具体实施方式
以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果,旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点,不作为对本案可实施范围的限定。
实施例1 化合物1的合成
步骤1:
向2-己基癸酸(1-1,2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和6-溴己醇(1.68 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.45 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-2(2.00 g,58%收率)。
步骤2:
向化合物1-2(2 .00g)的乙醇(20 mL)溶液中加入4-氨基丁烷-1-醇(0.47 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-3(1.83 g,90%收率)。
步骤3:
向化合物1-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.23 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物1-1a直接用于下一步(4.06 g,95%收率)。
步骤4:
向化合物1-1a(4.06g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.14 g)在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1b(2.80g,70%收率)。
步骤5:
向化合物1-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(4.26 g)和1,6-二溴己烷(2.72 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50mL)稀释,用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1c(2.23 g,50%收率)。
步骤6:
向化合物1-3(1.80 g)的乙醇(18 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 1.09g),化合物1-1c(2.10 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-3完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1(2.30 g,70%收率),核磁图谱见图1。
实施例2 化合物2的合成
步骤1:
向2-己基癸酸(1-1,2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和6-溴己醇(1.68 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.45 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-2(2.01 g,56%收率)。
步骤2:
向化合物1-2(2 .01g)的乙醇(20 mL)溶液中加入4-氨基己烷-1-醇(0.54 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物2-3(1.91 g,89%收率)。
步骤3:
向化合物1-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.23 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物1-1a直接用于下一步(4.07 g,96%收率)。
步骤4:
向化合物1-1a(4.06g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.14 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1b(2.80g,70%收率)。
步骤5:
向化合物1-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(4.26 g)和1,6-二溴己烷(2.72 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50 mL)稀释,用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1c(2.24 g,51%收率)。
步骤6:
向化合物2-1(1.91 g)的乙醇(18 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 1.09 g)和化合物1-1c(2.06 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物2-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物2(2.40 g,70%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.07 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.56 (q, J =5.8 Hz, 2H), 3.00 – 2.73 (m, 2H), 2.67 – 2.48 (m, 2H), 2.37 (dt, J = 12.3,6.1 Hz, 6H), 2.29 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 1.71 – 1.45 (m, 19H), 1.45 – 1.21 (m,48H), 0.97 – 0.83 (m, 12H)。
实施例3化合物3的合成
步骤1:
向化合物3-1(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,84mg)和7-溴庚醇(2.05 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.29 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3-2(2.06 g,59%收率)。
步骤2:
向化合物3-2(2 .06g)的乙醇(20 mL)溶液中加入4-氨基丁烷-1-醇(0.50 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3-3(1.92 g,91%收率)。
步骤3:
向化合物3-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.50 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物3-1a直接用于下一步(4.11 g,94%收率)。
步骤4:
向化合物3-1a(4.11 g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.38 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物3-1a完全消失。将反应混合物用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3-1b(2.85 g,71%收率)。
步骤5:
向化合物3-1b(2.85 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA,3.01 g)和1,7-二溴庚烷(3.31 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3-1c(2.46 g,51%收率)。
步骤6:
向化合物3-3(1.92 g)的乙醇(18 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 1.18 g)和化合物3-1c(2.13 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物2-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3(2.45 g,72%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.07 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.61 – 3.54(m, 2H), 2.95 – 2.80 (m, 2H), 2.58 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 2.49 – 2.44 (m, 2H),2.36 (t, J = 6.2 Hz, 4H), 2.29 (p, J = 7.7 Hz, 1H), 1.66 (ddd, J = 14.0, 7.6,6.4 Hz, 2H), 1.63 – 1.55 (m, 10H), 1.55 – 1.44 (m, 8H), 1.44 – 1.36 (m, 9H),1.36 – 1.24 (m, 35H), 0.93 – 0.85 (m, 12H)。
实施例4 化合物4的合成
步骤1:
向化合物4-1(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,141mg)和6-溴己醇(2.52 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,2.16 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-2(2.26 g,56%收率)。
步骤2:
向化合物4-2(2 .26g)的乙醇(20 mL)溶液中加入2-氨基乙烷-1-醇(0.45 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-3(1.90 g,93%收率)。
步骤3:
向化合物4-1a(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.00 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物4-1b直接用于下一步(4.05 g,93%收率)。
步骤4:
向化合物4-1b(4.05 g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.21 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物3-1a完全消失。将反应混合物用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-1c(2.81 g,72%收率)。
步骤5:
向化合物4-1c(2.81 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA,2.41 g)和1,6-二溴己烷(2.51 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-1d(2.17 g,51%收率)。
步骤6:
向化合物4-3(1.20 g)的乙醇(12 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.98 g)和化合物4-1d(2.13 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物4-3完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4(2.44 g,71%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.03 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.64 (dt, J =6.5, 5.7 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 2.63 –2.54 (m, 3H), 2.47 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 2.31 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.68 – 1.45(m, 14H), 1.45 – 1.22 (m, 42H), 0.97 – 0.81 (m, 9H)。
实施例5 化合物5的合成
步骤1:
向化合物4-1(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,142mg)和7-溴庚醇(2.72 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,2.16 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物5-1(2.35 g,56%收率)。
步骤2:
向化合物5-1(2 .35 g)的乙醇(20 mL)溶液中加入2-氨基乙烷-1-醇(0.45 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物5-2(1.99 g,91%收率)。
步骤3:
向化合物4-1a(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.00 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物4-1b直接用于下一步(4.05 g,93%收率)。
步骤4:
向化合物4-1b(4.05 g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.21 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物3-1a完全消失。将反应混合物用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-1c(2.81 g,71%收率)。
步骤5:
向化合物4-1c(2.81 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA,2.41 g)和1,7-二溴庚烷(2.65 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物5-1c(2.23 g,51%收率)。
步骤6:
向化合物5-2(1.00 g)的乙醇(10 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.78 g)和化合物4-1d(1.59 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物4-3完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3(2.47 g,73%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.03 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.64 (dt, J =6.5, 5.7 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 2.62 –2.54 (m, 3H), 2.47 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 2.31 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.65 – 1.45(m, 14H), 1.44 – 1.21 (m, 46H), 0.93 – 0.84 (m, 9H)。
实施例6化合物6的合成
步骤1:
向化合物4-1a(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,86mg)和6-溴己醇(1.53 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.33 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6-1(1.82 g,56%收率)。
步骤2:
向化合物6-1(1.82 g)的乙醇(20 mL)溶液中加入2-氨基乙烷-1-醇(0.27 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6-2(1.57 g,90%收率)。
步骤3:
向化合物4-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(3.32 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物4-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物6-1a直接用于下一步(4.0 g,95%收率)。
步骤4:
向化合物6-1a(4.0g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.73 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6-1b(3.0g,75%收率)。
步骤5:
向化合物6-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(6.16 g)和1,6-二溴己烷(3.81 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50mL)稀释,用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6-1c(3.00 g,59%收率)。
步骤6:
向化合物6-2(1.57 g)的乙醇(10 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.95 g)和化合物6-1c(1.42 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物4-3完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6(1.62 g,74%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.07 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.64 (dt, J =6.5, 5.7 Hz, 2H), 2.90 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 2.57(t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.53 – 2.44 (m, 6H), 2.28 (q, J = 7.7 Hz, 1H), 1.71 –1.45 (m, 14H), 1.45 – 1.24 (m, 43H), 0.93 – 0.85 (m, 9H)。
实施例7 化合物7的合成
步骤1:
向化合物4-1(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,141mg)和6-溴己醇(2.52 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,2.16 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-2(2.26 g,56%收率)。
步骤2:
向化合物4-2(2 .26g)的乙醇(20 mL)溶液中加入N,N-二甲基乙二胺(0.65 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-3a(2.08 g,90%收率)。
步骤3:
向化合物4-1a(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.00 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物4-1b直接用于下一步(4.05 g,94%收率)。
步骤4:
向化合物4-1b(4.05 g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.21 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物3-1a完全消失。将反应混合物用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-1c(2.81 g,71%收率)。
步骤5:
向化合物4-1c(2.81 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA,2.41 g)和1,6-二溴己烷(2.51 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-1d(2.17 g,52%收率)。
步骤6:
向化合物4-3a(1.40 g)的乙醇(10 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 1.05g)和化合物4-1d(1.42 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物4-3a完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物7(2.07 g,71%收率)。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 4.03 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.87 (t, J =6.7 Hz, 2H), 2.63 – 2.53 (m, 5H), 2.45 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 2.35 (s, 6H),2.31 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.71 – 1.46 (m, 14H), 1.44 – 1.19 (m, 42H), 1.02 –0.77 (m, 9H)。
实施例8 化合物8的合成
步骤1:
向化合物1-1(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中加入二氯亚砜(1.16 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物1-1a直接用于下一步(2.03 g,96%收率)。
步骤2:
向化合物1-1a(2.03g)的10% wt NaOH溶液(10 mL)溶液和甲苯(100 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(0.57 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(200 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1b(1.40g,72%收率)。
步骤3:
向化合物1-1b(1.40 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(2.13 g)和1,6-二溴己烷(1.36 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(25 mL)稀释,用EA(15 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(50 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1c(1.17 g,51%收率)。
步骤4:
向化合物1-1c(1.17 g)的乙醇(10 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.69g)和化合物4-1d(1.42 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-1c完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物8(1.07 g,49%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.61 – 3.54 (m, 2H), 2.95 – 2.80 (m,4H), 2.73 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 2.58 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 2.49 – 2.44 (m, 2H),2.36 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 1.61 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.59 – 1.53 (m, 13H),1.52 – 1.45 (m, 4H), 1.45 – 1.40 (m, 4H), 1.40 – 1.30 (m, 20H), 1.30 – 1.23(m, 23H), 0.94 – 0.85 (m, 12H)。
实施例9化合物9的合成:
步骤1:
向化合物1-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.23 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物1-1a直接用于下一步(4.06 g,95%收率)。
步骤2:
向化合物1-1a(4.06g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.14 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1b(2.80g,70%收率)。
步骤3:
向化合物1-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(4.26 g)和1,6-二溴己烷(2.72 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50mL)稀释,用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1c(2.23 g,50%收率)。
步骤4:
向化合物1-1c(1.0 g)的乙醇(20 mL)溶液中加入5-羟基戊胺(0.26 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物9-1(0.8 g,76%收率)。
步骤5:
向化合物9-1(0.8 g)的乙醇(10 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.45 g)和化合物1-1c(0.84 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物9-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物9(1.0 g,70%收率)。1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.56 (q, J = 5.8 Hz, 1H), 2.95 – 2.80 (m, 2H),2.63 – 2.54 (m, 2H), 2.37 (dt, J = 12.4, 6.1 Hz, 3H), 1.63 – 1.46 (m, 10H),1.46 – 1.31 (m, 12H), 1.31 – 1.23 (m, 13H), 0.92 – 0.86 (m, 6H)。
实施例10 化合物10的合成:
步骤1:
向化合物3-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.50 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物3-1a直接用于下一步(4.11 g,95%收率)。
步骤2:
向化合物3-1a(4.11 g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.38 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物3-1a完全消失。将反应混合物用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3-1b(2.85 g,70%收率)。
步骤3:
向化合物3-1b(2.85 g)的THF溶液(28 mL)溶液中二异丙基乙胺(DIPEA, 3.01 g)和1,7-二溴庚烷(3.31 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物3-1c(2.46 g,50%收率)。
步骤4:
向化合物3-1c(2.00 g)的乙醇(20 mL)溶液中加入4-羟丁胺(0.26 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物3-1c完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物10(2.6 g,66%收率)。1H NMR (500 MHz,Chloroform-d) δ 3.62 – 3.50 (m, 2H), 2.96 – 2.80 (m, 4H), 2.73 (t, J = 5.8Hz, 1H), 2.58 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 2.50 – 2.44 (m, 2H), 2.36 (t, J = 6.1 Hz,4H), 1.64 – 1.45 (m, 20H), 1.44 – 1.23 (m, 44H), 0.96 – 0.82 (m, 12H)。
实施例11 化合物11的合成:
步骤1:
向化合物4-1(2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,142mg)和7-溴庚醇(2.72 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,2.16 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1% EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物5-1(2.35 g,58%收率)。
步骤2:
向化合物5-1(2.00g)的乙醇(20 mL)溶液中加入2-羟基乙胺(0.37 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物5-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物11-1(1.30 g,71%收率)。
步骤3:
向化合物4-1a(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.00 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物4-1b直接用于下一步(4.05 g,95%收率)。
步骤4:
向化合物4-1b(4.05 g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.21 g)在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物3-1a完全消失。将反应混合物用EA(30 mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物4-1c(2.81 g,70%收率)。
步骤5:
向化合物4-1c(2.81 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA,2.41 g)和1,7-二溴庚烷(2.65 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物5-1a(2.23 g,50%收率)。
步骤6:
向化合物11-1(1.0 g)的乙醇(15 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.78 g)和化合物5-1a(1.58 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物11-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物11(1.50 g,68%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.61 – 3.54 (m, 2H), 2.95 – 2.80 (m,4H), 2.73 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 2.58 (m, 2H), 2.50 – 2.44 (m, 2H), 2.36 (t, J= 6.1 Hz, 4H), 1.64 – 1.43 (m, 20H), 1.45 – 1.23 (m, 45H), 0.94 – 0.85 (m,12H)。
实施例12 化合物12的合成
步骤1:
向2-己基癸酸(1-1,2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和6-溴己醇(1.68 g)中。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.45 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-2(2.00g,58%收率)。
步骤2:
向化合物1-2(1.50g)的乙醇(20 mL)溶液中加入3-甲氧基丙胺(0.35 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物12-1(1.20 g,78%收率)。
步骤3:
向化合物1-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.23 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物1-1a直接用于下一步(4.06 g,95%收率)。
步骤4:
向化合物1-1a(4.06g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.14 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1b(2.80g,70%收率)。
步骤5:
向化合物1-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(4.26 g)和1,6-二溴己烷(2.72 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50mL)稀释,用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1c(2.23 g,50%收率)。
步骤6:
向化合物12-1(1.0 g)的乙醇(15 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.87 g)和化合物1-1c(1.20 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物12-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物12(1.2 g,65%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.07 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.42 (td, J =6.6, 1.4 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.95 – 2.80 (m, 2H), 2.63 – 2.52 (m, 3H),2.37 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 2.29 (m, 1H), 1.79 – 1.22 (m, 66H), 0.94 – 0.85 (m,12H)。
实施例13化合物13的合成
步骤1:
向2-己基癸酸(1-1,2.00 g)的DCM(20 mL)溶液中依次加入4-二甲氨基吡啶(DMAP,95 mg)和6-溴己醇(1.68 g)。混合物在25℃搅拌5分钟后,加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)(EDCl,1.45 g),反应混合物25℃搅拌12小时,然后TLC显示起始醇完全消失。将反应混合物用DCM(30 mL)稀释,并用饱和NaHCO3(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-2(2.00 g,58%收率)。
步骤2:
向化合物1-2(2 .00g)的乙醇(20 mL)溶液中加入4-乙酰氧基丁胺(0.69 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物13-1(1.80 g,80%收率)。
步骤3:
向化合物13-1(1.50 g)的乙醇(15 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.87g)和化合物1-1d(1.60 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-3完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物13(2.0 g,76%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.11 – 4.04 (dt, J = 8.0, 6.4 Hz, 4H),2.38 – 2.34 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 2.32 – 2.26 (m, 1H), 2.03 (s, 2H), 1.79 –1.21 (m, 68H), 0.92 – 0.87 (m, 12H)。
实施例14 化合物14的合成
步骤1:
向化合物1-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(2.23 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合物1-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物1-1a直接用于下一步(4.06 g,95%收率)。
步骤2:
向化合物1-1a(4.06g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.14 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1b(2.80g,70%收率)。
步骤3:
向化合物1-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(4.26 g)和1,6-二溴己烷(2.72 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50mL)稀释,用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物1-1c(2.23 g,50%收率)。
步骤4:
向化合物1-1c(2 .00g)的乙醇(20 mL)溶液中加入3-甲氧基丙胺(0.45 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-1c完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物14-1(1.80 g,88%收率)。
步骤5:
向化合物14-1(1.50 g)的乙醇(18 mL)溶液中加入二异丙基乙胺(DIPEA, 0.87g)和化合物1-1c(1.62 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-3完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物14(2.10 g,78%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.42 (td, J = 6.6, 1.4 Hz, 2H), 3.18 (s,3H), 2.95 – 2.81 (m, 4H), 2.63 – 2.52 (m, 4H), 2.37 (t, J = 6.1 Hz, 4H), 1.78– 1.64 (m, J = 6.5 Hz, 2H), 1.63 – 1.23 (m, 64H), 0.92 – 0.85 (m, 12H)。
实施例15化合物15的合成
步骤1:
向化合物4-1(4.00 g)的DCM(40 mL)溶液中加入二氯亚砜(3.32 g)。将混合物在40℃搅拌6小时。然后TLC显示起始化合4-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,得到粗产物6-1a直接用于下一步(4.0 g,90%收率)。
步骤2:
向化合物6-1a(4.0g)的10% wt NaOH溶液(20 mL)溶液和甲苯(200 mL)的混合溶液中加入硫代乙酰胺(1.73 g),在25℃搅拌48小时。然后TLC显示起始化合物1-1a完全消失。将反应混合物用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂,得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6-1b(3.0g,76%收率)。
步骤3:
向化合物6-1b(2.80 g)的THF溶液(28 mL)溶液中加入碳酸钾(6.16 g)和1,6-二溴己烷(3.81 g)。将混合物在25℃搅拌12小时。然后TLC显示化合物1-1b完全消失。将反应混合物用水(50mL)稀释,用EA(30mL)萃取两次,合并有机层并用饱和盐水(100 mL)洗涤。合并有机层经Na2SO4干燥,并真空除去溶剂将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物6-1c(3.00 g,57%收率)。
步骤4:
向化合物6-1c(2.50g)的乙醇(20 mL)溶液中加入N,N-二甲基-1,2-乙二胺(0.47g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物1-2完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物15-1(2.30 g,90%收率)。
步骤5:
向化合物15-1(2.00 g)的乙醇(20 mL)溶液中分别加入N,N-二甲基-1,2-乙二胺(1.44 g)和化合物1-1d(2.84 g)。将混合物在90℃搅拌12小时。然后TLC显示起始化合物15-1完全消失。将反应混合物浓缩得到粗产物,将粗产物通过柱色谱法(硅胶柱,洗脱液为含0-1%EA(体积百分比)的正己烷溶液)纯化,并将纯产物馏分蒸发,得到化合物15(2.6 g,63%收率)。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 2.92 – 2.85 (dt, J = 12.1, 6.5 Hz,4H), 2.61 – 2.56 (m, 5H), 2.53 – 2.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.47 – 2.43 (t, J= 6.1 Hz, 4H), 2.38 – 2.34 (s, 6H), 1.64 – 1.57 (m, 7H), 1.57 – 1.51 (m, 4H),1.50 – 1.45 (m, 4H), 1.44 – 1.25 (m, 43H), 0.92 – 0.87 (m, 9H)。
实施例16纳米脂质颗粒制备以及性状表征
配制水相:将mRNA按照 0.13 μg/μL的终浓度稀释于柠檬酸缓冲液;
将各脂质组分(本文所示阳离子脂质,DSPC,胆固醇,PEG脂质)按照总浓度10 mg/mL溶于乙醇,比例随阳离子脂质不同而有所不同。其中编号1-3、8-10、12-14和16所用的PEG脂质为ALC-0159;编号4-7、11、15和17-19用的PEG脂质为PEG2000-DMG。
将3 mL mRNA缓冲液和1 mL脂质溶液分别装入两个5 mL注射器,安装于微流控注射泵上,将芯片连接到注射器,设定注射泵流速,点击注射泵的开始按键,将料液注入芯片。观察芯片出口的产品颜色,弃去前5滴乳白色液滴(约为100 μL)后,后端样品收集到EP管中。将收集到的产品放入透析袋中,隔10 mM PBS(pH 7.4)透析6小时(截留分子量:100KDa),随后保存于4℃。
按照Ribogreen试剂盒说明,测试计算产品的包封率;于马尔文公司的Zetasizernano仪器上使用标准检测方法进行粒径与PDI检测、Zeta电位分析。
本实施例所制备得到的负载mRNA的LNP的粒径、PDI和包封率的检测结果如表1所示。
表1
实施例17 利用纳米脂质颗粒组合物递送荧光素酶mRNA在体内表达效果测定
在6-8周龄的雌性SD大鼠通过肌肉注射含30ug mRNA的LUC-mRNA-脂质纳米颗粒(LUC-mRNA对应的核苷酸序列见SEQ ID NO:1),制备方法同实施例16。在特定时间点小鼠尾静脉注射D-Luciferin Potassium Salt 200ug,使用PerkinElmer小动物成像系统进行检测。Fluc通常用于哺乳动物细胞培养物中以测量基因表达和细胞活力。其在底物荧光素存在下发射出生物性光。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120nt,假尿嘧啶完全取代。检测结果如图2和表2,1-15#化合物组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA至肝脏的水平优于16#(ALC-0315)。
表2
实施例18 利用纳米脂质颗粒组合物递送促红细胞生成素(EPO)mRNA在小鼠内表达与效果测定
在6-8周龄的雌性Balb/c小鼠通过尾静脉注射10ug EPO-mRNA-脂质纳米颗粒(EPO-mRNA对应的核苷酸序列见SEQ ID NO:2),制备方法同实施例16,并根据特定检测时间点(0、4、12、24、48小时)将动物分为5组。在特定时间点对小鼠进行眼框取血,测定红细胞压积。hEPO通常用于哺乳动物血液中蛋白质表达水平的表征基因,其表达水平与红细胞压积成正比。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120nt,假尿嘧啶完全取代。检测结果如图3所示,由结果可知,化合物1#组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA的水平优于17#(MC3)。
实施例19 利用纳米脂质颗粒组合物递送单克隆抗体Palivizumab mRNA在小鼠内功能测定
在6-8周龄的雌性Balb/c小鼠通过肌肉注射10ug Palivizumab-mRNA-脂质纳米颗粒(Palivizumab-mRNA对应的核苷酸序列见SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4),制备方法同实施例16。在特定时间点24h对小鼠进行眼框取血,测定小鼠血清中和RSV A2的中和抗体滴度。在384孔的微量滴定板上进行HEp-2细胞培养。培养皿每孔含有15 ml病毒,组织培养半最大感染剂量(TCID50)为25 ~ 1000,每孔含有15 ml连续稀释的血清,在37℃、5%CO2条件下孵育1 ~ 1.5小时。每孔中加入2.5 x105个HEp-2细胞,37℃孵育3 - 4天。用80%丙酮/20%磷酸盐缓冲盐水在4℃低温条件下固定细胞15分钟,用辣根过氧化物酶结合的抗RSV F的ELISA试剂盒检测病毒复制,并通过酶标仪在450nm时监测吸光率来定量,利用GraphPad Prism中的非线性拟合算法计算IC50值。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120nt,假尿嘧啶完全取代。检测结果如图4,采用1#化合物制备的阳离子脂质递送的Palivizumab-mRNA表达量优于18#化合物(lipid5)的表达量,因此产生了更好的抗病毒效果。
实施例20 利用纳米脂质颗粒组合物递送肿瘤抗原Kras-mRNA在小鼠内表达效果测定
在6-8周龄的雌性NOG-SCID小鼠荷瘤LU65,小鼠通过瘤内注射10ug G12C Kras-mRNA-脂质纳米颗粒(Kras-mRNA对应的核苷酸序列见SEQ ID NO:5),每周注射1次,持续4周,制备方法同实施例16。在4周后对小鼠进行眼框取血,测定小鼠血清中抗Kras G12C的抗体滴度,同时检测细胞免疫水平。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120nt,假尿嘧啶完全取代。检测结果如图5、图6,采用1#、2#、3#化合物制备的阳离子脂质递送的Kras-mRNA诱导了优于ALC-0315的细胞免疫(图5),产生了更好的抑制肿瘤生长效果(图6)。
实施例21 利用纳米脂质颗粒组合物递送新型冠状病毒mRNA疫苗
采用6周K18-hACE2 KI小鼠模型,于0、14天肌肉注射给与不同纳米脂质颗粒组合物递送的mRNA新冠肺炎疫苗(对应的核苷酸序列见SEQ ID NO:6)进行免疫,第28天(末次免疫后第14天)以2.5×103PFU的新冠病毒剂量滴鼻攻击动物,评价不同纳米脂质颗粒组合物递送的mRNA新冠肺炎疫苗对SARS-CoV-2病毒毒株感染的保护效果。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120nt,假尿嘧啶完全取代。检测结果攻毒后体重变化、右肺病毒载量以及存活率分别如图7、图8、图9所示,由结果可知,化合物1#组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA的水平优于17#(MC3)。
实施例22 利用纳米脂质颗粒组合物递送呼吸道合胞病毒mRNA疫苗
5 - 7周龄雌性BALB/c小鼠,不同纳米脂质颗粒组合物递送的mRNA新冠肺炎疫苗进行免疫,所用的mRNA编码RSF F 融合前构型(DS-Cav1,对应的核苷酸序列见SEQ ID NO:7)每隔3周免疫1次。第二次免疫后两周,抽血进行血清学检测。第二次免疫后4周处死动物,收集脾脏进行ICS检测。所用到的mRNA的基本特征为ARCA帽结构,polyA尾长度为100-120nt,假尿嘧啶完全取代。免疫后小鼠的中和抗体滴度和细胞免疫水平如图10、图11所示,由结果可知,化合物1#组成的纳米脂质颗粒组合物递送mRNA的水平优于19#(SM102)。
序列表
<110> 深圳市瑞吉生物科技有限公司
<120> 用于递送核酸的阳离子脂质化合物和组合物及用途
<130> GAI22CN2026
<160> 7
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1653
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备Luciferase疫苗
<400> 1
atggaggatg ctaagaatat caagaagggt ccagccccat tttacccgct ggaagacgga 60
acggctggcg agcagctcca caaggcaatg aaaaggtacg ccttagtgcc tggcacgatc 120
gcttttacag acgcccatat tgaggtcaat attacgtatg ctgagtattt cgagatgagt 180
gtgagacttg cagaggccat gaagcgttac gggctcaaca ctaatcatcg tatagtggtg 240
tgttcagaaa actctctgca attcttcatg ccggtcttag gagcgctctt cataggagtg 300
gcagttgcgc cagcgaatga catatataac gagcgcgagt tgctgaactc tatgaatatt 360
tcacagccaa cggtcgtttt cgtatccaaa aaaggcctac aaaagatcct caacgtacaa 420
aaaaaactgc ctatcataca aaaaattatt attatggact cgaagaccga ctatcaaggg 480
tttcaaagca tgtacacgtt cgttactagc catctccctc caggcttcaa tgaatacgac 540
ttcgtgcctg aatcattcga ccgtgacaaa accatagccc tgatcatgaa ctcatcggga 600
agcacgggct taccaaaagg tgtggcgctt ccacacagga ctgcttgtgt aagatttagt 660
catgccagag atcccatctt tggaaatcaa atcattccag acactgccat tcttagtgtc 720
gtaccgttcc atcatggttt cggaatgttc acgactttgg gctatttaat ttgtggtttc 780
cgcgttgttt tgatgtatag gttcgaagag gaactgttcc tgagatcatt acaggactat 840
aagatccaga gcgccctact cgttccgacg ctattttcct ttttcgcgaa atcgaccctc 900
attgacaaat acgatctgtc taacctacat gagattgcta gtgggggtgc gcccctaagc 960
aaagaggttg gtgaagcggt ggcgaagcga tttcatctgc ctggaatacg gcaagggtac 1020
ggtttaaccg aaaccacatc ggccatcttg ataacgccag aaggggacga caagccggga 1080
gctgtaggta aggttgttcc attcttcgaa gcgaaagtgg tggacttgga cactggaaag 1140
accttagggg ttaatcaacg tggggagctg tgcgtcagag gcccgatgat catgtctggg 1200
tacgttaaca accctgaagc aacgaatgcc ttaattgata aggacgggtg gttgcactcg 1260
ggtgacatag cctactggga cgaagacgaa cactttttca ttgtggatcg tctgaagtcc 1320
ctgattaaat ataaaggcta tcaagtggcc ccagcggagc tcgaatctat tttgctgcaa 1380
cacccgaaca tcttcgatgc gggcgttgca ggtctgccag acgatgatgc gggagagctc 1440
ccggctgcag ttgttgtcct tgagcatggg aagactatga cggaaaaaga aatcgttgat 1500
tatgtggcat cgcaagtaac caccgccaag aagctacgtg gtggggtggt cttcgtggat 1560
gaggtaccca aaggtctgac tggaaaacta gacgctcgga aaattcgcga gattctcatc 1620
aaggcgaaaa aaggtggaaa aagcaagcta tga 1653
<210> 2
<211> 579
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备EPO疫苗
<400> 2
atgggggttc ctgagagacc aactctactg ttgctactat cacttttact catcccttta 60
ggattgccag ttctgtgcgc acccccgcgc cttatttgcg attctcgcgt gctagaacgt 120
tacatactcg aggccaagga ggccgagaat gttacaatgg ggtgcgccga agggccccgc 180
ctaagcgaga acatcacggt gccggatacc aaggttaatt tttacgcatg gaaacgaatg 240
gaagtagagg aacaagcaat cgaagtctgg cagggcctgt cgttgctaag cgaagccatt 300
ctccaagccc aggcccttct cgccaacagc agtcaaccgc ctgaaacgct gcaacttcac 360
atcgacaaag ccatatctgg tctccgttcc ctgacctccc ttctgcgggt tttgggagcc 420
cagaaagagc ttatgagccc gccggatact acccctcccg cccctttgcg gacccttacg 480
gttgatacct tttgcaaact gttcagggta tatgcgaatt tcctccgagg taaacttaaa 540
ctttatacag gggaggtatg tcggagaggt gaccgctga 579
<210> 3
<211> 291
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备Palivizumab疫苗VL
<400> 3
atggacatcc agatgaccca atctcctagt actcttagcg cctccgtcgg cgatcgagtt 60
acaataactt gccgggcgtc ccagtcaatt tcatcatggc tcgcttggta ccaacagaag 120
ccggggaagg cacccaagtt actaatctac gacgcttctt ctctagagtc gggcgtgcct 180
tctcgctttt ccggctccgg aagtggcacc gaattcacgc ttaccattag ctcattgcaa 240
cccgatgact tcgccacata ctattgtcaa cagtataact cgtactcctg a 291
<210> 4
<211> 366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备Palivizumab疫苗VH
<400> 4
atgcaggtca ctttacggga aagcggcccg gcactagtaa agccaacgca aaccctcact 60
ctcacttgca cattttccgg atttagcctg agcacgtccg gcatgtcagt cggatggatc 120
agacaacccc cgggtaaagc actagagtgg ttagcggata tctggtggga tgacaagaaa 180
gattataatc cctctcttaa aagcaggtta acaatatcca aggatacgtc caagaatcaa 240
gtggtgctta aggtgacgaa tatggacccc gctgataccg caacttacta ttgtgctcgg 300
tccatgataa cgaattggta tttcgatgtt tggggggctg gcacaaccgt cactgtatct 360
agttga 366
<210> 5
<211> 159
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备Kras G12C疫苗
<400> 5
atgacggaat acaagttagt ggttgtagga gcctgcggag tgggaaaatc cgccttgaca 60
atacagctaa tccaggggtc tatgacggaa tacaaattag ttgtggtggg cgcgtgcggc 120
gtaggtaagt ctgctctaac gatacagttg attcaatga 159
<210> 6
<211> 3822
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备COVID-19 Spike疫苗
<400> 6
atgttcgtgt tcctggtgct gctgcccctg gtgagcagcc agtgcgtgaa cctgaccacc 60
cggacccagc tgccaccagc ctacaccaac agcttcaccc ggggcgtcta ctaccccgac 120
aaggtgttcc ggagcagcgt cctgcacagc acccaggacc tgttcctgcc cttcttcagc 180
aacgtgacct ggttccacgc catccacgtg agcggcacca acggcaccaa gcggttcgac 240
aaccccgtgc tgcccttcaa cgacggcgtg tacttcgcca gcaccgagaa gagcaacatc 300
atccggggct ggatcttcgg caccaccctg gacagcaaga cccagagcct gctgatcgtg 360
aataacgcca ccaacgtggt gatcaaggtg tgcgagttcc agttctgcaa cgaccccttc 420
ctgggcgtgt actaccacaa gaacaacaag agctggatgg agagcgagtt ccgggtgtac 480
agcagcgcca acaactgcac cttcgagtac gtgagccagc ccttcctgat ggacctggag 540
ggcaagcagg gcaacttcaa gaacctgcgg gagttcgtgt tcaagaacat cgacggctac 600
ttcaagatct acagcaagca caccccaatc aacctggtgc gggatctgcc ccagggcttc 660
tcagccctgg agcccctggt ggacctgccc atcggcatca acatcacccg gttccagacc 720
ctgctggccc tgcaccggag ctacctgacc ccaggcgaca gcagcagcgg gtggacagca 780
ggcgcggctg cttactacgt gggctacctg cagccccgga ccttcctgct gaagtacaac 840
gagaacggca ccatcaccga cgccgtggac tgcgccctgg accctctgag cgagaccaag 900
tgcaccctga agagcttcac cgtggagaag ggcatctacc agaccagcaa cttccgggtg 960
cagcccaccg agagcatcgt gcggttcccc aacatcacca acctgtgccc cttcggcgag 1020
gtgttcaacg ccacccggtt cgccagcgtg tacgcctgga accggaagcg gatcagcaac 1080
tgcgtggccg actacagcgt gctgtacaac agcgccagct tcagcacctt caagtgctac 1140
ggcgtgagcc ccaccaagct gaacgacctg tgcttcacca acgtgtacgc cgacagcttc 1200
gtgatccgtg gcgacgaggt gcggcagatc gcacccggcc agacaggcaa gatcgccgac 1260
tacaactaca agctgcccga cgacttcacc ggctgcgtga tcgcctggaa cagcaacaac 1320
ctcgacagca aggtgggcgg caactacaac tacctgtacc ggctgttccg gaagagcaac 1380
ctgaagccct tcgagcggga catcagcacc gagatctacc aagccggctc caccccttgc 1440
aacggcgtgg agggcttcaa ctgctacttc cctctgcaga gctacggctt ccagcccacc 1500
aacggcgtgg gctaccagcc ctaccgggtg gtggtgctga gcttcgagct gctgcacgcc 1560
ccagccaccg tgtgtggccc caagaagagc accaacctgg tgaagaacaa gtgcgtgaac 1620
ttcaacttca acggccttac cggcaccggc gtgctgaccg agagcaacaa gaaattcctg 1680
ccctttcagc agttcggccg ggacatcgcc gacaccaccg acgctgtgcg ggatccccag 1740
accctggaga tcctggacat caccccttgc agcttcggcg gcgtgagcgt gatcacccca 1800
ggcaccaaca ccagcaacca ggtggccgtg ctgtaccagg acgtgaactg caccgaggtg 1860
cccgtggcca tccacgccga ccagctgaca cccacctggc gggtctacag caccggcagc 1920
aacgtgttcc agacccgggc cggttgcctg atcggcgccg agcacgtgaa caacagctac 1980
gagtgcgaca tccccatcgg cgccggcatc tgtgccagct accagaccca gaccaattca 2040
ccccggaggg caaggagcgt ggccagccag agcatcatcg cctacaccat gagcctgggc 2100
gccgagaaca gcgtggccta cagcaacaac agcatcgcca tccccaccaa cttcaccatc 2160
agcgtgacca ccgagattct gcccgtgagc atgaccaaga ccagcgtgga ctgcaccatg 2220
tacatctgcg gcgacagcac cgagtgcagc aacctgctgc tgcagtacgg cagcttctgc 2280
acccagctga accgggccct gaccggcatc gccgtggagc aggacaagaa cacccaggag 2340
gtgttcgccc aggtgaagca gatctacaag acccctccca tcaaggactt cggcggcttc 2400
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ctgctgttca acaaggtgac cctagccgac gccggcttca tcaagcagta cggcgactgc 2520
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accctggtga agcagctgag cagcaacttc ggcgccatca gcagcgtgct gaacgacatc 2940
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gacttctgcg gcaagggcta ccacctgatg agctttcccc agagcgcacc ccacggagtg 3180
gtgttcctgc acgtgaccta cgtgcccgcc caggagaaga acttcaccac cgccccagcc 3240
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cactggttcg tgacccagcg gaacttctac gagccccaga tcatcaccac cgacaacacc 3360
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atcgccggcc tgatcgccat cgtgatggtg accatcatgc tgtgctgcat gaccagctgc 3720
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<210> 7
<211> 1659
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 用于制备DS-Cav1疫苗
<400> 7
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tgttttgctt cgggccaaaa cataaccgaa gagttttacc aatccacctg ctctgcagtg 120
tccaaaggtt acctctcggc actgagaaca ggatggtaca ccagcgttat aacaattgaa 180
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gaaggcgagg ttaataaaat taagtcggcg ctattgtcca caaataaggc cgtggtctct 540
ctctcgaatg gcgtttctgt acttaccttc aaagtactgg atctgaagaa ctacatcgac 600
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attgaattcc aacagaaaaa taatcgtctg ctagaaataa cacgcgagtt tagtgtgaat 720
gctggagtaa ccacgcctgt ttccacgtac atgcttacga attcagaact gctctcattg 780
attaacgaca tgccaattac aaatgatcag aaaaaactaa tgtctaacaa tgtccaaatt 840
gtccggcagc agtcatatag tataatgtgt attatcaaag aagaagttct ggcgtatgta 900
gtgcagttgc ctttgtatgg agtgatagac accccgtgtt ggaaattgca cacgtcgcct 960
ttgtgcacaa ctaataccaa agagggatca aacatctgtc tgacacgcac ggatagaggt 1020
tggtactgtg acaacgccgg ttccgtgtca ttctttccgc aggcagagac atgcaaagta 1080
cagagcaaca gggtcttctg tgacacaatg aacagcctaa ctcttccctc ggaaatcaat 1140
ctatgcaatg ttgacatctt caatccgaag tacgactgca agatcatgac ctccaaaacg 1200
gacgtgtcat caagcgtaat aacttcgctg ggtgcaatag tgtcgtgcta tggaaaaact 1260
aaatgtacag cgtcaaacaa aaatcggggg ataattaaaa cgttcagtaa tggatgtgac 1320
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