CN114989027A - 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途 - Google Patents

用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途 Download PDF

Info

Publication number
CN114989027A
CN114989027A CN202210926949.9A CN202210926949A CN114989027A CN 114989027 A CN114989027 A CN 114989027A CN 202210926949 A CN202210926949 A CN 202210926949A CN 114989027 A CN114989027 A CN 114989027A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
cationic lipid
liposomal formulation
dcm
5min
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210926949.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114989027B (zh
Inventor
胡勇
李亚霏
胡昭宇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Ruiji Biotechnology Co ltd
Wuhan Ruiji Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Wuhan Ruiji Biotechnology Co ltd
Shenzhen Ruiji Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Ruiji Biotechnology Co ltd, Shenzhen Ruiji Biotechnology Co ltd filed Critical Wuhan Ruiji Biotechnology Co ltd
Priority to CN202210926949.9A priority Critical patent/CN114989027B/zh
Publication of CN114989027A publication Critical patent/CN114989027A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114989027B publication Critical patent/CN114989027B/zh
Priority to PCT/CN2023/110927 priority patent/WO2024027789A1/zh
Priority to US18/410,875 priority patent/US20240180836A1/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/12—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of acyclic carbon skeletons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C219/00—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C219/02—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C219/04—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C219/06—Compounds containing amino and esterified hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having esterified hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the hydroxy groups esterified by carboxylic acids having the esterifying carboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/16—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by amino or carboxyl groups, e.g. ethylenediamine-tetra-acetic acid, iminodiacetic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/10—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/11—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/12—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/52—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/22—Esters of monothiocarboxylic acids having carbon atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/30—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
    • C07D295/125—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C07D295/13—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途。所述化合物如下式（I）所示。本发明还提供了以所述化合物为关键组分的纳米脂质颗粒在核酸递送方面的用途，包含递送载体的组分、制备方法和使用方法。
Figure 198422DEST_PATH_IMAGE001
（I）。

Description

用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
技术领域
本发明涉及脂质递送载体领域，是一类阳离子脂质化合物，与其他脂质成分结合后能够形成可载药的纳米脂质颗粒，从而在体外和体内实现细胞外向细胞内递送核酸。具体的说，本发明涉及用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途。
背景技术
核酸药物通过将外源基因导入靶细胞或组织，替代、补偿、阻断或修正特定基因，以达到治疗和预防疾病的目的。其研发生产工艺相对简单，具有研发周期短、临床开发成功率高、改良可塑性更好等优势。
但是裸mRNA在体内循环时间短、易被降解，且难以进入靶细胞或者靶组织。因此提高mRNA药物的体内递送效率，是提高该类产品有效性的关键方向之一。
目前，应用最广的核酸药物的递送载体是脂质纳米颗粒，它具有提高基因药物疗效以及靶向递送作用等特点，可以保护核酸在体内不被迅速降解，延长循环时间，增强靶向递送。它由2~4个脂质组分组成，包括阳离子脂质化合物、0~2种辅助脂质和0~1种PEG脂质构成。其中阳离子脂质化合物在核酸包载和释放中起关键作用，因此研发新型、高效、低毒的阳离子脂质化合物至关重要。
发明内容
本发明提供了一类易于降解、体内代谢速度快的含硫的阳离子脂质化合物，包括其药物可接受的盐和其立体异构体或互变异构体。其主要用途是与其他脂质组分以特定比例联合使用，以形成用于递送预防或治疗剂（如治疗性核酸）的脂质纳米颗粒。
本发明的另一目的是提供该类脂质化合物的合成方法，使用原料易得、采用条件温和的反应路线、产品产率高、仪器设备要求低且操作简单。
在一些实例中，治疗性核酸包括质粒DNA、信使RNA、反义寡核苷酸(ASON)、微小RNA(miRNA)、干扰RNA(micRNA)、dicer底物RNA、互补DNA(cDNA)。
同时本发明还提供了此类阳离子脂质化合物与其他脂质组分联合使用时的制剂配比以及使用方法，以及在细胞和动物模型中的应用。
在本发明的实施方案中，采用的是具有如下式(I)结构的阳离子脂质化合物：
Figure 199250DEST_PATH_IMAGE001
(I)
或其药物可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其中：
L1为-C(=O)-、-OC(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)O-、-O-、-S-、-S-S-、-C(=O)S-、-SC(=O)-、-N(R6)C(=O)-、-C(=O)N(R6)-、-N(R6)C(=O)O-、-OC(=O)N(R6)-、-SC(＝O)N(R6)-、-N(R6)C(＝O)S-、-C(＝S)-、-SC(＝S)-、和-C(＝S)S-中任一种，所述R6为H或C1-C12烷基；
G1和G2各自独立地为C3-C10亚烷基；
R1为C2-C12烷基；
R2为H或C2-C12烷基；
R3为C2-C12烷基；
R4为H或C2-C12烷基；
R5为H、C1-C6烷基、-R7-OH、-R7-OC(=O)CH3、-R7-NHC(=O)-CH3、-R7-OCH3或-R7-NR8(R9)；
R7为C2-C18亚烷基；
R8、R9为C1-C8的直链烷基，或者R8、R9和其连接的N原子形成C3-C10杂环烷基。
根据本发明一些具体实施方案，其中，L1为-OC(=O)-、-C(=O)O-、-SC(=O)-或-C(=O)S-。
根据本发明一些具体实施方案，其中，G1和G2为C3-C8亚烷基。
根据本发明一些具体实施方案，其中，R7为C2-C6亚烷基。
根据本发明一些具体实施方案，其中，R1和R3各自独立地为 C3-C9烷基；R2和R4为H或C3-C9烷基。
根据本发明一些具体实施方案，其中，R2和R4有且仅有一个为H。
根据本发明一些具体实施方案，其中，R5为-R7-OH，R7为C2-C8亚烷基。
根据本发明一些具体实施方案，其中，R5为R7-N(CH2CH3)CH2CH3。
根据本发明一些具体实施方案，其中，其中，所述式(I)结构中的-C(R1)R2或-C(R3)R4结构各自独立地符合如下特征：
Figure 50531DEST_PATH_IMAGE002
。
根据本发明一些具体实施方案，其中，
L1为-OC(=O)-或-SC(=O)-；
G1为C5-C8亚烷基；
G2为C4-C8亚烷基；
-C(R1)R2结构选自
Figure 745955DEST_PATH_IMAGE003
；
-C(R3)R4结构选自
Figure 791444DEST_PATH_IMAGE004
；
R5为-R7-OH、或-R7-NR8(R9)；
R7为C2-C6亚烷基；
R8，R9为C1-C8的直链烷基，或者R8, R9和其连接的N原子形成C3-C10杂环烷基。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述阳离子脂质化合物具有以下表中所示的结构之一：
Figure 597726DEST_PATH_IMAGE005
Figure 506776DEST_PATH_IMAGE006
Figure 107522DEST_PATH_IMAGE007
本发明还提供了包含一种或多种本发明的阳离子脂质化合物与预防性或治疗性核酸的脂质体制剂，其中，所述脂质体制剂用于预防或者治疗某种疾病。
该脂质体制剂包含选自中性脂质、带电脂质、类固醇和聚合物缀合的脂质的一种或多种组分。本发明所用到的治疗物为治疗性核酸，包含质粒DNA、信使RNA、反义寡核苷酸(ASON)、微小RNA (miRNA)、干扰RNA(micRNA)、dicer底物RNA、互补DNA(cDNA)。优选为质粒DNA、信使RNA和反义寡核苷酸。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述核酸与所述阳离子脂质化合物的摩尔比为20：1至1：1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述核酸与所述阳离子脂质化合物的摩尔比为10：1至4：1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，该脂质体制剂的直径为50 nm至300 nm。
根据本发明一些具体实施方案，其中，该脂质体制剂的直径为50 nm至150 nm，或150 nm至200 nm。
根据本发明一些具体实施方案，其中，还包含一种或多种其他脂质组分，包括但不限于结构脂质、类固醇和聚合物缀合的脂质。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所包含的类固醇为胆固醇。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述胆固醇与阳离子脂质化合物的摩尔比为0:1至1.5:1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述胆固醇与阳离子脂质化合物的摩尔比为0.2:1至1.2:1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，聚合物缀合的脂质中的聚合物为聚乙二醇（PEG）。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述阳离子脂质化合物与所述聚乙二醇化脂质的摩尔比为100:1至20:1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述聚乙二醇化脂质为PEG-DAG、PEG-PE、PEG-SDAG、PEG-cer、PEG-DMG或ALC-0159。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述脂质体制剂包含选自DPPG、DSPC、DPPC、DMPC、DOPC、POPC、DOPE和DSPE中的一种或多种结构脂质。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述结构脂质为DSPC或DOPE。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述结构脂质与所述阳离子脂质化合物的摩尔比为0:1至0.5:1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述结构脂质与所述阳离子脂质化合物的摩尔比为0:1至0.3:1。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述脂质体制剂包括核酸。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述核酸选自反义RNA和/或信使RNA。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述核酸为信使RNA。
本发明还提供了本发明所述的阳离子脂质化合物或所述的脂质体制剂在制备用于在对象中诱导蛋白质表达的药物中的用途。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述对象为哺乳动物。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述对象是非人灵长类动物。
根据本发明一些具体实施方案，其中，所述对象是人。
综上所述，本发明提供了用于递送核酸的阳离子脂质化合物和脂质体制剂及用途。本发明的技术方案具有如下优点：
本发明的阳离子脂质化合物具有硫酯键，硫酯键的引入使得该化合物更易降解，提高了该脂质化合物的体内清除速度，使得由该化合物构成的载体毒性更低、体内残留更少。且所述脂质化合物的制备方法具有使用原料易得、反应条件温和、产品产率高、仪器设备要求低且操作简单的优点。
附图说明
图1为实施例14的化合物荧光亮度图；
图2为实施例15的红细胞压积图；
图3为实施例16的阳离子脂质代谢速度图。
具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果，旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点，不作为对本案可实施范围的限定。
实施例1
化合物1的合成
Figure 367602DEST_PATH_IMAGE008
步骤1：
将化合物1-1（3.0 g）溶于DCM（10 ml），室温搅拌，依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI，3.35 g），4-二甲氨基吡啶（DMAP，1.64 g）和9-十七醇（3.79 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与1-1标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（10g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速15ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物1-2（5.5 g，89％收率）。
步骤2：
向化合物1-2（5.0 g）和乙醇胺（1.0 g）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（4.5 g）。将混合物在70℃搅拌2小时。TLC显示化合物1-2完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物1-3（3.0 g，62.6％收率）。
步骤3：
将化合物1-1（3.0 g）溶于DCM（40 ml），室温搅拌，依次称取苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU，4.1 g），N,N-二异丙基乙胺（DIEA，2.3 g）和1-壬硫醇（1.6g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与1-1标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min， 5-5% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物1-4（2.9 g，89％收率）。
步骤4：
将化合物1-3（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（170 mg），K2CO3（470 mg）和化合物1-4（500 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d 氨水，磷钼酸），观察到有比1-3极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物1（600 mg，73%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.01 – 3.96 (m, 1H), 2.85 (d, J =7.6 Hz, 2H), 2.81 – 2.75 (m, 2H), 2.79 – 2.58 (m, 6H), 2.57 – 2.40 (m, 2H),2.31 – 2.27 (m, 2H), 1.95 – 1.48 (m, 16H), 1.25 (s, 46H), 0.86 (d, J = 7.2Hz, 9H)。
实施例2
化合物2的合成
Figure 711995DEST_PATH_IMAGE009
步骤1：
将化合物2-1（3.0 g）溶于DCM（40 ml），室温搅拌，依次称取苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU，7.0 g），N,N-二异丙基乙胺（DIEA，4.0 g）和1-十一硫醇（3.5 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与2-1标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（40g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速30ml/min）得到无色油状液体化合物2-2（5.0 g，89％收率）。
步骤2：
将化合物1-3（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（170 mg），K2CO3（470 mg）和化合物2-2（500 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比1-3极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物2（600 mg，73%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.01 – 3.96 (m, 1H), 2.92 -2.88 (m,2H), 2.81 – 2.75 (m, 2H), 2.79 – 2.58 (m, 6H), 2.57 – 2.40 (m, 2H), 2.31 –2.27 (m, 2H), 1.95 – 1.48 (m, 16H), 1.25 (s, 46H), 0.86 (d, J = 7.2 Hz, 9H)。
实施例3
化合物8的合成
Figure 491864DEST_PATH_IMAGE010
步骤1：
将化合物8-1（3.0 g）溶于DCM（10 ml），室温搅拌，依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI，3.43 g），4-二甲氨基吡啶（DMAP，1.46 g）和正庚醇（1.67g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与8-1标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物8-2（3.5 g，84％收率）。
步骤2：
向化合物8-2（3.0 g）和乙醇胺（780 mg）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（3.6 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物8-2完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物8-3（1.7 g，60％收率）。
步骤3：
将化合物8-4（3.0 g）溶于DCM（40 ml），冰浴下搅拌，依次称取三苯基膦（2.45 g）和四溴化碳（7.76 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。有极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速30ml/min）得到无色油状液体化合物8-5（2.1 g，84％收率）。
步骤4：
将化合物8-5（2.0 g）溶于无水乙腈（50 ml），室温搅拌。然后称取硫代乙酸钾（1.43 g）加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌24h。将反应液减压浓缩后，所得固体用乙酸乙酯溶解后，加饱和食盐水洗涤三次，所得有机相减压蒸发，加适量硅胶拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速10ml/min）得到粉色油状液体化合物8-6（1.6 g，81％收率）。
步骤5：
将化合物8-6（1.5 g）溶于甲醇（100 ml），室温搅拌。然后加入4.77 mL甲醇钠的甲醇溶液（1M）到上述反应体系中，在氮气氛围下室温搅拌2h。反应液用安伯莱特离子交换树脂IR120中和后，过滤，洗涤，有机相浓缩。所得固体用乙酸乙酯溶解后，加饱和食盐水洗涤三次，所得有机相减压蒸发，加适量硅胶拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5%20min，5-5% 5min，流速10ml/min）得到淡黄色油状液体化合物8-7（1.1 g，81％收率）。
步骤6：
将化合物1-1（800 mg）溶于DCM（40 ml），室温搅拌，依次称取苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU，1.6 g），N,N-二异丙基乙胺（DIEA，930 mg）和 8-7（1.1 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与1-1标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物8-8（1.4 g，82％收率）。
步骤7：
将化合物8-3（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（228 mg），K2CO3（420 mg）和化合物8-8（870 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d 氨水，磷钼酸），观察到有比8-3极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物8（600 mg，54%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.60 – 3.55 (m, 1H), 2.86 – 2.83 (d,J = 7.6 Hz, 2H), 2.81 – 2.77 (m, 2H), 2.75 – 2.58 (m, 6H), 2.49 – 2.44 (m,2H), 2.31 – 2.27 (m, 2H), 1.95 – 1.48 (m, 16H), 1.25 (s, 46H), 0.86 (d, J =7.2 Hz, 9H)。
实施例4
化合物9的合成
Figure 529090DEST_PATH_IMAGE011
步骤1：
向化合物1-4（2.0 g）和乙醇胺（669 mg）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（2.3 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物1-4完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物8-3（1.2 g，63％收率）。
步骤2：
将化合物9-1（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（217 mg），K2CO3（400 mg）和化合物8-8（830 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比9-1极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（15 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物2（700 mg，65%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.01 – 3.96 (m, 1H), 2.92 -2.88 (m,2H), 2.81 – 2.75 (m, 2H), 2.79 – 2.58 (m, 6H), 2.57 – 2.40 (m, 2H), 2.31 –2.27 (m, 2H), 1.95 – 1.48 (m, 14H), 1.25 (s, 48H), 0.86 (d, J = 7.2 Hz, 9H)。
实施例5
化合物15的合成
Figure 10887DEST_PATH_IMAGE012
步骤1：
将化合物15-1（3.0 g）溶于DCM（40 ml），冰浴下搅拌，依次称取三苯基膦（2.76 g）和四溴化碳（8.71 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。有极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速30ml/min）得到无色油状液体化合物15-2（3.06 g，80％收率）。
步骤2：
将化合物15-2（2.0 g）溶于无水乙腈（50 ml），室温搅拌。然后称取硫代乙酸钾（1.57 g）加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌24h。将反应液减压浓缩后，所得固体用乙酸乙酯溶解后，加饱和食盐水洗涤三次，所得有机相减压蒸发，加适量硅胶拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速10ml/min）得到粉色油状液体化合物15-3（1.49 g，76％收率）。
步骤3：
将化合物15-3（1.5 g）溶于甲醇（100 ml），室温搅拌。然后加入5.2 mL甲醇钠的甲醇溶液（1M）到上述反应体系中，在氮气氛围下室温搅拌2h。反应液用安伯莱特离子交换树脂IR120中和后，过滤，洗涤，有机相浓缩。所得固体用乙酸乙酯溶解后，加饱和食盐水洗涤三次，所得有机相减压蒸发，加适量硅胶拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5%20min，5-5% 5min，流速10ml/min）得到淡黄色油状液体化合物15-4（1.06 g，83％收率）。
步骤4：
将化合物15-4（800 mg）溶于DCM（40 ml），室温搅拌，依次称取苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU，1.79 g），N,N-二异丙基乙胺（DIEA，1.04 g）和6-溴己酸（1.07 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与15-4标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物15-5（1.09 g，79％收率）。
步骤5：
将7-溴庚酸（3.0 g）溶于DCM（10 ml），室温搅拌，依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI，3.15 g），4-二甲氨基吡啶（DMAP，1.6 g）和化合物15-1（2.75 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与15-1标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物15-6（3.96 g，72％收率）。
步骤6：
向化合物15-6（3.0 g）和4-氨基-1-丁醇（1.78 mg）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（2.77 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物15-6完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物15-7（1.59 g，52％收率）。
步骤7：
将化合物15-7（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（175 mg），K2CO3（485 mg）和化合物15-5（591 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比15-7极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物15（557 mg，61%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.01 – 3.96 (m, 1H), 2.85 (d, J =7.6 Hz, 4H), 2.81 – 2.75 (m, 1H), 2.70 – 2.58 (m, 6H), 2.57 – 2.40 (m, 2H),1.95 – 1.48 (m, 16H), 1.25 (s, 52H), 0.86 (d, J = 7.2 Hz, 12H)。
实施例6
化合物24的合成
Figure 158971DEST_PATH_IMAGE013
步骤1：
向化合物1-4（2.0 g）和1-(3-氨基丙基)哌啶（2.18 g）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（2.12 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物1-4完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物24-1（1.42 g，61％收率）。
步骤2：
将化合物24-1（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（176 mg），K2CO3（486 mg）和化合物8-8（672 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比24-1极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（15 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物24（700 mg，65%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.24 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.01 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 2.79 – 2.64 (m, 1H), 2.53 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 2.44 (d, J =3.2 Hz, 2H), 2.33 – 2.21 (m, 10H), 1.95 – 1.83 (m, 6H), 1.64 – 1.51 (m, 16H),1.42 – 1.25 (m, 48H), 0.91 – 0.88 (m, 9H)。
实施例7
化合物25的合成
Figure 42614DEST_PATH_IMAGE014
步骤1：
向化合物15-6（3.0 g）和3-二乙胺基丙胺（1.9 g）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（2.97 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物15-6完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物25-1（1.8 g，54％收率）。
步骤2：
将化合物25-1（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（160 mg），K2CO3（442 mg）和化合物15-5（662 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比15-5极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物25（150 mg，17%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.81 – 4.82 (m, 1H), 3.89 (d, J =7.2 Hz, 4H), 3.23 – 3.12 (m, 1H), 3.02 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 2.48 (d, J = 7.2Hz, 4H), 2.36 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 2.31 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 2.07 – 1.86 (m,4H), 1.65 – 1.56 (m, 4H), 1.53 – 1.43 (m, 6H), 1.41 – 1.19 (m, 54H), 1.04 (d,J = 7.8 Hz, 6H), 0.85 (d, J = 12.4 Hz, 12H)。
实施例8
化合物28的合成
Figure 500009DEST_PATH_IMAGE015
步骤1：
将化合物28-1（2.5 g）溶于DCM（10 ml），室温搅拌，依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI，2.9 g），4-二甲氨基吡啶（DMAP，1.42 g）和正庚醇（2.5g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物28-2（3.1 g，76％收率）。
步骤2：
向化合物28-2（3.0 g）和乙醇胺（700 mg）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（2.4 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物28-2完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物28-3（1.42 g，75％收率）。
步骤3：
将化合物28-3（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（228 mg），K2CO3（630 mg）和化合物8-8（1.1 g）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比28-3极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物28（450 mg，41%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.13 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.45 (d, J= 3.4 Hz, 2H), 3.01 (d, J = 7.2 Hz, 4H), 2.87 – 2.76 (m, 1H), 2.53 (d, J =3.2 Hz, 2H), 2.40 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 2.32 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 1.98 – 1.88(m, 4H), 1.77 – 1.63 (m, 6H), 1.54 – 1.44 (m, 6H), 1.42 – 1.26 (m, 46H), 0.88(d, J = 9.8 Hz, 9H)。
实施例9
化合物31的合成
Figure 469102DEST_PATH_IMAGE016
步骤1：
将原料31-1(5 g)溶于DCM (50 ml)，滴加一滴DMF，用N2置换气体。然后称取SOCl2(4.14 g)滴加到上述反应液中，室温搅拌3h。取少量反应液稀释与31-1标样对照点板(PE/EA=10/1, 磷钼酸)，观察到有比31-1极性小的新点，31-1剩余较少。反应液减压旋干后，用少量DCM溶解滴加到硫代乙酰胺(4.36 g)的甲苯溶液（50 mL）中，40℃加热搅拌3h后，往反应体系中滴加10% NaOH溶液（30 ml），40℃下加热搅拌过夜。取少量反应液稀释点板( PE/EA=20/1, 磷钼酸)，观察到些许拖尾的主点，且有紫外吸收。反应液用6 M/L HCl调pH至3-5，用乙酸乙酯萃取反应液，有机相干燥后减压蒸发。加适量DCM和硅胶拌样过柱（PE,600ml），点板和紫外灯检测，得到淡黄色油状液体31-2（3.02 g，55％收率）。
步骤2：
向1,7-二溴庚烷（3.29 g）的四氢呋喃溶液（40 mL）中分批加入化合物31-2（2.0g）和碳酸钾（2.94 g）。将混合物在45℃搅拌3小时。TLC显示化合物31-2完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物31-3（2.33 g，60％收率）。
步骤3：
向化合物31-3（2.0 g）和乙醇胺（1.0 g）的乙腈溶液（40 mL）溶液中加入碳酸钾（2.27 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物31-3完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物31-4（0.92 g，49％收率）。
步骤4：
将化合物31-4（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（217 mg），K2CO3（600 mg）和化合物8-8（829 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d 氨水，磷钼酸），观察到有比31-4极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物31（647 mg，60%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.63 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.23 (d, J= 3.4 Hz, 2H), 3.06 (d, J = 7.2 Hz, 4H), 2.91 – 2.85 (m, 1H), 2.57 (d, J =3.2 Hz, 2H), 2.38 (d, J = 7.6 Hz, 4H), 2.07 – 1.86 (m, 6H), 1.74 – 1.63 (m,4H), 1.59 – 1.46 (m, 4H), 1.42 – 1.26 (m, 48H), 0.87 (d, J = 9.8 Hz, 9H)。
实施例10
化合物35的合成
Figure 155298DEST_PATH_IMAGE017
步骤1：
将原料35-1(5 g)溶于DCM (50 ml)，滴加一滴DMF，用N2置换气体。然后称取SOCl2(2.8 g)滴加到上述反应液中，室温搅拌3h。取少量反应液稀释与35-1标样对照点板(PE/EA=10/1, 磷钼酸)，观察到有比35-1极性小的新点，35-1剩余较少。反应液减压旋干后，用少量DCM溶解滴加到硫代乙酰胺(2.2 g)的甲苯溶液（50 mL）中，40℃加热搅拌3h后，往反应体系中滴加10% NaOH溶液（30 ml），40℃下加热搅拌过夜。取少量反应液稀释点板(PE/EA=20/1, 磷钼酸)，观察到些许拖尾的主点，且有紫外吸收。反应液用6 M/L HCl调pH至3-5，用乙酸乙酯萃取反应液，有机相干燥后减压蒸发。加适量DCM和硅胶拌样过柱（PE, 600ml），点板和紫外灯检测，得到淡黄色油状液体35-2（3.1 g，58％收率）。
步骤2：
向1,6-二溴己烷（2.15 g）的四氢呋喃溶液（40 mL）中分批加入化合物35-2（2.0g）和碳酸钾（2.03 g）。将混合物在45℃搅拌3小时。TLC显示化合物35-2完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物35-3（2.1 g，65％收率）。
步骤3：
向化合物35-3（2.0 g）和4-氨基-1-丁醇（1.15 g）的乙腈溶液（40 mL）溶液中加入碳酸钾（1.78 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物35-3完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物35-4（1.02 g，50％收率）。
步骤4：
将化合物15-4（800 mg）溶于DCM（40 ml），室温搅拌，依次称取苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU，1.81 g），N,N-二异丙基乙胺（DIEA，0.99 g）和7-溴庚酸（1.03 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与35-4标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物35-5（1.03 g，61％收率）。
步骤5：
将化合物35-4（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（169 mg），K2CO3（467 mg）和化合物35-5（589 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比35-4极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物35（620 mg，68%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.51 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.04 (d, J= 9.8 Hz, 6H), 2.86 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 2.71 – 2.63 (m, 1H), 2.46 (d, J =3.2 Hz, 2H), 2.39 – 2.28 (m, 1H), 2.01 – 1.86 (m, 6H), 1.63 – 1.52 (m, 6H),1.42 – 1.26 (m, 56H), 0.87 (d, J = 12.8 Hz, 12H)。
实施例11
化合物40的合成
Figure 893447DEST_PATH_IMAGE018
步骤1：
将化合物40-1（3.0 g）溶于乙醇（50 ml），冰浴下搅拌，依次称取乙醇钠（EtONa，1.33 g），1-溴代庚烷（2.8 g）分批加入反应体系，室温搅拌6h。反应液用饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，所得有机相经无水硫酸钠干燥，加适量硅胶拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物40-2（2.0 g，47％收率）。
步骤2：
向化合物40-2（2.0 g）的DMSO溶液（30 mL）溶液中加入氯化锂（2.1 g）。将混合物在160℃搅拌10小时。反应液降至室温，反应液中加水淬灭，乙酸乙酯萃取，所得有机相经经饱和食盐水洗涤和无水硫酸钠干燥后，加适量硅胶拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 %5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物40-3（800 mg，51％收率）。
步骤3：
将化合物40-3（800 mg）溶于乙醇（10 mL），四氢呋喃（10 ml）然后加入氢氧化锂（748 mg）的水（10 mL）溶液，室温下搅拌16h。加水和乙酸乙酯，水相用稀盐酸调节至pH=2，乙酸乙酯萃取三遍，所得有机相经无水硫酸钠干燥，浓缩后得到无色油状液体化合物40-4（660 mg，92％收率）。
步骤4：
将化合物40-4（1.0 g）溶于DCM（20 ml），室温搅拌，依次称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI，1.1 g），4-二甲氨基吡啶（DMAP，535 mg）和6-溴正己醇（873 mg）分批加入反应体系，室温搅拌2h。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min），点板监测，将纯产物部分馏分蒸发，得到无色油状液体化合物40-5（1.3 g，76％收率）。
步骤5：
向化合物40-5（1.2 g）和4-氨基-1-丁醇（820 mg）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（1.3 g）。将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物40-5完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物40-6（800 mg，65％收率）。
步骤6：
将化合物40-7（3.0 g）溶于DCM（40 ml），冰浴下搅拌，依次称取三苯基膦（2.76 g）和四溴化碳（8.71 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。有极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速30ml/min）得到无色油状液体化合物40-8（2.6 g，66％收率）。
步骤7：
将化合物40-8（2.0 g）溶于无水乙腈（50 ml），室温搅拌。然后称取硫代乙酸钾（1.57 g）加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌24h。将反应液减压浓缩后，所得固体用乙酸乙酯溶解后，加饱和食盐水洗涤三次，所得有机相减压蒸发，加适量硅胶拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速10ml/min）得到粉色油状液体化合物40-9（1.5 g，76％收率）。
步骤8：
将化合物40-9（1.5 g）溶于甲醇（100 ml），室温搅拌。然后加入6.0 mL甲醇钠的甲醇溶液（1M）到上述反应体系中，在氮气氛围下室温搅拌2h。反应液用安伯莱特离子交换树脂IR120中和后，过滤，洗涤，有机相浓缩。所得固体用乙酸乙酯溶解后，加饱和食盐水洗涤三次，所得有机相减压蒸发，加适量硅胶拌样、纯化（40 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5%20min，5-5% 5min，流速10ml/min）得到淡黄色油状液体化合物40-10（950 mg，76％收率）。
步骤9：
将化合物40-10（800 mg）溶于DCM（40 ml），室温搅拌，依次称取苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU，1.79 g），N,N-二异丙基乙胺（DIEA，1.04 g）和7-溴己酸（1.1 g）分批加入反应体系，室温搅拌2h。取少量反应液稀释与40-10标样对照点板（PE/EA=10/1，磷钼酸），观察到极性变小的新点。反应液减压蒸发，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-5% 20min，5-5% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物40-11（1.20 g，80％收率）。
步骤10：
将化合物40-6（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（188 mg），K2CO3（519 mg）和40-11(817 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d 氨水，磷钼酸），观察到有比40-6极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（25 g正相柱，DCM/MeOH，0.1%氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物40（600 mg，66%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.01 – 3.96 (m, 1H), 2.85 (d, J =7.6 Hz, 4H), 2.81 – 2.75 (m, 1H), 2.70 – 2.58 (m, 6H), 2.57 – 2.40 (m, 2H),1.95 – 1.48 (m, 14H), 1.25 (s, 46H), 0.86 (d, J = 7.2 Hz, 12H)。
实施例12
化合物43的合成
Figure 538055DEST_PATH_IMAGE019
步骤1：
向化合物31-3（2.0 g）和1-(3-氨基丙基)吡咯烷（2.11 g）的乙腈溶液（100 mL）溶液中加入碳酸钾（2.27g），将混合物在70℃搅拌3小时。TLC显示化合物31-3完全消失，有一个极性变大的点生成。将反应液过滤，所得滤液浓缩后的粗产品，加适量硅胶和DCM拌样、纯化（25 g正相柱，PE/EA，0-0 % 5min，0-10% 20min，10-10% 5min，流速20ml/min）得到无色油状液体化合物43-1（1.10 g，49％收率）。
步骤2：
将化合物43-1（500 mg）溶于乙腈（10 ml），室温搅拌。然后依次称取NaI（181 mg），K2CO3（502 mg）和化合物8-8（695 mg）分批加入到上述反应体系中，在85℃下加热回流搅拌2h。取少量反应液稀释点板（DCM/MeOH=10/1，1d氨水，磷钼酸），观察到有比43-1极性小的新点。反应液冷却至室温后减压蒸发，加适量DCM和硅胶拌样，纯化（15 g正相柱，DCM/MeOH，0.1% 氨水，0-0 % 10min，0-7.5% 20min，7.5-7.5% 5min，流速25ml/min），浓缩得到淡黄色油状液体化合物43（300 mg，31%收率）。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.24 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.01 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 2.79 – 2.64 (m, 1H), 2.53 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 2.44 (d, J =3.2 Hz, 2H), 2.33 – 2.21 (m, 10H), 1.95 – 1.83 (m, 6H), 1.64 – 1.51 (m, 16H),1.42 – 1.25 (m, 46H), 0.91 – 0.88 (m, 9H)。
实施例13纳米脂质颗粒制备以及性状表征
将荧光素酶mRNA（Luc mRNA）稀释于10-100 mM，pH 4.0的柠檬酸缓冲液中；将各脂质组分（本发明所示阳离子脂质：DSPC：胆固醇：PEG脂质）按总浓度10 mg/mL溶于乙醇。其中1.6%PEG脂质组使用的ALC-0159，1.5%PEG脂质组使用的DMG-PEG2000。
将3 mL mRNA缓冲液和1 mL脂质溶液分别装入两个5 mL注射器，安装于微流控注射泵上，将芯片连接到注射器，设定注射泵流速，点击注射泵的开始按键，以流速比3：1的方式注入芯片。观察芯片出口的产品颜色，弃去前5滴乳白色液滴（约为100 μL）后，后端样品收集到EP管中。将收集到的产品放入透析袋中，隔10 mM PBS（pH 7.4）透析6小时（截留分子量：100 KDa），随后超滤浓缩至理想浓度，再将脂质纳米颗粒经0.22 μm无菌过滤器过滤，保存于4℃。
按照Ribogreen试剂盒说明，测试计算产品的包封率；于马尔文公司的Zetasizernano仪器上使用标准检测方法进行粒径与多分散系数（PDI）检测、Zeta电位分析。
本实施例所制备得到的负载mRNA的LNP的粒径、PDI和包封率的检测结果如表1所示。结果表明，该配方下的脂质和mRNA形成的纳米颗粒包封率较高、粒径均一，为100 nm左右，符合核酸递送载体的基本特征。
表1
Figure 728865DEST_PATH_IMAGE020
*DLin-MC3-DMA为商业核酸递送系统Onpattro的阳离子脂质。
实施例14利用纳米脂质颗粒组合物递送荧光素酶mRNA在体内表达效果测定
在6-8周龄的雌性雌性Balb/c小鼠通过尾静脉注射含3ug mRNA的LUC-mRNA-脂质纳米颗粒（LUC-mRNA对应的核苷酸序列见专利申请202210286081.0的SEQ ID NO:1），制备方法同实施例13。在特定时间点小鼠腹腔注射D-Luciferin Potassium Salt 200ug，使用勤翔小动物成像系统进行检测。Fluc通常用于哺乳动物细胞培养物中以测量基因表达和细胞活力。其在底物荧光素存在下发射出生物性光。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构，polyA尾长度为100-120nt，假尿嘧啶完全取代。检测结果如图1，编号1-8的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA至肝脏的水平优于MC3纳米脂质颗粒。
实施例15 利用纳米脂质颗粒组合物递送促红细胞生成素（EPO）mRNA在小鼠内表达与效果测定
在6-8周龄的雌性Balb/c小鼠通过尾静脉注射10 ug EPO-mRNA-脂质纳米颗粒（EPO-mRNA对应的核苷酸序列见专利申请202210286081.0的SEQ ID NO:2），制备方法同实施例13，注射后48h对小鼠进行眼框取血，测定红细胞压积。hEPO通常用于哺乳动物血液中蛋白质表达水平的表征基因，其表达水平与红细胞压积成正比。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构，polyA尾长度为100-120nt，假尿嘧啶完全取代。检测结果如图2所示，由结果可知，多种本专利阳离子组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA的水平优于DLin-MC3-DMA。
实施例16 不同阳离子脂质的体内代谢速度
在6-8周龄的雌性Balb/c小鼠通过尾静脉注射5 ug EPO-mRNA-脂质纳米颗粒，制备方法同实施例13，注射后按不同时间点（注射后、1h、3h、6h、24h、48h）处死，取肝脏破碎后，分三次用氯仿萃取其中脂质，最后合并萃取液，旋蒸去除氯仿，加入甲醇溶解，再用HPLC-CAD（Thermo Vanquish）分析其中阳离子脂质的含量。分析柱为AcclaimTM C18柱。流动相A相为0.5%TEAA水溶液，B相为0.5%TEAA甲醇溶液，样品按下表2的梯度洗脱。结果如图3。
表2
Figure 235064DEST_PATH_IMAGE021
由结果可见，化合物9的体内代谢速度快与DLin-MC3-DMA，代表着它有更好的生物安全性。

Claims (27)

1.具有以下式(I)结构的用于递送核酸的阳离子脂质化合物：
Figure 390800DEST_PATH_IMAGE001
(I)
或其药物可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其特征在于：
L1为-C(=O)-、-OC(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)O-、-O-、-S-、-S-S-、-C(=O)S-、-SC(=O)-、-N(R6)C(=O)-、-C(=O)N(R6)-、-N(R6)C(=O)O-、-OC(=O)N(R6)-、-SC(＝O)N(R6)-、-N(R6)C(＝O)S-、-C(＝S)-、-SC(＝S)-、和-C(＝S)S-中任一种，所述R6为H或C1-C12烷基；
G1和G2各自独立地为C3-C10亚烷基；
R1为C2-C12烷基；
R2为H或C2-C12烷基；
R3为C2-C12烷基；
R4为H或C2-C12烷基；
R5为H、C1-C6烷基、-R7-OH、-R7-OC(=O)CH3、-R7-NHC(=O)-CH3、-R7-OCH3或-R7-NR8(R9)；
R7为C2-C18亚烷基；
R8、R9为C1-C8的直链烷基，或者R8、R9和其连接的N原子形成C3-C10杂环烷基。
2.如权利要求1所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，L1为-OC(=O)-、-C(=O)O-、-SC(=O)-或-C(=O)S-。
3.如权利要求2所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，G1和G2为C3-C8亚烷基。
4.如权利要求3所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，R7为C2-C6亚烷基。
5.如权利要求4所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，R5为-R7-OH。
6.如权利要求5所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，R1和R3各自独立地为 C3-C9烷基；R2和R4为H或C3-C9烷基。
7.如权利要求6所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，R2和R4仅有一个为H。
8.如权利要求1所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，R5为-R7-N(CH2CH3)CH2CH3。
9.如权利要求5所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，所述式(I)结构中的-C(R1)R2或-C(R3)R4结构各自独立地符合如下特征：
Figure 186849DEST_PATH_IMAGE002
。
10.如权利要求1所述的阳离子脂质化合物，其特征在于，所述阳离子脂质化合物具有以下表中所示的结构之一：
Figure 113217DEST_PATH_IMAGE003
Figure 193168DEST_PATH_IMAGE004
Figure 546789DEST_PATH_IMAGE005
Figure 79402DEST_PATH_IMAGE006
Figure 58728DEST_PATH_IMAGE007
Figure 258765DEST_PATH_IMAGE008
Figure 517708DEST_PATH_IMAGE009
Figure 537617DEST_PATH_IMAGE010
。
11.包含权利要求1-10任意一项所述阳离子脂质化合物与预防性或治疗性核酸的脂质体制剂，其特征在于，所述制剂用于预防或者治疗某种疾病。
12.如权利要求11所述的脂质体制剂，其特征在于，所述核酸与所述化合物的摩尔比为20：1至1：1。
13.如权利要求12所述的脂质体制剂，其特征在于，所述核酸与所述化合物的摩尔比为10：1至4：1。
14.如权利要求11所述的脂质体制剂，其特征在于，该脂质体制剂的直径为50 nm至300nm。
15.如权利要求14所述的脂质体制剂，其特征在于，该脂质体制剂的直径为50 nm至150nm，或150 nm至200 nm。
16.如权利要求11所述的脂质体制剂，其特征在于，还包含一种或多种其他脂质组分，包括结构脂质、类固醇和聚合物缀合的脂质。
17.如权利要求16所述的脂质体制剂，其特征在于，所包含的类固醇为胆固醇。
18.如权利要求17所述的脂质体制剂，其特征在于，所述胆固醇与阳离子脂质化合物的摩尔比为（0-1.5）：1。
19.如权利要求11所述的脂质体制剂，其特征在于，聚合物缀合的脂质中的聚合物为聚乙二醇（PEG）。
20.如权利要求19所述的脂质体制剂，其特征在于，所述化合物与所述聚乙二醇缀合的脂质的摩尔比为100:1至20:1。
21.如权利要求19所述的脂质体制剂，其特征在于，所述聚乙二醇缀合的脂质为PEG-DAG、PEG-PE、PEG-SDAG、PEG-cer、PEG-DMG或ALC-0159。
22.如权利要求16所述的脂质体制剂，其特征在于，所述结构脂质选自DPPG、DSPC、DPPC、DMPC、DOPC、POPC、DOPE和DSPE中的一种或多种的组合。
23.如权利要求22所述的脂质体制剂，其特征在于，所述结构脂质与阳离子脂质化合物的摩尔比为（0-0.5）：1。
24.如权利要求11所述的脂质体制剂，其特征在于，所述核酸选自反义RNA和/或信使RNA。
25.如权利要求1-10任意一项所述的阳离子脂质化合物或权利要求11-24任意一项所述的脂质体制剂在制备用于在对象中诱导蛋白质表达的药物中的用途。
26.如权利要求25所述的用途，其特征在于，所述对象为哺乳动物。
27.如权利要求25所述的用途，其特征在于，所述对象是非人灵长类动物或人。
CN202210926949.9A 2022-08-03 2022-08-03 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途 Active CN114989027B (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210926949.9A CN114989027B (zh) 2022-08-03 2022-08-03 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
PCT/CN2023/110927 WO2024027789A1 (zh) 2022-08-03 2023-08-03 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
US18/410,875 US20240180836A1 (en) 2022-08-03 2024-01-11 Cationic Lipid Compound and Composition for Delivery of Nucleic Acids and Use Thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210926949.9A CN114989027B (zh) 2022-08-03 2022-08-03 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114989027A true CN114989027A (zh) 2022-09-02
CN114989027B CN114989027B (zh) 2023-01-31

Family

ID=83022543

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210926949.9A Active CN114989027B (zh) 2022-08-03 2022-08-03 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20240180836A1 (zh)
CN (1) CN114989027B (zh)
WO (1) WO2024027789A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117263882A (zh) * 2023-11-21 2023-12-22 深圳瑞吉生物科技有限公司 一种阳离子脂质化合物、包含其的组合物及应用
CN117257965A (zh) * 2023-11-21 2023-12-22 深圳瑞吉生物科技有限公司 一种核酸递送载体组合物及其应用
WO2024027789A1 (zh) * 2022-08-03 2024-02-08 深圳瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108368028A (zh) * 2015-10-28 2018-08-03 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型脂质和脂质纳米颗粒制剂
CN110352071A (zh) * 2016-10-26 2019-10-18 库瑞瓦格股份公司 脂质纳米颗粒mRNA疫苗
CN114380724A (zh) * 2022-03-23 2022-04-22 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
CN114773217A (zh) * 2022-06-20 2022-07-22 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114763324A (zh) * 2021-01-15 2022-07-19 纳肽得(青岛)生物医药有限公司 一种脂质化合物及脂质体与药物组合物
CN114989027B (zh) * 2022-08-03 2023-01-31 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108368028A (zh) * 2015-10-28 2018-08-03 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型脂质和脂质纳米颗粒制剂
CN110352071A (zh) * 2016-10-26 2019-10-18 库瑞瓦格股份公司 脂质纳米颗粒mRNA疫苗
CN114380724A (zh) * 2022-03-23 2022-04-22 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
CN114773217A (zh) * 2022-06-20 2022-07-22 深圳市瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024027789A1 (zh) * 2022-08-03 2024-02-08 深圳瑞吉生物科技有限公司 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
CN117263882A (zh) * 2023-11-21 2023-12-22 深圳瑞吉生物科技有限公司 一种阳离子脂质化合物、包含其的组合物及应用
CN117257965A (zh) * 2023-11-21 2023-12-22 深圳瑞吉生物科技有限公司 一种核酸递送载体组合物及其应用
CN117263882B (zh) * 2023-11-21 2024-02-23 深圳瑞吉生物科技有限公司 一种阳离子脂质化合物、包含其的组合物及应用
CN117257965B (zh) * 2023-11-21 2024-02-23 深圳瑞吉生物科技有限公司 一种核酸递送载体组合物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN114989027B (zh) 2023-01-31
WO2024027789A1 (zh) 2024-02-08
US20240180836A1 (en) 2024-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114773217B (zh) 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
CN114989027B (zh) 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
US5880131A (en) High molecular weight polymer-based prodrugs
AU2010249881B2 (en) Compositions comprising cationic amphiphiles and colipids for delivering therapeutics molecules
CN114380724B (zh) 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
EP2863925B1 (de) Sialinsäurederivate
TWI828461B (zh) 可電離脂質化合物
EP4434546A1 (en) Novel acid-sensitive aptamer triptolide conjugate and application
CN102911252B (zh) 含肽类树状分子的阳离子脂质、转基因载体及其制备方法和应用
CN117623978A (zh) 可生物降解的氨基酸衍生可电离脂质及其制备方法与应用
DE60115667T2 (de) Säureempfindliche verbindungen, deren herstellung und verwendungen
WO2021193397A1 (ja) シスチン骨格を有する新規カチオン性脂質
US20240360072A1 (en) Cationic Lipid Compound and Composition for Delivery of Nucleic Acids and Use Thereof
WO2024203577A1 (ja) ジスルフィド結合を有するカチオン性脂質
CN117257965B (zh) 一种核酸递送载体组合物及其应用
WO2024198497A1 (zh) 氨基脂质、脂质纳米颗粒及其应用
CN118290339A (zh) 可电离脂质化合物及其应用
CN118619839A (zh) 用于核酸递送的可电离阳离子脂质化合物、脂质纳米颗粒及其制备方法与应用
CN118290282A (zh) 可电离脂质化合物及其制备方法和应用
CN117486832A (zh) 一种能够实现早期溶酶体逃逸的用于rna递送的阳离子脂质分子
CN117003659A (zh) 一种可离子化脂质或其药学上可接受的盐、组合物和应用
CN118812628A (zh) 一种甘露糖基化丝氨酰胱氨酰二油胺类化合物及其制备方法和应用
CN117924106A (zh) 可电离脂质化合物
CN117024323A (zh) 一种可降解、可电离的阳离子脂材及其应用
KR100604435B1 (ko) 조직 투과를 향상시키기 위한 약물

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40078374

Country of ref document: HK

CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 518057 floor 4, building 2, Shenzhen biological incubation base, No. 10, Gaoxin Zhongyi Road, Maling community, Yuehai street, Nanshan District, Shenzhen, Guangdong

Patentee after: Shenzhen Ruiji Biotechnology Co.,Ltd.

Patentee after: Wuhan Ruiji Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 518057 floor 4, building 2, Shenzhen biological incubation base, No. 10, Gaoxin Zhongyi Road, Maling community, Yuehai street, Nanshan District, Shenzhen, Guangdong

Patentee before: Shenzhen Ruiji Biotechnology Co.,Ltd.

Patentee before: Wuhan Ruiji Biotechnology Co.,Ltd.

CP01 Change in the name or title of a patent holder