CN117651713A - 与cd300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体 - Google Patents

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Abstract

公开了与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体、表达该所述嵌合抗原受体的免疫细胞，等等，其中根据本公开的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体能够特异性识别表达CD300c抗原或CD300c受体的癌细胞，从而能够以直接和有效的方式抑制癌细胞的生长、转移和发展等，并可有效地用作各种癌症的免疫治疗剂、因此可以直接有效地抑制癌症的生长、转移、发展等等，并可有效地用作各种癌症的免疫治疗剂。

Description

与CD300C抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体
[技术领域]
本公开涉及与CD300抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体、表达所述受体的免疫细胞、其用途、等等。
[背景技术]
癌症是现代人死亡原因中占比最大的疾病之一。这种疾病是由各种原因导致的基因突变使正常细胞发生变化而引起的，并且是指不按照正常细胞的分化、增殖、生长模式等规律生长的恶性肿瘤。癌症的特征在于“不受控制的细胞生长”，这种异常的细胞生长会形成称为肿瘤的细胞团，其浸润周围组织，并且严重时可能转移到身体的其他器官。癌症是一种棘手的慢性疾病，其在很多情况下即使通过手术、放疗、化疗等等治疗也无法从根本上治愈，给患者带来痛苦，并最终导致死亡。特别是近年来，由于老年人口增加、环境恶化等原因，全球癌症发病率每年以5％以上的速度递增。根据世界卫生组织的报告，预计在未来25年内，癌症患者人数将增至3000万，其中2000万将死于癌症。
癌症药物治疗，即抗癌剂，通常是细胞毒性化合物，通过攻击和杀死癌细胞来治疗癌症。然而，这些抗癌剂不仅会损害癌细胞，还会损害正常细胞，因此会产生很大的不良反应。因此，人们开发了靶向治疗药物来减少不良反应。然而，这些靶向治疗药物虽然可以减少不良反应，但也有其局限性，即很大可能性发生耐药。因此，近年来，人们对利用人体免疫系统来减少毒性和抗药性问题的免疫治疗剂的兴趣迅速增加。作为此类免疫治疗药物的一个实例，免疫检查点抑制剂已被开发出来，其特异性地与癌细胞表面的PD-L1结合，抑制T细胞与PD-1的结合，从而激活T细胞攻击癌细胞。然而，即使是这些免疫检查点抑制剂，在多种类型的癌症中也是无效的。因此，亟需开发对各种癌症具有同等治疗效果的新型免疫治疗剂。
同时，嵌合抗原受体(CAR)是一种被设计为向T细胞提供抗原特异性的人工受体，由能激活T细胞并提供特异性免疫的抗原特异性结构域、跨膜结构域和胞内结构域等组成。最近，人们正在积极开展癌症免疫疗法的研究，使用其中已经引入了编码此类嵌合抗原受体的基因的细胞，即通过从病人体内收集T细胞，将编码嵌合抗原受体的基因引入这些T细胞并扩增，然后再转回病人体内的一种治疗癌症的方法。
[现有技术文件]
[专利文件]
(专利文件1)韩国专利公开号No.10-2016-0016725
[公开]
[技术问题]
本公开旨在解决如上描述的现有技术中的问题。
本公开的一个方面是提供一种用于预防或治疗癌症的嵌合抗原受体，包括一个与CD300c抗原或其受体特异性结合的结合结构域。
本公开的另一方面是提供表达所述嵌合抗原受体的免疫细胞。
本公开的再另一个方面是提供编码所述嵌合抗原受体的分离的核酸分子。
本公开的再另一个方面是提供包括编码所述嵌合抗原受体的核酸分子的载体。
本公开的再另一个方面是提供使用所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞的抗癌疗法。
本公开的再另一个方面是提供预防或治疗癌症的方法，所述方法使用所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞。
本公开的再另一个方面是提供所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞用于预防或治疗癌症的用途。
本公开的再另一个方面是提供所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
本公开的一个方面并不局限于上述方面。通过下面的描述，本公开的各个方面将更加清晰，并将通过权利要求书中描述的方法及其组合来实现。
[技术方案]
为实现上述方面，本公开的代表性特征如下。
根据本公开的一个方面，提供了嵌合抗原受体，其包括与CD300c抗原或其受体特异性结合的结合结构域。
根据本公开的另一方面，提供了包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞。
根据本公开的再另一个方面，提供了编码所述嵌合抗原受体的核酸。
根据本公开的再另一个方面，提供了表达所述嵌合抗原受体的载体。
根据本公开的再另一个方面，提供了含有所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞的药物组合物。
根据本公开的再另一个方面，提供了预防或治疗癌症的方法，其包括向受试者施用所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞。
根据本公开的再另一个方面，提供了使用所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞的抗癌疗法。
根据本公开的再另一个方面，提供了所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞用于预防或治疗癌症的用途。
根据本公开的再另一个方面，提供了所述嵌合抗原受体或包括所述嵌合抗原受体的免疫细胞用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
[有益效果]
根据本公开的与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体能够特异性识别表达CD300c抗原或CD300c受体的癌细胞，从而能够以直接有效的方式抑制癌症的生长、转移、发展等等，并能够有效地用于治疗在其表面表达CD300c抗原或CD300c受体的各种癌症。
[附图简介]
图1a至1y分别说明了根据本公开的25种类型的抗CD300c单克隆抗体的重链和轻链可变区序列(核酸和氨基酸序列)。在每幅图中，CDR区域(CDR1、CDR2和CDR3)循序出现。
图2是简要说明本公开的抗CD300c单克隆抗体和/或CD300c siRNA发挥抗癌作用的机理的示意图。
图3是简要说明了本公开的抗CD300c单克隆抗体分别作用于单核细胞、T细胞和癌细胞的机制的示意图。
图4展示了根据本公开的一个实施方案，抗CD300c单克隆抗体在非还原条件下的SDS-PAGE结果。
图5展示了根据本公开的一个实施方案，抗CD300c单克隆抗体在还原条件下的SDS-PAGE结果。
图6展示了根据本公开的一个实施方案，通过比较普通细胞、免疫细胞和癌细胞系中CD300c的表达所获得的结果。
图7展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体与CD300c抗原的结合亲和力所获得的结果。
图8展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体通过T细胞活化的抗癌作用所获得的结果。
图9和10展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体对分化为M1巨噬细胞的影响所获得的结果。
图11和12展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体对分化为M1巨噬细胞的浓度依赖性影响所获得的结果。
图13展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体对分化为M1巨噬细胞的影响所获得的结果。
图14展示了根据本公开的一个实施方案，通过再检测抗CD300c单克隆抗体是否促进人单核细胞分化为M1巨噬细胞所获得的结果。
图15至图18展示了根据本公开的一个实施方案，通过使用ELISA法对抗CD300c单克隆抗体和常规免疫治疗剂对于分化为M1巨噬细胞的能力进行比较所得到的结果。
图19展示了根据本公开的一个实施方案，通过使用ELISA对抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂对于从M0巨噬细胞分化为M1巨噬细胞的能力进行比较所得到的结果。
图20展示了根据本公开的一个实施方案，通过使用ELISA对抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂对于分化为M1巨噬细胞的能力进行比较所得到的结果。
图21至23展示了根据本公开的一个实施方案，通过使用ELISA法检测抗CD300c单克隆抗体对于从M2巨噬细胞重分化(再极化)为M1巨噬细胞的能力所获得的结果。
图24展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体向M1巨噬细胞的分化能力和再分化(再极化)能力所获得的结果。
图25至27展示了在根据本公开的一个实施方案中的抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂联合处理中，通过检测M1巨噬细胞分化信号MAPK((图25)、NF-κB((图26)和IκB(图27)的信号转导所获得的结果。
图28展示了根据本公开的一个实施方案，通过在0％FBS条件下检测抗CD300c单克隆抗体对癌细胞生长的抑制作用所获得的结果。
图29展示了根据本公开的一个实施方案，通过在0.1％FBS条件下检测抗CD300c单克隆抗体对癌细胞生长的抑制作用所获得的结果。
图30展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂对癌(肺癌)细胞生长的抑制作用所获得的结果。
图31展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂对癌(乳腺癌)细胞生长的抑制作用。
图32展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体的取决于其浓度对癌细胞生长的抑制作用所获得的结果。
图33展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测在抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂的共同处理下的细胞凋亡信号的变化情况所获得的结果。
图34和35展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗药物共同处理中对癌细胞生长的抑制效果所获得的结果。
图36展示了根据本公开的一个实施方案的结合ELISA结果。
图37展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体能否促进小鼠巨噬细胞分化为M1巨噬细胞所获得的结果。
图38展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体是否在小鼠癌细胞系中表现出抗癌作用所获得的结果。
图39示意性地展示了本公开的一个实施方案中使用的实验性方法。
图40展示了根据本公开的一个实施方案，给植入结直肠癌细胞系的小鼠单独施用或联合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体时观察到的体内癌症生长抑制效果。
图41展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体是否能够刺激小鼠肿瘤模型中的CD8+T细胞免疫所获得的结果。
图42展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测抗CD300c单克隆抗体是否会增加小鼠模型中癌症组织中的M1巨噬细胞所获得的结果。
图43简要展示了根据本公开的一个实施方案，用于构建特异性结合CD300c抗原或其受体的嵌合抗原受体的基因排列。
图44简要展示了根据本公开的一个实施方案，用于构建特异性结合CD300c抗原或其受体的嵌合抗原受体的载体图谱。
图45展示了根据本公开的一个实施方案，通过使用蛋白质印迹法检测表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞系所获得的结果。
图46展示了根据本公开的一个实施方案，通过检测表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞系的抗癌作用所获得的结果。
[实施发明的最佳模式]
下面将参照具体附图，对于本公开内容在其中被实践的具体实施方案，详细描述本公开的具体说明书。然而，本公开内容并不局限于此，且本公开内容的范围仅由所附权利要求(经适当解释)以及权利要求所享有的全面的等同形式来界定。应当理解的是，本公开的各种实施方案虽然彼此不同，但并不一定相互排斥。例如，本文所描述的特定特征、结构或特性可以从一个实施方案到另一个实施方案而有所不同，或作为实施方案的组合而实现，而不脱离本公开的精神和范围。除非另有定义，本文中使用的技术和科学术语具有与本公开所属技术领域中常用术语相同的含义。出于解释本说明书的目的，除非上下文另有明确规定，否则以下定义将适用，单数形式包括复数指代，反之亦然。
定义
本文所用术语"大约"是指在特定值的可接受误差范围内，其是本领域普通技术人员已知的。
术语“((抗原)结合结构域”是指蛋白质中与抗原结合的部分。抗原结合结构域可以是合成多肽、可酶促获得的多肽或基因工程多肽，也可以是与抗原结合的免疫球蛋白(如抗体)或其部分(如抗原结合片段)。
术语“抗体”广泛地使用，并且包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE等任何亚型的单克隆抗体(包括全长抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、抗体融合(例如抗体与(多)肽的融合或抗体与化合物的融合)以及抗体片段(包括抗原结合片段)。在本文中，前缀“抗”与抗原连用时，表示给定的抗体与给定的抗原有反应。不受限制地，与特定抗原反应的抗体可通过合成和/或重组方法产生，如在噬菌体或类似载体中的重组抗体库的选择，或用抗原或编码抗原的核酸免疫动物。典型的IgG抗体包含两条相同的重链和两条相同的轻链通过二硫键连接。每条重链和轻链都包含恒定区和可变区。重链可变区(HVR)和轻链可变区(LVR)分别包含三个称为“互补决定区”((“CDR”)或“高变区”的区段，其主要负责结合抗原上的表位。这些通常被称为CDR1、CDR2和CDR3，从N端开始依顺序编号。可变区中CDR之外的保守程度更高的部分称为“框架区”((“FR”)。本文的抗体可以是例如动物抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
术语“单结构域抗体”是一种特异性针对CD300c抗原的抗体，其中CDR是单结构域多肽的一部分，并且通常只需使用两条重链和一个抗原结合位点即可制备。然而，单结构域抗体可以包括所有天然缺乏轻链的抗体、从常规4链抗体衍生的单结构域抗体、工程化抗体以及除了那些从抗体衍生之外的单结构域支架。
术语“单链可变片段(scFv)”是指一种蛋白质，其中抗体的轻链可变区和重链可变区经由由具有约15个氨基酸残基的肽序列组成的接头相互连接。scFv可以是以轻链可变结构域-接头-重链可变区的顺序，也可以是以重链可变区-接头-轻链可变区的顺序，并具有与其原始抗体相同或相似的抗原特异性。连接部位是主要由甘氨酸和丝氨酸组成的亲水性柔性肽链(SG接头)。主要使用的是15个氨基酸的序列“(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3”或类似的序列。抗体是指与特定抗原发生免疫反应的免疫球蛋白分子，包括所有多克隆抗体、单克隆抗体及其功能片段。此外，该术语还包括通过基因工程产生的形式，诸如嵌合抗体(例如，人源化鼠抗体)和异源抗体(例如，双特异性抗体)。在这之中，单克隆抗体是对单一抗原位点(表位)表现出单一结合特异性和亲和力的抗体。与多克隆抗体(包括了对不同表位表现出特异性的抗体)不同，单克隆抗体对抗原上的单一表位表现出结合特异性和亲和力，这便于作为治疗药物进行质量控制。特别是，本公开的抗CD300c单克隆抗体不仅本身通过与表达CD300c的癌细胞特异性结合而表现出抗癌活性，而且还通过刺激免疫细胞而表现出最大化的癌细胞依赖性抗癌活性。抗体在构成上包括重链和/或轻链的可变区，其中可变区作为其一级结构包括了形成抗体分子抗原结合位点的部分。本公开的抗体可由包含可变区的部分片段组成。
术语“人源化”((也称为再成形(reshaping)或CDR移植)包括一种成熟的技术，用于降低异种来源(通常是啮齿动物)的单克隆抗体的免疫原性，和用于改善其亲和力或效应子功能(ADCC、补体激活、C1q结合)。
本文所用的术语"单克隆抗体"是指从基本同质的抗体群体中获得的抗体，也就是说，除了可能以很小的量存在的可能的天然突变和/或翻译后修饰(例如，异构化或酰胺化)，构成该群体的单个抗体是相同的。单克隆抗体具有高度特异性，针对单一抗原位点。单克隆抗体是从基本上同质的抗体群中获得的，显示了抗体的性质，并且不被解释为需要通过任何特定方法进行抗体的生产。例如，根据本公开内容使用的单克隆抗体可以通过多种技术构建，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法以及利用含有全部或部分人类免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法。
术语“抗原结合片段”是指抗体中与抗原或包括抗原的多肽具有特异性结合能力的一个部分。“抗体”和“抗原结合片段”这两个术语可以互换使用，除非在上下文中被理解为“抗体”明确排除了“抗原结合片段”的情况，并且“抗体”可以理解为包括“抗原结合片段”。抗原结合片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab′、Fab′-SH、F(ab′)2、双体抗体((diabody)、三抗体(triabody)、四抗体(tetrabody)、交叉-Fab片段、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)以及由抗体片段和单结构域抗体组成的多特异性抗体。
术语“嵌合抗原受体”或“CAR”被定义为一种细胞表面受体，它包括细胞外靶标结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。本公开的嵌合抗原受体主要旨在用于淋巴细胞，如T细胞和自然杀伤(NK)细胞。
术语“抗癌剂”统指用于常规癌症治疗的已知药物，这些药物作用于细胞的各种代谢途径，对癌细胞产生细胞毒性或细胞抑制作用。抗癌剂包括化学治疗剂、靶向治疗剂和免疫治疗剂。
“免疫治疗剂”是指能激活免疫细胞杀死癌细胞的药物。
术语"受试者"可与"患者"互换使用，可以是需要预防或治疗癌症的哺乳动物，如灵长类动物(如人)、伴侣动物(如狗、猫等)、家畜(如牛、猪、马、绵羊、山羊等)和实验动物(如大鼠、小鼠、豚鼠等)。在本公开的一个实施方案中，受试者是人。
术语"治疗"一般是指获得所需的药理和/或生理效应。这种效果可以是治疗性的，即部分或完全治愈疾病和/或归因于疾病的不良反应。理想的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、削弱疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展速度、改善或减缓疾病状态、缓解或改善预后。优选地，"治疗"可以指对已经发生的疾病或病症进行医疗干预。
术语“预防”是指预防性治疗，即一种措施或程序，其目的是防止而不是治愈疾病。术语“预防”是指获得预期的药理和/或生理效果，从完全或部分防止疾病或其症状角度而言是预防性的。
术语“给药/施用”是指向受试者提供一种物质(例如，抗CD300c抗体或其抗原结合片段和其他抗癌剂)，以达到预防或治疗目的(例如，防止或治疗癌症)。
术语"生物样本"包括从受试者身上获取的各种样本类型，可用于诊断性或监测性测定。生物样本包括但不限于血液和其他生物来源的液体样本，以及固体组织样本，如活检标本或组织培养物或由此衍生的细胞及其后代。因此，生物样本涵盖临床样本，也包括培养中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物液体和组织样本，尤其是肿瘤样本。
嵌合抗原受体
根据本公开的一个方面，提供了嵌合抗原受体，其包括一个特异性结合CD300c抗原或其受体的结合结构域。嵌合抗原受体(CAR)是一种人工构建的杂合蛋白或多肽，其含有与T细胞信号传导结构域相连接的抗体(例如scFv)的抗原结合结构域。通过利用单克隆抗体的抗原结合能力，嵌合抗原受体能够以非MHC限制的方式诱导T细胞对选定靶点产生特异性和反应性。嵌合抗原受体可包括(胞外)抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。此外，嵌合抗原受体还可进一步包括GS接头。此外，嵌合抗原受体还可进一步包括信号肽。在一个实施方案中，嵌合抗原受体可包括(胞外)抗原结合结构域、GS接头、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。在另一个实施方案中，嵌合抗原受体可包括(胞外)抗原结合结构域、信号肽、GS接头、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。除以上所列举的组件外，本公开的嵌合抗原受体还可包括本领域公知的任何嵌合抗原受体组件。
在一个实施方案中，结合结构域可包括由抗体、单结构域抗体和单链可变片段((其中每一个都特异性地与CD300c抗原或其受体以及抗原结合)组成的组中的任意一项或多项。
具体地，结合结构域可以是CD300c抗原。CD300c抗原可包括整个CD300c抗原序列或CD300c抗原序列的用于与其受体结合的胞外结构域(ECD)。CD300c抗原的胞外结构域序列可包括SEQ ID NO:402所示的氨基酸序列或由其组成。此外，胞外结构域序列可包括与SEQ ID NO:402具有70％或更高、75％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高或98％或更高序列同一性的氨基酸序列。
此外，结合结构域可以是抗CD300c抗体(优选抗CD300c单克隆抗体)或其抗原结合片段。不过，所述结合结构域可以包括任何物质，只要其能与CD300c抗原或其受体特异性结合。在这方面，在结合结构域是抗体或其抗原结合片段的情况下，可通过本领域已知的任何抗体生产技术来制备此类结合结构域。
在一个实施方案中，所述结合结构域可包括：
(i)重链可变区，其包括：CDR1，其包括选自由SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:103、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:223、SEQ IDNO:235、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:271、SEQ ID NO:283、和SEQ ID NO:295组成的组的氨基酸序列，或由其组成；
CDR2，其其包括选自由SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:104、SEQ IDNO:116、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:200、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:236、SEQ IDNO:248、SEQ ID NO:260、SEQ ID NO:272、SEQ ID NO:284、和SEQ ID NO:296组成的组的氨基酸序列，或由其组成；
CDR3，其包括选自由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:177、SEQID NO:189、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:285、和SEQ ID NO:297组成的组的氨基酸序列，或由其组成；和
(ii)轻链可变区，其包括：CDR1，其包括选自由SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:22、SEQID NO:34、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:94、SEQID NO:106、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:226、SEQID NO:238、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:286、和SEQ IDNO:298组成的组的氨基酸序列，或由其组成；
CDR2，其其包括选自由SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:107、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:179、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:239、SEQ IDNO:251、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:287、和SEQ ID NO:299组成的组的氨基酸序列，或由其组成；
CDR3，其包括选自由SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:180、SEQID NO:192、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:288、和SEQ ID NO:300组成的组的氨基酸序列，或由其组成。
在另一个实施方案中，(i)重链可变区可包括：
CDR1，其包括如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:115、或SEQ ID NO:211所示的序列，或由其组成；
CDR2，其包括如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:116、或SEQ ID NO:212所示的序列，或由其组成；和
CDR3，其包括如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:117、或SEQ ID NO:213所示的序列，或由其组成；并且
(ii)轻链可变区可包括：
CDR1，其包括如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:118、或SEQ ID NO:214所示的序列，或由其组成；
CDR2，其包括如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:119、或SEQ ID NO:215所示的序列，或由其组成；和
CDR3，其包括如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:120、或SEQ ID NO:216所示的序列，或由其组成。
在另一个实施方案中，重链可变区可包括如SEQ ID NO:303、SEQ ID NO:323、SEQID NO:327、SEQ ID NO:339或SEQ ID NO:371所示的氨基酸序列，轻链可变区可包括SEQ IDNO:304、SEQ ID NO:324、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:340或SEQ ID NO:372所示的氨基酸序列。优选地，重链可变区可包括SEQ ID NO:303所示的氨基酸序列，轻链可变区可包括SEQID NO:304所示的氨基酸序列；重链可变区可包括SEQ ID NO:323所示的氨基酸序列，轻链可变区可包括SEQ ID NO:324所示的氨基酸序列；重链可变区可包括SEQ ID NO：327所示的氨基酸序列，轻链可变区可包括SEQ ID NO:328所示的氨基酸序列；重链可变区可包括SEQID NO:339所示的氨基酸序列，轻链可变区可包括SEQ ID NO:340所示的氨基酸序列；重链可变区可包括SEQ ID NO:371所示的氨基酸序列，重链可变区可包括SEQ ID NO:372所示的氨基酸序列。
在又另一个实施方案中，所述嵌合抗原受体的结合结构域可包括重链可变区，其包括分别包括式(1)至式(3)所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1至CDR3，以及一个轻链可变区，其包括分别包括式(4)至式(6)所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1至CDR3(每个氨基酸序列以N→C方向表示)：
FTFSX1YX2MX3WVR(1)(SEQ ID NO:403)
其中
X1＝R、S、或D
X2＝A、G、或H
X3＝T、H、或S
X1X2SX3X4GGX5TYYAX6(2)(SEQ ID NO:404)
其中
X1＝S、A、或T
X2＝M或I
X3＝G或S
X4＝T或S
X5＝T、S、或Y
X6＝D或E
YCAX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11W(3)(SEQ ID NO:405)其中
X1＝R、V、或S
X2＝G或S
X3＝A、G、S、Y、或I
X4＝Y、A、Q、G、或R
X5＝G或L
X6＝F、R、I、M、或P
X7＝D、G、F、或L
X8＝H、F、D、或V
X9＝F、I、Y或不存在
X10＝D或不存在
X11＝Y或不存在
CX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13W(4)(SEQ ID NO:406)其中
X1＝R、S、或T
X2＝A、G、或R
X3＝S或N
X4＝Q、S、或N
X5＝S、I、或G
X6＝I、N、或G
X7＝G、I、T、或S
X8＝N、G、R、A、或K
X9＝Y、S、R、或G
X10＝N或不存在
X11＝Y或不存在
X12＝L或V
X13＝N、Y、H、或Q
X1X2X3X4X5X6X7GX8X9(5)(SEQ ID NO:407)
其中
X1＝D、E、S、或R
X2＝A、D、K、或N
X3＝S或N
X4＝N、K、或Q
X5＝L或R
X6＝E或P
X7＝T或S
X8＝I或V
X9＝P或R
YCX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11F(6)(SEQ ID NO:408)
其中
X1＝Q、S、或A
X2＝Q、S、或A
X3＝S、Y、或W
X4＝S、T、D、或A
X5＝A、S、D、或G
X6＝I、S、N、或T
X7＝P、S、L、N、或K
X8＝Y、T、S、N、或G
X9＝V、G、L或不存在
X10＝P或不存在
X11＝T、I、或V.
在一个具体的实施方案中，所述结合结构域可以是单链可变区段(scFv)，并且可以包括选自由SEQ ID NO：412、414、416、418、420、422、424、426、428、430、432、434、436、438和440组成的组的氨基酸序列，或由其组成。优选地，所述结合结构域可包括SEQ ID NO：412、414、416、418或440或由其组成。
所述结合结构域可包括与如上描述的任何氨基酸序列具有80％或更高、优选90％或更高、更优选95％或更高、最优选98％或更高序列同一性的序列。
在一个具体的实施方案中，可以考虑本公开的抗体的氨基酸序列变体。例如，改善抗体的结合亲和力和/或其他生物特性可能是满足需要的。抗体的氨基酸序列变体的制备可通过在编码分子的核苷酸序列中引入适当的修饰，或通过肽合成。此类修饰包括从抗体的氨基酸序列中缺失残基，和/或向此类氨基酸序列中插入残基，和/或在此类氨基酸序列内取代残基。只要最终构建体具有所需的特性((例如抗原结合特性)，就可以对各种修饰((包括缺失、插入和取代)进行任意组合，以获得最终构建物。取代诱变的目的位点包括重链可变区(HVR)和框架区(FR)。表1在"优选取代"标题下提供了保守取代，并在下文氨基酸侧链类别(1)至(6)中作了进一步说明。可将氨基酸取代引入目的分子，并对产物进行所需活性的筛选，例如保持/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改进的ADCC或CDC。
[表1]
原始残基 示例性取代 优选取代
Ala(A) Val；Leu；Ile Val
Arg(R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn(N) Gln；His；Asp；Lys；Arg Gln
Asp(D) Glu；Asn Glu
Cys(C) Ser；Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
Glu(E) Asp；Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸 Leu
Leu(L) 正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys(K) Arg；Gln；Asn Arg
Met(M) Leu；Phe；Ile Ile
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸 Leu
氨基酸可根据共同的侧链特性进行分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链方向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代将需要转换一个类别成员为另一个类别。
本文所用术语"氨基酸序列变体"包括实质性变体，其中亲本抗原结合分子(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基中存在氨基酸取代。一般地，被选作进一步研究的变体将具有修饰，例如，在某些生物学特性上相对于亲本抗原结合分子有所改进(例如，亲和力增强或免疫原性降低)，和/或基本保留了亲本抗原结合分子的某些生物学特性。一种示例性的取代性变体是亲和力成熟抗体，其可以方便地产生，例如，使用本领域已知的基于噬菌体展示的亲和力成熟技术。简而言之，一个或多个HVR残基被突变，并且变体抗原结合分子被展示在噬菌体上，并针对特定的生物活性(例如结合亲和力)进行筛选。在一个具体的实施方案中，可以在一个或多个HVR内进行取代、插入或缺失，只要此类改变没有实质性降低抗原结合分子结合抗原的能力。例如，可以在HVRs中进行不大幅降低结合亲和力的保守改变(如本文提供的保守取代)。
此外，还提供了本公开的抗体或其抗原结合片段的变体，它们对CD300c抗原或其受体的亲和力有所提高。此类变体可通过多种亲和力成熟方案获得，包括CDR突变(Yang等人,J.Mol.Biol.,254,392-403,1995)、链更替(chain shuffling,Marks等人,Bio/Technology,10,779-783,1992)、大肠杆菌突变株的使用(Low等人,J.Mol.Biol.,250,359-368,1996)、DNA更替(DNAshuffling,Patten等人,Curr.Opin.Biotechnol.,8,724-733,1997)、噬菌体展示(Thompson等人,J.Mol.Biol.,256,77-88,1996)和有性PCR(Crameri等人,Nature,391,288-291,1998)。Vaughan等人(Science,239,1534-1536,1988年)对这些亲和力成熟方法进行了讨论。
抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段可能具有种间交叉反应性。具体地，抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段可在人和小鼠CD300c抗原之间表现出交叉反应。这种交叉反应在实施例6.3和6.4中确认。
在一个具体的实施方案中，所述信号肽可以是或包括CD8α信号肽。
在一个具体的实施方案中，所述GS接头可以是由甘氨酸和丝氨酸组成的5至15肽。具体地，GS接头可包括SEQ ID NO:422所示的氨基酸序列或由其组成。
在一个具体的实施方案中，所述跨膜结构域可以是或包括CD8铰链区(分化簇8铰链)和/或CD28跨膜结构域。CD8铰链可包括SEQ ID NO:424所示的氨基酸序列或由其组成。CD28跨膜结构域可包括SEQ ID NO:426所示的氨基酸序列或由其组成。
在一个具体的实施方案中，细胞内信号传导结构域可以是或包括CD28胞内结构域和/或CD3ζ胞内结构域。CD28胞内结构域可包括SEQ ID NO:428所示的氨基酸序列或由其组成。CD3ζ细胞内结构域可包括SEQ ID NO:430所示的氨基酸序列或由其组成。
多核苷酸、载体和免疫细胞
根据本公开的另一方面，提供了包括编码所述嵌合抗原受体的核酸序列的多核苷酸、包括所述多核苷酸的载体(例如表达载体)和表达所述嵌合抗原受体的免疫细胞。
本公开的多核苷酸可包括编码构成嵌合抗原受体或被包含在嵌合抗原受体中的氨基酸序列的任何核酸序列，还可包括与其具有80％或更高、优选90％或更高、更优选95％或更高、最优选98％或更高同一性的核酸序列。
“载体”指的是一种核酸分子，其能够转运与之相连的另一种核酸。一种类型的载体是"质粒"，其指的是环状双链DNA环，其中可以插入额外的DNA片段。另一种类型载体是病毒载体，在这种载体中存在源自病毒的DNA或RNA序列，用于包装成病毒。特定的载体能够在其被引入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离复制型(episomal)哺乳动物载体)。其他载体(如非游离复制型哺乳动物载体)在引入宿主细胞后会整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，特定的载体能诱导与之操作性连接的基因的表达。此类载体在此称为"表达载体"。DNA重组技术中常用的表达载体通常是质粒形式。如本文所用，术语"质粒"和"载体"可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本公开内容还包括其他形式的表达载体，诸如病毒载体(例如慢病毒、复制缺陷逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，它们具有同等的功能。
表达本公开的嵌合抗原受体的免疫细胞可通过用载体转化免疫细胞而产生。例如，免疫细胞可通过向免疫细胞中引入包括编码所需嵌合抗原受体的核酸序列的慢病毒载体来产生。
在一个实施方案中，所述免疫细胞可以是选自由单核细胞、巨噬细胞、T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)和树突状细胞组成的组中的一种或多种。此外，只要可用于预防或治疗癌症，任何免疫细胞都可包括在其中。优选地，本公开的免疫细胞可以是T细胞。就本公开的目的而言，T细胞可以是任何T细胞，诸如培养的T细胞，例如原代T细胞，或来自培养的T细胞系的T细胞，例如Jurkat、SupT1等等，或获自哺乳动物的T细胞。从哺乳动物体内获得的T细胞可以从多种来源获得，包括但不限于骨髓、血液、淋巴结、胸腺或其他组织或体液。T细胞也可以被富集或纯化。T细胞可以是人T细胞。T细胞可以是从人体分离的T细胞。T细胞可以是任何类型的T细胞，并且可以处于任何发育阶段，包括但不限于CD4+/CD8+双阳性T细胞、CD8+T细胞(例如细胞毒性T细胞)、CD4+辅助性T细胞(例如Th1和Th2细胞)、外周血单个核细胞(PBMC)、外周血白细胞(PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、记忆T细胞、初始T细胞、等等。T细胞可以是CD8+T细胞或CD4+T细胞。
预防或治疗癌症的方法
根据本公开的另一个方面，提供了一种通过使用本公开的免疫细胞在受试者中预防或治疗癌症、减轻或降低癌症至少一种症状或体征的严重程度、抑制转移或抑制癌症生长的方法。如本文所用的"预防或治疗癌症"可包括抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌剂耐药性。此类方法可包括向需要预防或治疗癌症的受试者施用本公开的免疫细胞。因此，提供了一种包括免疫细胞作为活性成分的组合物，用于预防或治疗癌症。
如本文所用，术语"癌症"是指一种生理状况，其典型特征是哺乳动物体内不受调节的细胞生长。根据发生部位的不同，本公开内容中要预防或治疗的癌症可包括结直肠癌、小肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、内分泌腺癌、口腔癌、舌癌、咽癌、喉癌、食道癌、宫颈癌、子宫癌、输卵管癌、卵巢癌、脑癌、头颈癌、肺癌、肺癌、淋巴腺癌、胆囊癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌(或黑色素瘤)、乳腺癌、胃癌、骨癌、血液癌症，等等。然而，任何癌症都可以包括在内，只要癌细胞表面表达CD300c蛋白。在一个实施方案中，癌症可至少包括选自结直肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、口腔癌、咽癌、喉癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、舌癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、骨癌和血液癌症中的任何一种。在另一个实施方案中，癌症可以是实体癌。
在一个实施方案中，所述方法可进一步包括施用一种或多种抗癌剂(例如免疫治疗剂)。在(i)本公开的免疫细胞与(ii)一种或多种免疫治疗剂结合使用的情况下，(i)和(ii)可同时或顺序给药。
“顺序给药”意思是指首先施用一种成分，然后将另一种成分立即给药或在第一次给药后预定间隔时间内给药，其中各成分可以是任何顺序。也就是说，一种或多种免疫治疗剂可在免疫细胞给药后立即给药或以预定间隔给药，反之亦然。此外，一种或多种免疫治疗剂中的任何一种都可以被首先给药，随后是免疫细胞，并且然后是一种或多种免疫治疗剂中的另一种。
免疫治疗剂具有一种新的机制，人体内的免疫细胞通过其被激活以杀伤癌细胞，因此其优势在于可以广泛用于大多数没有特定基因突变的癌症。此外，免疫治疗剂的不良反应更少，它们通过增强患者自身的免疫系统来治疗癌症，具有改善患者生活质量和显著延长生存期的效果。这些免疫治疗剂包括免疫检查点抑制剂，并且可以是通过已知方法制备或是市售产品。免疫治疗剂的实例包括但不限于抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4、抗CD47、抗KIR、抗LAG3、抗CD137、抗OX40、抗CD276、抗CD27、抗GITR、抗TIM3、抗41BB、抗CD226、抗CD40、抗CD70、抗ICOS、抗CD40L、抗BTLA、抗TCR和抗TIGIT抗体。此外，免疫治疗剂的实例包括但不限于：度伐利尤单抗(durvalumab,)、阿特珠单抗(atezolizumab,Tecentriq)、阿维单抗(avelumab,/>)、派姆单抗(pembrolizumab,/>)、纳武单抗αCD47、西米普利单抗(cemiplimab,/>)、莫洛利单抗(magrolimab,Hu5F9-G4)、和伊匹木单抗(ipilimumab,/>)。
在一个实施方案中，免疫治疗剂可至少包括选自抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4、抗CD47、抗KIR、抗LAG3、抗CD137、抗OX40、抗CD276、抗CD27、抗GITR、抗TIM3、抗41BB、抗CD226、抗CD40、抗CD70、抗ICOS、抗CD40L、抗BTLA、抗TCR和抗TIGIT抗体任一种。在一个实例中，免疫治疗剂可至少包括选自抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4和抗CD47抗体的任何一种。
在另一个实施方案中，免疫治疗剂可包括选自以下组别的至少一种：度伐利尤单抗(Imfinzi)、阿特珠单抗(Tecentriq)、派姆单抗(Keytruda)、纳武单抗(Opdivo)、αCD47和伊匹木单抗(Yervoy)。
每种情况下，根据本公开的免疫细胞和任选的一种或多种额外的抗癌剂，可以以多种方式给药，取决于是否需要局部治疗或全身治疗以及需要治疗的区域。向受试者施用这些成分的方法可根据施用目的、患病部位、受试者的病情等等而有所不同。给药途径可以是口服、胃肠外、吸入、局部((local)或表面(topical)给药(例如，病灶内给药)。胃肠外给药的实例可包括但不限于静脉内、皮下、腹膜内、肺内、动脉内、肌肉内、直肠内、阴道内、关节内、前列腺内、鼻内、眼内、膀胱内、鞘内或体室内((intraventricular)给药(例如脑室内给药)。此外，在联合使用时，免疫细胞和额外的抗癌剂可以通过相同的途径或不同的途径给药。
在所述方法中，根据本公开的免疫细胞的数量可根据个体(患者)的年龄、性别和体重而变化。免疫细胞的数量可为个体肿瘤细胞数量的约1至约10倍。此外，至少一种额外抗癌剂的有效量可根据个体(患者)的年龄、性别和体重而变化。一般地，给药量可为每公斤体重约0.01毫克至100毫克，或5毫克至约50毫克。用量可通过每天一次或每天多次以划分的剂量给药。然而，有效量可根据给药途径和给药时间、疾病严重程度、性别、体重、年龄等因素增减。因此，本公开的范围并不局限于此。
药物组合物
根据本公开的再另一个方面，提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其中包括根据本公开的免疫细胞作为活性成分。此外，还提供了根据本公开的免疫细胞用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
所述免疫细胞可以以预防或治疗有效量包含在组合物中。所述药物组合物可被施用于受试者以抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌剂耐药性。
在一个实施方案中，所述药物组合物可进一步包括至少一种额外的抗癌剂(例如免疫治疗剂)。具体地，所述免疫细胞和额外的免疫治疗剂可以被包括在相同的组合物中，也可以被包括在分开的组合物中。当被包括在分开的组合物中时，所述免疫细胞和额外的免疫治疗剂可单独配制，并可同时或依次给药。
为制备本公开的药物组合物，可将所述免疫细胞和额外的免疫治疗剂与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合。所述药物组合物可以冻干制剂或水溶液的形式制备。例如，参见Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S.Pharmacopeia:NationalFormulary,Mack Publishing Company,Easton,PA(1984)。
可接受的载体和/或赋形剂(包括稳定剂)在使用剂量和浓度下对接收者无毒性，包括但不限于缓冲剂(例如磷酸盐、柠檬酸或其他有机酸)；抗氧化剂(例如，抗坏血酸或蛋氨酸)；防腐剂(例如，十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵或苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质(例如，血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；亲水性聚合物(例如，聚乙烯吡咯烷酮)；氨基酸(例如，甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸)；单糖、二糖和其他碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂(例如，EDTA)；糖类(例如，蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨醇)；成盐反离子(salt-forming counter-ion，例如，钠)；金属络合物(例如，锌-蛋白质络合物)；以及(或)非离子表面活性剂(例如，TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG))。
本公开的药物组合物可根据给药途径以本领域已知的合适形式配制。
如本文所用的术语“预防或治疗有效量”或“有效量”是指组合物中有效预防或治疗受试者癌症的活性成分的量。此外，这个量足以以适用于医疗的合理效益/风险比预防或治疗癌症，并且不会造成不良反应。有效量的水平可根据患者的健康状况、疾病类型、疾病严重程度、药物活性、对药物的敏感性、给药方法、给药频率、给药途径和排泄率、治疗持续时间、联合使用或同时使用的药物以及医学领域公知的其他因素来确定。重要的是，考虑到上述所有因素，给药量必须是最小的，这样才能在达到最大疗效的同时，将不良反应降到最低或无。
关于本公开的药物组合物中每种活性成分的有效量，参照预防或治疗癌症的方法部分的描述。
在另一个实施方案中，所述药物组合物能够抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌剂耐药性。
[实施本发明的模式]
下文将通过实施例更详细地描述本公开内容。然而，以下实施例仅用于说明本公开内容，本公开内容的范围并不局限于此。
实施例
I.抗CD300c单克隆抗体的生产
实施例1.生产抗CD300c单克隆抗体
实施例1.1.构建抗CD300c单克隆抗体库
为了选择抗CD300c单克隆抗体，使用λ噬菌体文库、κ噬菌体文库、VH3VL1噬菌体文库和OPALTL噬菌体文库进行了生物淘选(biopanning)。具体地，在免疫管中加入浓度为5μg/mL的CD300c抗原并反应1小时，使抗原吸附在免疫管表面。之后，加入3％脱脂奶以抑制非特异性反应，然后在每个免疫管中加入1012PFU的量、分散在3％脱脂奶中的抗体噬菌体库，进行抗原结合。用Tris缓冲盐水-Tween 20((TBST)溶液洗涤三次以去除非特异性结合的噬菌体，然后用100mM三乙胺溶液洗脱与CD300c抗原特异性结合的单链可变片段(scFv)噬菌体抗体。洗脱的噬菌体用1.0M Tris-HCl缓冲液(pH 7.8)中和，然后在37℃下处理大肠杆菌ER2537感染1小时。将感染的大肠杆菌涂抹在含有羧苄青霉素的LB琼脂培养基上，然后在37℃下培养16小时。然后，用3mL超级肉汤(SB)-羧苄青霉素培养基将形成的大肠杆菌菌落悬浮。部分悬浮液在加入15％甘油后保存在-80℃温度下直至使用，剩余部分重新接种到SB-羧苄青霉素-2％葡萄糖溶液中，并在37℃下培养。将获得的培养物离心，使用含有噬菌体颗粒的上清液重复进行生物淘选三次，以获得并浓缩抗原特异性抗体。
重复三次生物淘选后，将含有抗体基因的大肠杆菌接种到含羧苄青霉素的LB琼脂培养基上，在37℃培养16小时。将形成的大肠杆菌菌落再次接种到SB-羧苄青霉素-2％葡萄糖溶液中，在37℃下培养，直到吸光度(OD600nm)达到0.5。然后加入IPTG，在30℃下继续培养16小时。之后，进行周质提取。根据结果，初步获得了特异性结合CD300c抗原的抗体库。
实施例1.2.抗CD300c单克隆抗体的筛选
为了选择出与CD300c抗原以高亲和力特异性结合的抗CD300c单克隆抗体，使用与实施例1.1相同的方法获得的库池((library pool)进行ELISA。更具体地，将包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.0)中的CD300c和CD300a抗原以每孔5μg/mL的浓度分别分配到ELISA板中，然后在室温下孵育3小时，使抗原与板结合。然后，用磷酸盐缓冲盐水-吐温20(PBST)洗板三次以除去未结合的抗原，再向每孔加入350μL添加了2％牛血清白蛋白(BSA)的PBST，室温孵育1小时后，再次用PBST洗板。然后，加入25μg含有以与实施例1.1相同的方式获得的scFv的周质提取物，室温孵育1小时，进行抗原结合。1小时后，用PBST冲洗三次以除去未结合的scFv，然后加入4μg/mL的检测抗体，再次室温孵育1小时。随后用PBST清除未结合的检测抗体。然后，加入与HRP结合的抗兔IgG，室温孵育1小时，再用PBST去除未结合的抗体。随后加入TMB溶液，孵育10分钟显影。然后加入2N硫酸溶液终止显影反应，在450nm处测量吸光度，以确定与CD300c抗原特异性结合的抗体。
实施例1.3.抗CD300c单克隆抗体序列的鉴定
对使用与实施例1.2相同的方法选择的抗CD300c单克隆抗体的核苷酸序列进行了鉴定。更具体地，对于每一个所选的抗体克隆，使用质粒小提取试剂盒从中提取质粒DNA，然后进行DNA测序，以测序互补决定区(CDR)序列。结果得到了25种具有不同氨基酸序列的抗CD300c单克隆抗体。这些25种抗CD300c单克隆抗体的重链和轻链可变区见表2和表3。
[表2]
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[表3]
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在表2和表3所记载的每幅图中，CDR区域(CDR1、CDR2和CDR3)均以下划线标出，并按顺序出现(即CDR1出现，随后CDR2，然后是CDR3)。此外，每幅图中包含的CDR区域都用如表4所示的序列编号表示：
[表4]
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如上所描述，已鉴定出25种类型的抗CD300c单克隆抗体，它们能以高结合亲和力与CD300c抗原特异性结合，并能够用于预防或治疗癌症。
实施例1.4.抗CD300c单克隆抗体的生产和纯化
通过使用实施例1.3中确定的抗CD300c单克隆抗体的核苷酸序列，制备了分别具有能够表达抗体的重链和轻链的表达载体。更具体地，使用分析的CDR序列在pCIW3.3载体中插入基因，从而使载体能分别表达重链和轻链，由此制备表达载体。制备好的重链和轻链表达载体与聚乙烯亚胺(PEI)以1:1的质量比混合。将混合物转染到293T细胞中诱导抗体表达，第8天，离心除去培养物中的细胞，得到培养物。过滤得到的培养物，然后用0.1M NaH2PO4和0.1M Na2HPO4混合溶液(pH 7.0)重悬。重悬的溶液通过使用蛋白A珠球(GE Healthcare)进行亲和层析纯化，然后使用洗脱缓冲液(Thermofisher)进行洗脱。
为了鉴定所产生的抗体，在5μg纯化抗体中加入还原性样品缓冲液和非还原性样品缓冲液的每一种，然后使用预制的SDS-PAGE((Invitrogen)进行电泳。然后使用考马斯亮蓝对蛋白质进行染色。非还原条件下的结果如图4所示，还原条件下的结果如图5所示。
如图4和图5所示，已确定生产并纯化了高纯度的抗CD300c单克隆抗体。
II.CD300c在癌细胞中的表达以及抗CD300c单克隆抗体与CD300c抗原的结合
实验实施例1.癌症细胞系中CD300c的表达鉴定
为了评估CD300c是否在各种癌细胞中表达，我们培养了各种癌细胞系，诸如MKN45(人胃癌细胞系)、IM95((人胃癌细胞系)、HT-29((人结直肠癌细胞系)、A549((人肺癌细胞系)、HCT116((人结直肠癌细胞系)、MDA-MB-231((人乳腺癌细胞系)和HepG2((人肝癌细胞系)，并评估了CD300c在mRNA和蛋白质水平上的表达。此外，还对作为免疫细胞的THP-1细胞(人单核细胞系)进行了评估。特别地，HEK293T(正常细胞系)被用作对照。
同时，还通过进行Western印迹和使用荧光标记细胞的流式细胞术(FACS)鉴定蛋白质的表达。具体地，用4％的甲醛固定每种培养细胞系，然后用5％的普通牛血清白蛋白进行封闭。然后用0.5μg eFluor660标记的抗CD300c抗体(Invitrogen)进行染色。随后，使用流式细胞仪(FACS)鉴定荧光标记的细胞。
结果发现，CD300c抗原在各种癌细胞(诸如结直肠癌、肺癌和乳腺癌)中都有mRNA和蛋白质水平的表达。此外，如图6所示，根据流式细胞术(FACS)的分析结果，发现了与正常细胞系(HEK293T)相比，在人肺癌细胞系(A549)和人单核细胞系(THP-1)中观察到CD300c显著高表达。
实验实施例2.抗CD300c单克隆抗体抗原结合亲和力的鉴定
为了鉴定实施例1中生产的抗CD300c单克隆抗体的抗原结合能力，实施了结合ELISA。具体地，每种包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.0)中的CD300c抗原(11832-H08H，中生生物)或CD300a抗原(12449-H08H，中生生物)以每孔8μg/mL的浓度分配到ELISA板中，然后在室温下孵育3小时，使抗原与板结合。然后，用PBST洗板三次以除去未结合的抗原，再向每个孔中加入300μL添加5％牛血清白蛋白(BSA)的PBST，室温孵育1小时后，再次用PBST洗板。然后将抗CD300c单克隆抗体稀释四倍并加入，室温孵育1小时以进行抗原结合。1小时后，用PBST冲洗3次，去除未结合的抗CD300c单克隆抗体，然后加入4μg/mL的检测抗体(HRP偶联的抗Fc IgG)，再次室温孵育1小时。然后用PBST清除未结合的检测抗体，再加入TMB溶液，孵育10分钟显影。然后加入2N硫酸溶液终止显影反应，在450纳米处测量吸光度，以鉴定与CD300c抗原特异性结合的抗体。结果见下表5和图7。
[表5]
CB301antibody EC50(μg/mL)
CK1 0.056
CK2 0.033
CK3 0.793
CL4 0.031
CL5 0.032
CL6 0.148
CL7 0.047
CL8 49.7
CL9 0.094
CL10 0.039
SK11 0.052
SK12 0.067
SK13 0.044
SK14 0.065
SK15 14.74
SK16 2.42
SK17 0.054
SL18 0.17
如表5所示，测定抗CD300c单克隆抗体的EC50(引起最大相应的50％的药物有效浓度)值的结果显示，发现除4个克隆(CK3、CL8、SK15和SK16)外，其余14个克隆均表现出0.2μg/mL或更低的高结合亲和力。此外，如图7中所示，发现本公开的抗CD300c单克隆抗体与CD300c抗原以高亲和力结合，甚至在结合ELISA结果的S型曲线中也是如此。
实验实施例3.抗CD300c单克隆抗体与CD300c抗原结合特异性的鉴定
为了确定抗CD300c单克隆抗体CL7对CD300c抗原的特异性，进一步研究了CL7是否对CD300a抗原有交叉反应，后者已知拮抗CD300c抗原并且具有与其相似的蛋白序列。更具体地，使用浓度为0.039、0.63和10μg/mL的CD300a抗原(可获自Sino Biological)，然后以与实验实施例2相同的方式进行结合ELISA检测。结果如图36所示。
如图36所示，发现抗CD300c单克隆抗体不与CD300c以外的抗原结合，只对于CD300c抗原显示出高结合特异性。
III.表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的细胞的制备及其抗癌作用的鉴定
实施例2.构建特异性结合CD300c抗原或其受体的嵌合抗原受体的表达载体
为了生产包括特异性结合CD300c抗原或其受体的结合结构域的嵌合抗原受体，将下列序列依次插入pLVX-Puro载体(Addgene)，以构建特异性结合CD300c抗原或其受体的嵌合抗原受体(pLVX-Puro/aCD300c scFv或pLVX-Puro/CD300c ECD-CAR)的表达载体：CD8α信号肽(DNA序列由SEQ ID NO：301所示)，其包括SEQ ID NO:302所示的氨基酸序列，使得合成的蛋白质穿过细胞膜并移动到正确位置；CK1、CL6、CL7、CL10和SL18的每一种的抗CD300c单链可变片段，其包括分别由SEQ ID NO：412、414、416、418和420所示的氨基酸序列，并且与CD300c抗原或其受体特异性结合(aCD300c scFv，DNA序列分别由SEQ ID NO：411、413、415、417和419所示)，或CD300c细胞外结构域(ECD)抗原，其包括由SEQ ID NO:402所示的氨基酸序列(DNA序列由SEQ ID NO:401所示)；GS接头，其包括由SEQ ID NO：422所示的氨基酸序列(DNA序列由SEQ ID NO:421所示)；作为跨膜结构域的包括由SEQ ID NO:424所示的氨基酸序列的CD8铰链((分化簇8铰链，DNA 序列由SEQ ID NO：423所示)和包括SEQ ID NO:426所示的氨基酸序列的CD28跨膜结构域(DNA序列由SEQ ID NO:425所示)；包括由SEQ ID NO:428所示的氨基酸序列的CD28胞内结构域(DNA序列由SEQ ID NO:427所示)和包括由SEQ IDNO:430所示的氨基酸序列的CD3ζ细胞内结构域(DNA序列由SEQ ID NO:429所示)表示的氨基酸序列)作为用于巨噬细胞活化信号传导的胞浆内结构域。表6列出了各个构建的相应载体的基因和蛋白质序列组合。基因排列示意图如图43所示，构建的载体图实例如图44所示。
[表6]
实施例3.制备用于表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的重组慢病毒
制备表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的重组慢病毒所需的细胞系HEK293T细胞系(ATCC)按照如下准备。将热处理过的胎牛血清(FBS)加入新鲜DMEM(Gibco)中至浓度为10％，加入1×青霉素-链霉素(Gibco)，然后通过上下颠倒进行均匀混合，制备用于细胞培养的完全培养基。所得完全培养基在使用前预热至37℃。HEK293T细胞系在使用前通过将冻存细胞储存液快速转移到37℃的恒温水浴中解冻2至3分钟，接种到30mL完全培养基中，并在5％CO2的培养箱中在37℃下培养。当细胞汇合度达到80％或更高时，通过传代培养来维持细胞。慢病毒转染时，将HEK293T细胞系以1-2×106细胞浓度接种到10mL完全培养基中，培养16小时，然后进行慢病毒转染。
使用LENTI-XTM Expression System((Takara)试剂盒进行慢病毒转染，以表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体。将无菌水(Invitrogen)加入到7μg的以与实施例2的相同方式构建的表达载体pLVX-Puro/aCD300C scFv或pLVX-Puro/CD300cECD-CAR中，达到600μL。然后，将所得产物放入LENTI-XTM Expression System中的Lenti-XPackaging Single Shots管中，并混合，以制备纳米颗粒复合物溶液。通过室温下反应10分钟获得的纳米颗粒复合物溶液滴加到先前制备的HEK293T细胞中，然后通过两边摇晃进行混合。混合物在孵箱中培养4小时，然后再加入6mL新鲜的完全培养基，培养48小时。培养结束后，收集上清液，离心除去细胞碎片，用0.45μm过滤器过滤，保存在-80℃温度下直至使用。
向LENTI-XTM Expression System的GoStix盒样品孔中加入20μL获得的慢病毒上清液后，向样品孔中滴入三滴Chase溶液，然后在室温下孵育10分钟。随后，条带的存在与否可确认是否获得了有效剂量为5×105IFU/mL或更高的重组慢病毒。
结果发现，制备了表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的重组慢病毒。经鉴定，所制备的慢病毒表达嵌合抗原受体，其分别包括CK1、CL6、CL7、CL10和SL18单链可变片段的氨基酸序列。
实施例4.产生表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞
为了产生表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞，以与实施例2中相同方式制备的重组慢病毒被转染到Jurkat细胞系中。更具体地，将0.1至10MOI的重组慢病毒接种到添加有8μg/mL聚凝胺(Merk)的完全培养基中，然后通过上下颠倒均匀混合。将每孔1mL混合物加入在6孔板中制备的Jurkat细胞系中，以1,800rpm离心45至90分钟，然后在5％CO2培养箱中37℃培养24小时。24小时后，以5×105细胞/mL的浓度进行传代培养。
为了确定与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体是否在转染的Jurkat细胞系中正常表达，使用PRO-PREP溶液(iNtRON)获得了培养的Jurkat细胞的总蛋白。使用microBCA蛋白检测试剂盒(Thermo Fisher)测定所获得蛋白质的浓度，然后使用等量蛋白质进行蛋白质印迹。具体地，等量蛋白质经SDS-PAGE((Invitrogen)电泳，然后将电泳蛋白质转移到硝酸纤维素膜(Invitrogen)上。蛋白结合的硝酸纤维素膜用5％脱脂奶(BD)溶液封闭非特异性抗体反应。用5％脱脂牛奶分别稀释作为一抗的抗CD3抗体和抗GAPDH抗体(Cell Signaling Technologies,USA)至1:1,000的浓度，用于处理硝酸纤维素膜。孵育后，去除未结合的抗体。将辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗(Cell SignalingTechnologies)稀释至1:2,000的浓度，用于处理硝酸纤维素膜。用ECL溶液(ThermoFisher)处理膜以诱导显色，然后用发光图像分析仪iBright1500(Invitrogen)对蛋白质进行定量。蛋白质印迹结果如图45所示。
如图45所示，观察到了与抗CD3抗体结合的CD3ζ胞内结构域，表明产生了表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞系。
此外，还使用流式细胞仪(FACS)检测了与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的表达水平。更具体地，用PE融合的抗IgG抗体(Jackson ImmunoResearch)处理Jurkat细胞系，在4℃培养30分钟，然后用流式细胞仪检测。
流式细胞术的结果表明，产生了表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞系。
实验实施例4.表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞的抗癌效果
为了确定表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞的抗癌效果，使用A549细胞系对其癌细胞杀伤效果进行了检测。具体地，将A549细胞系接种到96孔板中，细胞浓度为1×105细胞/mL。将以与实施例4中相同方式产生的表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞以20:1的浓度应用于癌细胞并共培养。未转染慢病毒的Jurkat细胞作为对照。共培养24小时后，从每个孔中去除共培养的Jurkat细胞系，然后用CCK-8((DOJINDO)孵育1小时，然后在OD450nm处测量吸光度，以检测癌细胞的死亡程度。结果如图46所示。
如图46所示，经鉴定，表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的Jurkat细胞系对A549细胞系表现出抗癌作用，而且这些抗癌作用高于未接受慢病毒转染的Jurkat细胞系。
上述结果可以确定，使用表达与CD300c抗原或其受体特异性结合的嵌合抗原受体的免疫细胞系，可以提高使用免疫细胞系治疗癌症的效果，从而可以有效治疗癌症。还发现免疫细胞系仅特异性响应于表面表达CD300c抗原的癌细胞，因此可以将治疗效果最大限度化并减少不良反应。
IV.抗CD300c单克隆抗体的抗癌作用
实施例5.通过服用抗CD300c单克隆抗体鉴定抗癌效果
实施例5.1.识别T细胞活化效应
为了确定在实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体是否能通过激活T细胞而表现出抗癌效果，检测了根据在人T细胞中用抗CD300c单克隆抗体处理后的白细胞介素-2(IL-2)的产生水平。IL-2是一种有助于T细胞生长、增殖和分化的免疫因子，IL-2生成水平的提高意味着T细胞因刺激的增加而被激活，从而诱导T细胞分化、增殖和生长的增加。具体来说，将抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体各以2μg/孔的浓度加入96孔板中，并固定24小时。然后，用1×105细胞/孔的Jurkat T细胞(人T淋巴细胞系)和10μg/孔的抗CD300c单克隆抗体共同处理所述孔。然后，用ELISA试剂盒(IL-2Quantikine试剂盒，R&D Systems)测定IL-2的产生水平，并与未用抗CD300c单克隆抗体处理的对照组进行比较。结果如图8所示。
如图8所示，抗-CD3单克隆抗体和抗-CD28单克隆抗体激活的Jurkat T细胞经抗CD300c单克隆抗体处理后，IL-2的产生水平增加。上述结果表明，抗CD300c单克隆抗体可以活化T细胞，诱导抗癌免疫作用，从而抑制癌组织的生长。
实验实施例5.2.促进分化为M1型巨噬细胞的鉴定(I)：测定巨噬细胞分化标志物(TNF-α)的产生水平
为了确定实施例1中选择的抗CD300c单克隆抗体是否能够促进单核细胞分化为M1巨噬细胞，将THP-1((人单核细胞系)以1.5×104个细胞/孔的比例分配到96孔板中，并用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体和/或100ng/mL的LPS处理。孵育48小时后，使用ELISA试剂盒(Human TNF-αQuantikine kit,R&D Systems)测定M1巨噬细胞的分化标志物肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成水平。结果见图9和10。
如图9所示，抗CD300c单克隆抗体CL4、CL7、CL10和SL18表现出增加的TNF-α生成水平，是相比于单独用LPS处理的对照组(Con)的约2倍或更多。
此外，如图10所示，与仅用LPS处理的对照组(Con)相比，所有仅用抗CD300c单克隆抗体处理而未用LPS处理的实验组的TNF-α生成水平都有所提高。
实验实施例5.3.鉴定在分化为M1巨噬细胞的能力中的抗体浓度依赖性增强
为了确定抗CD300c单克隆抗体诱导分化为M1巨噬细胞的作用随抗CD300c单克隆抗体的浓度而增加，用与实验实施例5.2中相同的方式检测TNF-α的产生水平。抗CD300c单克隆抗体分别以10、1和0.1μg/mL的浓度使用。结果如图11所示。
如图11所示，随着抗CD300c单克隆抗体(CL7、CL10或SL18)处理浓度的增加，TNF-α的产生水平也随之增加。
为了在更具体的浓度下进行鉴定，使用了浓度为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.157和0.079μg/mL的抗CD300c单克隆抗体CL7，并检测了TNF-α的产生水平。结果如图12所示。
如图12所示，随着用于处理的抗CD300c单克隆抗体浓度的增加，TNF-α的产生水平也随之增加。
实验实施例5.4.促进分化为M1型巨噬细胞的鉴定(II)：细胞形态观察
为了通过细胞形态鉴定单核细胞经抗CD300c单克隆抗体处理后向M1巨噬细胞分化的模式，用10μg/mL抗CD300c单克隆抗体处理THP-1，培养48小时，然后在显微镜下观察细胞形态。结果如图13所示。
如图13所示，发现了对于用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组(CL7)，THP-1细胞的形态由悬浮细胞变为圆形贴壁细胞，即M1巨噬细胞。上述结果表明，抗CD300c单克隆抗体的处理促进了单核细胞向M1型巨噬细胞的分化。
实验实施例5.5.再鉴定(re-identification)促进分化为M1巨噬细胞的能力
为了再鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7是否促进人单核细胞向M1巨噬细胞分化，使用ELISA试剂盒测定了TNF-α、白细胞介素-1β((IL-1β)和白细胞介素-8((IL-8)的分泌水平。更具体地，将THP-1按1.5×104个细胞/孔的比例分配到96孔板中，然后用10μg/mL抗CD300c单克隆抗体处理。培养48小时后，使用ELISA试剂盒(Human TNF-αQuantikine kit,R&D Systems)检测分化为M1巨噬细胞的标志物TNF-α、IL-1β和IL-8的产生水平。结果如图14所示。
如图14所示，与未用抗-CD300c单克隆抗体处理的对照组(Con)相比，在用抗-CD300c单克隆抗体处理的实验组(CL7)中，分化为M1巨噬细胞的所有三种标记物均被发现增加。
实验实施例5.6.鉴定M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的再极化能力
为了确定抗CD300c单克隆抗体是否能使M2巨噬细胞重分化(再极化)为M1巨噬细胞，将THP-1按1.5×104细胞/孔分配到96孔板中，通过用320nM的PMA处理进行6小时预处理，然后用20ng/mL的白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-13(IL-13)以及用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体处理，再孵育18小时。使用ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-1β和IL-8的产生水平。结果如图21至23所示。
如图21至23所示，已发现未使用PMA进行预处理和用IL-4、IL-13和抗CD300c单克隆抗体联合处理的实验组，表现出TNF-α、IL-1β和IL-8的产生水平增加；以及，使用PMA进行预处理和用IL-4、IL-13和抗CD300c单克隆抗体联合处理的实验组，也类似地表现出TNF-α、IL-1β和IL-8的产生水平增加。结果表明，抗CD300c单克隆抗体能有效地将M2巨噬细胞重分化(再极化)为M1巨噬细胞。
实验实施例5.7.鉴定向M1巨噬细胞的分化能力和再极化能力
为了鉴定抗CD300c单克隆抗体对于向M1巨噬细胞的分化能力和再分化(再极化)的能力，将THP-1按1.5×104细胞/孔分配到96孔板中，用10μg/mL抗CD300c单克隆抗体预处理48小时，并用100ng/mL PMA、100ng/mL LPS、20ng/mL IL-4和IL-13处理，孵育24小时。使用ELISA试剂盒检测TNF-α的产生水平。结果如图24所示。
如图24所示，与单用PMA处理的M0巨噬细胞对照组、单用LPS处理的M1巨噬细胞对照组和单用IL-4和IL-13处理的M2巨噬细胞对照组相比，用抗CD300c单克隆抗体预处理的所有实验组表现出显著提高的TNF-α产生水平。结果表明，抗CD300c单克隆抗体具有将M0巨噬细胞分化为M1巨噬细胞、将THP-1分化为M1巨噬细胞以及将M2巨噬细胞重分化(再极化)为M1巨噬细胞的卓越能力。
实验实施例6.通过抗癌效果观察鉴定抗CD300c单克隆抗体的种间交叉反应性
实验实施例6.1人癌细胞生长抑制效果的鉴定
为了确定CD300c靶向单克隆抗体对癌细胞生长的作用，使用A549(人肺癌细胞系)进行了细胞增殖测定。具体来说，在0％胎牛血清(FBS)条件下，将2×104细胞分配到96孔板中；在0.1％胎牛血清条件下，将6×103细胞分配到96孔板中。然后，用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体处理细胞，孵育5天。用CCK-8((DOJINDO)处理细胞，在OD450nm处测量吸光度，以检测抗CD300c单克隆抗体对癌细胞生长的抑制作用。结果如图28和29所示。
如图28所示，在0％FBS的条件下，除SK11和SK17外的所有抗体都具有抑制癌细胞生长的作用。
如图29所示，在0.1％FBS条件下，实验中使用的所有抗CD300c单克隆抗体都具有抑制癌细胞生长的作用。
实验实施例6.2.鉴定抗CD300c单克隆抗体根据浓度抑制癌细胞生长的作用
为了确定抗CD300c单克隆抗体根据浓度对癌细胞生长的抑制作用，在0％胎牛血清(FBS)条件下，将2×104个A549细胞分配到96孔板中，用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体处理，然后培养5天。随后，用CCK-8(DOJINDO)处理细胞，孵育3小时，然后在OD450nm处测量吸光度，以检测抗CD300c单克隆抗体对癌细胞生长的抑制作用。结果如图32所示。
如图32所示，随着抗CD300c单克隆抗体浓度的增加，癌细胞的生长受到抑制。
实验实施例6.3.鉴定增强的小鼠中分化为M1巨噬细胞的能力
为了确定抗CD300c单克隆抗体是否能促进从小鼠巨噬细胞向M1巨噬细胞分化，将小鼠巨噬细胞(Raw264.7)以1×104细胞/孔的浓度分配到96孔板中，然后用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体处理，再进行孵育。用ELISA试剂盒检测TNF-α的产生水平。结果如图37所示。
如图37所示，在使用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组中，TNF-α的产生水平升高。上述结果表明，抗CD300c单克隆抗体在小鼠中的作用与人类同等，因此具有促进分化为M1巨噬细胞的交叉反应性。
实验实施例6.4.鉴定在小鼠中对癌细胞生长的抑制作用
为了确定抗CD300c单克隆抗体CL7、CL10和SL18是否表现出抗癌作用，将CT26(小鼠结直肠癌细胞系)以1×104细胞/孔的浓度分配到96孔板中，用10ug/mL的单克隆抗体处理，然后培养5天。然后，通过CCK-8检测进行细胞增殖测定。
如图38所示，抗CD300c单克隆抗体对癌细胞增殖的抑制率分别表现为66％(CL7)、15％((CL10)和38％((SL18)，均高于对照组的抑制率，表明抗CD300c单克隆抗体在小鼠中表现出癌症治疗作用。由此可见，抗CD300c单克隆抗体在人类中和小鼠的作用同等，因此具有交叉反应性，显示出抗癌效果。
实验实施例7.抗CD300c单克隆抗体与常规免疫治疗剂之间的体外抗癌效果比较
以下实验实施例中使用的癌症免疫治疗剂如下：英飞凡(AstraZeneca)和可瑞达(/>Merck Sharp&Dohme)。
实验实施例7.1.抗CD300c单克隆抗体与常规免疫治疗剂对于分化为M1巨噬细胞的能力比较：测量三种分化标志物(TNF-α、IL-1β和IL-8)的生成水平
为了在抗-CD300c单克隆抗体和常规免疫治疗剂之间比较对于向M1巨噬细胞的分化能力，以与实验实施例5.2相同的方式使用ELISA试剂盒检测TNF-α的产生水平。常规免疫治疗剂英飞凡所用的浓度为10μg/mL。结果如图15所示。
如图15所示，与单独使用英飞凡((Imf)治疗的对照组相比，抗CD300c单克隆抗体显著提高了TNF-α的产生水平。上述结果表明，与常规已知的免疫治疗剂相比，抗CD300c单克隆抗体能明显提高分化为M1巨噬细胞的分化能力。
为了与其他免疫治疗剂进行比较，使用了抗PD-L1免疫治疗剂英飞凡、抗PD-1免疫治疗剂可瑞达和同种型对照(免疫球蛋白G)抗体，每种浓度为10μg/mL，并使用ELISA试剂盒检测了TNF-α、IL-1β和IL-8的产生水平。结果如图16至18所示。
如图16至18所示，与英飞凡、可瑞达和IgG抗体相比，抗CD300c单克隆抗体显著增加了TNF-α、IL-1β和IL-8的产生水平。上述结果表明，与常规的免疫治疗剂相比，抗CD300c单克隆抗体能显著增加分化为M1巨噬细胞的分化。
实验实施例7.2.抗CD300c单克隆抗体与常规免疫治疗剂之间对于从M0巨噬细胞分化为M1巨噬细胞的能力比较
为了在抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂之间比较将M0巨噬细胞分化为M1巨噬细胞的能力，将THP-1按1.5×104细胞/孔分配到96孔板中，然后用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体、10μg/mL的英飞凡和/或200nM的佛波醇-12-十四酸酯-13-乙酸酯((PMA)处理。培养48小时后，使用ELISA试剂盒测定TNF-α的生成水平。结果如图19所示。
如图19所示，在单独使用免疫治疗剂英飞凡处理的对比组中，没有TNF-α产生，但在单独使用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组中，TNF-α的产生水平增加了。此外，还发现了即使THP-1细胞通过用PMA处理分化成M0巨噬细胞，用抗CD300c单克隆抗体治疗的实验组相比于用英飞凡治疗的实验组也显示出显著高水平的TNF-α生成。上述结果表明，与常规的免疫治疗剂相比，抗CD300c单克隆抗体能促进M0巨噬细胞分化为M1巨噬细胞。
实验实施例7.3.抗CD300c单克隆抗体与常规免疫治疗剂之间分化为M1巨噬细胞能力的比较
为了在抗CD300c单克隆抗体和常规免疫治疗剂之间比较分化为M1巨噬细胞的能力，用与实验实施例5.2相同的方法检测TNF-α的产生水平。结果如图20所示。
如图20所示，发现当单核细胞通过LPS处理分化为M1巨噬细胞时，使用英飞凡和LPS联合处理的实验组在TNF-α的产生水平上没表现显著差异，但使用抗CD300c单克隆抗体和LPS联合处理的实验组在TNF-α的产生水平上有显著增加，相比于单独使用抗CD300c单克隆抗体的实验组。
实验实施例7.4.抗CD300c单克隆抗体与常规免疫治疗剂抑制癌细胞生长效果的比较
为了比较抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂对癌细胞生长的抑制作用，我们使用A549((人类肺癌细胞系)和MDA-MB-231((人类乳腺癌细胞系)对细胞生长抑制作用进行了研究。具体地，在0％胎牛血清(FBS)条件下，将2×104细胞分配到96孔板中；在0.1％胎牛血清条件下，将6×103细胞分配到96孔板中。然后，用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体处理细胞，再培养5天，然后在光学显微镜下观察。结果如图30和31所示。
如图30所示，在A549细胞系中，抗CD300c单克隆抗体比免疫治疗剂英飞凡能更有效地抑制癌细胞的增殖。
如图31所示，在MDA-MB-231细胞系中，抗CD300c单克隆抗体比免疫治疗剂英飞凡能更有效地抑制癌细胞的增殖。
V.抗CD300c单克隆抗体与免疫治疗剂的联合应用
实施例5.抗CD300c单克隆抗体(CL7)和免疫治疗剂的共同用药
实施例1中生产的抗CD300c单克隆抗体(CL7)与其他免疫治疗剂联合使用，例如抗PD-L1抗体和/>抗PD-1抗体/>抗CD47抗体(aCD47)和抗CTLA-4抗体。
可从以下药物中获得相应的免疫治疗剂：英飞凡(AstraZeneca)；欧狄沃和抗CTLA-4抗体(Bristol Myers Squibb Company)；可瑞达((Merck Sharp&Dohme)；以及抗CD47抗体(Abcam)。
实验实施例8.鉴定通过联合对巨噬细胞活性的(协同)提升
实验实施例8.1.鉴定M1巨噬细胞分化能力的增强
为了确定抗CD300c单克隆抗体CL7与免疫治疗剂诸如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体联合处理单核细胞时，单核细胞向M1巨噬细胞的分化能力是否会增强，检测了M1巨噬细胞分化的代表性信号丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、IκB和NF-kB的信号转导情况。具体地，将THP-1按8.8×105个细胞/孔的比例分配到6孔板中，然后用10μg/mL抗CD300c单克隆抗体、10μg/mL英飞凡和/或10μg/mL可瑞达处理。对照组使用等量磷酸盐缓冲液(PBS)进行处理。培养48小时后，通过Western印迹法检测MAPK信号的磷酸化SAPK/JNK、磷酸化ERK和磷酸化p38、NF-kB信号的磷酸化NF-kB和IkB信号的磷酸化IkB。结果如图25至27所示。
图25、26和27分别展示了MAPK、NF-Kb和IkB信号转导的结果。与单独使用抗-CD300c单克隆抗体处理细胞相比，当抗-CD300c单克隆抗体与免疫治疗剂诸如抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体和抗-CD47抗体联合处理细胞时，磷酸化的MAPK、IkB和NF-kB的水平升高。上述结果表明，与单独使用抗-CD300c单克隆抗体处理细胞相比，当抗-CD300c单克隆抗体与免疫治疗剂诸如抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体和抗-CD47抗体联合处理细胞时，代表分化为M1巨噬细胞的细胞信号增加。
实验实施例9.鉴定通过联合使用(体外)对癌细胞生长的抑制效果的(协同)提高
实验实施例9.1.鉴定凋亡信号
鉴定了当抗CD300c单克隆抗体CL7与免疫治疗剂诸如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体联合使用时，凋亡信号是否会增加。具体来说，将A549细胞按8×105细胞/孔分配到6孔板中，然后用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体和10μg/mL的英飞凡、可瑞达、欧狄沃以及抗CD47抗体单独或联合处理。培养48小时后，通过Western印迹检测细胞凋亡信号或细胞周期信号。作为凋亡信号的标志物，检测剪切的caspase-9、caspase-3、caspase-2和caspase-8，并且细胞周期蛋白D1、CDK2、p27kip1、CDK6、细胞周期蛋白D3、P21Waf1、Cip1等等作为细胞周期标志物被检测。
如图33所示，与单独使用抗-CD300c单克隆抗体处理细胞相比，使用抗-CD300c单克隆抗体和抗-PD-1抗体英飞凡联合处理细胞时，细胞凋亡信号增加，并且当细胞与抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂(如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体)联合处理时，剪切的caspase-9和p21的水平升高，细胞周期蛋白D1的水平降低。上述结果表明，与单独使用抗-CD300c单克隆抗体处理细胞相比，抗-CD300c单克隆抗体与抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体或抗-CD47抗体等免疫治疗剂联合使用，能更好地诱导癌细胞凋亡。
实验实施例9.2.鉴定对癌症细胞系的生长抑制作用
为了确定抗CD300c单克隆抗体CL7和免疫治疗剂联合使用对癌细胞生长的抑制作用，我们使用A549((人肺癌细胞株)和MDA-MB-231((人乳腺癌细胞株)对癌细胞生长抑制作用进行了比较。具体来说，在无胎牛血清(FBS)条件下，将2×104个细胞(A549)或3×104个细胞(MDA-MB-231)分配到96孔板中；在0.1％胎牛血清条件下，将6×103个细胞(A549)或1×104个细胞(MDA-MB-231)分配到96孔板中。然后，用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体和英飞凡单独或联合处理细胞，并培养5天。对照组使用等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理。然后，用CCK-8(DOJINDO)处理细胞，在OD450nm处测量吸光度。结果如图34(A549)和图35(MDA-MB-231)所示。
如图34所示，对于无FBS的A549细胞株，与对照组相比，单独使用抗CD300c单克隆抗体处理的细胞生长抑制效果要高出17％，而将抗CD300c单克隆抗体和英飞凡联合使用的细胞生长抑制效果要高出34％。
如图35所示，对于MDA-MB-231细胞株，在0％FBS条件下，与对照组相比，单用抗CD300c单克隆抗体处理对癌细胞生长抑制效果高19％，抗CD300c单克隆抗体和抗CD47抗体联合处理对癌细胞生长抑制效果高45％，抗CD300c单克隆抗体、抗CD47抗体和英飞凡联合处理的癌细胞生长抑制效果高51％。在0.1％FBS条件下，观察到抗CD300c单克隆抗体处理的癌细胞生长抑制效果高出19％，抗CD300c单克隆抗体和抗CD47抗体联合处理的癌细胞生长抑制效果高出22％，抗CD300c单克隆抗体、抗CD47抗体和英飞凡联合处理的癌细胞生长抑制效果高出32％。
上述结果表明，与单独使用抗-CD300c单克隆抗体相比，抗-CD300c单克隆抗体与免疫治疗剂((如抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体或抗-CD47抗体)联合使用可进一步抑制癌细胞的生长。
实验实施例10.鉴定联合用药的体内(协同)提升
实验实施例10.1.体内癌细胞生长抑制效果的鉴定
为了确定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内的抗癌效果，我们通过皮下注射将2×105个细胞的结直肠癌细胞系(CT26)植入8周龄的BALB/c小鼠体内，构建了异种移植小鼠肿瘤模型。动物饲养和实验均在无特定病原体(SPF)设施中进行。在植入结直肠癌细胞系后的第12天(D12)，向具有肿瘤大小为50至100mm3的小鼠单独或联合施用抗CD300c单克隆抗体和从BioXcell购买的抗PD-1抗体，并向对照组施用等量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。实验方法示意图见图39。具体来说，小鼠腹腔注射各自抗体(CL7：10mg/kg；抗PD-1抗体：10mg/kg)，单独或联合使用，每周两次，连续两周(D12、D15、D19和D22共4次)。连续25天测量肿瘤体积。结果如图40所示。
从图40中可以看出，与对照组相比，发现单独使用抗CD300c单克隆抗体的实验组的癌症生长受到了抑制，但与单独使用抗CD300c单克隆抗体的治疗相比，抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂诸如抗PD-1抗体联合治疗中的癌症被更有效地抑制。
实验实施例10.2.体内M1巨噬细胞增加效应的鉴定
为了确定抗CD300c单克隆抗体是否会增加小鼠模型癌症组织中的M1巨噬细胞，以与实验实施例10.1相同的方式对小鼠进行实验，在第25天将小鼠安乐死，并向小鼠血管内注射和灌注1％的多聚甲醛(PFA)，然后获取癌症组织。获得的癌组织用1％的PFAs固定，并依次用10％、20％和30％的蔗糖溶液脱水。脱水后的癌组织在最佳切割温度(OCT)包埋剂中冷冻，然后用冷冻切片机将癌组织切成50μm厚。组织在20mg/ml胶原酶D和2mg/ml DNase I的混合溶液中于37℃孵育1小时，然后通过70μm细胞滤网过滤。红细胞裂解后，再次通过尼龙网过滤成单个细胞。为抑制单细胞悬浮液中的非特异性反应，用CD16/32抗体(Invitrogen公司)孵育细胞1小时，然后检测细胞活力。用M1巨噬细胞标志物iNOS和M2巨噬细胞标志物CD206抗体对所得产物进行染色，并用FACS进行分析。
结果，如图42所示，发现与对照组相比，用抗PD-1抗体治疗的实验组中M1巨噬细胞部分地增加，但在用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组中，M1巨噬细胞显著增加，几乎观察不到M2巨噬细胞。此外，还发现在联合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体的实验组中，M1巨噬细胞进一步增加。上述结果表明，与单独使用抗-CD300c单克隆抗体相比，抗-CD300c单克隆抗体与免疫治疗剂诸如抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体和抗-CD47抗体联合使用可有效促进分化为M1巨噬细胞。
实验实施例10.3.体内CD8+T细胞免疫刺激效应的鉴定
为了确定抗CD300c单克隆抗体CL7是否能刺激小鼠肿瘤模型中的CD8+T细胞免疫，在第25天将与实验例10.1中相同方式实验的小鼠安乐死，然后向小鼠血管内注射并灌注1％的多聚甲醛(PFA)，然后获取癌组织。获得的癌组织用1％的PFA固定，并依次用10％、20％和30％的蔗糖溶液脱水。脱水后的癌组织在最佳切割温度(OCT)包埋剂中冷冻，然后用冷冻切片机将癌组织切成50μm厚。然后用CD8+和iNOS进行染色。
如图41所示，与对照组相比，用抗-PD-1抗体治疗的实验组的CD8+T细胞部分地增加，但用抗-CD300c单克隆抗体治疗的实验组中的CD8+T细胞显著增加。还发现，与单独使用抗-PD-1的治疗组相比，使用抗-CD300c单克隆抗体和抗-PD-1抗体联合治疗的实验组的CD8+T细胞进一步增加。上述结果表明，当抗CD300c单克隆抗体与常规免疫治疗剂联合使用时，抗CD300c单克隆抗体能更有效地增加CD8+T细胞的数量。
通过上述结果，可以确定本公开的抗CD300c单克隆抗体可以与CD300c抗原高度特异性结合，并且由于其种间交叉反应性((例如与小鼠)，可以用于各种个体。此外，还在体外和体内发现，抗CD300c单克隆抗体可作为免疫治疗剂，通过活化T细胞和促进分化为M1巨噬细胞，有效抑制癌细胞的增殖、转移等。因此，发现抗CD300c单克隆抗体可有效地用于针对表达CD300c抗原的各种癌症的免疫治疗剂。
上文对本公开内容的描述是为了说明问题，本公开内容所属技术领域的普通技术人员能够理解，本文公开的实施方式可以很容易地修改成其他具体形式，而不改变本公开内容的技术精神或基本特征。因此，上文所述的实施方式和实施例应理解为在所有方面都是说明性而非限制性的。
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<400> 78
tgcgcagcat gggacgacag cctgagcggt cctgtgttc 39
<210> 79
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7重链CDR1
<400> 79
Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 80
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7重链CDR2
<400> 80
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 81
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7重链CDR3
<400> 81
Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp
1 5 10
<210> 82
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7轻链CDR1
<400> 82
Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Thr Arg Arg Val His Trp
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7轻链CDR2
<400> 83
Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 84
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7轻链CDR3
<400> 84
Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe
1 5 10
<210> 85
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链CDR1
<400> 85
agcagctacg caatgagctg ggtcaga 27
<210> 86
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链CDR2
<400> 86
gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac tacgcagac 39
<210> 87
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链CDR3
<400> 87
tgcgcacgta gcggtcgtta cgcagacttg acatctgggg ga 42
<210> 88
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链CDR1
<400> 88
tgcagcggta gcaacagcaa catcggtaac aactacgtg 39
<210> 89
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链CDR2
<400> 89
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<210> 90
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链CDR3
<400> 90
tgcagcagct acactagcag cagcactgtg atgttc 36
<210> 91
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链CDR1
<400> 91
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 92
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链CDR2
<400> 92
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 93
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链CDR3
<400> 93
Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Arg Tyr Ala Asp Leu Thr Ser Gly
1 5 10
<210> 94
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链CDR1
<400> 94
Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp
1 5 10 15
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链CDR2
<400> 95
Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链CDR3
<400> 96
Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Met Phe
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链CDR1
<400> 97
agcagctact actggagctg ggtcaga 27
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<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链CDR2
<400> 98
gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac tacgcagac 39
<210> 99
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链CDR3
<400> 99
tgcgcacgta tcgacgtgta cggtttcgac atctgggga 39
<210> 100
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链CDR1
<400> 100
tgcagcggta gcactagcaa catcggtact aactacgtg 39
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链CDR2
<400> 101
aacaacaacc gtcctagtgg tgtg 24
<210> 102
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链CDR3
<400> 102
tgccagactt gggacagcag cactgacgta gtg 33
<210> 103
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链CDR1
<400> 103
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Val Arg
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<210> 104
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链CDR2
<400> 104
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 105
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链CDR3
<400> 105
Tyr Cys Ala Arg Ile Asp Val Tyr Gly Phe Asp Ile Trp
1 5 10
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链CDR1
<400> 106
Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn Tyr Val Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链CDR2
<400> 107
Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 108
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链CDR3
<400> 108
Tyr Cys Gln Thr Trp Asp Ser Ser Thr Asp Val Val Phe
1 5 10
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<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链CDR1
<400> 109
tcagcagcta cggtatgcat tgggtcagac a 31
<210> 110
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链CDR2
<400> 110
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 111
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链CDR3
<400> 111
actgcgcaag cggttacggt ctgatggacg tgtggggaca 40
<210> 112
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链CDR1
<400> 112
gctgcactcg tagcagcggt atcatcgcaa gcaactacgt gca 43
<210> 113
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链CDR2
<400> 113
cgcaacaacc agcgccctag tggtgtg 27
<210> 114
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链CDR3
<400> 114
actgcagcag ctacgcaggt aacaacaacc tggtgttcgg 40
<210> 115
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链CDR1
<400> 115
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 116
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链CDR2
<400> 116
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
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<210> 117
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链CDR3
<400> 117
Tyr Cys Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 118
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链CDR1
<400> 118
Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ile Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp
1 5 10 15
<210> 119
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链CDR2
<400> 119
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 120
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链CDR3
<400> 120
Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn Asn Leu Val Phe
1 5 10
<210> 121
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链CDR1
<400> 121
ttcagcacct atggcatgca ttgggttcgc 30
<210> 122
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链CDR2
<400> 122
agcgccatca gcggcagcgg cggcagcacc tattatgccg at 42
<210> 123
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链CDR3
<400> 123
tactgtgccc gcggcctgag cggccttgat tattgg 36
<210> 124
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链CDR1
<400> 124
tgccgctcca gccagggcat caccaactat ctggcctgg 39
<210> 125
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链CDR2
<400> 125
ctgatctatg atgccagcaa ccgcgccacc ggcatc 36
<210> 126
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链CDR3
<400> 126
tattattgtc agcagagcta tagcacccct ctgaccttcg gtcag 45
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链CDR1
<400> 127
Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 128
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链CDR2
<400> 128
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链CDR3
<400> 129
Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Ser Gly Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 130
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链CDR1
<400> 130
Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链CDR2
<400> 131
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro
1 5 10
<210> 132
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链CDR3
<400> 132
Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 133
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链CDR1
<400> 133
ccttcagcag ctatgccatg cattgggttc gcca 34
<210> 134
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链CDR2
<400> 134
tgagcgccat cagcggcagc ggcggcgata cctatcatgc cgatagcgt 49
<210> 135
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链CDR3
<400> 135
actactgtac ccgcggcctg agcggctttg attattgggg 40
<210> 136
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链CDR1
<400> 136
catgccgcgc cagccagagc atcagcagct atctgaactg gta 43
<210> 137
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链CDR2
<400> 137
tgctgatcta tgatgccagc aaccgcgccc ctggcatccc 40
<210> 138
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链CDR3
<400> 138
tgtattattg tcagcagagc tatagcatcc ctatcacctt cggtcaggg 49
<210> 139
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链CDR1
<400> 139
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 140
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链CDR2
<400> 140
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asp Thr Tyr His Ala Asp
1 5 10
<210> 141
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链CDR3
<400> 141
Tyr Cys Thr Arg Gly Leu Ser Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 142
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链CDR1
<400> 142
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp
1 5 10
<210> 143
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链CDR2
<400> 143
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro
1 5 10
<210> 144
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链CDR3
<400> 144
Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 145
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链CDR1
<400> 145
ttcagcgatt atgccatgag ctgggttcgc 30
<210> 146
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链CDR2
<400> 146
agcatcagca gcagcagcag ctatatctac tataccgata gc 42
<210> 147
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链CDR3
<400> 147
tactgtgccc gcggcggcta tggctttgat tattgg 36
<210> 148
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链CDR1
<400> 148
tgccgcgcca gccagagcat cagcagctat ctgaactgg 39
<210> 149
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链CDR2
<400> 149
ctgatctata gcgccagcag ccgcccacag ggcatc 36
<210> 150
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链CDR3
<400> 150
tattattgtc agcagtatga tgatctgcct tttaccttcg gtcag 45
<210> 151
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链CDR1
<400> 151
Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 152
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链CDR2
<400> 152
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Thr Asp
1 5 10
<210> 153
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链CDR3
<400> 153
Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 154
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链CDR1
<400> 154
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp
1 5 10
<210> 155
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链CDR2
<400> 155
Ser Ala Ser Ser Arg Pro Gln Gly Ile Pro
1 5 10
<210> 156
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链CDR3
<400> 156
Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 157
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链CDR1
<400> 157
ccttcagcaa ctttgcgatc gcctgggttc gcca 34
<210> 158
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链CDR2
<400> 158
gcgccatcag cggccgcggc accagcacct attatgccga tagcgt 46
<210> 159
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链CDR3
<400> 159
actactgtgc ccgcggcgtg agcggctttg atagctgggg 40
<210> 160
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链CDR1
<400> 160
catgccgcgc cagccagagc atcagcagcc atctggcctg gta 43
<210> 161
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链CDR2
<400> 161
tgctgatcta tgataccagc aaccgcgcca ccggcatccc 40
<210> 162
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链CDR3
<400> 162
tgtactattg tcagcagagc tatagcaccc cttttacctt cggtcaggg 49
<210> 163
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链CDR1
<400> 163
Phe Thr Phe Ser Asn Phe Ala Ile Ala Trp Val Arg
1 5 10
<210> 164
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链CDR2
<400> 164
Ala Ile Ser Gly Arg Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 165
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链CDR3
<400> 165
Tyr Cys Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp
1 5 10
<210> 166
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链CDR1
<400> 166
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 167
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链CDR2
<400> 167
Asp Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro
1 5 10
<210> 168
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链CDR3
<400> 168
Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe
1 5 10
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<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链CDR1
<400> 169
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链CDR2
<400> 170
tgagcgccat caacggcagc ggcggcagca cctattatgc cgatagcgt 49
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<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链CDR3
<400> 171
actactgtgc ccgcggcctg cagggctttg attattgggg aca 43
<210> 172
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链CDR1
<400> 172
catgccaggc cagccaggat atcaccaact atctgaactg gta 43
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链CDR2
<400> 173
tgctgatcta tgatgccagc agcctggaaa ccggcatccc 40
<210> 174
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链CDR3
<400> 174
tgtattattg tcagcagagc tatagcaccc ctatcacctt cggtcaggg 49
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链CDR1
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Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链CDR2
<400> 176
Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链CDR3
<400> 177
Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Gln Gly Phe Asp Tyr Trp
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链CDR1
<400> 178
Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn Trp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链CDR2
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Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr Gly Ile Pro
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链CDR3
<400> 180
Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe
1 5 10
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链CDR1
<400> 181
ccttcagcag ctatgccatg agctgggttc gcca 34
<210> 182
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链CDR2
<400> 182
tgagcgccat caacggcagc ggcggcagca ccctgtatgc cgatagcgt 49
<210> 183
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链CDR3
<400> 183
actactgtgc ccgcggcgtg agcggctttg atagctgggg 40
<210> 184
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链CDR1
<400> 184
catgccgcat cagccagagc atcagcagct atctgaactg gta 43
<210> 185
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链CDR2
<400> 185
tgctgatcta tgatgccagc ctgcgcgcca ccggcatccc 40
<210> 186
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链CDR3
<400> 186
tgtattattg tcagcagagc tataaaaccc ctatcacctt cggtcaggg 49
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链CDR1
<400> 187
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链CDR2
<400> 188
Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Asp
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链CDR3
<400> 189
Tyr Cys Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链CDR1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链CDR2
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Asp Ala Ser Leu Arg Ala Thr Gly Ile Pro
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链CDR3
<400> 192
Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Thr Pro Ile Thr Phe
1 5 10
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<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链CDR1
<400> 193
ccttcagcag ctattattgg agctgggttc gcca 34
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链CDR2
<400> 194
tgagcaccat caccggcagc ggcggcagca ccgattatgc caacagcgt 49
<210> 195
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链CDR3
<400> 195
actactgtgc caccggcggc ggcatctttg actattgggg 40
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链CDR1
<400> 196
catgccaggc cagccagacc atcagcaact atctgaactg gta 43
<210> 197
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链CDR2
<400> 197
tgctgatcta tgatgccagc aaccgcgcca ccggcatccc 40
<210> 198
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链CDR3
<400> 198
tgtattattg tcagcagtac aacagctatc ctcctagctt cggtcaggg 49
<210> 199
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链CDR1
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Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Val Arg
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<210> 200
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链CDR2
<400> 200
Thr Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asn
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链CDR3
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Tyr Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ile Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链CDR1
<400> 202
Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp
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<210> 203
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链CDR2
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1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链CDR3
<400> 204
Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Ser Phe
1 5 10
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<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链CDR1
<400> 205
tcaccttcag cgattatcat atgcattggg ttcg 34
<210> 206
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链CDR2
<400> 206
tcagcagcag cggcggctat acctattatg ccga 34
<210> 207
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链CDR3
<400> 207
cccgatcgat acgcctgcct ctggattatt gggg 34
<210> 208
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链CDR1
<400> 208
gcggcaacaa catcggcagc aaaggcgtgc attggta 37
<210> 209
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链CDR2
<400> 209
atgaagatag caaacgccct agcggcgtgc gtga 34
<210> 210
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链CDR3
<400> 210
gctatgatag caccaaaggc gtggtgtttg gtgg 34
<210> 211
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链CDR1
<400> 211
Phe Thr Phe Ser Asp Tyr His Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 212
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链CDR2
<400> 212
Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu
1 5 10
<210> 213
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链CDR3
<400> 213
Tyr Cys Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 214
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链CDR1
<400> 214
Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His Trp
1 5 10
<210> 215
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链CDR2
<400> 215
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Arg
1 5 10
<210> 216
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链CDR3
<400> 216
Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Thr Lys Gly Val Val Phe
1 5 10
<210> 217
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链CDR1
<400> 217
tcagcagcta cggtatgcat tgggtcagac aggc 34
<210> 218
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链CDR2
<400> 218
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 219
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链CDR3
<400> 219
actgcgtgcg tggttacggt gcaatggacg tgtggggaca 40
<210> 220
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR1
<400> 220
gctgcactcg tagcagcggt agcatcgcaa gcaactacgt gca 43
<210> 221
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR2
<400> 221
accgcaacaa ccagcgccct agtggtgtgc c 31
<210> 222
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR3
<400> 222
actgcagcag ctacactact agcagcactc tggtgttcgg 40
<210> 223
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链CDR1
<400> 223
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 224
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链CDR2
<400> 224
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 225
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链CDR3
<400> 225
Tyr Cys Val Arg Gly Tyr Gly Ala Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 226
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR1
<400> 226
Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp
1 5 10 15
<210> 227
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR2
<400> 227
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 228
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR3
<400> 228
Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser Ser Thr Leu Val Phe
1 5 10
<210> 229
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链CDR1
<400> 229
tcagcagcta cgcaatgcat tgggtcagac aggc 34
<210> 230
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链CDR2
<400> 230
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 231
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链CDR3
<400> 231
actgcgcaag cggctacggt ctgatggacg tatggggaca 40
<210> 232
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR1
<400> 232
gctgcactgg tactagcagc gacgtgggta actacaacct ggtgag 46
<210> 233
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR2
<400> 233
acagcaacaa ccagcgccct agtggtgtgc c 31
<210> 234
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR3
<400> 234
actgcagcag ctacactggt agcaacgctc tgttgttcgg 40
<210> 235
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链CDR1
<400> 235
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 236
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链CDR2
<400> 236
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 237
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链CDR3
<400> 237
Tyr Cys Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 238
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR1
<400> 238
Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr Asn Leu Val Ser Trp
1 5 10 15
<210> 239
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR2
<400> 239
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 240
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR3
<400> 240
Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser Asn Ala Leu Leu Phe
1 5 10
<210> 241
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链CDR1
<400> 241
tcagcagcta cgcaatgagc tgggtcagac a 31
<210> 242
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链CDR2
<400> 242
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 243
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链CDR3
<400> 243
actgcgcacg ctggcattac agcttcgact actggggaca 40
<210> 244
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR1
<400> 244
gctgccgtgg taacaacatc ggtagcaagc gtgtgca 37
<210> 245
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR2
<400> 245
acagctacaa ccaccgtcct agcggtgtgc c 31
<210> 246
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR3
<400> 246
actgcaacac ttgggacgac agcctggagg gtcctgtgtt cgg 43
<210> 247
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链CDR1
<400> 247
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 248
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链CDR2
<400> 248
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 249
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链CDR3
<400> 249
Tyr Cys Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 250
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR1
<400> 250
Cys Arg Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val His Trp
1 5 10
<210> 251
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR2
<400> 251
Ser Tyr Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 252
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR3
<400> 252
Tyr Cys Asn Thr Trp Asp Asp Ser Leu Glu Gly Pro Val Phe
1 5 10
<210> 253
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链CDR1
<400> 253
tcagcggcta cgcaatgagc tgggtcagac a 31
<210> 254
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链CDR2
<400> 254
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 255
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链CDR3
<400> 255
actgcgcacg tagtcctagc ggtctgttcg actactgggg aca 43
<210> 256
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR1
<400> 256
gctgcggtgg taacaacatc ggtagcaagc gtgtgca 37
<210> 257
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR2
<400> 257
acaacactag caacaagcat agcggtgtgc c 31
<210> 258
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR3
<400> 258
actgcagcag ctacctacag cagcactctc tgttcgg 37
<210> 259
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链CDR1
<400> 259
Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 260
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链CDR2
<400> 260
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 261
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链CDR3
<400> 261
Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Ser Gly Leu Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 262
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR1
<400> 262
Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val His Trp
1 5 10
<210> 263
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR2
<400> 263
Asn Thr Ser Asn Lys His Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 264
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR3
<400> 264
Tyr Cys Ser Ser Tyr Leu Gln Gln His Ser Leu Phe
1 5 10
<210> 265
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链CDR1
<400> 265
agcagctacg caatgagctg ggtcagaca 29
<210> 266
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链CDR2
<400> 266
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 267
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链CDR3
<400> 267
actgcacacg tttcgtgggt gcaatcggtg cattcgacta ctggggaca 49
<210> 268
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR1
<400> 268
gctgcagtgg taacaacatc ggtagccgta gcgtgca 37
<210> 269
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR2
<400> 269
accgcaacaa ccagcgccct agtggtgtgc c 31
<210> 270
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR3
<400> 270
actgcgcagc atgggacgac agcctgagcg gtcctgtgtt cgg 43
<210> 271
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链CDR1
<400> 271
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 272
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链CDR2
<400> 272
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 273
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链CDR3
<400> 273
Tyr Cys Thr Arg Phe Val Gly Ala Ile Gly Ala Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 274
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR1
<400> 274
Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Arg Ser Val His Trp
1 5 10
<210> 275
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR2
<400> 275
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 276
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR3
<400> 276
Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe
1 5 10
<210> 277
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR1
<400> 277
tcagccatta cgcaatgagc tgggtcagac a 31
<210> 278
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR2
<400> 278
ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43
<210> 279
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR3
<400> 279
actgcgcacg tggttgggac agccctactc tgacatactt cgacagctgg ggaca 55
<210> 280
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR1
<400> 280
gctgcagcgg tactagcagc aacatcggta acaacgacgt gag 43
<210> 281
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR2
<400> 281
accaggacac taagcgtcct agcggtgtgc c 31
<210> 282
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR3
<400> 282
actgcgcagc atgggacgac agcctgagcg gtcctgtgtt cgg 43
<210> 283
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR1
<400> 283
Phe Thr Phe Ser His Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
1 5 10
<210> 284
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR2
<400> 284
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 285
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR3
<400> 285
Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Asp Ser Pro Thr Leu Thr Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Trp
<210> 286
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR1
<400> 286
Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Asp Val Ser Trp
1 5 10 15
<210> 287
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR2
<400> 287
Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 288
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR3
<400> 288
Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe
1 5 10
<210> 289
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR1
<400> 289
agcagctacg gtatgcattg ggtcaga 27
<210> 290
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR2
<400> 290
gcaatcagcg gtagcggtgg ttacacttac tacgcagac 39
<210> 291
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR3
<400> 291
tgcgcacgct ggcattacag cttcgactac tgggga 36
<210> 292
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR1
<400> 292
tgcagcggta gcagcagcaa catcggtaac aactacgtg 39
<210> 293
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR2
<400> 293
cgcaacaacc agcgccctag tggtgtg 27
<210> 294
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR3
<400> 294
tgccagagct acgacaacag caacgtgctg ttc 33
<210> 295
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR1
<400> 295
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg
1 5 10
<210> 296
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR2
<400> 296
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10
<210> 297
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR3
<400> 297
Tyr Cys Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 298
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR1
<400> 298
Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp
1 5 10 15
<210> 299
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR2
<400> 299
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 300
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR3
<400> 300
Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Asn Ser Asn Val Leu Phe
1 5 10
<210> 301
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1重链可变区
<400> 301
gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc cgctatgcca tgacctgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atgagcggca ccggcggcac cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggtcg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgcc 300
tatggctttg atcattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348
<210> 302
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1轻链可变区
<400> 302
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcggc aactatctga actggtatca gcagaaacca 120
ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc tggaaaccgg catccctgat 180
cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agtagcgcca tcccttatac cttcggtcag 300
ggcactaaag tggaaatcaa a 321
<210> 303
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1重链可变区
<400> 303
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Met Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 304
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1轻链可变区
<400> 304
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ala Ile Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 305
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK2重链可变区
<400> 305
gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatggca tgcattgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcaccag catctattat 180
gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcggc 300
accgcctttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348
<210> 306
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK2轻链可变区
<400> 306
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc gcgccagcca gagatcagac aactatctgg cctggtatca gcagaaacca 120
ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc gcgccaccgg catccctgat 180
cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctatagca ccccttttac cttcggtcag 300
ggcactaaag tggaaaccaa a 321
<210> 307
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK2重链可变区
<400> 307
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 308
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK2轻链可变区
<400> 308
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ser Asp Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Thr Lys
100 105
<210> 309
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK3重链可变区
<400> 309
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tcagctgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc accagcggca gcggccgcgc cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc gcgcgatacc 300
tggtgggaag gctattttga tctgtgggga caaggtactc tggtgaccgt gagcagc 357
<210> 310
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK3轻链可变区
<400> 310
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc aggccagcca tatcagcacc catctgaact ggtatcagca gaaaccaggt 120
caggctccac gtctgctgat ctatggcgcc agcagccgcg ccaccggcat ccctgatcgc 180
ttctcaggat ctggaagcgg taccgatttt accctgacca tcagccgcct ggaacctgag 240
gactttgccg tgtattattg tcagcagtat aacacctatc ctcctacctt cggtcagggc 300
actaaagtgg aaatcaaa 318
<210> 311
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK3重链可变区
<400> 311
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Thr Ser Gly Ser Gly Arg Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Trp Trp Glu Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 312
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK3轻链可变区
<400> 312
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ala Ser His Ile Ser Thr His Leu
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 313
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL4重链可变区
<400> 313
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcggc agcaactata tgagctgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcagcggca gcggcaccag cacctattat 180
gccgatagct tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcatg 300
tggggcatgg atgtgtgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348
<210> 314
<211> 312
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL4轻链可变区
<400> 314
cagagcgtgc tgacccagcc tcctagcgcc tccggtacac caggacagcg cgtgactatt 60
agctgtaccg gcaaacatcg gcacaccgtg aactggtacc agctactgcc tggaactgca 120
cctaagctgc tgatctatct ggatagcgaa cgccctagcg gcgtacctga tcgctttagc 180
ggtagcaaat caggcaccag cgccagcctg gccatcagcg gccttcgctc cgaagatgaa 240
gccgattatt attgtcagag ctatgatagc agcagcgtgg tgtttggtgg cggtaccaag 300
ctgaccgtgc tg 312
<210> 315
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL4重链可变区
<400> 315
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Met Trp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 316
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL4轻链可变区
<400> 316
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Lys His Arg His Thr Val Asn Trp
20 25 30
Tyr Gln Leu Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Asp
35 40 45
Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
50 55 60
Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu
65 70 75 80
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Ser Val Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100
<210> 317
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL5重链可变区
<400> 317
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tgcattgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atcagcggcg gcggctatgg cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcagcacc 300
gtgtgggcct ttgatatctg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag c 351
<210> 318
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL5轻链可变区
<400> 318
cagagcgtgc tgacccagcc tcctagcgcc tccggtacac caggacagcg cgtgactatt 60
agctgtagcg gcaacaacat cggcagcaaa agcgtgcatt ggtaccagca actgcctgga 120
actgcaccta agctgctgat ctatgatgtg agcaaacgcc ctagcgagcg tcctgatcgc 180
tttagcggta gcaaatcagg caccagcgcc agtctggcca tcagcgacct tcgctccgaa 240
gatgaagccg attattattg tcagagcttt gatagcagcg gcacctggat ctttggtggc 300
ggtaccaagc tgaccgtgct g 321
<210> 319
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL5重链可变区
<400> 319
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Trp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 320
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL5轻链可变区
<400> 320
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Glu Arg Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Asp Leu Arg Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Ser Ser Gly Thr Trp
85 90 95
Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 321
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6重链可变区
<400> 321
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc agtcagtggt 300
gcaggtcgtg gtttcttcga ctactgggga caaggtactc tggtcactgt ctcctca 357
<210> 322
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6轻链可变区
<400> 322
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagcg gtagcagcag caacattggt agcaactacg tgtactggta tcagcaactc 120
ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac gaggacaaca agcgtcctag tggtgtgcct 180
gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240
tccgaggacg aggctgacta ttactgcagc agctacacta gcagcagcac tgtgatcttc 300
ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327
<210> 323
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6重链可变区
<400> 323
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Ser Gly Ala Gly Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 324
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6轻链可变区
<400> 324
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 325
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7重链可变区
<400> 325
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc cgctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagcagc 300
cagggtatct tcgacatctg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc a 351
<210> 326
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7轻链可变区
<400> 326
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagtg gtaacaatat cggtactaga cgcgtgcatt ggtatcagca actcccagac 120
accgctccta agctcctgat ttacagtaag aacaaccgtc ctagtggtgt gcctgatcgc 180
ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcagtggact tcgctccgag 240
gacgaggctg actattactg cgcagcatgg gacgacagcc tgagcggtcc tgtgttcggc 300
ggtgggacca aactgaccgt ccta 324
<210> 327
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7重链可变区
<400> 327
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 328
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7轻链可变区
<400> 328
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Thr Arg Arg Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Asp Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly
85 90 95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 329
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链可变区
<400> 329
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcaaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagcggt 300
cgttacgcag acttgacatc tgggggacaa ggtactctgg tcactgtctc ctca 354
<210> 330
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链可变区
<400> 330
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagcg gtagcaacag caacatcggt aacaactacg tgagctggta tcagcaactc 120
ccagacaccc ctcctaagct cctgatttac gacaacaaca agcgtcctag tggtgtgcct 180
gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240
tccgaggacg aggctgacta ttactgcagc agctacacta gcagcagcac tgtgatgttc 300
ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327
<210> 331
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8重链可变区
<400> 331
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Arg Tyr Ala Asp Leu Thr Ser Gly Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 332
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL8轻链可变区
<400> 332
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Asp Thr Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Val Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 333
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链可变区
<400> 333
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctactact ggagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtatcgac 300
gtgtacggtt tcgacatctg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc a 351
<210> 334
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链可变区
<400> 334
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagcg gtagcactag caacatcggt actaactacg tgtactggta tcagcaactc 120
ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac gacaacaaca accgtcctag tggtgtgcct 180
gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240
tccgaggacg aggctgacta ttactgccag acttgggaca gcagcactga cgtagtgttc 300
ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327
<210> 335
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9重链可变区
<400> 335
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Val Tyr Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 336
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL9轻链可变区
<400> 336
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Trp Asp Ser Ser Thr
85 90 95
Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 337
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链可变区
<400> 337
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc aagcggttac 300
ggtctgatgg acgtgtgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348
<210> 338
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链可变区
<400> 338
tctgtgctga ctcagccacc ttcagcatct ggtactccag gtcagcgcgt caccatcagc 60
tgcactcgta gcagcggtat catcgcaagc aactacgtgc agtggtatca gcaactccca 120
ggcaccgctc ctaagctcct gatttaccgc aacaaccagc gccctagtgg tgtgcctgat 180
cgcttttctg ggtccaagtc tggcacctca gcctctctgg ctatcagtgg acttcgctcc 240
gaggacgagg ctgactatta ctgcagcagc tacgcaggta acaacaacct ggtgttcggc 300
ggtgggacca aactgaccgt ccta 324
<210> 339
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10重链可变区
<400> 339
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 340
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10轻链可变区
<400> 340
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ile Ile Ala Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn
85 90 95
Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 341
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链可变区
<400> 341
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agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc acctatggca tgcattgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcggcag cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcctg 300
agcggccttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348
<210> 342
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链可变区
<400> 342
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<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11重链可变区
<400> 343
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 344
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK11轻链可变区
<400> 344
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链可变区
<400> 345
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链可变区
<400> 346
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<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12重链可变区
<400> 347
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asp Thr Tyr His Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gly Leu Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK12轻链可变区
<400> 348
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Phe Ser Asp
100 105 110
<210> 349
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链可变区
<400> 349
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
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cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atcagcagca gcagcagcta tatctactat 180
accgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcggc 300
tatggctttg attattgggg acaaggtacc ctggtgaccg tgagcagc 348
<210> 350
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链可变区
<400> 350
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcagc agctatctga actggtatca gcagaaacca 120
ggtcaggctc cacgtctgct gatctatagc gccagcagcc gcccacaggg catccccgat 180
cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag tatgatgatc tgccttttac cttcggtcag 300
ggcactaaag tggaaatcaa a 321
<210> 351
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13重链可变区
<400> 351
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK13轻链可变区
<400> 352
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Pro Gln Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 353
<211> 346
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链可变区
<400> 353
gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc aactttgcga tcgcctgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggcc gcggcaccag cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgtg 300
agcggctttg atagctgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagca 346
<210> 354
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链可变区
<400> 354
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcagc agccatctgg cctggtatca gcagaaacca 120
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cgcttctcag gatctgggag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
gaggactttg ccgtgtacta ttgtcagcag agctatagca ccccttttac cttcggtcag 300
ggcactaaag tggaaatcaa a 321
<210> 355
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14重链可变区
<400> 355
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Ala Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 356
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK14轻链可变区
<400> 356
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 357
<211> 349
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链可变区
<400> 357
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tgcattgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcaacggca gcggcggcag cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagacga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcctg 300
cagggctttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagca 349
<210> 358
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链可变区
<400> 358
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc aggccagcca ggatatcacc aactatctga actggtatca gcagaaacca 120
ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcagcc tggaaaccgg catccctgat 180
cgtttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctatagca cccctatcac cttcggtcag 300
ggcactaaag tggaaatcaa a 321
<210> 359
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15重链可变区
<400> 359
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Thr Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Gln Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 360
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK15轻链可变区
<400> 360
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 361
<211> 349
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链可变区
<400> 361
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
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agcggctttg atagctgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagcg 349
<210> 362
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链可变区
<400> 362
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc gcatcagcca gagcatcagc agctatctga actggtatca gcagaaacca 120
ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcctgc gcgccaccgg catccctgat 180
cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
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ggcactaaag tggaaatcaa a 321
<210> 363
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16重链可变区
<400> 363
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 364
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK16轻链可变区
<400> 364
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ile Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Leu Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Thr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 365
<211> 349
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链可变区
<400> 365
gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctattatt ggagctgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcaccggca gcggcggcag caccgattat 180
gccaacagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc caccggcggc 300
ggcatctttg actattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagcg 349
<210> 366
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链可变区
<400> 366
gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60
ctgtcatgcc aggccagcca gaccatcagc aactatctga actggtatca gcagaaacca 120
ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc gcgccaccgg catccctgat 180
cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240
gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag tacaacagct atcctcctag cttcggtcag 300
ggcactaaag tggaaatcaa a 321
<210> 367
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17重链可变区
<400> 367
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Gly Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 368
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SK17轻链可变区
<400> 368
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 369
<211> 352
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链可变区
<400> 369
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
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cgcctgcctc tggattattg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag ca 352
<210> 370
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链可变区
<400> 370
cagagcgtgc tgacccagcc tcctagcgcc tccggtacac caggacagcg cgtgactatt 60
agctgtagcg gcaacaacat cggcagcaaa ggcgtgcatt ggtatcagca actgcctgga 120
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<210> 371
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18重链可变区
<400> 371
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 372
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18轻链可变区
<400> 372
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Arg Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Thr Lys Gly Val
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 373
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链可变区
<400> 373
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagt ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgt gcgtggttac 300
ggtgcaatgg acgtgtgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348
<210> 374
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链可变区
<400> 374
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcactc gtagcagcgg tagcatcgca agcaactacg tgcagtggta tcagcaactc 120
ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac cgcaacaacc agcgccctag tggtgtgcct 180
gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240
tccgaggacg aggctgacta ttactgcagc agctacacta ctagcagcac tctggtgttc 300
ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327
<210> 375
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10重链可变区
<400> 375
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Gly Tyr Gly Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 376
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A10轻链可变区
<400> 376
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser Ser
85 90 95
Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 377
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链可变区
<400> 377
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacgcaa tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcaaaggac actgccgtgt attactgcgc aagcggctac 300
ggtctgatgg acgtatgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348
<210> 378
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链可变区
<400> 378
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcactg gtactagcag cgacgtgggt aactacaacc tggtgagctg gtatcagcaa 120
ctcccaggca ccgctcctaa gctcctgatt tacagcaaca accagcgccc tagtggtgtg 180
cctgatcgct tttctgggtc caagtctggc acctcagcct ctctggctat cagtggactt 240
cgctccgagg acgaggctga ctattactgc agcagctaca ctggtagcaa cgctctgttg 300
ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 330
<210> 379
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12重链可变区
<400> 379
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Lys Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 380
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_A12轻链可变区
<400> 380
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser
85 90 95
Asn Ala Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 381
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链可变区
<400> 381
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgctggcat 300
tacagcttcg actactgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348
<210> 382
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链可变区
<400> 382
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgccgtg gtaacaacat cggtagcaag cgtgtgcatt ggtatcagca actcccaggc 120
accgctccta agctcctgat ttacagctac aaccaccgtc ctagcggtgt gcctgatcgc 180
ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcactggact tcgctccgag 240
gacgaagctg actattactg caacacttgg gacgacagcc tggagggtcc tgtgttcggc 300
ggtgggacca aactgaccgt ccta 324
<210> 383
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6重链可变区
<400> 383
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 384
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_E6轻链可变区
<400> 384
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Tyr Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Arg Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Thr Trp Asp Asp Ser Leu Glu Gly
85 90 95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 385
<211> 352
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链可变区
<400> 385
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc ggctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagtcct 300
agcggtctgt tcgactactg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc ag 352
<210> 386
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链可变区
<400> 386
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcggtg gtaacaacat cggtagcaag cgtgtgcatt ggtatcagca actcccaggc 120
accgctccta agctcctgat ttacaacact agcaacaagc atagcggtgt gcctgatcgc 180
ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcagtggact tcgctccgag 240
gacgaggctg actattactg cagcagctac ctacagcagc actctctgtt cggcggtggg 300
accaaactaa ccgtccta 318
<210> 387
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4重链可变区
<400> 387
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Pro Ser Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 388
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_F4轻链可变区
<400> 388
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asn Thr Ser Asn Lys His Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Leu Gln Gln His Ser Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 389
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链可变区
<400> 389
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc ctcttccgcc 60
tcctcctgtg cagcctccgg attcactttc agcagctacg caatgagctg ggtcagacag 120
gcaccaggta agggactgga gtgggtctct gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac 180
tacgcagaca gcgtgaaggg tcgcttcacc atctcacgcg acaactccaa gaacaccctg 240
tacctgcaga tgaacagcct tcgcgcagag gacactgccg tgtattactg cacacgtttc 300
gtgggtgcaa tcggtgcatt cgactactgg ggacaaggta ctctggtcac tgtctcctca 360
360
<210> 390
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链可变区
<400> 390
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagtg gtaacaacat cggtagccgt agcgtgcatt ggtatcagca actcccaggc 120
accgctccta agctcctgat ttaccgcaac aaccagcgcc ctagtggtgt gcctgatcgc 180
ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcagtggact tcgctccgag 240
gacgaggctg actattactg cgcagcatgg gacgacagcc tgagcggtcc tgtgttcggc 300
ggtgggacca aactgaccgt ccta 324
<210> 391
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11重链可变区
<400> 391
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Ser Ser Ala Ser Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Thr Arg Phe Val Gly Ala Ile Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 392
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_H3L1_G11轻链可变区
<400> 392
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Arg Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly
85 90 95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 393
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链可变区
<400> 393
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc cattacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtggttgg 300
gacagcccta ctctgacata cttcgacagc tggggacaag gtactctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 394
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链可变区
<400> 394
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagcg gtactagcag caacatcggt aacaacgacg tgagctggta tcagcaactc 120
ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac caggacacta agcgtcctag cggtgtgcct 180
gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240
tccgaggacg aggctgacta ttactgcgca gcatgggacg acagcctgag cggtcctgtg 300
ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 330
<210> 395
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5重链可变区
<400> 395
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Trp Asp Ser Pro Thr Leu Thr Tyr Phe Asp Ser Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 396
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_B5轻链可变区
<400> 396
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 397
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链可变区
<400> 397
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca atcagcggta gcggtggtta cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgctggcat 300
tacagcttcg actactgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348
<210> 398
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链可变区
<400> 398
cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60
agctgcagcg gtagcagcag caacatcggt aacaactacg tgagctggta tcagcaactc 120
ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac cgcaacaacc agcgccctag tggtgtgcct 180
gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240
tccgaggacg aggctgacta ttactgccag agctacgaca acagcaacgt gctgttcggc 300
ggtgggacca aactgaccgt ccta 324
<210> 399
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6重链可变区
<400> 399
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 400
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CB301_OPALTL_E6轻链可变区
<400> 400
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Asn Ser Asn
85 90 95
Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 401
<211> 489
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD300c ECD
<400> 401
ggctattttc ctctgagcca ccccatgacc gtggcgggcc ccgtgggggg atccctgagt 60
gtgcagtgtc gctatgagaa ggaacacagg accctcaaca aattctggtg cagaccacca 120
cagattctcc gatgtgacaa gattgtggag accaaagggt cagcagggaa aaggaatggc 180
cgagtgtcca tcagggacag tcctgcaaac ctcagcttca cagtgaccct ggagaatctc 240
acagaggagg acgcaggcac ctactggtgt ggggtggata caccgtggct ccgagacttt 300
catgatccca ttgtcgaggt tgaggtgtcc gtgttcccgg ccgggacgac cacagcctcc 360
agcccccaga gctccatggg cacctcaggt cctcccacga agctgcccgt gcacacctgg 420
cccagcgtga ccagaaagga cagccccgaa cccagcccac accctggctc cctgttcagc 480
aatgtccgc 489
<210> 402
<211> 163
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD300c ECD
<400> 402
Gly Tyr Phe Pro Leu Ser His Pro Met Thr Val Ala Gly Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Ser Val Gln Cys Arg Tyr Glu Lys Glu His Arg Thr Leu
20 25 30
Asn Lys Phe Trp Cys Arg Pro Pro Gln Ile Leu Arg Cys Asp Lys Ile
35 40 45
Val Glu Thr Lys Gly Ser Ala Gly Lys Arg Asn Gly Arg Val Ser Ile
50 55 60
Arg Asp Ser Pro Ala Asn Leu Ser Phe Thr Val Thr Leu Glu Asn Leu
65 70 75 80
Thr Glu Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Gly Val Asp Thr Pro Trp
85 90 95
Leu Arg Asp Phe His Asp Pro Ile Val Glu Val Glu Val Ser Val Phe
100 105 110
Pro Ala Gly Thr Thr Thr Ala Ser Ser Pro Gln Ser Ser Met Gly Thr
115 120 125
Ser Gly Pro Pro Thr Lys Leu Pro Val His Thr Trp Pro Ser Val Thr
130 135 140
Arg Lys Asp Ser Pro Glu Pro Ser Pro His Pro Gly Ser Leu Phe Ser
145 150 155 160
Asn Val Arg
<210> 403
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段 重链CDR1
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)
<223> Xaa = R, S, or D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa = A, G, or H
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)
<223> Xaa = T, H, or S
<400> 403
Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr Xaa Met Xaa Trp Val Arg
1 5 10
<210> 404
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段 重链CDR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa = S, A, or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa = M or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)
<223> Xaa = G or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)
<223> Xaa = T or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)
<223> Xaa = T, S, or Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa = D or E
<400> 404
Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Gly Gly Xaa Thr Tyr Tyr Ala Xaa
1 5 10
<210> 405
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段 重链CDR3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)
<223> Xaa = R, V, or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)
<223> Xaa = G or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)
<223> Xaa = A, G, S, Y, or I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa = Y, A, Q, G, or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)
<223> Xaa = G or L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)
<223> Xaa = F, R, I, M, or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa = D, G, F, or L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)
<223> Xaa = H, F, D, or V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)
<223> Xaa = F, I, Y, or not present
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa = D or not present
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)
<223> Xaa = Y or not present
<400> 405
Tyr Cys Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp
1 5 10 15
<210> 406
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段 轻链CDR1
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa = R, S, or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)
<223> Xaa = A, G, or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)
<223> Xaa = S or N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)
<223> Xaa = Q, S, or N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)
<223> Xaa = S, I, or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa = I, N, or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)
<223> Xaa = G, I, T, or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)
<223> Xaa = N, G, R, A, or K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa = Y, S, R, or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)
<223> Xaa = N or not present
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)
<223> Xaa = Y or not present
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa = L or V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)
<223> Xaa = N, Y, H, or Q
<400> 406
Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp
1 5 10 15
<210> 407
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段 轻链CDR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)
<223> Xaa = D, E, S, or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)
<223> Xaa = A, D, K, or N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)
<223> Xaa = S or N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)
<223> Xaa = N, K, or Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)
<223> Xaa = L or R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)
<223> Xaa = E or P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa = T or S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)
<223> Xaa = I or V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa = P or R
<400> 407
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1 5 10
<210> 408
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段 轻链CDR3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)
<223> Xaa = Q, S, or A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)
<223> Xaa = Q, S, or A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)
<223> Xaa = S, Y, or W
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)
<223> Xaa = S, T, D, or A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)
<223> Xaa = A, S, D, or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)
<223> Xaa = I, S, N, or T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)
<223> Xaa = P, S, L, N, or K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)
<223> Xaa = Y, T, S, N, or G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)
<223> Xaa = V, G, L, or not present
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)
<223> Xaa = P or not present
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)
<223> Xaa = T, I, or V
<400> 408
Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe
1 5 10
<210> 409
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8alpha信号肽
<400> 409
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccg 63
<210> 410
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8alpha信号肽
<400> 410
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 411
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1 scFv
<400> 411
gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc cgctatgcca tgacctgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atgagcggca ccggcggcac cacctattat 180
gccgatagcg tgaaaggtcg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgcc 300
tatggctttg atcattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagcag tggaggaggt 360
agcggaggtg gtggatctgg aggtggaggt agtgaaatcg tgctgaccca gagccctggc 420
accctgagcc tgagccctgg cgaacgcgca acactgtcat gccgcgccag ccagagcatc 480
ggcaactatc tgaactggta tcagcagaaa ccaggtcagg ctccacgtct gctgatctat 540
gatgccagca acctggaaac cggcatccct gatcgcttct caggatctgg aagcggtacc 600
gattttaccc tgaccatcag ccgcctggaa cctgaggact ttgccgtgta ttattgtcag 660
cagagtagcg ccatccctta taccttcggt cagggcacta aagtggaaat caaa 714
<210> 412
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1 scFv
<400> 412
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Met Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Tyr Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu
130 135 140
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
145 150 155 160
Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
195 200 205
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ala
210 215 220
Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 413
<211> 729
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6 scFv
<400> 413
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc agtcagtggt 300
gcaggtcgtg gtttcttcga ctactgggga caaggtactc tggtcactgt ctcctcaggt 360
ggaggcggtt caggcggagg tggatctggc ggtggcggat cccagtctgt gctgactcag 420
ccaccttcag catctggtac tccaggtcag cgcgtcacca tcagctgcag cggtagcagc 480
agcaacattg gtagcaacta cgtgtactgg tatcagcaac tcccaggcac cgctcctaag 540
ctcctgattt acgaggacaa caagcgtcct agtggtgtgc ctgatcgctt ttctgggtcc 600
aagtctggca cctcagcctc tctggctatc agtggacttc gctccgagga cgaggctgac 660
tattactgca gcagctacac tagcagcagc actgtgatct tcggcggtgg gaccaaactg 720
accgtccta 729
<210> 414
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6 scFv
<400> 414
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Ser Gly Ala Gly Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala
130 135 140
Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser
145 150 155 160
Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly
165 170 175
Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly
180 185 190
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu
195 200 205
Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu
<210> 415
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7 scFv
<400> 415
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc cgctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagcagc 300
cagggtatct tcgacatctg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc aggtggaggc 360
ggttcaggcg gaggtggatc tggcggtggc ggatcccagt ctgtgctgac tcagccacct 420
tcagcatctg gtactccagg tcagcgcgtc accatcagct gcagtggtaa caatatcggt 480
actagacgcg tgcattggta tcagcaactc ccagacaccg ctcctaagct cctgatttac 540
agtaagaaca accgtcctag tggtgtgcct gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc 600
tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc tccgaggacg aggctgacta ttactgcgca 660
gcatgggacg acagcctgag cggtcctgtg ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 720
720
<210> 416
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7 scFv
<400> 416
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly
145 150 155 160
Thr Arg Arg Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Asp Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp
210 215 220
Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
<210> 417
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10 scFv
<400> 417
gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60
tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120
ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180
gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc aagcggttac 300
ggtctgatgg acgtgtgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctcagg tggaggcggt 360
tcaggcggag gtggatctgg cggtggcgga tcccagtctg tgctgactca gccaccttca 420
gcatctggta ctccaggtca gcgcgtcacc atcagctgca ctcgtagcag cggtatcatc 480
gcaagcaact acgtgcagtg gtatcagcaa ctcccaggca ccgctcctaa gctcctgatt 540
taccgcaaca accagcgccc tagtggtgtg cctgatcgct tttctgggtc caagtctggc 600
acctcagcct ctctggctat cagtggactt cgctccgagg acgaggctga ctattactgc 660
agcagctacg caggtaacaa caacctggtg ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 720
720
<210> 418
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10 scFv
<400> 418
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr
130 135 140
Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ile Ile
145 150 155 160
Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro
165 170 175
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser
195 200 205
Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala
210 215 220
Gly Asn Asn Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
<210> 419
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18 scFv
<400> 419
cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc gattatcata tgcattgggt tcgccaagca 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcagcagca gcggcggcta tacctattat 180
gccgaaagcg tgaaaagccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgatcgata 300
cgcctgcctc tggattattg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag cagtggagga 360
ggtagcggag gtggtggatc tggaggtgga ggtagtcaga gcgtgctgac ccagcctcct 420
agcgcctccg gtacaccagg acagcgcgtg actattagct gtagcggcaa caacatcggc 480
agcaaaggcg tgcattggta tcagcaactg cctggaactg cacctaagct gctgatctat 540
gaagatagca aacgccctag cggcgtgcgt gatcgcttta gcggtagcaa atcaggcacc 600
agcgccagcc tggccatcag cggccttcgc tccgaagatg aagccgatta ttattgtcag 660
agctatgata gcaccaaagg cgtggtgttt ggtggcggta ccaagctgac cgtgctg 717
<210> 420
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18 scFv
<400> 420
Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly
145 150 155 160
Ser Lys Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Arg Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser
210 215 220
Thr Lys Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235
<210> 421
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<400> 421
ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc 30
<210> 422
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GS接头
<400> 422
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 423
<211> 135
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8铰链
<400> 423
accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60
tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120
gacttcgcct gtgat 135
<210> 424
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8铰链
<400> 424
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 425
<211> 81
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 425
ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60
gcctttatta ttttctgggt g 81
<210> 426
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 426
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 427
<211> 123
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28胞内结构域
<400> 427
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 428
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28胞内结构域
<400> 428
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 429
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3zeta胞内结构域
<400> 429
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaa 339
<210> 430
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3zeta胞内结构域
<400> 430
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 431
<211> 1485
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1 CAR
<400> 431
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggaagtgc agctgctgga aagtggaggt ggactggtgc agcctggcgg cagcctgcgc 120
ctgagctgtg ccgccagcgg attcaccttc agccgctatg ccatgacctg ggttcgccaa 180
gcacctggca aaggcctgga atgggtgagc agcatgagcg gcaccggcgg caccacctat 240
tatgccgata gcgtgaaagg tcgctttacc atcagccgcg ataacagcaa aaacaccctg 300
tatctgcaga tgaacagcct gcgcgccgag gacaccgcag tctactactg tgcccgcggc 360
gcctatggct ttgatcattg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag cagtggagga 420
ggtagcggag gtggtggatc tggaggtgga ggtagtgaaa tcgtgctgac ccagagccct 480
ggcaccctga gcctgagccc tggcgaacgc gcaacactgt catgccgcgc cagccagagc 540
atcggcaact atctgaactg gtatcagcag aaaccaggtc aggctccacg tctgctgatc 600
tatgatgcca gcaacctgga aaccggcatc cctgatcgct tctcaggatc tggaagcggt 660
accgatttta ccctgaccat cagccgcctg gaacctgagg actttgccgt gtattattgt 720
cagcagagta gcgccatccc ttataccttc ggtcagggca ctaaagtgga aatcaaaggt 780
ggcggaggtt ctggaggtgg aggttccacc acgacgccag cgccgcgacc accaacaccg 840
gcgcccacca tcgcgtcgca gcccctgtcc ctgcgcccag aggcgtgccg gccagcggcg 900
gggggcgcag tgcacacgag ggggctggac ttcgcctgtg atttttgggt gctggtggtg 960
gttggtggag tcctggcttg ctatagcttg ctagtaacag tggcctttat tattttctgg 1020
gtgaggagta agaggagcag gctcctgcac agtgactaca tgaacatgac tccccgccgc 1080
cccgggccca cccgcaagca ttaccagccc tatgccccac cacgcgactt cgcagcctat 1140
cgctccagag tgaagttcag caggagcgca gacgcccccg cgtaccagca gggccagaac 1200
cagctctata acgagctcaa tctaggacga agagaggagt acgatgtttt ggacaagaga 1260
cgtggccggg accctgagat ggggggaaag ccgagaagga agaaccctca ggaaggcctg 1320
tacaatgaac tgcagaaaga taagatggcg gaggcctaca gtgagattgg gatgaaaggc 1380
gagcgccgga ggggcaaggg gcacgatggc ctttaccagg gtctcagtac agccaccaag 1440
gacacctacg acgcccttca catgcaggcc ctgccccctc gctaa 1485
<210> 432
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CK1 CAR
<400> 432
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Met Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Tyr Gly Phe Asp His Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro
145 150 155 160
Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg
165 170 175
Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
180 185 190
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
195 200 205
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
210 215 220
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Gln Gln Ser Ser Ala Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
245 250 255
Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Thr Thr
260 265 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
275 280 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
290 295 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val
305 310 315 320
Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe
325 330 335
Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp
340 345 350
Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr
355 360 365
Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val
370 375 380
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
385 390 395 400
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
405 410 415
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
420 425 430
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
435 440 445
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
450 455 460
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
465 470 475 480
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 433
<211> 1500
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6 CAR
<400> 433
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggaggtgc agctgttgga gtctggtgga ggcttggtac agcctggagg ttctcttcgc 120
ctctcctgtg cagcctccgg attcactttc agcagctacg gtatgcattg ggtcagacag 180
gcaccaggta agggactgga gtgggtctct gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac 240
tacgcagaca gcgtgaaggg tcgcttcacc atctcacgcg acaactccaa gaacaccctg 300
tacctgcaga tgaacagcct tcgcgcagag gacactgccg tgtattactg cgcagtcagt 360
ggtgcaggtc gtggtttctt cgactactgg ggacaaggta ctctggtcac tgtctcctca 420
ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggatct ggcggtggcg gatcccagtc tgtgctgact 480
cagccacctt cagcatctgg tactccaggt cagcgcgtca ccatcagctg cagcggtagc 540
agcagcaaca ttggtagcaa ctacgtgtac tggtatcagc aactcccagg caccgctcct 600
aagctcctga tttacgagga caacaagcgt cctagtggtg tgcctgatcg cttttctggg 660
tccaagtctg gcacctcagc ctctctggct atcagtggac ttcgctccga ggacgaggct 720
gactattact gcagcagcta cactagcagc agcactgtga tcttcggcgg tgggaccaaa 780
ctgaccgtcc taggtggcgg aggttctgga ggtggaggtt ccaccacgac gccagcgccg 840
cgaccaccaa caccggcgcc caccatcgcg tcgcagcccc tgtccctgcg cccagaggcg 900
tgccggccag cggcgggggg cgcagtgcac acgagggggc tggacttcgc ctgtgatttt 960
tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 1020
tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 1080
atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 1140
gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac 1200
cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat 1260
gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac 1320
cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag 1380
attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc 1440
agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa 1500
1500
<210> 434
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL6 CAR
<400> 434
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Ser Gly Ala Gly Arg Gly Phe Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr
145 150 155 160
Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser
165 170 175
Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Asn
195 200 205
Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
210 215 220
Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala
225 230 235 240
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Ile Phe Gly
245 250 255
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
275 280 285
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
290 295 300
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe
305 310 315 320
Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
325 330 335
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg
340 345 350
Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro
355 360 365
Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala
370 375 380
Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
385 390 395 400
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
405 410 415
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
420 425 430
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
435 440 445
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
450 455 460
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
465 470 475 480
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
485 490 495
Pro Pro Arg
<210> 435
<211> 1491
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7 CAR
<400> 435
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggaggtgc agctgttgga gtctggtgga ggcttggtac agcctggagg ttctcttcgc 120
ctctcctgtg cagcctccgg attcactttc agccgctacg caatgagctg ggtcagacag 180
gcaccaggta agggactgga gtgggtctct gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac 240
tacgcagaca gcgtgaaggg tcgcttcacc atctcacgcg acaactccaa gaacaccctg 300
tacctgcaga tgaacagcct tcgcgcagag gacactgccg tgtattactg cgcacgtagc 360
agccagggta tcttcgacat ctggggacaa ggtactctgg tcactgtctc ctcaggtgga 420
ggcggttcag gcggaggtgg atctggcggt ggcggatccc agtctgtgct gactcagcca 480
ccttcagcat ctggtactcc aggtcagcgc gtcaccatca gctgcagtgg taacaatatc 540
ggtactagac gcgtgcattg gtatcagcaa ctcccagaca ccgctcctaa gctcctgatt 600
tacagtaaga acaaccgtcc tagtggtgtg cctgatcgct tttctgggtc caagtctggc 660
acctcagcct ctctggctat cagtggactt cgctccgagg acgaggctga ctattactgc 720
gcagcatggg acgacagcct gagcggtcct gtgttcggcg gtgggaccaa actgaccgtc 780
ctaggtggcg gaggttctgg aggtggaggt tccaccacga cgccagcgcc gcgaccacca 840
acaccggcgc ccaccatcgc gtcgcagccc ctgtccctgc gcccagaggc gtgccggcca 900
gcggcggggg gcgcagtgca cacgaggggg ctggacttcg cctgtgattt ttgggtgctg 960
gtggtggttg gtggagtcct ggcttgctat agcttgctag taacagtggc ctttattatt 1020
ttctgggtga ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactccc 1080
cgccgccccg ggcccacccg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 1140
gcctatcgct ccagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc 1200
cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 1260
aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa 1320
ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg 1380
aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc 1440
accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta a 1491
<210> 436
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL7 CAR
<400> 436
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro
145 150 155 160
Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser
165 170 175
Gly Asn Asn Ile Gly Thr Arg Arg Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro
180 185 190
Asp Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser
195 200 205
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
210 215 220
Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr
245 250 255
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
260 265 270
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
275 280 285
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
290 295 300
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu
305 310 315 320
Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val
325 330 335
Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His
340 345 350
Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys
355 360 365
His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
370 375 380
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
385 390 395 400
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
405 410 415
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
420 425 430
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
435 440 445
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
450 455 460
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
465 470 475 480
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 437
<211> 1491
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10 CAR
<400> 437
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggaggtgc agctgttgga gtctggtgga ggcttggtac agcctggagg ttctcttcgc 120
ctctcctgtg cagcctccgg attcactttc agcagctacg gtatgcattg ggtcagacag 180
gcaccaggta agggactgga gtgggtctct gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac 240
tacgcagaca gcgtgaaggg tcgcttcacc atctcacgcg acaactccaa gaacaccctg 300
tacctgcaga tgaacagcct tcgcgcagag gacactgccg tgtattactg cgcaagcggt 360
tacggtctga tggacgtgtg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc aggtggaggc 420
ggttcaggcg gaggtggatc tggcggtggc ggatcccagt ctgtgctgac tcagccacct 480
tcagcatctg gtactccagg tcagcgcgtc accatcagct gcactcgtag cagcggtatc 540
atcgcaagca actacgtgca gtggtatcag caactcccag gcaccgctcc taagctcctg 600
atttaccgca acaaccagcg ccctagtggt gtgcctgatc gcttttctgg gtccaagtct 660
ggcacctcag cctctctggc tatcagtgga cttcgctccg aggacgaggc tgactattac 720
tgcagcagct acgcaggtaa caacaacctg gtgttcggcg gtgggaccaa actgaccgtc 780
ctaggtggcg gaggttctgg aggtggaggt tccaccacga cgccagcgcc gcgaccacca 840
acaccggcgc ccaccatcgc gtcgcagccc ctgtccctgc gcccagaggc gtgccggcca 900
gcggcggggg gcgcagtgca cacgaggggg ctggacttcg cctgtgattt ttgggtgctg 960
gtggtggttg gtggagtcct ggcttgctat agcttgctag taacagtggc ctttattatt 1020
ttctgggtga ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactccc 1080
cgccgccccg ggcccacccg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 1140
gcctatcgct ccagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc 1200
cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 1260
aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa 1320
ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg 1380
aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc 1440
accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta a 1491
<210> 438
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL10 CAR
<400> 438
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
145 150 155 160
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg
165 170 175
Ser Ser Gly Ile Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu
180 185 190
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro
195 200 205
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
210 215 220
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr
245 250 255
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
260 265 270
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
275 280 285
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
290 295 300
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu
305 310 315 320
Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val
325 330 335
Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His
340 345 350
Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys
355 360 365
His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
370 375 380
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
385 390 395 400
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
405 410 415
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
420 425 430
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
435 440 445
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
450 455 460
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
465 470 475 480
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 439
<211> 1488
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18 CAR
<400> 439
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccgcgagtgc agctgctgga aagtggaggt ggactggtgc agcctggcgg cagcctgcgc 120
ctgagctgtg ccgccagcgg attcaccttc agcgattatc atatgcattg ggttcgccaa 180
gcacctggca aaggcctgga atgggtgagc accatcagca gcagcggcgg ctatacctat 240
tatgccgaaa gcgtgaaaag ccgctttacc atcagccgcg ataacagcaa aaacaccctg 300
tatctgcaga tgaacagcct gcgcgccgag gacaccgcag tctactactg tgcccgatcg 360
atacgcctgc ctctggatta ttggggacaa ggtactctgg tgaccgtgag cagcagtgga 420
ggaggtagcg gaggtggtgg atctggaggt ggaggtagtc agagcgtgct gacccagcct 480
cctagcgcct ccggtacacc aggacagcgc gtgactatta gctgtagcgg caacaacatc 540
ggcagcaaag gcgtgcattg gtatcagcaa ctgcctggaa ctgcacctaa gctgctgatc 600
tatgaagata gcaaacgccc tagcggcgtg cgtgatcgct ttagcggtag caaatcaggc 660
accagcgcca gcctggccat cagcggcctt cgctccgaag atgaagccga ttattattgt 720
cagagctatg atagcaccaa aggcgtggtg tttggtggcg gtaccaagct gaccgtgctg 780
ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca 840
ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg 900
gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg gacttcgcct gtgatttttg ggtgctggtg 960
gtggttggtg gagtcctggc ttgctatagc ttgctagtaa cagtggcctt tattattttc 1020
tgggtgagga gtaagaggag caggctcctg cacagtgact acatgaacat gactccccgc 1080
cgccccgggc ccacccgcaa gcattaccag ccctatgccc caccacgcga cttcgcagcc 1140
tatcgctcca gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacca gcagggccag 1200
aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1260
agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1320
ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1380
ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1440
aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgctaa 1488
<210> 440
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SL18 CAR
<400> 440
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Asp Tyr His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Glu Ser Val Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro
145 150 155 160
Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser
165 170 175
Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro
180 185 190
Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser
195 200 205
Gly Val Arg Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
210 215 220
Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Gln Ser Tyr Asp Ser Thr Lys Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
245 250 255
Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Thr
260 265 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
275 280 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
290 295 300
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val
305 310 315 320
Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala
325 330 335
Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser
340 345 350
Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His
355 360 365
Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 441
<211> 1260
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD300c ECD CAR
<400> 441
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccgggctatt ttcctctgag ccaccccatg accgtggcgg gccccgtggg gggatccctg 120
agtgtgcagt gtcgctatga gaaggaacac aggaccctca acaaattctg gtgcagacca 180
ccacagattc tccgatgtga caagattgtg gagaccaaag ggtcagcagg gaaaaggaat 240
ggccgagtgt ccatcaggga cagtcctgca aacctcagct tcacagtgac cctggagaat 300
ctcacagagg aggacgcagg cacctactgg tgtggggtgg atacaccgtg gctccgagac 360
tttcatgatc ccattgtcga ggttgaggtg tccgtgttcc cggccgggac gaccacagcc 420
tccagccccc agagctccat gggcacctca ggtcctccca cgaagctgcc cgtgcacacc 480
tggcccagcg tgaccagaaa ggacagcccc gaacccagcc cacaccctgg ctccctgttc 540
agcaatgtcc gcggtggcgg aggttctgga ggtggaggtt ccaccacgac gccagcgccg 600
cgaccaccaa caccggcgcc caccatcgcg tcgcagcccc tgtccctgcg cccagaggcg 660
tgccggccag cggcgggggg cgcagtgcac acgagggggc tggacttcgc ctgtgatttt 720
tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 780
tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 840
atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 900
gacttcgcag cctatcgctc cagagtgaag ttcagcagga gcgcagacgc ccccgcgtac 960
cagcagggcc agaaccagct ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat 1020
gttttggaca agagacgtgg ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac 1080
cctcaggaag gcctgtacaa tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag 1140
attgggatga aaggcgagcg ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc 1200
agtacagcca ccaaggacac ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa 1260
1260
<210> 442
<211> 419
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD300c ECD CAR
<400> 442
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Gly Tyr Phe Pro Leu Ser His Pro Met Thr Val
20 25 30
Ala Gly Pro Val Gly Gly Ser Leu Ser Val Gln Cys Arg Tyr Glu Lys
35 40 45
Glu His Arg Thr Leu Asn Lys Phe Trp Cys Arg Pro Pro Gln Ile Leu
50 55 60
Arg Cys Asp Lys Ile Val Glu Thr Lys Gly Ser Ala Gly Lys Arg Asn
65 70 75 80
Gly Arg Val Ser Ile Arg Asp Ser Pro Ala Asn Leu Ser Phe Thr Val
85 90 95
Thr Leu Glu Asn Leu Thr Glu Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Gly
100 105 110
Val Asp Thr Pro Trp Leu Arg Asp Phe His Asp Pro Ile Val Glu Val
115 120 125
Glu Val Ser Val Phe Pro Ala Gly Thr Thr Thr Ala Ser Ser Pro Gln
130 135 140
Ser Ser Met Gly Thr Ser Gly Pro Pro Thr Lys Leu Pro Val His Thr
145 150 155 160
Trp Pro Ser Val Thr Arg Lys Asp Ser Pro Glu Pro Ser Pro His Pro
165 170 175
Gly Ser Leu Phe Ser Asn Val Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
180 185 190
Gly Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
195 200 205
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
210 215 220
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe
225 230 235 240
Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
245 250 255
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg
260 265 270
Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro
275 280 285
Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala
290 295 300
Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
305 310 315 320
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
325 330 335
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
340 345 350
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
355 360 365
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
370 375 380
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
385 390 395 400
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
405 410 415
Pro Pro Arg

Claims (21)

1.嵌合抗原受体，其包含与CD300c抗原或其受体特异性结合的结合结构域。
2.权利要求1的嵌合抗原受体，进一步包含跨膜结构域和胞内信号传导结构域。
3.权利要求1的嵌合抗原受体，其中所述结合结构域是选自抗体、单结构域抗体和单链可变片段中的任一种。
4.权利要求1的嵌合抗原受体，
其中所述结合结构域包含：
(i)重链可变区，其包含：
CDR1，其包含选自由SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:43、SEQID NO:55、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:151、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:175、SEQ IDNO:187、SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:211、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:271、SEQ ID NO:283、和SEQ ID NO:295组成的组的氨基酸序列；
CDR2，其包含选自由SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:44、SEQID NO:56、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:176、SEQ IDNO:188、SEQ ID NO:200、SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:236、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:260、SEQ ID NO:272、SEQ ID NO:284、和SEQ ID NO:296组成的组的氨基酸序列；
CDR3，其包含选自由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:45、SEQID NO:57、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:177、SEQ IDNO:189、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:237、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:285、和SEQ ID NO:297组成的组的氨基酸序列；和
(ii)轻链可变区，其包含：
CDR1，其包含选自由SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:46、SEQID NO:58、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:178、SEQ IDNO:190、SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:238、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:286、和SEQ ID NO:298组成的组的氨基酸序列；
CDR2，其包含选自由SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:47、SEQID NO:59、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:179、SEQ IDNO:191、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:239、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:287、和SEQ ID NO:299组成的组的氨基酸序列；
CDR3，其包含选自由SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:48、SEQID NO:60、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:180、SEQ IDNO:192、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:240、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:288、和SEQ ID NO:300组成的组的氨基酸序列，或
其中所述结合结构域包含如SEQ ID NO:402所示的氨基酸序列。
5.权利要求1的嵌合抗原受体，其中所述结合结构域包含：
重链可变区，其包含分别包含式(1)至式(3)所示的氨基酸序列的CDR1至CDR3，以及
轻链可变区，其包含分别包含式(4)至式(6)所示的氨基酸序列的CDR1至CDR3：
FTFSX1YX2MX3WVR (1)
其中
X1＝R、S、或D
X2＝A、G、或H
X3＝T、H、或S
X1X2SX3X4GGX5TYYAX6 (2)
其中
X1＝S、A、或T
X2＝M或I
X3＝G或S
X4＝T或S
X5＝T、S、或Y
X6＝D或E
YCAX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11W(3)其中
X1＝R、V、或S
X2＝G或S
X3＝A、G、S、Y、或I
X4＝Y、A、Q、G、或R
X5＝G或L
X6＝F、R、I、M、或P
X7＝D、G、F、或L
X8＝H、F、D、或V
X9＝F、I、Y或不存在
X10＝D或不存在
X11＝Y或不存在
CX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13W(4)其中
X1＝R、S、或T
X2＝A、G、或R
X3＝S或N
X4＝Q、S、或N
X5＝S、I、或G
X6＝I、N、或G
X7＝G、I、T、或S
X8＝N、G、R、A、或K
X9＝Y、S、R、或G
X10＝N或不存在
X11＝Y或不存在
X12＝L或V
X13＝N、Y、H、或Q
X1X2X3X4X5X6X7GX8X9(5)
其中
X1＝D、E、S、或R
X2＝A、D、K、或N
X3＝S或N
X4＝N、K、或Q
X5＝L或R
X6＝E或P
X7＝T或S
X8＝I或V
X9＝P或R
YCX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11F (6)
其中
X1＝Q、S、或A
X2＝Q、S、或A
X3＝S、Y、或W
X4＝S、T、D、或A
X5＝A、S、D、或G
X6＝I、S、N、或T
X7＝P、S、L、N、或K
X8＝Y、T、S、N、或G
X9＝V、G、L或不存在
X10＝P或不存在
X11＝T、I、或V。
6.权利要求4的嵌合抗原受体，其中(i)所述重链可变区包含：
CDR1，其包含如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:115、或SEQ IDNO:211所示的序列，或由其组成；
CDR2，其包含如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:116、或SEQ IDNO:212所示的序列，或由其组成；和
CDR3，其包含如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:117、或SEQ IDNO:213所示的序列，或由其组成；并且
(ii)所述轻链可变区包含：
CDR1，其包含如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:118、或SEQID NO:214所示的序列，或由其组成；
CDR2，其包含如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:119、或SEQID NO:215所示的序列，或由其组成；和
CDR3，其包含如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:120、或SEQID NO:216所示的序列，或由其组成。
7.权利要求1的嵌合抗原受体，进一步包含信号肽、GS接头、跨膜结构域和胞浆内结构域。
8.权利要求7的嵌合抗原受体，其中所述信号肽包含CD8α信号肽。
9.权利要求7的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域包含CD8铰链(分化簇8的铰链)和CD28跨膜结构域。
10.权利要求7的嵌合抗原受体，其中所述胞浆内结构域包含CD28胞内结构域和CD3ζ胞内结构域。
11.多核苷酸，其包含编码权利要求1至10中任一项的嵌合抗原受体的核酸序列。
12.表达载体，其包含权利要求11的多核苷酸。
13.免疫细胞，其包含权利要求1至10中任一项的嵌合抗原受体。
14.权利要求13的免疫细胞，其中所述免疫细胞包括选自单核细胞、巨噬细胞、T细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)和树突状细胞中的任何一种或多种。
15.用于预防或治疗表达CD300c抗原或CD300c受体的癌症的药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的权利要求13的免疫细胞。
16.权利要求15的药物组合物，其中所述癌症包括选自结直肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、口腔癌、咽癌、喉癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、舌癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、骨癌和血液癌症中的任意一种或多种。
17.权利要求15的药物组合物，其进一步包含另一种抗癌剂。
18.权利要求15的药物组合物，其中所述药物组合物抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌剂耐药性。
19.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用包含权利要求13的免疫细胞作为活性成分的组合物。
20.权利要求13的免疫细胞用于预防或治疗癌症的用途。
21.权利要求13的免疫细胞用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
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