地，上述免疫细胞为单核细胞、巨噬细胞、T细胞、自然杀伤细胞(Natural killer cell；NK cell)、树突状细胞等，但只要是用作癌症治疗用途的免疫细胞则不限于此。

并且，本发明提供包含上述免疫细胞作为有效成分的用于预防或治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的药物组合物。

在本发明的一具体例中，上述癌症为大肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、口腔癌、咽癌、喉癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、舌癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、骨癌、血液癌等，但只要是在表面表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的种类则不限于此。

在本发明的再一具体例中，上述药物组合物还可以包含其他现有的抗癌药物，优选地，上述抗癌药物为多柔比星、顺铂、吉西他滨、奥沙利铂、5-FU、西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、癌抗原、抗癌病毒等，但只要是目前用作抗癌药物的物质则不限于此。上述癌症抗原为对癌种具有特异性的癌症疫苗(cancer vaccine)，作为膀胱癌特异性癌抗原优选NY-ESO-1，作为乳房癌特异性癌抗原优选HER2，作为大肠癌特异性癌抗原优选CEA，作为肺癌特异性癌抗原优选VEGFR1、VEGFR2等，但只要是已知作为癌症疫苗的癌抗原则不限于此。作为抗癌病毒的一例，有Imlygic、Pexa-Vec等，但只要是已知的抗癌病毒则不限于此。上述抗癌药物可以优选与本公开的单克隆抗体联合用药，或者可以为包含于本发明的免疫细胞内的形式，或者也可以为与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体结合的形式，也可以为共同包含在抗癌药物载体内的形式。但不限定于此。

在本发明的还有一具体例中，上述药物组合物的特征在于，抑制癌症或癌症干细胞的增殖、存活、转移、复发、抗癌药物耐药性等，但只要是通过本发明的药物组合物产生的效果则不限于此。

并且，本发明提供一种癌症治疗方法，包括向个体给药包含表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞作为有效成分的组合物的步骤。

并且，本发明提供一种包含表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞作为有效成分的组合物的预防或治疗癌症的用途。

并且，本发明提供一种用来表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞来制备用于癌症治疗的药物的用途。

发明的效果

本发明的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体特异性地具有与多种癌细胞表面表达的CD300c抗原或其受体的高结合力并与之结合，在激活T细胞的同时抑制癌细胞的增殖，从而可以有效地用作多种癌症的免疫治疗剂。并且，利用本发明的表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞不仅可以具有免疫细胞自身的治疗效果，还可以在通过嵌合抗原受体抑制CD300c蛋白的生成来激活T细胞的同时抑制癌细胞的增殖，从而确认可以有效地抑制癌细胞的生长、发育、转移等。并且，用本发明的表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞处理对细胞凋亡具有抵抗能力的抗性癌细胞时，能够明显减弱癌细胞的这种能力，有望在防止癌症复发方面也具有优异的功效。

附图说明

图1为简要示出用于制备本发明一实施例的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的基因排列的图。

图2为示出用于制备本发明一实施例的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的载体图谱的图。

图3为示出通过蛋白印迹法确认表达本发明一实施例的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞株的结果的图。

图4为示出确认表达本发明一实施例的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞株的抗癌效果的结果的图。

具体实施方式

本发明的表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞与癌细胞表面的CD300c抗原或其受体特异性结合，通过有效地抑制CD300c的机制来有效地抑制癌细胞的生长及癌症的发展，因此可以有效用在表面表达CD300c抗原或CD300c受体的多种癌症的治疗中。

在本说明书中，术语“抗体(antibody)”是指在免疫学上与特定抗原发生免疫反应的免疫球蛋白分子，包括多克隆抗体(polyclonal antibody)，单克隆抗体(monoclonalantibody)及其功能片段(fragment)。并且，上述术语可以包括如嵌合抗体(例如，人源化鼠抗体)及异源结合抗体(例如，双特异性抗体)等通过基因工程生产的形式。其中，单克隆抗体是对单个抗原性位点(epitope)表现出单一结合特异性和亲和力的抗体，与包含对多个对不同表位表现出特异性的抗体的多克隆抗体不同，单克隆抗体只对抗原上的单个表位表现出结合特异性和亲和力，因此更易于控制治疗药物的质量。尤其，本发明的抗CD300c单克隆抗体不仅可以与表达CD300c的癌细胞特异性结合，从而其本身表现出抗癌活性，还可以通过刺激免疫细胞使癌细胞依赖性抗癌活性最大化。上述抗体的结构中包括重链(heavychain)和/或轻链(light chain)的可变区(variable region)，上述可变区域包括形成抗体分子的抗原结合位点的部分作为一级结构，本发明的抗体可以由包含上述可变区的一些片段组成，优选地，上述可变区可以由CD300c的可溶性受体来取代，但只要能够产生与本发明的抗CD300c单克隆抗体相同的效果，则不限于此。

在本说明书中，“单域抗体(single domain antibody)”为对CD300c抗原特异的抗体，CDR为作为单结构域多肽的一部分的抗体，通常可以为只利用两个重链(heavy chain)与抗原结合部位来制备的抗体，但可以包括所有自然缺失轻链的抗体、源自现有的4-链抗体的单域抗体、修改的抗体及除源自抗体以外的单域支架。

在本说明书中，术语“单链可变片段(single-chain variable fragment，scFv)”是指将抗体的轻链及重链的可变区通过由15个左右的氨基酸连接的肽序列构成的接头(linker)连接的蛋白，可以具有轻链可变区-接头-重链可变区或重链可变区-接头-轻链可变区的顺序，并且具有与原抗体相同或相似的抗原特异性。连接位点是主要由甘氨酸(glycine)和丝氨酸(serine)组成的亲水性柔性肽链，主要使用“(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)₃”的15个氨基酸序列或类似序列。上述抗体(antibody)是指在免疫学上与特定抗原发生免疫反应的免疫球蛋白分子，包括多克隆抗体(polyclonal antibody)，单克隆抗体(monoclonalantibody)及其功能片段(fragment)。并且，上述术语可以包括如嵌合抗体(例如，人源化鼠抗体)及异源结合抗体(例如，双特异性抗体)等通过基因工程生产的形式。其中，单克隆抗体是对单个抗原性位点(epitope)表现出单一结合特异性和亲和力的抗体，与包含对多个对不同表位表现出特异性的抗体的多克隆抗体不同，单克隆抗体只对抗原上的单个表位表现出结合特异性和亲和力，因此更易于控制治疗药物的质量。尤其，本发明的抗CD300c单克隆抗体不仅可以与表达CD300c的癌细胞特异性结合，从而其本身表现出抗癌活性，还可以通过刺激免疫细胞使癌细胞依赖性抗癌活性最大化。上述抗体的结构中包括重链(heavychain)和/或轻链(light chain)的可变区(variable region)，上述可变区域包括形成抗体分子的抗原结合位点的部分作为一级结构，本发明的抗体可以由包含上述可变区的一些片段组成。

在本说明书中，术语“预防(prevention)”是指通过施用本发明的药物组合物来抑制癌症等疾病或延缓发病的任何行动。

在本说明书中，术语“治疗(treatment)”是指通过施用本发明的药物组合物使癌症等的症状好转或发生有益改变的任何行动。

在本说明书中，术语“个体(individual)”是指可以施用本发明的药物组合物的对象，该对象没有任何限制。

在本说明书中，术语“药物组合物(pharmaceutical composition)”可以以胶囊、片剂、颗粒、注射剂、膏剂、粉末或饮料的形式为特征，上述药物组合物的特征可以为以人为对象。上述药物组合物并不局限于这些形式，可以按照常规方法制成散剂、颗粒剂、胶囊、片剂、水性混悬剂等口服剂型及外用剂、栓剂和灭菌注射溶液的形式剂型后使用。本发明的药物组合物可以包含药剂学上可接受的载体。药剂学上可接受的载体有，口服给药时可以使用粘合剂、润滑剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、助悬剂、色素、香料等；作为注射剂可以混合使用缓冲剂、防腐剂、止痛剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等；用于局部给药时可以使用基剂、赋形剂、润滑剂、防腐剂等。本发明的药物组合物的剂型可以与上述的药剂学上可接受的载体混合制备成多种形式。例如，在口服给药的情况下，可以制成片剂、锭剂、胶囊、酏剂(elixir)、混悬剂、糖浆剂、晶片剂等形式；在用作注射剂的情况下，可以制备成单位剂量安瓿或多次剂量的形式。此外，还可以配制成溶液、混悬剂、片剂、胶囊、缓释剂等。此外，还可以配制成溶液、混悬剂、片剂、胶囊、缓释剂等。

同时，适合配制的载体、赋形剂和稀释剂的示例可以有乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁或矿物油等。此外，还可以包括填充剂、抗凝剂、润滑剂、润湿剂、调味剂、乳化剂、防腐剂等。

根据本发明的药物组合物的给药途径包括但不限于，包括口腔、静脉内、肌肉内、动脉内、骨髓内、鞘内、心内、经皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、肠管、局部、舌下或直肠。优选口服或非口服给药。本申请中使用的术语“胃肠外”包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、滑囊内、胸骨内、鞘内、病灶内及颅内注射或输注技术。本发明的药物组合物也可以以栓剂的形式用于直肠给药。

本发明的药物组合物可以根据所用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、配方、给药时间、给药途径、排泄率、药物组合以及要预防或治疗的特定疾病的重症等多种因素而变化，上述药物组合物的剂量可以根据患者病情、体重、疾病程度、药物形式、给药途径及周期由本领域的普通技术人员适当地选择，每日给药剂量可以为0.0001mg/kg至500mg/kg或0.001mg/kg至500mg/kg。可以每日给药一次，也可以分次给药。上述剂量不以任何方式限制本发明的范围。本发明的药物组合物可以配制成丸剂、糖衣丸、胶囊、液剂、凝胶、糖浆、浆剂和混悬剂。

以下，提供下述实施例以便于理解本发明。但是，下述实施例只是为了更容易地理解本发明而提供，本发明的内容不受下述实施例的限制。

实施例

实施例1：制备与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体表达载体

为了制备与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体，依次向pLVX-Puro载体(Addgene公司)插入包含使合成的蛋白质通过细胞膜后移动到正确位置的序列2的氨基酸序列的CD8α信号肽(CD8αsignal peptide，脱氧核糖核酸(DNA)序列为序列1)、包含各个与CD300c抗原或其受体特异性结合的序列4、6、8、10、12的氨基酸序列的CK1、CL6、CL7、CL10、SL18的各个单链可变片段(anti-CD300c single chain variable fragment；aCD300c scFv，脱氧核糖核酸序列分别为序列3、序列5、序列7、序列9、序列11)或包含序列14的氨基酸序列的CD300c ECD(胞外结构域)抗原(脱氧核糖核酸序列为序列13)、包含序列16的氨基酸序列的GS接头(脱氧核糖核酸序列为序列15)、作为跨膜结构域的包含序列18的氨基酸序列的CD8铰链(脱氧核糖核酸序列为序列17)、包含序列20的氨基酸序列的CD28跨膜结构域(脱氧核糖核酸序列为序列19)、作为用于传递巨噬细胞激活信号的胞质内结构域的包含序列22的氨基酸序列的CD28胞内结构域(脱氧核糖核酸序列为序列21)以及包含序列24的氨基酸序列的CD3ζ胞内结构域(脱氧核糖核酸序列为序列23)来制备与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体表达载体(pLVX-Puro/aCD300c scFv或pLVX-Puro/CD300c ECD-CAR)。制备的各载体的基因及蛋白质序列组合如表1所示。并且，基因排列的示意图如图1所示，制备的载体图谱的例示如图2所示。

表1

实施例2.制备用于表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的重组慢病毒

以如下方式准备用于表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的重组慢病毒的制备所需的HEK293T细胞株(ATCC)。细胞培养所使用的完全培养基为向新鲜的杜氏改良伊戈尔培养基(DMEM)(Gibco公司)加入经热处理的胎牛血清的(FBS，fetalbovine serum)以使浓度达到10％后，加入1X的青霉素-链霉素(Penicillin-Streptomycin)(Gibco公司)后，通过上下颠倒的方式均匀混合后，预热为37℃来使用。然后，HEK293T细胞株是将冷冻保管的细胞储备(stock)在使用前迅速移到37℃的恒温水槽，在2分钟至3分钟内急速解冻后接种到30mL的完全培养基中，在37℃、5％的CO₂的培养器中培养。然后，在细胞饱和度达到80％以上时，进行传代培养来保持。为了慢病毒转染(transfection)，以1×10⁶cells～2×10⁶cells的浓度将HEK293T细胞株接种到10mL的完全培养基中后，培养16小时后，实施慢病毒转染。

用于表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的慢病毒的转染使用Lenti-X^TMExpression System(Takara公司)试剂盒。向以与实施例1相同的方法制备的7μg的pLVX-Puro/aCD300C scFv或pLVX-Puro/CD300c ECD-CAR表达载体加入无菌水(sterilewater)(Invitrogen公司)至600μL后，装入Lenti-X^TM表达系统(Expression System)内的Lenti-X Packaging Single Shots tube后混合来制备纳米粒子复合溶液(nanoparticlecomplex solution)。然后，一边向预先制备的HEK293T细胞逐滴加入在常温下反应10分钟的纳米粒子复合溶液一边左右晃动来混合。然后在培养器中培养4小时后，再加入新的完全培养基6mL后，培养48小时。培养后回收上清液去除通过离心分离细胞残余物后使用0.45μm的过滤器过滤，而后在-80℃的温度下保管直至使用。

将获得的慢病毒上清液中的20μL添加到Lenti-X^TM表达系统内的GoStix盒式样品孔(GoStix cassette sample well)(S)中后，向样品孔(sample well)中滴入3滴Chase溶液后在常温下反应10分钟后，通过确认有无条带来确认是否获得5×10⁵IFU/mL以上有效容量的重组慢病毒。

结果，确认制备了表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的重组慢病毒。确认到制备的慢病毒表达分别包含序列4、6、8、10、12或14的氨基酸序列的嵌合抗原受体。

实施例3：制备表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat 细胞

为了制备表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞，将以与实施例2相同的方法制备的重组慢病转染到Jurkat细胞株。更详细地，将0.1MOI至10MOI的重组慢病毒接种到添加有8μg/mL的聚凝胺(polybrene)(Merk公司)的完全培养基后，以上下颠倒的方式均匀混合。然后，向在6孔培养板中准备好的Jurkat细胞株每孔加入1mL的混合物后，以1800rmp的转速离心分离45分钟至90分钟后，在37℃、5％的CO₂的培养器中培养24小时。24小时后，以5×10⁵cells/mL的浓度传代培养。

然后，为了确认转染的Jurkat细胞株中是否正常地表达了与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体，利用PRO-PREP溶液(iNtRON公司)回收培养的Jurkat细胞的总蛋白质。然后，使用微型BCA蛋白定量试剂盒(microBCA protein assay kit)(Thermofisher公司)测量获得的蛋白质的浓度后，利用相同量的蛋白质实施蛋白印迹法。更详细地，将相同量的蛋白质在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(Invitrogen公司)中进行电泳后，使用硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)(Invitrogen公司)移动电泳的蛋白质。然后利用5％的脱脂牛奶(skim milk)(BD公司)溶液封闭结合有蛋白质的硝酸纤维素膜来阻断抗体的非特异性反应，将抗CD3抗体及抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(Cell Signaling Technologies公司，美国)用作一抗，分别使用5％的脱脂牛奶稀释为1∶1000的浓度，使用其处理硝酸纤维素膜并反应后，去除未结合的抗体。然后将作为二抗的辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase；HRP)-接合二抗(CellSignaling Technologies公司)稀释为1∶2000的浓度来处理。然后，处理增强型化学发光试剂溶液(ECL solution)(Thermofisher公司)来诱导发色反应后，使用冷光(Luminescent)图像分析设备iBright1500(Invitrogen公司)来定量蛋白质的量。蛋白印迹法的结果如图3所示。

如图3所示，可以确认结合有抗CD3抗体的CD3ζ胞内结构域，通过此可以确认制备了表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞株。

然后追加地，利用流式细胞分析仪(FACS)确认与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的表达程度。更详细地，向Jurkat细胞株处理PE-融合抗IgG抗体(Jacksonimmunoresearch公司)后在4℃的温度下培养30分钟并反应后，利用流式细胞分析仪来确认。

流式细胞分析的结果，确认到制备了表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞株。

实施例4：确认CD300c的癌细胞表达

为了评估CD300c是否在多种癌细胞中表达，通过培养多种人类来源实体癌细胞株来在信使核糖核酸(mRNA)及蛋白质水平上评估CD300c的表达。更详细地，培养作为人类肺癌细胞株的A549、作为人类乳腺癌细胞株的MDA-MB-231、作为小鼠大肠癌细胞株的CT26，使用4％的甲醛固定各细胞后利用5％的正常山羊血清(Normal goat serum)进行封闭。然后，处理1μg的抗CD300c抗体并反应后，利用异硫氰酸荧光素标记的(FITC-labeled)抗兔(rabbit)IgG抗体进行染色。然后利用流式细胞分析仪确认荧光标记的细胞。

结果确认，大肠癌、肺癌、乳腺癌等多种癌细胞的细胞表面具有CD300c抗原。

实施例5：表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞的抗癌效果

为了确认表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞的抗癌效果，利用A549细胞株确认癌细胞杀灭效果。更详细地，以1×10⁵cells/mL的浓度将A549细胞株接种于96孔培养板。然后，以20∶1的浓度向癌细胞处理以与实施例3相同的方法制备的表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞后进行共培养。将未使用慢病毒转染的Jurkat细胞用作对照组。共培养24小时后，从各孔中去除共培养的Jurkat细胞株，利用CCK-8(Dojindo公司)反应1小时后，在OD_450nm下测量吸光度来确认癌细胞的杀灭程度。结果如图4所示。

如图4所示，表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞株对A549细胞株显出抗癌效果，确认到比未使用慢病毒转染的Jurkat细胞株显出更高的抗癌效果。

通过上述结果可以确认，若利用表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞株，可以通过增加利用免疫细胞株的癌症治疗效果来有效治疗癌症。并且，只对表面表达CD300c抗原的癌细胞发生特异性反应，因此可以确认可以在减少副作用的同时使治疗效果最大化。

以上所述的内容仅用于例示本发明，本发明所属技术领域的普通技术人员可以理解的是，在不变更本发明的技术思想或必需特征的情况下可以轻易变形为其他具体形式。因此，应该理解的是，无论从何种意义上来讲，以上所述的实施例仅用于例示，而非出于限定的目的。

产业上的可应用性

由于本发明的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体与CD300c抗原或其受体特异性结合，因此，不但可以用在分泌CD300c抗原的癌症的治疗上，还可以在体内通过抑制CD300c激活T细胞等来减少副作用，不仅如此，还可以通过增加癌症的治疗效果来在多种癌症的免疫治疗中有效使用。

序列表

<110> 善萃科思生物科技公司

<120> 与CD300C抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体

<130> P22113418WP

<150> KR1020190155027

<151> 2019-11-28

<150> KR1020200162200

<151> 2020-11-27

<160> 36

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8α 信号肽

<400> 1

atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60

ccg 63

<210> 2

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8α 信号肽

<400> 2

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 3

<211> 714

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1 scFv

<400> 3

gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc cgctatgcca tgacctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atgagcggca ccggcggcac cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggtcg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgcc 300

tatggctttg atcattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagcag tggaggaggt 360

agcggaggtg gtggatctgg aggtggaggt agtgaaatcg tgctgaccca gagccctggc 420

accctgagcc tgagccctgg cgaacgcgca acactgtcat gccgcgccag ccagagcatc 480

ggcaactatc tgaactggta tcagcagaaa ccaggtcagg ctccacgtct gctgatctat 540

gatgccagca acctggaaac cggcatccct gatcgcttct caggatctgg aagcggtacc 600

gattttaccc tgaccatcag ccgcctggaa cctgaggact ttgccgtgta ttattgtcag 660

cagagtagcg ccatccctta taccttcggt cagggcacta aagtggaaat caaa 714

<210> 4

<211> 238

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1 scFv

<400> 4

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Met Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu

130 135 140

Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile

145 150 155 160

Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg

165 170 175

Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Asp Arg

180 185 190

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg

195 200 205

Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ala

210 215 220

Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235

<210> 5

<211> 729

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6 scFv

<400> 5

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc agtcagtggt 300

gcaggtcgtg gtttcttcga ctactgggga caaggtactc tggtcactgt ctcctcaggt 360

ggaggcggtt caggcggagg tggatctggc ggtggcggat cccagtctgt gctgactcag 420

ccaccttcag catctggtac tccaggtcag cgcgtcacca tcagctgcag cggtagcagc 480

agcaacattg gtagcaacta cgtgtactgg tatcagcaac tcccaggcac cgctcctaag 540

ctcctgattt acgaggacaa caagcgtcct agtggtgtgc ctgatcgctt ttctgggtcc 600

aagtctggca cctcagcctc tctggctatc agtggacttc gctccgagga cgaggctgac 660

tattactgca gcagctacac tagcagcagc actgtgatct tcggcggtgg gaccaaactg 720

accgtccta 729

<210> 6

<211> 243

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6 scFv

<400> 6

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Val Ser Gly Ala Gly Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala

130 135 140

Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser

145 150 155 160

Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly

165 170 175

Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly

180 185 190

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu

195 200 205

Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser

210 215 220

Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240

Thr Val Leu

<210> 7

<211> 720

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7 scFv

<400> 7

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc cgctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagcagc 300

cagggtatct tcgacatctg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc aggtggaggc 360

ggttcaggcg gaggtggatc tggcggtggc ggatcccagt ctgtgctgac tcagccacct 420

tcagcatctg gtactccagg tcagcgcgtc accatcagct gcagtggtaa caatatcggt 480

actagacgcg tgcattggta tcagcaactc ccagacaccg ctcctaagct cctgatttac 540

agtaagaaca accgtcctag tggtgtgcct gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc 600

tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc tccgaggacg aggctgacta ttactgcgca 660

gcatgggacg acagcctgag cggtcctgtg ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 720

<210> 8

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7 scFv

<400> 8

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly

130 135 140

Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly

145 150 155 160

Thr Arg Arg Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Asp Thr Ala Pro Lys

165 170 175

Leu Leu Ile Tyr Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

180 185 190

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

195 200 205

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp

210 215 220

Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

225 230 235 240

<210> 9

<211> 720

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10 scFv

<400> 9

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc aagcggttac 300

ggtctgatgg acgtgtgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctcagg tggaggcggt 360

tcaggcggag gtggatctgg cggtggcgga tcccagtctg tgctgactca gccaccttca 420

gcatctggta ctccaggtca gcgcgtcacc atcagctgca ctcgtagcag cggtatcatc 480

gcaagcaact acgtgcagtg gtatcagcaa ctcccaggca ccgctcctaa gctcctgatt 540

taccgcaaca accagcgccc tagtggtgtg cctgatcgct tttctgggtc caagtctggc 600

acctcagcct ctctggctat cagtggactt cgctccgagg acgaggctga ctattactgc 660

agcagctacg caggtaacaa caacctggtg ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 720

<210> 10

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10 scFv

<400> 10

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr

130 135 140

Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ile Ile

145 150 155 160

Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro

165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser

195 200 205

Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala

210 215 220

Gly Asn Asn Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

225 230 235 240

<210> 11

<211> 717

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18 scFv

<400> 11

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc gattatcata tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcagcagca gcggcggcta tacctattat 180

gccgaaagcg tgaaaagccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgatcgata 300

cgcctgcctc tggattattg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag cagtggagga 360

ggtagcggag gtggtggatc tggaggtgga ggtagtcaga gcgtgctgac ccagcctcct 420

agcgcctccg gtacaccagg acagcgcgtg actattagct gtagcggcaa caacatcggc 480

agcaaaggcg tgcattggta tcagcaactg cctggaactg cacctaagct gctgatctat 540

gaagatagca aacgccctag cggcgtgcgt gatcgcttta gcggtagcaa atcaggcacc 600

agcgccagcc tggccatcag cggccttcgc tccgaagatg aagccgatta ttattgtcag 660

agctatgata gcaccaaagg cgtggtgttt ggtggcggta ccaagctgac cgtgctg 717

<210> 12

<211> 239

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18 scFv

<400> 12

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

50 55 60

Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly

130 135 140

Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly

145 150 155 160

Ser Lys Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

165 170 175

Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Arg Asp Arg

180 185 190

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

195 200 205

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

210 215 220

Thr Lys Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

225 230 235

<210> 13

<211> 489

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD300c ECD

<400> 13

ggctattttc ctctgagcca ccccatgacc gtggcgggcc ccgtgggggg atccctgagt 60

gtgcagtgtc gctatgagaa ggaacacagg accctcaaca aattctggtg cagaccacca 120

cagattctcc gatgtgacaa gattgtggag accaaagggt cagcagggaa aaggaatggc 180

cgagtgtcca tcagggacag tcctgcaaac ctcagcttca cagtgaccct ggagaatctc 240

acagaggagg acgcaggcac ctactggtgt ggggtggata caccgtggct ccgagacttt 300

catgatccca ttgtcgaggt tgaggtgtcc gtgttcccgg ccgggacgac cacagcctcc 360

agcccccaga gctccatggg cacctcaggt cctcccacga agctgcccgt gcacacctgg 420

cccagcgtga ccagaaagga cagccccgaa cccagcccac accctggctc cctgttcagc 480

aatgtccgc 489

<210> 14

<211> 163

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD300c ECD

<400> 14

Gly Tyr Phe Pro Leu Ser His Pro Met Thr Val Ala Gly Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Ser Leu Ser Val Gln Cys Arg Tyr Glu Lys Glu His Arg Thr Leu

20 25 30

Asn Lys Phe Trp Cys Arg Pro Pro Gln Ile Leu Arg Cys Asp Lys Ile

35 40 45

Val Glu Thr Lys Gly Ser Ala Gly Lys Arg Asn Gly Arg Val Ser Ile

50 55 60

Arg Asp Ser Pro Ala Asn Leu Ser Phe Thr Val Thr Leu Glu Asn Leu

65 70 75 80

Thr Glu Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Gly Val Asp Thr Pro Trp

85 90 95

Leu Arg Asp Phe His Asp Pro Ile Val Glu Val Glu Val Ser Val Phe

100 105 110

Pro Ala Gly Thr Thr Thr Ala Ser Ser Pro Gln Ser Ser Met Gly Thr

115 120 125

Ser Gly Pro Pro Thr Lys Leu Pro Val His Thr Trp Pro Ser Val Thr

130 135 140

Arg Lys Asp Ser Pro Glu Pro Ser Pro His Pro Gly Ser Leu Phe Ser

145 150 155 160

Asn Val Arg

<210> 15

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GS linker

<400> 15

ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc 30

<210> 16

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> GS linker

<400> 16

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 17

<211> 135

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 hinge

<400> 17

accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60

tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120

gacttcgcct gtgat 135

<210> 18

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8 hinge

<400> 18

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 19

<211> 81

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD28 transmembrane domain

<400> 19

ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60

gcctttatta ttttctgggt g 81

<210> 20

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD28 transmembrane domain

<400> 20

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 21

<211> 123

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD28 intracellular domain

<400> 21

aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60

gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120

tcc 123

<210> 22

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD28 intracellular domain

<400> 22

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 23

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3zeta intracellular domain

<400> 23

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaa 339

<210> 24

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3zeta intracellular domain

<400> 24

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 25

<211> 1485

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1 CAR

<400> 25

atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60

ccggaagtgc agctgctgga aagtggaggt ggactggtgc agcctggcgg cagcctgcgc 120

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1 CAR

<400> 26

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1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

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Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Met Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr

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Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Tyr Gly Phe Asp His Trp Gly

115 120 125

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130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro

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Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg

165 170 175

Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

180 185 190

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr

195 200 205

Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

210 215 220

Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

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Gln Gln Ser Ser Ala Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val

245 250 255

Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Thr Thr

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Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro

275 280 285

Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val

290 295 300

His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val

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Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

325 330 335

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

340 345 350

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

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Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

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<212> DNA

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<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6 CAR

<400> 28

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

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Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Ile Phe Gly

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Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

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<212> DNA

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<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7 CAR

<400> 30

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1 5 10 15

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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro

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Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser

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Gly Asn Asn Ile Gly Thr Arg Arg Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro

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Asp Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser

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Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser

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Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

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Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr

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Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu

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Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val

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<212> DNA

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<220>

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gcggcggggg gcgcagtgca cacgaggggg ctggacttcg cctgtgattt ttgggtgctg 960

gtggtggttg gtggagtcct ggcttgctat agcttgctag taacagtggc ctttattatt 1020

ttctgggtga ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactccc 1080

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gcctatcgct ccagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc 1200

cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 1260

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<210> 32

<211> 496

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10 CAR

<400> 32

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

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Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

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Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro

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165 170 175

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180 185 190

Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro

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Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala

210 215 220

Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr

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Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr

245 250 255

Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr

260 265 270

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275 280 285

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

290 295 300

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325 330 335

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340 345 350

Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys

355 360 365

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370 375 380

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405 410 415

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

420 425 430

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

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<213> 人工序列

<220>

<223> SL18 CAR

<400> 33

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ggaggtagcg gaggtggtgg atctggaggt ggaggtagtc agagcgtgct gacccagcct 480

cctagcgcct ccggtacacc aggacagcgc gtgactatta gctgtagcgg caacaacatc 540

ggcagcaaag gcgtgcattg gtatcagcaa ctgcctggaa ctgcacctaa gctgctgatc 600

tatgaagata gcaaacgccc tagcggcgtg cgtgatcgct ttagcggtag caaatcaggc 660

accagcgcca gcctggccat cagcggcctt cgctccgaag atgaagccga ttattattgt 720

cagagctatg atagcaccaa aggcgtggtg tttggtggcg gtaccaagct gaccgtgctg 780

ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca 840

ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg 900

gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgatttttg ggtgctggtg 960

gtggttggtg gagtcctggc ttgctatagc ttgctagtaa cagtggcctt tattattttc 1020

tgggtgagga gtaagaggag caggctcctg cacagtgact acatgaacat gactccccgc 1080

cgccccgggc ccacccgcaa gcattaccag ccctatgccc caccacgcga cttcgcagcc 1140

tatcgctcca gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacca gcagggccag 1200

aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1260

agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1320

ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1380

ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1440

aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgctaa 1488

<210> 34

<211> 495

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18 CAR

<400> 34

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Asp Tyr His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Val Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro

145 150 155 160

Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser

165 170 175

Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser

195 200 205

Gly Val Arg Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser

210 215 220

Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Gln Ser Tyr Asp Ser Thr Lys Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys

245 250 255

Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Thr

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln

275 280 285

Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala

290 295 300

Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val

305 310 315 320

Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala

325 330 335

Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser

340 345 350

Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His

355 360 365

Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg

370 375 380

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

385 390 395 400

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

405 410 415

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

420 425 430

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

435 440 445

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

450 455 460

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

465 470 475 480

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490 495

<210> 35

<211> 1260

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD300c ECD CAR

<400> 35

atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60

ccgggctatt ttcctctgag ccaccccatg accgtggcgg gccccgtggg gggatccctg 120

agtgtgcagt gtcgctatga gaaggaacac aggaccctca acaaattctg gtgcagacca 180

ccacagattc tccgatgtga caagattgtg gagaccaaag ggtcagcagg gaaaaggaat 240

ggccgagtgt ccatcaggga cagtcctgca aacctcagct tcacagtgac cctggagaat 300

ctcacagagg aggacgcagg cacctactgg tgtggggtgg atacaccgtg gctccgagac 360

tttcatgatc ccattgtcga ggttgaggtg tccgtgttcc cggccgggac gaccacagcc 420

tccagccccc agagctccat gggcacctca ggtcctccca cgaagctgcc cgtgcacacc 480

tggcccagcg tgaccagaaa ggacagcccc gaacccagcc cacaccctgg ctccctgttc 540

agcaatgtcc gcggtggcgg aggttctgga ggtggaggtt ccaccacgac gccagcgccg 600

cgaccaccaa caccggcgcc caccatcgcg tcgcagcccc tgtccctgcg cccagaggcg 660

tgccggccag cggcgggggg cgcagtgcac acgagggggc tggacttcgc ctgtgatttt 720

tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 780

tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 840

atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 900

gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac 960

cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat 1020

gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac 1080

cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag 1140

attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc 1200

agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa 1260

<210> 36

<211> 419

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD300c ECD CAR

<400> 36

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gly Tyr Phe Pro Leu Ser His Pro Met Thr Val

20 25 30

Ala Gly Pro Val Gly Gly Ser Leu Ser Val Gln Cys Arg Tyr Glu Lys

35 40 45

Glu His Arg Thr Leu Asn Lys Phe Trp Cys Arg Pro Pro Gln Ile Leu

50 55 60

Arg Cys Asp Lys Ile Val Glu Thr Lys Gly Ser Ala Gly Lys Arg Asn

65 70 75 80

Gly Arg Val Ser Ile Arg Asp Ser Pro Ala Asn Leu Ser Phe Thr Val

85 90 95

Thr Leu Glu Asn Leu Thr Glu Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Gly

100 105 110

Val Asp Thr Pro Trp Leu Arg Asp Phe His Asp Pro Ile Val Glu Val

115 120 125

Glu Val Ser Val Phe Pro Ala Gly Thr Thr Thr Ala Ser Ser Pro Gln

130 135 140

Ser Ser Met Gly Thr Ser Gly Pro Pro Thr Lys Leu Pro Val His Thr

145 150 155 160

Trp Pro Ser Val Thr Arg Lys Asp Ser Pro Glu Pro Ser Pro His Pro

165 170 175

Gly Ser Leu Phe Ser Asn Val Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

180 185 190

Gly Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr

195 200 205

Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala

210 215 220

Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe

225 230 235 240

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

245 250 255

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

260 265 270

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

275 280 285

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

290 295 300

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

305 310 315 320

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

325 330 335

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

340 345 350

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

355 360 365

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

370 375 380

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

385 390 395 400

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

405 410 415

Pro Pro Arg

Claims

1.一种嵌合抗原受体，与CD300c抗原或其受体特异性结合，其特征在于，上述嵌合抗原受体包含选自由与CD300c抗原或其受体特异性结合的抗体、单域抗体、单链可变片段及抗原组成的组中的一种以上。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，上述嵌合抗原受体包含由序列4、6、8、10、12或14表示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，上述嵌合抗原受体还包含信号肽(signalpeptide)、GS接头、跨膜结构域(transmembrane domain)以及胞质内结构域(intracytoplasmic domain)。

4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，上述信号肽为CD8α信号肽。

5.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，上述跨膜结构域为CD8铰链(hinge of cluster of differentiation 8)及CD28跨膜结构域(CD28transmembranedomain)。

6.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，上述胞质内结构域为CD28胞内结构域(CD28 intracellular domain)及CD3ζ胞内结构域(CD3ζintracellular domain)。

7.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，上述嵌合抗原受体用作治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的用途。

8.一种重组载体，其特征在于，表达权利要求1至7中任一项所述的嵌合抗原受体。

9.一种免疫细胞，其特征在于，由权利要求8所述的重组载体转化而成。

10.根据权利要求9所述的免疫细胞，其特征在于，上述免疫细胞为选自由单核细胞、巨噬细胞、T细胞、自然杀伤细胞(Naturalkiller cell；NK cell)及树突状细胞组成的组中的一种以上。

11.一种用于预防或治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的药物组合物，其特征在于，包含权利要求9所述的免疫细胞作为有效成分。

12.根据权利要求11所述的用于预防或治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的药物组合物，其特征在于，上述癌症为选自由大肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、口腔癌、咽癌、喉癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、舌癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、骨癌及血液癌组成的组中的一种以上。

13.根据权利要求11所述的用于预防或治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的药物组合物，其特征在于，上述药物组合物还包含其他抗癌药物。

14.根据权利要求11所述的用于预防或治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的药物组合物，其特征在于，上述药物组合物抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌药物耐药性。

15.一种预防或治疗癌症的方法，其特征在于，包括向个体给药包含权利要求9所述的免疫细胞作为有效成分的组合物的步骤。

16.一种组合物的预防或治疗癌症的用途，其特征在于，上述组合物包含权利要求9所述的免疫细胞作为有效成分。