KR102009238B1 - 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 암 세포의 표면에 특이적으로 발현되는 암 항원 단백질을 표적으로 한 항체 및 그 암의 치료 및/또는 예방제로서의 용도, 구체적으로는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 CAPRIN-1 부분 폴리펩티드와 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 프래그먼트, 및 그것을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물을 제공한다.

Description

암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATMENT AND/OR PREVENTION OF CANCER}

본 발명은 CAPRIN-1에 대한 항체 또는 그 프래그먼트의, 암의 치료 및/또는 예방제 등으로서의 신규의 의약 용도에 관한 것이다.

암은 전체 사망 원인의 제 1위를 차지하는 질환이며, 현재 행해지고 있는 치료는 수술 요법을 주체로 방사선 요법과 화학 요법을 조합시킨 것이다. 최근의 새로운 수술법의 개발이나 새로운 항암제의 발견에도 불구하고, 일부의 암을 제외하고 암의 치료 성적은 그다지 향상되고 있지 않은 것이 현재의 상태이다. 최근, 분자 생물학이나 암 면역학의 진보에 의해 암에 특이적으로 반응하는 항체류, 세포 장해성 T세포에 의해 인식되는 암 항원류, 암 항원을 코드하는 유전자류 등이 동정되고 있고, 암 항원류를 타깃으로 한 특이적 암 치료법으로의 기대가 높아지고 있다(비특허문헌 1).

암 치료법에 있어서는 부작용을 경감하기 위해서, 그 항원으로서 인식되는 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질은 정상 세포에는 거의 존재하지 않고, 암 세포에 특이적으로 존재하고 있는 것이 바람직하다. 1991년, 벨기에 Ludwig 연구소의 Boon 등은 자기 암 세포주와 암 반응성 T세포를 사용한 cDNA 발현 클로닝법에 의해 CD8 양성 T세포가 인식하는 인간 멜라노마 항원 MAGE1을 단리했다(비특허문헌 2). 그 후에, 암 환자의 생체 내에서 자기의 암에 반응해서 산생되는 항체가 인식하는 종양 항원을 유전자의 발현 클로닝의 방법을 받아들여서 동정하는 SEREX(serological identification of antigens by recombinant expression cloning)법이 보고되고(비특허문헌 3 및 특허문헌 1), 이 방법에 의해 정상 세포에는 거의 발현이 없고, 암에 특이적으로 발현되는 몇가지의 암 항원이 단리되어 있다(비특허문헌 4∼9). 또한, 그 일부를 타깃으로 해서 암 항원에 특이적으로 반응하는 면역 세포를 사용한 세포 요법이나, 암 항원을 포함하는 백신 등의 암 특이적 면역 요법의 임상 시험이 실시되고 있다.

한편, 최근 암 세포 상의 항원 단백질을 표적으로 한 암을 치료하기 위한 각종 항체 의약이 세상에 대두되어 왔다. 암 특이적 치료약으로서 일정한 약효가 얻어져 주목받고 있지만, 표적이 되는 항원 단백질의 대부분은 정상 세포에도 발현되는 것이며, 항체 투여의 결과 암 세포뿐만 아니라 항원이 발현되는 정상 세포도 장해되어 버리고, 그 결과 발생하는 부작용이 문제가 되고 있다. 따라서, 암 세포 표면에 특이적으로 발현되는 암 항원을 동정하고, 그것을 표적으로 한 항체를 의약품으로서 사용할 수 있으면 보다 부작용이 적은 항체 의약에 의한 치료가 가능해진다고 기대된다.

Cytoplasmic- and proliferation-associateed protein 1(CAPRIN-1)은 휴지기의 정상 세포가 활성화나 세포 분열을 일으킬 때에 발현되고, 또한 세포 내에서 RNA와 세포 내 스트레스 과립을 형성해서 mRNA의 수송, 번역의 제어에 관여하는 것 등이 알려져 있는 세포 내 단백질로서 알려져 있었지만, 암 세포의 표면에 특이적으로 발현되는 것이 발견되어 암 치료를 위한 항체 의약의 타깃으로서 연구가 진행되고 있다(특허문헌 2).

미국 특허 제 5698396호 WO2010/016526

아키요시 츠요시, 「암과 화학 요법」, 1997년, 제 24권, p55-519(암과 화학 요법사, 일본) Bruggen P. et al., Science, 254: 1643-1647(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 11810-11813(1995) Int. J. Cancer, 72: 965-971(1997) Cancer Res., 58: 1034-1041(1998) Int. J. Cancer, 29: 652-658(1998) Int. J. Oncol., 14: 703-708(1999) Cancer Res., 56: 4766-4772(1996) Hum. Mol. Genet 6: 33-39,1997

본 발명의 목적은 암 세포의 표면에 특이적으로 발현되는 CAPRIN-1을 표적으로 한 종래의 항체보다 항종양 활성이 뛰어난 항체를 작출하여 암의 치료 및/또는 예방제로서의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명은 이하의 특징을 갖는다.

본 발명은 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열, 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 CAPRIN-1의 부분 폴리펩티드와 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 프래그먼트, 및 그것을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물을 제공한다.

그 실시형태에 있어서, 상기 암은 유방암, 신장암, 췌장암, 대장암, 폐암, 뇌종양, 위암, 자궁경암, 난소암, 전립선암, 방광암, 식도암, 백혈병, 림프종, 섬유육종, 비만 세포종 또는 멜라노마이다.

다른 실시형태에 있어서, 상기 항체는 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체이다.

다른 실시형태에 있어서, 상기 항체는 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체, 또는 다중 특이성 항체(예를 들면, 2중 특이성 항체)이다.

본 명세서는 본원의 우선권의 기초인 일본 특허출원 2012-035484호의 명세서 및/또는 도면에 기재되는 내용을 포함한다.

(발명의 효과)

본 발명에 의한 CAPRIN-1에 대한 항체는 암 세포를 장해한다. 따라서, CAPRIN-1에 대한 항체는 암의 치료나 예방에 유용하다.

본 발명에 의한 항체는 CAPRIN-1의 소정의 부분 폴리펩티드를 인식하여 결합하는 항체이고, 항종양 활성을 갖는다. 본 발명에 의한 항체는 보다 구체적으로는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열, 또는 그 아미노산 서열이 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 CAPRIN-1 단백질의 부분 폴리펩티드(CAPRIN-1 부분 폴리펩티드)를 인식하는(즉, 면역학적 반응성을 갖는) 항체이다. 본 발명에서는 이 항체가 항종양 활성을 나타내는 것을 명확하게 했다. 본 발명은 상기와 같은 CAPRIN-1 단백질의 단편에 결합하고, 또한 항종양 활성을 나타내는 모든 항체에 관한 것이다.

본 발명에 의한 상기 CAPRIN-1에 대한 항체는 항종양 활성을 발휘할 수 있는 한 어떠한 종류의 항체라도 좋고, 예를 들면 재조합 항체[예를 들면, 합성 항체, 다중 특이성 항체(예를 들면, 2중 특이성 항체), 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체(scFv) 등], 인간 항체, 그것들의 항체 프래그먼트[예를 들면, Fab, F(ab')₂, Fv 등]를 포함한다. 이들 항체 및 그 프래그먼트는 또한 당업자가 공지의 방법에 의해 조제하는 것이 가능하다. 본 발명에 의한 항체는 CAPRIN-1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드와 면역학적 반응성을 갖는, 즉 항원-항체 반응을 통해서 CAPRIN-1 단백질과 결합하는, 바람직하게는 CAPRIN-1 단백질과 특이적으로 결합하는 것이 바람직하다. 여기에서, 「CAPRIN-1 단백질과 특이적으로 결합하는」이란 CAPRIN-1 단백질에 특이적으로 결합하고, 그 이외의 단백질과 실질적으로 결합하지 않는 것을 의미한다. 본 발명에 의한 항체는 모노클로날 항체인 것이 바람직하지만, 균질한 항체를 안정되게 생산할 수 있는 한 폴리클로날 항체라도 좋다. 또한, 피험자가 인간일 경우에는 거절 반응을 회피 또는 억제하기 위해서 인간 항체 또는 인간화 항체인 것이 바람직하다.

본 발명에 의한 CAPRIN-1 폴리펩티드에 대한 항체의 항종양 활성은, 후술하는 바와 같이 생체 내에서 암을 갖고 있는 동물에 대한 종양 증식의 억제를 조사함으로써, 또는 생체 밖에서 그 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포에 대하여 면역 세포 또는 보체를 통한 세포 장해 활성을 나타내는지의 여부를 조사함으로써 평가할 수 있다.

또한, 본 발명에 있어서의 암의 치료 및/또는 예방의 대상인 피험자는 인간, 애완동물, 가축류, 경기용 동물 등의 포유동물이며, 바람직한 피험자는 인간이다.

이하에, 본 발명에 대해서 보다 상세하게 설명한다.

<항체 제작용 항원의 제작>

본 발명에 의한 CAPRIN-1에 대한 항체를 취득하기 위한 감작 항원으로서 사용되는 단백질 또는 그 단편은 인간, 개, 고양이, 소, 말, 마우스, 래트, 닭 등, 그 유래가 되는 동물종에 제한되지 않는다. 그러나, 세포 융합에 사용하는 친세포와의 적합성을 고려해서 선택하는 것이 바람직하고, 일반적으로는 포유동물 유래의 단백질이 바람직하고, 특히 인간 유래의 단백질이 바람직하다. 예를 들면, CAPRIN-1이 인간 CAPRIN-1인 경우, 인간 CAPRIN-1 단백질이나 그 부분 펩티드, 인간 CAPRIN-1을 발현하는 세포 등을 사용할 수 있다.

인간 CAPRIN-1 및 그 호모로그의 염기서열 및 아미노산 서열은, 예를 들면 GenBank(미국 NCBI)에 액세스하여 BLAST, FASTA 등의 알고리즘(Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5877, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997)을 이용함으로써 입수할 수 있다.

본 발명에서는 인간 CAPRIN-1의 염기서열(서열 번호 1 또는 3) 또는 아미노산 서열(서열 번호 2 또는 4)을 기준으로 했을 경우, 이것들의 ORF 또는 성숙 부분의 염기서열 또는 아미노산 서열과 70%∼100%, 바람직하게는 80%∼100%, 보다 바람직하게는 90%∼100%, 더욱 바람직하게는 95%∼100%, 예를 들면 97%∼100%, 98%∼100%, 99%∼100% 또는 99.5%∼100%의 서열 동일성을 갖는 서열로 이루어지는 핵산 또는 단백질이 타깃인 CAPRIN-1이 된다(또한, 서열 번호 2와 서열 번호 4의 아미노산 서열을 비교하면, 690위치 이후의 아미노산 잔기가 상위하다). 여기에서, 「%서열 동일성」은 2개의 서열을 갭을 도입하거나, 또는 갭을 도입하지 않고 최대의 유사도(또는 일치도)가 되도록 얼라인먼트(정렬)했을 때, 아미노산(또는 염기)의 총 수(갭의 수를 포함함)에 대한 동일 아미노산(또는 염기)의 퍼센티지(%)를 의미한다.

CAPRIN-1 단백질의 단편으로서는 항체가 인식하는 최소 단위인 에피토프(항원 결정기)를 포함하고, 또한 그 에피토프 아미노산 길이∼그 단백질의 전체 길이 미만의 길이를 갖는 것을 사용할 수 있다. 에피토프는 포유동물, 바람직하게는 인간에게 있어서 항원성 또는 면역원성을 갖는 폴리펩티드 단편을 가리키고, 그 최소 단위는 약 7∼12 아미노산, 예를 들면 8∼11 아미노산으로 이루어진다. 본 발명에 의한 항체의 제작에 사용하는 CAPRIN-1 단백질의 단편은 본 발명의 항체가 인식하는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열(서열 번호 2 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열 중의 141위치∼156위치의 서열에 상당함) 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그들 아미노산 서열 중의 연속하는 약 7∼12 아미노산, 예를 들면 연속하는 8∼11 아미노산으로 이루어지는 에피토프를 적어도 포함하는 단편인 것이 바람직하다.

상기한 인간 CAPRIN-1 단백질이나 그 부분 펩티드를 포함하는 폴리펩티드 단편은, 예를 들면 Fmoc법(플루오레닐메틸옥시카르보닐법), tBoc법(t-부틸옥시카르보닐법) 등의 화학 합성법에 따라서 합성할 수 있다[일본 생화학회 편, 생화학 실험 강좌 1, 단백질의 화학 IV, 화학 수식과 펩티드 합성, 도쿄 카가쿠 도진(일본), 1981년]. 또한, 각종 시판의 펩티드 합성기를 이용해서 상법에 의해 합성할 수도 있다.

또한, 공지의 유전자 공학적 방법[Sambrook 등, Molecular Cloning, 제 2판, Current Protocols in Molecular Biology(1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausubel 등, Short Protocols in Molecular Biology, 제 3판, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology(1995), John Wiley & Sons 등]을 이용하여 상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 조제하고, 그 폴리뉴클레오티드를 발현 벡터에 장착해서 숙주 세포에 도입하고, 그 숙주 세포 중에서 폴리펩티드를 생산시킴으로써 목적으로 하는 인간 CAPRIN-1 단백질이나 그 폴리펩티드 단편을 얻을 수도 있다.

상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드는 공지의 유전자 공학적 방법이나 시판의 핵산 합성기를 사용한 상법에 의해 용이하게 조제할 수 있다. 예를 들면, 인간 CAPRIN-1 유전자의 염기서열을 포함하는 DNA는 인간 염색체 DNA 또는 cDNA 라이브러리를 주형으로 해서 사용하고, 그 염기서열을 증폭시킬 수 있도록 설계한 1쌍의 프라이머를 이용하여 PCR을 행함으로써 조제할 수 있다. PCR의 반응 조건은 적당하게 설정할 수 있고, 예를 들면 내열성 DNA 폴리메라아제(예를 들면, Taq 폴리메라아제, Pfu 폴리메라아제 등) 및 Mg^{2 +} 함유 PCR 버퍼를 이용하여 94℃에서 30초간(변성), 55℃에서 30초∼1분간(어닐링), 72℃에서 2분간(신장)으로 이루어지는 반응 행정을 1사이클로 해서, 예를 들면 30사이클 행한 후 72℃에서 7분간 반응시키는 조건 등을 들 수 있지만, 이것에 한정되지 않는다. PCR의 방법, 조건 등에 대해서는, 예를 들면 Ausubel 등, Short Protocols in Molecular Biology, 제 3판, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology(1995), John Wiley & Sons(특히, 제 15장)에 기재되어 있다.

또한, CAPRIN-1 유전자의 염기서열 및 CAPRIN-1 단백질의 아미노산 서열 정보에 의거하여 적당한 프로브나 프라이머를 조제하고, 그것을 이용하여 인간 등의 cDNA 라이브러리를 스크리닝함으로써 원하는 DNA를 단리할 수 있다. cDNA 라이브러리는 CAPRIN-1의 단백질을 발현하고 있는 세포, 기관 또는 조직으로부터 제작하는 것이 바람직하다. 그러한 세포나 조직의 예는 정소, 백혈병, 유방암, 림프종, 뇌종양, 폐암, 췌장암, 대장암 등의 암 또는 종양으로부터 유래되는 세포 또는 조직이다. 상기한 프로브 또는 프라이머의 조제, cDNA 라이브러리의 구축, cDNA 라이브러리의 스크리닝, 및 목적 유전자의 클로닝 등의 조작은 당업자에게 기지이며, 예를 들면 Sambrook 등, Molecular Cloning, 제 2판, Current Protocols in Molecular Biology(1989), Ausbel 등(상기) 등에 기재된 방법에 준해서 행할 수 있다. 이렇게 하여 얻어진 DNA로부터 인간 CAPRIN-1 단백질이나 그 부분 펩티드를 코드하는 DNA를 얻을 수 있다.

발현 벡터를 도입하는 상기 숙주 세포로서는 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 세포이면 어떠한 것이라도 좋고, 원핵 세포의 예로서는 대장균 등, 진핵 세포의 예로서는 원숭이 신장 세포 COS1, 차이니즈 햄스터 난소 세포 CHO 등의 포유동물 세포, 인간 태아 신장 세포주 HEK293, 마우스 배아 피부 세포주 NIH3T3, 출아 효모, 분열 효모 등의 효모 세포, 누에 세포, 아프리카 발톱개구리 난세포 등을 들 수 있지만, 이것들에 한정되지 않는다.

숙주 세포로서 원핵 세포를 사용할 경우, 발현 벡터로서는 원핵 세포 중에서 복제 가능한 오리진, 프로모터, 리보솜 결합 부위, 멀티클로닝사이트, 터미네이터, 약제 내성 유전자, 영양 요구성 상보 유전자 등을 갖는 발현 벡터를 사용한다. 대장균용 발현 벡터로서는 pUC계, pBluescriptII, pET 발현 시스템, pGEX 발현 시스템 등을 예시할 수 있다. 상기 폴리펩티드를 코드하는 DNA를 이러한 발현 벡터에 장착하고 그 벡터에서 원핵 숙주 세포를 형질 전환한 뒤, 얻어진 형질 전환체를 배양하면, 상기 DNA가 코드하고 있는 폴리펩티드를 원핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 이때, 그 폴리펩티드를 다른 단백질과의 융합 단백질로서 발현시킬 수도 있다.

숙주 세포로서 진핵 세포를 사용할 경우, 발현 벡터로서는 프로모터, 스플라이싱 영역, 폴리(A) 부가 부위 등을 갖는 진핵 세포용 발현 벡터를 사용한다. 그러한 발현 벡터로서는 pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV 벡터, pRS, pcDNA3, pYES2 등을 예시할 수 있다. 상기와 마찬가지로, 상기 폴리펩티드를 코드하는 DNA를 이러한 발현 벡터에 장착하고 그 벡터에서 진핵 숙주 세포를 형질 전환한 뒤, 얻어진 형질 전환체를 배양하면 상기 DNA가 코드하고 있는 폴리펩티드를 진핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 발현 벡터로서 pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1 등을 사용했을 경우에는 His 태그[예를 들면, (His)₆∼(His)₁₀], FLAG 태그, myc 태그, HA 태그, GFP 등 각종 태그를 부가한 융합 단백질로서 상기 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다.

발현 벡터의 숙주 세포로의 도입은 전기 천공법, 인산 칼슘법, 리포솜법, DEAE 덱스트란법, 마이크로인젝션, 바이러스 감염, 리포펙션, 세포막 투과성 펩티드와의 결합 등의 주지의 방법을 사용할 수 있다.

숙주 세포로부터 목적의 폴리펩티드를 단리 정제하기 위해서는 공지의 분리 조작을 조합시켜서 행할 수 있다. 예를 들면, 요소 등의 변성제나 계면활성제에 의한 처리, 초음파 처리, 효소 소화, 염석이나 용매 분별 침전법, 투석, 원심 분리, 한외 여과, 겔 여과, SDS-PAGE, 등전점 전기영동, 이온 교환 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피 등을 들 수 있지만, 이것들에 한정되지 않는다.

본 발명에 의한 항체를 제작하기 위해서, 이상과 같이 해서 제작한 항원을 후술과 같이 감작 항원으로서 사용할 수 있다.

<항체의 구조>

항체(면역 글로블린)는 통상 적어도 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 헤테로 다량체 당단백질이다. IgM은 별도로 하고, 면역 글로블린은 2개의 동일한 경(L)쇄 및 2개의 동일한 중(H)쇄로 구성되는 약 150kDa의 헤테로 4량체 당단백질이다. 전형적으로는 각각의 경쇄는 1개의 디술피드 공유 결합에 의해 중쇄에 연결되어 있지만, 여러 가지 면역 글로블린 아이소타입의 중쇄간의 디술피드 결합의 수는 변동한다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 쇄 내 디술피드 결합도 갖는다. 각각의 중쇄는 한쪽 끝에 가변 도메인(VH영역)을 갖고, 그것에 몇개의 정상 영역이 계속된다. 각각의 경쇄는 가변 도메인(VL영역)을 갖고, 그 반대의 끝에 1개의 정상 영역을 갖는다. 경쇄의 정상 영역은 중쇄의 최초의 정상 영역과 정렬되어 있고, 또한 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬되어 있다. 항체의 가변 도메인은 특정 영역이 상보성 결정 영역(CDR)이라고 불리는 특정 가변성을 나타내서 항체에 결합 특이성을 부여한다. 가변 영역의 상대적으로 보존되어 있는 부분은 프레임워크 영역(FR)이라고 불리고 있다. 완전한 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 3개의 CDR에 의해 연결된 4개의 FR을 포함한다. 3개의 CDR은 중쇄에서는 그 N말부터 순차적으로 CDRH1, CDRH2, CDRH3, 마찬가지로 경쇄에서는 CDRL1, CDRL2, CDRL3이라고 불리고 있다. 항체의 항원으로의 결합 특이성에는 CDRH3이 가장 중요하다. 또한, 각 쇄의 CDR은 FR영역에 의해 근접한 상태로 함께 유지되고, 다른쪽 쇄로부터의 CDR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. 정상 영역은 항체가 항원에 결합하는 것에 직접 기여하지 않지만, 여러 가지 이펙터 기능, 예를 들면 항체 의존성 세포성 세포 장해 활성(ADCC)으로의 관여, Fcγ 수용체로의 결합을 통한 식작용, 신생아 Fc 수용체(FcRn)를 통한 반감기/클리어런스 속도, 보체 캐스케이드의 C1q 구성 요소를 통한 보체 의존성 세포 장해(CDC)를 나타낸다.

<항체의 제작>

본 발명에 있어서의 항CAPRIN-1 항체란 CAPRIN-1 단백질의 전체 길이 또는 그 단편과 면역학적 반응성을 갖는 항체를 의미한다. 특히, 본 발명의 항CAPRIN-1 항체는 CAPRIN-1 단백질의 부분 폴리펩티드(CAPRIN-1 부분 폴리펩티드)이고 에피토프를 포함하는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드, 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 면역학적으로 결합하는 항체이다. 본 발명의 항체는 바람직하게는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 중의 연속하는 약 7∼12 아미노산, 예를 들면 연속하는 8∼11 아미노산으로 이루어지는 에피토프를 인식한다. 본 발명의 이 항CAPRIN-1 항체는 전장 CAPRIN-1 단백질과 특이적으로 결합할 수 있다. 본 발명의 항체는 CAPRIN-1 단백질 또는 그 단편을 항원으로 해서 얻어진 항체 중에서, 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 면역학적으로 결합하는 항체를 상법에 의해 선택함으로써 취득할 수 있다.

여기에서, 「면역학적 반응성」이란 생체 내에서 항체와 CAPRIN-1 항원(CAPRIN-1 단백질의 전체 길이 또는 그 부분 폴리펩티드)이 결합하는 특성을 의미한다. 본 발명의 항체의 CAPRIN-1로의 이러한 결합을 통해서 종양 세포를 장해(예를 들면 사멸, 억제 또는 퇴축)하는 기능이 발휘된다. 본 발명의 항체는 CAPRIN-1 단백질과 결합해서 종양, 예를 들면 유방암, 신장암, 췌장암, 대장암(예를 들면 결장암), 폐암, 뇌종양, 위암, 자궁경암, 난소암, 전립선암, 방광암, 식도암, 백혈병, 림프종, 섬유육종, 비만 세포종 또는 멜라노마 등을 장해할 수 있다.

본 발명의 항체는 임의의 종류(타입)의 항체이면 좋다. 본 발명의 항체의 종류의 예로서는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 합성 항체, 다중 특이성 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체, 항체 프래그먼트[예를 들면, Fab, F(ab')₂, Fv] 등을 포함한다. 또한, 항체는 면역 글로블린 분자의 임의의 클래스, 예를 들면 IgG, IgE, IgM, IgA, IgD 및 IgY, 또는 임의의 서브 클래스, 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 등이다.

항체는 또한 글리코실화 이외에, 아세틸화, 포르밀화, 아미드화, 인산화, 또는 페그(PEG)화 등에 의해 수식되어 있어도 좋다.

이하에, 여러 가지 항체의 제작예를 나타낸다.

항체가 모노클로날 항체일 때에는, 예를 들면 CAPRIN-1을 발현하는 유방암 세포주 SK-BR-3 등을 마우스에 투여해서 면역하고, 동 마우스로부터 비장을 추출하여 세포를 분리한 뒤, 그 세포와 마우스 미엘로마 세포를 융합시켜 얻어진 융합 세포(하이브리도마) 중에서 암 세포 증식 억제 작용을 갖는 항체를 산생하는 클론을 선택한다. 또는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 결합하는 항체를 산생하는 클론을 선택해도 좋다. 암 세포 증식 억제 작용을 갖는 모노클로날 항체 산생 하이브리도마 또는 서열 번호 5 등의 폴리펩티드에 대한 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마를 단리하고, 상기 하이브리도마를 배양하여 배양 상청으로부터 일반적인 어피니티 정제법에 의해 항체를 정제함으로써 본 발명의 항체를 조제하는 것이 가능하다.

모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마는, 예를 들면 이하와 같이 해서도 제작할 수 있다. 우선, 공지의 방법에 따라서 감작 항원을 동물에게 면역한다. 일반적 방법으로서, 감작 항원을 포유동물의 복강 내 또는 피하에 주사함으로써 행해진다. 구체적으로는 감작 항원을 PBS(Phosphate-Buffered Saline)나 생리식염수 등으로 적당량으로 희석, 현탁함으로써 소망에 의해 통상의 아쥬반트, 예를 들면 프로인트 완전 아쥬반트를 적당량 혼합하고 유화 후, 포유동물에게 4∼21일마다 수회 투여한다. 또한, 감작 항원 면역시에 적당한 담체를 사용할 수도 있다.

이와 같이, 포유동물을 면역하고, 혈청 중에 원하는 항체 레벨이 상승하는 것을 확인한 후에 포유동물로부터 면역 세포를 채취하여 세포 융합에 첨가하지만, 바람직한 면역 세포로서는 특히 비장 세포를 들 수 있다.

상기 면역 세포와 융합되는 다른쪽의 친세포로서, 포유동물의 미엘로마 세포를 사용한다. 이 미엘로마 세포로서는 공지의 여러 가지 세포주, 예를 들면 P3U1(P3-X63Ag8U1), P3(P3x63Ag8.653)[J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550], P3x63Ag8U.1[Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7], NS-1[Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-519], MPC-11[Margulies. D.H. et al., Cell (1976) 8, 405-415], SP2/0[Shulman, M. et al., Nature (1978) 276, 269-270], FO[deSt. Groth, S.F. et al., J. Immunol. Methods (1980) 35, 1-21], S194[Trowbridge, I.S. J. Exp. Med. (1978) 148, 313-323], R210[Galfre, G. et al., Nature (1979) 277, 131-133] 등이 바람직하게 사용된다.

상기 면역 세포와 미엘로마 세포의 세포 융합은 기본적으로는 공지의 방법, 예를 들면 쾰러와 밀스테인의 방법[Kohler, G. and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46] 등에 준해서 행할 수 있다.

보다 구체적으로는, 상기 세포 융합은 예를 들면 세포 융합 촉진제의 존재 하에 통상의 영양 배양액 중에서 실시된다. 융합 촉진제로서는, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜(PEG), 센다이 바이러스(HVJ) 등이 사용되고, 또한 소망에 의해 융합 효율을 높이기 위해서 디메틸술폭시드 등의 보조제를 첨가 사용할 수도 있다.

면역 세포와 미엘로마 세포의 사용 비율은 임의로 설정할 수 있다. 예를 들면, 미엘로마 세포에 대하여 면역 세포를 1∼10배로 하는 것이 바람직하다. 상기 세포 융합에 사용하는 배양액으로서는, 예를 들면 상기 미엘로마 세포주의 증식에 바람직한 RPMI1640 배양액, MEM 배양액, 그 밖에 이러한 종류의 세포 배양에 사용되는 통상의 배양액이 사용 가능하고, 또한 소태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보충액을 병용할 수도 있다.

세포 융합에서는 상기 면역 세포와 미엘로마 세포의 소정량을 상기 배양액 중에서 잘 혼합하고, 미리 37℃ 정도로 가온한 PEG 용액(예를 들면, 평균 분자량 1000∼6000 정도)을 통상 30∼60%(w/v)의 농도로 첨가하고 혼합함으로써 목적으로 하는 하이브리도마를 형성한다. 계속해서, 적당한 배양액을 순차적으로 첨가하고 원심해서 상청을 제거하는 조작을 반복함으로써 하이브리도마의 생육에 바람직하지 못한 세포 융합제 등을 제거하는 것이 바람직하다.

이렇게 하여 얻어진 하이브리도마는 통상의 선택 배양액, 예를 들면 HAT 배양액(히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함하는 배양액)으로 배양함으로써 선택된다. 상기 HAT 배양액에서의 배양은 목적으로 하는 하이브리도마 이외의 세포(비융합 세포)가 사멸하는 데에 충분한 시간(통상, 수 일∼수 주간) 계속한다. 이어서, 통상의 한계 희석법을 실시하고, 목적으로 하는 항체를 산생하는 하이브리도마의 스크리닝 및 단일 클로닝을 행한다.

또한, 인간 이외의 동물에게 항원을 면역해서 상기 하이브리도마를 얻는 것 외에, 인간 림프구, 예를 들면 EB 바이러스에 감염된 인간 림프구를 in vitro에서 단백질, 단백질 발현 세포 또는 그 용해물로 감작하고, 감작 림프구를 인간 유래의 영구 분열능을 갖는 미엘로마 세포, 예를 들면 U266(등록 번호 TIB196)과 융합시켜 원하는 활성(예를 들면, 세포 증식 억제 활성)을 갖는 인간 항체를 산생하는 하이브리도마를 얻을 수도 있다.

이렇게 하여 제작되는 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마는 통상의 배양액 중에서 계대 배양하는 것이 가능하고, 또한 액체 질소 중에서 장기 보존하는 것이 가능하다.

즉, 원하는 항원이나 원하는 항원을 발현하는 세포를 감작 항원으로서 사용하고, 이것을 통상의 면역 방법에 따라서 면역하여 얻어지는 면역 세포를 통상의 세포 융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시키고, 통상의 스크리닝법에 의해 모노클로날인 항체 산생 세포(하이브리도마)를 스크리닝함으로써 제작할 수 있다.

본 발명에서 사용 가능한 항체의 다른 예가 폴리클로날 항체이다. 폴리클로날 항체는, 예를 들면 다음과 같이 해서 얻을 수 있다.

천연의 CAPRIN-1 단백질, 또는 GST 등과의 융합 단백질로서 대장균 등의 미생물에 있어서 발현시킨 재조합 CAPRIN-1 단백질, 또는 그 부분 펩티드를 마우스, 인간 항체 산생 마우스, 토끼 등의 소동물에게 면역하여 혈청을 얻는다. 또는 CAPRIN-1의 단편인 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드(바람직하게는 상기 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드), 또는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 중의 연속하는 약 7∼12 아미노산, 예를 들면 연속하는 8∼11 아미노산으로 이루어지는 에피토프를 포함하는(바람직하게는 상기 에피토프로 이루어지는) 폴리펩티드를 감작 항원으로 해서 포유동물에게 면역하여 혈청을 얻을 수도 있다. 이들 혈청을, 예를 들면 유안 침전, 프로틴A, 프로틴G 컬럼, DEAE 이온 교환 크로마토그래피, CAPRIN-1 단백질이나 합성 펩티드를 커플링한 어피니티 컬럼 등에 의해 정제함으로써 항CAPRIN-1 폴리클로날 항체를 조제할 수 있다. 본 발명의 폴리클로날 항체에는 인간 항체 산생 동물(예를 들면, 마우스)에게 CAPRIN-1 단백질을 면역해서 얻어지는 항체가 포함된다.

여기에서, 인간 항체 산생 마우스로서는, 예를 들면 KM마우스(키린 파마/Medarex) 및 Xeno마우스(Amgen)가 알려져 있다(예를 들면, 국제 공개 제 WO02/43478호, 동 제 WO02/092812호 등). 이러한 마우스를 CAPRIN-1 단백질 또는 그 단편으로 면역할 때에는 완전 인간 폴리클로날 항체를 혈액으로부터 얻을 수 있다. 또한, 면역 후의 마우스로부터 비장 세포를 추출하여 미엘로마 세포와의 융합법에 의해 인간형 모노클로날 항체를 제작할 수 있다.

항원의 조제는, 예를 들면 동물 세포를 사용한 방법(일본 특허공표 2007-530068)이나 바큘로 바이러스를 사용한 방법(예를 들면, 국제 공개 제 WO98/46777호 등) 등에 준해서 행할 수 있다. 항원의 면역원성이 낮을 경우에는 알부민 등의 면역원성을 갖는 거대 분자와 결합시켜서 면역을 행하면 좋다. 항원은 아쥬반트와 함께 투여해서 면역해도 좋다.

본 발명의 항체는 또한 그 항체 유전자를 하이브리도마로부터 클로닝하여 적당한 벡터에 장착하고, 이것을 숙주에 도입하여 유전자 재조합 기술을 이용해서 산생시킨 유전자 재조합형 항체로서도 얻을 수 있다(예를 들면, Carl, A.K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 참조). 구체적으로는 하이브리도마의 mRNA로부터 역전사 효소를 이용하여 항체의 가변 영역(V영역)의 cDNA를 합성한다. 목적으로 하는 항체의 V영역을 코드하는 DNA가 얻어지면, 이것을 원하는 항체 정상 영역(C영역)을 코드하는 DNA와 연결하고, 이것을 발현 벡터에 장착한다. 또는 항체의 V영역을 코드하는 DNA를 항체 C영역의 DNA를 포함하는 발현 벡터에 장착해도 좋다. 발현 제어 영역, 예를 들면 인핸서, 프로모터의 제어 하에서 발현되도록 발현 벡터에 도입한다. 이어서, 이 발현 벡터에 의해 숙주 세포를 형질 전환하여 항체를 발현시킬 수 있다.

본 발명의 항CAPRIN-1 항체는 모노클로날 항체인 것이 바람직하다. 그러나, 폴리클로날 항체, 유전자 개변 항체(키메라 항체, 인간화 항체 등) 등이라도 좋다.

모노클로날 항체에는 인간 모노클로날 항체, 비인간 동물 모노클로날 항체(예를 들면, 마우스 모노클로날 항체, 래트 모노클로날 항체, 토끼 모노클로날 항체, 닭 모노클로날 항체 등), 키메라 모노클로날 항체 등이 포함된다. 모노클로날 항체는 CAPRIN-1 단백질 또는 그 단편으로 면역한 비인간 포유동물(예를 들면, 마우스, 인간 항체 산생 마우스, 닭, 토끼 등)로부터의 비장 세포와 미엘로마 세포의 융합에 의해 얻어진 하이브리도마를 배양함으로써 제작될 수 있다. 키메라 항체는 다른 동물 유래의 서열을 조합시켜서 제작되는 항체이며, 예를 들면, 마우스 항체의 중쇄, 경쇄의 가변 영역과 인간 항체의 중쇄, 경쇄의 정상 영역으로 이루어지는 항체 등이다. 키메라 항체의 제작은 공지의 방법을 이용하여 행할 수 있고, 예를 들면 항체 V영역을 코드하는 DNA와 인간 항체 C영역을 코드하는 DNA를 연결하고, 이것을 발현 벡터에 장착해서 숙주에 도입하여 산생시킴으로써 얻어진다.

또한, 후술의 실시예에 기재된 방법에 의해 항종양 효과를 갖는 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 CAPRIN-1 부분 폴리펩티드와 면역학적 반응성을 갖는 모노클로날 항체가 제작된다.

인간화 항체는 재구성(reshaped) 인간 항체라고도 칭해지는 개변 항체이다. 인간화 항체는 면역 동물 유래의 항체의 CDR을 인간 항체의 상보성 결정 영역으로 이식함으로써 구축된다. 그 일반적인 유전자 재조합 방법도 알려져 있다.

구체적으로는, 예를 들면 마우스 항체, 토끼 항체나 닭 항체의 CDR과 인간 항체의 프레임워크 영역(framework region; FR)을 연결하도록 설계한 DNA 서열을, 말단부에 오버랩하는 부분을 갖도록 제작한 수 개의 올리고뉴클레오티드로부터 PCR법에 의해 합성한다. 얻어진 DNA를 인간 항체 정상 영역을 코드하는 DNA와 연결하고, 이어서 발현 벡터에 장착하고, 이것을 숙주에 도입하여 산생시킴으로써 얻어진다(유럽 특허출원 공개 제 EP239400호, 국제 공개 제 WO96/02576호 참조). CDR을 통해서 연결되는 인간 항체의 FR은 상보성 결정 영역이 양호한 항원 결합 부위를 형성하는 것이 선택된다. 필요에 따라, 재구성 인간 항체의 상보성 결정 영역이 적절한 항원 결합 부위를 형성하도록 항체의 가변 영역에 있어서의 프레임워크 영역의 아미노산을 치환해도 좋다(Sato K. et al., Cancer Research 1993, 53: 851-856). 또한, FR은 다른 클래스 또는 서브 클래스의 인간 항체 유래의 프레임워크 영역과 치환되어도 좋다(국제 공개 제 WO99/51743호 참조).

키메라 항체나 인간화 항체를 제작한 후에, 가변 영역(예를 들면 FR)이나 정상 영역 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하거나 해도 좋다.

아미노산의 치환은, 예를 들면 15 미만, 10 미만, 8 이하, 7 이하, 6 이하, 5 이하, 4 이하, 3 이하, 또는 2 이하의 아미노산, 바람직하게는 1∼5 아미노산, 보다 바람직하게는 1 또는 2 아미노산의 치환이며, 치환 항체는 미치환 항체와 기능적으로 동등해야 한다. 치환은 보존적 아미노산 치환이 바람직하고, 이것은 전하, 측쇄, 극성, 방향족성 등의 성질이 유사한 아미노산간의 치환이다. 성질이 유사한 아미노산은, 예를 들면 염기성 아미노산(아르기닌, 리신, 히스티딘), 산성 아미노산(아스파르트산, 글루탐산), 무전하 극성 아미노산(글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신), 무극성 아미노산(류신, 이소류신, 알라닌, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 메티오닌), 분기쇄 아미노산(류신, 발린, 이소류신), 방향족 아미노산(페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 히스티딘) 등으로 분류할 수 있다.

항체 수식물로서는, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 각종 분자와 결합한 항체를 들 수 있다. 본 발명의 항체 수식물에 있어서는 결합되는 물질은 한정되지 않는다. 이러한 항체 수식물을 얻기 위해서는 얻어진 항체에 화학적인 수식을 실시함으로써 얻을 수 있다. 이들 방법은 이 분야에 있어서 이미 확립되어 있다.

여기에서, 「기능적으로 동등」이란 대상이 되는 항체가 본 발명의 항체와 마찬가지의 생물학적 또는 생화학적 활성, 구체적으로는 종양을 장해하는 기능을 갖는 것, 인간으로의 적용시에 거절 반응을 본질적으로 일으키지 않는 것 등을 가리킨다. 이러한 활성으로서는, 예를 들면 세포 증식 억제 활성, 또는 결합 활성을 예시할 수 있다.

어떤 폴리펩티드와 기능적으로 동등한 폴리펩티드를 조제하기 위한, 당업자에게 잘 알려진 방법으로서는 폴리펩티드에 변이를 도입하는 방법이 알려져 있다. 예를 들면, 당업자라면 부위 특이적 변이 유발법[Hashimoto-Gotoh, T. et al., (1995) Gene 152, 271-275, Zoller, MJ., and Smith, M. (1983) Methods Enzymol. 100, 468-500, Kramer, W. et al., (1984) Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456, Kramer, W. and Fritz, HJ., (1987) Methods Enzymol. 154, 350-367, Kunkel, TA., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 488-492, Kunkel (1988) Methods Enzymol. 85, 2763-2766] 등을 이용하여 본 발명의 항체에 적당하게 변이를 도입함으로써 그 항체와 기능적으로 동등한 항체를 조제할 수 있다.

상기 CAPRIN-1 단백질의 에피토프 또는 그것을 포함하는 CAPRIN-1 단편 폴리펩티드를 인식하는 항체는 당업자에게 공지의 방법에 의해 얻는 것이 가능하다. 예를 들면, 상기에서 얻어지는 암 세포 증식 억제 작용을 갖는 항CAPRIN-1 항체가 인식하는 CAPRIN-1 단백질의 에피토프를 통상의 방법(예를 들면, 에피토프 매핑이나 후술에 있는 에피토프의 동정의 방법 등)에 의해 결정하고, 그 에피토프에 포함되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 면역원으로 해서 항체를 제작하는 방법이나, 통상의 방법으로 제작된 항체의 에피토프를 결정하고, 항CAPRIN-1 항체와 에피토프가 같은 항체를 선택하는 방법 등에 의해 얻을 수 있다. 여기에서, 「에피토프」는 포유동물, 바람직하게는 인간에게 있어서 항원성 또는 면역원성을 갖는 폴리펩티드 단편을 가리키고, 그 최소 단위는 약 7∼12 아미노산, 바람직하게는 8∼11 아미노산으로 이루어진다.

본 발명의 항체는 CAPRIN-1과 면역학적 반응성을 갖는 항체, 또는 CAPRIN-1을 특이적으로 인식하는 항체, 또는 CAPRIN-1과 특이적으로 결합하는 항체이며, 암에 대한 세포 장해 활성, 또는 종양 증식 억제 작용을 나타내는 항체이다. 그 항체는 그것을 투여하는 대상 동물에게 있어서 거절 반응이 거의 또는 완전히 회피되는 구조를 갖는 항체인 것이 바람직하다. 그러한 항체로서는, 예를 들면 대상 동물이 인간일 경우 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체(예를 들면, 인간-마우스 키메라 항체), 단쇄 항체, 2중 특이성 항체 등을 들 수 있다. 이들 항체는 중쇄 및 경쇄의 가변 영역이 인간 항체 유래의 것이거나, 또는 중쇄 및 경쇄의 가변 영역이 비인간 동물 항체 유래의 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3)과 인간 항체 유래의 프레임워크 영역(FR1, FR2, FR3 및 FR4)으로 이루어지는 것이거나, 또는 중쇄 및 경쇄의 가변 영역이 비인간 동물 항체 유래의 것이고, 또한 중쇄 및 경쇄의 정상 영역이 인간 항체 유래의 것인 재조합형 항체이다. 바람직한 항체는 앞의 2가지의 항체이다.

이들 재조합형 항체는 다음과 같이 해서 제작할 수 있다. 하이브리도마 등의 항체 산생 세포로부터 인간 CAPRIN-1에 대한 모노클로날 항체(예를 들면, 인간 모노클로날 항체, 마우스 모노클로날 항체, 래트 모노클로날 항체, 토끼 모노클로날 항체, 닭 모노클로날 항체 등)를 코드하는 DNA를 클로닝하고, 이것을 주형으로 해서 그 항체의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA를 RT-PCR법 등에 의해 제작하고, 예를 들면 Kabat EU numbering system[Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5thEd. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)]에 의거하여 경쇄 및 중쇄의 각 가변 영역의 서열, 또는 각 CDR1, CDR2, CDR3의 서열, 또는 각 FR1, FR2, FR3, FR4의 서열을 결정할 수 있다.

또한, 이들 각 가변 영역을 코드하는 DNA 또는 각 CDR을 코드하는 DNA를 유전자 재조합 기술[Sambrook 등, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)] 또는 DNA 합성기를 이용하여 제작한다. 여기에서, 상기 인간 모노클로날 항체 산생 하이브리도마는 인간 항체 산생 동물(예를 들면, 마우스)에 인간 CAPRIN-1을 면역한 뒤, 그 면역 동물로부터 절제한 비장 세포와 미엘로마 세포를 융합시킴으로써 제작할 수 있다. 이것과는 별도로, 필요에 따라서 유전자 재조합 기술 또는 DNA 합성기를 이용하여 인간 항체 유래의 경쇄 또는 중쇄의 가변 영역 및 정상 영역을 코드하는 DNA를 제작한다.

인간화 항체의 경우에는 인간 항체 유래의 경쇄 또는 중쇄의 가변 영역을 코드하는 DNA 중의 CDR 코딩 서열을 그것들에 대응하는 인간 이외의 동물(예를 들면, 마우스, 래트, 토끼, 닭 등) 유래의 항체의 CDR 코딩 서열과 치환한 DNA를 제작하고, 그것에 의해서 얻어진 DNA를 각각 인간 항체 유래의 경쇄 또는 중쇄의 정상 영역을 코드하는 DNA와 연결함으로써 인간화 항체를 코드하는 DNA를 제작할 수 있다.

키메라 항체의 경우에는 인간 이외의 동물(예를 들면, 마우스, 래트, 토끼, 닭 등) 유래의 항체의 경쇄 또는 중쇄의 가변 영역을 코드하는 DNA를 각각 인간 항체 유래의 경쇄 또는 중쇄의 정상 영역을 코드하는 DNA와 연결함으로써 키메라 항체를 코드하는 DNA를 제작할 수 있다.

단쇄 항체의 경우에는 이 항체는 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 링커를 통해서 직선상으로 연결된 항체이며, 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA, 링커를 코드하는 DNA, 및 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA를 결합함으로써 단쇄 항체를 코드하는 DNA를 제작할 수 있다. 여기에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 모두 인간 항체 유래의 것이거나, 또는 CDR만 인간 이외의 동물(예를 들면, 마우스, 래트, 토끼, 닭 등) 유래의 항체의 CDR에 의해 치환된 인간 항체 유래의 것이다. 또한, 링커는 12∼19 아미노산으로 이루어지고, 예를 들면 15 아미노산의 (G₄S)₃[G.-B. Kim 등, Protein Engineering Design and Selection 2007, 20(9): 425-432]을 들 수 있다.

2중 특이성 항체(예를 들면, diabody)의 경우에는, 이 항체는 2개의 다른 에피토프와 특이적으로 결합 가능한 항체이며, 예를 들면 중쇄 가변 영역A를 코드하는 DNA, 경쇄 가변 영역B를 코드하는 DNA, 중쇄 가변 영역B를 코드하는 DNA, 및 경쇄 가변 영역A를 코드하는 DNA를 이 순서로 결합함(단, 경쇄 가변 영역B를 코드하는 DNA와 중쇄 가변 영역B를 코드하는 DNA는 상기와 같은 링커를 코드하는 DNA를 통해서 결합됨)으로써 2중 특이성 항체를 코드하는 DNA를 제작할 수 있다. 여기에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 모두 인간 항체 유래의 것이거나, 또는 CDR만 인간 이외의 동물(예를 들면, 마우스, 래트, 토끼, 닭 등) 유래의 항체의 CDR에 의해 치환된 인간 항체 유래의 것이다.

상기한 바와 같이 해서 제작된 재조합 DNA를 1개 또는 복수의 적당한 벡터에 장착하고, 이것을 숙주 세포(예를 들면, 포유동물 세포, 효모 세포, 곤충 세포 등)에 도입하여 (공)발현시킴으로써 재조합형 항체를 제작할 수 있다(P.J. Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean., Monoclonal Antibodies., 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS; J.W. Goding., Monoclonal Antibodies: principles and practice., 1993 ACADEMIC PRESS).

상기 방법에 의해 제작되는 본 발명의 항체로서는, 예를 들면 후술의 실시예에서 취득된 이하의 항체(a)를 들 수 있다.

(a) 서열 번호 8, 9 및 10의 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 12, 13 및 14의 상보성 결정 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체(예를 들면, 서열 번호 11의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 15의 경쇄 가변 영역으로 구성되는 항체).

여기에서, 서열 번호 8, 9 및 10에 나타내는 아미노산 서열은 각각 마우스 유래 항체의 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3이고, 또한 서열 번호 12, 13 및 14에 나타내는 아미노산 서열은 각각 마우스 유래 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3이다.

또한, 본 발명의 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체 또는 2중 특이성 항체는, 예를 들면 이하의 항체 (i)∼(iii)일 수 있다.

(i) 각각 서열 번호 8, 9 및 10의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, CDR2와 CDR3 및 인간 항체 유래의 프레임워크 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역과, 각각 서열 번호 12, 13 및 14의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, CDR2와 CDR3 및 인간 항체 유래의 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체.

(ii) 각각 서열 번호 8, 9 및 10의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, CDR2와 CDR3 및 인간 항체 유래의 프레임워크 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역과 인간 항체 유래의 중쇄 정상 영역을 포함하는 중쇄와, 각각 서열 번호 12, 13 및 14의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, CDR2와 CDR3 및 인간 항체 유래의 프레임워크 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역과 인간 항체 유래의 경쇄 정상 영역을 포함하는 경쇄를 포함해서 이루어지는 항체.

(iii) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역과 인간 항체 유래의 중쇄 정상 영역을 포함하는 중쇄와, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과 인간 항체 유래의 경쇄 정상 영역을 포함하는 경쇄를 포함해서 이루어지는 항체.

또한, 인간 항체 중쇄 및 경쇄의 정상 영역 및 가변 영역의 서열은, 예를 들면 NCBI(미국: GenBank, UniGene 등)로부터 입수 가능하고, 예를 들면 인간 IgG1 중쇄 정상 영역에 대해서는 등록 번호 J00228, 인간 IgG2 중쇄 정상 영역에 대해서는 등록 번호 J00230, 인간 IgG3 중쇄 정상 영역에 대해서는 등록 번호 X03604, 인간 IgG4 중쇄 정상 영역에 대해서는 등록 번호 K01316, 인간 경쇄 κ 정상 영역에 대해서는 등록 번호 V00557, X64135, X64133 등, 인간 경쇄 λ 정상 영역에 대해서는 등록 번호 X64132, X64134 등의 서열을 참조할 수 있다.

상기 항체는 바람직하게는 세포 장해 활성을 갖고 있고, 이것에 의해 항종양 효과를 발휘할 수 있다.

또한, 상기 항체에 있어서의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역이나 CDR의 특정 서열은 단순히 예시를 목적으로 한 것이며, 특정 서열에 한정되지 않는 것은 명확하다. 인간 CAPRIN-1에 대한 다른 인간 항체 또는 비인간 동물 항체(예를 들면, 마우스 항체)를 산생할 수 있는 하이브리도마를 제작하고, 하이브리도마가 산생하는 모노클로날 항체를 회수하여 인간 CAPRIN-1과의 면역학적 결합성 및 세포 장해 활성을 지표로 해서 목적의 항체인지의 여부를 판정한다. 그것에 의해서 목적의 모노클로날 항체 산생 하이브리도마를 식별한 뒤, 상기한 바와 같이 그 하이브리도마로부터 목적의 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 코드하는 DNA를 제작해 서열 결정하고, 그 DNA를 다른 항체의 제작을 위해서 이용한다.

또한, 상기 항체는 CAPRIN-1을 특이적으로 인식한다고 하는 특이성을 갖는 한 각 항체의 특히 프레임워크 영역의 서열 및/또는 정상 영역의 서열에 있어서 1 또는 수 개의 아미노산의 치환, 결실 또는 부가가 있어도 좋다. 여기에서, 수 개란 바람직하게는 2∼5개, 보다 바람직하게는 2개 또는 3개를 의미한다.

본 발명의 항체의 CAPRIN-1 단백질 또는 그 단편에 대한 친화정수 Ka(k_on/k_off)는 바람직하게는 적어도 10⁷M^-1, 적어도 10⁸M^-1, 적어도 5×10⁸M^-1, 적어도 10⁹M^-1, 적어도 5×10⁹M^-1, 적어도 10¹⁰M^-1, 적어도 5×10¹⁰M^-1, 적어도 10¹¹M^-1, 적어도 5×10¹¹M^-1, 적어도 10¹²M^-1, 또는 적어도 10¹³M^-1이다.

본 발명의 항체는 항종양제와 콘쥬게이트할 수 있다. 항체와 항종양제의 결합은 아미노기, 카르복실기, 히드록시기, 티올기 등과 반응성의 기(예를 들면, 숙신산 이미딜기, 포르밀기, 2-피리딜디티오기, 말레이이미딜기, 알콕시카르보닐기, 히드록시기 등)를 갖는 스페이서를 통해서 행할 수 있다.

항종양제의 예는 문헌 등에서 공지의 하기의 항종양제, 즉 파클리탁셀, 독소루비신, 다우노루비신, 시클로포스파미드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 티오테파, 부술판, 임프로술판, 피포술판, 벤조도파(benzodopa), 카르보퀀, 메투레도파(meturedopa), 우레도파(uredopa), 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드(triethilenethiophosphoramide), 트리메티롤로멜라민(trimethylolomelamine), 불라타신, 불라타시논, 캄토테신, 브리오스타틴, 칼리스타틴(callystatin), 크립토피신1, 크립토피신8, 돌라스타틴, 두오카마이신, 엘루테로빈, 판크라티스타틴, 사르코딕티인(sarcodictyin), 스폰기스타틴, 클로람부실, 클로르나파진(chloRNAphazine), 콜로포스파미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민옥시드히드로클로리드, 메팔란, 노벰비친(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide), 우라실머스타드, 카무스틴, 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴, 칼리체아마이신(calicheamicin), 다이네마이신, 클로드로네이트, 에스페라마이신, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신(authramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카미노마이신, 카지노필린(carzinophilin), 크로모마이신, 닥티노마이신, 데토루비신(detorbicin), 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, 아드리아마이신(adriamycin), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신(marcellomycin), 마이토마이신C, 마이코페놀산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycins), 페플로마이신, 포트피로마이신(potfiromycin), 푸로마이신, 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스, 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin), 데놉테린(denopterin), 프테롭테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 플루다라빈(fludarabine), 6-메르캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌, 안시타빈, 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(azauridine), 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈(enocitabine), 플록수리딘(floxuridine); 안드로겐류, 예를 들면 칼루스테론(calusterone), 프로피온산 드로모스타놀론, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤(testolactone), 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄, 프롤린산(frolinic acid), 아세글라톤, 알도포스파미드글리코시드, 아미노레불린산, 에닐우라실, 암사크린(amsacrine), 베스트라부실(bestrabucil), 비산트렌(bisantrene), 에다트락세이트(edatraxate), 데포파민(defofamine), 데메콜신(demecolcine), 디아지퀀(diaziquone), 엘포르니틴(elfornithine), 아세트산 엘립티늄(elliptinium), 에포틸론(epothilone), 에토글루시드(etoglucid), 렌티난, 로니다민(lonidamine), 마이탄신(maytansine), 안사미토신(ansamitocine), 미토구아존(mitoguazone), 미톡산트론, 모피단몰(mopidanmol), 니트라에린(nitraerine), 펜토스타틴, 페나메트(phenamet), 피라루비신, 로속산트론(losoxantrone), 포도필린산(podophyllinic acid), 2-에틸히드라지드, 프로카바진, 라족산(razoxane), 리족신, 시조피란, 스피로게르마늄(spirogermanium), 테누아존산(tenuazonic acid), 트리아지퀀(triaziquone), 로리딘(roridine)A, 안구이딘(anguidine), 우레탄, 빈데신, 다카바진, 만노무스틴(mannomustine), 미토브로니톨, 미톨락톨(mitolactol), 피포브로만(pipobroman), 가시토신(gacytosine), 독세탁셀, 클로람부실, 겜시타빈(gemcitabine), 6-티오구아닌, 메르캅토푸린, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 빈블라스틴, 에토포시드, 이포스파미드, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 노반트론(novantrone), 테니포시드, 에다트렉세이트(edatrexate), 다우노마이신, 아미노프테린, 크셀로다(xeloda), 이반드로네이트(ibandronate), 이리노테칸, 토포이소머라제 인히비터, 디플루오로메티롤니틴(DMFO), 레티노인산, 카페시타빈(capecitabine), 및 그것들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 유도체를 포함한다.

또한, 본 발명의 항체와 항종양제를 병용 투여함으로써 보다 높은 치료 효과를 얻을 수 있다. 본 방법은 CAPRIN-1이 발현되고 있는 암 환자에 대하여 외과적 수술 전후 어느 쪽에 있어서나 적응할 수 있다. 특히, 수술 후에 종래 항종양제 단독으로 처치되고 있었던 CAPRIN-1이 발현되고 있는 암에 대하여 보다 높은 암 재발 방지나 생존기간의 연장이 얻어진다.

본 발명의 항체와의 병용 투여에 사용되는 항종양제의 예는 문헌 등에서 공지인 하기의 항종양제, 즉 파클리탁셀, 독소루비신, 다우노루비신, 시클로포스파미드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 티오테파, 부술판, 임프로술판, 피포술판, 벤조도파(benzodopa), 카르보퀀, 메투레도파(meturedopa), 우레도파(uredopa), 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드(triethilenethiophosphoramide), 트리메티롤로멜라민(trimethylolomelamine), 불라타신, 불라타시논, 캄토테신, 브리오스타틴, 칼리스타틴(callystatin), 크립토피신1, 크립토피신8, 돌라스타틴, 두오카마이신, 엘루테로빈, 판크라티스타틴, 사르코딕티인(sarcodictyin), 스폰기스타틴, 클로람부실, 클로르나파진(chloRNAphazine), 콜로포스파미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민옥시드히드로클로리드, 메팔란, 노벰비친(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide), 우라실머스타드, 카무스틴, 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴, 칼리체아마이신(calicheamicin), 다이네마이신, 클로드로네이트, 에스페라마이신, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신(authramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카미노마이신, 카지노필린(carzinophilin), 크로모마이신, 닥티노마이신, 데토루비신(detorbicin), 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, 아드리아마이신(adriamycin), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신(marcellomycin), 마이토마이신C, 마이코페놀산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycins), 페플로마이신, 포트피로마이신(potfiromycin), 푸로마이신, 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘(tubercidin), 우베니멕스, 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin), 데놉테린(denopterin), 프테롭테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 플루다라빈(fludarabine), 6-메르캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌, 안시타빈, 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘(azauridine), 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈(enocitabine), 플록수리딘(floxuridine), 칼루스테론(calusterone), 프로피온산 드로모스타놀론, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤(testolactone), 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄, 프롤린산(frolinic acid), 아세글라톤, 알도포스파미드글리코시드, 아미노레불린산, 에닐우라실, 암사크린(amsacrine), 베스트라부실(bestrabucil), 비산트렌(bisantrene), 에다트락세이트(edatraxate), 데포파민(defofamine), 데메콜신(demecolcine), 디아지퀀(diaziquone), 엘포르니틴(elfornithine), 아세트산 엘립티늄(elliptinium), 에포틸론(epothilone), 에토글루시드(etoglucid), 렌티난, 로니다민(lonidamine), 마이탄신(maytansine), 안사미토신(ansamitocine), 미토구아존(mitoguazone), 미톡산트론, 모피단몰(mopida㎚ol), 니트라에린(nitraerine), 펜토스타틴, 페나메트(phenamet), 피라루비신, 로속산트론(losoxantrone), 포도필린산(podophyllinic acid), 2-에틸히드라지드, 프로카바진, 라족산(razoxane), 리족신, 시조피란, 스피로게르마늄(spirogermanium), 테누아존산(tenuazonic acid), 트리아지퀀(triaziquone), 로리딘(roridine)A, 안구이딘(anguidine), 우레탄, 빈데신, 다카바진, 만노무스틴(mannomustine), 미토브로니톨, 미톨락톨(mitolactol), 피포브로만(pipobroman), 가시토신(gacytosine), 독세탁셀, 클로람부실, 겜시타빈(gemcitabine), 6-티오구아닌, 메르캅토푸린, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 빈블라스틴, 에토포시드, 이포스파미드, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 노반트론(novantrone), 테니포시드, 에다트렉세이트(edatrexate), 다우노마이신, 아미노프테린, 크셀로다(xeloda), 이반드로네이트(ibandronate), 이리노테칸, 토포이소머라제 인히비터, 디플루오로메티롤니틴(DMFO), 레티노인산, 카페시타빈(capecitabine), 및 그것들의 약학적으로 허용 가능한 (공지의)염 또는 (공지의)유도체도 포함한다. 상기 중, 특히 시클로포스파미드, 파클리탁셀, 독세탁셀, 비노렐빈이 바람직하게 사용된다.

또는 본 발명의 항체에는 문헌 등에서 공지인 ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³SM, ²¹²Bi, ³²P, ¹⁷⁵Lu, ¹⁷⁶Lu, ⁸⁹Sr, ⁶⁴Cu, ¹¹¹In 등의 방사성 동위체를 결합하는 것도 가능하다[Hideo Saji, YAKUGAKU ZASSHI 128(3) 323-332 8(2008), Jpn]. 방사성 동위체는 종양의 치료나 진단을 위해서 유효한 것이 바람직하다. 이러한 방사성 동위체도 본 발명에 있어서의 항종양제에 포함된다.

<에피토프의 동정>

본 발명의 항체는 이하의 실시예에 나타내어지는 바와 같이, 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열 중의 에피토프와 결합한다. 본 발명의 항체에 대한 에피토프를 확인하는 방법 중 하나로서, 서열 번호 5의 폴리펩티드 중의 에피토프를 플레이트에 고정화하여 본 에피토프에 대한 항체의 반응성을 평가하는 방법을 들 수 있다. 구체적으로는 올리고에틸렌글리콜 등의 스페이서를 통해서 흡전자성 관능기가 부착된 플레이트에 서열 번호 5의 폴리펩티드 중의 에피토프를 반응시켜서 고정화한 것에 본 발명의 항체를 반응시키고, HRP(Horseradish Peroxidase) 등으로 표식된 본 발명의 항체에 결합하는 2차 항체를 반응시킴으로써 항체의 반응성을 평가(본 발명의 항체가 결합하는 에피토프를 확인)할 수 있다. 또한, 플레이트에 고정화하는 서열 번호 5의 폴리펩티드 중의 에피토프는 서열 번호 5의 서열에 있어서 적어도 그 에피토프를 포함하는 서열 그 자체, 또는 그 일부가 수식된 것[예를 들면, N말단 잔기나 C말단 잔기에 수 개의 임의의 아미노산이나 KLH 등의 단백질이 수식된 것, 또는 MAP 단백질에 (폴리)펩티드를 수식한 것 등]이 사용되고, 이들 어느 하나의 (폴리)펩티드에 대하여 본 발명의 항체가 결합하면 좋다.

한편, 본 발명의 항체라도 상기 방법으로 서열 번호 5의 폴리펩티드에 반응하지 않는(에피토프를 확인할 수 없는) 경우가 있을지도 모른다. 그 경우에는 항원과 항체가 결합하기 쉬운 용액 조건 하에서 항원과 항체를 반응시켜 면역 침강법에 의해 항원-항체 복합체를 취득한 후, 항체에 결합한 부분 폴리펩티드를 분리하여 그 아미노산 서열을 조사함으로써 본 발명의 항체의 에피토프를 확인할 수 있다. 또한, 항원은 예를 들면 상기 서열 번호 5의 폴리펩티드 그 자체, 일부 수식된 것, 또는 CAPRIN-1 단백질에서도 상기 방법으로 본 발명의 항체가 반응하는 에피토프가 확인되면 좋다.

<항종양 효과>

본 발명에서 사용되는 항CAPRIN-1 항체에 의한 CAPRIN-1 발현 암 세포에 대한 항종양 효과는 이하의 기서에 의해 일어난다고 생각된다: CAPRIN-1 발현 세포의 이펙터 세포 항체 의존적 세포 장해성(ADCC), 및 CAPRIN-1 발현 세포의 보체 의존적 세포 장해성(CDC). 단, 이 기서에 의해 본 발명의 범위를 한정하는 것은 의도하지 않는다.

또한, 상기 기서에 의한 항종양 효과는 암 세포의 세포 표면에 발현되는 항체가 결합하는 표적 분자의 수에 상관하는 것이 알려져 있다[Niwa R., Clinical Cancer Research 2005 Mar 15; 11(6): 2327-2336]. 암 세포의 세포 표면에 발현되는 표적 분자의 수는 세포 표면의 분자수를 측정할 수 있는 기존의 측정 키트를 이용하여 조사하는 것이 가능하다. 즉, 항체가 결합하는 표적 분자의 수는 표적 분자에 대한 항체 등을 1차 항체로서 암 세포에 반응시키고, 미리 분자수가 알려진 검량선 비드와 함께 형광 표식된 항1차 항체를 반응시켜 샘플의 평균 형광 강도를 측정하고, 검량선을 얻어서 표적 분자의 수를 알 수 있다.

따라서, 본 발명에서 사용되는 항CAPRIN-1 항체의 활성 평가는 이하 실시예에 구체적으로 나타내어지는 바와 같이 생체 밖에서 CAPRIN-1을 발현하는 암 세포에 대하여 상기 ADCC 활성 또는 CDC 활성을 측정하는 것, 또는 본 발명에 있는 항CAPRIN-1 항체를 1차 항체로서 사용했을 경우의 암 세포의 세포 표면에 발현되는 CAPRIN-1 분자의 수를 조사함으로써 평가할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 항CAPRIN-1 항체는 암 세포 상의 CAPRIN-1 단백질과 결합하고, 상기 활성에 의해 항종양 작용을 나타내기 때문에 암의 치료 또는 예방에 유용하다고 생각된다. 즉, 본 발명은 항CAPRIN-1 항체를 유효 성분으로 하는, 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물을 제공한다. 항CAPRIN-1 항체를 인체에 투여하는 목적(항체 치료)으로 사용할 경우에는 면역원성을 저하시키기 때문에 인간 항체나 인간화 항체로 하는 것이 바람직하다.

또한, 항CAPRIN-1 항체와 암 세포 표면 상의 CAPRIN-1 단백질의 결합 친화성이 높을수록 항CAPRIN-1 항체에 의한 보다 강한 항종양 활성이 얻어진다. 따라서, 본 발명의 항체는 CAPRIN-1 단백질과 높은 결합 친화성을 갖기 때문에 보다 강한 항종양 효과를 기대할 수 있고, 암의 치료 및/또는 예방을 목적으로 한 의약 조성물로서 적응하는 것이 가능해진다. 본 발명의 항체는 높은 결합 친화성으로서, 상술한 바와 같이 결합정수(친화정수) Ka(k_on/k_off)가 바람직하게는 적어도 10⁷M^-1, 적어도 10⁸M^-1, 적어도 5×10⁸M^-1, 적어도 10⁹M^-1, 적어도 5×10⁹M^-1, 적어도 10¹⁰M^-1, 적어도 5×10¹⁰M^-1, 적어도 10¹¹M^-1, 적어도 5×10¹¹M^-1, 적어도 10¹²M^-1, 또는 적어도 10¹³M^-1을 갖는 것이 바람직하다.

또한, 항CAPRIN-1 항체와 결합하는 암 세포 표면 상의 CAPRIN-1 분자의 수가 많을수록 항CAPRIN-1 항체에 의한 보다 강한 항종양 활성이 얻어진다. 항종양 효과를 기대하기 위해서는 CAPRIN-1 분자의 수는 본 발명의 항CAPRIN-1 항체를 측정에 사용했을 경우에, 그 항체가 결합하는 암 세포 1개당 CAPRIN-1 분자의 수가 10⁴개 이상, 바람직하게는 10⁵개 이상이 바람직하다. 세포 표면 상의 CAPRIN-1 분자의 수가 많은 종양(암 세포)이 본 발명의 항체의 투여 대상이 되는 암으로서 특히 바람직하다.

<항원 발현 세포로의 결합>

항체가 CAPRIN-1에 결합하는 능력은 실시예에서 설명되는 바와 같은, 예를 들면 ELISA법, 웨스턴블로트법, 면역 형광 및 플로우 사이타머트리 분석 등을 사용한 결합 어세이를 이용해서 특정할 수 있다.

<면역 조직 화학 염색>

CAPRIN-1을 인식하는 항체는 당업자에게 주지의 방법에서의 면역 조직 화학에 의해, 외과 수술 동안에 환자로부터 얻은 조직이나, 자연히 또는 트랜스펙션 후에 CAPRIN-1을 발현하는 세포계를 접종한 이종 이식 조직을 담지하는 동물로부터 얻은 조직으로부터, 파라포름알데히드 또는 아세톤 고정한 동결 절편 또는 파라포름알데히드로 고정한 파라핀 포매(包埋)한 조직 절편을 사용하여 CAPRIN-1과의 반응성에 관해서 시험할 수 있다.

면역 조직 화학 염색을 위해서, CAPRIN-1에 대하여 반응성이 있는 항체를 여러 가지 방법으로 염색시킬 수 있다. 예를 들면, 호스래디시퍼옥시다아제 복합 염소 항마우스 항체, 염소 항토끼 항체나 염소 항닭 항체를 반응시킴으로써 가시화할 수 있다.

<의약 조성물, 및 암의 치료 및/또는 예방 방법>

본 발명의 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물의 표적은 CAPRIN-1 유전자를 발현하는 암(세포)이면 특별하게 한정되지 않는다.

본 명세서에서 사용되는 「종양」 및 「암」이라고 하는 용어는 악성 신생물을 의미하고, 호환적으로 사용된다.

본 발명에 있어서 대상이 되는 암으로서는 CAPRIN-1 단백질을 코드하는 유전자를 발현하고 있는 암이며, 바람직하게는 유방암, 신장암, 췌장암, 대장암, 폐암, 뇌종양, 위암, 자궁경암, 난소암, 전립선암, 방광암, 식도암, 백혈병, 림프종, 섬유육종, 비만 세포종 또는 멜라노마이다.

이들 특정 암에는, 예를 들면 유선암, 복합형 유선암, 유선 악성 혼합 종양, 유관내 유두상 선암, 폐선암, 편평 상피암, 소세포암, 대세포암, 신경 상피조직성 종양인 신경교종, 뇌실상의종, 신경세포성 종양, 태아형의 신경외 배엽성 종양, 신경초종, 신경 섬유종, 수막종, 만성형 림프구성 백혈병, 림프종, 소화관형 림프종, 소화기형 림프종, 소∼중 세포형 림프종, 맹장암, 상행 결장암, 하행 결장암, 횡행 결장암, S상 결장암, 직장암, 난소 상피암, 배아 세포 종양, 간질 세포 종양, 췌관암, 침윤성 췌관암, 췌장암의 선암, 선방 세포암, 선편평 상피암, 거세포종, 췌관내 유두 점액성 종양, 점액성 낭포선암, 췌장 아종, 장액성 낭포선암, 고체 유두상 암, 가스트리노마, 글루카고노마, 인슐리노마, 다발성 내분비 선종증 1(Wermer 증후군), 비기능성 도세포종, 소마토스타티노마, VIP 산생 종양이 포함되지만, 이것들에 한정되지 않는다.

또한, 대상이 되는 바람직한 피험자(환자)는 포유동물이고, 예를 들면 영장류, 애완동물, 가축류, 경기용 동물 등을 포함하는 포유동물이고, 특히 인간, 개 및 고양이가 바람직하다.

본 발명에서 사용되는 항체를 의약 조성물로서 사용할 경우에는 당업자가 공지의 방법으로 제제화하는 것이 가능하다. 예를 들면, 물 또는 그 이외의 약학적으로 허용할 수 있는 액과의 무균성 용액, 또는 현탁액제의 주사제의 형태로 비경구적으로 사용할 수 있다. 예를 들면, 약리학상 허용되는 담체 또는 매체, 구체적으로는 멸균수나 생리식염수, 식물유, 유화제, 현탁제, 계면활성제, 안정제, 향미제, 부형제, 비히클, 방부제, 결합제 등과 적당하게 조합시켜서 일반적으로 확인된 제약 실시에 요구되는 단위용량 형태로 혼화함으로써 제제화하는 것이 고려된다. 이들 제제에 있어서의 유효 성분량은 지시된 범위의 적당한 용량이 얻어지도록 하는 것이다.

주사를 위한 무균 조성물은 주사용 증류수와 같은 비히클을 이용하여 통상의 제제 실시에 따라서 처방할 수 있다.

주사용의 수용액으로서는, 예를 들면 생리식염수, 포도당이나 그 밖의 보조약을 포함하는 등장액, 예를 들면 D-소르비톨, D-만노스, D-만니톨, 염화나트륨을 들 수 있고, 적당한 용해 보조제, 예를 들면 알콜, 구체적으로는 에탄올, 폴리알콜, 예를 들면 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 비이온성 계면활성제, 예를 들면 폴리소르베이트 80(TM), HCO-60과 병용해도 좋다.

유성액으로서는 참깨유, 대두유를 들 수 있고, 용해 보조제로서 벤조산 벤질, 벤질알콜과 병용해도 좋다. 또한, 완충제, 예를 들면 인산염 완충액, 아세트산 나트륨 완충액, 무통화제, 예를 들면 염산 프로카인, 안정제, 예를 들면 벤질알콜, 페놀, 산화방지제와 배합해도 좋다. 조제된 주사액은 통상 적당한 앰플에 충전시킨다.

투여는 경구 또는 비경구이며, 바람직하게는 비경구 투여이고, 구체적으로는 주사제형, 경비 투여제형, 경폐 투여제형, 경피 투여형 등을 들 수 있다. 주사제형의 예로서는, 예를 들면 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사 등에 의해 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다.

또한, 환자의 연령, 체중, 성별, 증상 등에 따라 적당하게 투여 방법을 선택할 수 있다. 항체 또는 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 의약 조성물의 투여량으로서는, 예를 들면 1회에 대해서 체중 1㎏당 0.0001㎎∼1000㎎의 범위로 선택하는 것이 가능하다. 또는, 예를 들면 환자당 0.001∼100000㎎/body의 범위로 투여량을 선택할 수 있지만, 이것들의 수치에 반드시 제한되는 것은 아니다. 투여량, 투여 방법은 환자의 체중, 연령, 성별, 증상 등에 따라 변동하지만, 당업자라면 적당하게 선택하는 것이 가능하다.

본 발명의 항체 또는 그 프래그먼트를 포함하는 상기 의약 조성물을 피험자에게 투여함으로써 암, 바람직하게는 유방암, 신장암, 췌장암, 대장암, 폐암, 뇌종양, 위암, 자궁경암, 난소암, 전립선암, 방광암, 식도암, 백혈병, 림프종, 섬유육종, 비만 세포종 또는 멜라노마를 치료 및/또는 예방할 수 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물을 위에서 예시한 바와 같은 항종양제 또는 항종양제를 포함하는 의약 조성물과 조합시켜서 피험자에 병용 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 및/또는 예방 방법도 본 발명에 포함된다. 본 발명의 항체 또는 그 프래그먼트와 항종양제는 동시에, 또는 각각 피험자에게 투여될 수 있다. 각각 투여할 경우에는 어느 의약 조성물이 먼저라도 또는 후라도 좋고, 그것들의 투여 간격, 투여량, 투여 경로 및 투여 횟수는 전문의에 의해 적당하게 선택될 수 있다. 동시에 투여하는 별도의 의약제형에는, 예를 들면 본 발명의 항체 또는 그 프래그먼트와 항종양제를 약리학상 허용되는 담체(또는 매체) 중에서 혼합하고 제제화해서 얻어지는 의약 조성물도 포함되는 것으로 한다. 또한, 항종양제를 함유하는 상기 의약 조성물 및 제형 중 어느 것에 대해서나 본 발명의 항체를 함유하는 의약 조성물 및 제형에 대한 처방, 제제화, 투여 경로, 용량, 암 등의 설명을 적용할 수 있다.

따라서, 본 발명은 본 발명의 의약 조성물과, 위에서 예시한 바와 같은 항종양제를 포함하는 의약 조성물을 포함하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 조합 의약품 및 그것을 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 및/또는 예방 방법도 제공한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 그 프래그먼트와 항종양제를 약리학상 허용되는 담체와 함께 포함하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물도 제공한다.

<폴리펩티드 및 DNA>

본 발명은 또한 본 발명의 상기 항체 또는 그 프래그먼트(항체 결합 프래그먼트)를 코드하는 DNA도 제공한다. 그러한 DNA는 상기 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코드하는 DNA라도 좋고, 상기 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA라도 좋다. 그러한 DNA는 또한 상기 항체의 각 상보성 결정 영역을 단독으로 또는 조합시켜서 코드하는 DNA라도 좋다. 그러한 DNA는, 예를 들면 상기 항체(a)의 경우 서열 번호 8, 9 및 10의 아미노산 서열을 코드하는 염기서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코드하는 DNA, 서열 번호 12, 13 및 14의 아미노산 서열을 코드하는 염기서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 코드하는 DNA 등을 포함한다.

이들 서열의 DNA에 의해 코드되는 상보성 결정 영역(CDR)이 항체의 특이성을 결정하는 영역이기 때문에, 항체의 그 이외의 영역(즉, 정상 영역 및 프레임워크 영역)을 코드하는 서열은 다른 항체 유래의 서열이라도 좋다. 여기에서, 다른 항체란 인간 이외의 생물 유래의 항체도 포함하지만, 부작용 저감의 관점으로부터는 인간 유래의 것이 바람직하다. 즉, 상기 DNA에서는 중쇄 및 경쇄의 각 프레임워크 영역 및 각 정상 영역을 코드하는 영역이 인간 항체 유래의 대응 아미노산 서열을 코드하는 염기서열을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 항체를 코드하는 DNA의 다른 예는, 예를 들면 상기 항체(a)의 경우 서열 번호 11의 아미노산 서열을 코드하는 염기서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코드하는 염기서열을 포함하는 DNA, 경쇄 가변 영역을 코드하는 영역이 서열 번호 15의 아미노산 서열을 코드하는 염기서열을 포함하는 DNA 등이다. 여기에서, 서열 번호 11의 아미노산 서열을 코드하는 염기서열의 예는 서열 번호 16의 염기서열이다. 또한, 서열 번호 15의 아미노산 서열을 코드하는 염기서열의 예는 서열 번호 17의 염기서열이다. 이들 DNA에서도 중쇄 및 경쇄의 각 정상 영역을 코드하는 영역을 포함할 경우, 그 영역이 인간 항체 유래의 대응 아미노산 서열(중쇄 및 경쇄의 각 정상 영역의 아미노산 서열)을 코드하는 염기서열을 포함하는 것이 바람직하다.

이들 항체의 DNA는, 예를 들면 상기 방법 또는 이하의 방법으로 얻을 수 있다. 우선, 본 발명의 항체를 산생하는 하이브리도마로부터 시판의 RNA 추출 키트를 이용하여 전체 RNA를 조제하고, 랜덤 프라이머 등을 이용하여 역전사 효소에 의해 cDNA를 합성한다. 이어서, 기지의 마우스 항체 중쇄 유전자 및 경쇄 유전자의 각 가변 영역에 있어서 각각 보존되어 있는 서열의 올리고뉴클레오티드를 프라이머에 사용한 PCR법에 의해, 항체를 코드하는 cDNA를 증폭시킨다. 정상 영역을 코드하는 서열에 대해서는 기지의 서열을 PCR법으로 증폭함으로써 얻을 수 있다. DNA의 염기서열은 서열 결정용 플러스미드 또는 파지(Phage)에 장착하거나 하여 상법에 의해 결정할 수 있다.

본 발명은 또한 상기 항체(a)에 관한 이하의 폴리펩티드 및 DNA도 제공한다.

(i) 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 및 그 폴리펩티드를 코드하는 DNA(예를 들면, 서열 번호 16의 염기서열을 포함하는 DNA).

(ii) 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 및 그 폴리펩티드를 코드하는 DNA(예를 들면, 서열 번호 17의 염기서열을 포함하는 DNA).

(iii) 서열 번호 8, 9 및 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 군으로부터 선택되는 중쇄 CDR 폴리펩티드, 및 그 폴리펩티드를 코드하는 DNA.

(iv) 서열 번호 12, 13 및 14에 나타내는 아미노산 서열로부터 선택되는 경쇄 CDR 폴리펩티드, 및 그 폴리펩티드를 코드하는 DNA.

이들 폴리펩티드 및 DNA는 상기한 바와 같이 유전자 재조합 기술을 이용하여 제작할 수 있다.

<본 발명의 요약>

위에서 설명한 본 발명을 이하에 요약한다.

(1) 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열 또는 그 아미노산 서열과 80% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 CAPRIN-1 부분 폴리펩티드와 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 프래그먼트.

(2) CAPRIN-1 단백질을 발현하는 암 세포에 대하여 세포 장해 활성을 갖는 상기 (1)에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트.

(3) 상기 항체가 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체인 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트.

(4) 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체 또는 다중 특이성 항체인 상기 (1)∼(3) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트.

(5) 서열 번호 8, 9 및 10의 상보성 결정 영역(각각 CDR1, CDR2, CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 12, 13 및 14의 상보성 결정 영역(각각 CDR1, CDR2, CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 또한 CAPRIN-1 단백질과 면역학적 반응성을 갖는 (1)∼(4) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트.

(6) 항종양제가 콘쥬게이트된 상기 (1)∼(5) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트.

(7) 상기 (1)∼(6) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트를 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물.

(8) 상기 암이 유방암, 신장암, 췌장암, 대장암, 폐암, 뇌종양, 위암, 자궁경암, 난소암, 전립선암, 방광암, 식도암, 백혈병, 림프종, 섬유육종, 비만 세포종또는 멜라노마인 상기 (7)에 기재된 의약 조성물.

(9) 상기 (7) 또는 (8)에 기재된 의약 조성물과, 항종양제를 포함하는 의약 조성물을 포함해서 이루어지는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 조합 의약품.

(10) 상기 (1)∼(5) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트를 코드하는 DNA.

(11) 상기 (1)∼(6) 중 어느 하나에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트, (7) 또는 (8)에 기재된 의약 조성물, 또는 상기 (9)에 기재된 조합 의약품을 피험자에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 및/또는 예방 방법.

실시예

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명의 범위는 이것들의 구체예에 의해 제한되지 않는 것으로 한다.

실시예 1 각 조직에서의 CAPRIN-1 발현 해석

CAPRIN-1 유전자의 개 및 인간의 정상 조직 및 각종 세포주에 있어서의 발현을 WO2010/016526의 실시예 1(4)에 따라서 RT-PCR법에 의해 조사했다. 그 결과, 건강한 개 조직에서는 정소에 강한 발현이 보이고, 한편 개 유방암 및 선암 조직에서 발현이 보였다. 또한, 인간 조직에서의 발현을 함께 확인한 결과, 개 CAPRIN-1 유전자와 마찬가지로 정상 조직에서 발현을 확인할 수 있었던 것은 정소뿐이었지만, 암 세포에서는 인간 유방암 세포주 8종(ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, MRK-nu-1) 및 췌장암 세포주 4종(Capan-2, MIAPaCa-2, Panc-1, BxPc-3) 등, 다종류의 암 세포주에서 발현이 검출되었다. 이 결과로부터, CAPRIN-1은 정소 이외의 정상 조직에서는 발현이 보이지 않고, 한편 유방암 세포주 및 췌장암 세포주에 발현되고 있는 것이 확인되었다.

실시예 2 CAPRIN-1에 대한 마우스 모노클로날 항체의 제작

(1) 마우스 모노클로날 항체의 제작

WO2010/016526의 실시예 3에서 조제한 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 인간 CAPRIN-1 단백질 100㎍을 등량의 MPL+TDM 아쥬반트(시그마사 제)와 혼합하고, 이것을 마우스 1마리당의 항원 용액으로 했다. 항원 용액을 6주령의 Balb/c마우스(니혼 SLC사 제)의 복강 내에 투여 후, 1주간마다 7회 투여를 행하여 면역을 완료했다. 최후의 면역으로부터 3일 후에 적출한 각각의 비장을 멸균한 2매의 슬라이드 유리에 끼워서 갈아서 으깨고, PBS(-)(닛스이사 제)를 이용하여 세정해서 1500rpm으로 10분간 원심해서 상청을 제거하는 조작을 3회 반복해서 비장 세포를 얻었다. 얻어진 비장 세포와 마우스 미엘로마 세포 SP2/0(ATCC로부터 구입)을 10:1의 비율로 혼화하고, 거기에 37℃로 가온한 10%FBS를 포함하는 RPMI1640 배지 200㎕와 PEG1500(베링거사 제) 800㎕를 혼화해서 조제한 PEG 용액을 첨가하고 5분간 정치해서 세포 융합을 행했다. 1700rpm으로 5분간 원심하여 상청을 제거 후, Gibco사 제의 HAT 용액을 2%당량 첨가한 15% FBS를 포함하는 RPMI1640 배지(HAT 선택 배지) 150㎖로 세포를 현탁하고, 96공 플레이트(눈크사 제)의 1웰당 100㎕씩, 플레이트 15매에 파종했다. 7일간, 37℃, 5% CO₂의 조건으로 배양함으로써 비장 세포와 미엘로마 세포가 융합한 하이브리도마를 얻었다.

제작한 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1 단백질에 대한 결합 친화성을 지표로 하이브리도마를 선발했다. WO2010/016526의 실시예 3에 기재된 방법으로 조제한 CAPRIN-1 단백질용액 1㎍/㎖를 96공 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정 후, 0.5%Bovine Serum Albumin(BSA) 용액(시그마사 제)을 1웰당 400㎕ 첨가하여 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제거하고 1웰당 400㎕의 PBS-T로 웰을 3회 세정 후, 상기에서 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하여 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정한 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항마우스 IgG(H+L) 항체(Invitrogen사 제)를 1웰당 100㎕ 첨가하여 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 3회 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo사 제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고 15∼30분간 정치해서 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하고 반응을 정지시키고, 흡광도계를 이용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, 흡광도값이 높았던 항체를 산생하는 하이브리도마를 복수개 선발했다.

선발한 하이브리도마를 96공 플레이트 1웰당 0.5개가 되도록 플레이트에 첨가하여 배양했다. 1주간 후, 웰 중에 단일의 콜로니를 형성하고 있는 하이브리도마가 관찰되었다. 그들 웰의 세포를 더 배양하여, 클로닝된 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1 단백질에 대한 결합 친화성을 지표로 하이브리도마를 선발했다. WO2010/016526의 실시예 3에 기재된 방법으로 조제한 CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖를 96공 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정 후, 0.5% BSA 용액을 1웰당 400㎕ 첨가하여 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제거하고 1웰당 400㎕의 PBS-T로 웰을 3회 세정 후, 상기에서 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하여 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항마우스 IgG(H+L) 항체(인비트로젠사 제)를 1웰당 100㎕ 첨가하여 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 3회 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo사 제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고 15∼30분간 정치해서 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가해서 반응을 정지시키고, 흡광도계를 이용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, CAPRIN-1 단백질에 반응성을 나타내는 모노클로날 항체를 산생하는 61개의 하이브리도마주를 얻었다.

이어서, 그들 모노클로날 항체 중, CAPRIN-1을 발현하는 유방암 세포의 세포 표면에 반응성을 나타내는 것을 선발했다. 구체적으로는 10⁶개의 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231V를 1.5㎖ 용량의 미크로 원심 튜브에 의해 원심 분리하고, 이것에 상기 각 하이브리도마의 배양 상청 100㎕를 첨가하여 빙상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 0.1% FBS를 포함하는 PBS로 500배 희석한 FITC 표식 염소 항마우스 IgG 항체(인비트로젠사 제)를 첨가하여 빙상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정 후, 벡톤 딕킨슨 가부시키가이샤의 FACS 캘리버에 의해 형광 강도를 측정했다. 한편, 상기와 마찬가지의 조작을 항체 대신에 아무것도 처리하고 있지 않은 6주령의 Balb/c마우스의 혈청을 하이브리도마 배양용 배지에서 500배 희석한 것을 이용하여 행하고, 컨트롤로 했다. 그 결과, 컨트롤에 비해서 형광 강도가 강한, 즉 유방암 세포의 세포 표면에 반응하는 모노클로날 항체 1개(항CAPRIN-1 항체 #1)를 선발했다.

(2) 항CAPRIN-1 모노클로날 항체 #1이 인식하는 CAPRIN-1 에피토프의 동정

(1)에서 취득한 암 세포의 세포 표면에 반응하는 CAPRIN-1에 대한 모노클로날 항체(항CAPRIN-1 항체 #1)를 사용하여 인식하는 CAPRIN-1 에피토프 영역의 동정을 행했다. 인간 CAPRIN-1 단백질의 아미노산 서열 중, 12∼16 아미노산으로 이루어지는 93개의 후보 펩티드를 합성하고, 각각 1㎎/㎖의 농도가 되도록 DMSO로 용해했다.

각 펩티드를 0.1M 탄산 나트륨 완충액(pH9.6) 중에 30㎍/㎖의 농도가 되도록 용해하고, 96공 플레이트(Nunc사 제, 제품번호: 436006)의 1공당 100㎕씩 첨가하여 4℃에서 하룻밤 정치했다. 액을 버리고, 10mM 에탄올아민/0.1M 탄산 나트륨 완충액(PH9.6)을 1공당 200㎕씩 첨가하여 실온에서 1시간 정치한 후, 액을 버리고 0.5% Tween20을 포함하는 PBS(PBST)로 2회 세정함으로써 각 펩티드가 고상화된 플레이트를 제작했다.

이것에 항CAPRIN-1 항체 #1을 포함하는 세포 배양 상청을 1공당 50㎕ 첨가하여 실온에서 1시간 진탕한 후, 액을 제거하고 PBST로 3회 세정했다. 이어서, HRP가 표식된 항마우스 IgG(Invitrogen사 제) 항체를 PBST로 3000∼4000배 희석한 2차 항체 용액을 웰에 50㎕씩 첨가한 후, 액을 제거하고 PBST로 6회 세정을 행했다.

TMB 기질 용액(Thermo사 제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 15∼30분간 정치해서 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하여 반응을 정지시키고, 흡광도계를 이용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다.

그 결과, 실시예 2(1)에서 얻어진 항CAPRIN-1 항체 #1이 인식하는 CAPRIN-1의 부분 서열로서, 서열 번호 5의 폴리펩티드가 동정되었다.

(3) 항CAPRIN-1 항체 #1의 가변 영역 유전자의 클로닝

실시예 2(1)에서 얻어진 모노클로날 항체에 대하여, WO2010/016526의 실시예 5에 기재된 방법에 따라서 가변 영역을 코드하는 유전자 서열 및 그 아미노산 서열을 해석했다. 그 결과, 모노클로날 항체 #1은 서열 번호 11에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 15에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것이었다. 얻어진 모노클로날 항체 #1의 중쇄 가변 영역을 코드하는 유전자 서열을 서열 번호 16에, 및 아미노산 서열을 서열 번호 11에, 경쇄 가변 영역을 코드하는 유전자 서열을 서열 번호 17에, 및 아미노산 서열을 서열 번호 15에 나타낸다.

또한, 실시예 2(1)에서 얻어진 모노클로날 항체 #1은 서열 번호 11에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 15에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 그 중 중쇄 가변 영역 중의 CDR1∼3이 각각 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지고, 경쇄 가변 영역 중의 CDR1∼3이 각각 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 것이 나타내어졌다.

실시예 3 암 세포 표면 상에 존재하는 CAPRIN-1의 부분 폴리펩티드에 대한 폴리클로날 항체의 제작

암 세포 표면 상에 존재하는 CAPRIN-1의 부분 폴리펩티드에 대한 폴리클로날 항체를 얻기 위해서, 실시예 2에서 취득한 항CAPRIN-1 항체 #1의 에피토프 영역을 포함하는 폴리펩티드(서열 번호 5로 나타내어지는 CAPRIN-1 유래의 펩티드), 서열 번호 2의 인간 CAPRIN-1의 아미노산 서열 중의 아미노산 잔기 번호 50-98 영역의 폴리펩티드 및 서열 번호 2 중의 아미노산 잔기 번호 233-305 영역의 폴리펩티드를 합성했다. 이들 펩티드 1㎎씩을 항원으로 해서 등용량의 불완전 프로인트 아쥬반트(IFA) 용액과 혼합하고, 이것을 2주간마다 4회, 토끼의 피하에 투여를 행했다. 그 후에, 혈액을 채취하여 각 폴리클로날 항체를 포함하는 항혈청을 얻었다. 또한, 이들 항혈청을 프로틴G 담체(GE 헬스케어 바이오사이언스사 제)를 이용하여 정제하고 PBS로 치환한, 암 세포 표면 상에 존재하는 CAPRIN-1의 부분 폴리펩티드에 대한 폴리클로날 항체를 얻었다. 또한, 항원을 투여하고 있지 않은 토끼의 혈청을 상기와 마찬가지로 해서 프로틴G 담체를 이용하여 정제한 것을 컨트롤 항체로 했다.

실시예 4 암 세포막면 상에서의 CAPRIN-1 단백질의 발현 해석

이어서, CAPRIN-1 유전자의 발현이 많이 확인된 인간 유방암 세포주 8종(ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, MRK-nu-1)에 대하여, 그 세포 표면 상에 CAPRIN-1 단백질이 발현되고 있는지의 여부를 조사했다. 상기에서 유전자 발현이 확인된 각 인간 유방암 세포주 각각 5×10⁵ 세포를 1.5㎖의 미크로 원심 튜브에 의해 원심 분리했다. 이것에 본 실시예 3에서 상기한 바와 같이 조제한 서열 번호 5에 나타내어지는 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체 2㎍(5㎕)과 95㎕의 0.1% 소태아 혈청을 포함하는 PBS를 첨가해서 섞고, 빙상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 1㎕의 Alexa488 표식 Goat anti-rabbit IgG 항체(인비트로젠사 제) 및 98㎕의 0.1% 소태아 혈청(FBS)을 포함하는 PBS를 첨가해서 섞고, 빙상에서 30시간 정치했다. PBS로 세정 후, 벡톤 딕킨슨 가부시키가이샤의 FACS 캘리버에 의해 형광 강도를 측정했다. 한편, 상기와 마찬가지의 조작을 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체 대신에 실시예 3에서 상기한 바와 같이 조제한 컨트롤 항체를 이용하여 행하고, 컨트롤로 했다. 그 결과, 항CAPRIN-1 항체를 첨가한 세포는 컨트롤에 비해서 어느 암 세포나 형광 강도가 35% 이상 강했다. 이것으로부터, 상기 인간 암 세포주의 세포막 표면 상에 CAPRIN-1 단백질이 발현되고 있는 것이 확인되었다. 또한, 상기 형광 강도의 증강률은 각 세포에 있어서의 평균 형광 강도(MFI값)의 증가율로 나타내어지고, 이하의 계산식에 의해 산출했다.

평균 형광 강도의 증가율(형광 강도의 증강률)(%)=[(항CAPRIN-1 항체를 반응시킨 세포의 MFI값)-(컨트롤 MFI값)]÷(컨트롤 MFI값)×100.

또한, 마찬가지의 상기 방법을 이용하여 신장암 세포주 2종(Caki-1,Caki-2), 방광암 세포주(T24), 난소암 세포주(SKOV3), 폐암 세포주 2종(QG56, A549), 전립선암 세포주(PC3), 자궁경암 세포주(SW756), 섬유육종 세포주(HT1080), 뇌종양 세포주 2종(T98G, U87㎎), 위암 세포주(MKN28), 대장암 세포주 3종(Lovo, DLD-1, HCT-116), 췌장암 세포주 4종(Capan-2, MIAPaCa-2, Panc-1, BxPC-3)에 대하여 형광 강도를 측정한 결과, 컨트롤에 비해서 어느 암 세포나 형광 강도가 35% 이상 강했다.

또한, 본 결과는 실시예 2에서 취득된 항CAPRIN-1 항체 #1을 사용했을 경우에도 마찬가지로 암 세포막면 상에서의 CAPRIN-1 단백질의 발현이 확인되었다.

실시예 5 인간-마우스 키메라 모노클로날 항체의 제작

실시예 2에서 얻어진 항CAPRIN-1 항체 #1의 중쇄 가변 영역을 포함한 유전자 증폭 단편의 양단을 제한 효소 처리한 후 정제하고, 마우스 항체 유래의 리더 서열과 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG₁의 H쇄 정상 영역을 이미 삽입이 완료된 pcDNA4/myc-His(Invitrogen사 제) 벡터에 상법에 따라서 삽입했다. 또한, 항CAPRIN-1 항체 #1의 경쇄 가변 영역을 포함한 유전자 증폭 단편의 양단을 제한 효소 처리한 후 정제하고, 마우스 항체 유래의 리더 서열과 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG₁의 L쇄 정상 영역을 이미 삽입이 완료된 pcDNA 3.1/myc-His(Invitrogen사 제) 벡터에 상법에 따라서 삽입했다.

이어서, 상기에 있는 항CAPRIN-1 항체 #1의 중쇄 가변 영역이 삽입된 상기 재조합 벡터와, 경쇄 가변 영역이 삽입된 상기 재조합 벡터를 CHO-K1 세포(리켄 셀 뱅크로부터 입수)에 도입했다. 구체적으로는 12공 배양 플레이트의 1웰당 1㎖의 10% FBS를 포함하는 Ham's F12 배지(Invitrogen사 제)에서 배양된 2×10⁵개의 CHO-K1 세포를 PBS(-)로 세정한 뒤에, 1웰당 1㎖의 10% FBS를 포함하는 Ham's F12 배지를 새롭게 추가한 웰에 30㎕의 OptiMEM(Invitrogen사 제)에 용해한 상기 각 벡터 250ng과 Polyfect transfection reagent(QIAGEN사 제) 30㎕를 혼합한 것을 첨가했다. 상기 재조합 벡터를 도입한 CHO-K1 세포를 200㎍/㎖ 제오신(Invitrogen사 제) 및 200㎍/㎖ 제네티신(로슈사 제)을 첨가한 10% FBS를 포함하는 Ham's F12 배지에서 배양한 뒤, 96웰 플레이트의 1웰당 0.5개가 되도록 상기 재조합 벡터를 도입한 CHO-K1 세포를 파종하여 실시예 2에서 얻은 항CAPRIN-1 항체 #1의 가변 영역을 갖는 인간-마우스 키메라 모노클로날 항체 #1을 안정적으로 산생하는 세포주를 제작했다.

제작한 세포주를 150㎠ 플라스크를 이용하여 5×10⁵개/㎖이며 혈청을 포함하지 않는 OptiCHO 배지(Invitrogen사 제) 30㎖를 이용하여 5일간 배양하고, 인간-마우스 키메라 모노클로날 항체 #1을 포함하는 배양 상청을 얻었다.

또한, 비교 항체로서 WO2010/016526에 기재되는 마우스 유래의 항CAPRIN-1 모노클로날 항체이며 동 문헌 중의 서열 번호 26의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 27의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 1, 서열 번호 28의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 29의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 2, 서열 번호 30의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 31의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 3, 서열 번호 32의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 33의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 4, 서열 번호 34의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 35의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 5, 서열 번호 36의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 37의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 6, 서열 번호 38의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 39의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 7, 서열 번호 40의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 41의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 8, 서열 번호 42의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 43의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 9, 서열 번호 44의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 45의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 10, 서열 번호 46의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 47의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 11, WO2011/096517에 기재되는 항CAPRIN-1 모노클로날 항체이며 동 문헌 중의 서열 번호 43의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 47의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 12, 서열 번호 43의 중쇄 가변 영역과 서열 번호의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 13, WO2011/096528에 기재되는 항CAPRIN-1 모노클로날 항체이며 동 문헌 중의 서열 번호 43의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 47의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 14, 서열 번호 51의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 55의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 15, 서열 번호 59의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 63의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 16, 서열 번호 76의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 80의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 17, 서열 번호 84의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 88의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 18, 서열 번호 92의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 96의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 19, WO2011/096519에 기재되는 항CAPRIN-1 모노클로날 항체이며 동 문헌 중의 서열 번호 42의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 46의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 20, WO2011/096533에 기재되는 항CAPRIN-1 모노클로날 항체이며 서열 번호 43의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 51의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 21, 서열 번호 47의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 51의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 22, 서열 번호 63의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 67의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 23, WO2011/096534에 기재되는 항CAPRIN-1 모노클로날 항체이며 동 문헌 중의 서열 번호 43의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 47의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 24, 서열 번호 43의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 51의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 25, 서열 번호 63의 중쇄 가변 영역과 서열 번호 67의 경쇄 가변 영역을 갖는 비교 항체 26에 대해서도 상기와 마찬가지로 해서 비교 시료인 인간-마우스 키메라 비교 항체 1∼26을 각각 안정적으로 산생하는 세포주를 제작하고, 제작한 세포주를 150㎠ 플라스크를 이용하여 5×10⁵개/㎖이며 혈청을 포함하지 않는 OptiCHO 배지(Invitrogen사 제) 30㎖를 이용하여 5일간 배양하고, 인간-마우스 키메라 비교 모노클로날 항체 1∼26을 포함하는 배양 상청을 얻었다.

실시예 6 항CAPRIN-1 모노클로날을 사용한 각종 암 세포 표면에서의 CAPRIN-1의 발현

이어서, CAPRIN-1 유전자의 발현이 확인된 인간 유방암 세포주 8종(ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, MRK-nu-1), 신장암 세포주 2종(Caki-1,Caki-2), 방광암 세포주(T24), 난소암 세포주(SKOV3), 폐암 세포주 2종(QG56, A549), 전립선암 세포주(PC3), 자궁경암 세포주(SW756), 섬유육종 세포주(HT1080), 뇌종양 세포주 2종(T98G, U87MG), 위암 세포주(MKN28), 대장암 세포주 3종(Lovo, DLD-1, HCT-116), 췌장암 세포주 4종(Capan-2, MIAPaCa-2, Panc-1, BxPC-3)에 대하여, 실시예 2에서 얻어진 항CAPRIN-1 항체 #1을 포함하는 배양 상청을 이용하여 각 세포의 세포 표면 상에서의 CAPRIN-1 단백질의 발현을 조사했다. 각 세포주 각각 10⁶ 세포를 1.5㎖ 용량의 미크로 원심 튜브에 의해 원심 분리했다. 상기 항체를 포함하는 각 세포 배양 상청(100㎕)을 첨가하고, 빙상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 0.1% FBS를 포함하는 PBS로 희석한 FITC 표식 염소 항마우스 IgG(H+L) 항체(Jackson ImmunoResearch사 제)를 첨가하고, 4℃에서 30분간 정치했다. PBS로 세정 후, 벡톤 딕킨슨 가부시키가이샤의 FACS 캘리버에 의해 형광 강도를 측정했다. 음성 컨트롤에는 2차 항체만을 반응시킨 것을 사용했다. 그 결과, 항CAPRIN-1 항체 #1은 음성 컨트롤에 비해서 형광 강도가 30% 이상 강한 반응성을 나타냈다. 이것으로부터, 상기 인간 암 세포주의 세포막 표면 상에 CAPRIN-1 단백질이 발현되고 있는 것이 확인되었다. 또한, 상기 형광 강도의 증강률은 각 세포에 있어서의 평균 형광 강도(MFI값)의 증가율로 나타내어지고, 이하의 계산식에 의해 산출했다.

평균 형광 강도의 증가율(형광 강도의 증강률)(%)=[(항CAPRIN-1 항체를 반응시킨 세포의 MFI값)-(컨트롤 MFI값)]÷(컨트롤 MFI값)×100.

실시예 7 CAPRIN-1 유래 펩티드(서열 번호 5)에 대한 항체의 암 세포에 대한 항종양 활성

서열 번호 5에 나타내는 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 항체의 CAPRIN-1을 발현하는 암 세포에 대한 세포 장해성의 강도를 평가하기 위해서 ADCC 활성을 측정했다. 실시예 3에서 조제한 서열 번호 5에 나타내는 펩티드에 대한 폴리클로날 항체를 이용하여 평가를 행했다. 비교하는 항체로서, 그 밖의 인간 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체(실시예 3에서 조제한 인간 CAPRIN-1의 서열 번호 2의 아미노산 서열 중의 아미노산 잔기 번호 50-98에 대한 폴리클로날 항체와 아미노산 잔기 번호 233-305에 대한 폴리클로날 항체)를 사용하고, 음성 컨트롤로서 실시예 3에서 조제한 토끼 혈청 유래의 컨트롤 항체를 이용하여 마찬가지로 평가했다.

CAPRIN-1의 발현이 확인되고 있는 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231V, 인간 대장암 세포주 DLD-1, 인간 췌장암 세포주 Capan-2, 인간 폐암 세포주 QG56을 10⁶개 50㎖ 용량의 원심 튜브에 모으고, 100μCi의 크로뮴 51을 첨가하여 37℃에서 2시간 인큐베이트했다. 그 후에, 10% 소태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지에서 3회 세정하고, 96공 V바닥 플레이트 1공당 2×10³개씩 첨가했다. 이것에 상기 서열 번호 5에 나타내는 인간 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체 및 상기에 있는 그 밖의 인간 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체 2종류(인간 CAPRIN-1의 서열 번호 2의 아미노산 잔기 번호 50-98에 대한 폴리클로날 항체와 아미노산 잔기 번호 233-305에 대한 폴리클로날 항체)를 각각 1㎍씩 첨가하고, 또한 인간의 말초혈로부터 정법에 따라서 분리한 림프구를 4×10⁵개씩 첨가하고, 37℃, 5% CO₂의 조건 하에서 4시간 배양했다. 배양 후, 장해를 받은 암 세포로부터 방출되는 배양 상청 중의 크로뮴(Cr) 51의 양을 측정하고, 각 인간 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체에 의한 암 세포에 대한 ADCC 활성을 산출했다. 그 결과, 인간 CAPRIN-1의 서열 번호 2의 아미노산 잔기 번호 50-98 및 아미노산 잔기 번호 233-305의 아미노산 서열을 갖는 인간 CAPRIN-1 부분 펩티드를 면역해서 얻은 폴리클로날 항체의 경우에는 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231V, 인간 대장암 세포주 DLD-1, 인간 췌장암 세포주 Capan-2, 인간 폐암 세포주 QG56에 있어서의 활성은 어느 항체나 각각 8% 미만이었던 것에 대하여, 서열 번호 5에 나타내는 인간 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 폴리클로날 항체를 첨가한 군은 어느 암 세포주에 대해서나 27% 이상의 세포 장해 활성이 확인되었다. 음성 컨트롤의 항체는 어느 암 세포에 대해서나 5% 미만의 활성이었다. 따라서, 서열 번호 5에 나타내는 CAPRIN-1에 대한 항체는 CAPRIN-1을 발현하는 암 세포에 대하여 강한 세포 장해 활성을 발휘하는 것이 명확해졌다.

또한, 세포 장해 활성은 상기한 바와 같이 본 발명에서 사용되는 CAPRIN-1에 대한 항체, 림프구 및 크로뮴 51을 도입시킨 2×10³개의 각 암 세포주를 혼합해서 4시간 배양하고, 배양 후 배지에 방출된 크로뮴 51의 양을 측정하고, 이하 계산식 ＊에 의해 산출한 암 세포주에 대한 세포 장해 활성을 나타낸 결과이다.

＊식: 세포 장해 활성(%)=CAPRIN-1에 대한 항체 및 림프구를 첨가했을 때의 표적 세포로부터의 크로뮴 51 유리량÷1N 염산을 첨가한 표적 세포로부터의 크로뮴 51 유리량×100.

실시예 5에서 얻은 인간-마우스 키메라 모노클로날 항체의 인간 암 세포에 대한 세포 장해 활성을 평가했다. 상기 항체를 산생하는 각 세포 배양 상청을 Hitrap ProteinA SepharoseFF(GE 헬스케어사 제)를 이용하여 정제하고, PBS(-)로 치환해서 0.22㎛의 필터(밀리포어사 제)에서 여과한 것을 활성 측정용 항체로서 사용했다. 10⁶개의 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231V, 인간 대장암 세포주 DLD-1, 인간 췌장암 세포주 Capan-2, 인간 폐암 세포주 QG56을 50㎖ 용량의 원심 튜브에 모으고, 100μCi의 크로뮴 51을 첨가하여 37℃에서 2시간 인큐베이트했다. 그 후에, 10% FBS를 포함하는 RPMI1640 배지에서 3회 세정하고, 96공 V바닥 플레이트 1공당 2×10³개씩 첨가해서 표적 세포로 했다. 이것에, 상기 정제 항체 인간-마우스 키메라 항CAPRIN-1 항체 #1 및 실시예 5에서 얻은 인간-마우스 키메라 비교 모노클로날 항체 1∼26을 각각 0.75㎍ 첨가하고, 또한 정법에 따라서 조제한 인간 말초혈 림프구 세포로부터 정법을 이용하여 인간 NK 세포를 포함하는 세포 집단을 분리했다. 인간 NK 세포를 포함하는 세포 집단은 말초혈 단핵구 세포 분리용의 비중 분리액 Histopaque(시그마알드리치사)를 이용하여 분리한 인간 말초혈 단핵구 세포를 FITC 형광 색소로 표식된 항체[항인간 CD3 항체, 항인간 CD20 항체, 항인간 CD19 항체, 항인간 CD11c 항체, 항HLA-DR 항체(벡톤 앤드 딕킨슨사)]로 반응시키고, 셀 소터[FACS Vantage SE(벡톤 앤드 딕킨슨사)]를 이용하여 상기 항체로 물들지 않는 NK 세포를 포함한 세포 집단을 분리한 것, 또는 인간 NK 세포 분리 키트(밀테니사 제)를 이용하여 분리한 것을 사용했다. 분리한 NK 세포를 포함한 세포를 1웰당 2×10⁵개 첨가하고, 37℃, 5%, CO₂의 조건 하에서 4시간 배양했다. 배양 후, 장해를 받은 종양 세포로부터 방출되는 배양 상청 중의 크로뮴 51의 양을 측정하고, 항CAPRIN-1 항체에 의한 암 세포에 대한 세포 장해 활성을 산출했다. 음성 컨트롤에는 아이소타입 컨트롤 항체를 첨가한 것을 사용했다. 그 결과, 아이소타입 컨트롤 항체를 사용했을 경우의 세포 장해 활성은 어느 암 세포에 대해서나 5% 미만이고, 인간-마우스 키메라 비교 모노클로날 항체 1∼26을 사용했을 경우의 세포 장해 활성은 MDA-MB-231V에서는 5% 미만, DLD-1에서는 8% 미만, Capan-2에서는 10% 미만, QG56에서는 10% 미만이었던 것에 대하여, 인간-마우스 키메라 항CAPRIN-1 항체 #1은 MDA-MB-231V에서는 12% 이상, DLD-1에서는 22% 이상, Capan-2에서는 28% 이상, QG56에서는 21% 이상이었다. 마찬가지로, 다른 암 세포, 유방암 세포주 T47D, Hs578T, BT-20, SK-BR-3, MCF7, MRK-nu-1, 글리오마 세포주 T98G, 폐암 세포주 A549, 신장암 세포주 Caki-1, 자궁경암 세포주 SW756, 방광암 세포주 T24, 위암 세포주 MKN28, 대장암 세포주 SW480, 백혈병 세포주 AML5 및 림프종 세포주 Ramos에 대하여, 아이소타입 컨트롤 항체를 사용했을 경우 및 비교 항체 1∼비교 항체 26을 사용한 경우에는 모두 4% 미만이었던 것에 대하여, 인간-마우스 키메라 모노클로날 항체는 세포 장해 활성이 10% 이상 확인되었다. 이상의 결과로부터, 서열 번호 5에 나타내는 CAPRIN-1 유래 펩티드에 대한 항체는 ADCC 활성에 의해 CAPRIN-1을 발현하는 암 세포를 장해하는 것이 나타내어지고, 비교 항체 1∼26에 비해서 인간-마우스 키메라 항CAPRIN-1 항체 #1은 인간 암 세포에 대하여 강한 세포 장해 활성을 나타내는 것이 명확해졌다.

또한, 세포 장해 활성은 상기한 바와 같이 본 발명에서 사용되는 CAPRIN-1에 대한 항체, 림프구(NK 세포를 포함하는 집단) 세포 및 크로뮴 51을 도입시킨 2×10³개의 각 암 세포주를 혼합해서 4시간 배양하고, 배양 후 배지에 방출된 크로뮴 51의 양을 측정하고, 이하 계산식 ＊에 의해 산출한 암 세포주에 대한 세포 장해 활성을 나타낸 결과이다.

＊식: 세포 장해 활성(%)=CAPRIN-1에 대한 항체 및 림프구(NK 세포를 포함하는 집단) 세포를 첨가했을 때의 표적 세포로부터의 크로뮴 51 유리량÷1N 염산을 첨가한 표적 세포로부터의 크로뮴 51 유리량×100.

실시예 8 항CAPRIN-1 항체 #1이 인식하는 각종 암 세포 표면에서의 CAPRIN-1의 분자수

인간 유방암 세포주(MDA-MB-231V), 신장암 세포주(Caki-1), 방광암 세포주(T24), 난소암 세포주(SKOV3), 폐암 세포주(QG56, A549), 췌장암 세포주(Capan-2), 전립선암 세포주(PC3), 자궁경암 세포주(SW756), 섬유육종 세포주(HT1080), 뇌종양 세포주(T98G), 위암 세포주(MKN28), 대장암 세포주(Lovo, DLD-1), 백혈병 세포주(AML5), 림프종 세포주(Ramos)에 대하여 항CAPRIN-1 항체 #1이 인식하는 각종 암 세포 표면에서의 CAPRIN-1 분자의 수를 분자수 측정 키트 "QIFIKIT"(DAKO사 제)를 이용하여 조사했다. 마찬가지로 해서, 실시예 5에서 제작한 항CAPRIN-1 모노클로날 항체의 비교 모노클로날 항체 1∼26에 대해서도 각종 암 세포 표면에서의 CAPRIN-1 분자의 수를 조사했다.

첨부 프로토콜에 따라서, 각 세포주에 항CAPRIN-1 항체 #1 및 비교 항체 1∼비교 항체 26을 최종 농도가 5㎍/㎖가 되도록 PBS로 희석하고, 각 세포주에 첨가해서 30분 반응시켰다. PBS로 세정한 후, 키트에 첨부된 검량 비드와 함께 각 세포주에 키트에 첨부된 형광 표식된 2차 항체 항마우스 IgG 항체를 첨가하고, 빙상에서 45분간 정치했다. 각 세포주 및 검량 비드를 PBS로 세정 후, 벡톤 딕킨슨 가부시키가이샤의 FACS 캘리버에 의해 형광 강도를 측정해서 평균 형광 강도값(mean)을 얻었다. 또한, 비교 항체에 대해서도 마찬가지의 측정을 행하여 mean을 얻었다. 음성 컨트롤에는 아이소타입 컨트롤 항체를 반응시킨 것을 사용하여 mean을 얻었다. 각 평균 형광 강도값(mean)을 이용하여 키트에 첨부된 방법에 따라 분자수를 산출했다. 그 결과, 항CAPRIN-1 모노클로날 항체 및 비교 항체 12∼26이 인식하는 각종 암 세포 표면에서의 CAPRIN-1의 분자수는 조사한 모든 인간 암 세포에 있어서 세포 1개당 10⁵개 이상이었다. 한편, 비교 항체 1∼11에 대해서는 세포 1개당 10⁵개보다 적었다.

(산업상의 이용 가능성)

본 발명의 항체는 암의 치료 및/또는 예방을 위해서 유용하다.

본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허출원을 그대로 참고로 하여 본 명세서에 도입되는 것으로 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Toray Industries, Inc. <120> Pharmaceutical Composition for Treatment and/or Prevention of Cancer <130> PH-5508-PCT <150> JP 2012-035484 <151> 2012-02-21 <160> 17 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 5562 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (190)..(2319) <223> <400> 1 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc tcg gcc acc agc cac agc ggg agc ggc agc aag tcg 231 Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 1 5 10 tcc gga ccg cca ccg ccg tcg ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcc gcg 279 Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gcc ggg gcc gcc gcg ccg gct tct cag cac ccc gca acc ggc acc 327 Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggg gtg atc gac 375 Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp 50 55 60 aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423 Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471 Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp 80 85 90 gcc gtt tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519 Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca cta agt caa gat att cag aaa aca 567 Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt cgg gag cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa 615 Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663 Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg cgg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711 Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tca ttg ttg gat gaa ttc tat 759 Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag cta gta gac cct gaa cgg gac atg agc ttg agg ttg aat gaa cag 807 Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln 195 200 205 tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855 Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903 Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tca aac tac ttt gac agc acc cac aac cac cag aat 951 Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca gca cct gca gtt gaa gac 999 Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa gct gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047 Gln Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln 275 280 285 agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095 Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143 Thr Gln Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa acg gtt gag gtg gta aat tca ctc cag cag caa cct cag gct gca 1191 Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala 320 325 330 tcc cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag gca 1239 Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala 335 340 345 350 gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287 Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ctg gat ttt gaa aat 1335 Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gcc att gta tct gca cag cct atg aat cca aca 1383 Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431 Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tct aga ctt gct cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcg aca 1479 Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tca tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527 Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575 Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca atc tct tta aat aca gac cag act 1623 Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr 465 470 475 aca gca tca tca tcc ctt cct gct gcg tct cag cct caa gta ttt cag 1671 Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln 480 485 490 gct ggg aca agc aaa cct tta cat agc agt gga atc aat gta aat gca 1719 Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767 Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815 Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln 530 535 540 gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863 Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911 Thr Glu Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959 Gly Ser Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt agc aat cag ccc tat tac aat 2007 Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt gct aga ggc ttg atg 2055 Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac cgg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103 Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151 Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser 640 645 650 cag ttc agt gct ccc cgg gat tac tct ggc tat caa cgg gat gga tat 2199 Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc 2247 Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295 Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaatcgcca 2349 Met Asn Thr Gln Gln Val Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct 2409 ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2469 tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca tgttctgtcc 2529 taagcgtcat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589 aacaatatac tttacagggt gataataatc tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649 gcaagattga cttttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gttattcaat 2709 gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829 gcataccaaa ttatgcatgg gtcctaatca cacatataag gctggctacc agctttgaca 2889 cagcactgtt catctggcca aacaactgtg gttaaaaaca catgtaaaat gctttttaac 2949 agctgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009 aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069 tatttagata cctttttgaa cacttaacag tttctttgag acaatgactt ttgtaaggat 3129 tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 3189 ctgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249 actctcggtc acatgttttt ccttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgcctgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429 agcaaaacaa ataaaacgtt tataaaagtt gtatcttgaa acactggtgt tcaacagcta 3489 gcagcttatg tgattcaccc catgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tctagtactt gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgcataggg 3669 agagtctcta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg acttagcctt atgtactctg 3729 ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg cctaggaagt taatgctgct 3789 tattgtctca ttctgacttc atggagaatt aatcccacct ttaagcaaag gctactaagt 3849 taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909 ccagtaggtg ctcagctatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969 tggagttttt gctggttttg taacctacca aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029 caaaagtttt gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089 aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaac 4149 ctgttacttt ggcaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgtacca caaccatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269 atttgtggtt tactgggtaa tccctagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaactaa 4329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gacctctgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449 gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt gtaaaggtgt tcatagtttg 4509 actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct actcagacca 4629 tatttttaaa ggggtgcctc attatggggc agagaacttt tcaataagtc tcattaagat 4689 ctgaatcttg gttctaagca ttctgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749 ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4809 tcactgtagc ctcttggtgt agcaagctca catacaaaat acttttgtat atgcataata 4869 taaatcatct catgtggata tgaaacttct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttat 4929 tgattacctt gattagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989 aaagtttttt ttcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5049 atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109 tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg ttttaggaca tttgttcatt 5229 atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289 tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca ttccacttgg gttgttttta agcattctaa 5349 attttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409 ttatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctca 5469 tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt 5529 taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gtc 5562 <210> 2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15 Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45 Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys 50 55 60 Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu 65 70 75 80 Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val 85 90 95 Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110 Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys 115 120 125 Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys 130 135 140 Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160 Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175 Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190 Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu 195 200 205 His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220 Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val 225 230 235 240 Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu 245 250 255 Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gln Val 260 265 270 Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu 275 280 285 Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln 290 295 300 Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320 Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro 325 330 335 Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro 340 345 350 Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly 355 360 365 Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr 370 375 380 Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn 385 390 395 400 Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415 Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val 420 425 430 Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu 435 440 445 Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile 450 455 460 Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala 465 470 475 480 Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly 485 490 495 Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510 Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525 Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser 530 535 540 Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu 545 550 555 560 Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575 Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln 580 585 590 Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605 Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620 Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640 Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe 645 650 655 Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln 660 665 670 Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685 Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn 690 695 700 Thr Gln Gln Val Asn 705 <210> 3 <211> 3553 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (190)..(2274) <223> <400> 3 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc tcg gcc acc agc cac agc ggg agc ggc agc aag tcg 231 Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 1 5 10 tcc gga ccg cca ccg ccg tcg ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcc gcg 279 Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gcc ggg gcc gcc gcg ccg gct tct cag cac ccc gca acc ggc acc 327 Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggg gtg atc gac 375 Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp 50 55 60 aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423 Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471 Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp 80 85 90 gcc gtt tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519 Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gca cta agt caa gat att cag aaa aca 567 Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt cgg gag cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa 615 Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663 Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg cgg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711 Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tca ttg ttg gat gaa ttc tat 759 Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag cta gta gac cct gaa cgg gac atg agc ttg agg ttg aat gaa cag 807 Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln 195 200 205 tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855 Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903 Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tca aac tac ttt gac agc acc cac aac cac cag aat 951 Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca gca cct gca gtt gaa gac 999 Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa gct gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047 Gln Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln 275 280 285 agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095 Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143 Thr Gln Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa acg gtt gag gtg gta aat tca ctc cag cag caa cct cag gct gca 1191 Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala 320 325 330 tcc cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag gca 1239 Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala 335 340 345 350 gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287 Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ctg gat ttt gaa aat 1335 Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gcc att gta tct gca cag cct atg aat cca aca 1383 Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431 Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tct aga ctt gct cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcg aca 1479 Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tca tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527 Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575 Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca atc tct tta aat aca gac cag act 1623 Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr 465 470 475 aca gca tca tca tcc ctt cct gct gcg tct cag cct caa gta ttt cag 1671 Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln 480 485 490 gct ggg aca agc aaa cct tta cat agc agt gga atc aat gta aat gca 1719 Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767 Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815 Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln 530 535 540 gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863 Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911 Thr Glu Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959 Gly Ser Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt agc aat cag ccc tat tac aat 2007 Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt gct aga ggc ttg atg 2055 Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac cgg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103 Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151 Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser 640 645 650 cag ttc agt gct ccc cgg gat tac tct ggc tat caa cgg gat gga tat 2199 Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc 2247 Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga tcctagctcc taagtggagc 2294 Pro Arg Gly Asn Ile Leu Trp Trp 690 ttctgttctg gccttggaag agctgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354 tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgctctgttt ctaaaactta atcttggacc 2414 caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534 taaaacctgc taaatgtttt taggaagtac ttactgaaac atttttgtaa gacatttttg 2594 gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654 tattatattt tagggccaga caccctttaa tggccggata agccatagtt aacatttaga 2714 gaaccattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaatg ccttttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagttatt tctgactttt aaacaaaact cccaaattcc taacttattg 2834 agctatactt aaaaaaaatt acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894 aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cctatttaac aattagagct agcatttcat 2954 gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aacaggtttc 3014 ctctattggc cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074 ttgaatacta gtagaaactg gccaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134 cttgggaatt actgacttga ctagaagtat caaaggatgt ttgcatgtga atgtgggtta 3194 tgttctttcc caccttgtag catattcgat gaaagttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254 tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gtcattatac agttttgaat 3314 gttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374 attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434 atgtaagctc catgagagca ggtaccttgt ctgtcttctc tgctgtatct attcccaacg 3494 cttgatgatg gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tatttgttga atgaatgaa 3553 <210> 4 <211> 694 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15 Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45 Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys 50 55 60 Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu 65 70 75 80 Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val 85 90 95 Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110 Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys 115 120 125 Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys 130 135 140 Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160 Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175 Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190 Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu 195 200 205 His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220 Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val 225 230 235 240 Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu 245 250 255 Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gln Val 260 265 270 Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu 275 280 285 Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln 290 295 300 Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320 Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro 325 330 335 Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro 340 345 350 Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly 355 360 365 Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr 370 375 380 Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn 385 390 395 400 Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415 Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val 420 425 430 Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu 435 440 445 Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile 450 455 460 Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala 465 470 475 480 Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly 485 490 495 Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510 Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525 Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser 530 535 540 Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu 545 550 555 560 Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575 Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln 580 585 590 Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605 Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620 Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640 Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe 645 650 655 Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln 660 665 670 Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685 Gly Asn Ile Leu Trp Trp 690 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu 1 5 10 15 <210> 6 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 7 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Ser Tyr Val Met His 1 5 <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Arg Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gly Gly Tyr Phe 1 5 10 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys 1 5 10 15 Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln 20 25 30 Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn 35 40 45 Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 50 55 60 Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr 65 70 75 80 Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Tyr Tyr Tyr Gly 85 90 95 Ser Ser Gly Gly Tyr Phe Asp Val Trp Ala Gln Asp His Val Arg Thr 100 105 110 <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Glu 1 5 10 15 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 14 Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 16 <211> 336 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 16 ggacctgagc tggtaaagcc tggggcttca gtgaagatgt cctgcaaggc ttctggatac 60 acattcacta gctatgttat gcactgggtg aagcagaagc ctgggcaggg ccttgagtgg 120 attggatata ttaatcctta caatgatggt actaagtaca atgagaagtt caaaggcaag 180 gccacactga cttcagacaa atcctccagc acagcctaca tggagctcag cagcctgacc 240 tctgaggact ctgcggtcta ttactgtgca aggaggtatt actacggtag tagcgggggg 300 tacttcgatg tctgggcgca ggaccacgta cgcacg 336 <210> 17 <211> 324 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 17 gatgtccaga taacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 60 attaattgca gggcaagtaa gagcattagc aaatatttag cctggtatca agagaaacct 120 gggaaaacta ataagcttct tatctactct ggatccactt tgcaatctgg aattccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct 240 gaagattttg caatgtatta ctgtcaacag cataatgaat acccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa acgg 324

Claims (11)

1. 서열 번호 5로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 CAPRIN-1 부분 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 프래그먼트.
2. 제 1 항에 있어서,
   CAPRIN-1 단백질을 발현하는 암 세포에 대하여 세포 장해 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 프래그먼트.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
   상기 항체는 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체인 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 프래그먼트.
4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
   인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체 또는 다중 특이성 항체인 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 프래그먼트.
5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
   서열 번호 8, 9 및 10의 상보성 결정 영역(각각 CDR1, CDR2, CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 12, 13 및 14의 상보성 결정 영역(각각 CDR1, CDR2, CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 또한 CAPRIN-1 단백질과 면역학적 반응을 갖는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 프래그먼트.
6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
   항종양제가 콘쥬게이트된 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 프래그먼트.
7. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트를 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물.
8. 제 7 항에 있어서,
   상기 암은 유방암, 신장암, 췌장암, 대장암, 폐암, 뇌종양, 위암, 자궁경암, 난소암, 전립선암, 방광암, 식도암, 백혈병, 림프종, 섬유육종, 비만 세포종 또는 멜라노마인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
9. 제 7 항에 기재된 의약 조성물과, 항종양제를 포함하는 의약 조성물을 포함해서 이루어지는 것을 특징으로 하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 조합 의약품.
10. 제 1 항 또는 제 2 항에 기재된 항체 또는 그 프래그먼트를 코드하는 것을 특징으로 하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
11. 삭제