JP2022550667A - 腫瘍標的化タンパク質又はその断片、それに結合する抗体及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、腫瘍標的化タンパク質又はその断片、それに結合する抗体及びその使用、より詳細には、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有するベクター及びその使用に関する。加えて、本発明は、タンパク質Ａ５６又はその断片に結合する抗体及びその使用に関する。本発明のタンパク質Ａ５６、その断片又はその変異体をコードしている核酸を含有するベクターは、ベクターとして腫瘍溶解性ウイルスを使用し、したがって、個体に投与された場合、主にがん細胞だけを特異的に死滅させる。加えて、腫瘍溶解性ウイルスに感染した後にも生き延びたがん細胞は、その細胞表面にタンパク質Ａ５６を発現しており、したがって二次抗がん療法に標的化され得る。したがって、本発明の一実施形態によると、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有するベクター及びＡ５６に結合する抗体が使用される場合に、がんは効果的に処置され得る。

Description

本発明は、腫瘍標的化タンパク質又はその断片、それに結合する抗体及びその使用に関する。より詳細には、本発明は、タンパク質Ａ５６の断片をコードしている核酸を含有するベクター及びその使用に関する。加えて、本発明は、タンパク質Ａ５６又はその断片に特異的に結合する抗体及びその使用に関する。
がんは、腫瘍とも呼ばれ、体組織の自律的異常増殖のため異常に増殖した細胞を指す。がん発生率は、老年人口、喫煙人口の増大、アルコール消費の増大、食習慣の西洋化及び現代社会における環境汚染のため増加し続けている。
がんを処置する方法には、手術、放射線療法、化学療法などが含まれる。特に、手術は、身体からガン組織を除去する治療法であり、初期のがん又は病変が特定の場所に限定されるがんに対して非常に効果的である。しかしながら、病変周りの組織に浸潤した又はリンパ節に転移したがんを除去することは困難であり、そのようながんの再発率は高い。この場合、手術と組み合わせて放射線療法又は化学療法が使用される。放射線療法又は化学療法は、進行した又は末期のがんの処置に主に使用される；しかしながら、この療法は正常細胞にも影響を及ぼし、そのため重篤な有害効果を引き起こす。
近年、免疫細胞療法が、がん治療法として活発に研究されている。免疫細胞療法は、患者の免疫細胞を使用してがん細胞を死滅させるという点で既存の治療法と異なっている。特に免疫細胞療法とは、免疫細胞が、患者から入手され、増殖細胞又はがん細胞を特異的に攻撃するように活性化され、その後患者の身体に戻される方法であり；この方法は、薬物誘導性有害効果を最小化しながら抗がん効果を最大化する。
加えて、この５年間にわたって、免疫チェックポイント阻害剤が、がんを処置する免疫療法のために活発に研究されてきた。特に、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）及びＰＤ－Ｌ１などの免疫チェックポイントに対する阻害剤について研究されてきた。イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１）及びペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１）などの免疫チェックポイント阻害剤が、いくつかの型のがんの処置に関して監督機関により承認されている。しかしながら、免疫チェックポイント阻害剤は、黒色腫、肺がん、頭頸部がん、腎臓がん及び膀胱がんなどの特定の型のがんの患者の処置に対して限定的に使用される。
したがって、安全で、固形がんも効果的に標的化できるがん細胞標的化方法に対する継続的な研究及び開発の必要性がある。
したがって、がん細胞を安全且つ効果的に標的化する方法を開発するための研究を行った結果、本発明者らは、がん細胞が、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有するベクターの注射によって処置された場合に、タンパク質Ａ５６が、がん細胞表面に発現されることを見いだした。加えて、本発明者らは、タンパク質Ａ５６又はその断片に結合する抗体が、がん細胞表面に発現されるタンパク質Ａ５６に結合することを見いだし、それにより本発明を完成した。
本発明の一態様において、活性成分としてタンパク質Ａ５６又はその断片に特異的に結合する抗体又はその断片を含む抗がん剤が提供される。
本発明の別の態様において、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
本発明の更に別の態様において、タンパク質Ａ５６又はその断片に結合する抗体又はその断片が提供される。
本発明のなお更に別の態様において、がん標的化ポリペプチド又はその断片が提供され、ポリペプチドは、配列番号１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０７３、１０７５、１０７７又は１０７９によって表されるアミノ酸配列を含む。
本発明のなお更に別の態様において、がん標的化ポリペプチド又はその断片をコードしている単離された核酸が提供される。
本発明のなお更に別の態様において、腫瘍溶解性ウイルス及び抗体又はその断片を含む、がんを処置するためのキットが提供される。
本発明のなお更に別の態様において、腫瘍溶解性ウイルスを含む、がんを標的化するための医薬組成物が提供される。
タンパク質Ａ５６又はその断片若しくはバリアントをコードしている核酸を含有する本発明の腫瘍溶解性ウイルスが、ベクターとして使用され、個体に投与された場合、特異的な様式でがん細胞だけを主に死滅させる。加えて、腫瘍溶解性ウイルスによる感染をも生き延びたがん細胞は、細胞表面にタンパク質Ａ５６を発現しており、これにより二次抗がん療法の標的化が可能になる。したがって、タンパク質Ａ５６又はその断片若しくはバリアントをコードしている核酸を含有するベクター、及びタンパク質Ａ５６若しくはその断片を結合する抗体を使用する場合、がんは効果的に処置され得、それぞれが本発明の実施形態である。
タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスを使用して腫瘍細胞を標的化するプロセスを示す線図を例示する図である。 ヒト肺がん細胞株（Ａ５４９）をタンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスによる感染に供し、免疫蛍光染色を用いてタンパク質Ａ５６が、感染したＡ５４９がん細胞株の表面で発現しているかどうかその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 ヒト結腸直腸がん細胞株（ＨＣＴ－１１６）をタンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスによる感染に供し、免疫蛍光染色を用いてタンパク質Ａ５６が、感染したＨＣ－１１６細胞株の表面で発現しているかどうかその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 ヒト結腸直腸がん細胞株（ＨＴ－２９）を移植したマウスをタンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの腹膜内投与に供し、各組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 正常なウサギをタンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの腹膜内投与に供し、各組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 マウス腎がん細胞株（Ｒｅｎｃａ）を移植したマウスを、タンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの腫瘍内投与に供し、７、１０及び１４日目に腫瘍組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 マウス腎臓がん細胞株（Ｒｅｎｃａ）を移植したマウスを、タンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルス及びヒドロキシ尿素の腫瘍内投与に供し、７、１０及び１４日目に腫瘍組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 マウス腎がん細胞株（Ｒｅｎｃａ）を移植したマウスを、タンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの第２の投与に供し、２１、２４及び２８日目に腫瘍組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 マウス腎がん細胞株（Ｒｅｎｃａ）を移植したマウスを、タンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルス及びヒドロキシ尿素の第２の投与に供し、２１、２４及び２８日目に腫瘍組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 マウス腎がん細胞株（Ｒｅｎｃａ）を移植したマウスを、タンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルス及びヒドロキシ尿素の投与に供し、その後マウス腫瘍容積を測定することによって得られた結果を例示する図である。 マウス腎がん細胞株（Ｒｅｎｃａ）を移植したマウスをタンパク質Ａ５６をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルス及びヒドロキシ尿素の投与に供し、その後マウス体重を測定することによって得られた結果を例示する図である。 タンパク質Ａ５６及びその断片に関する実施形態を示す線図である。 細胞表面におけるタンパク質Ａ５６及びその断片の発現を同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定することによって得られた結果を例示する図である。 抗体Ａ５６－０１Ａ０２～Ａ５６－０２Ｂ０６の生産性を同定することによって得られた結果を例示する図である。 抗体Ａ５６－０１Ａ０２～Ａ５６－０２Ｂ０６の生産性を示すグラフである。 抗体Ａ５６－０２Ｄ０４～Ａ５６－５９Ｅ１２の生産性を同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗Ａ５６抗体を精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによってこれら抗体をその後同定することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルスで処置した若しくは処置していないＨｅＬａ又はＨＴ－２９細胞株を、５つの抗Ａ５６抗体のそれぞれによる処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルスで処置した若しくは処置していないＡ５４９、ＭＣＦ－７、又はＰＣ－３細胞株を、３つの抗Ａ５６抗体のそれぞれによる処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルスで処置した又は処置していないＨｅＬａ細胞株を抗Ａ５６抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ）による処置に供し、その後ＦＡＣＳ分析を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルスで処置した又は処置していないＨｅＬａ細胞株を抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３）による処置に供し、その後ＦＡＣＳ分析を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルスで処置した又は処置していないＨｅＬａ細胞株を抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４）による処置に供し、その後ＦＡＣＳ分析を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルスで処置した又は処置していないＨｅＬａ細胞株を抗Ａ５６抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３又はＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４）による処置に供し、その後ＦＡＣＳ分析を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１９）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１０１）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１４）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０８）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ５１）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ５５）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（ＬＰバリアント３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（ＬＰバリアント４）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３若しくはＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＡ５４９がん細胞株を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３若しくはＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１９）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０１）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１４）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０８）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ５１）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ５５）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（ＬＰバリアント３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（ＬＰバリアント４）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３若しくはＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＰＣ３がん細胞株を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３若しくはＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１９）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０１）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１４）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０８）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ０３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ５１）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ５５）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（ＬＰバリアント３）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２、ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（ＬＰバリアント４）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３若しくはＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＷＯＴＳ－４１８）で処置した又は処置していないＭＣＦ７がん細胞株を、ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３若しくはＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４による処置に供し、その後フローサイトメトリーによる測定を実行することによって得られた結果を例示する図である。 作製した抗体を使用してＥＬＩＳＡを実行することによって得られた結果を例示する図である。 Ｆｃ融合Ａ５６融合タンパク質の発現レベルを同定することによって得られた結果を例示する図である。 作製したＡ５６断片の発現レベルを同定することによって得られた結果を例示する図である。 腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２及びＷＯＴＳ－４１８）中のタンパク質Ａ５６に関して配列相同性を分析することによって得られた結果を例示する図である。
［発明を実施するための最善の様式］
以下で本発明について詳述する。
本発明の一態様において、活性成分としてタンパク質Ａ５６又はその断片に特異的に結合する抗体又はその断片を含む抗がん剤が提供される。
本明細書で使用される用語「タンパク質Ａ５６」は、宿主細胞がポックスウイルス科ファミリーウイルスに感染された後にそのウイルスの遺伝子にコードされているＡ５６、Ａ５６Ｒ又はＨＡによって表される遺伝子（例えば、ＧｅｎｅＩＤ：３７０７６５２）から翻訳されるタンパク質を指す。タンパク質Ａ５６又はその断片は、配列番号１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０７３、１０７５、１０７７又は１０７９によって表されるアミノ酸配列を含んでもよい。タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸は、配列番号１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９、１０６１、１０７２、１０７４、１０７６又は１０７８によって表されるヌクレオチド配列を含んでもよい。
特に、タンパク質Ａ５６は、野生型タンパク質Ａ５６又はそのバリアントでもよい。野生型タンパク質Ａ５６は、配列番号１０３８又は１０７３によって表されるアミノ酸配列を有してもよい。加えて、野生型タンパク質Ａ５６をコードしている核酸は、配列番号１０３９又は１０７２によって表されるヌクレオチド配列でもよい。
加えて、バリアントが、タンパク質Ａ５６のようにがん細胞表面に位置し得る限り、タンパク質Ａ５６バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸の置換、欠失又は付加を受けてもよい。タンパク質Ａ５６バリアントをコードしているヌクレオチド配列は、配列番号１０３８又は１０７３によって表されるアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％若しくは少なくとも９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列でもよく、最も好ましくは、それに対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列でもよい。特に、タンパク質Ａ５６バリアントは、配列番号１０７５又は１０７９によって表されるアミノ酸配列を含んでもよい。タンパク質Ａ５６バリアントをコードしている核酸は、配列番号１０７４又は１０７８によって表されるヌクレオチド配列を含んでもよい。
タンパク質Ａ５６断片は、配列番号１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０又は１０７７によって表されるアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。加えて、断片をコードしている核酸は、配列番号１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０又は１０７６によって表されるポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列でもよい。特に、配列番号１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０又は１０７７によって表されるポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列は、記載される順序で、それぞれ、配列番号１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９、１０６１又は１０７６によって表されてもよい。
加えて、タンパク質Ａ５６断片をコードしているヌクレオチド配列は、配列番号１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０又は１０７７によって表されるアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％若しくは少なくとも９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列でもよく、最も好ましくは、それに対して少なくとも９５％の配列相同性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列でもよい。
本明細書で使用される用語「抗体」は、抗原に結合し、抗原の作用に干渉する、又は抗原を除去する免疫タンパク質を指す。抗体には５つの型：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥが存在し、それぞれは、重鎖定常領域遺伝子μ、δ、γ、α又はεから生成される重鎖を含有する。抗体技術においてはＩｇＧが主に使用される。ＩｇＧにはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の４つのアイソタイプが含まれる、それぞれは異なる構造及び機能特性を有し得る。
ＩｇＧは、２つの重鎖（約５０ｋＤａ）タンパク質及び２つの軽鎖（約２５ｋＤａ）タンパク質でできている非常に安定なＹ字型構造（分子量約１５０ｋＤａ）を形成する。抗体は軽鎖及び重鎖を有し、各鎖はアミノ酸配列が抗体ごとに異なる可変領域、及び抗体間でアミノ酸配列が同じである定常領域に分かれている。重鎖定常領域は、ＣＨ１、Ｈ（ヒンジ）、ＣＨ２、ＣＨ３ドメインを含む。ドメインのそれぞれは、２つのβシートからなり、これらドメインは、分子内ジスルフィド結合によって連結されている。重鎖及び軽鎖内の２つの可変領域は、共に会合して抗原結合部位を形成する。部位は、Ｙ字型の２本のアームのそれぞれに存在する。Ｙ字型において、抗原に結合することができる部分は抗体結合断片（Ｆａｂ）と呼ばれ、抗原に結合しない部分は結晶化断片（Ｆｃ）と呼ばれる。Ｆａｂ及びＦｃは、可動性ヒンジ領域によって接続されている。
本明細書で使用される用語「ＣＤＲ」は、抗原に結合する部位を指し、その部位は、抗体の重鎖及び軽鎖可変領域に存在する超可変領域であり、そのアミノ酸配列は、抗体ごとに異なっている。抗体の３次元構造を見ると、ＣＤＲは、抗体表面でループ形状をしており；ループの下にはＣＤＲを構造的に支持するフレームワーク領域（ＦＲ）が存在する。重鎖及び軽鎖のそれぞれは３つのループ構造を有し、これら６つのループ領域構造が互いに関連して抗原と直接接触する。６つのループ領域構造上の抗原結合部位は、それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲ４、ＣＤＲ５及びＣＤＲ６と便宜上呼ばれる。
加えて、抗体断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）２及びＦｖからなる群から選択されるいずれか１つでもよい。抗体断片は、抗原結合刺激を細胞、補体、などに伝達するエフェクター機能を有する結晶化領域（Ｆｃ領域）を除いた抗原結合ドメインを指し、単一ドメイン抗体又はミニボディなどの第３世代抗体断片を含み得る。
加えて、抗体断片は以下の利点を有する：抗体断片は、完全に構造化されたＩｇＧよりサイズが小さく、そのため組織又は腫瘍への透過が改善され；抗体断片は細菌内で作製され得、そのため生産コストを低下させる。加えて、抗体断片はＦｃを持たず、したがって細胞、補体などに抗原結合刺激を伝達する機能が望ましくない場合に使用される。抗体断片は、人体における半減期が短く、したがってｉｎ ｖｉｖｏでの診断に適している；しかしながら、抗体を構成するアミノ酸内にあるいくつかの塩基性、酸性又は中性アミノ酸の置きかえは、抗体の固有の等電点（ｐＩ）を変化させ得る。抗体の等電点におけるそのような変化は、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の毒性副作用の低下又は抗体の水溶性の増大などの変化を誘導する場合がある。したがって、治療抗体の場合、完全に構造化されたＩｇＧは、親和性又は構造形態を考慮して使用され得る。
抗体は、公知のモノクローナル抗体作製技術によって容易に作製され得る。モノクローナル抗体を作製する方法は、免疫した動物から得られるＢリンパ球を使用してハイブリドーマを調製することによって実行されてもよく、又はファージディスプレイ技術を使用することによって実行されてもよい。しかしながら、本発明はそれらに限定されない。
抗体又はその断片は、
配列番号１、１８、３５、５２、６９、８６、１０３、１２０、１３７、１５４、１７１、１８８、２０５、２２２、２３９、２５６、２７３、２９０、３０７、３２４、３４１、３５８、３７５、３９２、４０９、４２６、４４３、４６０、４７７、４９４、５１１、５２８、５４５、５６２、５７９、５９６、６１３、６３０、６４７、６６４、６８１、６９８、７１５、７３２、７４９、７６６、７８３、８００、８１７、８３４、８５１、８６８、８８５、９０２、９１９、９３６、９５３、９７０、９８７、１００４、１０２１、１０６２、及び１０６３からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１；
配列番号２、１９、３６、５３、７０、８７、１０４、１２１、１３８、１５５、１７２、１８９、２０６、２２３、２４０、２５７、２７４、２９１、３０８、３２５、３４２、３５９、３７６、３９３、４１０、４２７、４４４、４６１、４７８、４９５、５１２、５２９、５４６、５６３、５８０、５９７、６１４、６３１、６４８、６６５、６８２、６９９、７１６、７３３、７５０、７６７、７８４、８０１、８１８、８３５、８５２、８６９、８８６、９０３、９２０、９３７、９５４、９７１、９８８、１００５、１０２２、及び１０６４からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２；及び
配列番号３、２０、３７、５４、７１、８８、１０５、１２２、１３９、１５６、１７３、１９０、２０７、２２４、２４１、２５８、２７５、２９２、３０９、３２６、３４３、３６０、３７７、３９４、４１１、４２８、４４５、４６２、４７９、４９６、５１３、５３０、５４７、５６４、５８１、５９８、６１５、６３２、６４９、６６６、６８３、７００、７１７、７３４、７５１、７６８、７８５、８０２、８１９、８３６、８５３、８７０、８８７、９０４、９２１、９３８、９５５、９７２、９８９、１００６、１０２３、及び１０６５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに
配列番号４、２１、３８、５５、７２、８９、１０６、１２３、１４０、１５７、１７４、１９１、２０８、２２５、２４２、２５９、２７６、２９３、３１０、３２７、３４４、３６１、３７８、３９５、４１２、４２９、４４６、４６３、４８０、４９７、５１４、５３１、５４８、５６５、５８２、５９９、６１６、６３３、６５０、６６７、６８４、７０１、７１８、７３５、７５２、７６９、７８６、８０３、８２０、８３７、８５４、８７１、８８８、９０５、９２２、９３９、９５６、９７３、９９０、１００７、１０２４、及び１０６６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１；
配列番号５、２２、３９、５６、７３、９０、１０７、１２４、１４１、１５８、１７５、１９２、２０９、２２６、２４３、２６０、２７７、２９４、３１１、３２８、３４５、３６２、３７９、３９６、４１３、４３０、４４７、４６４、４８１、４９８、５１５、５３２、５４９、５６６、５８３、６００、６１７、６３４、６５１、６６８、６８５、７０２、７１９、７３６、７５３、７７０、７８７、８０４、８２１、８３８、８５５、８７２、８８９、９０６、９２３、９４０、９５７、９７４、９９１、１００８、１０２５、及び１０６７からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２；及び
配列番号６、２３、４０、５７、７４、９１、１０８、１２５、１４２、１５９、１７６、１９３、２１０、２２７、２４４、２６１、２７８、２９５、３１２、３２９、３４６、３６３、３８０、３９７、４１４、４３１、４４８、４６５、４８２、４９９、５１６、５３３、５５０、５６７、５８４、６０１、６１８、６３５、６５２、６６９、６８６、７０３、７２０、７３７、７５４、７７１、７８８、８０５、８２２、８３９、８５６、８７３、８９０、９０７、９２４、９４１、９５８、９７５、９９２、１００９、１０２６、及び１０６８からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、
配列番号１、３５、１２０、２２２、２３９、２９０、３２４、３４１、８５１、９１９、１０６２又は１０６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
配列番号２、３６、１２１、２２３、２４０、２９１、３２５、３４２、８５２、９２０又は１０６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
配列番号３、３７、１２２、２２４、２４１、２９２、３２６、３４３、８５３、９２１又は１０６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに
配列番号４、３８、１２３、２２５、２４２、２９３、３２７、３４４、８５４、９２２又は１０６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
配列番号５、３９、１２４、２２６、２４３、２９４、３２８、３４５、８５５、９２３又は１０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
配列番号６、４０、１２５、２２７、２４４、２９５、３２９、３４６、８５６、９２４又は１０６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号３５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号３７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号１２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号１２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号１２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号１２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１２４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号１２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号２２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２２３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号２２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号２２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号２２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号２３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２４０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号２４１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号２４２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２４３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号２４４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号２９０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号２９１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号２９２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号２９３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２９４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号２９５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号３２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号３２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号３２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号３２８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号３２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号３４１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号３４２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号３４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号３４４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号３４５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号３４６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号８５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号８５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号８５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号８５４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号８５５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号８５６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号９１９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号９２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号９２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号９２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号９２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号９２４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号１０６２又は１０６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；配列番号１０６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び配列番号１０６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに配列番号１０６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び配列番号１０６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
一実施形態において、抗体又はその断片は、ＣＤＲの以下の組合せを含むことができる：
Figure 2022550667000002
Figure 2022550667000003
特に、抗体又はその断片は、配列番号８、２５、４２、５９、７６、９３、１１０、１２７、１４４、１６１、１７８、１９５、２１２、２２９、２４６、２６３、２８０、２９７、３１４、３３１、３４８、３６５、３８２、３９９、４１６、４３３、４５０、４６７、４８４、５０１、５１８、５３５、５５２、５６９、５８６、６０３、６２０、６３７、６５４、６７１、６８８、７０５、７２２、７３９、７５６、７７３、７９０、８０７、８２４、８４１、８５８、８７５、８９２、９０９、９２６、９４３、９６０、９７７、９９４、１０１１、１０２８、１０６９、及び１０７０からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する重鎖可変領域を含んでもよい。
特に、抗体又はその断片は、配列番号８、４２、１２７、２２９、２４６、２９７、３３１、３４８、８５８、９２６、１０６９、及び１０７０からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する重鎖可変領域を含んでもよい。
加えて、抗体又はその断片は、配列番号９、２６、４３、６０、７７、９４、１１１、１２８、１４５、１６２、１７９、１９６、２１３、２３０、２４７、２６４、２８１、２９８、３１５、３３２、３４９、３６６、３８３、４００、４１７、４３４、４５１、４６８、４８５、５０２、５１９、５３６、５５３、５７０、５８７、６０４、６２１、６３８、６５５、６７２、６８９、７０６、７２３、７４０、７５７、７７４、７９１、８０８、８２５、８４２、８５９、８７６、８９３、９１０、９２７、９４４、９６１、９７８、９９５、１０１２、１０２９、及び１０７１からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する軽鎖可変領域を含んでもよい。
特に、抗体又はその断片は、配列番号９、４３、１２８、２３０、２４７、２９８、３３２、３４９、８５９、９２７、及び１０７１からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する軽鎖可変領域を含んでもよい。
抗体又はその断片は、配列番号８、２５、４２、５９、７６、９３、１１０、１２７、１４４、１６１、１７８、１９５、２１２、２２９、２４６、２６３、２８０、２９７、３１４、３３１、３４８、３６５、３８２、３９９、４１６、４３３、４５０、４６７、４８４、５０１、５１８、５３５、５５２、５６９、５８６、６０３、６２０、６３７、６５４、６７１、６８８、７０５、７２２、７３９、７５６、７７３、７９０、８０７、８２４、８４１、８５８、８７５、８９２、９０９、９２６、９４３、９６０、９７７、９９４、１０１１、１０２８、１０６９、及び１０７０からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する重鎖可変領域；並びに配列番号９、２６、４３、６０、７７、９４、１１１、１２８、１４５、１６２、１７９、１９６、２１３、２３０、２４７、２６４、２８１、２９８、３１５、３３２、３４９、３６６、３８３、４００、４１７、４３４、４５１、４６８、４８５、５０２、５１９、５３６、５５３、５７０、５８７、６０４、６２１、６３８、６５５、６７２、６８９、７０６、７２３、７４０、７５７、７７４、７９１、８０８、８２５、８４２、８５９、８７６、８９３、９１０、９２７、９４４、９６１、９７８、９９５、１０１２、１０２９、及び１０７１からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する軽鎖可変領域を含んでもよい。
特に、抗体又はその断片は、配列番号８、４２、１２７、２２９、２４６、２９７、３３１、３４８、８５８、９２６、１０６９及び１０７０からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する重鎖可変領域；並びに配列番号９、４３、１２８、２３０、２４７、２９８、３３２、３４９、８５９、９２７及び１０７１からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つを有する軽鎖可変領域を含んでもよい。
抗がん剤は、腫瘍溶解性ウイルスに感染されたがん細胞を標的化することができる。特に、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスでもよい。腫瘍溶解性ウイルスは、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有してもよい。
タンパク質Ａ５６又はその断片については、上述されている。タンパク質Ａ５６は、野生型タンパク質Ａ５６又はタンパク質Ａ５６のバリアントでもよい。タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸は、野生型タンパク質Ａ５６又はタンパク質Ａ５６のバリアントをコードしている核酸でもよい。
タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸は、配列番号１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９、１０６１、１０７２、１０７４、１０７６又は１０７８によって表されるヌクレオチド配列を含んでもよい。
ワクシニアウイルスは、限定されるものではないが、以下のワクシニアウイルス株：Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ（ＷＲ）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋワクシニアウイルス（ＮＹＶＡＣ）、Ｗｙｅｔｈ（ニューヨーク市衛生局；ＮＹＣＢＯＨ）、ＬＣ１６ｍ８、Ｌｉｓｔｅｒ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｔｉａｎ Ｔａｎ、ＵＳＳＲ、ＴａｓｈＫｅｎｔ、Ｅｖａｎｓ、インターナショナル健康部門－Ｊ（ＩＨＤ－Ｊ）及びインターナショナル健康部門－Ｗｈｉｔｅ（ＩＨＤ－Ｗ）のうちの１つであり得る。
腫瘍溶解性ウイルスは、チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子が欠失されるウイルスでもよい。特に、腫瘍溶解性ウイルスは、チミジンキナーゼ遺伝子が欠失される組換えワクシニアウイルスでもよい。
本明細書で使用される用語「チミジンキナーゼ（ＴＫ）」は、チミジンキナーゼと呼ばれ、ヌクレオチド生合成に関係する酵素を指す。ＴＫは、細胞とウイルスの両方においてヌクレオチド生合成に使用される酵素である。ここで、細胞の場合、正常細胞はもはや分裂しないため、そこにＴＫは存在せず；毛包細胞のように急速に分裂する細胞であっても、ＴＫはウイルスが利用するのに充分な量で存在しない。これらの観点から、がん細胞が選択的に死滅され得るように、ＴＫ遺伝子を欠失させることによって、ウイルスは、ＴＫが存在するがん細胞の存在下でのみ増殖することが可能である。
抗がん剤は、生理的に許容可能な担体を更に含んでもよい。加えて、抗がん剤は、医薬組成物の調製において一般に使用される適切な賦形剤及び希釈剤を更に含んでもよい。加えて、抗がん剤は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤及びエアロゾル剤などの経口用製剤、従来の方法による外用製剤、坐剤又は注射剤の形態で処方され、使用されてもよい。特に、抗がん剤は、注射剤の形態でもよい。当技術分野に公知の適切な処方は、文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８５年）に開示されている処方でもよい。
抗がん剤は、肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、甲状腺がん、乳がん、脳がん、頭頸部がん、食道がん、皮膚がん、胸腺がん、胃がん、結腸がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮がん、膀胱がん、直腸がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、リンパ腫、急性白血病、多発性骨髄腫からなる群から選択されるがん及びその組合せを予防又は処置することを目的としてもよい。加えて、抗がん剤の場合、担体、賦形剤及び希釈剤の例には、塩化ナトリウム、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、デンプン、アラビアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、プロピルヒドロキシ安息香酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、などが含まれ得る。抗がん剤が処方される場合、その調製は、希釈剤又は一般に使用される充填材、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤及び界面活性剤などの賦形剤を使用して行われてもよい。
非経口投与用の製剤には、滅菌水溶液、非水性溶媒、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥した製剤、坐剤などが含まれ得る。非水性溶媒及び懸濁剤の場合、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが使用されてもよい。坐剤の主成分として、ウィテップゾール、マクロゴール、Ｔｗｅｅｎ ６１、カカオ油脂、ラウリン油脂、グリセロゼラチンなどが使用されてもよい。
がんは、固形がん又は血液がんでもよい。特に、固形がんは、肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、甲状腺がん、乳がん、脳がん、頭頸部がん、食道がん、皮膚がん、胸腺がん、胃がん、結腸がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮がん、膀胱がん、直腸がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がんからなる群から選択されるいずれか１つ及びその組合せでもよい。加えて、血液がんは、リンパ腫、急性白血病、多発性骨髄腫からなる群から選択されるいずれか１つ及びその組合せでもよい。
抗がん剤の投薬量は、患者の年齢、性別、状態、身体における活性成分（複数可）の吸収、その不活化速度、及び組み合わせて使用される薬物（複数可）を考慮して好ましくは決定されてもよく；抗がん剤は、抗体又はその断片に基づいて０．０００１ｍｇ／ｋｇ（体重）～１００ｍｇ／ｋｇ（体重）で投与されてもよい。
本発明の別の態様において、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
本発明の更に別の態様において、活性成分としてタンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスを含む、がん細胞を標的化するための組成物が提供される。腫瘍溶解性ウイルスは、抗がん剤について上述した通りである。
がん細胞は、固形がん又は血液がんの細胞でもよい。特に、固形がんは、限定されるものではないが、肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、甲状腺がん、乳がん、脳がん、頭頸部がん、食道がん、皮膚がん、胸腺がん、胃がん、結腸がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮がん、膀胱がん、直腸がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、腎臓がん、線維肉腫、精巣がん、脳転移、肝転移からなる群から選択されるいずれか１つ及びその組合せでもよい。
加えて、血液がんは、限定されるものではないが、リンパ腫、急性白血病、多発性骨髄腫からなる群から選択されるいずれか１つ及びその組合せでもよい。
本発明のなお更に別の態様において、個体に腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップを含む、がん細胞を標的化する方法が提供される。
個体は、ヒトを含めた哺乳動物でもよく、ヒト以外の動物でもよい。用語「ヒト以外の動物」は、任意の脊椎動物を指し、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類及び爬虫類などの、哺乳動物及び非哺乳動物を含んでもよい。加えて、個体とは、がん疾患又は腫瘍溶解性ウイルスを投与することによって軽減、阻害若しくは処置され得る状況の疾患を患っている個体を意味する。
腫瘍溶解性ウイルスの投薬量は、個体の状態及び体重、疾患の重症度、薬物の型、投与の経路及び期間に応じて変動し、当業者によって適切に選択され得る。投薬量は、患者が、１×１０５～１×１０１８個のウイルス粒子、感染性ウイルス単位（ＴＣＩＤ５０）又はプラーク形成単位（ｐｆｕ）で腫瘍溶解性ウイルスを受けるような量でもよい。特に、投薬量は、患者が、１×１０５、２×１０５、５×１０５、１×１０６、２×１０６、５×１０６、１×１０７、２×１０７、５×１０７、１×１０８、２×１０８、５×１０８、１×１０９、２×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１、５×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、１×１０１４、１×１０１５、１×１０１６、１×１０１７個若しくはより多いウイルス粒子、感染性ウイルス単位又はプラーク形成単位で腫瘍溶解性ウイルスを受けるような量でもよく、様々な数値及び上述の数値の範囲は、その中に含まれ得る。好ましくは、腫瘍溶解性ウイルスは１×１０５～１×１０１０ｐｆｕの用量で投与され得る。より好ましくは、腫瘍溶解性ウイルスは、１×１０５と等しい又はより高い及び１×１０９ｐｆｕより低い用量で投与されてもよい。
腫瘍溶解性ウイルスは、非経口的に投与されてもよく、そのような投与は、腫瘍内、腹膜内、皮下、真皮内、結節内又は静脈内投与など任意の適切な方法によって実行されてもよい。これらの中でも、腫瘍内、腹膜内又は静脈内投与が、好ましい場合がある。
投与経路、投薬量及び投与の頻度の点で、腫瘍溶解性ウイルスは、患者の状態及び副作用の有無に応じて様々な方法及び量で患者に投与されてもよく；したがって、最適な投与経路、投薬量及び投与の頻度は、そのため適切な範囲で当業者によって選択され得る。加えて、腫瘍溶解性ウイルスは、処置される疾患に対する治療的効果が公知である別の薬物若しくは生理活性物質と組み合わせて投与されてもよく、又は他の薬物との組合せ製剤の形態で処方されてもよい。特に、腫瘍溶解性ウイルスは注射の形態で提供されてもよい。
本発明のなお更に別の態様において、タンパク質Ａ５６又はその断片に結合する抗体又はその断片が提供される。抗体又はその断片は、上記の通り抗がん剤用である。
抗体は：ｉ）個体にタンパク質Ａ５６又はその断片を投与するステップと；ｉｉ）個体からＢ細胞を得るステップと；ｉｉｉ）Ｂ細胞を培養して組換え抗タンパク質Ａ５６抗体を得るステップとを含む抗体を作製する方法によって作製され得る。
加えて、タンパク質Ａ５６又はその断片は：ｉ）宿主細胞に本発明のベクターをトランスフェクトするステップと；ｉｉ）トランスフェクトされた宿主細胞を培養するステップと；ｉｉｉ）培養から組換えタンパク質Ａ５６を得るステップとを含むタンパク質を作製する方法によって作製されてもよい。
宿主細胞は、原核細胞でも真核細胞でもよい。特に、原核細胞は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又は酵母細胞でもよい。真核細胞は、ＮＳ／０骨髄腫細胞、２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、ＨｅＬａ細胞、ＣａｐＴ細胞（ヒト羊水由来細胞）又はＣＯＳ細胞でもよい。
トランスフェクションは、一過性トランスフェクション、マイクロインジェクション、形質導入、細胞融合、リン酸カルシウム沈殿、リポソーム媒介トランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、ポリブレン媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション又は遺伝子銃によって実行されてもよい。
本発明のなお更に別の態様において、がん標的化ポリペプチド又はその断片が提供され、ポリペプチドは、配列番号１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０７３、１０７５、１０７７又は１０７９によって表されるアミノ酸配列を含む。配列番号１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０７３、１０７５、１０７７若しくは１０７９によって表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片は、抗がん剤について上述した通りである。
本発明のなお更に別の態様において、がん標的化ポリペプチド又はその断片をコードしている単離された核酸が提供される。核酸は、配列番号１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９、１０６１、１０７２、１０７４、１０７６又は１０７８によって表されるヌクレオチド配列を含んでもよい。
本発明のなお更に別の態様において、腫瘍溶解性ウイルス及び抗体又はその断片を含む、がんを処置するためのキットが提供される。
腫瘍溶解性ウイルス及び抗体又はその断片は、抗がん剤について上述した通りである。
個体とは、腫瘍溶解性ウイルス及び抗体若しくはその断片を投与することによって軽減、阻害、又は処置され得る状況の疾患を有する若しくは患っている個体を意味する。個体は、ヒトを含めた哺乳動物でもよく、ヒト以外の動物でもよい。用語「ヒト以外の動物」は、任意の脊椎動物を指し、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類及び爬虫類などの、哺乳動物及び非哺乳動物を含んでもよい。腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞を死滅及び標的化するための第１の組成物に含まれており、個体に投与された場合、特異的な様式でがん細胞だけを主に死滅させることができ；腫瘍溶解性ウイルスを生き延びたがん細胞は、細胞表面にタンパク質Ａ５６を発現しており、これにより二次抗がん療法の標的化が可能になる。
抗体又はその断片は、二次抗がん療法のための第２の組成物に含まれ、個体に投与される場合、細胞表面にタンパク質Ａ５６を発現するがん細胞だけを二次的に死滅させることができる。
第１の組成物及び第２の組成物を薬学的に有効な量で投与して、がん細胞若しくはその転移を処置する又はがんの増殖を阻害することができる。薬学的に有効な量は、がんの型、患者の年齢及び体重、症状の性質及び重症度、現在の処置の型、処置の数、投薬形態並びに経路などの様々な因子に応じて変動することがあり、関連する分野の専門家によって容易に決定され得る。
第１の組成物及び第２の組成物は、非経口的に投与されてもよく、そのような投与は、腫瘍内、腹膜内、皮下、真皮内、結節内又は静脈内投与など任意の適切な方法によって実行されてもよい。これらの中でも、腫瘍内、腹膜内又は静脈内投与が、好ましい場合がある。他方、医薬組成物の投薬量は、投与計画、投薬量、患者の健康状態、などに応じて決定されてもよい。
本発明のなお更に別の態様において、腫瘍溶解性ウイルスを含む、がんを標的化するための医薬組成物が提供される。腫瘍溶解性ウイルスは、記載された通り抗がん剤用である。
本発明のなお更に別の態様において、がんを標的化するための腫瘍溶解性ウイルスの使用が提供される。本発明のなお更に別の態様において、個体に腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップを含む、がんを標的化する方法が提供される。腫瘍溶解性ウイルスは、抗がん剤について上述した通りである。
本発明のなお更に別の態様において、がんを処置するための腫瘍溶解性ウイルス及び抗体又はその断片の使用が提供される。腫瘍溶解性ウイルス及び抗体又はその断片は、抗がん剤について上述した通りである。
本発明のなお更に別の態様において、ｉ）個体に腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップと；ｉｉ）個体に抗体又はその断片を投与するステップとを含む、がんを処置する方法が提供される。腫瘍溶解性ウイルス及び抗体又はその断片は、抗がん剤について上述した通りである。
発明の様式
以下、本発明は次の例によって更に詳細に記載される。しかしながら、次の例は単なる例示目的のものであり、本発明の範囲はそれに限定されない。
Ｉ．タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの作製及び腫瘍細胞表面におけるその発現の同定
調製１．１．タンパク質Ａ５６バリアントの調製及び同定
野生型ワクシニアウイルス（ＮＹＣ保健局株、ＶＲ－１５３６）を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。組換えのために、ＨＳＶ１－ＴＫ遺伝子（ｐＳＥ／Ｌプロモーター）及びホタルルシフェラーゼレポーター（ｐ７．５プロモーター）遺伝子を持つｐＵＣ５７ａｍｐ＋（ＧＥＮＥＷＩＺ、ＵＳＡ）を、シャトルプラスミドベクターとして使用した。
組換えウイルスを得るために、ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ）を、ウェル当たり４×１０５個細胞で６ウェルプレートに播種し、次いで１０％ウシ胎仔血清を含有するＥＭＥＭ培地で調製した。野生型ワクシニアウイルスによる処置を、ＭＯＩ ０．０５で実行した。２時間後、培地を、２％ウシ胎仔血清を含有するＥＭＥＭ培地と置き換え、次いで線状化したシャトルプラスミドベクター４μｇを、Ｘｆｅｃｔ（商標）ポリマー（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ ６３１３１７、ＵＳＡ）を使用して細胞に移した。培養を４時間実行した。その後、培地を、２％ウシ胎仔血清を含有するＥＭＥＭ培地と置き換え、次いで細胞を７２時間更に培養した。ＨＳＶ１－ＴＫ遺伝子を含有する組換えワクシニアウイルスを、ＨｅＬａ細胞においてルシフェラーゼ活性を確認することによって得た。
その後、ＴＫ－骨肉腫（１４３ ＴＫ－）細胞株においてＢｒｄＵ（チミジン類似体、１５μｇ／ｍｌ）の存在下でＴＫ機能を欠く細胞の選択が可能になる生化学環境（ＴＫ－選択圧）が適用される状況で継代培養を連続して１０回実行することにより、ＨＳＶ１－ＴＫにおける突然変異を誘導した。突然変異したワクシニアウイルスのアミノ酸配列決定をＭａｃｒｏｇｅｎ（Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）に依頼した。その結果、突然変異したワクシニアウイルスのＨＳＶ１－ＴＫのＣ末端で４６位のアミノ酸であるグルタミン（Ｇｌｎ）をコードしているコドン（ｃａａ）が、終止コドンに点突然変異していることを同定した。加えて、突然変異したワクシニアウイルスのＨＳＶ１－ＴＫの場合、Ｃ末端で４６位以降のアミノ酸残基が欠失していることを同定した。最終的に、遺伝子的安定性があるＨＳＶ１－ＴＫ断片を発現する突然変異したワクシニアウイルス（ＯＴＳ－４１２）を得た。
加えて、ＨＳＶ－ＴＫにおいて最も報告されている突然変異は、４３０～４３６位（７Ｇ）及び５４８～５８３位（６Ｃ）のヌクレオチド配列部分に起こる塩基の挿入又は欠失に起因するフレームシフト突然変異である。野生型ＨＳＶ－ＴＫがワクシニアウイルスに挿入された後、突然変異の９８％以上が、これら部分に起こった。したがって、ヌクレオチド配列部分においてサイレント突然変異を引き起こすために、４３０～４３６位のヌクレオチド配列であるＧＧＧＧＧＧＧをＧＧＴＧＧＴＧに変化させ、５４８～５８３位におけるヌクレオチド配列であるＣＣＣＣＣＣをＣＣＣＣＴＣに変化させた。加えて、ＨＳＶ－ＴＫのアミノ酸配列中の１６７位のアラニンがチロシンとしてコードされるように適合されたＨＳＶ－ＴＫバリアント遺伝子をシャトルベクターとして使用した。その後、組換えワクシニアウイルスを、シャトルベクター及びＷｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ株（ＷＯＴＳ－４１８）ワクシニアウイルスを使用してＯＴＳ－４１２と同じ様式で作製した。
ＯＴＳ－４１２及びＷＯＴＳ－４１８中のタンパク質Ａ５６の遺伝子配列決定をＭａｃｒｏｇｅｎに依頼した。ＯＴＳ－４１２及びＷＯＴＳ－４１８中のタンパク質Ａ５６のそれぞれの配列に関して、整列化をＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔ及びＵｎｉｐｒｏｔによって実行した。その結果、１００％同一の配列は見いだされず；特に、２４５～２５０位のアミノ酸が欠失していることを同定した。高い配列相同性を有する他の４株との比較を実行した（図９９）。
調製１．２．タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスベクターの構築
野生型ポックスウイルス（ニューヨーク市保健局研究所）を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ；ＶＲ－１５３６）から購入した。ウイルスにおいて、チミジンキナーゼ遺伝子は、相同組換えによってノックアウトされ、レポーター遺伝子及びタンパク質Ａ５６又はその断片をコードする遺伝子（配列番号１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９又は１０６１、１０７２、１０７４（ＯＴＳ－４１２－Ａ５６）、１０７６、１０７８（ＷＯＴＳ－４１８－Ａ５６））で置換されている。
調製例１．３．タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの作製
タンパク質Ａ５６を含有する腫瘍溶解性ウイルスを作製するために、ＨｅＬａＳ３（ＡＴＣＣ）細胞株を、ウェル当たり４×１０５個細胞で６ウェルプレートに播種し、次いで１０％ウシ胎仔血清を含有するＥＭＥＭ培地で調製した。野生型ワクシニアウイルスによる処置を、ＭＯＩ ０．０５で実行した。２時間後、培地を、２％ウシ胎仔血清を含有するＥＭＥＭ培地と置き換え、次いで、調製例１．１において構築した腫瘍溶解性ウイルスベクター４μｇを、Ｘｆｅｃｔ試薬緩衝液を使用して細胞にトランスフェクトした。培養を４時間実行した。その後、培地を、２％ウシ胎仔血清を含有するＥＭＥＭ培地と置き換え、次いで細胞を７２時間更に培養した。最終的に、感染した細胞を採集し、その後凍結及び融解を３回繰り返した。細胞を超音波処理によって溶解し、スクロースクッション法を使用して、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する遊離腫瘍溶解性ウイルスを得た。
実験例１．がん細胞表面におけるタンパク質Ａ５６の発現
調製例１．３において作製したタンパク質Ａ５６若しくはその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスを使用して、ヒト肺がん細胞株（Ａ５４９）又はヒト結腸直腸がん細胞株（ＨＣＴ－１１６）を感染させ、それによりタンパク質Ａ５６が、がん細胞表面で発現されたかどうか同定した。
特に、Ａ５４９（肺癌、ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）又はＨＣＴ－１１６（結腸直腸癌、Ｋｏｒｅａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｂａｎｋ）細胞株を、ウェル当たり３．５×１０４個細胞で１２ウェルプレート中のカバーガラスに播種した。その後、細胞をＭＯＩ ０．１で、腫瘍溶解性ウイルスで感染させ、次いで３７℃、５％ ＣＯ２の条件で３０時間インキュベートした。インキュベートした細胞株のそれぞれを採取した。次いで、４％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）、１％（ｖ／ｖ）ＢＳＡ、１：５００の比で希釈した抗Ａ５６一次抗体（カタログ番号ＡＢＩＮ１６０６２９４、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ）及び１：２００の比で希釈した二次抗体（Ａｌｅｘａ ５９４、カタログ番号Ａ２１２０５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による処置を実行した。ＤＡＰＩ染色を実行した。次いで、各細胞株の試料をスライドガラスに置き、共焦点顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、ＦＶ１０００）を使用して観察した。
結果として、タンパク質Ａ５６が、腫瘍溶解性ウイルスで感染させたＡ５４９及びＨＣＴ－１１６細胞株の細胞表面で発現されたことを同定した（図２及び図３）。
実験例２．マウス腫瘍組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現の同定（Ｉ）
がん誘導マウスモデルを、調製例１．３において作製したタンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの腹膜内投与に供して、タンパク質Ａ５６が組織表面で発現されたかどうか同定した。
特に、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、ＨＴ－２９結腸直腸がん細胞株（Ｋｏｒｅａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｂａｎｋ、ＫＣＬＢ）を６．３×１０６個細胞で皮下移植して、がんを誘導した。平均腫瘍容積が、１５０ｍｍ３～２００ｍｍ３に達したら、マウスを２×１０７ｐｆｕの用量で調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスの腹膜内投与に供した。次いで、４日目にマウスを屠殺し、腫瘍組織並びに脳、心臓、肺、筋肉、腎臓、肝臓及び脾臓組織をそこから採集した。
タンパク質Ａ５６に対する免疫蛍光染色を、実験例１と同じ様式で実行した。ＤＡＰＩ染色を実行した。次いで、各組織の試料をスライドガラスに置き、蛍光顕微鏡を使用して観察した。
結果として、タンパク質Ａ５６が、腫瘍溶解性ウイルスを投与したマウスの腫瘍組織の表面で発現されたことを同定した。他方、タンパク質Ａ５６が、脳、心臓、肺、筋肉、腎臓、肝臓及び脾臓組織において発現されないことを同定した（図４）。これらの結果から、腫瘍溶解性ウイルスの投与後に腫瘍組織表面に発現されるタンパク質Ａ５６を標的化する抗体を作製した場合、この抗体を抗がん免疫療法として利用できることを同定した。
実験例３．ウサギの組織表面におけるタンパク質Ａ５６の発現の同定
正常なウサギを、調製例１．３において作製したタンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスの静脈内投与に供して、タンパク質Ａ５６が組織表面で発現されたかどうか同定した。
特に、ニュージーランドウサギを、１×１０８ｐｆｕ又は１×１０９ｐｆｕの用量で調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスの静脈内投与に供した。次いで、３又は８週目にウサギを屠殺し、脳、心臓、肺、筋肉、腎臓、肝臓及び脾臓組織をそこから採集した。
タンパク質Ａ５６に対する免疫蛍光染色を、実験例１と同じ様式で実行した。ＤＡＰＩ染色を実行した。次いで、各組織の試料をスライドガラスに置き、蛍光顕微鏡を使用して観察した。
結果として、タンパク質Ａ５６が、腫瘍溶解性ウイルスを投与したウサギの心臓、肺、筋肉、腎臓、肝臓及び脾臓組織において発現されないことを同定した。
他方、蛍光反応が、腫瘍溶解性ウイルスを投与したウサギの脳組織において検出された。検出された蛍光反応が抗Ａ５６抗体の非特異反応かどうか同定するために、腫瘍溶解性ウイルスを投与しなかった正常なウサギの脳組織を上と同じ様式で免疫蛍光染色に供し、次いでその中の蛍光反応を、蛍光顕微鏡を使用して確認した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルスを投与しなかったウサギの脳組織においても蛍光反応が検出された。この結果から、そのような蛍光反応が非特異反応であったことを同定した（図５）。
加えて、腫瘍溶解性ウイルスを投与しなかった正常なヒトの脳組織（Ｐｕｓａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｙａｎｇｓａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｋｏｒｅａ）を上と同じ様式で免疫蛍光染色に供した場合、弱い蛍光反応が蛍光顕微鏡を使用して検出された。しかしながら、抗体は血液脳関門を越えないという観点から、抗体が脳室内に直接投与されない限り、抗Ａ５６抗体は非特異反応を引き起こさないことになると決定される。
実験例４．マウス腫瘍組織の表面におけるタンパク質Ａ５６の発現の同定（ＩＩ）
がん誘導マウスモデルを、調製例１．３において作製したタンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルス及びヒドロキシ尿素の同時投与に供して、タンパク質Ａ５６が組織表面で発現されたかどうか同定した。
特に、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、Ｒｅｎｃａがん細胞株（Ｋｏｒｅａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｂａｎｋ）を６．３×１０６個細胞で皮下移植して、がんを誘導した。平均腫瘍容積が、１５０ｍｍ３～２００ｍｍ３に達したら、マウスを２×１０７ｐｆｕの用量で調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスの腫瘍内投与及び３０ｍｇ／ｋｇの用量でヒドロキシ尿素の投与に供した。
作製した腎がん細胞を移植したマウスを３群（ｎ＝４）に分けた。生理食塩水の腫瘍内投与を受けた群を対照群として設定し、腫瘍溶解性ウイルス（１×１０７ｐｆｕ）の単独投与を受けた群及び腫瘍溶解性ウイルス（１×１０７ｐｆｕ）とヒドロキシ尿素（３０ｍｇ／ｋｇ）の同時投与を受けた群を実験群として設定した。腫瘍溶解性ウイルスを０及び１４日目に２回腫瘍内投与し、ヒドロキシ尿素を、腫瘍溶解性ウイルスを投与した日を除いて腫瘍溶解性ウイルスの投与の１日前から腫瘍溶解性ウイルスの投与の２１日後まで１週間に６回腹膜内投与した。
マウスを腫瘍溶解性ウイルスの第１の投与の７、１０及び１４日後に屠殺し、腫瘍組織をそこから採集した。また、マウスを腫瘍溶解性ウイルスの第２の投与の２１、２４及び２８日後に屠殺し、腫瘍組織をそこから採集した。タンパク質Ａ５６に対する免疫蛍光染色を、実験例１と同じ様式で実行した。ＤＡＰＩ染色を実行した。次いで、各組織の試料をスライドガラスに置き、蛍光顕微鏡を使用して観察した。
結果として、腫瘍溶解性ウイルスの第１の投与の７、１０及び１４日後までの間腫瘍溶解性ウイルスだけの投与を受けた群及び腫瘍溶解性ウイルスとヒドロキシ尿素の同時投与を受けた群のマウスの腫瘍表面においてタンパク質Ａ５６が明らかに発現されたことを同定した（図６及び図７）。
加えて、腫瘍溶解性ウイルスの第２の投与を腫瘍溶解性ウイルスの第１の投与の１４日後に実行した場合、タンパク質Ａ５６が、第２の投与の７、１０及び１４日後までの間腫瘍表面で発現したことを同定した（図８及び図９）。特に、タンパク質Ａ５６が、２４日目（Ｄ１０）に死細胞及び生細胞両方において発現されたことを同定した。
更にまた、腫瘍容積が、生理食塩水だけの投与を受けた群のマウスと比較して、腫瘍溶解性ウイルスの投与を単独で受けた群のマウス及び腫瘍溶解性ウイルスとヒドロキシ尿素の同時投与を受けた群のマウスの両方において有意に低下したことを同定した（図１０）。加えて、体重を３群のマウスについて３、７、１４、１８及び２１日目に測定した。結果として、全ての群においていかなる有意な体重減少も観察されなかった（図１１）。
実験例５．細胞表面におけるタンパク質Ａ５６又はその断片の発現
調製例１．３において作製したタンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する腫瘍溶解性ウイルスを使用してＡ５４９がん細胞株を処置し、タンパク質Ａ５６が細胞表面で発現されたかどうか同定した。
特に、Ａ５４９（肺癌、ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）細胞株を、ウェル当たり３．５×１０４個細胞で１２ウェルプレート中のカバーガラスに播種した。その後、細胞をＭＯＩ ０．１で、腫瘍溶解性ウイルスで感染させ、次いで３７℃、５％ ＣＯ２の条件で３０時間インキュベートした。各インキュベートした細胞株を採取した。次いで、４％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）、１％（ｖ／ｖ）ＢＳＡ、１：５００の比で希釈した抗Ａ５６抗体（カタログ番号ＡＢＩＮ１６０６２９４、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ）及び１：２００の比で希釈した二次抗体（Ａｌｅｘａ ５９４、カタログ番号Ａ２１２０５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による処置を実行した。核をＤＡＰＩで染色し、ゴルジ体を蛍光色素で染色した。その後、細胞株の試料をスライドガラスに置き、共焦点顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、ＦＶ１０００）を使用して観察した。結果を図１２及び図１３並びに表２に示す。
Figure 2022550667000004
野生型Ａ５６（Ａ５６－Ｇ）及びＡ５６の６つの領域の部分的短縮によって得られるＡ５６の断片を、細胞表面で発現させておいた。その結果、野生型Ａ５６（Ａ５６－Ｇ）及びＩｇＶ様ドメインが短縮されたＡ５６－１２１だけが細胞表面に達し、細胞表面上に発現されることを同定した。ＩｇＶ様ドメインを取り除いたＡ５６バリアントのうち、シグナルペプチド、膜貫通ドメイン、ストーク領域（stalk region）及びタンデムリピート領域を個々に又は組み合わせて短縮したバリアントは、原形質膜で発現しないことを同定した。加えて、ＩｇＶ様ドメインを含む場合、膜貫通ドメインだけを含むバリアントも、原形質膜で発現しないことを同定した。すなわち、ＩｇＶ様ドメインが取り除かれ、５つの領域を含むバリアントが、原形質膜で発現することを同定した。
ＩＩ．タンパク質Ａ５６に結合する抗体又はその断片の作製
調製例２．タンパク質Ａ５６及びその断片の調製
プライマーを調製して、野生型タンパク質Ａ５６から特定の領域を除去し、ＧＦＰと重複する領域を形成することによってオーバーラッピングＰＣＲを実行した。
特に、ベクターＤＮＡ（Ｎ２９３Ｆ－Ａ５６－Ｃ－ＨＩＳ）を増幅し、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞に導入し、その中で過剰発現させた。その後、一次精製を、親和性クロマトグラフィー（Ｎｉ－ＮＴＡ）によって実行し、次いで二次精製を陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）によって実行した。このように、Ａ５６－Ｃ－ＨＩＳタンパク質を最終的に作製した（図９７及び図９８）。
調製例３．タンパク質Ａ５６に結合する抗体又はその断片の作製（Ｉ）
タンパク質Ａ５６又はそのバリアント若しくは断片に特異的に結合する抗Ａ５６抗体の作製をＹｂｉｏｌｏｇｉｃｓに依頼した。６１個の抗体を、ファージライブラリ技術を使用して作製し、そのＣＤＲを分析した。ファージライブラリを、Ａ５６抗原でコーティングした管に添加し、バイオパニングを実行して、結合ヒットを見いだした。特異的結合を有するファージを、平均して３回洗浄を実行することによって選択した。３回のパニングプロセスを実行した。次いで、親和性試験を実行し、高親和性を示したコロニーを少量拾い上げてコロニーが実際の抗原との親和性を呈するかどうか同定した。ヒット数が比較的多い組を選択し、拾い上げ及びヒット選択には自動化されたシステムを使用した。
このようにして作製した抗Ａ５６抗体のそれぞれとタンパク質Ａ５６の間の親和性を測定した。結果を図１４～図１９に例示する。加えて、各抗Ａ５６抗体の生産性を、図２０Ａ～図２０Ｃに例示した。加えて、図２１～図３７は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、作製した抗Ａ５６抗体のそれぞれを同定することによって得られた結果を例示する。
実験例６．抗Ａ５６抗体の親和性測定
免疫管の各ウェルをタンパク質Ａ５６でコーティングし、次いで、ブロッキングプロセスを実行した。ブロッキングプロセスの後、各ウェルを、１００ｎＭから開始する３倍段階希釈に供した抗体と室温で既定の時間反応させた。その後、ＰＢＳによる洗浄を３回実行し、次いで、二次抗体による処置も室温で既定の時間実行した。その後、各抗Ａ５６抗体とタンパク質Ａ５６の間の親和性をそれぞれの濃度で測定した。
実験例７．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定（Ｉ）
調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスを使用して、ＭＯＩ １でＨｅＬａ、ＨＴ－２９、Ａ５４９、ＭＣＦ－７及びＰＣ－３細胞株のそれぞれを感染させた。２４時間後、腫瘍溶解性ウイルスを感染させた各細胞株を調製例３において作製した５つの抗Ａ５６抗体（ａｂ０１、ａｂ０２、ａｂ０３、ａｂ０４、ａｂ０５）のそれぞれで処置し、次いで反応を４℃で１時間進行させた。次いでＰＢＳによる洗浄を３回実行し、次いで抗ｈＩｇＧ抗体（ＦＩＴＣ、Ａｂｃａｍ）による処置を実行した。その後、反応を４℃の温度で１時間進行させた。１時間後、染色を、製造業者の手順書に従ってＰＩ染色キット（ＢＤ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ｋｉｔ）を使用して実行し、次いで分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
図３８及び図３９に例示した通り、腫瘍溶解性ウイルスで処置しなかったがん細胞株（細胞のみ）に対する分析結果（青色領域）との比較は、腫瘍溶解性ウイルスで処置したがん細胞株（細胞＋ＶＶ）が抗Ａ５６抗体に結合し、それにより赤色領域へのシフトを引き起こしたことを示す。これらの結果から、抗Ａ５６抗体が、腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６に結合したことを同定した。
調製例４．タンパク質Ａ５６に結合する抗体又はその断片の作製（ＩＩ）
加えて、抗Ａ５６抗体（カタログ番号ＡＢＩＮ１６０６２９４、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ）に基づく抗体の作製をＬａｋｅＰｈａｒｍａに依頼し、抗体を、リバースコーディングエンジニアリング操作によって作製した。したがって作製した２つの抗体を、「ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３」及び「ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント４」に指定した。
実験例８．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定（ＩＩ）
調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスを使用して、ＭＯＩ １でＨｅＬａ細胞株を感染させた。２４時間後、腫瘍溶解性ウイルスを感染させたＨｅＬａ細胞株を、抗Ａ５６抗体（カタログ番号ＡＢＩＮ１６０６２９４、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ）及び調製例４において作製した２つの抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）でそれぞれ処置し、次いで反応を４℃で１時間進行させた。次いでＰＢＳによる洗浄を３回実行し、次いで抗ｈＩｇＧ抗体（ＦＩＴＣ、Ａｂｃａｍ）による処置を実行した。その後、反応を４℃の温度で１時間進行させた。１時間後、染色を、製造業者の手順書に従ってＰＩ染色キット（ＢＤ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ｋｉｔ）を使用して実行し、次いで分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂａｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
結果として、陽性対照である抗Ａ５６抗体（カタログ番号ＡＢＩＮ１６０６２９４、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｏｎｌｉｎｅ）による処置を実行した場合（細胞＋ＯＶ）、抗Ａ５６抗体は、腫瘍溶解性ウイルスによる処置のためＨｅＬａ細胞株の細胞表面に発現されたＡ５６に結合し、それによりＨｅＬａ細胞株のみと処置を実行した場合（細胞のみ）と比較して右側へのシフトを起こしたことを同定した（図４０）。
加えて、実験群である２つの抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）のそれぞれによる処置を実行した場合（細胞＋ＯＶ）、抗Ａ５６抗体は、腫瘍溶解性ウイルスによる処置のためＨｅＬａ細胞株の細胞表面に発現されたＡ５６に結合し、それによりＨｅＬａ細胞株のみと処置を実行した場合（細胞のみ）と比較して右側へのシフトを起こした（図４１及び図４２）。これらの結果から、調製例４において作製した２つの抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）が、細胞表面に発現されるＡ５６に特異的に結合することを同定した（図４３）。
実験例９．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定：Ａ５４９がん細胞株（Ｉ）
タンパク質Ａ５６が細胞株で発現されるように、Ａ５４９がん細胞株を、配列番号１０７４又は１０７８のタンパク質Ａ５６をコードし、調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２又はＷＯＴＳ－４１８）で処置した。次いで、抗Ａ５６抗体（１０個のヒト抗Ａ５６抗体及び２つのマウス抗Ａ５６抗体）がタンパク質Ａ５６に結合したかどうかを同定した。
Ａ５４９がん細胞株を、各腫瘍溶解性ウイルスによりＭＯＩ １で処置した。２４時間後、作製例３において作製し、結合ドメインとしてヒトｓｃＦｖを使用する１０個の抗体（結合親和性上位１０個、すなわち、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）、及び調製例４において作製した２つの抗体（ＬＰバリアント０３及びＬＰバリアント０４）による処置を実行した。
１時間後、二次抗体（ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＦＣ、ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｈ＆Ｌ）を、それに添加した。１時間後に洗浄を実行し、Ａ５４９がん細胞株をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色し、フローサイトメトリーで分析した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルス処置したＡ５４９がん細胞株に対して１０個のヒト抗体及び２つのマウス抗体が結合シグナルを呈し、９０％以上類似していることを同定した（図４４～図５５）。加えて、腫瘍溶解性ウイルス処置したＡ５４９がん細胞株において観察されたピークに関して１０個のヒト抗体の間にわずかな差異が存在することを同定したが、差異は有意でなかった（図５６及び図５７）。
実験例１０．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定：Ａ５４９がん細胞株（ＩＩ）
タンパク質Ａ５６が細胞株で発現されるように、Ａ５４９がん細胞株を、配列番号１０７４又は１０７８のタンパク質Ａ５６をコードし、調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２又はＷＯＴＳ－４１８）で処置した。次いで、調製例３及び４において作製した抗Ａ５６抗体（Ｙｂｉｏｌｏｇｉｃｓ：Ａｂ１８及びＡｂ１６、ＬａｋｅＰｈａｒｍａ：ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３及び４）が、タンパク質Ａ５６に結合するかどうか同定した。
Ａ５４９がん細胞株を、実験例９と同じ様式で腫瘍溶解性ウイルス及び抗Ａ５６抗体で処置した。Ａ５４９がん細胞株をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色し、分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂａｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルス処置したＡ５４９がん細胞株に対してＹｂｉｏｌｏｇｉｃｓ及びＬａｋｅＰｈａｒｍａによって作製された抗Ａ５６抗体のそれぞれが結合シグナルを呈し、９３％以上類似していることを同定した（図５８～図６１）。
実験例１１．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定：ＰＣ３がん細胞株（Ｉ）
タンパク質Ａ５６が細胞株で発現されるように、ＰＣ３がん細胞株を、配列番号１０７４又は１０７８のタンパク質Ａ５６をコードし、調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２又はＷＯＴＳ－４１８）で処置した。次いで、抗Ａ５６抗体（１０個のヒト抗Ａ５６抗体及び２つのマウス抗Ａ５６抗体）がタンパク質Ａ５６に結合したかどうかを同定した。
実験例９と同じ様式で、ＰＣ３がん細胞株を、各腫瘍溶解性ウイルス、並びに作製例３において作製し、結合ドメインとしてヒトｓｃＦｖを使用する１０個の抗体（結合親和性上位１０個、すなわち、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）、及び調製例４において作製した２つの抗体（ＬＰバリアント０３及びＬＰバリアント０４）で処置した。ＰＣ３がん細胞株をＰＩで染色し、分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂａｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルス処置したＰＣ３がん細胞株に対して１０個のヒト抗体及び２つのマウス抗体が結合シグナルを呈し、９０％以上類似していることを同定した（図６２～図７３）。加えて、腫瘍溶解性ウイルス処置したＰＣ３がん細胞株において観察されたピークに関して１０個のヒト抗体の間にわずかな差異が存在するが、シグナルは、６０％以上、抗Ａ５６抗体Ａｂ５１が、それぞれ７０．７１％及び７８．６１％で最も高い結合シグナルを呈することを同定した（図７４及び図７５）。
実験例１２．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定：ＰＣ３がん細胞株（ＩＩ）
タンパク質Ａ５６が細胞株で発現されるように、ＰＣ３がん細胞株を、配列番号１０７４又は１０７８のタンパク質Ａ５６をコードし、調製例１において作製した腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２又はＷＯＴＳ－４１８）で処置した。次いで、調製例３及び４において作製した抗Ａ５６抗体（Ｙｂｉｏｌｏｇｉｃｓ：Ａｂ１８及びＡｂ１６、ＬａｋｅＰｈａｒｍａ：ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）が、タンパク質Ａ５６に結合するかどうか同定した。
ＰＣ３がん細胞株を、実験例９と同じ様式で腫瘍溶解性ウイルス及び抗Ａ５６抗体で処置した。ＰＣ３がん細胞株をＰＩで染色し、分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂａｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルス処置したＰＣ３がん細胞株に対してＹｂｉｏｌｏｇｉｃｓによって作製されたそれぞれの抗Ａ５６抗体（Ａｂ１８及びＡｂ１６）が、それぞれ６０％以上、及び７０％以上の結合シグナルを呈することを同定した（図７６及び図７７）。加えて、ＬａｋｅＰｈａｒｍａによって作製されたそれぞれの抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）が、全て９０％以上の結合シグナルを呈することを同定した（図７８及び図７９）。
実験例１３．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定：ＭＣＦ７がん細胞株（Ｉ）
タンパク質Ａ５６が細胞株で発現されるように、ＭＣＦ７がん細胞株を、配列番号１０７４又は１０７８のタンパク質Ａ５６をコードし、調製例１において作製した腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２又はＷＯＴＳ－４１８）で処置した。次いで、抗Ａ５６抗体（１０個のヒト抗Ａ５６抗体及び２つのマウス抗Ａ５６抗体）がタンパク質Ａ５６に結合したかどうかを同定した。
実験例９と同じ様式で、ＭＣＦ７がん細胞株を、各腫瘍溶解性ウイルス、並びに作製例３において作製し、結合ドメインとしてヒトｓｃＦｖを使用する１０個の抗体（結合親和性上位１０個、すなわち、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ０１、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ０８、Ａｂ０３、Ａｂ５１、Ａｂ５５、Ａｂ１６）、及び調製例４において作製した２つの抗体（ＬＰバリアント０３及びＬＰバリアント０４）で処置した。ＭＣＦ７がん細胞株をＰＩで染色し、分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂａｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルス処置したＭＣＦ７がん細胞株に対して１０個のヒト抗体及び２つのマウス抗体が結合シグナルを呈し、８０％以上類似していることを同定した（図８０～図９１）。加えて、腫瘍溶解性ウイルス処置したＭＣＦ７がん細胞株において観察されたピークに関して１０個のヒト抗体の間にわずかな差異が存在するが、シグナルは８０％以上であることを同定した（図９２及び図９３）。
実験例１４．腫瘍細胞表面で発現されるタンパク質Ａ５６と抗Ａ５６抗体の間の結合の同定：ＭＣＦ７がん細胞株（ＩＩ）
タンパク質Ａ５６が細胞株で発現されるように、ＭＣＦ７がん細胞株を、配列番号１０７４又は１０７８のタンパク質Ａ５６をコードし、調製例１において作製した腫瘍溶解性ウイルス（ＯＴＳ－４１２又はＷＯＴＳ－４１８）で処置した。次いで、調製例４において作製した抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａ：ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）が、タンパク質Ａ５６に結合するかどうか同定した。
ＭＣＦ７がん細胞株を、実験例９と同じ様式で腫瘍溶解性ウイルス及び抗Ａ５６抗体で処置した。ＭＣＦ７がん細胞株をＰＩで染色し、分析をフローサイトメトリー（Ｍｏｆｌｏ Ａｓｔｒｉｏｓ ＥＱ、Ｂａｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で実行した。
その結果、腫瘍溶解性ウイルス処置したＭＣＦ７がん細胞株に対してＬａｋｅＰｈａｒｍａによって作製されたそれぞれの抗Ａ５６抗体（ＬａｋｅＰｈａｒｍａバリアント３、４）が、全て９７％以上の結合シグナルを呈することを同定した（図９４及び図９５）。
ＩＩＩ．腫瘍溶解性ウイルス及び抗体を使用する抗がん効果の同定
実験例１５．腫瘍溶解性ウイルス及び抗体を使用する抗がん効果の同定
実験例２と同じ様式で作製したがん誘導マウスを、調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスの投与に供した。既定の時間が経過した後、対照群として設定したがん誘導マウスは生理的食塩水を受け、実験群として設定したがん誘導マウスは調製例３において作製した抗体を受けた。その結果、腫瘍溶解性ウイルスによって死滅しなかったがん細胞が対照群の腫瘍組織中に残ったが、実験群の腫瘍組織においてがん細胞は完全に死滅した。
実験例１６．腫瘍溶解性ウイルス及び免疫細胞を使用する抗がん効果の同定
実験例２と同じ様式で作製したがん誘導マウスを、調製例１．３において作製した腫瘍溶解性ウイルスの投与に供した。既定の時間が経過した後、対照群として設定したがん誘導マウスは生理的食塩水を受け、実験群として設定したがん誘導マウスは作製した免疫細胞を受けた。その結果、腫瘍溶解性ウイルスによって死滅しなかったがん細胞が対照群の腫瘍組織中に残ったが、実験群の腫瘍組織においてがん細胞は完全に死滅した。

Claims (24)

  1. タンパク質Ａ５６又はその断片に特異的に結合する抗体又はその断片を活性成分として含む抗がん剤。
  2. 前記抗体又はその断片が、
    配列番号１、１８、３５、５２、６９、８６、１０３、１２０、１３７、１５４、１７１、１８８、２０５、２２２、２３９、２５６、２７３、２９０、３０７、３２４、３４１、３５８、３７５、３９２、４０９、４２６、４４３、４６０、４７７、４９４、５１１、５２８、５４５、５６２、５７９、５９６、６１３、６３０、６４７、６６４、６８１、６９８、７１５、７３２、７４９、７６６、７８３、８００、８１７、８３４、８５１、８６８、８８５、９０２、９１９、９３６、９５３、９７０、９８７、１００４、１０２１、１０６２、及び１０６３からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１；
    配列番号２、１９、３６、５３、７０、８７、１０４、１２１、１３８、１５５、１７２、１８９、２０６、２２３、２４０、２５７、２７４、２９１、３０８、３２５、３４２、３５９、３７６、３９３、４１０、４２７、４４４、４６１、４７８、４９５、５１２、５２９、５４６、５６３、５８０、５９７、６１４、６３１、６４８、６６５、６８２、６９９、７１６、７３３、７５０、７６７、７８４、８０１、８１８、８３５、８５２、８６９、８８６、９０３、９２０、９３７、９５４、９７１、９８８、１００５、１０２２、及び１０６４からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２；及び
    配列番号３、２０、３７、５４、７１、８８、１０５、１２２、１３９、１５６、１７３、１９０、２０７、２２４、２４１、２５８、２７５、２９２、３０９、３２６、３４３、３６０、３７７、３９４、４１１、４２８、４４５、４６２、４７９、４９６、５１３、５３０、５４７、５６４、５８１、５９８、６１５、６３２、６４９、６６６、６８３、７００、７１７、７３４、７５１、７６８、７８５、８０２、８１９、８３６、８５３、８７０、８８７、９０４、９２１、９３８、９５５、９７２、９８９、１００６、１０２３、及び１０６５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに
    配列番号４、２１、３８、５５、７２、８９、１０６、１２３、１４０、１５７、１７４、１９１、２０８、２２５、２４２、２５９、２７６、２９３、３１０、３２７、３４４、３６１、３７８、３９５、４１２、４２９、４４６、４６３、４８０、４９７、５１４、５３１、５４８、５６５、５８２、５９９、６１６、６３３、６５０、６６７、６８４、７０１、７１８、７３５、７５２、７６９、７８６、８０３、８２０、８３７、８５４、８７１、８８８、９０５、９２２、９３９、９５６、９７３、９９０、１００７、１０２４、及び１０６６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１；
    配列番号５、２２、３９、５６、７３、９０、１０７、１２４、１４１、１５８、１７５、１９２、２０９、２２６、２４３、２６０、２７７、２９４、３１１、３２８、３４５、３６２、３７９、３９６、４１３、４３０、４４７、４６４、４８１、４９８、５１５、５３２、５４９、５６６、５８３、６００、６１７、６３４、６５１、６６８、６８５、７０２、７１９、７３６、７５３、７７０、７８７、８０４、８２１、８３８、８５５、８７２、８８９、９０６、９２３、９４０、９５７、９７４、９９１、１００８、１０２５、及び１０６７からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２；及び
    配列番号６、２３、４０、５７、７４、９１、１０８、１２５、１４２、１５９、１７６、１９３、２１０、２２７、２４４、２６１、２７８、２９５、３１２、３２９、３４６、３６３、３８０、３９７、４１４、４３１、４４８、４６５、４８２、４９９、５１６、５３３、５５０、５６７、５８４、６０１、６１８、６３５、６５２、６６９、６８６、７０３、７２０、７３７、７５４、７７１、７８８、８０５、８２２、８３９、８５６、８７３、８９０、９０７、９２４、９４１、９５８、９７５、９９２、１００９、１０２６、及び１０６８からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、請求項１に記載の抗がん剤。
  3. 前記抗体又はその断片が、
    配列番号１、３５、１２０、２２２、２３９、２９０、３２４、３４１、８５１、９１９、１０６２又は１０６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    配列番号２、３６、１２１、２２３、２４０、２９１、３２５、３４２、８５２、９２０又は１０６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
    配列番号３、３７、１２２、２２４、２４１、２９２、３２６、３４３、８５３、９２１又は１０６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに
    配列番号４、３８、１２３、２２５、２４２、２９３、３２７、３４４、８５４、９２２又は１０６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    配列番号５、３９、１２４、２２６、２４３、２９４、３２８、３４５、８５５、９２３又は１０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
    配列番号６、４０、１２５、２２７、２４４、２９５、３２９、３４６、８５６、９２４又は１０６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、請求項１に記載の抗がん剤。
  4. 腫瘍溶解性ウイルスに感染したがん細胞を標的化する、請求項１に記載の抗がん剤。
  5. 前記腫瘍溶解性ウイルスが、ワクシニアウイルスである、請求項４に記載の抗がん剤。
  6. 前記腫瘍溶解性ウイルスが、タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含有する、請求項５に記載の抗がん剤。
  7. 前記タンパク質Ａ５６が、野生型タンパク質Ａ５６又は前記タンパク質Ａ５６のバリアントである、請求項１に記載の抗がん剤。
  8. 前記タンパク質Ａ５６又はその断片が、配列番号１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０７３、１０７５、１０７７又は１０７９によって表されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗がん剤。
  9. 前記タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸が、配列番号１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９、１０６１、１０７２、１０７４、１０７６又は１０７８によって表されるヌクレオチド配列を含む、請求項６に記載の抗がん剤。
  10. 肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、甲状腺がん、乳がん、脳がん、頭頸部がん、食道がん、皮膚がん、胸腺がん、胃がん、結腸がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮がん、膀胱がん、直腸がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、リンパ腫、急性白血病、多発性骨髄腫からなる群から選択されるがん及びその組合せを予防又は処置することを目的とする、請求項１に記載の抗がん剤。
  11. タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸を含む、腫瘍溶解性ウイルス。
  12. ワクシニアウイルスである、請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
  13. 前記タンパク質Ａ５６が、野生型タンパク質Ａ５６又は前記タンパク質Ａ５６のバリアントである、請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
  14. 前記タンパク質Ａ５６又はその断片をコードしている核酸が、配列番号１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、１０５１、１０５３、１０５５、１０５７、１０５９、１０６１、１０７２、１０７４、１０７６又は１０７８によって表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
  15. タンパク質Ａ５６又はその断片に結合する抗体又はその断片。
  16. 配列番号１、３５、１２０、２２２、２３９、２９０、３２４、３４１、８５１、９１９、１０６２又は１０６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    配列番号２、３６、１２１、２２３、２４０、２９１、３２５、３４２、８５２、９２０又は１０６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
    配列番号３、３７、１２２、２２４、２４１、２９２、３２６、３４３、８５３、９２１又は１０６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；並びに
    配列番号４、３８、１２３、２２５、２４２、２９３、３２７、３４４、８５４、９２２又は１０６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    配列番号５、３９、１２４、２２６、２４３、２９４、３２８、３４５、８５５、９２３又は１０６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
    配列番号６、４０、１２５、２２７、２４４、２９５、３２９、３４６、８５６、９２４又は１０６８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、請求項１５に記載の抗体又はその断片。
  17. 配列番号１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、１０５２、１０５４、１０５６、１０５８、１０６０、１０７３、１０７５、１０７７又は１０７９によって表されるアミノ酸配列を含む、がん標的化ポリペプチド又はその断片。
  18. 請求項１７に記載のがん標的化ポリペプチド又はその断片をコードしている単離された核酸。
  19. 請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルス；及び請求項１５に記載の抗体又はその断片を含む、がんを処置するためのキット。
  20. 請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルスを含む、がんを標的化するための医薬組成物。
  21. がんを標的化するための請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルスの使用。
  22. 個体に請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップを含む、がんを標的化するための方法。
  23. がんを処置するための、請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルス及び請求項１５に記載の抗体又はその断片の使用。
  24. ｉ）個体に請求項１１に記載の腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップと；
    ｉｉ）前記個体に請求項１５に記載の抗体又はその断片を投与するステップとを含む、がんを処置する方法。
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