CN117897402A - 使用抗cd300c抗体的组合疗法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗CD300c抗体及使用其的组合疗法，更具体地，本发明涉及预防或治疗癌症的药物组合物、试剂盒和方法，包含抗CD300c单克隆抗体和一种或多种另外的抗癌剂作为活性成分。

Description

使用抗CD300C抗体的组合疗法

技术领域

本公开涉及抗CD300c抗体和使用抗CD300c抗体的组合疗法。更具体地，本发明涉及一种预防或治疗癌症的组合物、试剂盒和组合疗法，它们各自包含抗CD300c单克隆抗体和至少一种另外的抗癌剂作为活性成分。

背景技术

近年来，活化人体免疫系统以帮助对抗癌细胞的免疫疗法作为癌症治疗受到关注。以往的癌症治疗剂，由于着眼于癌细胞的特征即迅速分裂的细胞的杀伤，因此不仅对癌细胞，而且对正常细胞中的迅速分裂的细胞也有副作用。然而，已知免疫治疗剂利用癌症患者的免疫系统来影响癌细胞，因此现有抗癌剂的典型副作用很少。此外，免疫治疗剂利用身体的免疫系统，因此可以应用于各种癌症类型，这与靶向癌症的特定突变或信号的靶向治疗剂不同。免疫检查点抑制剂如帕博利珠单抗(Keytruda)作为一种免疫治疗剂受到关注。

同时，CD300抗原样家族成员C(CD300C)蛋白，其是由人CD300C基因编码的蛋白，存在于各种癌细胞的表面。CD300c蛋白的活性或表达的抑制可活化T细胞以减少癌症的增殖(韩国专利公开号10-2019-0136949)。

还已知许多类型的肿瘤通常同时表达多种免疫检查点蛋白。因此，尽管免疫检查点抑制剂如帕博利珠单抗(Keytruda)的具有有前景的临床活性，但提高治疗活性、降低毒性或提高两者的治疗效果仍然是免疫治疗剂开发中的关键目标。

现有技术文献

专利文献

(专利文献1)韩国专利公开号10-2019-0136949

发明内容技术问题

本公开的一个方面是解决所有上述问题。

本公开的另一方面是提供使用抗CD300c抗体用于预防或治疗癌症的组合疗法。

本公开的再一方面是提供一种用于组合疗法的药物组合物，所述组合疗法使用抗CD300c抗体用于预防或治疗癌症。

本公开的又一个方面是提供用于组合疗法的试剂盒，所述组合疗法使用抗CD300c抗体用于预防或治疗癌症。

本发明的另一个方面是提供一种诊断或治疗方法，该方法基于根据抗CD300c抗体表达水平的标志物蛋白的变化或施用抗CD300c抗体。

本公开的方面不限于如上所述的方面。本公开的方面将通过以下描述变得更清楚，并且将通过如权利要求及其组合中描述的手段来实现。

技术方案

用于实现上述目的本公开的代表性特征如下。根据本公开的一个方面，提供了抗CD300c抗体或其抗原结合片段和抗CD300c抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗癌症的用途。

根据本公开的另一个方面，提供了用于预防或治疗癌症的抗CD300c抗体或其抗原结合片段与至少一种另外的抗癌剂的组合用途。

根据本公开的另一个方面，提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，该药物组合物含有抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂作为活性成分。

根据本公开的另一个方面，提供了一种预防或治疗癌症的方法，该方法包括向需要预防或治疗癌症的个体施用抗CD300c(CD300抗原样家族成员C)抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂。

根据本公开的又一方面，提供了一种用于预防或治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包括：包含有效量的抗CD300c抗体或其抗原结合片段的组合物；和指导所述抗体或其抗原结合片段与至少一种另外的抗癌剂组合使用的说明书。

根据本公开的又一个方面，提供了一种提供预测抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性所需的信息的方法，该方法包括基于获自个体的生物样品或数据来确定标志物的表达水平以预测治疗应答性。

根据本公开的再一方面，提供了一种提供预防或治疗癌症的信息的方法，该方法包括基于获自需要预防或治疗癌症的个体的生物样品或数据来测量CD300c蛋白的表达水平。

有益效果

在体内和体外都证实，与单独使用抗CD300c抗体或另外的抗癌剂相比，本公开抗CD300c抗体和另外的抗癌剂的组合治疗可有效和协同抑制癌细胞的生长、增殖、转移等。因此，组合使用抗CD300c抗体和另外的抗癌剂可有利地用于治疗或预防各种类型的癌症。

还揭示了CD300c蛋白的表达水平和各种癌症患者的生存期之间存在显著的相关性，表明CD300c蛋白的表达水平可用于预测癌症患者的预后或使用抗CD300c抗体治疗的可能性。此外，已证实施用抗CD300c抗体后，关于免疫检查点蛋白、免疫细胞活化因子和肿瘤微环境的标志物蛋白发生改变，表明这些标志物蛋白可用于鉴定患者对抗CD300c抗体的治疗应答性或有效地施用抗CD300c抗体与另外的抗癌剂的组合。

附图说明

图1a-1y分别示出了本公开25种抗CD300c单克隆抗体的重链和轻链可变区序列(核酸和氨基酸序列)。在各图中，CDR区(CDR1、CDR2和CDR3)顺序标明。

图2示出了根据实施例1.4，在非还原条件下，通过对抗CD300c单克隆抗体进行SDS-PAGE所获得的结果。

图3示出了根据实施例1.4，在还原条件下，通过对抗CD300c单克隆抗体进行SDS-PAGE所获得的结果。

图4示出了根据实验实施例1.1，通过鉴定正常细胞、免疫细胞和癌细胞系中CD300c表达所获得的结果。

图5a和5b示出了根据实验实施例1.2，通过鉴定癌组织(图5a)和免疫细胞(图5b)中CD300c表达所获得的结果。

图6a和6b示出了根据实验实施例1.3，通过鉴定扁桃体组织(图6a)和癌组织(图6b)中CD300c表达所获得的结果。

图7示出了根据实验实施例2.1，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体对CD300c抗原的结合亲和力所获得的结果。

图8示出了根据实验实施例2.2中FACS结合结果的S形曲线。

图9示出了根据实验实施例2.3的结合ELISA的结果。

图10示出了实验实施例2.4的表面等离子体共振的结果。

图11示出了根据实验实施例2.5的结合ELISA的结果。

图12示出了根据实验实施例2.6的结合ELISA的结果。

图13示出了根据实验实施例3.1，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体是否促进小鼠巨噬细胞分化为M1巨噬细胞所获得的结果。

图14示出了根据实验实施例3.2，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体对肿瘤相关巨噬细胞作用所获得的结果。

图15示出了根据实验实施例3.3，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体对CD8+ T细胞的体内作用所获得的结果。

图16示出了根据实验实施例3.4，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体是否以肿瘤特异性方式增加CD8+ T细胞数量所获得的结果。

图17示出了根据实验实施例3.5，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体对CD8+ T细胞活性提高的体内作用所获得的结果。

图18示出了根据实验实施例3.6，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体对细胞毒性T细胞相对于调节性T细胞的增加的体内作用所获得的结果。

图19示出了根据实验实施例3.7，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体对细胞毒性T细胞、调节性T细胞和肿瘤相关巨噬细胞的作用所获得的结果。

图20示出了根据实验实施例3.8，鉴定抗CD300c单克隆抗体是否表现出抗癌作用所获得的结果。

图21示出了根据实验实施例3.9，鉴定抗CD300c单克隆抗体在体内条件下抗癌作用所获得的结果。

图22示出了根据实验实施例4，在各种癌症患者中根据CD300c表达水平鉴定总生存期所获得的结果。

图23示出了根据实施例2.1，用CL7处理实体癌模型时所获得的Nanostring免疫谱结果。

图24示出了根据实施例2.1，当用CL7处理实体癌模型时所获得的各种免疫细胞和肿瘤微环境相关标志物的表达的变化。符号*表示与CL7处理前相比，其表达水平统计学上有显著变化的标志物。

图25示出了根据实施例2.2，基于实施例2.1中得到的Nanostring免疫谱结果鉴定的免疫检查点标志物的表达变化。符号*表示与CL7处理前相比，其表达水平统计学上有显著变化的标志物。

图26示出了根据实验实施例5.1，通过用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂单独或组合处理，单核细胞分化为M1巨噬细胞(无论M1巨噬细胞是否增加)的结果。

图27示出了根据实验实施例5.2，通过用抗CD300c单克隆抗体处理，单核细胞分化为M1巨噬细胞(其指示M1巨噬细胞标志物是否增加)。

图28示出了根据实验实施例5.2，通过用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂组合处理，单核细胞分化为M1巨噬细胞的结果(其指示M1巨噬细胞标志物是否增加)。

图29-31示出了根据实验实施例5.4，通过用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂组合处理鉴定MAPK信号(图29)、NF-κB信号(图30)和IκB信号(图31)所获得的结果，所述MAPK信号、NF-κB信号和IκB信号是M1巨噬细胞分化的信号。

图32示出了根据实验实施例6.1，通过鉴定用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂组合处理的凋亡信号变化所获得的结果。

图33和34示出了根据实验实施例6.2，通过鉴定通过使用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂组合处理的癌细胞生长抑制作用所获得的结果。

图35示意性示出了实验实施例7.1中使用的实验方法。

图36示出了根据实验实施例7.1，当对移植结肠癌细胞系的小鼠单独或组合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体时观察到的体内癌症生长抑制作用。

图37示出了根据实验实施例7.3，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体在小鼠模型的癌组织中是否增加M1巨噬细胞所获得的结果。

图38示出了根据实验实施例7.4，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体在小鼠肿瘤模型中是否促进CD8+ T细胞免疫所获得的结果。

图39示意性示出了实验实施例8.1中使用的实验方法。

图40示出了根据实验实施例8.1，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体在除CT26结肠癌小鼠模型外的其它癌症中是否有效所获得的结果。

图41示出了根据实验实施例8.2，通过鉴定单独或组合施用(包括双联和三联组合施用)抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂在B16F10黑色素瘤模型中对CD8+ T细胞的体内作用所获得的结果。

图42示出了根据实验实施例8.3，通过鉴定单独或组合施用(包括双联和三联组合施用)抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂在B16F10黑色素瘤模型中对调节性T细胞的体内作用所获得的结果。

图43示出了根据实验实施例8.4，通过鉴定单独或组合施用(包括双联和三联组合施用)抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂在B16F10黑色素瘤模型中对巨噬细胞的体内作用所获得的结果。

图44a和44b示出了根据实验实施例9，通过鉴定组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂的体内抗癌作用所获得的结果。图44a示出了肿瘤体积减小速率，且图44b示出了完全缓解速率。

图45示出了根据实验实施例10，通过鉴定组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂提高长期生存率的效果所获得的结果。

图46示出了根据实验实施例11，通过鉴定组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂预防癌症复发的体内作用所获得的结果。

图47示出了根据实验实施例12，通过鉴定组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂的免疫记忆效应所获得的结果。

图48a和48b示出了根据实验实施例14，通过鉴定单独或组合施用(包括双联和三联组合施用)抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂是否能促进单核细胞分化为M1巨噬细胞所获得的结果。

图49a和49b示出了根据实验实施例15，通过鉴定抗CD300c单克隆抗体是否能通过与免疫治疗剂组合施用抑制癌细胞生长所获得的结果。

图50-52分别示出了选择索拉菲尼(图50)、吉西他滨(图51)和紫杉醇(图52)用于抗CD300c单克隆抗体组合治疗的最佳治疗浓度的图。

图53-55示出了通过鉴定分别用于与抗CD300c单克隆抗体组合治疗的索拉菲尼(图53)、吉西他滨(图54)和紫杉醇(图55)的癌细胞生长抑制作用所获得的结果。

实施本发明的最佳方式

将参考特定附图针对可实践本公开的特定实施例方案描述本公开的以下详细描述。然而，本公开不限于此，并且本公开的范围仅由适当解释的所附权利要求连同权利要求所赋予的等同物的全部范围来限定。应当理解，本公开的各种实施方案虽然彼此不同，但不一定是相互排斥的。例如，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，本文描述的特定特征、结构或特性可以从一个实施方案到另一个实施方案变化，或者被实现为实施方案的组合。除非另外定义，否则本文所用的技术和科学术语具有与本公开所属领域中通常使用的相同的含义。为了解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指代物，反之亦然，除非上下文另外清楚地指明。

定义

如本文所用，术语“约”是指本领域普通技术人员已知的每个值的可接受的误差范围。

本文所用的术语“抗体”是广义使用的，包括任何同种型的单克隆抗体(包括全长抗体)(例如，IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，抗体融合物(例如，抗体与(多)肽的融合物或抗体与化合物的融合物)和抗体片段(包括抗原结合片段)。如本文所用，前缀“抗”当与抗原结合时指示给定抗体与给定抗原反应。与特定抗原反应的抗体可以通过合成和/或重组方法产生，而没有限制，例如在噬菌体或类似载体中选择重组抗体文库，或者通过用抗原或编码抗原的核酸免疫动物。典型的IgG抗体由通过二硫键连接的两条相同的重链和两条相同的轻链组成。每条重链和轻链含有恒定区和可变区。重链可变区(HVR)和轻链可变区(LVR)含有三个区段，分别称为“互补决定区”(“CDR”)或“高变区”，它们主要负责结合抗原的表位。它们通常称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始顺序编号。CDR外的可变区的更高度保守的部分被称为“框架区”(“FR”)。本文中的抗体可以是例如动物抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

术语“人源化”(也称为重塑或CDR移植)包括一种成熟的技术，用于降低来自异种来源(通常为啮齿类)的单克隆抗体的免疫原性并用于提高它们的亲和力或效应功能(ADCC、补体活化、C1q结合)。

如本文所用，术语“单克隆抗体”指从基本上同质的抗体群获得的抗体，即，包括该群的各个抗体是相同的，除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原位点。单克隆抗体获自基本上同质的抗体群，显示了抗体的性质，并且不应被解释为需要通过任何特定方法来产生抗体。例如，根据本公开使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法。

术语“抗原结合片段”是指对抗原或包括其的多肽具有特异性结合能力的抗体的一部分。术语“抗体”和“抗原结合片段”可以互换使用，除了在上下文中理解“抗体”特异性地排除“抗原结合片段”并且“抗体”可以解释为包括“抗原结合片段”的情况。抗原结合片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、双抗体、三抗体、四抗体、交叉Fab片段、线性抗体、单链抗体分子(例如，scFv)和由抗体片段和单结构域抗体形成的多特异性抗体。

术语“抗癌剂”总体上是指在常规癌症治疗中使用的已知药物，其作用于细胞的各种代谢途径并对癌细胞表现出细胞毒性或细胞抑制效应。抗癌剂主要包括化学治疗剂、靶向治疗剂和免疫治疗剂。

术语“免疫治疗剂”是指活化免疫细胞以杀死癌细胞的药物。

术语“化学治疗剂”是指癌症治疗剂，也称为细胞毒性抗癌剂或化学药物抗癌剂。

术语“个体”与“患者”可互换使用，并且可以是需要预防或治疗癌症的哺乳动物，例如灵长类(例如，人)、伴侣动物(例如，狗和猫)、家畜(例如，奶牛、猪、马、绵羊和山羊)和实验室动物(例如，大鼠、小鼠和豚鼠)。在本公开的一个实施方案中，所述个体是人。

术语“治疗”通常是指获得期望的药理学和/或生理学效果。该作用对部分或完全治愈疾病和/或归因于该疾病的副作用而言可以是治疗性的。期望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发作或复发、缓解症状、减弱疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或减缓疾病状态、以及缓解或改善预后。优选地，“治疗”可以指已经发展的疾病或病症的医学干预。

术语“预防”涉及预防性治疗，即，涉及其目的在于预防而不是治愈疾病的措施或程序。“预防”是指获得所需的药理学和/或生理学效果，其在完全或部分预防疾病或其症状方面是预防性的。

术语“施用”是指是施用给个体一种物质(例如，抗CD300c抗体或其抗原结合片段或另一种抗癌剂)以实现预防或治疗目的(例如，预防或治疗癌症)的方法。

术语“生物样品”包括从个体获得的多种样品类型，并且可以用于诊断或监测测定。生物样品包括但不限于血液和生物来源的其它液体样品和固体组织样品，例如活检标本或组织培养物或来源于其的细胞及其后代。因此，生物样品包括临床样品，并且还包括培养中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物流体和组织样品，特别是肿瘤样品。术语“生物学数据”是指使用生物学样品获得的任何分析数据。

术语“表达水平”可以通过测量相应标志物的mRNA和蛋白质中至少一种的表达水平来确定。对于测量mRNA或蛋白质表达水平的方法，可以使用本领域已知的任何方法。例如，用于测量mRNA表达水平的试剂可以是特异性结合相应标志物基因的一对引物或探针，用于测量蛋白质表达水平的试剂可以是特异性结合相应标志物的抗体、底物、配体或辅因子。用于测量mRNA水平的测定方法包括但不限于逆转录聚合酶链式反应、竞争性逆转录聚合酶链式反应、实时逆转录聚合酶链式反应、RNase保护测定、Northern blotting或DNA芯片测定。测量蛋白质水平的测定方法包括但不限于Western blotting、ELISA、放射免疫测定、放射免疫扩散测定、Ouchterlony免疫扩散、火箭免疫电泳、免疫组织化学染色、免疫沉淀测定、补体结合测定、FACS和蛋白质芯片测定。

术语“治疗应答性”是指患有或怀疑患有癌症的个体对用治疗活性成分(如CD300c抗体或其抗原结合片段)治疗的反应是有利还是不利。治疗应答性可通过在施用CD300c抗体或其抗原结合片段后观察到的与肿瘤治疗相关的免疫系统的变化来评估。

抗CD300c抗体

根据本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段是特异性结合CD300c蛋白的抗原结合分子。

术语“CD300c蛋白”可与“CD300c”或“CD300c抗原”互换使用，是由CD300c基因编码的蛋白。已知CD300c蛋白与B7家族蛋白表现出显著的序列同一性，并在抗原呈递细胞膜上表达。抑制CD300c蛋白的表达或活性可诱导T细胞的活化和/或促进分化为M1巨噬细胞。

术语“抗CD300c抗体”可与结合CD300c蛋白的多肽互换使用。术语“多肽”是指通过肽键彼此连接的氨基酸的任何聚合物，而不考虑其长度。也就是说，本文所用的多肽也包括肽和蛋白质。

在一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段能够特异性结合CD300c蛋白的胞外域(ECD)。CD300c的胞外结构域可以是人CD300c蛋白的胞外结构域，并且可以包括如SEQ ID NO：402中所示的氨基酸序列。

在一个实施方案中，鉴了定CD300c蛋白的表达水平表现出与各种癌症患者的生存期具有非常高的相关性。具体地，鉴定了相对于癌症患者的平均CD300c表达水平，具有高CD300c表达水平的癌症患者比具有低CD300c表达水平的癌症患者的生存期更短。这意味着使用根据本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段抑制CD300c的表达或活性可产生癌症治疗效果或增加癌症患者生存期的效果。

根据本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段可特异性结合各种癌细胞表面表达的CD300c，因此表现出抗癌作用。抗CD300c抗体与CD300c的结合可活化T细胞，同时促进分化为M1巨噬细胞，以有效抑制癌细胞的增殖，这允许抗CD300c抗体有效用作各种癌症的免疫治疗剂。此外，根据本公开的抗CD300c抗体可通过与常规免疫治疗剂组合施用而表现出进一步提高的治疗效果，且还具有物种间交叉反应性(例如，在人和小鼠抗原之间)，这允许该抗体广泛应用于各种哺乳动物。此外，预期当用本公开的抗CD300c抗体处理显示抗凋亡能力的抗性癌细胞时，该抗体能够显著减弱癌细胞的抗性，从而显示预防癌症复发的优异功效。另外，癌细胞通常抑制促炎细胞因子IL-2的产生以逃避免疫系统。已鉴定抗CD300c抗体通过恢复被这些癌细胞阻断的IL-2的产生活化免疫系统，其诱导癌细胞死亡。因此，预期抗CD300c抗体可用作更基础的免疫治疗剂。关于CD300c蛋白或抗CD300c抗体的细节，也可参考韩国专利公开号10-2019-0136949，其全部内容在此引入作为参考。

在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可包括：

(i)重链可变区，其包含：包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的CDR1：SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：67、SEQ IDNO：79、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：199、SEQ IDNO：211、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：283和SEQ ID NO：295；

包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的CDR2：SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：20、SEQID NO：32、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：92、SEQID NO：104、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：212、SEQ ID NO：224、SEQID NO：236、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：260、SEQ ID NO：272、SEQ ID NO：284和SEQ ID NO：296；和

包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的CDR3：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：21、SEQID NO：33、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：93、SEQID NO：105、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：189、SEQ IDNO：201、SEQ ID NO：213、SEQ ID NO：225、SEQID NO：237、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：285和SEQ ID NO：297；以及

(ii)轻链可变区，其包含：包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的CDR1：SEQ IDNO：10、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：70、SEQ IDNO：82、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：190、SEQ ID NO：202、SEQ IDNO：214、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：238、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：262、SEQ ID NO：274、SEQ ID NO：286和SEQ ID NO：298；

包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的CDR2：SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：155、SEQID NO：167、SEQ ID NO179、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：215、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：239、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO:287和SEQ ID NO：299；和

包含选自以下的氨基酸序列或由其组成的CDR3：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：156、SEQID NO：168、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：216、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：264、SEQ ID NO：276、SEQ ID NO：288和SEQ ID NO：300。

在另一个实施方案中，(i)重链可变区可包括：

CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：115和SEQ ID NO：211；

CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：116和SEQ ID NO：212；和

CDR3，其包含选自SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：117和SEQ ID NO：213的氨基酸序列或由其组成；以及

(ii)轻链可变区可包括：

CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：118和SEQ ID NO：214；

CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：215；和

CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：120和SEQ ID NO：216。

在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以是选自下列抗体的任何一种：

一种抗体，其包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ IDNO：81中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：82中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：83中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：84中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；

一种抗体，其包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：115中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：116中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQID NO：117中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：118中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：119中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：120中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；以及

一种抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：211中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：212中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：213中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：214所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：215所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：216所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3。

在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：79中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：80中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：81中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：82中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ IDNO：83中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：84中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；

在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：115中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：116中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：117中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：118中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQID NO：119中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：120中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3。

在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：211中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ ID NO：212中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：213中所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：214所示的氨基酸序列或由其组成的CDR1、含有SEQ IDNO：215所示的氨基酸序列或由其组成的CDR2、含有SEQ ID NO：216所示的氨基酸序列或由其组成的CDR3。

在另一个实施方案中，重链可变区可包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID No：303、307、311、315、319、323、327、331、335、339、343、347、351、355、359、363、367、371、375、379、383、387、391、395和399；并且轻链可变区可包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID No：304、308、312、316、320、324、328、332、336、340、344、348、352、356、360、364、368、372、376、380、384、388、392、396和400。

在另一个实施方案中，重链可变区可包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID No：315、327、339和371；并且所述轻链可变区可包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID No：316、328、340和372。

在另一个实施方案中，重链可变区可包含：如SEQ ID No：315所示的氨基酸序列，并且轻链可变区可包含如SEQ ID No：316所示的氨基酸序列；重链可变区可包含如SEQIDNo：327中所示的氨基酸序列，并且轻链可变区可包含如SEQ ID No：328所示的氨基酸序列；重链可变区可包含如SEQ ID No：339中所示的氨基酸序列，并且轻链可变区可包含如SEQ ID No：340所示的氨基酸序列；或者重链可变区可包含如SEQ ID No：371所示的氨基酸序列，并且轻链可变区可包含如SEQ ID No：372所示的氨基酸序列。

在又一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段可包含重链可变区和轻链可变区：所述重链可变区包含含有分别由式(1)至(3)表示的氨基酸序列或由其组成的CDR1至CDR3；所述轻链可变区包含含有分别由式(4)至(6)表示的氨基酸序列或由其组成的CDR1至CDR3(各氨基酸序列以N→C方向显示)：

FTFX1X2X3X4MX5WVR(1)(SEQ ID NO：403)

其中，

X1＝G或S

X2＝S、R或D

X3＝N或Y

X4＝Y、A、G或H

X5＝S或H

X1ISX2SGX3X4TYYAX5(2)(SEQ ID NO：404)

其中，

X1＝T或A

X2＝G或S

X3＝T或G

X4＝S或Y

X5＝D或E

YCAX1X2X3X4X5X6X7X8X9W(3)(SEQ ID NO：405)

其中，

X1＝R或S

X2＝G或S

X3＝M、S、Y或I

X4＝W、Q、G或R

X5＝G或L

X6＝M、I或P

X7＝D、F或L

X8＝V或D

X9＝I、Y或不存在

CX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11VX12W(4)(SEQ ID NO：406)其中，

X1＝T或S

X2＝G或R

X3＝K、N或S

X4＝H、N或S

X5＝R、I或G

X6＝H、G或I

X7＝T、I或S

X8＝R、A、K或不存在

X9＝R、S、G或不存在

X10＝N或不存在

X11＝Y或不存在

X12＝N、H或QX1X2X3X4RPSGVX5(5)(SEQ ID NO：407)其中，

X1＝L、S、R或E

X2＝D、K或N

X3＝S或N

X4＝E、N、Q或K

X5＝P或RYCX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10VF(6)(SEQ ID NO：408)

其中，

X1＝Q、A或S

X2＝S或A

X3＝Y或W

X4＝D或A

X5＝S、D或G

X6＝S、N或T

X7＝S、L、N或K

X8＝V、S、N或G

X9＝G、L、V或不存在

X10＝P或不存在。

在一个具体实施方案中，抗CD300c抗体或抗原结合片段可包含与CDR序列或表4、5和6中所示序列具有80％或更高、优选90％或更高、更优选95％或更高和最优选98％或更高序列同一性的序列。

在一个具体实施方案中，考虑了本公开的抗体的氨基酸序列变体。例如，可能需要提高抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过将适当的修饰引入编码分子的核苷酸序列中或通过肽合成来制备。这样的修饰包括例如在抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终构建体，条件是最终构建体具有期望的特征，例如抗原结合。取代诱变的目的位点包括重链可变区(HVR)和骨架区(FR)。保守取代在表1中“优选取代”标题下提供，并且在下面参考氨基酸侧链类别(1)至(6)进一步描述。可将氨基酸取代引入目的分子中，并筛选具有所需活性的产物，所述所需活性例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC。

表1

氨基酸可以根据共同的侧链特性分组：

(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；

(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；

(3)酸性：Asp，Glu；

(4)碱性：His，Lys，Arg；

(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；

(6)芳香族：Trp，Tyr，Phe。

非保守取代需要将这些类别之一的成员交换为另一类别。

本文所用的术语“氨基酸序列变体”包括基本变体，其中在亲代抗原结合分子(例如，人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基中有氨基酸取代。通常，选择用于进一步研究的所得变体在某些生物学特性(例如，增加的亲和力、降低的免疫原性)上相对于亲本抗原结合分子具有修饰(例如，改善)和/或基本上保留亲本抗原结合分子的某些生物学特性。示例性的取代变体是亲和力成熟的抗体，其可以方便地使用例如本领域已知的基于噬菌体展示的亲和力成熟技术来产生。简言之，突变一个或多个HVR残基，在噬菌体上展示变体抗原结合分子并筛选特定的生物活性(例如，结合亲和力)。在一个具体实施方案中，取代、插入或缺失可发生在一个或多个HVR内，只要这些改变基本上不降低抗原结合分子结合抗原的能力。例如，可以在HVR中进行基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如，本文提供的保守性取代)。

氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端融合，其长度范围从一个残基到含有一百或更多残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体。该分子的其它插入变体包括与增加抗体血清半衰期的多肽的N或C末端融合。此外，该分子的其它插入变体可包括与多肽的N末端或C末端融合以促进血脑屏障(BBB)的通过。

此外，提供了本公开的抗体或其抗原结合片段的变体，其具有提高的对CD300c抗原的亲和力。这些变体可通过许多亲和力成熟方案获得，包括CDR突变(Yang等人，J.Mol.Biol.,254,392-403,1995)；链改组(Marks等人，Bio/Technology,10,779-783,1992)；使用大肠杆菌的诱变菌株(Low等人，J.Mol.Biol.,250,359-368,1996)；DNA改组(Patten等人，Curr.Opin.Biotechnol.,8,724-733,1997)；噬菌体展示(Thompson等人，J.Mol.Biol.,256,77-88,1996)，和有性PCR(sexual PCR)(Crameri等人，Nature,391,288-291,1998)。Vaughan等人(Science,239,1534-1536,1988)讨论了这些亲和力成熟的方法。

在一个实施方案中，抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段可具有物种间交叉反应性。具体地，抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段可对人和小鼠CD300c抗原均表现出交叉反应性。这种交叉反应性在实验实施例3.1-3.8中被鉴定。

在另一个实施方案中，抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段可包括抗体偶联药物的形式，其中抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段结合另一种药物，或可以这种形式提供。

如本文所用，术语“抗体偶联药物”指药物和抗体彼此化学连接而不降低抗体和药物的生物学活性的形式。在本公开中，抗体偶联药物表示药物与抗体重链和/或轻链的N末端的氨基酸残基结合的形式，具体地，药物与抗体重链和/或轻链的N末端的α-氨基结合的形式。

“药物”可以指对细胞(例如，癌细胞)具有某种生物活性的任何物质，这是包括DNA、RNA或肽的概念。药物可以是含有能够与α-氨基反应和交联的反应基团的形式，并且还包括含有能够与α-氨基反应和交联的反应基团并且接头与其连接的形式。

能够与α-氨基反应和交联的反应基团的类型没有特别限制，只要该反应基团能够与抗体重链或轻链N末端的α-氨基反应和交联。反应性基团包括本领域已知的与氨基反应的所有类型的基团。反应基团可以是，例如，异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、NHS酯、磺酰氯、醛、乙二醛、环氧化物、环氧乙烷、碳酸酯、芳基卤、亚氨酸酯、碳二亚胺、酸酐和氟苯基酯中的任何一种，但不限于此。

不论能够治疗由根据本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段靶向的疾病的药物类型如何，都含有所述药物，但可优选为抗癌剂。

本发明人鉴定抗CD300c抗体或其抗原结合片段可与至少一种其它抗癌剂组合显示增强的抗癌作用。因此，本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段可以与至少一种其他抗癌剂组合用于预防或治疗癌症。在一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段可与至少一种其它免疫治疗剂和/或至少一种化学治疗剂组合使用。在另一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段可与至少一种其它免疫治疗剂和至少一种化学治疗剂组合使用。

与免疫治疗剂的组合使用

免疫治疗剂具有一种新的机制，通过该机制体内的免疫细胞被活化以杀死癌细胞，因此免疫治疗剂的优点在于它们可以广泛用于大多数癌症而没有特定的基因突变。此外，免疫治疗剂具有较少的副作用，因为它们通过加强患者自身的免疫系统来治疗癌症，并且具有改善患者生活质量和显著延长生存期的作用。这些免疫治疗剂包括免疫检查点抑制剂，并且可以通过已知方法或商业上可获得的产品制造。免疫治疗剂的实例包括但不限于抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4、抗CD47、抗KIR、抗LAG3、抗CD137、抗OX40、抗CD276、抗CD27、抗GITR、抗TIM3、抗41BB、抗CD226、抗CD40、抗CD70、抗ICOS、抗CD40L、抗BTLA、抗TCR和抗TIGIT抗体。此外，免疫治疗剂的实例包括但不限于度伐鲁单抗(durvalumab(Imfinzi))、阿替利珠单抗(atezolizumab(Tecentriq))、阿维鲁单抗(avelumab(Bavencio))、帕博利珠单抗(pembrolizumab(Keytruda))、纳武单抗(nivolumab(Opdivo))、αCD47、西米普利单抗(cemiplimab(Libtayo))、莫洛利单抗(magrolimab(Hu5F9-G4)和伊匹单抗(ipilimumab(Yervoy))。

在一个实施方案中，免疫治疗剂可包括选自以下的至少一种：抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4、抗CD47、抗KIR、抗LAG3、抗CD137、抗OX40、抗CD276、抗CD27、抗GITR、抗TIM3、抗41BB、抗CD226、抗CD40、抗CD70、抗ICOS、抗CD40L、抗BTLA、抗TCR和抗TIGIT抗体。在一个实例中，免疫治疗剂可包括选自以下的至少一种：PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4和抗CD47抗体。

在另一个实施方案中，所述免疫治疗剂可包括选自以下的至少一种：度伐鲁单抗(durvalumab(Imfinzi))、阿替利珠单抗(atezolizumab(Tecentriq))、帕博利珠单抗(pembrolizumab(Keytruda))、纳武单抗(nivolumab(Opdivo))、αCD47和伊匹单抗(ipilimumab(Yervoy))。

与化学治疗剂组合使用

化学治疗剂是指癌症治疗剂，也称为细胞毒性抗癌剂或化学药物抗癌剂。这些化学治疗剂具有副作用，例如呕吐、脱发和白细胞减少，这是由于不仅攻击癌细胞而且攻击周围的正常细胞而引起的。因此，化学治疗剂不单独使用，而是与其它免疫治疗剂组合使用，当一起使用时，其显示出协同效应。这些化学治疗剂包括小分子治疗剂，并且可以是通过已知方法制造或商购的产品。化学治疗剂的实例可包括微管组装抑制剂、DNA嵌入剂或复制抑制剂、多激酶抑制剂、血管生成抑制剂、抗代谢物和紫杉醇，但不限于此。

在一个实施方案中，化学治疗剂可以包括选自微管组装抑制剂、DNA复制抑制剂、多激酶抑制剂和血管生成抑制剂的至少一种。

化学治疗剂的具体实例如表2所示。

表2

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然而，化学治疗剂不限于表2所示的抗癌剂，可以使用任何化学治疗剂，只要其通过与这些化学治疗剂相同或相似的作用机制发挥相同或相似的作用。

在另一个实施方案中，化学治疗剂可以包括选自索拉非尼、吉西他滨和紫杉醇的至少一种。

剂量

抗CD300c抗体或其抗原结合片段和另外的抗癌剂(例如，免疫治疗剂或化学治疗剂)的有效量或有效无毒量可通过常规实验确定。例如，抗体或抗癌剂的治疗活性量可根据例如以下因素而变化：疾病的阶段、疾病的严重程度、个体的年龄、性别、医学并发症和体重，以及组分在个体中引起期望的反应的能力，以及同时使用的抗癌剂的剂量。可调节抗CD300c抗体或其抗原结合片段和另外的抗癌剂各自的剂量和给药方案以提供最佳治疗应答。例如，可以每天、每周、每两周、每三周、每四周等施用若干份剂量，和/或剂量可以根据治疗情况的紧迫性成比例地减少或增加。

癌症的预防或治疗方法

根据本公开的一个方面，提供了一种用于预防或治疗癌症、减轻或降低癌症的至少一种症状或体征的严重性、抑制转移或抑制癌症生长的方法。如本文所用，“预防或治疗癌症”可包括抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌剂抗性。这种方法包括组合使用抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂。具体地，该方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的抗CD300c抗体或其抗原结合片段和治疗有效量的至少一种另外的抗癌剂。所述至少一种另外的抗癌剂可以包括至少一种免疫治疗剂、至少一种化学治疗剂，或至少一种免疫治疗剂和至少一种化学治疗剂。

术语“癌症”是指哺乳动物中通常以不受控制的细胞生长为特征的生理状况。根据发生部位，本公开中待预防或治疗的癌症可包括结直肠癌、小肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、内分泌腺癌、口腔癌、舌癌、咽癌、喉癌、食道癌、宫颈癌、子宫癌、输卵管癌、卵巢癌、脑癌、头颈癌、肺癌、淋巴腺癌、胆囊癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌(或黑色素瘤)、乳腺癌、胃癌、骨癌、血癌等。然而，任何癌症都可包括在其中，只要它在癌细胞表面表达CD300c蛋白。在一个实施方案中，所述癌症可包括选自以下的至少一种：结直肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、口腔癌、咽癌、喉癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、舌癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、骨癌和血癌。在另一个实施方案中，癌症可以是实体癌。

在一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂可同时或顺序施用。

“顺序施用”是指首先施用一种成分，在第一次施用后立即或以预定间隔施用另一种成分，其中所述成分可以以任何顺序施用。即，可首先施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段，可在第一次施用后立即或以预定的间隔施用至少一种另外的抗癌剂，反之亦然。此外，可首先施用至少一种另外的抗癌剂中的任一种，然后施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段，然后施用至少一种另外的抗癌剂中的另一种。

在一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段可与两种或更多种另外的抗癌剂组合施用。在一个实例中，鉴定了当抗CD300c抗体或其抗原结合片段与两种免疫治疗剂(例如，抗PD-L1抗体和抗PD-1抗体，或抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体)组合使用时，观察到最高的癌细胞增殖抑制作用。

根据本公开的抗体或其抗原结合片段中的每一种和至少一种另外的抗癌剂可以以多种方式施用，这取决于是需要局部治疗还是全身治疗以及待治疗的区域。将这些成分施用于个体的方法可以根据施用目的、疾病部位、个体的状况等而变化。施用途径可以是口服、肠胃外、吸入、原位或局部(例如，病灶内施用)。例如，肠胃外施用可包括但不限于静脉内、皮下、腹膜内、肺内、动脉内、肌内、直肠、阴道、关节内、前列腺内、鼻内、眼内、膀胱内、鞘内或心室内施用(例如，脑室内施用)。此外，抗CD300c抗体和另外的抗癌剂可通过相同途径或相互不同的途径施用。

在该方法中，根据本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种其它癌症试剂中的每一种的有效量可根据个体(患者)的年龄、性别和体重而变化。通常，可以以每kg体重约0.01mg至约100mg或约5mg至约50mg的量进行施用。该量可以一天一次或一天几次以分剂量施用。然而，根据施用途径和时间、疾病的严重程度、性别、体重、年龄等，可以增加或减少有效量。因此，本公开的范围不限于此。

根据本发明的方法可包括预先鉴定来自个体的CD300c蛋白的表达水平。根据表达水平，可确定是否施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段。

在一个实施方案中，所述方法还可包括在施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段之前，基于个体的生物样品或数据来鉴定CD300c蛋白的表达水平。

此外，该方法可包括当基于个体的生物样品或数据确定的CD300c蛋白的表达水平在统计学上显著高于(例如，至少高10％)对照组(例如，未患癌症的正常人的表达水平或癌症患者的平均表达水平)时，确定个体适于使用抗CD300c抗体或其抗原结合片段治疗。然而，CD300c蛋白表达水平的示例性差异仅是一个实例，可为20％或更高、30％或更高、40％或更高、50％或更高、60％或更高、或70％或更高，但不限于此。优选地，对照组可以显示相同类型的癌症患者中的平均表达水平。在另一个实施方案中，根据本公开的方法可包括在向个体施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段之后，通过测量特异性标志物表达水平的变化来选择适于与抗CD300c抗体或其抗原结合片段组合使用的另外的免疫治疗剂。

具体地，该方法还可包括基于来自施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体的生物样品或数据，来确定选自下列标志物的至少一种标志物的表达水平：

Bst2、Cd40、Cd70、Cd86、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Cd206、Msr1、Arg1、Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Vcam1、Icam1、Gzma、Gzmb、Icos、Cd69、Ifng、Tnf、Cd1d1、Cd1d2、Cd38、Cxcr6、Xcr1、Tbx21、Stat1、Stat4、Cxcr3、IL-12b、IL-4、IL-6、IL-13、PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Ox40、Gitr、Hvem、CD27、CD28、Cma1、Timd4、Bcl6、Cxcl5和Ccl21a。

关于标志物的描述，参见表3。

表3

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在另一个实施方案中，该方法还可包括基于所确定的标志物表达水平选择另外的抗癌剂。具体地，标志物可包括但不限于PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Icos、Ox40、Gitr、Hvem、CD27和CD28。在另一个实施方案中，标志物可包括选自以下的至少一种：PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Icos、Ox40、Gitr、Hvem、CD27和CD28。在另一个实施方案中，标志物可包括选自以下的至少一种：PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3和Tim3。在另一个实施方案中，标志物可包括选自以下的至少一种：ICOS、Ox40、Gitr、Hvem、CD27和CD28。

这些标志物的表达水平的变化是指当将本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段施用于个体时观察到的影响肿瘤抑制作用的肿瘤/免疫相关标志物的变化。例如，标志物表达水平的变化可包括与免疫细胞(例如，树突细胞、巨噬细胞、T细胞、NKT细胞)活性相关的蛋白标志物或免疫检查点蛋白标志物、影响肿瘤增殖的肿瘤微环境(TME)蛋白标志物和与Th1和Th2应答相关的标志物的表达模式的变化。关于标志物的具体实例，参考如上所示的描述。通过这些表达模式的变化，可以预测患者将对药物作出应答的可能性，或者选择可以使抗癌效果最大化的抗癌剂，包括另一种免疫检查点抑制剂。此外，利用标志物使得确定患者是否能用抗体治疗成为可能。此外，可以监测药物的治疗效果。此外，可以提供治疗方法的信息，包括药物剂量、用途、组合治疗等。

根据本公开的一个实施方案，鉴定了当本发明的抗CD300c抗体或其抗原结合片段与另一种免疫检查点抑制剂(抗PD-L1抗体度伐鲁单抗(Imfinzi)、抗PD-1抗体纳武单抗(Opdivo)、抗PD-1抗体帕博利珠单抗(Keytruda)、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体(αCD47)中的至少一种)组合使用时，表现出增强的抗肿瘤效果，所述另一种免疫检查点抑制剂通过施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段后观察到的个体中标志物表达水平的变化来选择。

在又一个实施方案中，该方法还可包括基于确定的标志物表达水平确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性。标志物可包括但不限于vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、IL-6、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、CD27和CD28。优选地，标志物可包括选自以下的至少一种：vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、IL-6、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38和Cxcr6。另外，标志物可包括选自以下的至少一种：vegfa、pdgfrb、Col4a1和Hif1a。另外，标志物可以包括选自以下的至少一种：Bst2、CCL8和Xcl1。此外，标志物可包括CCR7、CD80或其组合。在另一个实施方案中，标志物可包括选自以下的至少一种：Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3和IL-6。

在又一个实施方案中，该方法还可包括当与未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比至少一种标志物的表达水平降低时，确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。例如，根据该方法，当与未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，在选自vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a和IL-6的至少一种标志物的表达水平降低时，可确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。具体地，表达水平的降低意味着统计学上显著的降低。表达水平的降低率可以包括但不限于约10％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高、或约100％或更高。

此外，该方法还可包括当与未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比至少一种标志物的表达水平提高时，确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。例如，根据该方法，当至少一种标志物的表达水平与施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比增加时，可确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异，所述至少一种标志物选自Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、Cd27和Cd28。具体地，表达水平的增加意味着统计学上显著的增加。表达水平的增加率可以包括但不限于约10％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高、或约100％或更高。

药物组合物

根据本公开的又一方面，提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包括抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂作为活性成分。

具体地，抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂可以预防或治疗有效量包含在组合物中。在一个实施方案中，另外的抗癌剂可以包括免疫治疗剂、化学治疗剂或其组合。所述药物组合物可以施用于个体以抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或抗癌剂抗性。

在一个实施方案中，抗CD300c抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂可各自配制并分别同时或顺序施用。

在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂可包含在相同的组合物中或分开地包含在单独的组合物中。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂可以分开包含在单独的组合物中。

为了制备本公开的药物组合物，抗体或其抗原结合片段和/或另外的抗癌剂可以与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合。药物组合物可以制备成冻干制剂或水溶液的形式。例如，参见文献[Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S.Pharmacopeia:National Formulary,Mack Publishing Company,Easton,PA(1984)]。

可接受的载体和/或赋形剂(包括稳定剂)在所用的剂量和浓度下对个体是无毒的，并且其实例可以包括但不限于缓冲剂(例如，磷酸盐、柠檬酸盐或有机酸)；抗氧化剂(例如，抗坏血酸或甲硫氨酸)；防腐剂(例如，十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六甲铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质(例如，血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；亲水性聚合物(例如，聚乙烯吡咯烷酮)；氨基酸(例如，甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸)；单糖、二糖和其它碳水化合物(例如，葡萄糖、甘露糖和糊精)；螯合剂(例如，EDTA)；糖(例如，蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇)；成盐反离子(例如，钠)；金属络合物(例如，Zn-蛋白络合物)；和(或)非离子表面活性剂(例如，TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG))。

本公开的药物组合物可以根据施用途径配制成本领域已知的合适形式。

如本文所用，术语“预防或治疗有效量”或“有效量”是指组合物中有效预防或治疗个体中癌症的活性成分的量。该量也足以以适用于医学治疗的合理的效益/风险比预防或治疗癌症，并且不引起副作用。有效量的水平可以根据患者的健康状况、疾病类型、疾病的严重程度、药物的活性、对药物的敏感性、施用方法、施用频率、施用途径和排泄速率、治疗持续时间、与其组合或同时使用的药物以及医学领域中公知的其它因素来确定。特别地，考虑到上述所有因素，施用允许达到最大效果而具有最小副作用或没有副作用的最小量是重要的，这可由本领域技术人员容易地确定。

具体地，本公开的药物组合物中的每种活性成分的有效量可以根据个体(患者)的年龄、性别和体重而变化。通常，每kg体重约0.01mg至约100mg，或约5mg至约50mg可以每天一次或以分开的剂量每天几次施用。然而，本公开的范围不限于此，因为有效量可以根据施用途径和持续时间、疾病的严重程度、性别、体重、年龄等而增加或减少。

用于预防或治疗癌症的试剂盒

根据本发明的另一方面，提供了一种用于预防或治疗癌症的试剂盒，该试剂盒包括作为第一活性成分的根据本发明的抗CD300c抗体或其抗原结合片段和作为第二活性成分的另外的抗癌剂。

在一个实施方案中，第一活性成分和第二活性成分可以混合和配制，然后置于同一容器中。在另一个实施方案中，第一活性成分和第二活性成分可以单独配制，然后置于同一容器中或分开的容器中，并且可以同时施用或以时间间隔先后施用，而不考虑顺序。

在一个实施方案中，试剂盒还可包括含有药物的说明书或活性成分的施用说明书。任选地，试剂盒中可以包括施用每种活性成分所需的仪器或装置。

还提供了用于预防或治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包括：(i)含有根据本公开的抗CD300c抗体或其抗原结合片段的组合物；和(ii)指导所述抗体或其抗原结合片段与至少一种另外的抗癌剂组合使用的说明书。具体地，该组合物可含有预防或治疗有效量的抗CD300c抗体或抗原结合片段。

用于预测治疗应答性的方法和试剂盒

根据本公开的又一个方面，提供了一种用于提供预测抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性所需的信息的方法。该方法可包括基于从个体获得的生物样品或数据来确定用于预测治疗应答性的标志物的表达水平。所述标志物可包括选自以下的至少一种：Bst2、Cd40、Cd70、Cd86、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Cd206、Msr1、Arg1、Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Vcam1、Icam1、Gzma、Gzmb、Icos、Cd69、Ifng、Tnf、Cd1d1、Cd1d2、Cd38、Cxcr6、Xcr1、Tbx21、Stat1、Stat4、Cxcr3、IL-12b、IL-4、IL-6、IL-13、PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Ox40、Gitr、Hvem、CD27、CD28、Cma1、Timd4、Bcl6、Cxcl5和Ccl21a，但不限于此。在一个实施方案中，标志物可以包括选自以下的至少一种：Bst2、Cd40、Cd70、Cd86、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Cd206、Msr1、Arg1、Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Vcam1、Icam1、Gzma、Gzmb、Icos、Cd69、Ifng、Tnf、Cd1d1、Cd1d2、Cd38、Cxcr6、Xcr1、Tbx21、Stat1、Stat4、Cxcr3、IL-12b、IL-4、IL-6、IL-13、PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Ox40、Gitr、Hvem、CD27、CD28、Cma1、Timd4、Bcl6、Cxcl5和Ccl21a。在另一个实施方案中，标志物可以包括选自以下的至少一种：vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、IL-6、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、CD27和CD28。

此外，该方法还可包括当上述标志物中至少一种标志物的表达水平与对照组例如未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比降低时，确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。在一个实施方案中，根据该方法，当与对照组例如未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，选自vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a和IL-6的至少一种标志物的表达水平降低时，可确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。具体地，表达水平的降低是指统计学上显著的降低，并且表达水平降低率可以包括但不限于至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％和至少约100％。

此外，该方法还可包括当上述标志物中至少一种标志物的表达水平与对照组例如未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比增加时，确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。在一个实施方案中，根据该方法，当与未施用抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，选自Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、Cd27和Cd28的至少一种标志物的表达水平增加时，可确定抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。具体地，表达水平的增加是指统计学上显著的增加，并且表达水平增加率可以包括但不限于至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％和至少约100％。

根据本发明的另一个方面，提供了一种试剂盒，该试剂盒包括一种物质，该物质用于测量用于预测抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性的标志物的表达水平。试剂盒可以包括一种或多种类型的适于分析方法的组成组合物、溶液或装置。试剂盒可以是用于测量蛋白质标志物表达水平的试剂盒，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。试剂盒可以包括本领域已知的抗体免疫学检测所必需的其它试剂。

提供用于预防或治疗癌症的信息的方法和试剂盒

根据本发明再一方面，提供了一种提供预防或治疗癌症的信息的方法，该方法包括基于从需要预防或治疗癌症的个体获得的生物样品或数据来确定CD300c蛋白的表达水平。

在一个实施方案中，该方法还可包括比较测量的CD300c蛋白表达水平与对照组中的表达水平(在正常人中的表达水平或在癌症患者中的平均表达水平)。具体而言，当CD300c蛋白的表达水平与对照组相比统计学显著更高，例如高1.1倍或更多、1.2倍或更多、1.3倍或更多、1.4倍或更多、或1.5倍或更多时，可确定个体适于使用抗CD300c抗体或其抗原结合片段预防或治疗癌症。然而，表达水平的差异不限于此。

预防或治疗癌症的信息可包括关于与CD300c蛋白相关的治疗剂(例如，抗CD300c抗体或其抗原结合片段)的治疗应答性、治疗剂的选择、待治疗个体的选择、个体的预后和个体的生存期中的至少一种的信息。优选地，用于预防或治疗癌症的信息可包括抗CD300c抗体或其抗原结合片段的癌症治疗应答性、个体的生存期、或其两者。

根据本发明再一方面，提供了一种提供预防或治疗癌症的信息的试剂盒，该试剂盒包括一种物质，该物质用于通过使用获自需要预防或治疗癌症的个体的生物样品或数据来测量CD300c蛋白的表达水平。试剂盒可包括一种或多种类型的适于分析方法的组成组合物、溶液或装置。试剂盒可以是用于测量蛋白质标志物表达水平的试剂盒，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。试剂盒可以包括本领域已知的抗体免疫学检测所必需的其它试剂。

具体实施方式

在下文中，将通过实施例更详细地描述本公开。然而，以下实施例仅用于说明本公开，并且本公开的范围不限于此。

I.特异性结合CD300c的单克隆抗体

实施例1.抗CD300c单克隆抗体的产生

实施例1.1.抗CD300c单克隆抗体文库的构建

为了选择抗CD300c单克隆抗体，使用λ噬菌体文库、κ噬菌体文库、VH3VL1噬菌体文库和OPALT噬菌体文库进行生物淘选。更具体地，将CD300c抗原以5μg/mL的浓度加入到每个免疫管中，随后孵育1小时，以使抗原吸附在免疫管的表面上。此后，加入3％脱脂乳以抑制非特异性反应。然后，将分散在3％脱脂乳中的10¹²PFU的抗体噬菌体文库加入到每个免疫管中用于抗原结合。此后，通过用Tris缓冲盐水-Tween 20(TBST)溶液洗涤三次以除去非特异性结合的噬菌体，然后用100mM三乙胺溶液洗脱特异性结合CD300c抗原的单链可变片段(scFv)噬菌体抗体。用1.0M Tris-HCl缓冲液(pH 7.8)中和洗脱的噬菌体，然后用洗脱的噬菌体在37℃感染大肠杆菌ER2537 1小时。将感染的大肠杆菌涂布在含有羧苄青霉素的LB琼脂培养基上，37℃培养16小时。然后，将形成的大肠杆菌菌落悬浮在3mL超级肉汤(SB)-羧苄青霉素培养物中。将一些悬浮液加入15％甘油，保存在-80℃备用，将剩余部分再接种到SB-羧苄青霉素-2％葡萄糖溶液中，37℃培养，然后离心获得的培养物，用含有噬菌体颗粒的上清液再次重复生物淘选三次，以获得并浓缩抗原特异性抗体。

重复生物淘选三次后，将含有抗体基因的大肠杆菌涂布在含有羧苄青霉素的LB琼脂培养基上，37℃培养16小时。将形成的大肠杆菌菌落再次接种到SB-羧苄青霉素-2％葡萄糖溶液中，并在37℃培养直到吸光度(OD 600nm)达到0.5。然后，加入IPTG，在30℃下再培养16小时。然后进行周质提取。根据结果，初步获得了特异性结合CD300c抗原的抗体文库。

实施例1.2.抗CD300c单克隆抗体的选择

为了选择以高结合亲和力特异性结合CD300c抗原的抗CD300c单克隆抗体，使用以与实施例1.1相同的方法获得的文库池进行ELISA。更具体地，将包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.0)中的CD300c抗原和CD300a抗原的每一种以每孔5μg/mL的浓度分配到ELISA板中，随后在室温下孵育3小时，以便抗原结合到板上。通过用磷酸缓冲盐-Tween 20(PBST)洗涤三次除去未结合的抗原，然后向每个孔中加入350μL补充有2％牛血清白蛋白(BSA)的PBST，随后在室温下孵育1小时，然后用PBST再次洗涤。然后，向其中加入25μg以与实施例1.1相同方法获得的含有scFv的周质提取物，然后在室温下孵育1小时以进行抗原结合。1小时后，用PBST洗涤三次，除去未结合的scFv，然后加入4μg/mL检测用抗体，再次在室温下孵育1小时。随后，使用PBST除去未结合的检测用抗体，然后加入HRP偶联的抗兔IgG，随后在室温下孵育1小时。使用PBST再次除去未结合的抗体。随后，加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液，然后孵育10分钟进行显色。然后，加入2N硫酸溶液终止显色反应，在450nm测量吸光度以鉴定特异性结合CD300c抗原的抗体。

实施例1.3.抗CD300c单克隆抗体序列的鉴定

鉴定了使用与实施例1.2相同的方法选择的抗CD300c单克隆抗体的核苷酸序列。更具体地，对于每个选择的抗体克隆，使用质粒小量制备试剂盒从中提取质粒DNA。然后，进行DNA测序以分析互补决定区(CDR)序列。结果，获得25种具有不同氨基酸序列的抗CD300c单克隆抗体。这25种抗CD300c单克隆抗体的重链和轻链可变区显示在下表4和5中。

表4

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表5

在上述表4和5中提到的各图中，CDR区(CDR1、CDR2和CDR3)加了下划线并顺序出现(即，出现CDR1，随后是CDR2，然后是CDR3)。另外，各图所示的重链或轻链可变区中包含的CDR区如下表6所示的SEQ ID No中所列。

表6

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如上所述，鉴定了25种抗CD300c单克隆抗体，它们以高结合亲和力特异性结合CD300c抗原，可用于预防或治疗癌症。

实施例1.4.抗CD300c单克隆抗体的制备和纯化

通过使用实施例1.3中鉴定的抗CD300c单克隆抗体的各核苷酸序列，构建能够表达抗体的具有分开的重链和轻链的表达载体。更具体地，通过使用分析的CDR序列将基因插入pCIW3.3载体中构建表达载体，以使载体可分别表达重链和轻链。将构建的重链和轻链表达载体与聚乙烯亚胺(PEI)以1:1的质量比混合，转染到293T细胞中以诱导抗体表达。然后，在第8天，离心培养物以除去细胞，获得所得培养物。过滤获得的培养物，然后用0.1MNaH₂PO₄和0.1M Na₂HPO₄的混合溶液(pH 7.0)重悬。使用蛋白A磁珠(GE Healthcare)通过亲和层析纯化重悬的溶液，最后使用洗脱缓冲液(Thermofiser)洗脱。

为了鉴定产生的抗体，将5μg纯化的抗体加入还原样品缓冲液和非还原样品缓冲液，随后使用预先制备的SDS-PAGE(Invitrogen)进行电泳。然后，使用考马斯蓝对蛋白质进行染色。图2中示出了非还原条件下获得的结果，图3中示出了还原条件下获得的结果。

如图2和3所示，鉴定了高纯度的抗CD300c单克隆抗体的产生和纯化。

实验实施例1.CD300c在癌细胞和免疫细胞中的表达

实验实施例1.1.CD300c在癌细胞系中表达的鉴定

为了评价CD300c在各种癌细胞中是否表达，培养多种癌细胞系，如MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)，以评价CD300c在mRNA和蛋白水平的表达。另外，还评价了免疫细胞THP-1细胞(人单核细胞系)。具体地，HEK293T(正常细胞系)用作对照组。

同时，通过荧光标记的细胞的Western blot和流式细胞术(FACS)鉴定蛋白质的表达。具体地，用4％甲醛固定各培养的细胞系，然后用5％正常牛血清白蛋白封闭。然后，用0.5μg的eFluor660标记的抗CD300c抗体(Invitrogen)对细胞染色。随后，使用流式细胞术(FACS)鉴定荧光标记的细胞。

结果鉴定了CD300c抗原在各种癌细胞如结肠癌、肺癌和乳腺癌中在mRNA和蛋白水平表达。另外，如图4所示，使用流式细胞术(FACS)分析的结果表明，与正常细胞系(HEK293T)相比，在人肺癌细胞系(A549)和人单核细胞系(THP-1)中观察到显著高表达的CD300c。

实验实施例1.2.CD300c在癌组织和免疫细胞中的表达的鉴定(I)

为了鉴定患者癌组织中CD300c的表达，如下进行组织微阵列。用福尔马林固定结肠癌患者的组织并包埋在石蜡块中。然后，使用切片机将石蜡块切成直径为2.0mm、厚度为3至5μm的切片。然后，将切片以一定方向附着于载玻片，然后干燥。用H&E染色对癌组织进行染色，然后用抗CD300c抗体(Invitrogen)以1:500处理以对CD300c染色。结果如图5a所示，鉴定了CD300c在患者结肠癌组织中表达。

为了鉴定CD300c是否不仅在结肠癌患者的组织中表达，而且在癌组织内的免疫细胞中表达，通过皮下注射将2×10⁵CT26细胞移植到8周龄BALB/c小鼠中。在肿瘤移植后第25天(D25)，处死小鼠，从对照组的6只未施用抗CD300c抗体的小鼠收集肿瘤组织。将收集的肿瘤组织在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合溶液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液(来自Invitrogen)对细胞染色以检查细胞活力，以及用针对总巨噬细胞标志物F4/80(来自Abcam)、CD11b(来自Abcam)、CD11c(来自Abcam)、CD3(来自Abcam)、CD4(来自Thermofisher)和CD8(来自Thermofisher)的抗体和CD300c抗体(来自义翘神州)对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图5b所示，鉴定了表达CD300c的免疫细胞存在于小鼠肿瘤组织中。这些是表达CD11b和CD11c标志物的免疫细胞，其实例包括树突细胞和巨噬细胞。这些结果鉴定了CD300c在癌组织和免疫细胞中都表达。

实验实施例1.3.CD300c在癌组织和免疫细胞中表达的鉴定(II)

为了鉴定CD300c在人免疫组织和癌细胞中的表达，如下进行组织微阵列。将正常的扁桃体组织和结肠癌患者的组织用福尔马林固定并包埋在石蜡块中。随后，在正常扁桃体组织和结肠癌患者的组织中，确定进行组织微阵列的位置，然后使用切片机将每个石蜡块切成直径为2.0mm、厚度为3至5μm的切片。然后，将切片以一定方向附着于载玻片并干燥。用H&E染色对癌组织进行染色，然后用抗CD300c抗体(Invitrogen)以1:500处理以对CD300c染色。

结果如图6a和6b所示，鉴定了CD300c在患者的正常扁桃体组织(图6a)(其为免疫组织)和结肠癌组织(图6b)中表达。由于大量的免疫细胞如T细胞和单核细胞分布在扁桃体中，CD300c在扁桃体组织中的表达意味着CD300c在免疫细胞中表达。如实验实施例1.2，在该实验实施例中鉴定了CD300c在结肠癌患者的组织中表达；然而，该实验实施例是有意义的，因为在所有4位结肠癌患者的组织中观察到CD300c的表达，表明CD300c在大量结肠癌组织中表达。

实验实施例2.抗CD300c单克隆抗体识别CD300c抗原及其与CD300c抗原结合的鉴定

实验实施例2.1.抗CD300c单克隆抗体的抗原结合亲和力的鉴定

为了鉴定实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体的抗原结合能力，进行结合ELISA。具体地，将包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.0)中的CD300c抗原(11832-H08H，义翘神州)或CD300a抗原(12449-H08H，义翘神州)以每孔8μg/mL的浓度分配到ELISA板中，随后在室温下孵育3小时以使抗原结合到板上。通过用磷酸缓冲盐-Tween 20(PBST)洗涤三次以除去未结合的抗原，然后向每个孔中加入300μL补充有5％牛血清白蛋白(BSA)的PBST，随后在室温下孵育1小时，然后用PBST洗涤。然后，将抗CD300c单克隆抗体一式四份稀释并加入其中，然后在室温下孵育1小时以进行抗原结合。1小时后，用PBST洗涤三次以除去未结合的抗CD300c单克隆抗体，然后加入4μg/mL检测用抗体(HRP缀合的抗Fc IgG)，接着再次在室温下孵育1小时。接着，使用PBST除去未结合的检测用抗体，加入TMB溶液，孵育10分钟进行显色。然后，加入2N硫酸溶液终止显色反应，在450nm测量吸光度以鉴定特异性结合CD300c抗原的抗体。结果示于表7和图7中。

表7

CB301抗体	EC50(μg/mL)
		CK1	0.056
CK2	0.033
		CK3	0.793
CL4	0.031
		CL5	0.032
CL6	0.148
		CL7	0.047
CL8	49.7
		CL9	0.094
CL10	0.039
		SK11	0.052
SK12	0.067
		SK13	0.044
SK14	0.065
		SK15	14.74
SK16	2.42
		SK17	0.054
SL18	0.17

如表7所示，作为测量抗CD300c单克隆抗体的EC50(引起最大反应50％的药物有效浓度)值的结果，鉴定了除了4个克隆(CK3、CL8、SK15、SK16)外其余所有14个克隆显示高达0.2μg/mL或更低的结合亲和力，表明高结合亲和力。此外，如图7所示，根据结合ELISA的结果，鉴定到本发明的抗CD300c单克隆抗体以高结合亲和力结合CD300c抗原，即使在S形曲线中也是如此。

实验实施例2.2.抗CD300c单克隆抗体识别细胞抗原的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体(CL7)是否识别细胞抗原，进行FACS结合。

CD300c在293T细胞(ATCC)和THP-1细胞(ATCC)中过量表达，然后将各细胞以2×10⁵个细胞/管分配到各微量离心管中。然后，将细胞与抗CD300c单克隆抗体在CO₂培养箱中孵育30分钟，并用FACS缓冲液洗涤两次，其中所述单克隆抗体从10μg/mL开始连续稀释3倍。然后，将细胞与FITC-偶联的抗人IgG(H+L)在CO₂培养箱中孵育30分钟，并用FACS缓冲液洗涤两次，所述抗人IgG(H+L)在FACS缓冲液中以1:100稀释。接着，用贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter,Inc.)制造的CytoFLEX仪器测量FITC信号，然后使用CytExpert程序获得MFI值。使用所获得的MFI值，通过Sigmaplot程序绘制S形曲线以计算EC50(引起50％最大反应的药物有效浓度)。结果，获得293T细胞的EC50为2.7nM，获得THP-1细胞的EC50为2.6nM。

如图8所示，在FACS结合结果的S形曲线中，实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体以强结合亲和力与THP-1和293T细胞表面过表达的CD300c结合。因此，鉴定了抗CD300c单克隆抗体以抗原特异性方式结合CD300c。

实验实施例2.3.抗CD300c单克隆抗体对CD300c抗原的结合亲和力的鉴定(I)：结合ELISA

将CD300c抗原(250μg/mL)在包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.0)中稀释至800ng/mL的浓度，以100μL/孔置于96孔微孔板中，并在4℃下孵育过夜。第二天，用200μL PBST洗涤微孔板三次。然后，向其中加入200μL封闭缓冲液(5％脱脂乳)，然后在室温下封闭1小时。将抗CD300c单克隆抗体CL7在PBS中稀释至200μg/mL，通过使用Nanodrop(产品名：NanoDropOne/One，Thermofisher制造)测量来检查其浓度。随后，CL7用PBS从10μg/mL开始一式四份稀释，每次加入100μL，随后在室温下孵育1小时。孵育后，用200μl PBST洗涤微孔板三次。将二抗(缀合的抗Fc IgG)在封闭缓冲液中以1:10,000稀释，并以100μL加入，随后在室温下孵育1小时，然后用200μL PBST洗涤三次。随后，将TMB和过氧化氢以1:1混合，并以100μL/孔加入，随后在室温下孵育7至9分钟。然后，加入50μL的1N硫酸以终止显色，并使用酶标仪(产品名：Varioskan LUX)在450nm进行测量以获得结合亲和力结果。

结果如图9所示，鉴定了抗CD300c单克隆抗体以浓度依赖的方式结合CD300c，表明抗CD300c单克隆抗体对抗原CD300c具有优异的结合亲和力和特异性。

实验实施例2.4.抗CD300c单克隆抗体对CD300c抗原的结合亲和力的鉴定(II)：表面等离子体共振

为了鉴定抗原CD300c和抗CD300c单克隆抗体CL7之间的结合亲和力，进行了表面等离子体共振实验。

为了将CD300c固定在CMS芯片上，将5μg/mL的CD300c稀释在10mM乙酸盐缓冲液(pH5.5)中。然后，将流速全部设置为等于10mL/min，并且将目标RU分别设置为300RU。抗原被0.2M EDC和0.05M NHS的混合物活化，并用1M乙醇胺封闭以进行固定，使得CD300c的最终RU变成399.2RU。然后，将CL7在PBSP中稀释至浓度分别为0、0.195、0.39、0.78、1.56、3.125和6.25μg/mL。动力学/亲和力测试以240秒的结合时间、900秒的解离时间和30μL/min的流速进行。随后，使50mM NaOH以30μL/min的速率流动30秒以再生表面。

结果如图10所示，分析KD值为5.199E-10M，抗CD300c单克隆抗体的结合亲和力鉴定为0.52Nm，相当于亚纳摩尔水平。这表明抗CD300c单克隆抗体对抗原显示高结合亲和力。

实验实施例2.5.抗CD300c单克隆抗体对CD300c抗原结合特异性的鉴定(I)

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7仅特异性结合CD300c而不结合其它B7家族蛋白，进行了结合ELISA。更具体地，将包被缓冲液(0.1M碳酸钠，pH 9.0)中的CD300c抗原、CD300a抗原或其他七个B7家族蛋白抗原(PD-L1[B7-H1](义翘神州)、ICOS配体[B7-H2](义翘神州)、CD276[B7-H3](义翘神州)、B7-H4(义翘神州)、CD80[B7-1](义翘神州)、CD86[B7-2](义翘神州)、CD273[PD-L2](义翘神州))中的每一个以每孔8μg/mL的浓度包被在ELISA板上，然后通过在2℃至8℃下孵育过夜而结合到板上。通过用PBST洗涤三次除去未结合的抗原，然后向每个孔中加入300mL封闭缓冲液(5％脱脂乳的PBST溶液)。随后，在室温下封闭1小时，接着再次用PBST洗涤。然后，CL7用PBS一式四份稀释，室温下与抗原孵育1小时，与抗原结合1小时后，用PBST洗涤三次。然后，向其中加入在封闭缓冲液中稀释至4μg/mL的二抗(HRP缀合的抗Fc IgG)，然后在室温下孵育1小时。接着，用PBST除去未结合的检测用抗体，加入TMB溶液，孵育10分钟进行显色。然后，加入2N硫酸溶液终止显色反应，在450nm测量吸光度以鉴定特异性结合CD300c抗原的抗体。

结果如图11所示，鉴定了抗CD300c单克隆抗体仅特异性识别CD300c，而不结合其它类似的蛋白质。

实验实施例2.6.抗CD300c单克隆抗体对CD300c抗原结合特异性的鉴定(II)

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7对CD300c抗原的特异性，进一步鉴定了CL7是否表现出与已知拮抗CD300c抗原并具有与其相似的蛋白序列的CD300a抗原的交叉反应性。更具体地，CD300a抗原(来自义翘神州)以0.039μg/mL、0.63μg/mL和10μg/mL的浓度用于处理，然后通过与实验实施例2.1相同的方法进行结合ELISA。

结果如图12所示，鉴定了抗CD300c单克隆抗体不与CD300c以外的抗原结合，仅对CD300c抗原显示高结合特异性。

实验实施例3.通过施用抗CD300c单克隆抗体的抗癌作用的鉴定

实验实施例3.1.小鼠中分化为M1巨噬细胞能力的提高的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体是否能促进小鼠巨噬细胞分化为M1巨噬细胞，将小鼠巨噬细胞(Raw264.7)以1×10⁴细胞/孔的浓度分配到96孔板中，然后用10μg/mL CL7处理，接着孵育。然后，通过ELISA试剂盒(Human TNF-αQuantikine kit,R&D Systems)鉴定TNF-α的产量。结果如图13所示。

如图13所示，在用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组中鉴定到TNF-α的产生水平增加，表明抗CD300c单克隆抗体在小鼠中促进分化为M1巨噬细胞。

参照后面描述的实验实施例5.2，抗CD300c单克隆抗体也促进在人类中分化为M1巨噬细胞。因此可以看出，抗CD300c单克隆抗体在小鼠以及人中作用相同，因此具有促进分化为M1巨噬细胞的交叉反应性。

实验实施例3.2.肿瘤相关巨噬细胞(TAM)增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内条件下对肿瘤相关巨噬细胞的作用，通过皮下注射将2×10⁵细胞的结肠癌细胞系(CT26)移植到8周龄BALB/c小鼠中，制备同系小鼠肿瘤模型。动物的饲养和实验都在无特定病原体(SPF)的设备中进行。另外，在移植结肠癌细胞系12天后，分别向肿瘤大小为50mm³-100 mm³的小鼠施用抗CD300c单克隆抗体，而对于对照组，给小鼠注射相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。对小鼠腹膜内注射25mg/kg每种物质，每周两次，持续两周，共4次。在注射后第25天，处死小鼠，从CL7 25mg/kg施用组(与对照组相比，显示出最高的抗肿瘤效果)的六只小鼠中的每只收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液(来自Invitrogen)对细胞染色以检查细胞活力，以及用针对总巨噬细胞标志物F4/80和M1巨噬细胞标志物iNOS的抗体(来自Abcam)对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图14所示，鉴定了对于单独用抗CD300c单克隆抗体处理，M1型肿瘤相关巨噬细胞的表达水平在小鼠癌组织中增加。这意味着施用抗CD300c单克隆抗体增加了癌组织中的肿瘤相关巨噬细胞，从而抑制癌症生长。

实验实施例3.3.细胞毒性T细胞增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内条件下对CD8+ T细胞的作用，如实验实施例3.2制备同系小鼠肿瘤模型，并以相同浓度施用抗CD300c单克隆抗体。

在注射后第25天，处死小鼠，从CL7 25mg/kg施用组(与对照组相比，显示出最高的抗肿瘤效果)的六只小鼠中的每只收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液对细胞染色以检查细胞活力，以及用CD8+抗体(来自Abcam)和CD4+抗体(来自Abcam)对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图15所示，鉴定了对于单独用抗CD300c单克隆抗体处理，肿瘤中T细胞的数量增加。这意味着施用抗CD300c单克隆抗体增加了肿瘤内细胞毒性T细胞，从而显示癌症治疗效果。

实验实施例3.4.细胞毒性T细胞的肿瘤特异性增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7是否以肿瘤特异性方式增加CD8+ T细胞的数量，如实验实施例3.2制备同系小鼠肿瘤模型，并以相同浓度施用抗CD300c单克隆抗体。在注射后第25天，处死小鼠，从CL7 25mg/kg施用组(与对照组相比，显示出最高的抗肿瘤效果)的六只小鼠中的每只收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液对细胞染色以检查细胞活力，以及用AH1四聚体抗体(来自Abcam)对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图16所示，鉴定了对于单独用抗CD300c单克隆抗体处理，在CD8+ T细胞中作为CT26肿瘤标志物因子的AH1四聚体的表达增加，因此CD8+ T细胞的数量以肿瘤(CT26)特异性方式增加。这表明施用抗CD300c单克隆抗体增加了CD8+ T细胞靶向并抑制CT26癌细胞。

实验实施例3.5.细胞毒性T细胞活性的增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内条件下对CD8+ T细胞的作用，如实验实施例3.2制备同系小鼠肿瘤模型，并以相同浓度施用抗CD300c单克隆抗体。在注射后第25天，处死小鼠，从CL7 25mg/kg施用组(与对照组相比，其显示出最高的抗肿瘤效果)中的六只小鼠的每只小鼠收集脾脏。随后，通过ELISPOT试验测量IFN-g来鉴定结果。具体地，小鼠IFN-g ELISpot试剂盒购自R&D Systems(#EL485)，并且根据试剂盒的方案测量IFN-g。

结果如图17所示，鉴定了对于单独用抗CD300C单克隆抗体处理，IFN-g的表达增加。这表明单独施用抗CD300C单克隆抗体不仅导致CD8+ T细胞数量的增加(参见图15)，而且导致CD8+ T细胞活性的增加，从而以多种方式抑制癌症生长，以显示癌症治疗效果。

实验实施例3.6.细胞毒性T细胞相对于调节性T细胞的增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内对细胞毒性T细胞相对于调节性T细胞增加的作用，如实验实施例3.2制备同系小鼠肿瘤模型，并以相同浓度施用抗CD300c单克隆抗体。在注射后第25天，处死小鼠，从CL7 25mg/kg施用组(与对照组相比，显示出最高的抗肿瘤效果)的六只小鼠中的每只收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液对细胞染色以检查细胞活力，以及用针对Treg标志物蛋白CD25的抗体(来自义翘神州)和Foxp3的抗体(来自Abcam)、CD3+抗体和CD8+抗体对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图18所示，鉴定了对于单独用抗CD300C单克隆抗体处理，CD8+ T细胞相对于Treg T细胞增加。这意味着由于施用抗CD300C单克隆抗体引起的CD8+ T细胞数量增加，进一步抑制了癌症生长。

实验实施例3.7.对细胞毒性T细胞、调节性T细胞和肿瘤相关巨噬细胞的作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7对细胞毒性T细胞、调节性T细胞和肿瘤相关巨噬细胞的作用，进行了以下实验。如实验实施例3.2制备同系小鼠肿瘤模型。另外，在移植结肠癌细胞系12天后，向肿瘤大小为50mm³-100 mm³的小鼠施用抗CD300c单克隆抗体，而对于对照组，给小鼠注射相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。小鼠腹膜内注射25mg/kg，每周两次，持续两周，共4次。在注射后第25天，处死小鼠，从CL7 25mg/kg施用组(与对照组相比，显示出最高的抗肿瘤效果)的六只小鼠中的每只收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中，于37℃下孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色液对细胞染色以检查细胞活力，用CD8+ T细胞标志物CD8的抗体和CD4的抗体、Treg细胞标志物Foxp3的抗体和CD4的抗体、或针对总巨噬细胞标志物F4/80和M1巨噬细胞标志物iNOS的抗体(来自Abcam)对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。结果示于图19中。

如图19所示，鉴定了抗CD300c单克隆抗体(CL7)显著增加活化的CD8+ T细胞、抑制调节性T细胞和向M1表型复极化肿瘤相关巨噬细胞。

实验实施例3.8.小鼠中癌细胞生长抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7、CL10和SL18是否表现出抗癌作用，将CT26(小鼠结肠癌细胞系)以1×10⁴细胞/孔的浓度分配到96孔板中，用10μg/mL的单克隆抗体处理，然后孵育5天。然后，通过CCK-8检测进行细胞增殖测定。

如图20所示，鉴定了抗CD300c单克隆抗体分别发挥66％(CL7)、15％(CL10)、38％(SL18)的癌细胞增殖抑制作用，表明抗CD300c单克隆抗体在小鼠中显示癌症治疗作用。

参考后面描述的实验实施例6.2，可以看出抗CD300c单克隆抗体也在人体内表现出抗癌作用，因此对人和小鼠CD300c都具有交叉反应性。

实验实施例3.9.体内癌症生长抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内条件下的抗癌作用，通过皮下注射将2×10⁵细胞的结肠癌细胞系(CT26)移植到8周龄BALB/c小鼠中，以制备同系小鼠肿瘤模型。动物的饲养和实验都在SPF设备中进行。在结肠癌细胞系移植后第11天(D11)，分别向肿瘤大小为50mm³-100 mm³的小鼠施用1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg或25mg/kg的抗CD300c单克隆抗体，对于对照组，施用小鼠相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。具体地，向小鼠每周两次腹膜内注射各个剂量，持续两周(在D11、D14、D18和D21总共4次)。测量肿瘤体积25天。结果示于图21中。

如图21所示，鉴定了抗CD300c单克隆抗体CL7以剂量依赖方式延迟CT26结肠癌的生长。

实验实施例4.根据CD300c表达水平比较各种癌症患者的总生存期

根据CD300c表达水平的总生存期的比较通过使用从US TCGA(癌症基因组图谱)数据库获得的肾癌(530例)、胰腺癌(177例)和肝癌(370例)患者的数据进行。首先，根据CD300c表达水平的高和低将各癌症患者分类。通过与每种癌症类型的CD300c表达水平的平均值比较，将这些高和低水平分类。在肾癌患者中，394例具有低的CD300c表达水平，136例具有高CD300c表达水平。在胰腺癌患者中，57例具有低的CD300c表达水平，120例具有高的CD300c表达水平。在肝癌患者中，192例具有低的CD300c表达水平，178例具有高的CD300c表达水平。使用Kaplan-Meier方法分析根据每个癌症患者CD300c表达水平的总生存期。然后，通过使用对数秩检验比较具有高和低CD300c表达水平的患者之间的生存期。

结果如图22所示，鉴定了CD300c表达水平高的患者比CD300c表达水平低的患者的生存期更短，这表明考虑P值时有显著的结果。这些结果不仅意味着CD300c的表达与癌症患者的生存期高度相关，而且意味着CD300c的表达或活性的抑制可预期具有癌症治疗效果或生存期增加效果。

II.施用抗CD300c单克隆抗体引起的生物标志物表达的变化

实施例2.施用抗CD300c单克隆抗体引起免疫细胞相关标志物和肿瘤微环境相关标志物表达的变化

实施例2.1.Nanostring免疫谱

为了鉴定当向实体癌模型施用实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体(CL7)时免疫细胞和肿瘤微环境相关标志物表达的变化，通过皮下注射将2×10⁵细胞的结肠癌细胞系(CT26)移植到8周龄BALB/c小鼠中，以制备同系小鼠肿瘤模型。动物的饲养和实验都在无特定病原体(SPF)的设备中进行。另外，在移植结肠癌细胞系12天后，分别向肿瘤大小为50mm³-100mm³的小鼠施用抗CD300c单克隆抗体，而对于对照组，给小鼠注射相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。小鼠腹膜内注射25mg/kg，每周两次，持续两周，共4次。在注射后第25天，将小鼠安乐死以制备肿瘤组织。从中提取纯化RNA，通过Nanostring免疫谱鉴定树突状细胞标志物、巨噬细胞标志物、肿瘤微环境(TME)标志物、Th1应答标志物或Th2应答标志物的变化。

Nanostring免疫谱结果显示于图23中，结果表明施用抗CD300c单克隆抗体广泛重编程肿瘤免疫微环境。

此外，图24显示了与对照组相比，通过观察施用抗CD300c单克隆抗体引起的树突细胞标志物、巨噬细胞标志物、肿瘤微环境标志物、Th1应答标志物或Th2应答标志物的变化而获得的结果。如图24所示，鉴定了施用抗CD300c单克隆抗体导致树突细胞标志物的Bst2、CCL8和Xcl1的表达显著增加；M1巨噬细胞标志物CCR7和CD80表达显著增加；降低了帮助肿瘤微环境中的癌症生长的VEGFA、PDGFRb、Col4a1和Hif1a的表达；以及增加了鉴定Th1应答的标志物Tbx21、Stat1、Stat4、IFN-g和Cxcr3的表达。

实施例2.2.免疫检查点标志物表达的变化

根据实施例2.1获得的Nanostring免疫谱结果，鉴定了当向同系小鼠肿瘤模型施用抗CD300c单克隆抗体时，哪些免疫检查点标志物与对照组相比显示表达的显著差异。

结果如图25所示，鉴定了施用抗CD300c单克隆抗体导致作为抑制性免疫检查点(IC)的PD-1、CTLA-4和Lag3的表达增加，以及作为激动性IC的ICOS、OX40、Gitr、Cd27和Cd28的表达增加。

这些结果具有相当重要的意义，因为这些结果可提供关于当抗CD300c单克隆抗体和另外的免疫治疗剂组合施用以获得进一步增强的抗癌功效时需要选择哪种免疫检查点相关的免疫治疗剂的有用信息。

III.抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂的组合使用

实施例3.抗CD300c单克隆抗体(CL7)和免疫治疗剂的组合施用

将实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体(CL7)与另一种免疫治疗剂，例如抗PD-L1抗体和/>和抗PD-1抗体/>抗CD47抗体(αCD47)，或抗CTLA-4抗体组合使用，并获得结果。

各免疫治疗剂可从以下获得：Imfinzi(AstraZeneca)；Opdivo和抗CTLA-4抗体(Bristol Myers Squibb)；Keytruda(Merck Sharp&Dohme)；和抗CD47抗体(Abcam)。

实验实施例5.通过组合使用协同增加巨噬细胞活性的鉴定

实验实施例5.1.M1巨噬细胞增加的鉴定

为了通过细胞形态学鉴定当用实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体CL7和免疫治疗剂如作为抗PD-L1抗体的Imfinzi、作为抗PD-1抗体的Keytruda和抗CD47抗体(αCD47)单独或组合处理单核细胞时其分化为M1巨噬细胞的模式，分别用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂以10μg/mL单独或组合处理THP-1(人单核细胞系)。将细胞孵育48小时，然后在显微镜下观察细胞形态。

结果如图26所示，可以确定，与单独使用免疫治疗剂进行的处理相比，在使用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂进行的组合处理中，THP-1细胞的形态从悬浮细胞变为M1巨噬细胞形式的圆形粘附细胞。这些结果表明，通过用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂组合治疗进一步促进了单核细胞向M1巨噬细胞的分化。

实验实施例5.2.M1巨噬细胞标志物增加的鉴定

为了鉴定当用实施例1中产生的抗CD300c单克隆抗体CL7和免疫治疗剂如作为抗PD-L1抗体的Imfinzi、作为抗PD-1抗体的Opdivo、作为抗PD-1抗体的Keytruda、抗CD47抗体(αCD47)和抗CTLA-4抗体单独或组合处理细胞时单核细胞分化为M1巨噬细胞的诱导是否增加，将THP-1以1.5×10⁴细胞/孔分配到96孔板中，并分别用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂以10μg/mL单独或组合处理，然后孵育48小时，并使用ELISA试剂盒(Human TNF-αQuantikine kit,R&D Systems)测量肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1b和IL-8(它们是M1的分化标志物)的产生水平。

结果如图27所示，鉴定了当细胞用单独的抗CD300c单克隆抗体处理时，所有三种分化标志物的产生水平增加，尤其是IL-8的产生水平显著增加。如图28所示，鉴定到与单独用抗CD300c单克隆抗体处理细胞相比，当用抗CD300c单克隆抗体与Imfinzi、Opdivo、Keytruda和αCD47中至少一种的组合处理细胞时，作为M1巨噬细胞分化标志物的TNF-α的产生水平进一步增加。这些结果表明，与单独用抗CD300c单克隆抗体处理细胞相比，用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体和/或抗CD47抗体处理细胞时，有更多的单核细胞分化为M1巨噬细胞。

实验实施例5.3.M2巨噬细胞标志物减少的鉴定

为了鉴定当细胞用单独或组合的抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如Imfinzi、Opdivo、Keytruda、抗CTLA-4或αCD47处理时单核细胞分化为M2巨噬细胞的诱导是否降低，将MP-1以1.5×10⁴细胞/孔分配到96孔板中，并用320nM PMA预处理6小时。然后，用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂以10μg/mL单独或组合处理，与用20ng/mL的白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-13(IL-13)处理一起进行。然后孵育48小时。然后，用ELISA试剂盒(R&D Systems)测量M2巨噬细胞分化标志物IL-10和IL-12的产生水平。

结果鉴定了与单独用抗CD300c单克隆抗体处理相比，在用抗CD300c单克隆抗体和Imfinzi、Opdivo、Keytruda、和αCD47中至少一种组合处理中，IL-10和IL-12的产生水平进一步降低30％或更多。

实验实施例5.4.分化为M1巨噬细胞的能力增加的鉴定

为了鉴定当用抗CD300c单克隆抗体CL7与免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体组合处理细胞时，单核细胞向M1巨噬细胞的分化是否增加，检测了促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、IκB和NF-κB的信号，它们是M1巨噬细胞分化的代表性信号。具体地，将THP-1以8.8×10⁵细胞/孔分配到6孔板中，并用10μg/mL抗CD300c单克隆抗体、10μg/mL Imfinzi和/或10μg/mL Keytruda处理。对于对照组，用相同量的磷酸盐缓冲液(PBS)处理细胞。在细胞孵育48小时后，进行Western blotting以鉴定磷酸化的SAPK/JNK、磷酸化的ERK、用于MAPK信号的磷酸化的p38、用于NF-κB信号的磷酸化的NF-κB和用于IκB信号的磷酸化的IκB。结果示于图29-31中。

图29、30和31分别显示了通过鉴定MAPK、NF-κB和IκB的信号传导而获得的结果。鉴定了当用抗CD300c单克隆抗体与免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体组合处理THP-1时，与用抗CD300c单克隆抗体单独处理THP-1时相比，磷酸化MAPK、IκB和NF-κB的水平增加。这些结果表明，当用抗CD300-300c单克隆抗体与免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体组合处理THP-1时，与单独用抗CD300-300c单克隆抗体处理相THP-1比，显示分化为M1巨噬细胞的细胞信号传导增加。

实验实施例6.通过组合使用(体外)引起癌细胞抑制作用的(协同)增加的鉴定

实验实施例6.1.细胞凋亡信号的鉴定

鉴定了凋亡信号是否通过用抗CD300c单克隆抗体CL7和免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体组合治疗而增加。具体地，将A549以8×10⁵个细胞/孔分配到6孔板中，并用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体和10μg/mL的Imfinzi、Keytruda、Opdivo或抗CD47抗体单独或组合处理。细胞孵育48小时后，通过Westernblotting鉴定细胞凋亡信号或细胞周期信号。经切割的caspase-9、caspase-3、caspase-2和caspase-8被鉴定为凋亡信号的标志物，细胞周期蛋白D1、CDK2、p27kip1、CDK6、细胞周期蛋白D3、P21 Waf1、Cip1等被鉴定为细胞周期信号的标志物。

如图32所示，与单独用抗CD300c单克隆抗体处理相比，在用抗CD300c单克隆抗体和作为抗PD-1抗体的Imfinzi组合处理中凋亡信号增加；并且在用抗-CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体或抗-CD47抗体组合处理中，经切割的caspase9和p21水平增加，细胞周期蛋白D1水平降低。这些结果表明，与单独用抗CD300c单克隆抗体处理相比，用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体组合处理更好地诱导癌细胞的凋亡。

实验实施例6.2.癌细胞系生长抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7和免疫治疗剂组合施用对癌细胞生长抑制作用，使用A549(人肺癌细胞系)和MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)比较癌细胞生长抑制作用。具体地，在0％胎牛血清(FBS)条件下，将细胞以2×10⁴细胞/孔(A549)或3×10⁴细胞/孔(MDA-MB-231)分配到96孔板中，在0.1％胎牛血清条件下，将细胞以6×10³细胞/孔(A549)或1×10⁴细胞/孔(MDA-MB-231)分配到96孔板中。随后，用10μg/mL的抗CD300c单克隆抗体和Imfinzi单独或组合处理细胞，然后孵育5天。对于对照组，用相同量的磷酸盐缓冲液(PBS)处理细胞。然后，用CCK-8(DOJINDO)处理细胞，在OD 450nm测量吸光度。结果示于图33(A549)和图34(MDA-MB-231)中。

如图33所示，鉴定到，在0％FBS条件下，与对照组相比，A549细胞系在单独用抗CD300c单克隆抗体处理时细胞生长抑制作用高达17％，在用抗CD300c单克隆抗体和Imfinzi组合处理时细胞生长抑制作用高达34％。

如图34所示，观察到对于MDA-MB-231细胞系，在0.1％FBS条件下，与对照组相比，单独用抗CD300c单克隆抗体处理时癌细胞生长抑制作用高达19％，用抗CD300c单克隆抗体和抗CD47抗体组合处理时癌细胞生长抑制作用高达45％，用抗CD300c单克隆抗体、抗CD47抗体和Imfinzi组合处理时癌细胞生长抑制作用高达51％。观察到在0.1％FBS条件下，与对照组相比，单独用抗CD300c单克隆抗体处理的癌细胞生长抑制作用高达19％，用抗CD300c单克隆抗体和抗CD47抗体组合处理的癌细胞生长抑制作用高达22％，用抗CD300c单克隆抗体、抗CD47抗体和Imfinzi组合处理的癌细胞生长抑制作用高达32％。

这些结果表明，与单独用抗CD300c单克隆抗体治疗相比，在用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体组合治疗中癌细胞的生长被进一步抑制。

实验实施例7.通过组合使用引起体内抗癌作用的(协同)增加的鉴定(结肠癌小鼠模型)

实验实施例7.1.体内癌症生长抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在体内条件下的抗癌作用，通过皮下注射将2×10⁵细胞的结肠癌细胞系(CT26)移植到8周龄BALB/c小鼠中，以制备同系小鼠肿瘤模型。动物的饲养和实验都在SPF设备中进行。在结肠癌细胞系移植后的第12天(D12)，向肿瘤大小为50mm³-100 mm³的小鼠单独或组合施用抗CD300c单克隆抗体和购自BioXcell的抗PD-1抗体，而对于对照组，给小鼠施用相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。图35显示了实验方法的示意图，具体地，通过腹膜内注射对小鼠单独或组合注射各种抗体(CL7:10mg/kg；和抗PD-1抗体：10mg/kg)，每周两次，共两周(在D12、D15、D19和D22共4次)。测量肿瘤体积25天。结果示于图36中。

从图36中可以看出，鉴定了尽管与对照组相比，即使在单独施用抗CD300c单克隆抗体的实验组中癌症生长也受到抑制，但与单独使用抗CD300c单克隆抗体的治疗相比，在使用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体的组合治疗中更有效地抑制了癌症生长。

实验实施例7.2.体内肿瘤微环境中肿瘤浸润淋巴细胞的增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体对肿瘤微环境(TME)中的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的作用，在通过与实验实施例7.1中相同的方法进行的实验的第25天，将小鼠安乐死，并在血管内注射1％多聚甲醛(PFA)以进行灌注，然后获得癌组织。使用1％PFA固定获得的癌组织，并使用10％、20％和30％蔗糖溶液顺序脱水。将脱水的癌组织冷冻在OCT化合物(最佳切割温度化合物)中，然后使用冷冻切片机将癌组织切成50μm的厚度。在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合溶液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤以制备单细胞。为了抑制单细胞悬液中的非特异性反应，将细胞与CD16/32抗体(Invitrogen)孵育1小时，然后鉴定细胞活力，并将作为肿瘤浸润淋巴细胞标志物的CD8+ T细胞和CD31+癌血管细胞进行染色。

结果，鉴定了与单独施用抗CD300c单克隆抗体的实验组相比，在施用抗CD300c单克隆抗体以及抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体的实验组中，CD8+ T细胞增加。这些结果表明，与单独用抗CD300c单克隆抗体进行的治疗相比，在用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体组合治疗中，肿瘤浸润性淋巴细胞的数量增加，从而发挥抗癌作用。

实验实施例7.3.体内增加M1巨噬细胞的作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体是否增加小鼠模型癌组织中的M1巨噬细胞，用针对M1巨噬细胞标志物iNOS和M2巨噬细胞标志物CD206的抗体对通过与实验实施例7.2相同方法制备的癌组织切片进行染色，并通过FACS分析。

结果如图37所示，鉴定了与对照组相比，用抗PD-1抗体处理的实验组中巨噬细胞部分增加，而用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组中M1巨噬细胞显著增加，但几乎未观察到M2巨噬细胞。还鉴定了在组合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体的实验组中M1巨噬细胞进一步增加。这些结果表明，与单独用抗CD300c单克隆抗体治疗相比，用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体或抗CD47抗体组合治疗可有效促进分化为M1巨噬细胞。

实验实施例7.4.体内CD8+ T细胞免疫促进作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7是否促进小鼠肿瘤模型中的CD8+ T细胞免疫，在通过与实验实施例7.1相同的方法进行的实验的第25天，将小鼠安乐死，并血管内注射1％多聚甲醛(PFA)以进行灌注，然后获得癌组织。使用1％PFA固定获得的癌组织，并使用10％、20％和30％蔗糖溶液顺序脱水。将脱水的癌组织冷冻在OCT化合物中，然后使用冷冻切片机将癌组织切成50μm的厚度。然后，对组织的CD8+和Inos进行染色。

如图38所示，鉴定了与对照组相比，用抗PD-1抗体处理的实验组中CD8+ T细胞部分增加，而用抗CD300c单克隆抗体处理的实验组中CD8+ T细胞显著增加。还鉴定了与单独施用抗PD-1抗体的组相比，在组合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体的实验组中CD8+T细胞进一步增加。这些结果表明，在组合使用抗CD300c单克隆抗体和常规免疫治疗剂时，抗CD300c单克隆抗体更有效地增加了CD8+ T细胞的数量。

实验实施例7.5.体内免疫细胞活性的增加作用的鉴定

为了鉴定组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂是否提高免疫细胞的活性，通过与实验实施例7.1相同的方法从组合施用抗CD300c单克隆抗体与抗PD-1抗体、抗CTLA-4抗体、抗KIR抗体、抗LAG3抗体、抗CD137抗体、抗OX40抗体、抗CD276抗体、抗CD27抗体、抗GITR抗体、抗TIM3抗体、抗41BB抗体、抗CD226抗体、抗CD40抗体、抗CD70抗体、抗ICOS抗体、抗CD40L抗体、抗BTLA抗体、抗TCR抗体、抗TIGIT抗体或抗CD47抗体的小鼠获得脾脏。如实验实施例7.2所述，用能够检测T细胞活性和NKT细胞活性的各种标志物对获得的脾进行FACS染色，并通过MFI进行检查。

结果鉴定了组合施用抗CD300c单克隆抗体和上述免疫治疗剂增加了T细胞活化标志物Gzma、Icos、CD69和Ifng，并显著增加了NKT细胞活化标志物Cd11、CD38和cxcr6。这些结果表明，与单独用抗CD300c抗体治疗相比，在用抗CD300c抗体和免疫治疗剂组合治疗中，T细胞和NKT细胞进一步活化。

实验实施例7.6.体内Treg细胞抑制作用的鉴定

为了鉴定当实体癌模型组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体、抗KIR抗体、抗LAG3抗体、抗CD137抗体、抗OX40抗体、抗CD276抗体、抗CD27抗体、抗GITR抗体、抗TIM3抗体、抗41BB抗体、抗CD226抗体、抗CD40抗体、抗CD70抗体、抗ICOS抗体、抗CD40L抗体、抗BTLA抗体、抗TCR抗体、抗TIGIT抗体或抗CD47抗体时，引起免疫抑制应答的Treg细胞模式的变化，从通过与实验实施例7.2中相同的方法制备的脾组织中提取T细胞，并进行FACS以检测CD3+ T细胞中表达FOXP3的Treg细胞数量。

考虑到CD3+细胞中Treg细胞的比例，鉴定了与单独施用每种免疫治疗剂相比，在组合施用抗CD300c单克隆抗体和每种免疫治疗剂中Treg细胞的比例显著降低，表明攻击癌细胞的T细胞的活化被诱导。

实验实施例8.通过组合使用引起体内抗癌作用的(协同)增加的鉴定(黑色素瘤小鼠模型)

实施例8.1.体内癌症生长抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7在除CT26结肠癌小鼠模型之外的其它癌症中是否有效，用黑色素瘤小鼠模型进行了另外的实验。将7×10⁵的B16F10黑色素瘤细胞皮下注射移植到8周龄雄性C57BL/6小鼠中，以制备同系小鼠肿瘤模型。动物的饲养和实验都在SPF设备中进行。在黑色素瘤细胞系移植后第8天，给肿瘤大小为50mm³-100 mm³的小鼠腹膜内注射25mg/kg CL7、10mg/kgα-PD-1和4mg/kgα-CTLA4。图39显示了实验方法的示意图，更具体地，给小鼠注射抗CD300c单克隆抗体、抗PD-1抗体、抗CD300c单克隆抗体+抗PD-1抗体(组合)和抗CD300c单克隆抗体+抗PD-1抗体+抗CTLA-4抗体(三联)中的每种，每周两次，持续2周(共4次)，并且对于对照组，给小鼠注射相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。测量癌症尺寸20天。

结果如图40所示，鉴定了即使单独施用抗CD300c单克隆抗体也能抑制癌症生长，但组合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体+抗CTLA-4抗体的组中更有效地抑制了癌症生长。

实验实施例8.2.细胞毒性T细胞增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7与抗PD-1抗体和/或抗CTLA-4抗体在B16F10黑色素瘤模型中的组合使用对CD8+ T细胞的体内作用，如实验实施例8.1制备小鼠肿瘤模型，并注射相同浓度的各测试物质。

从每组中的六只小鼠收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液对细胞染色以检查细胞活力，以及用CD8+抗体和CD4+抗体对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图41所示，鉴定了与CT26癌模型(实验实施例3.3)中类似，通过组合施用抗-CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂(D组和T组)，甚至在B16F10黑色素瘤模型中，CD8+ T细胞的数量增加。具体地，D组表示CL7与抗PD-1抗体的组合使用，T组表示CL7、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体的组合使用。

实验实施例8.3.细胞毒性T细胞相对于调节性T细胞的增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7与抗PD-1抗体和/或抗CTLA-4抗体在B16F10黑色素瘤模型中组合使用对调节性T细胞的体内作用，如实验实施例8.1制备小鼠肿瘤模型，并注射相同浓度的各测试物质。实验组如下：(i)施用CL7的组，(ii)施用抗PD-1抗体的组，(iii)施用CL7和抗PD-1抗体的组(D组)，和(iv)施用CL7、抗PD-1抗体和抗CTLA4抗体的组(T组)。

从每组中的六只小鼠收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液对细胞染色以检查细胞生存力，以及用T针对reg标志物蛋白CD25和Foxp3的抗体、CD3+抗体和CD8+抗体对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

过组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂(D组和T组)，甚至在B16F10黑色素瘤模型中，CD8+ T细胞的数量相对于调节T细胞增加。具体地，D组表示CL7与抗PD-1抗体的组合使用，T组表示CL7、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体的组合使用。

实验实施例8.4.肿瘤相关巨噬细胞(TAM)增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7与抗PD-1抗体和/或抗CTLA-4抗体在B16F10黑色素瘤模型中的组合使用对巨噬细胞的体内作用，如实验实施例8.1制备小鼠肿瘤模型，并注射相同浓度的各测试物质。

从每组中的六只小鼠收集肿瘤组织。取出肿瘤组织，并在胶原酶D(20mg/mL)和DNase I(2mg/mL)的混合液中于37℃孵育1小时。然后，将所得产物通过70μm细胞过滤器过滤，接着裂解红细胞，然后再次通过尼龙网过滤。随后，用CD16/32抗体(来自Invitrogen)封闭单细胞悬浮液，并且用染色溶液对细胞染色以检查细胞生存力，以及用针对F4/80和iNOS的抗体对细胞染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果，如图43所示，鉴定了与CT26癌模型(实验实施例3.2)中类似，通过组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂(D组和T组)，甚至在B16F10黑色素瘤模型中，肿瘤相关M1型巨噬细胞的表达水平增加。具体地，D组表示CL7与抗PD-1抗体的组合使用，T组表示CL7、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体的组合使用。

图41、42和43中所示的结果具有以下含义。抗CD300c单克隆抗体CL7甚至在B16F10黑色素瘤小鼠模型中通过与在CT26结肠癌小鼠模型中相同的机制治疗癌症(图14、15和18)，因此可以预测组合施用CL7和免疫治疗剂在各种癌症中可发挥相同的作用。

实验实施例9.结直肠癌小鼠模型通过组合施用达到完全缓解的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7与抗PD-1抗体和/或抗CTLA-4抗体组合施用的体内抗癌作用，将2×10⁵CT26细胞皮下注射接种于8周龄BALB/c小鼠，以制备同系小鼠肿瘤模型。动物的饲养和实验都在SPF设备中进行。在结肠癌细胞系移植后第11天(D11)，向肿瘤大小为50mm³-100 mm³的小鼠单独或组合施用抗CD300c单克隆抗体、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体，它们各自购自BioXcell，对于对照组，给小鼠注射相同量的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。具体地，在D11、D14和D18，通过腹膜内注射对小鼠单独或组合注射各抗体(CL7:25mg/kg；抗PD-1抗体：10mg/kg；抗CTLA-4抗体：4mg/kg)，并测量肿瘤体积。

结果如图44a所示，鉴定了与对照组相比，甚至在单独施用抗CD300c单克隆抗体的实验组中癌症的生长也被抑制，且与单独使用抗CD300c单克隆抗体的治疗相比，在使用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体或抗CTLA-4抗体的组合治疗中癌症的生长被进一步抑制。特别地，CL7+αPD-1+αCTLA-4的三联组合施用使肿瘤大小降低90％。

此外，如图44b所示，组合施用(抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体)实现50％的完全缓解(CR)，三联组合施用(抗CD300c单克隆抗体+抗PD-1抗体+抗CTLA-4抗体)实现70％的完全缓解(CR)，表明组合施用产生优异的抗癌效果。

实验实施例10.通过组合施用提高的长期生存率的鉴定

在实验实施例9中测试的小鼠中鉴定了长期生存率。结果如图45所示，鉴定了与单独用抗CD300c单克隆抗体治疗相比，在用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂如抗PD-1抗体或抗CTLA-4抗体组合治疗中长期生存率也增加。

实验实施例11.通过组合施用的癌症复发预防作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL7和免疫治疗剂组合施用的体内癌症复发预防作用，通过皮下注射将2×10⁵细胞的结肠癌细胞系(CT26)移植到8周龄BALB/c小鼠中，以制备同系小鼠肿瘤模型，然后如实验实施例9所述进行实验，获得完全缓解的小鼠。将这样获得的小鼠再次移植2×10⁵个细胞的结肠癌细胞系(CT26)，观察30天。

结果如图46所示，鉴定了在通过组合施用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂实现完全缓解的组中没有发生癌症复发或转移。通过组合施用抗CD300c单克隆抗体和抗PD-1抗体(CL7+αPD-1；组合)或三联组合施用抗CD300c单克隆抗体、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体(CL7+αPD-1+αCTLA-4；三联)而实现完全缓解的个体，通过连续的免疫记忆具有全身性保护性免疫应答，从而预测该个体中癌症复发或转移得到抑制。

实验实施例12.通过组合施用的免疫记忆效应的鉴定

为了分析实验实施例11中已经完全缓解的小鼠中的效应记忆T细胞，处死小鼠并从其中收集脾脏。然后，从中获得脾脏细胞，并用CD44和CD62L(其是与T细胞活性相关的标志物)的抗体(来自Invitrogen)染色。然后，用CytoFLEX流式细胞仪读取数据，并用FlowJo软件分析。

结果如图47所示，鉴定到在用抗CD300c单克隆抗体和免疫治疗剂组合治疗中效应记忆T细胞显著增加。这表明，如实验实施例11所预测的，通过组合施用(组合)CL7和抗PD-1抗体或组合施用(三联)CL7、抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体，已经完全缓解的小鼠通过增加的效应记忆T细胞具有免疫记忆，因此即使形成了这类癌细胞，也可以抑制这些癌细胞的生长。

实施例4.抗CD300c单克隆抗体(CL10和SL18)和免疫治疗剂的组合施用

实施例1中制备的抗CD300c单克隆抗体(CL10和SL18)与其它免疫治疗剂例如抗PD-L1抗体Imfinzi，抗PD-1抗体Keytruda组合使用，观察结果。

各免疫治疗剂可从以下获得：Imfinzi(AstraZeneca)；和Keytruda(Merck Sharp&Dohme)。

实验实施例14.分化为M1巨噬细胞分化能力增加的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL10或SL18是否能促进巨噬细胞分化为M1巨噬细胞，将1×10⁴/孔的THP-1细胞分配到96孔板中，然后用10μg/mL CL10或SL18处理。此外，为了鉴定根据CL10或SL18和免疫治疗剂组合处理的效果，用抗CD300c单克隆抗体与Imfinzi和/或Keytruda以10μg/mL组合处理THP-1细胞。随后，将细胞在CO₂培养箱中孵育48小时，然后通过ELISA试剂盒(Human TNF-αQuantikine kit,R&D Systems)鉴定TNF-α的产生水平，TNF-α是M1巨噬细胞的分化标志物。结果示于图48a(CL10组合)和图48b(SL18组合)中。

如图48a和48b所示，鉴定了与单独用CL10或SL18处理THP-1细胞相比，当用CL10或SL18与Imfinzi或Keytruda组合处理THP-1细胞时，TNF-α的表达水平增加。特别地，鉴定了在CL10或SL18与两种抗体Imfinzi和Keytruda组合施用时TNF-α的表达水平最高。

实验实施例15.癌细胞增殖抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体CL10或SL18与免疫治疗剂组合施用的癌细胞生长抑制作用，使用A549(人肺癌细胞系)细胞比较了细胞生长抑制作用。具体地，在0％FBS条件下，将细胞以2×10⁴个细胞/孔分配到96孔板中，在0.1％FBS条件下，将细胞以6×10³个细胞/孔分配到96孔板中。然后，用CL10或SL18单独处理细胞，或用CL10或SL18与Imfinzi和/或Keytruda组合处理细胞，浓度各为10μg/mL，然后孵育5天。随后，用CCK-8(DOJINDO)以30μL/孔处理细胞，并在CO₂培养箱中孵育4小时，同时，每小时测量OD 450nm处的吸光度。结果示于图49a(CL10组合)和图49b(SL18组合)中。

如图49a和49b所示，鉴定了在0.1％FBS条件下，与单独用CL10或SL18处理A549细胞相比，当用CL10或SL18与Imfinzi或Keytruda组合处理A549细胞时，癌细胞增殖抑制作用进一步增加，并且当用CL10或SL18与两种抗体(Imfinzi和Keytruda)组合处理A549细胞时，癌细胞增殖抑制作用最高。

从实验实施例14和该实验实施例中可以看出，实施例1中产生的其它抗CD300c单克隆抗体，包括CL10和SL18，也表现出通过与CL7相同的作用机制的效力，并且通过与免疫治疗剂组合施用，抗CD300c单克隆抗体的效力与CL7一样得到提高。

IV.抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂的组合使用

实施例5.用于组合施用的各抗癌剂的适当浓度的确定

实施例5.1.索拉非尼

为了检测抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂索拉非尼组合治疗是否表现出癌细胞生长抑制作用，首先选择索拉非尼的治疗浓度。首先，将索拉非尼溶解在二甲亚砜中。在0％FBS培养基条件和0.1％FBS培养基条件下，将A549细胞以20,000个细胞/孔接种到96孔板中，然后用索拉非尼处理，索拉非尼被连续稀释到从高达180μM到低达0.02μM的浓度范围，然后孵育5天。孵育后，向各孔中加入10μL CCK-8(DOJINDO)，然后孵育4小时，在450nm处测量吸光度。结果示于图50中。

如图50所示，索拉非尼显示出浓度依赖性癌细胞生长抑制作用，并且在0％FBS培养基条件下，抗CD300c和索拉非尼组合治疗的最佳治疗浓度选择为9μM。

实施例5.2.吉西他滨

为了检测抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂吉西他滨组合治疗是否表现出癌细胞生长抑制作用，首先选择吉西他滨的治疗浓度。首先，将吉西他滨溶解在二甲亚砜中。在0％FBS培养基条件和0.1％FBS培养基条件下，将A549细胞以每孔20,000个细胞接种到96孔板中，然后用吉西他滨处理，吉西他滨被系列稀释到从高达450μM到低达0.07μM的浓度范围，接着孵育5天。孵育后，向各孔中加入10μL CCK-8(DOJINDO)，然后孵育4小时，在450nm处测量吸光度。结果示于图51中。

如图51所示，吉西他滨显示出浓度依赖性癌细胞生长抑制作用，并且在0％FBS培养基条件下，抗CD300c和吉西他滨组合治疗的最佳治疗浓度选择为1.9μM。

实施例5.3.紫杉醇

为了检测抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂紫杉醇的组合治疗是否表现出癌细胞生长抑制作用，首先选择紫杉醇的治疗浓度。首先，将紫杉醇溶解在三次蒸馏水(tertiary distilled water)中。在0％FBS培养基条件和0.1％FBS培养基条件下，将A549细胞以每孔20,000个细胞接种到96孔板中，然后用紫杉醇处理，紫杉醇被连续稀释到从高达225nM到低达0.02nM的浓度范围，然后孵育5天。孵育后，向各孔中加入10μL CCK-8(DOJINDO)，然后孵育4小时，在450nm处测量吸光度。结果示于图52中。

如图52所示，紫杉醇显示出浓度依赖性癌细胞生长抑制作用，在0％FBS培养基条件下，抗CD300c和紫杉醇组合治疗的最佳治疗浓度选择为5nM。

实验实施例16.抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂(体外)组合使用的抗癌作用

实验实施例16.1.抗CD300c单克隆抗体和索拉非尼组合治疗的癌细胞生长抑制作用的鉴定

为了鉴定用抗CD300c单克隆抗体和索拉非尼组合治疗的癌细胞生长抑制作用，使用A549(人肺癌细胞系)进行细胞增殖分析。将癌细胞以20,000接种到96孔板中，用10μg/mL抗CD300c单克隆抗体和9μM索拉非尼处理，然后孵育5天。孵育后，向各孔中加入10μLCCK-8(DOJINDO)，然后孵育4小时，在450nm处测量吸光度。结果示于图53中。

如图53所示，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗癌细胞生长抑制率为32％，单独用索拉非尼治疗为45％，但组合治疗显示癌细胞生长抑制率为77％，高于前两种方案。

实验实施例16.2.抗CD300c单克隆抗体和吉西他滨组合治疗对癌细胞生长抑制作用的鉴定

为了鉴定用抗CD300c单克隆抗体和吉西他滨组合治疗对癌细胞生长的抑制作用，使用A549(人肺癌细胞系)进行细胞增殖分析。用抗CD300抗体300c组合1.9μM吉西他滨处理细胞5天，然后向每个孔中加入10μL CCK-8(DOJINDO)，接着孵育4小时，在450nm测量吸光度。结果示于图54中。

如图54所示，单独使用抗CD300c单克隆抗体治疗的癌细胞生长抑制率为29％，单独使用吉西他滨治疗的癌细胞生长抑制率为38％，但组合治疗的癌细胞生长抑制率为57％，高于前两种方案。

实验实施例16.3.抗CD300c单克隆抗体和紫杉醇组合治疗对癌细胞生长抑制作用的鉴定

为了鉴定用抗CD300c单克隆抗体和紫杉醇组合治疗的癌细胞生长抑制作用，使用A549(人肺癌细胞系)进行细胞增殖分析。用抗CD300c单克隆抗体组合紫杉醇处理细胞，并孵育5天。然后，向每个孔中加入10μL CCK-8(DOJINDO)，随后孵育4小时，在450nm处测量吸光度。结果示于图55中。

如图55所示，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗癌细胞生长抑制率为29％，单独用紫杉醇治疗癌细胞生长抑制率为24％，但组合治疗显示癌细胞生长抑制率为39％，高于前两种方案。

实验实施例17.抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合治疗抑制癌细胞凋亡抗性

实验实施例17.1.抗CD300c单克隆抗体和索拉非尼组合治疗对癌细胞凋亡抗性的抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合治疗是否能抑制癌细胞凋亡抗性，使用了MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。将每种类型的癌细胞以1×10⁴/孔接种到96孔板中并孵育16小时。用抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合处理孵育的细胞8小时，然后用雷帕霉素处理48小时。使用膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)通过荧光分析鉴定癌细胞的生存程度。

结果，与hIgG1同种型对照组相比，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗的组的MFI增加17％，单独用索拉非尼治疗的组的MFI增加21％，但组合治疗组显示增加60％，表明组合治疗显著抑制了具有结肠癌、肺癌、乳腺癌等的各种细胞系中的癌细胞凋亡抗性。

实验实施例17.2.抗CD300c单克隆抗体与吉西他滨组合治疗抑制细胞凋亡能力的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体和吉西他滨组合治疗是否能抑制癌细胞凋亡抗性，使用了MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。将每种类型的癌细胞以1×10⁴/孔接种到96孔板中并孵育16小时。用抗CD300c单克隆抗体和吉西他滨组合处理孵育的细胞8小时，然后用雷帕霉素处理48小时。使用膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)通过荧光分析鉴定癌细胞的生存程度。

结果，与hIgG1同种型对照组相比，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗的组的MFI增加14％，单独用吉西他滨治疗的组的MFI增加21％，但组合治疗组显示增加60％，表明组合治疗显著抑制了结肠癌、肺癌、乳腺癌等多种细胞系中的癌细胞凋亡抗性。

实验实施例17.3.抗CD300c单克隆抗体与紫杉醇组合治疗对癌细胞凋亡抗性抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体和紫杉醇组合治疗是否能抑制癌细胞凋亡抗性，使用了MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。将每种类型的癌细胞以1×10⁴/孔接种到96孔板中并孵育16小时。用抗CD300c单克隆抗体和紫杉醇的组合处理孵育的细胞8小时，然后用雷帕霉素处理48小时。使用膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)通过荧光分析鉴定癌细胞的生存程度。

结果，与hIgG1同种型对照组相比，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗的组的MFI增加了16％，单独用紫杉醇治疗的组的MFI增加了19％，但组合治疗组显示49％，表明组合治疗显著抑制了结肠癌、肺癌、乳腺癌等多种细胞系中的癌细胞凋亡抗性。

实验实施例18.抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合治疗抑制癌细胞迁移/浸润

实验实施例18.1.抗CD300c单克隆抗体和索拉非尼组合治疗抑制癌细胞迁移/浸润

为了鉴定通过用抗CD300c单克隆抗体和索拉非尼组合治疗对癌细胞迁移/浸润抑制作用，使用MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。将癌细胞以1×10⁵接种到6孔板中并孵育16小时，然后通过用移液器吸头刮擦损伤每个孔。通过用培养基洗涤除去脱离的细胞，然后用抗CD300c单克隆抗体处理8小时。然后，进行24小时的观察。基于用移液管尖端刮擦形成的伤口面积，测量癌细胞的迁移距离，并且将该距离计算为百分比(％)以鉴定迁移抑制的程度。

结果，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗的组显示为27％，单独用索拉非尼治疗的组显示为32％，但组合治疗组显示为67％，表明组合治疗在结肠癌、肺癌、乳腺癌等各种细胞系中显著抑制了癌细胞的迁移和浸润。

实验实施例18.2.抗CD300c单克隆抗体和吉西他滨组合治疗抑制癌细胞迁移/浸润

为了鉴定通过用抗CD300c单克隆抗体和吉西他滨组合治疗的癌细胞迁移/侵袭抑制作用，使用MKN45、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。将癌细胞以1×10⁵接种到6孔板中个并孵育16小时，然后通过用移液器吸头刮擦损伤每个孔。通过用培养基洗涤除去脱离的细胞，然后用抗CD300c单克隆抗体处理8小时。然后，进行24小时的观察。基于用移液管尖端刮擦形成的伤口面积，测量癌细胞的迁移距离，并且将该距离计算为百分比(％)以鉴定迁移抑制的程度。

结果，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗的组显示为25％，单独用吉西他滨治疗的组显示为28％，但组合治疗组显示为60％，表明组合治疗在结肠癌、肺癌、乳腺癌等各种细胞系中显著抑制了癌细胞的迁移和浸润。

实验实施例18.3.抗CD300c单克隆抗体和紫杉醇组合治疗抑制癌细胞迁移/浸润

为了鉴定通过用抗CD300c单克隆抗体和紫杉醇组合治疗的癌细胞迁移/侵袭抑制作用，使用MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。将癌细胞以1×10⁵接种到6孔板中个并孵育16小时，然后通过用移液器吸头刮擦损伤每个孔。通过用培养基洗涤除去脱离的细胞，然后用抗CD300c单克隆抗体处理8小时。然后，进行24小时的观察。基于用移液管尖端刮擦形成的伤口面积，测量癌细胞的迁移距离，并且将该距离计算为百分比(％)以鉴定迁移抑制的程度。

结果，单独用抗CD300c单克隆抗体治疗的组显示25％，单独用紫杉醇治疗的组显示20％，但组合治疗组显示57％，表明组合治疗在结肠癌、肺癌、乳腺癌等各种细胞系中显著抑制了癌细胞的迁移和浸润。

实验实施例19.抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合治疗对癌细胞生长信号传导抑制作用的鉴定

为了鉴定抗CD300c单克隆抗体和每种化学治疗剂索拉非尼、吉西他滨和紫杉醇组合治疗对影响癌细胞生长的信号传导机制的影响，使用MKN45(人胃癌细胞系)、IM95(人胃癌细胞系)、HT-29(人结肠癌细胞系)、A549(人肺癌细胞系)、HCT116(人结肠癌细胞系)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞系)和HepG2(人肝癌细胞系)。用抗CD300c单克隆抗体和每种化学治疗剂的组合处理每种癌细胞系，研究了AKT和MAPK的磷酸化，其是下游信号传导的活化机制。

与单独用抗CD300c单克隆抗体或每种治疗剂处理的癌细胞相比，在用抗CD300c单克隆抗体和每种化学治疗剂处理的癌细胞中AKT和MAPKs蛋白的磷酸化被抑制，这表明用抗300c单克隆抗体和索拉非尼、吉西他滨和紫杉醇中的每一种组合处理可通过有效抑制癌细胞的生长信号传导机制来抑制癌细胞的生长。

实验实施例20.抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合治疗在小鼠中抗癌作用的鉴定

为了鉴定在体内条件下通过用抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂组合治疗的抗癌作用，通过将1×10⁶CT26细胞(小鼠结肠癌细胞系)皮下注射至人源化小鼠模型(huCD34-NSG小鼠)以制备人实体瘤异种移植模型。从施用于癌细胞后3天起，将小鼠分成单独施用25mg/kg抗CD300c单克隆抗体的组、施用化学治疗剂索拉非尼、吉西他滨和紫杉醇的组(各10mg/kg)、施用抗CD300c单克隆抗体和化学治疗剂的组和未施用的组。在抗CD300c单克隆抗体和每种化学治疗剂单独或组合腹膜内施用后，每周两次，总共四次，从小鼠分离实体瘤组织以测量其大小，从而鉴定单独的抗CD300c单克隆抗体的治疗效果和与现有化学治疗剂组合施用的效果。

结果，单独施用抗CD300c单克隆抗体的组的肿瘤抑制率为26％，在单独施用化学治疗剂的组中，索拉非尼的肿瘤抑制率为22％，吉西他滨的肿瘤抑制率为25％，紫杉醇的肿瘤抑制率为21％，但是组合施用组分别显示了50％、52％和61％的高肿瘤抑制率，表明组合治疗具有优异的癌细胞杀伤能力。通过单因素ANOVA分析，相应结果的p值被鉴定为0.05或更小，表明与单一治疗组中的肿瘤大小相比，每个组合治疗组中肿瘤大小的减小是显著的。

从上述结果可以看出，当本发明的抗CD300c单克隆抗体与化学治疗剂索拉非尼、吉西他滨和紫杉醇中的每一种组合时，显示了有利的效果，并且这种组合使用可以应用于各种个体。换句话说，在体内和体外都证实了用抗CD300c单克隆抗体和各化学治疗剂组合治疗可有效抑制癌细胞的生长、增殖、转移等，表明当与现有化学治疗剂组合使用时，抗CD300c单克隆抗体具有进一步增强的治疗效果，因此可有效用于免疫疗法。

统计处理

对于通过实验获得的结果，进行单因素ANOVA分析，随后进行Bonferroni事后检验，用于进行实验组之间的比较分析。当p值为0.05或更低时，组间差异显著。

<110> CentricsBio公司

<120> 使用抗CD300C抗体的组合疗法

<130> OPA23247

<150> KR 10-2021-0062311

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<160> 408

<170> KoPatentIn 3.0

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<220>

<223> CL4重链CDR3

<400> 39

cgcggcatgt ggggcatgga tgtgtgg 27

<210> 40

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链CDR1

<400> 40

ggcaaacatc ggcacaccgt gaactgg 27

<210> 41

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链CDR2

<400> 41

ctggatagcg aacgccctag cggcgtacct 30

<210> 42

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链CDR3

<400> 42

tatgatagca gcagcgtggt gtttggt 27

<210> 43

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4重链CDR1

<400> 43

Phe Thr Phe Gly Ser Asn Tyr Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 44

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4重链CDR2

<400> 44

Thr Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 45

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4重链CDR3

<400> 45

Tyr Cys Ala Arg Gly Met Trp Gly Met Asp Val Trp

1 5 10

<210> 46

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链CDR1

<400> 46

Cys Thr Gly Lys His Arg His Thr Val Asn Trp

1 5 10

<210> 47

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链CDR2

<400> 47

Leu Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 48

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链CDR3

<400> 48

Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Ser Val Val Phe

1 5 10

<210> 49

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链CDR1

<400> 49

accttcagca gctatgccat gcattgggtt cgc 33

<210> 50

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链CDR2

<400> 50

atcagcggcg gcggctatgg cacctattat gcc 33

<210> 51

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链CDR3

<400> 51

cgcagcaccg tgtgggcctt tgatatctgg 30

<210> 52

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链CDR1

<400> 52

ggcaacaaca tcggcagcaa aagcgtgcat 30

<210> 53

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链CDR2

<400> 53

gatgtgagca aacgccctag cgagcgtcct 30

<210> 54

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链CDR3

<400> 54

tttgatagca gcggcacctg gatctttggt 30

<210> 55

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链CDR1

<400> 55

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 56

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链CDR2

<400> 56

Ser Ile Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 57

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链CDR3

<400> 57

Tyr Cys Ala Arg Ser Thr Val Trp Ala Phe Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 58

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链CDR1

<400> 58

Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp

1 5 10

<210> 59

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链CDR2

<400> 59

Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Glu Arg Pro Asp

1 5 10

<210> 60

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链CDR3

<400> 60

Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Ser Ser Gly Thr Trp Ile Phe

1 5 10

<210> 61

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链CDR1

<400> 61

agcagctacg gtatgcattg ggtcaga 27

<210> 62

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链CDR2

<400> 62

gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac tacgcagac 39

<210> 63

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链CDR3

<400> 63

tgcgcagtca gtggtgcagg tcgtggtttc ttcgactact gggga 45

<210> 64

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链CDR1

<400> 64

tgcagcggta gcagcagcaa cattggtagc aactacgtg 39

<210> 65

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链CDR2

<400> 65

gacaacaagc gtcctagtgg tgtg 24

<210> 66

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链CDR3

<400> 66

tgcagcagct acactagcag cagcactgtg atc 33

<210> 67

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链CDR1

<400> 67

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 68

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链CDR2

<400> 68

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 69

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链CDR3

<400> 69

Tyr Cys Ala Val Ser Gly Ala Gly Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 70

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链CDR1

<400> 70

Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 71

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链CDR2

<400> 71

Glu Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 72

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链CDR3

<400> 72

Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Ile Phe

1 5 10

<210> 73

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链CDR1

<400> 73

agccgctacg caatgagctg ggtcaga 27

<210> 74

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链CDR2

<400> 74

gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac tacgcagac 39

<210> 75

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链CDR3

<400> 75

tgcgcacgta gcagccaggg tatcttcgac atctgggga 39

<210> 76

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链CDR1

<400> 76

tgcagtggta acaatatcgg tactagacgc gtg 33

<210> 77

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链CDR2

<400> 77

aagaacaacc gtcctagtgg tgtg 24

<210> 78

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链CDR3

<400> 78

tgcgcagcat gggacgacag cctgagcggt cctgtgttc 39

<210> 79

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链CDR1

<400> 79

Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 80

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链CDR2

<400> 80

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 81

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链CDR3

<400> 81

Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 82

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链CDR1

<400> 82

Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Thr Arg Arg Val His Trp

1 5 10

<210> 83

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链CDR2

<400> 83

Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 84

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链CDR3

<400> 84

Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe

1 5 10

<210> 85

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链CDR1

<400> 85

agcagctacg caatgagctg ggtcaga 27

<210> 86

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链CDR2

<400> 86

gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac tacgcagac 39

<210> 87

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链CDR3

<400> 87

tgcgcacgta gcggtcgtta cgcagacttg acatctgggg ga 42

<210> 88

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链CDR1

<400> 88

tgcagcggta gcaacagcaa catcggtaac aactacgtg 39

<210> 89

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链CDR2

<400> 89

aacaacaagc gtcctagtgg tgtg 24

<210> 90

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链CDR3

<400> 90

tgcagcagct acactagcag cagcactgtg atgttc 36

<210> 91

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链CDR1

<400> 91

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 92

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链CDR2

<400> 92

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 93

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链CDR3

<400> 93

Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Arg Tyr Ala Asp Leu Thr Ser Gly

1 5 10

<210> 94

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链CDR1

<400> 94

Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp

1 5 10 15

<210> 95

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链CDR2

<400> 95

Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 96

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链CDR3

<400> 96

Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Met Phe

1 5 10

<210> 97

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链CDR1

<400> 97

agcagctact actggagctg ggtcaga 27

<210> 98

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链CDR2

<400> 98

gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac tacgcagac 39

<210> 99

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链CDR3

<400> 99

tgcgcacgta tcgacgtgta cggtttcgac atctgggga 39

<210> 100

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链CDR1

<400> 100

tgcagcggta gcactagcaa catcggtact aactacgtg 39

<210> 101

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链CDR2

<400> 101

aacaacaacc gtcctagtgg tgtg 24

<210> 102

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链CDR3

<400> 102

tgccagactt gggacagcag cactgacgta gtg 33

<210> 103

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链CDR1

<400> 103

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 104

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链CDR2

<400> 104

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 105

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链CDR3

<400> 105

Tyr Cys Ala Arg Ile Asp Val Tyr Gly Phe Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 106

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链CDR1

<400> 106

Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn Tyr Val Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 107

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链CDR2

<400> 107

Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 108

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链CDR3

<400> 108

Tyr Cys Gln Thr Trp Asp Ser Ser Thr Asp Val Val Phe

1 5 10

<210> 109

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链CDR1

<400> 109

tcagcagcta cggtatgcat tgggtcagac a 31

<210> 110

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链CDR2

<400> 110

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 111

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链CDR3

<400> 111

actgcgcaag cggttacggt ctgatggacg tgtggggaca 40

<210> 112

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链CDR1

<400> 112

gctgcactcg tagcagcggt atcatcgcaa gcaactacgt gca 43

<210> 113

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链CDR2

<400> 113

cgcaacaacc agcgccctag tggtgtg 27

<210> 114

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链CDR3

<400> 114

actgcagcag ctacgcaggt aacaacaacc tggtgttcgg 40

<210> 115

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链CDR1

<400> 115

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 116

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链CDR2

<400> 116

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 117

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链CDR3

<400> 117

Tyr Cys Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp

1 5 10

<210> 118

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链CDR1

<400> 118

Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ile Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp

1 5 10 15

<210> 119

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链CDR2

<400> 119

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 120

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链CDR3

<400> 120

Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn Asn Leu Val Phe

1 5 10

<210> 121

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链CDR1

<400> 121

ttcagcacct atggcatgca ttgggttcgc 30

<210> 122

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链CDR2

<400> 122

agcgccatca gcggcagcgg cggcagcacc tattatgccg at 42

<210> 123

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链CDR3

<400> 123

tactgtgccc gcggcctgag cggccttgat tattgg 36

<210> 124

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链CDR1

<400> 124

tgccgctcca gccagggcat caccaactat ctggcctgg 39

<210> 125

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链CDR2

<400> 125

ctgatctatg atgccagcaa ccgcgccacc ggcatc 36

<210> 126

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链CDR3

<400> 126

tattattgtc agcagagcta tagcacccct ctgaccttcg gtcag 45

<210> 127

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链CDR1

<400> 127

Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 128

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链CDR2

<400> 128

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 129

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链CDR3

<400> 129

Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Ser Gly Leu Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 130

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链CDR1

<400> 130

Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr Leu Ala Trp

1 5 10

<210> 131

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链CDR2

<400> 131

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 132

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链CDR3

<400> 132

Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe

1 5 10

<210> 133

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链CDR1

<400> 133

ccttcagcag ctatgccatg cattgggttc gcca 34

<210> 134

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链CDR2

<400> 134

tgagcgccat cagcggcagc ggcggcgata cctatcatgc cgatagcgt 49

<210> 135

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链CDR3

<400> 135

actactgtac ccgcggcctg agcggctttg attattgggg 40

<210> 136

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链CDR1

<400> 136

catgccgcgc cagccagagc atcagcagct atctgaactg gta 43

<210> 137

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链CDR2

<400> 137

tgctgatcta tgatgccagc aaccgcgccc ctggcatccc 40

<210> 138

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链CDR3

<400> 138

tgtattattg tcagcagagc tatagcatcc ctatcacctt cggtcaggg 49

<210> 139

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链CDR1

<400> 139

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 140

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链CDR2

<400> 140

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asp Thr Tyr His Ala Asp

1 5 10

<210> 141

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链CDR3

<400> 141

Tyr Cys Thr Arg Gly Leu Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 142

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链CDR1

<400> 142

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp

1 5 10

<210> 143

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链CDR2

<400> 143

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 144

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链CDR3

<400> 144

Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Ile Thr Phe

1 5 10

<210> 145

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链CDR1

<400> 145

ttcagcgatt atgccatgag ctgggttcgc 30

<210> 146

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链CDR2

<400> 146

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<210> 147

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链CDR3

<400> 147

tactgtgccc gcggcggcta tggctttgat tattgg 36

<210> 148

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链CDR1

<400> 148

tgccgcgcca gccagagcat cagcagctat ctgaactgg 39

<210> 149

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链CDR2

<400> 149

ctgatctata gcgccagcag ccgcccacag ggcatc 36

<210> 150

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链CDR3

<400> 150

tattattgtc agcagtatga tgatctgcct tttaccttcg gtcag 45

<210> 151

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链CDR1

<400> 151

Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 152

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链CDR2

<400> 152

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Thr Asp

1 5 10

<210> 153

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链CDR3

<400> 153

Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 154

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链CDR1

<400> 154

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp

1 5 10

<210> 155

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链CDR2

<400> 155

Ser Ala Ser Ser Arg Pro Gln Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 156

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链CDR3

<400> 156

Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Phe Thr Phe

1 5 10

<210> 157

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链CDR1

<400> 157

ccttcagcaa ctttgcgatc gcctgggttc gcca 34

<210> 158

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链CDR2

<400> 158

gcgccatcag cggccgcggc accagcacct attatgccga tagcgt 46

<210> 159

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链CDR3

<400> 159

actactgtgc ccgcggcgtg agcggctttg atagctgggg 40

<210> 160

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链CDR1

<400> 160

catgccgcgc cagccagagc atcagcagcc atctggcctg gta 43

<210> 161

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链CDR2

<400> 161

tgctgatcta tgataccagc aaccgcgcca ccggcatccc 40

<210> 162

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链CDR3

<400> 162

tgtactattg tcagcagagc tatagcaccc cttttacctt cggtcaggg 49

<210> 163

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链CDR1

<400> 163

Phe Thr Phe Ser Asn Phe Ala Ile Ala Trp Val Arg

1 5 10

<210> 164

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链CDR2

<400> 164

Ala Ile Ser Gly Arg Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 165

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链CDR3

<400> 165

Tyr Cys Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp

1 5 10

<210> 166

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链CDR1

<400> 166

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His Leu Ala Trp

1 5 10

<210> 167

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链CDR2

<400> 167

Asp Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 168

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链CDR3

<400> 168

Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe

1 5 10

<210> 169

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链CDR1

<400> 169

ccttcagcag ctatgccatg cattgggttc gcca 34

<210> 170

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链CDR2

<400> 170

tgagcgccat caacggcagc ggcggcagca cctattatgc cgatagcgt 49

<210> 171

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链CDR3

<400> 171

actactgtgc ccgcggcctg cagggctttg attattgggg aca 43

<210> 172

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链CDR1

<400> 172

catgccaggc cagccaggat atcaccaact atctgaactg gta 43

<210> 173

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链CDR2

<400> 173

tgctgatcta tgatgccagc agcctggaaa ccggcatccc 40

<210> 174

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链CDR3

<400> 174

tgtattattg tcagcagagc tatagcaccc ctatcacctt cggtcaggg 49

<210> 175

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链CDR1

<400> 175

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 176

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链CDR2

<400> 176

Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 177

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链CDR3

<400> 177

Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Gln Gly Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 178

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链CDR1

<400> 178

Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn Trp

1 5 10

<210> 179

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链CDR2

<400> 179

Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 180

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链CDR3

<400> 180

Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe

1 5 10

<210> 181

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链CDR1

<400> 181

ccttcagcag ctatgccatg agctgggttc gcca 34

<210> 182

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链CDR2

<400> 182

tgagcgccat caacggcagc ggcggcagca ccctgtatgc cgatagcgt 49

<210> 183

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链CDR3

<400> 183

actactgtgc ccgcggcgtg agcggctttg atagctgggg 40

<210> 184

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链CDR1

<400> 184

catgccgcat cagccagagc atcagcagct atctgaactg gta 43

<210> 185

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链CDR2

<400> 185

tgctgatcta tgatgccagc ctgcgcgcca ccggcatccc 40

<210> 186

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链CDR3

<400> 186

tgtattattg tcagcagagc tataaaaccc ctatcacctt cggtcaggg 49

<210> 187

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链CDR1

<400> 187

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 188

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链CDR2

<400> 188

Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 189

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链CDR3

<400> 189

Tyr Cys Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp

1 5 10

<210> 190

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链CDR1

<400> 190

Cys Arg Ile Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp

1 5 10

<210> 191

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链CDR2

<400> 191

Asp Ala Ser Leu Arg Ala Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 192

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链CDR3

<400> 192

Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Thr Pro Ile Thr Phe

1 5 10

<210> 193

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链CDR1

<400> 193

ccttcagcag ctattattgg agctgggttc gcca 34

<210> 194

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链CDR2

<400> 194

tgagcaccat caccggcagc ggcggcagca ccgattatgc caacagcgt 49

<210> 195

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链CDR3

<400> 195

actactgtgc caccggcggc ggcatctttg actattgggg 40

<210> 196

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链CDR1

<400> 196

catgccaggc cagccagacc atcagcaact atctgaactg gta 43

<210> 197

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链CDR2

<400> 197

tgctgatcta tgatgccagc aaccgcgcca ccggcatccc 40

<210> 198

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链CDR3

<400> 198

tgtattattg tcagcagtac aacagctatc ctcctagctt cggtcaggg 49

<210> 199

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链CDR1

<400> 199

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 200

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链CDR2

<400> 200

Thr Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 201

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链CDR3

<400> 201

Tyr Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ile Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 202

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链CDR1

<400> 202

Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp

1 5 10

<210> 203

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链CDR2

<400> 203

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 204

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链CDR3

<400> 204

Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Ser Phe

1 5 10

<210> 205

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链CDR1

<400> 205

tcaccttcag cgattatcat atgcattggg ttcg 34

<210> 206

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链CDR2

<400> 206

tcagcagcag cggcggctat acctattatg ccga 34

<210> 207

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链CDR3

<400> 207

cccgatcgat acgcctgcct ctggattatt gggg 34

<210> 208

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链CDR1

<400> 208

gcggcaacaa catcggcagc aaaggcgtgc attggta 37

<210> 209

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链CDR2

<400> 209

atgaagatag caaacgccct agcggcgtgc gtga 34

<210> 210

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链CDR3

<400> 210

gctatgatag caccaaaggc gtggtgtttg gtgg 34

<210> 211

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链CDR1

<400> 211

Phe Thr Phe Ser Asp Tyr His Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 212

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链CDR2

<400> 212

Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu

1 5 10

<210> 213

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链CDR3

<400> 213

Tyr Cys Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 214

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链CDR1

<400> 214

Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His Trp

1 5 10

<210> 215

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链CDR2

<400> 215

Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Arg

1 5 10

<210> 216

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链CDR3

<400> 216

Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Thr Lys Gly Val Val Phe

1 5 10

<210> 217

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链CDR1

<400> 217

tcagcagcta cggtatgcat tgggtcagac aggc 34

<210> 218

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链CDR2

<400> 218

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 219

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链CDR3

<400> 219

actgcgtgcg tggttacggt gcaatggacg tgtggggaca 40

<210> 220

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR1

<400> 220

gctgcactcg tagcagcggt agcatcgcaa gcaactacgt gca 43

<210> 221

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR2

<400> 221

accgcaacaa ccagcgccct agtggtgtgc c 31

<210> 222

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR3

<400> 222

actgcagcag ctacactact agcagcactc tggtgttcgg 40

<210> 223

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链CDR1

<400> 223

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 224

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链CDR2

<400> 224

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 225

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链CDR3

<400> 225

Tyr Cys Val Arg Gly Tyr Gly Ala Met Asp Val Trp

1 5 10

<210> 226

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR1

<400> 226

Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln Trp

1 5 10 15

<210> 227

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR2

<400> 227

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 228

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链CDR3

<400> 228

Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser Ser Thr Leu Val Phe

1 5 10

<210> 229

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链CDR1

<400> 229

tcagcagcta cgcaatgcat tgggtcagac aggc 34

<210> 230

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链CDR2

<400> 230

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 231

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链CDR3

<400> 231

actgcgcaag cggctacggt ctgatggacg tatggggaca 40

<210> 232

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR1

<400> 232

gctgcactgg tactagcagc gacgtgggta actacaacct ggtgag 46

<210> 233

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR2

<400> 233

acagcaacaa ccagcgccct agtggtgtgc c 31

<210> 234

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR3

<400> 234

actgcagcag ctacactggt agcaacgctc tgttgttcgg 40

<210> 235

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链CDR1

<400> 235

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 236

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链CDR2

<400> 236

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 237

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链CDR3

<400> 237

Tyr Cys Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp

1 5 10

<210> 238

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR1

<400> 238

Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr Asn Leu Val Ser Trp

1 5 10 15

<210> 239

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR2

<400> 239

Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 240

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链CDR3

<400> 240

Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser Asn Ala Leu Leu Phe

1 5 10

<210> 241

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链CDR1

<400> 241

tcagcagcta cgcaatgagc tgggtcagac a 31

<210> 242

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链CDR2

<400> 242

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 243

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链CDR3

<400> 243

actgcgcacg ctggcattac agcttcgact actggggaca 40

<210> 244

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR1

<400> 244

gctgccgtgg taacaacatc ggtagcaagc gtgtgca 37

<210> 245

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR2

<400> 245

acagctacaa ccaccgtcct agcggtgtgc c 31

<210> 246

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR3

<400> 246

actgcaacac ttgggacgac agcctggagg gtcctgtgtt cgg 43

<210> 247

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链CDR1

<400> 247

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 248

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链CDR2

<400> 248

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 249

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链CDR3

<400> 249

Tyr Cys Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 250

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR1

<400> 250

Cys Arg Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val His Trp

1 5 10

<210> 251

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR2

<400> 251

Ser Tyr Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 252

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链CDR3

<400> 252

Tyr Cys Asn Thr Trp Asp Asp Ser Leu Glu Gly Pro Val Phe

1 5 10

<210> 253

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链CDR1

<400> 253

tcagcggcta cgcaatgagc tgggtcagac a 31

<210> 254

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链CDR2

<400> 254

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 255

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链CDR3

<400> 255

actgcgcacg tagtcctagc ggtctgttcg actactgggg aca 43

<210> 256

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR1

<400> 256

gctgcggtgg taacaacatc ggtagcaagc gtgtgca 37

<210> 257

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR2

<400> 257

acaacactag caacaagcat agcggtgtgc c 31

<210> 258

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR3

<400> 258

actgcagcag ctacctacag cagcactctc tgttcgg 37

<210> 259

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链CDR1

<400> 259

Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 260

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链CDR2

<400> 260

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 261

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链CDR3

<400> 261

Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Ser Gly Leu Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 262

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR1

<400> 262

Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val His Trp

1 5 10

<210> 263

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR2

<400> 263

Asn Thr Ser Asn Lys His Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 264

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链CDR3

<400> 264

Tyr Cys Ser Ser Tyr Leu Gln Gln His Ser Leu Phe

1 5 10

<210> 265

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链CDR1

<400> 265

agcagctacg caatgagctg ggtcagaca 29

<210> 266

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链CDR2

<400> 266

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 267

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链CDR3

<400> 267

actgcacacg tttcgtgggt gcaatcggtg cattcgacta ctggggaca 49

<210> 268

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR1

<400> 268

gctgcagtgg taacaacatc ggtagccgta gcgtgca 37

<210> 269

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR2

<400> 269

accgcaacaa ccagcgccct agtggtgtgc c 31

<210> 270

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR3

<400> 270

actgcgcagc atgggacgac agcctgagcg gtcctgtgtt cgg 43

<210> 271

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链CDR1

<400> 271

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 272

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链CDR2

<400> 272

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 273

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链CDR3

<400> 273

Tyr Cys Thr Arg Phe Val Gly Ala Ile Gly Ala Phe Asp Tyr Trp

1 5 10 15

<210> 274

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR1

<400> 274

Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Arg Ser Val His Trp

1 5 10

<210> 275

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR2

<400> 275

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 276

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链CDR3

<400> 276

Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe

1 5 10

<210> 277

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR1

<400> 277

tcagccatta cgcaatgagc tgggtcagac a 31

<210> 278

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR2

<400> 278

ctgcaattag cggtagcggt ggtagcactt actacgcaga cag 43

<210> 279

<211> 55

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR3

<400> 279

actgcgcacg tggttgggac agccctactc tgacatactt cgacagctgg ggaca 55

<210> 280

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR1

<400> 280

gctgcagcgg tactagcagc aacatcggta acaacgacgt gag 43

<210> 281

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR2

<400> 281

accaggacac taagcgtcct agcggtgtgc c 31

<210> 282

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR3

<400> 282

actgcgcagc atgggacgac agcctgagcg gtcctgtgtt cgg 43

<210> 283

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR1

<400> 283

Phe Thr Phe Ser His Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg

1 5 10

<210> 284

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR2

<400> 284

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 285

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链CDR3

<400> 285

Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Asp Ser Pro Thr Leu Thr Tyr Phe Asp Ser

1 5 10 15

Trp

<210> 286

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR1

<400> 286

Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Asp Val Ser Trp

1 5 10 15

<210> 287

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR2

<400> 287

Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 288

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链CDR3

<400> 288

Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe

1 5 10

<210> 289

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR1

<400> 289

agcagctacg gtatgcattg ggtcaga 27

<210> 290

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR2

<400> 290

gcaatcagcg gtagcggtgg ttacacttac tacgcagac 39

<210> 291

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR3

<400> 291

tgcgcacgct ggcattacag cttcgactac tgggga 36

<210> 292

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR1

<400> 292

tgcagcggta gcagcagcaa catcggtaac aactacgtg 39

<210> 293

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR2

<400> 293

cgcaacaacc agcgccctag tggtgtg 27

<210> 294

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR3

<400> 294

tgccagagct acgacaacag caacgtgctg ttc 33

<210> 295

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR1

<400> 295

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg

1 5 10

<210> 296

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR2

<400> 296

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp

1 5 10

<210> 297

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链CDR3

<400> 297

Tyr Cys Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 298

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR1

<400> 298

Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp

1 5 10 15

<210> 299

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR2

<400> 299

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro

1 5 10

<210> 300

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链CDR3

<400> 300

Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Asn Ser Asn Val Leu Phe

1 5 10

<210> 301

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1重链可变区

<400> 301

gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc cgctatgcca tgacctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atgagcggca ccggcggcac cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggtcg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgcc 300

tatggctttg atcattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348

<210> 302

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1轻链可变区

<400> 302

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcggc aactatctga actggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc tggaaaccgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agtagcgcca tcccttatac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 303

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1重链可变区

<400> 303

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Met Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Tyr Gly Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 304

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK1轻链可变区

<400> 304

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ala Ile Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 305

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK2重链可变区

<400> 305

gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatggca tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcaccag catctattat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcggc 300

accgcctttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348

<210> 306

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK2轻链可变区

<400> 306

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gcgccagcca gagatcagac aactatctgg cctggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc gcgccaccgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctatagca ccccttttac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaaccaa a 321

<210> 307

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK2重链可变区

<400> 307

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 308

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK2轻链可变区

<400> 308

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ser Asp Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Thr Lys

100 105

<210> 309

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK3重链可变区

<400> 309

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tcagctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc accagcggca gcggccgcgc cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc gcgcgatacc 300

tggtgggaag gctattttga tctgtgggga caaggtactc tggtgaccgt gagcagc 357

<210> 310

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CK3轻链可变区

<400> 310

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc aggccagcca tatcagcacc catctgaact ggtatcagca gaaaccaggt 120

caggctccac gtctgctgat ctatggcgcc agcagccgcg ccaccggcat ccctgatcgc 180

ttctcaggat ctggaagcgg taccgatttt accctgacca tcagccgcct ggaacctgag 240

gactttgccg tgtattattg tcagcagtat aacacctatc ctcctacctt cggtcagggc 300

actaaagtgg aaatcaaa 318

<210> 311

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK3重链可变区

<400> 311

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Thr Ser Gly Ser Gly Arg Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Thr Trp Trp Glu Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 312

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CK3轻链可变区

<400> 312

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ala Ser His Ile Ser Thr His Leu

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 313

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4重链可变区

<400> 313

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcggc agcaactata tgagctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcagcggca gcggcaccag cacctattat 180

gccgatagct tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcatg 300

tggggcatgg atgtgtgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348

<210> 314

<211> 312

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链可变区

<400> 314

cagagcgtgc tgacccagcc tcctagcgcc tccggtacac caggacagcg cgtgactatt 60

agctgtaccg gcaaacatcg gcacaccgtg aactggtacc agctactgcc tggaactgca 120

cctaagctgc tgatctatct ggatagcgaa cgccctagcg gcgtacctga tcgctttagc 180

ggtagcaaat caggcaccag cgccagcctg gccatcagcg gccttcgctc cgaagatgaa 240

gccgattatt attgtcagag ctatgatagc agcagcgtgg tgtttggtgg cggtaccaag 300

ctgaccgtgc tg 312

<210> 315

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4重链可变区

<400> 315

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Met Trp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 316

<211> 104

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL4轻链可变区

<400> 316

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Lys His Arg His Thr Val Asn Trp

20 25 30

Tyr Gln Leu Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Asp

35 40 45

Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser

50 55 60

Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu

65 70 75 80

Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Ser Val Val Phe Gly

85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100

<210> 317

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链可变区

<400> 317

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atcagcggcg gcggctatgg cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcagcacc 300

gtgtgggcct ttgatatctg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag c 351

<210> 318

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链可变区

<400> 318

cagagcgtgc tgacccagcc tcctagcgcc tccggtacac caggacagcg cgtgactatt 60

agctgtagcg gcaacaacat cggcagcaaa agcgtgcatt ggtaccagca actgcctgga 120

actgcaccta agctgctgat ctatgatgtg agcaaacgcc ctagcgagcg tcctgatcgc 180

tttagcggta gcaaatcagg caccagcgcc agtctggcca tcagcgacct tcgctccgaa 240

gatgaagccg attattattg tcagagcttt gatagcagcg gcacctggat ctttggtggc 300

ggtaccaagc tgaccgtgct g 321

<210> 319

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5重链可变区

<400> 319

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Gly Gly Tyr Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Val Trp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 320

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL5轻链可变区

<400> 320

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Glu Arg Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Asp Leu Arg Ser Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Ser Ser Gly Thr Trp

85 90 95

Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 321

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链可变区

<400> 321

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc agtcagtggt 300

gcaggtcgtg gtttcttcga ctactgggga caaggtactc tggtcactgt ctcctca 357

<210> 322

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链可变区

<400> 322

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagcg gtagcagcag caacattggt agcaactacg tgtactggta tcagcaactc 120

ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac gaggacaaca agcgtcctag tggtgtgcct 180

gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240

tccgaggacg aggctgacta ttactgcagc agctacacta gcagcagcac tgtgatcttc 300

ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327

<210> 323

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6重链可变区

<400> 323

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Val Ser Gly Ala Gly Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 324

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL6轻链可变区

<400> 324

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 325

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链可变区

<400> 325

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc cgctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagcagc 300

cagggtatct tcgacatctg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc a 351

<210> 326

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链可变区

<400> 326

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagtg gtaacaatat cggtactaga cgcgtgcatt ggtatcagca actcccagac 120

accgctccta agctcctgat ttacagtaag aacaaccgtc ctagtggtgt gcctgatcgc 180

ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcagtggact tcgctccgag 240

gacgaggctg actattactg cgcagcatgg gacgacagcc tgagcggtcc tgtgttcggc 300

ggtgggacca aactgaccgt ccta 324

<210> 327

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7重链可变区

<400> 327

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ser Gln Gly Ile Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 328

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL7轻链可变区

<400> 328

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Thr Arg Arg Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Asp Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Ser Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly

85 90 95

Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 329

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链可变区

<400> 329

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcaaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagcggt 300

cgttacgcag acttgacatc tgggggacaa ggtactctgg tcactgtctc ctca 354

<210> 330

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链可变区

<400> 330

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagcg gtagcaacag caacatcggt aacaactacg tgagctggta tcagcaactc 120

ccagacaccc ctcctaagct cctgatttac gacaacaaca agcgtcctag tggtgtgcct 180

gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240

tccgaggacg aggctgacta ttactgcagc agctacacta gcagcagcac tgtgatgttc 300

ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327

<210> 331

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8重链可变区

<400> 331

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Arg Tyr Ala Asp Leu Thr Ser Gly Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 332

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL8轻链可变区

<400> 332

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Asp Thr Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Val Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 333

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链可变区

<400> 333

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctactact ggagctgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtatcgac 300

gtgtacggtt tcgacatctg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc a 351

<210> 334

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链可变区

<400> 334

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagcg gtagcactag caacatcggt actaactacg tgtactggta tcagcaactc 120

ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac gacaacaaca accgtcctag tggtgtgcct 180

gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240

tccgaggacg aggctgacta ttactgccag acttgggaca gcagcactga cgtagtgttc 300

ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327

<210> 335

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9重链可变区

<400> 335

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ile Asp Val Tyr Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 336

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL9轻链可变区

<400> 336

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Trp Asp Ser Ser Thr

85 90 95

Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 337

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链可变区

<400> 337

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc aagcggttac 300

ggtctgatgg acgtgtgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348

<210> 338

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链可变区

<400> 338

tctgtgctga ctcagccacc ttcagcatct ggtactccag gtcagcgcgt caccatcagc 60

tgcactcgta gcagcggtat catcgcaagc aactacgtgc agtggtatca gcaactccca 120

ggcaccgctc ctaagctcct gatttaccgc aacaaccagc gccctagtgg tgtgcctgat 180

cgcttttctg ggtccaagtc tggcacctca gcctctctgg ctatcagtgg acttcgctcc 240

gaggacgagg ctgactatta ctgcagcagc tacgcaggta acaacaacct ggtgttcggc 300

ggtgggacca aactgaccgt ccta 324

<210> 339

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10重链可变区

<400> 339

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 340

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL10轻链可变区

<400> 340

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ile Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Asn Asn

85 90 95

Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 341

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链可变区

<400> 341

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc acctatggca tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcggcag cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcctg 300

agcggccttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348

<210> 342

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链可变区

<400> 342

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gctccagcca gggcatcacc aactatctgg cctggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc gcgccaccgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctatagca cccctctgac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 343

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11重链可变区

<400> 343

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Leu Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 344

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK11轻链可变区

<400> 344

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 345

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链可变区

<400> 345

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggca gcggcggcga tacctatcat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtac ccgcggcctg 300

agcggctttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagc 348

<210> 346

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链可变区

<400> 346

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcagc agctatctga actggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc gcgcccctgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctatagca tccctatcac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 347

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12重链可变区

<400> 347

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asp Thr Tyr His Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Gly Leu Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 348

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK12轻链可变区

<400> 348

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Phe Ser Asp

100 105 110

<210> 349

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链可变区

<400> 349

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc gattatgcca tgagctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcagc atcagcagca gcagcagcta tatctactat 180

accgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcggc 300

tatggctttg attattgggg acaaggtacc ctggtgaccg tgagcagc 348

<210> 350

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链可变区

<400> 350

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcagc agctatctga actggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatagc gccagcagcc gcccacaggg catccccgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag tatgatgatc tgccttttac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 351

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13重链可变区

<400> 351

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 352

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK13轻链可变区

<400> 352

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Pro Gln Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 353

<211> 346

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链可变区

<400> 353

gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc aactttgcga tcgcctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcagcggcc gcggcaccag cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgtg 300

agcggctttg atagctgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagca 346

<210> 354

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链可变区

<400> 354

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gcgccagcca gagcatcagc agccatctgg cctggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat accagcaacc gcgccaccgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctgggag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtacta ttgtcagcag agctatagca ccccttttac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 355

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14重链可变区

<400> 355

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

20 25 30

Ala Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Thr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 356

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK14轻链可变区

<400> 356

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser His

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Thr Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 357

<211> 349

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链可变区

<400> 357

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcaacggca gcggcggcag cacctattat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagacga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcctg 300

cagggctttg attattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagca 349

<210> 358

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链可变区

<400> 358

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc aggccagcca ggatatcacc aactatctga actggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcagcc tggaaaccgg catccctgat 180

cgtttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctatagca cccctatcac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 359

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15重链可变区

<400> 359

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Thr Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Leu Gln Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 360

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK15轻链可变区

<400> 360

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 361

<211> 349

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链可变区

<400> 361

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctatgcca tgagctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcc atcaacggca gcggcggcag caccctgtat 180

gccgatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgcggcgtg 300

agcggctttg atagctgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagcg 349

<210> 362

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链可变区

<400> 362

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc gcatcagcca gagcatcagc agctatctga actggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcctgc gcgccaccgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag agctataaaa cccctatcac cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 363

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16重链可变区

<400> 363

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Gly Ser Gly Gly Ser Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Val Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 364

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK16轻链可变区

<400> 364

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ile Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Leu Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Lys Thr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 365

<211> 349

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链可变区

<400> 365

gaagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc agctattatt ggagctgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcaccggca gcggcggcag caccgattat 180

gccaacagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc caccggcggc 300

ggcatctttg actattgggg acaaggtact ctggtgaccg tgagcagcg 349

<210> 366

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链可变区

<400> 366

gaaatcgtgc tgacccagag ccctggcacc ctgagcctga gccctggcga acgcgcaaca 60

ctgtcatgcc aggccagcca gaccatcagc aactatctga actggtatca gcagaaacca 120

ggtcaggctc cacgtctgct gatctatgat gccagcaacc gcgccaccgg catccctgat 180

cgcttctcag gatctggaag cggtaccgat tttaccctga ccatcagccg cctggaacct 240

gaggactttg ccgtgtatta ttgtcagcag tacaacagct atcctcctag cttcggtcag 300

ggcactaaag tggaaatcaa a 321

<210> 367

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17重链可变区

<400> 367

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asn Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Gly Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 368

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SK17轻链可变区

<400> 368

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 369

<211> 352

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链可变区

<400> 369

cgagtgcagc tgctggaaag tggaggtgga ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60

agctgtgccg ccagcggatt caccttcagc gattatcata tgcattgggt tcgccaagca 120

cctggcaaag gcctggaatg ggtgagcacc atcagcagca gcggcggcta tacctattat 180

gccgaaagcg tgaaaagccg ctttaccatc agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240

ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgcagtct actactgtgc ccgatcgata 300

cgcctgcctc tggattattg gggacaaggt actctggtga ccgtgagcag ca 352

<210> 370

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链可变区

<400> 370

cagagcgtgc tgacccagcc tcctagcgcc tccggtacac caggacagcg cgtgactatt 60

agctgtagcg gcaacaacat cggcagcaaa ggcgtgcatt ggtatcagca actgcctgga 120

actgcaccta agctgctgat ctatgaagat agcaaacgcc ctagcggcgt gcgtgatcgc 180

tttagcggta gcaaatcagg caccagcgcc agcctggcca tcagcggcct tcgctccgaa 240

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ggtaccaagc tgaccgtgct g 321

<210> 371

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18重链可变区

<400> 371

Arg Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val

50 55 60

Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ile Arg Leu Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 372

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> SL18轻链可变区

<400> 372

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Arg Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Thr Lys Gly Val

85 90 95

Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 373

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链可变区

<400> 373

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagt ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgt gcgtggttac 300

ggtgcaatgg acgtgtgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348

<210> 374

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链可变区

<400> 374

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcactc gtagcagcgg tagcatcgca agcaactacg tgcagtggta tcagcaactc 120

ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac cgcaacaacc agcgccctag tggtgtgcct 180

gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240

tccgaggacg aggctgacta ttactgcagc agctacacta ctagcagcac tctggtgttc 300

ggcggtggga ccaaactgac cgtccta 327

<210> 375

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10重链可变区

<400> 375

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Gly Tyr Gly Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 376

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A10轻链可变区

<400> 376

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser Ser

85 90 95

Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 377

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链可变区

<400> 377

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacgcaa tgcattgggt cagacaggca 120

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ctgcagatga acagccttcg cgcaaaggac actgccgtgt attactgcgc aagcggctac 300

ggtctgatgg acgtatgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348

<210> 378

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链可变区

<400> 378

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcactg gtactagcag cgacgtgggt aactacaacc tggtgagctg gtatcagcaa 120

ctcccaggca ccgctcctaa gctcctgatt tacagcaaca accagcgccc tagtggtgtg 180

cctgatcgct tttctgggtc caagtctggc acctcagcct ctctggctat cagtggactt 240

cgctccgagg acgaggctga ctattactgc agcagctaca ctggtagcaa cgctctgttg 300

ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 330

<210> 379

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12重链可变区

<400> 379

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Lys Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Tyr Gly Leu Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 380

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_A12轻链可变区

<400> 380

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr

20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser

85 90 95

Asn Ala Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 381

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链可变区

<400> 381

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

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ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgctggcat 300

tacagcttcg actactgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348

<210> 382

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链可变区

<400> 382

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgccgtg gtaacaacat cggtagcaag cgtgtgcatt ggtatcagca actcccaggc 120

accgctccta agctcctgat ttacagctac aaccaccgtc ctagcggtgt gcctgatcgc 180

ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcactggact tcgctccgag 240

gacgaagctg actattactg caacacttgg gacgacagcc tggagggtcc tgtgttcggc 300

ggtgggacca aactgaccgt ccta 324

<210> 383

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6重链可变区

<400> 383

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 384

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_E6轻链可变区

<400> 384

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Ser Tyr Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Arg Ser Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Thr Trp Asp Asp Ser Leu Glu Gly

85 90 95

Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 385

<211> 352

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链可变区

<400> 385

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc ggctacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtagtcct 300

agcggtctgt tcgactactg gggacaaggt actctggtca ctgtctcctc ag 352

<210> 386

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链可变区

<400> 386

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcggtg gtaacaacat cggtagcaag cgtgtgcatt ggtatcagca actcccaggc 120

accgctccta agctcctgat ttacaacact agcaacaagc atagcggtgt gcctgatcgc 180

ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcagtggact tcgctccgag 240

gacgaggctg actattactg cagcagctac ctacagcagc actctctgtt cggcggtggg 300

accaaactaa ccgtccta 318

<210> 387

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4重链可变区

<400> 387

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ser Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 388

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_F4轻链可变区

<400> 388

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Arg Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Thr Ser Asn Lys His Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Leu Gln Gln His Ser Leu

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 389

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链可变区

<400> 389

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc ctcttccgcc 60

tcctcctgtg cagcctccgg attcactttc agcagctacg caatgagctg ggtcagacag 120

gcaccaggta agggactgga gtgggtctct gcaattagcg gtagcggtgg tagcacttac 180

tacgcagaca gcgtgaaggg tcgcttcacc atctcacgcg acaactccaa gaacaccctg 240

tacctgcaga tgaacagcct tcgcgcagag gacactgccg tgtattactg cacacgtttc 300

gtgggtgcaa tcggtgcatt cgactactgg ggacaaggta ctctggtcac tgtctcctca 360

360

<210> 390

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链可变区

<400> 390

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagtg gtaacaacat cggtagccgt agcgtgcatt ggtatcagca actcccaggc 120

accgctccta agctcctgat ttaccgcaac aaccagcgcc ctagtggtgt gcctgatcgc 180

ttttctgggt ccaagtctgg cacctcagcc tctctggcta tcagtggact tcgctccgag 240

gacgaggctg actattactg cgcagcatgg gacgacagcc tgagcggtcc tgtgttcggc 300

ggtgggacca aactgaccgt ccta 324

<210> 391

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11重链可变区

<400> 391

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Ser Ser Ala Ser Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser

20 25 30

Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser

50 55 60

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Thr Arg Phe Val Gly Ala Ile Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 392

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_H3L1_G11轻链可变区

<400> 392

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Asn Ile Gly Ser Arg Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly

85 90 95

Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 393

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链可变区

<400> 393

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc cattacgcaa tgagctgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca attagcggta gcggtggtag cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgtggttgg 300

gacagcccta ctctgacata cttcgacagc tggggacaag gtactctggt cactgtctcc 360

tca 363

<210> 394

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链可变区

<400> 394

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagcg gtactagcag caacatcggt aacaacgacg tgagctggta tcagcaactc 120

ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac caggacacta agcgtcctag cggtgtgcct 180

gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240

tccgaggacg aggctgacta ttactgcgca gcatgggacg acagcctgag cggtcctgtg 300

ttcggcggtg ggaccaaact gaccgtccta 330

<210> 395

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5重链可变区

<400> 395

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Asp Ser Pro Thr Leu Thr Tyr Phe Asp Ser Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 396

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_B5轻链可变区

<400> 396

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 397

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链可变区

<400> 397

gaggtgcagc tgttggagtc tggtggaggc ttggtacagc ctggaggttc tcttcgcctc 60

tcctgtgcag cctccggatt cactttcagc agctacggta tgcattgggt cagacaggca 120

ccaggtaagg gactggagtg ggtctctgca atcagcggta gcggtggtta cacttactac 180

gcagacagcg tgaagggtcg cttcaccatc tcacgcgaca actccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagccttcg cgcagaggac actgccgtgt attactgcgc acgctggcat 300

tacagcttcg actactgggg acaaggtact ctggtcactg tctcctca 348

<210> 398

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链可变区

<400> 398

cagtctgtgc tgactcagcc accttcagca tctggtactc caggtcagcg cgtcaccatc 60

agctgcagcg gtagcagcag caacatcggt aacaactacg tgagctggta tcagcaactc 120

ccaggcaccg ctcctaagct cctgatttac cgcaacaacc agcgccctag tggtgtgcct 180

gatcgctttt ctgggtccaa gtctggcacc tcagcctctc tggctatcag tggacttcgc 240

tccgaggacg aggctgacta ttactgccag agctacgaca acagcaacgt gctgttcggc 300

ggtgggacca aactgaccgt ccta 324

<210> 399

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6重链可变区

<400> 399

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp His Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 400

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CB301_OPALTL_E6轻链可变区

<400> 400

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Asn Ser Asn

85 90 95

Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 401

<211> 489

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD300c ECD

<400> 401

ggctattttc ctctgagcca ccccatgacc gtggcgggcc ccgtgggggg atccctgagt 60

gtgcagtgtc gctatgagaa ggaacacagg accctcaaca aattctggtg cagaccacca 120

cagattctcc gatgtgacaa gattgtggag accaaagggt cagcagggaa aaggaatggc 180

cgagtgtcca tcagggacag tcctgcaaac ctcagcttca cagtgaccct ggagaatctc 240

acagaggagg acgcaggcac ctactggtgt ggggtggata caccgtggct ccgagacttt 300

catgatccca ttgtcgaggt tgaggtgtcc gtgttcccgg ccgggacgac cacagcctcc 360

agcccccaga gctccatggg cacctcaggt cctcccacga agctgcccgt gcacacctgg 420

cccagcgtga ccagaaagga cagccccgaa cccagcccac accctggctc cctgttcagc 480

aatgtccgc 489

<210> 402

<211> 163

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD300c ECD

<400> 402

Gly Tyr Phe Pro Leu Ser His Pro Met Thr Val Ala Gly Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Ser Leu Ser Val Gln Cys Arg Tyr Glu Lys Glu His Arg Thr Leu

20 25 30

Asn Lys Phe Trp Cys Arg Pro Pro Gln Ile Leu Arg Cys Asp Lys Ile

35 40 45

Val Glu Thr Lys Gly Ser Ala Gly Lys Arg Asn Gly Arg Val Ser Ile

50 55 60

Arg Asp Ser Pro Ala Asn Leu Ser Phe Thr Val Thr Leu Glu Asn Leu

65 70 75 80

Thr Glu Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Gly Val Asp Thr Pro Trp

85 90 95

Leu Arg Asp Phe His Asp Pro Ile Val Glu Val Glu Val Ser Val Phe

100 105 110

Pro Ala Gly Thr Thr Thr Ala Ser Ser Pro Gln Ser Ser Met Gly Thr

115 120 125

Ser Gly Pro Pro Thr Lys Leu Pro Val His Thr Trp Pro Ser Val Thr

130 135 140

Arg Lys Asp Ser Pro Glu Pro Ser Pro His Pro Gly Ser Leu Phe Ser

145 150 155 160

Asn Val Arg

<210> 403

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段的

重链CDR1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)

<223> Xaa = G或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)

<223> Xaa = S, R,或D

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)

<223> Xaa = N或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)

<223> Xaa = Y, A, G,或H

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)

<223> Xaa = S,或H

<400> 403

Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa Trp Val Arg

1 5 10

<210> 404

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段的

重链CDR2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa = T或A

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)

<223> Xaa = G或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)

<223> Xaa = T或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)

<223> Xaa = S或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)

<223> Xaa = D或E

<400> 404

Xaa Ile Ser Xaa Ser Gly Xaa Xaa Thr Tyr Tyr Ala Xaa

1 5 10

<210> 405

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段的

重链CDR3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)

<223> Xaa = R或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)

<223> Xaa = G或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)

<223> Xaa = M, S, Y,或I

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)

<223> Xaa = W, Q, G,或R

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)

<223> Xaa = G或L

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)

<223> Xaa = M, I,或P

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)

<223> Xaa = D, F,或L

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)

<223> Xaa = V或D

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)

<223> Xaa = I, Y,或不存在

<400> 405

Tyr Cys Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp

1 5 10

<210> 406

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段的

轻链CDR1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa = T或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)

<223> Xaa =G或R

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)

<223> Xaa = K, N,或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)

<223> Xaa = H, N,或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)

<223> Xaa = R, I,或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)

<223> Xaa = H, G,或I

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)

<223> Xaa = T, I,或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)

<223> Xaa = R, A, K,或不存在

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)

<223> Xaa = R, S, G,或不存在

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)

<223> Xaa = N或不存在

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)

<223> Xaa = Y或不存在

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)

<223> Xaa = N, H,或Q

<400> 406

Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa Trp

1 5 10 15

<210> 407

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段的

轻链CDR2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)

<223> Xaa = L, S, R,或E

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)

<223> Xaa = D, K,或N

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)

<223> Xaa = S或N

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)

<223> Xaa = E, N, Q,或K

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)

<223> Xaa = P或R

<400> 407

Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Pro Ser Gly Val Xaa

1 5 10

<210> 408

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD300c单克隆抗体或其抗原结合片段的

轻链CDR3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)

<223> Xaa = Q, A,或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)

<223> Xaa = S或A

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)

<223> Xaa = Y或W

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)

<223> Xaa = D或A

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)

<223> Xaa = S, D,或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)

<223> Xaa = S, N,或T

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)

<223> Xaa = S, L, N,或K

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)

<223> Xaa = V, S, N,或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)

<223> Xaa = G, L, V,或不存在

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)

<223> Xaa = P或不存在

<400> 408

Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Phe

1 5 10

Claims (38)

1.用于预防或治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物包含抗CD300C(CD300抗原样家族成员C)抗体或其抗原结合片段和至少一种另外的抗癌剂作为活性成分。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述另外的抗癌剂包括免疫治疗剂、化学治疗剂或其组合。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段包含：

(i)重链可变区，其包含：包含选自以下的氨基酸序列的CDR1：SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：79、SEQ IDNO：91、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：211、SEQ IDNO：223、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：259、SEQ ID NO：271、SEQ ID NO：283和SEQ ID NO：295；

包含选自以下的氨基酸序列的CDR2：SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：32、SEQID NO：44、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：164、SEQ IDNO：176、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：212、SEQ ID NO：224、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：248、SEQ ID NO：260、SEQ ID NO：272、SEQ ID NO：284和SEQ ID NO：296；和

包含选自以下的氨基酸序列的CDR3：SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：33、SEQID NO：45、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：165、SEQ IDNO：177、SEQ ID NO：189、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：213、SEQ ID NO：225、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：249、SEQ ID NO：261、SEQ ID NO：273、SEQ ID NO：285和SEQ ID NO：297；以及

(ii)轻链可变区，其包含：包含选自以下的氨基酸序列的CDR1：SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：22、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：94、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：190、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：214、SEQ IDNO：226、SEQ ID NO：238、SEQ ID NO：250、SEQ ID NO：262、SEQ ID NO：274、SEQ ID NO：286和SEQ ID NO：298；

包含选自以下的氨基酸序列的CDR2：SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：35、SEQID NO：47、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：167、SEQ IDNO：179、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：215、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：239、SEQ ID NO：251、SEQ ID NO：263、SEQ ID NO：275、SEQ ID NO：287和SEQ ID NO：299；和

包含选自以下的氨基酸序列的CDR3：SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：36、SEQID NO：48、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：168、SEQ IDNO：180、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：216、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：252、SEQ ID NO：264、SEQ ID NO：276、SEQ ID NO：288和SEQ ID NO：300。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段包含：

(i)重链可变区，其包含：包含选自以下的氨基酸序列的CDR1：SEQ ID NO：79、SEQ IDNO：115和SEQ ID NO：211；

包含选自以下的氨基酸序列的CDR2：SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：116和SEQ ID NO：212；和

包含选自以下的氨基酸序列的CDR3：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：117和SEQ ID NO：213；以及

(ii)轻链可变区，其包含：包含选自以下的氨基酸序列的CDR1：SEQ ID NO：82、SEQ IDNO：118和SEQ ID NO：214；

包含选自以下的氨基酸序列的CDR2：SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：119和SEQ ID NO：215；和

CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：120和SEQ ID NO：216。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段选自：

抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：80中所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：81中所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：82中所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：84中所示氨基酸序列的CDR3；

抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：115中所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：116中所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：117中所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：118所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：119所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：120所示氨基酸序列的CDR3；以及

抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：211中所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：212中所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：213中所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：214所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：215所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：216所示氨基酸序列的CDR3。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段包含：

重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：80中所示氨基酸序列的CDR2、含有SEQ ID NO：81中所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：82中所示氨基酸序列的CDR1、含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的CDR2和含有SEQ ID NO：84中所示氨基酸序列的CDR3。

7.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO：327的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：328的氨基酸序列的轻链可变区。

8.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段具有物种间交叉反应性。

9.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段包含：

重链可变区，其包含分别含有式(1)至(3)所示的氨基酸序列的CDR1至CDR3；和

轻链可变区，其包含分别含有式(4)至(6)所示的氨基酸序列的CDR1至CDR3：

FTFX1X2X3X4MX5WVR(1)

其中，

X1＝G或S

X2＝S、R或D

X3＝N或Y

X4＝Y、A、G或H

X5＝S或H

X1ISX2SGX3X4TYYAX5(2)

其中，

X1＝T或A

X2＝G或S

X3＝T或G

X4＝S或Y

X5＝D或E

YCAX1X2X3X4X5X6X7X8X9W(3)

其中，

X1＝R或S

X2＝G或S

X3＝M、S、Y或I

X4＝W、Q、G或R

X5＝G或L

X6＝M、I或P

X7＝D、F或L

X8＝V或D

X9＝I、Y或不存在

CX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11VX12W(4)其中，

X1＝T或S

X2＝G或R

X3＝K、N或S

X4＝H、N或S

X5＝R、I或G

X6＝H、G或I

X7＝T、I或S

X8＝R、A、K或不存在

X9＝R、S、G或不存在

X10＝N或不存在

X11＝Y或不存在

X12＝N、H或Q

X1X2X3X4RPSGVX5(5)

其中，

X1＝L、S、R或E

X2＝D、K或N

X3＝S或N

X4＝E、N、Q或K

X5＝P或R

YCX1X2X3X4X5X6X7X8X9X10VF(6)

其中，

X1＝Q、A或S

X2＝S或A

X3＝Y或W

X4＝D或A

X5＝S、D或G

X6＝S、N或T

X7＝S、L、N或K

X8＝V、S、N或G

X9＝G、L、V或不存在

X10＝P或不存在。

10.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述免疫治疗剂包括选自以下的至少一种：抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4、抗CD47、抗KIR、抗LAG3、抗CD137、抗OX40、抗CD276、抗CD27、抗GITR、抗TIM3、抗41BB、抗CD226、抗CD40、抗CD70、抗ICOS、抗CD40L、抗BTLA、抗TCR和抗TIGIT抗体。

11.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述免疫治疗剂包括选自以下的至少一种：抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗CD47抗体。

12.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述免疫治疗剂包括选自以下的至少一种：度伐鲁单抗(durvalumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、αCD47和伊匹单抗(ipilimumab)。

13.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂包括选自以下的至少一种：微管组装抑制剂、DNA嵌入剂或复制抑制剂、多激酶抑制剂和血管生成抑制剂。

14.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂包括选自以下的至少一种：阿霉素、紫杉醇、多西他赛、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、磷酸雌莫司汀(EMP)、NAB-紫杉醇(Abraxane)、环磷酰胺、表阿霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊苷、异环磷酰胺、吉西他滨、脱氧腺苷、克拉屈滨、氯法拉滨、氟达拉滨、喷司他丁、脱氧胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(Ara-C)、5-氮杂-2'-脱氧胞苷(地西他滨)、替扎他滨、卡培他滨、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、培美曲塞、巯嘌呤、放线菌素、柔红霉素、丝裂霉素、博来霉素、伊达比星、盐酸米托蒽醌、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、噻替哌、六甲蜜胺、甲基苄肼、白消安、链脲霉素、卡莫司汀、洛莫司汀、达卡巴嗪(DTI)、苯丁酸氮芥、拓扑替康、伊立替康、替莫唑胺、顺铂、卡铂、奥沙利铂、索拉非尼、瑞戈非尼、伐他拉尼、阿西替尼、马赛替尼、帕唑帕尼、舒尼替尼、Toceranib、西地尼布、来维替尼、尼达尼布、Semaxanib、替沃扎尼(Tivozanib)、凡德他尼和瑞复美(来那度胺)。

15.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂包括选自索拉非尼、吉西他滨和紫杉醇中的至少一种。

16.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述癌症包括选自以下的至少一种：结直肠癌、直肠癌、结肠癌、甲状腺癌、口腔癌、咽癌、喉癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、舌癌、乳腺癌、子宫癌、胃癌、骨癌和血癌。

17.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述癌症是实体癌。

18.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述癌症包括选自结肠癌、肺癌、黑色素瘤和乳腺癌的至少一种。

19.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物抑制癌症的增殖、存活、转移、复发或癌症试剂抗性。

20.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段和所述另外的抗癌剂各自配制并分别同时或顺序施用。

21.预防或治疗癌症的方法，所述方法包括向需要预防或治疗癌症的个体施用抗CD300c(CD300抗原样家族成员C)抗体或其抗原结合片段和所述至少一种另外的抗癌剂。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段和所述至少一种另外的抗癌剂同时或顺序施用。

23.如权利要求21所述的方法，其还包括在施用所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段之前，基于所述个体的生物样品或数据来鉴定CD300c蛋白的表达水平。

24.如权利要求21所述的方法，其还包括基于所述施用所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体的生物样品或数据来鉴定选自以下标志物的至少一种标志物的表达水平：

Bst2、Cd40、Cd70、Cd86、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Cd206、Msr1、Arg1、Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Vcam1、Icam1、Gzma、Gzmb、Icos、Cd69、Ifng、Tnf、Cd1d1、Cd1d2、Cd38、Cxcr6、Xcr1、Tbx21、Stat1、Stat4、Cxcr3、IL-12b、IL-4、IL-6、IL-13、PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Ox40、Gitr、Hvem、CD27、CD28、Cma1、Timd4、Bcl6、Cxcl5和Ccl21a。

25.如权利要求24所述的方法，其还包括基于鉴定的所述标志物的表达水平来选择所述另外的抗癌剂。

26.如权利要求24所述的方法，其还包括基于鉴定的所述标志物的表达水平来鉴定所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性。

27.如权利要求25所述的方法，其中所述标志物包括选自以下的至少一种：PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Icos、Ox40、Gitr、Hvem、CD27和CD28。

28.如权利要求26所述的方法，其中所述标志物包括选自以下的至少一种：vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、IL-6、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、CD27和CD28。

29.如权利要求28所述的方法，其还包括当与未施用所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，选自vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a和IL-6的至少一种标志物的表达水平在统计学上显著降低时，确定所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。

30.如权利要求28所述的方法，其还包括当与未施用所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，所述标志物中选自Icos、Ox40、Gitr、Hvem、CD27、CD28、Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、Gzma、Cd69、Cd1d1、Cd38和Cxcr6的至少一种标志物的表达水平在统计学上显著增加时，确定所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。

31.用于预防或治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包括：

包含抗CD300c(CD300抗原样家族成员C)抗体或其抗原结合片段的组合物；和

指导所述抗体或其抗原结合片段与至少一种另外的抗癌剂组合使用的说明书。

32.提供预测抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性所需信息的方法，所述方法包括通过使用获自个体的生物样品或数据来确定用于预测治疗应答性的标志物的表达水平，

其中所述标志物包括选自以下的至少一种：Bst2、Cd40、Cd70、Cd86、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Cd206、Msr1、Arg1、Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Vcam1、Icam1、Gzma、Gzmb、Icos、Cd69、Ifng、Tnf、Cd1d1、Cd1d2、Cd38、Cxcr6、Xcr1、Tbx21、Stat1、Stat4、Cxcr3、IL-12b、IL-4、IL-6、IL-13、Pd-1、Pd-l1、Ctla-4、Lag3、Tim3、Ox40、Gitr、Hvem、Cd27、Cd28、Cma1、Timd4、Bcl6、Cxcl5和Ccl21a。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述标志物包括选自以下的至少一种：Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Bst2、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、IL6、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、Cd27和Cd28。

34.如权利要求32所述的方法，其还包括当与未施用所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，选自vegfa、pdgfrb、Col4a1、Hif1a和IL-6的至少一种标志物的表达水平在统计学上显著降低时，确定所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。

35.如权利要求32所述的方法，其还包括当与未施用所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的个体相比，选自Bst2、CCL8、Xcl1、CCR7、CD80、Tbx21、Stat1、Stat4、Ifng、Cxcr3、Gzma、Icos、Cd69、Cd1d1、Cd38、Cxcr6、Ox40、Gitr、Cd27和Cd28的至少一种标志物的表达水平在统计学上显著增加时，确定所述抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性是良好或优异。

36.用于预测抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性的试剂盒，所述试剂盒包含用于测量用于预测抗CD300c抗体或其抗原结合片段的治疗应答性的物质的表达水平的物质，

其中所述标志物包括选自以下的至少一种：Bst2、Cd40、Cd70、Cd86、Ccl8、Xcl1、Ccr7、Cd80、Cd206、Msr1、Arg1、Vegfa、Pdgfrb、Col4a1、Hif1a、Vcam1、Icam1、Gzma、Gzmb、Icos、Cd69、Ifng、Tnf、Cd1d1、Cd1d2、Cd38、Cxcr6、Xcr1、Tbx21、Stat1、Stat4、Cxcr3、IL-12b、IL-4、IL-6、IL-13、PD-1、PD-L1、CTLA-4、Lag3、Tim3、Ox40、Gitr、Hvem、CD27、CD28、Cma1、Timd4、Bcl6、Cxcl5和Ccl21a。

37.提供预防或治疗癌症的信息的方法，所述方法包括使用获自需要预防或治疗癌症的个体的生物样品或数据来测量CD300c蛋白的表达水平。

38.如权利要求37所述的方法，其中所述预防或治疗癌症的信息包含关于与CD300c蛋白相关的治疗剂(例如，抗CD300c抗体或其抗原结合片段)的治疗应答性、治疗剂的选择、待治疗个体的选择、个体的预后和个体的生存期中的至少一种的信息。