CN115028697A - 降糖肽及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种降糖肽及其制备方法和应用,属于降糖技术领域,降糖肽由以下重量份数的原料组成:青刺果粕肽15‑25份、西兰花籽肽15‑25份、榧子仁肽5‑10份、黑老虎籽肽5‑10份、红参果肽5‑10份、虎掌菌肽2‑4份、珊瑚菌肽2‑4份、干巴菌肽2‑4份;本发明还提供了上述降糖肽在降血糖食品、药品中的应用。本发明的降糖肽具有很高的α‑淀粉酶抑制活性,即具有很高的降糖活性,从而可以对糖尿病患者起到维持血糖的保健效果。
Description
技术领域
本发明属于糖尿病治疗技术领域,具体涉及一种降糖肽,另外,本发明还涉及降糖肽的制备方法和应用。
背景技术
糖尿病是一种慢性内分泌疾病,全球发病率逐年上升。其中II型糖尿病是由于胰岛素缺乏或抵抗引起的血糖水平升高,而胰岛素抵抗导致食入的葡萄糖不能被充分利用,因此糖尿病患者经常有饥饿感。
目前,II型糖尿病的主要治疗方法包括使用胰岛素或口服降糖药维持正常范围的血糖水平,然而,这些方法都受到不良副作用和毒性的限制。有研究报道,天然产物的降糖成分因其具有有效性、慢性调节和减少副作用而广受欢迎,因此,有必要研制一种适宜II型糖尿病人的天然降糖产品。
发明内容
基于上述背景问题,本发明旨在提供一种降糖肽,具有很高的降糖活性,且能更快的被吸收,从而可以对糖尿病患者起到维持血糖的保健效果;本发明的另一目的是提供上述降糖肽的制备方法和应用。
为达到上述目的,一方面,本发明实施例提供的技术方案是:
降糖肽,由以下重量份数的原料组成:
青刺果粕肽15-25份、西兰花籽肽15-25份、榧子仁肽5-10份、黑老虎籽肽5-10份、红参果肽5-10份、虎掌菌肽2-4份、珊瑚菌肽2-4份、干巴菌肽2-4份。
在本发明的降糖肽组分中,青刺果粕是果仁榨油后的副产品,含有丰富的活性物质,如黄酮、多糖和极高的营养成分如粗脂肪、粗蛋白质、氨基酸、维生素和微量元素等;西兰花籽除具有抗肿瘤、抗氧化损伤、免疫调节以及抗菌作用,并且可以有效改善肥胖、缓解糖尿病引发的相关疾病。
而青刺果粕肽、西兰花籽肽等中还具有很高的α-淀粉酶抑制活性,因此具有很高的降糖活性。
另外,黑老虎籽中包括16种氨基酸,其中7种为人体的必需氨基酸,9种为非必需氨基酸,具有降血脂,提高免疫力的作用;红参果含有20种人体必需的氨基酸,具有调理血液、降低血糖、血脂和胆固醇,可帮助消化,调理肠胃,清肝解毒的功效;虎掌菌的蛋白脱除率达50.15%,有降低血中胆固醇的作用;珊瑚菌中有6种人体必需氨基酸,具有增强免疫力的作用;干巴菌含粗蛋白19.2%,还含有人体不能合成的多种氨基酸。这几种组分均含有丰富的蛋白质和氨基酸,与青刺果粕、西兰花籽、榧子仁组合既能提高降糖,降血脂的作用,还具有清热解毒的功效。
另一方面,本发明还提供一种降糖肽的制备方法,包括以下步骤:
将青刺果粕、西兰花籽、榧子仁、黑老虎籽、红参果、虎掌菌、珊瑚菌、干巴菌混合制成的原料粉加入超纯水中进行超声搅拌得到原料液,之后对原料液依次进行碱提、酸沉,收集酸沉后的沉淀进行水溶,调pH至中性,冷冻干燥后得到粗蛋白;
将黑曲霉菌株接种到PDA培养基上培养,之后用无菌生理盐水将孢子悬液重悬得到黑曲霉孢子悬液;
将原料粉与所述粗蛋白混合后灭菌、冷却,之后加入无菌水中,并接种所述黑曲霉孢子悬液,搅拌均匀后封闭培养得到固态发酵基质;
向所述固态发酵基质中加入无菌水进行依次进行超声提取、沸水浴,之后冷却至室温后进行微波干燥,最后对干燥后的样品进行超微粉碎即可。
进一步地,所述原料粉与超纯水的质量比为1:15-30,超声搅拌时间为30-40min。
进一步地,碱提、酸沉工艺为:调节原料液的pH至8.5-9.0,碱提2-3h,之后在9000-10000r/min下离心10-15min,收集上清液;
调节上清液的pH至3.5-3.9,酸沉30-40min,之后在9000-10000r/min下离心10-15min,收集沉淀。
进一步地,黑曲霉菌株在PDA培养基上的培养条件为:在温度5-45℃、湿度60-90%的条件下培养4-10d。
进一步地,黑曲霉孢子悬液的浓度为1-5×106-8个/mL。
更进一步地,向含有原料粉和粗蛋白混合物的无菌水中加入0.5-2.5wt%硫酸铵和0.1-1.0wt%磷酸二氢钾,并接种2-6mL黑曲霉孢子悬液,之后在温度30-40℃、湿度60-90%的条件下培养24-84h。
进一步地,微波干燥工艺为:采用400-600W的微波功率干燥至样品含水量为20-30%。
进一步地,超微粉碎工艺为:在20-40℃条件下超微粉碎5-25min,控制磨介填充率为70-90%。
本发明的制备方法中主要通过碱提、酸沉等步骤控制粗蛋白的得率,经过试验得出,碱提工艺的pH在8.5-9.0,碱提时间在2-3h,酸沉工艺的pH在3.5-3.9,酸沉时间在30-40min的范围内能够保证粗蛋白的得率在较高的水平。
本发明的制备方法中的固态发酵工艺使得各组分发酵产生多肽,通过多肽抑制了小肠粘膜中的α-淀粉酶的活性,进而竞争性地抑制寡糖和酶的结合,然后通过如氢键、极性和疏水性等作用对酶产生影响,进而影响酶的活性,减少葡萄糖的吸收。
第三方面,本发明实施例还提供了上述降糖肽在降血糖食品、药品中的应用。
与现有技术相比,本发明具有以下效果:
1、本发明的降糖肽具有很高的α-淀粉酶抑制活性,即具有很高的降糖活性,且能更快的被吸收,从而可以对糖尿病患者起到维持血糖的保健效果。
2、通过本发明的降糖肽制备的降糖食品对于糖尿病患者既能满足饱腹感又有稳定血糖的作用,相对长期使用胰岛素或降糖药品而对人体造成伤害,显得更为健康有效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例7和8中的降糖饼干消化时的葡萄糖释放量随时间的变化图;
图2为本发明实施例11和12中的降糖饼干消化时的葡萄糖释放量随时间的变化图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
降糖肽,由以下重量的原料组成:青刺果粕肽15g、西兰花籽肽15g、榧子仁肽5g、黑老虎籽肽5g、红参果肽5g、虎掌菌肽2g、珊瑚菌肽2g、干巴菌肽2g。
降糖肽的制备方法包括以下步骤:
(1)将青刺果粕肽15g、西兰花籽肽15g、榧子仁肽5g、黑老虎籽肽5g、红参果肽5g、虎掌菌肽2g、珊瑚菌肽2g、干巴菌肽2g混合得到51g原料粉,取41g原料粉与超纯水按照质量比1:15的配比混合,超声搅拌30min后得到原料液;
调节原料液的pH至8.5,碱提2h,之后在9000r/min下离心10min,收集上清液;调节上清液的pH至3.5,酸沉30min,之后在9000r/min下离心10min,收集沉淀;
将收集的沉淀用超纯水清洗3次,然后重新溶解于超纯水中,调pH至中性,冷冻干燥后得到粗蛋白。
(2)将黑曲霉菌株接种到PDA培养基上,并在温度25℃、湿度60%的条件下培养4d,之后用无菌生理盐水将孢子悬液重悬得到浓度为1×106个/mL的黑曲霉孢子悬液,用于后续发酵。
(3)将步骤(1)得到的粗蛋白与剩余的10g原料粉混合,在120℃下灭菌20min,冷却后加入5mL无菌水,添加粗蛋白与原料粉混合物质量的0.5%硫酸铵和0.1%磷酸二氢钾作为微生物的碳源和氮源,并接种2mL步骤(2)中的黑曲霉孢子悬液,搅拌均匀后封闭,在温度30℃、湿度60%的条件下培养24h得到固态发酵基质。
(4)向步骤(3)中的固态发酵基质中加入50mL无菌水,超声提取30min,之后在沸水浴煮沸5min,冷却至室温后,依次进行微波干燥和超微粉碎;
微波工艺为:在微波功率400W、干燥温度为20℃的条件下干燥0.5h,干燥至样品含水量30%;超微粉碎工艺为:在20℃条件下超微粉碎5min,控制磨介填充率为70%,粉碎后得到多肽。
(5)将步骤(4)中得到的多肽装入超滤装置中,放入截留量为5kDa的超滤膜于底部,磁力搅拌器上调至转速150rpm,收集分子量>5kDa的多肽组分,之后进行冷冻干燥。
实施例2
降糖肽,由以下重量的原料组成:青刺果粕肽15g、西兰花籽肽15g、榧子仁肽5g、黑老虎籽肽5g、红参果肽5g、虎掌菌肽2g、珊瑚菌肽2g、干巴菌肽2g。
与实施例1不同的是,本实施例在进行降糖肽的制备时,在超滤步骤中,收集分子量<5kDa的多肽组分,之后进行冷冻干燥。
实施例3
降糖肽,由以下重量的原料组成:青刺果粕肽20g、西兰花籽肽20g、榧子仁肽8g、黑老虎籽肽8g、红参果肽8g、虎掌菌肽3g、珊瑚菌肽3g、干巴菌肽3g。
降糖肽的制备方法包括以下步骤:
(1)将青刺果粕肽20g、西兰花籽肽20g、榧子仁肽8g、黑老虎籽肽8g、红参果肽8g、虎掌菌肽3g、珊瑚菌肽3g、干巴菌肽3g混合得到73g原料粉,取53g原料粉与超纯水按照质量比1:20的配比混合,超声搅拌35min后得到原料液;
调节原料液的pH至8.8,碱提2.5h,之后在9500r/min下离心12min,收集上清液;调节上清液的pH至3.7,酸沉35min,之后在9500r/min下离心12min,收集沉淀;
将收集的沉淀用超纯水清洗3次,然后重新溶解于超纯水中,调pH至中性,冷冻干燥后得到粗蛋白。
(2)将黑曲霉菌株接种到PDA培养基上,并在温度35℃、湿度75%的条件下培养7d,之后用无菌生理盐水将孢子悬液重悬得到浓度为3×107个/mL的黑曲霉孢子悬液,用于后续发酵。
(3)将步骤(1)得到的粗蛋白与剩余的20g原料粉混合,在135℃下灭菌30min,冷却后加入7mL无菌水,添加粗蛋白与原料粉混合物质量的1.5%硫酸铵和0.5%磷酸二氢钾作为微生物的碳源和氮源,并接种4mL步骤(2)中的黑曲霉孢子悬液,搅拌均匀后封闭,在温度35℃、湿度75%的条件下培养60h得到固态发酵基质。
(4)向步骤(3)中的固态发酵基质中加入75mL无菌水,超声提取45min,之后在沸水浴煮沸15min,冷却至室温后,依次进行微波干燥和超微粉碎;
微波工艺为:在微波功率500W、干燥温度为30℃的条件下干燥1h,干燥至样品含水量25%;超微粉碎工艺为:在30℃条件下超微粉碎15min,控制磨介填充率为80%,粉碎后得到多肽。
(5)将步骤(4)中得到的多肽装入超滤装置中,放入截留量为5kDa的超滤膜于底部,磁力搅拌器上调至转速150rpm,收集分子量>5kDa的多肽组分,之后进行冷冻干燥。
实施例4
降糖肽,由以下重量的原料组成:青刺果粕肽20g、西兰花籽肽20g、榧子仁肽8g、黑老虎籽肽8g、红参果肽8g、虎掌菌肽3g、珊瑚菌肽3g、干巴菌肽3g。
与实施例3不同的是,本实施例在进行降糖肽的制备时,在超滤步骤中,收集分子量<5kDa的多肽组分,之后进行冷冻干燥。
实施例5
降糖肽,由以下重量的原料组成:青刺果粕肽25g、西兰花籽肽25g、榧子仁肽10g、黑老虎籽肽10g、红参果肽10g、虎掌菌肽4g、珊瑚菌肽4g、干巴菌肽4g。
降糖肽的制备方法包括以下步骤:
(1)将青刺果粕肽25g、西兰花籽肽25g、榧子仁肽10g、黑老虎籽肽10g、红参果肽10g、虎掌菌肽4g、珊瑚菌肽4g、干巴菌肽4g混合得到92g原料粉,取62g原料粉与超纯水按照质量比1:20的配比混合,超声搅拌40min后得到原料液;
调节原料液的pH至9,碱提3h,之后在10000r/min下离心15min,收集上清液;调节上清液的pH至3.9,酸沉40min,之后在10000r/min下离心15min,收集沉淀;
将收集的沉淀用超纯水清洗4次,然后重新溶解于超纯水中,调pH至中性,冷冻干燥后得到粗蛋白。
(2)将黑曲霉菌株接种到PDA培养基上,并在温度45℃、湿度90%的条件下培养10d,之后用无菌生理盐水将孢子悬液重悬得到浓度为5×108个/mL的黑曲霉孢子悬液,用于后续发酵。
(3)将步骤(1)得到的粗蛋白与剩余的30g原料粉混合,在150℃下灭菌40min,冷却后加入10mL无菌水,添加粗蛋白与原料粉混合物质量的2.5%硫酸铵和1.0%磷酸二氢钾作为微生物的碳源和氮源,并接种6mL步骤(2)中的黑曲霉孢子悬液,搅拌均匀后封闭,在温度40℃、湿度90%的条件下培养84h得到固态发酵基质。
(4)向步骤(3)中的固态发酵基质中加入100mL无菌水,超声提取60min,之后在沸水浴煮沸25min,冷却至室温后,依次进行微波干燥和超微粉碎;
微波工艺为:在微波功率600W、干燥温度为40℃的条件下干燥2h,干燥至样品含水量20%;超微粉碎工艺为:在40℃条件下超微粉碎25min,控制磨介填充率为90%,粉碎后得到多肽。
(5)将步骤(4)中得到的多肽装入超滤装置中,放入截留量为5kDa的超滤膜于底部,磁力搅拌器上调至转速150rpm,收集分子量>5kDa的多肽组分,之后进行冷冻干燥。
实施例6
降糖肽,由以下重量的原料组成:青刺果粕肽25g、西兰花籽肽25g、榧子仁肽10g、黑老虎籽肽10g、红参果肽10g、虎掌菌肽4g、珊瑚菌肽4g、干巴菌肽4g。
与实施例5不同的是,本实施例在进行降糖肽的制备时,在超滤步骤中,收集分子量<5kDa的多肽组分,之后进行冷冻干燥。
实施例7
降糖饼干,包括以下重量的原料组成:青刺果粕肽15g、西兰花籽肽15g、榧子仁肽5g、黑老虎籽肽5g、红参果肽5g、虎掌菌肽2g、珊瑚菌肽2g、干巴菌肽2g、小麦粉100g。
降糖饼干的制备方法,包括以下步骤:
(1)将实施例1制备的多肽与小麦粉混合,并加入水30ml、葵花籽油25g、盐0.1g,完全混合搅拌,和面2min,得到短而均匀的面团,在常温下放置20min。
(2)将面团手工压成4mm厚的薄片,用压片机压片成型,然后进行烘烤,烘烤参数为:上火160℃,下火160℃,烘烤15min(7min时烤盘调整方向,保证均匀烤制),烘烤结束后得到薄厚均匀的饼干,装入密封袋中待用。
实施例8
降糖饼干,与实施例7不同的是,本实施例通过实施例2中制备的多肽进行饼干的制备,具体制备方法与实施例7相同。
实施例9
降糖饼干,包括以下重量的原料组成:青刺果粕肽20g、西兰花籽肽20g、榧子仁肽8g、黑老虎籽肽8g、红参果肽8g、虎掌菌肽3g、珊瑚菌肽3g、干巴菌肽3g、小麦粉150g。
(1)将实施例3制备的多肽与小麦粉混合,并加入水30ml、葵花籽油25g、盐0.1g,完全混合搅拌,和面2min,得到短而均匀的面团,在常温下放置20min。
(2)将面团手工压成4mm厚的薄片,用压片机压片成型,然后进行烘烤,烘烤参数为:上火160℃,下火160℃,烘烤15min(7min时烤盘调整方向,保证均匀烤制),烘烤结束后得到薄厚均匀的饼干,装入密封袋中待用。
实施例10
降糖饼干,与实施例9不同的是,本实施例通过实施例4中制备的多肽进行饼干的制备,具体制备方法与实施例9相同。
实施例11
降糖饼干,包括以下重量的原料组成:青刺果粕肽25g、西兰花籽肽25g、榧子仁肽10g、黑老虎籽肽10g、红参果肽10g、虎掌菌肽4g、珊瑚菌肽4g、干巴菌肽4g、小麦粉200g。
(1)将实施例5制备的多肽与小麦粉混合,并加入水30ml、葵花籽油25g、盐0.1g,完全混合搅拌,和面2min,得到短而均匀的面团,在常温下放置20min。
(2)将面团手工压成4mm厚的薄片,用压片机压片成型,然后进行烘烤,烘烤参数为:上火160℃,下火160℃,烘烤15min(7min时烤盘调整方向,保证均匀烤制),烘烤结束后得到薄厚均匀的饼干,装入密封袋中待用。
实施例12
降糖饼干,与实施例11不同的是,本实施例通过实施例6中制备的多肽进行饼干的制备,具体制备方法与实施例9相同。
对比例1
饼干的制备方法,包括以下步骤:
(1)在151g小麦粉中加入水30ml、葵花籽油25g、盐0.1g,完全混合搅拌,和面2min,得到短而均匀的面团,在常温下放置20min。
(2)将面团手工压成4mm厚的薄片,用压片机压片成型,然后进行烘烤,烘烤参数为:上火160℃,下火160℃,烘烤15min(7min时烤盘调整方向,保证均匀烤制),烘烤结束后得到薄厚均匀的饼干,装入密封袋中待用。
对比例2
(1)在292g小麦粉中加入水30ml、葵花籽油25g、盐0.1g,完全混合搅拌,和面2min,得到短而均匀的面团,在常温下放置20min。
(2)将面团手工压成4mm厚的薄片,用压片机压片成型,然后进行烘烤,烘烤参数为:上火160℃,下火160℃,烘烤15min(7min时烤盘调整方向,保证均匀烤制),烘烤结束后得到薄厚均匀的饼干,装入密封袋中待用。
一、饼干的GL(血糖负荷)的测定
1、测量方法:
根据食用后180min内计算饼干体外淀粉消化后得到的葡萄糖释放量曲线下的面积AUC180min与对照饼干样品的葡萄糖曲线下的面积AUC对照之间的比率计算水解指数(HI),如下式所示:
根据下式预测血糖指数(PGI):
预测血糖指数pGI=39.71+0.549HI
注:pGI是预测的血糖指数,HI是水解指数。
以葡萄糖为参考样品,每个样品的pGI葡萄糖=pGI×0.7,表示为以葡萄糖为标准食物的值,GL计算公式如下:
注:TS是总淀粉含量。
2、测量结果如表1所示:
表1实施例7-12以及对比例1-2中的饼干的GL值
从表1可以看出,本申请的降糖饼干的GL指均小于对比例1、2中饼干的GL值,说明加入本申请的降糖肽制得的饼干能够有效抑制升糖,从而对糖尿病患者具有维持血糖的保健效果。
二、饼干消化后的葡萄糖释放量
1、测量方法:
先进行体外淀粉消化实验,消化过程包括2个部分:模拟胃液消化和模拟肠液消化。
将2.5g饼干悬浮在30mL蒸馏水中,用1mol/L盐酸将pH值调节至2.5,加入1mL 10%胃蛋白酶溶液(2500U/mL)(用0.05mol/L盐酸配制)后,将样品置于37℃的培养箱中30min,之后以130rpm搅拌,用1mol/LNaHCO3和5mL 0.1mol/L磷酸钠缓冲液调节pH至6.0终止反应。
然后模拟肠道消化,在0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液中加入100μL淀粉糖苷酶,然后加入5mL 5%胰酶溶液,用蒸馏水将消解液体积调至55mL后,在37℃缓慢混合,每隔一定时间(0、20、60、90、120、180min)取出0.5mL样品,其中加入2mL乙醇以停止任何酶反应。用二硝基水杨酸(DNS)法测定上清液中的水解葡萄糖释放量。
2、测量结果如图1和图2所示。
从图1和图2均可以看出,实施例7-8以及实施例11-12的饼干消化时的葡萄糖释放速度和释放量均小于对比例1中的饼干,说明本申请的降糖肽可以抑制升糖速率。
三、饼干的颜色分析
1、测量方法:使用色度计测定实施例7-8、实施例11-12以及对比例1中的饼干表面的颜色,色度计预热10min,用黑色和白色标准校准,记录了分别表示亮度/亮度、红色/绿色和黄色/蓝色的L*、a*和b*值。
2、测量结果如表2所示:
表2实施例7-8、实施例11-12以及对比例1中的饼干的颜色
如表2所示,与对比例1相比,实施例7、8、11、12制备饼干的亮度L*值均呈下降趋势(p<0.05),这是因为添加降糖肽后,其蛋白质含量高,导致颜色较深;然而,实施例7、8、11、12制备饼干的a*值均呈上升的趋势(p<0.05),a*值从负值(绿色)逐渐增加至正值(红色),而饼干的b*值随着饼干样品的降糖肽添加量的增加而不断减少,表明其黄化指数不断减少。
四、饼干的质构分析
1、测量方法:使用质构分析仪在25℃下测定饼干的质构特性,具体采用重量为10kg、速度为0.5mm/s的称重传感器进行测试;采用直径为5mm的球形柱塞进行硬度测量。
2、测量结果如表3所示:
表3实施例7-8、实施例11-12以及对比例1中的饼干的颜色变化趋势
如表3所示,实施例7、8、11、12制备饼干的硬度、脆性和咀嚼性都与对比例1有显著的差异(P<0.05)。
制作饼干所使用的低筋面粉中含有一类水不溶性蛋白质,包括麦谷蛋白和醇溶蛋白,麦谷蛋白决定面团的弹性和结构强度,醇溶蛋白决定面团的粘度和流动性,醇溶蛋白和麦谷蛋白的结合形成了一种具有弹性、粘性和延展性的特殊网络结构的软凝胶,即面筋。而降糖肽竞争性的吸收水分,包裹淀粉颗粒分布在面筋网络结构中,阻止了许多蛋白质分子牢固地缠绕在一起,阻碍了空间网络结构的形成,饼干的硬度是由嵌入未胶凝淀粉颗粒中的蛋白质聚集体和脂质的复合基质决定的,饼干中面筋网络结构的减少降低了饼干的硬度;而且,实施例7、8、11、12制备饼干样品中的水分较多,导致饼干硬度下降。
结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明创造构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.降糖肽,其特征在于,由以下重量份数的原料组成:
青刺果粕肽15-25份、西兰花籽肽15-25份、榧子仁肽5-10份、黑老虎籽肽5-10份、红参果肽5-10份、虎掌菌肽2-4份、珊瑚菌肽2-4份、干巴菌肽2-4份。
2.降糖肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
将青刺果粕、西兰花籽、榧子仁、黑老虎籽、红参果、虎掌菌、珊瑚菌、干巴菌混合制成的原料粉加入超纯水中进行超声搅拌得到原料液,之后对原料液依次进行碱提、酸沉,收集酸沉后的沉淀进行水溶,调pH至中性,冷冻干燥后得到粗蛋白;
将黑曲霉菌株接种到PDA培养基上培养,之后用无菌生理盐水将孢子悬液重悬得到黑曲霉孢子悬液;
将原料粉与所述粗蛋白混合后灭菌、冷却,之后加入无菌水中,并接种所述黑曲霉孢子悬液,搅拌均匀后封闭培养得到固态发酵基质;
向所述固态发酵基质中加入无菌水进行依次进行超声提取、沸水浴,之后冷却至室温后进行微波干燥,最后对干燥后的样品进行超微粉碎即可。
3.根据权利要求2所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,所述原料粉与超纯水的质量比为1:15-30,超声搅拌时间为30-40min。
4.根据权利要求2所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,碱提、酸沉工艺为:调节原料液的pH至8.5-9.0,碱提2-3h,之后在9000-10000r/min下离心10-15min,收集上清液;
调节上清液的pH至3.5-3.9,酸沉30-40min,之后在9000-10000r/min下离心10-15min,收集沉淀。
5.根据权利要求2所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,黑曲霉菌株在PDA培养基上的培养条件为:在温度5-45℃、湿度60-90%的条件下培养4-10d。
6.根据权利要求2所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,黑曲霉孢子悬液的浓度为1-5×106-8个/mL。
7.根据权利要求6所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,向含有原料粉和粗蛋白混合物的无菌水中加入0.5-2.5wt%硫酸铵和0.1-1.0wt%磷酸二氢钾,并接种2-6mL黑曲霉孢子悬液,之后在温度30-40℃、湿度60-90%的条件下培养24-84h。
8.根据权利要求2所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,微波干燥工艺为:采用400-600W的微波功率干燥至样品含水量为20-30%。
9.根据权利要求2所述的降糖肽的制备方法,其特征在于,超微粉碎工艺为:在20-40℃条件下超微粉碎5-25min,控制磨介填充率为70-90%
10.如权利要求1所述的降糖肽在降血糖食品、药品中的应用。
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