CN115024225A - 一种耐寒猫须草的培养方法 - Google Patents

一种耐寒猫须草的培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及猫须草培养技术领域，本发明提供了一种耐寒猫须草的培养方法，包括如下步骤：(1)将猫须草叶接种到愈伤组织诱导培养基中培养，得到愈伤组织；(2)将愈伤组织接种到增殖培养基中培养，得到增殖后的愈伤组织；(3)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中培养，得到幼芽；(4)将幼芽接种到生根培养基中，培养得到耐寒猫须草幼苗。本发明的培养方法够在短时间内获取大量耐寒猫须草幼苗，幼苗的成活率达95％以上，且能够满足北方寒冷地区的种植需求，扩大猫须草的生产。

Description

一种耐寒猫须草的培养方法
技术领域
本发明涉及猫须草培养技术领域，尤其涉及一种耐寒猫须草的培养方法。
背景技术
猫须草，又名猫须公、牙努秒。属管状花目，唇形科多年生草本。茎直立，高1～1.5m，叶卵形、菱状卵形或卵状长圆形，苞片圆卵形，长约3.5mm，宽约3mm，花萼卵珠形，小坚果卵形，长约2mm，宽约1.6mm，深褐色，具皱纹。花、果期5～11月。猫须草清凉消炎，可入药，主要用于治疗急慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石和风湿性关节炎。
由于猫须草结果率低，种子寿命只有15d，发芽率仅为40％，传统生产繁殖方式难以满足市场需求。同时，传统猫须草生长于南方地区，如何扩大其生长环境，使其适于北方种植，也是一个亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种耐寒猫须草的培养方法，能够大量繁殖耐寒猫须草种苗，满足市场需求。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种耐寒猫须草的培养方法，包括如下步骤：
(1)将猫须草叶接种到愈伤组织诱导培养基中培养，得到愈伤组织；
(2)将愈伤组织接种到增殖培养基中培养，得到增殖后的愈伤组织；
(3)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中培养，得到幼芽；
(4)将幼芽接种到生根培养基中，培养得到耐寒猫须草幼苗。
作为优选，步骤(1)中所述猫须草叶接种前消毒并分割为0.6～0.8cm×0.6～0.8cm的小块。
作为优选，所述消毒的方法为60～80％的乙醇浸泡1～3min后再用0.08～0.12％的氯化汞浸泡3～5min，用无菌水清洗3～5次。
作为优选，步骤(1)中所述愈伤组织诱导培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.8～1.2mg/L NAA+0.8～1.2mg/L 6BA。
作为优选，步骤(2)中所述增殖培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.05～0.15mg/L NAA+0.3～0.7mg/L ZT。
作为优选，步骤(3)中所述分化培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.04～0.08mg/L NAA+0.3～0.7mg/L 6-BA。
作为优选，步骤(4)中所述生根培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+1.3～1.5mg/L IBA+2.5～3.5mg/L NAA+0.5～1.5mg ABA。
作为优选，步骤(1)～(3)中所述培养的温度独立的为30～35℃。
作为优选，步骤(3)和步骤(4)中所述培养时的光照时间为10～16h/d，光照强度为2600～2800Lx。
作为优选，步骤(4)中所述耐寒猫须草幼苗移栽到大田后喷施2～3次抗寒剂，所述抗寒剂为氯化镁溶液和/或氯化钙溶液，所述抗寒剂的浓度为120～160mg/L；步骤(4)中所述培养的起始温度为30～35℃，培养过程中每3～5天降低4～6℃，直至10～20℃。
本发明提供了一种耐寒猫须草的培养方法，包括如下步骤：(1)将猫须草叶接种到愈伤组织诱导培养基中培养，得到愈伤组织；(2)将愈伤组织接种到增殖培养基中培养，得到增殖后的愈伤组织；(3)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中培养，得到幼芽；(4)将幼芽接种到生根培养基中喷施抗寒剂，培养得到耐寒猫须草幼苗。本发明的培养方法够在短时间内获取大量耐寒猫须草幼苗，幼苗的成活率达95％以上，且能够满足北方寒冷地区的种植需求，扩大猫须草的生产。
附图说明
图1为云南猫须草野生材料在室内的栽培；
图2为云南猫须草形成的愈伤组织；
图3为云南猫须草愈伤组织诱导分化培养形成不定芽及幼苗；
图4为云南猫须草幼苗诱导生根分化培养；
图5为生长的云南猫须草幼苗；
图6为云南猫须草小苗练苗及移栽；
图7为猫须草在大田的种植。
具体实施方式
本发明提供了一种耐寒猫须草的培养方法，包括如下步骤：
(1)将猫须草叶接种到愈伤组织诱导培养基中培养，得到愈伤组织；
(2)将愈伤组织接种到增殖培养基中培养，得到增殖后的愈伤组织；
(3)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中培养，得到幼芽；
(4)将幼芽接种到生根培养基中，培养得到耐寒猫须草幼苗。
在本发明中，步骤(1)中所述猫须草叶接种前消毒并分割为0.6～0.8cm×0.6～0.8cm的小块。
在本发明中，所述小块的大小优选为0.7cm×0.7cm。
在本发明中，所述消毒的方法优选为60～80％的乙醇浸泡1～3min后再用0.08～0.12％的氯化汞浸泡3～5min，用无菌水清洗3～5次。
在本发明中，所述乙醇的浓度优选为65～75％，进一步优选为70％。
在本发明中，所述乙醇浸泡的时间优选为1.5～2.5min，进一步优选为2min。
在本发明中，所述氯化汞的浓度优选为0.09～0.11％，进一步优选为0.1％。
在本发明中，所述氯化汞浸泡的时间优选为3.5～4.5min，进一步优选为4min。
在本发明中，所述清洗的次数优选为4次。
在本发明中，步骤(1)中所述愈伤组织诱导培养基的配方优选为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.8～1.2mg/L NAA+0.8～1.2mg/L 6BA，进一步优选为MS培养基+16～19g/L蔗糖+4～6g/L琼脂+0.9～1.1mg/L NAA+0.9～1.1mg/L 6BA，再进一步优选为MS培养基+17～18g/L蔗糖+5g/L琼脂+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6BA。
在本发明中，步骤(2)中所述增殖培养基的配方优选为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.05～0.15mg/L NAA+0.3～0.7mg/L ZT，进一步优选为MS培养基+16～19g/L蔗糖+4～6g/L琼脂+0.08～0.12mg/L NAA+0.4～0.6mg/L ZT，再进一步优选为MS培养基+17～18g/L蔗糖+5g/L琼脂+0.10mg/L NAA+0.5mg/L ZT。
在本发明中，步骤(3)中所述分化培养基的配方优选为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.04～0.08mg/L NAA+0.3～0.7mg/L 6-BA，进一步优选为MS培养基+16～19g/L蔗糖+4～6g/L琼脂+0.05～0.07mg/L NAA+0.4～0.6mg/L 6-BA，再进一步优选为MS培养基+17～18g/L蔗糖+5g/L琼脂+0.06mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA。
在本发明中，步骤(4)中所述生根培养基的配方优选为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+1.3～1.5mg/L IBA+2.5～3.5mg/L NAA+0.5～1.5mg ABA，进一步优选为MS培养基+16～19g/L蔗糖+4～6g/L琼脂+1.4mg/L IBA+2.8～3.2mg/L NAA+0.8～1.2mg ABA，再进一步优选为MS培养基+17～18g/L蔗糖+5g/L琼脂+1.4mg/L IBA+3.0mg/L NAA+1.0mgABA。
在本发明中，步骤(1)～(3)中所述培养的温度独立的优选为30～35℃，进一步优选为31～34℃，再进一步优选为32～33℃。
在本发明中，步骤(3)和步骤(4)中所述培养的光照的时间优选为10～16h/d，进一步优选为12～14h/d，再进一步优选为13h/d
在本发明中，步骤(3)和步骤(4)中所述培养的光照强度优选为2600～2800Lx，进一步优选为2700Lx。
在本发明中，步骤(4)中所述耐寒猫须草幼苗移栽到大田后优选喷施2～3次抗寒剂。
在本发明中，步骤(4)中所述抗寒剂为氯化镁溶液和/或氯化钙溶液。
在本发明中，步骤(4)中所述抗寒剂的浓度优选为120～160mg/L，进一步优选为140mg/L。
在本发明中，步骤(4)中所述培养的起始温度为30～35℃，进一步优选为32～33℃。
在本发明中，步骤(4)中培养过程中优选每3～5天降低4～6℃，直至10～20℃，进一步优选为15℃。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)按照如下配方配置培养基
愈伤组织诱导培养基：MS培养基+15g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.8mg/L NAA+1.2mg/L6BA；
增殖培养基：MS培养基+15g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.05mg/L NAA+0.7mg/L ZT；
分化培养基：MS培养基+15g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.08mg/L NAA+0.3mg/L 6-BA；
生根培养基：MS培养基+15g/L蔗糖+7g/L琼脂+1.3mg/L IBA+3.5mg/L NAA+0.5mgABA；
(2)将猫须草叶用60％的乙醇浸泡3min后再用0.08％的氯化汞浸泡5min，用无菌水清洗3次后分割成0.6cm×0.6cm的小块；
(3)将猫须草叶的小块接种到愈伤组织诱导培养基中在30℃条件下培养，得到愈伤组织；
(4)将愈伤组织接种到增殖培养基中在35℃条件下培养，得到增殖后的愈伤组织；
(5)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中在35℃、光照16h/d、光照强度2600Lx条件下培养，得到幼芽；
(6)将幼芽接种到生根培养基中，在30℃、光照10h/d、光照强度2800Lx条件下培养，培养开始后每3天降低4℃，直至10℃，继续培养得到耐寒猫须草幼苗，幼苗移栽后喷施2次120mg/L的氯化镁溶液。
实施例2
(1)按照如下配方配置培养基
愈伤组织诱导培养基：MS培养基+20g/L蔗糖+3g/L琼脂+1.2mg/L NAA+0.8mg/L6BA；
增殖培养基：MS培养基+20g/L蔗糖+3g/L琼脂+0.15mg/L NAA+0.3mg/L ZT；
分化培养基：MS培养基+20g/L蔗糖+3g/L琼脂+0.04mg/L NAA+0.7mg/L 6-BA；
生根培养基：MS培养基+20g/L蔗糖+3g/L琼脂+1.5mg/L IBA+2.5mg/L NAA+1.5mg/LABA；
(2)将猫须草叶用80％的乙醇浸泡1min后再用0.12％的氯化汞浸泡3min，用无菌水清洗5次后分割成0.6cm×0.8cm的小块；
(3)将猫须草叶的小块接种到愈伤组织诱导培养基中在35℃条件下培养，得到愈伤组织；
(4)将愈伤组织接种到增殖培养基中在30℃条件下培养，得到增殖后的愈伤组织；
(5)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中在30℃、光照10h/d、光照强度2800Lx条件下培养，得到幼芽；
(6)将幼芽接种到生根培养基中，在35℃、光照16h/d、光照强度2600Lx条件下培养，培养开始后每4天降低5℃，直至20℃，继续培养得到耐寒猫须草幼苗，幼苗移栽后2次喷施160mg/L的氯化钙溶液。
实施例3
(1)按照如下配方配置培养基
愈伤组织诱导培养基：MS培养基+17g/L蔗糖+5g/L琼脂+1.0mg/L NAA+1.0mg/L6BA；
增殖培养基：MS培养基+18g/L蔗糖+5g/L琼脂+0.1mg/L NAA+0.5mg/L ZT；
分化培养基：MS培养基+18g/L蔗糖+5g/L琼脂+0.06mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA；
生根培养基：MS培养基+17g/L蔗糖+5g/L琼脂+1.4mg/L IBA+3.0mg/L NAA+1.0mg/LABA；
(2)将猫须草叶用70％的乙醇浸泡2min后再用0.1％的氯化汞浸泡4min，用无菌水清洗4次后分割成0.7cm×0.7cm的小块；
(3)将猫须草叶的小块接种到愈伤组织诱导培养基中在33℃条件下培养，得到愈伤组织；
(4)将愈伤组织接种到增殖培养基中在32℃条件下培养，得到增殖后的愈伤组织；
(5)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中在33℃、光照13h/d、光照强度2700Lx条件下培养，得到幼芽；
(6)将幼芽接种到生根培养基中，在31℃、光照14h/d、光照强度2700Lx条件下培养，培养开始后每5天降低6℃，直至13℃，继续培养培养得到耐寒猫须草幼苗，幼苗移栽后喷施140mg/L的氯化钙溶液。
试验例1
按照实施例1～3方法分别进行猫须草培育，每组接种25个锥形瓶，每瓶3个猫须草叶小块，统计各组的愈伤组织诱导率和幼苗成活率，结果如表1所示。
表1
组别 实施例1 实施例2 实施例3
愈伤组织诱导率 90.7％ 88.0％ 93.3％
幼苗成活率 95.6％ 97.0％ 97.1％
结论：实施例1～3的方法能够获得较好的培养效果，愈伤组织诱导率达到88％以上，幼苗成活率达到95.6％以上，能够满足大量耐寒猫须草幼苗的生产要求。
试验例2
按照实施例1～3分别进行猫须草培育，从各组培育的耐寒猫须草幼苗分别选取300株，在环境温度为12.6℃条件下将各组耐寒猫须草幼苗的移栽到同一块大田中。试验进行40天，实验过程中检测环境温度变化，试验结束后统计各组幼苗的存活率。
结果显示，试验过程中的最低温度为10.5℃，最高温度为21.7℃，试验结束后实施例1的耐寒猫须草幼苗存活率为96.0％，实施例2的耐寒猫须草幼苗存活率为95.3％，实施例3的耐寒猫须草幼苗存活率为97.3％。
由以上实施例可知，本发明提供了一种耐寒猫须草的培养方法，包括如下步骤：(1)将猫须草叶接种到愈伤组织诱导培养基中培养，得到愈伤组织；(2)将愈伤组织接种到增殖培养基中培养，得到增殖后的愈伤组织；(3)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中培养，得到幼芽；(4)将幼芽接种到生根培养基中喷施抗寒剂，培养得到耐寒猫须草幼苗。本发明的培养方法够在短时间内获取大量耐寒猫须草幼苗，幼苗的成活率达95％以上，且能够满足北方寒冷地区的种植需求，扩大猫须草的生产。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种耐寒猫须草的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将猫须草叶接种到愈伤组织诱导培养基中培养，得到愈伤组织；
(2)将愈伤组织接种到增殖培养基中培养，得到增殖后的愈伤组织；
(3)将增殖后的愈伤组织接种到分化培养基中培养，得到幼芽；
(4)将幼芽接种到生根培养基中，培养得到耐寒猫须草幼苗。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述猫须草叶接种前消毒并分割为0.6～0.8cm×0.6～0.8cm的小块。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述消毒的方法为60～80％的乙醇浸泡1～3min后再用0.08～0.12％的氯化汞浸泡3～5min，用无菌水清洗3～5次。
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述愈伤组织诱导培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.8～1.2mg/L NAA+0.8～1.2mg/L6BA。
5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述增殖培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.05～0.15mg/L NAA+0.3～0.7mg/L ZT。
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述分化培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+0.04～0.08mg/L NAA+0.3～0.7mg/L 6-BA。
7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述生根培养基的配方为：MS培养基+15～20g/L蔗糖+3～7g/L琼脂+1.3～1.5mg/L IBA+2.5～3.5mg/L NAA+0.5～1.5mg ABA。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)～(3)中所述培养的温度独立的为30～35℃。
9.根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中所述培养时的光照时间为10～16h/d，光照强度为2600～2800Lx。
10.根据权利要求1～9任意一项所述的培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述耐寒猫须草幼苗移栽到大田后喷施2～3次抗寒剂，所述抗寒剂为氯化镁溶液和/或氯化钙溶液，所述抗寒剂的浓度为120～160mg/L；步骤(4)中所述培养的起始温度为30～35℃，培养过程中每3～5天降低4～6℃，直至10～20℃。
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