CN114957395A - 一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用 - Google Patents

一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114957395A
CN114957395A CN202210570094.0A CN202210570094A CN114957395A CN 114957395 A CN114957395 A CN 114957395A CN 202210570094 A CN202210570094 A CN 202210570094A CN 114957395 A CN114957395 A CN 114957395A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bee
antibacterial peptide
kap
gene
peptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210570094.0A
Other languages
English (en)
Inventor
罗长财
胡祥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Kenuo Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Jiangxi Kenuo Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Kenuo Biotechnology Co ltd filed Critical Jiangxi Kenuo Biotechnology Co ltd
Publication of CN114957395A publication Critical patent/CN114957395A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
    • A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及基因工程领域，具体地，涉及一种蜜蜂抗菌肽及其基因和应用。其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。通过高密度液体发酵进行高效表达，制备出作为饲料添加剂的蜜蜂抗菌肽AP2，代替饲用抗生素，防治动物疾病，克服抗生素滥用带来的不良后果，并降低生产成本。

Description

一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用
技术领域
本发明涉及基因工程领域，具体地，涉及一种蜜蜂抗菌肽及其基因和应用。
背景技术
抗生素在治疗疾病、预防感染、促进动物生长、改善动物健康状况等方面发挥了十分积极的作用，但其危害也被各国所重视，在饲料及养殖中禁用抗生素的呼声越来越高。抗生素在环境中的污染，会使一些致病菌产生抗药性，甚至造成超级病菌的产生，这会对人类社会产生巨大的危害和风险。因此，抗生素的替代成为国内外急待解决的一个重大问题。
抗微生物肽(Antimicrobial Peptides,AMPs)是生物体免疫系统在受到异源刺激时，诱导产生的一类防御性生物活性肽，是机体非特异性天然防御系统的重要组成部分，广泛存在于自然界各种生物以及人体内。
抗菌肽为一种多肽类物质，对动物机体没有毒害作用，易被降解，不会对环境造成污染、残留，可作为畜禽饲料添加剂取代或部分取代目前饲喂动物所用的抗生素，减少抗生素对动物体的危害。
蜜蜂属于膜翅目昆虫，没有严格意义上的免疫应答机制，当受到外界致病菌的侵入时，其血淋巴内即会产生抗菌肽，用于抵御疾病的发生，属于非特异性免疫。
通过现代生物技术方法，工业化生产对病原菌具有专一性或特异性的抗菌肽产品，是开发饲用抗生素替代产品的一条重要而有效的途径。
发明内容
本发明的目的是提供一种蜜蜂抗菌肽AP2。
本发明的另一目的是提供编码上述蜜蜂抗菌肽AP2的基因Kap。
本发明的另一目的是提供包含编码上述蜜蜂抗菌肽AP2基因Kap的重组载体。
本发明的另一目的是提供包含上述蜜蜂抗菌肽AP2基因Kap的重组菌株。
本发明的另一目的是提供制备上述蜜蜂抗菌肽AP2的方法。
本发明的另一目的是提供上述蜜蜂抗菌肽AP2的应用。
本发明的来源于蜜蜂的抗菌肽AP2的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示：
RVRRPVYIPQPRPPHPRL
该抗菌肽共由18个氨基酸残基组成，分子量为2235Da。
本发明的编码上述蜜蜂抗菌肽AP2的基因Kap的序列如SEQ ID NO:2所示：
5’-ATGAGGGTAAGACGACCAGTCTATATACCTCAGCCCCGCCCTCCGCACCCACGGCTATGA-3’
该基因进行毕赤酵母密码子偏好优化，并且在5’及3’端分别加上EcoR I及Not I酶切位点后，合成后的基因序列如SEQ ID NO:3所示：
5’-GAATTCATGAGGGTAAGACGACCAGTCTATATACCTCAGCCCCGCCCTCCGCACCCACGGCTATGAGCGGCCGC-3’。
本发明提供了包含上述蜜蜂抗菌肽基因Kap的重组载体，载体优选为pPICZαA，将Kap采用EcoR I和Not I进行双酶切，然后插入到经同样双酶切得到的pPICZαA载体中，使该核苷酸序列位于AOX1启动子的下游并受其调控，优选得到重组载体Kap-pPICZαA。
本发明还提供了包含上述重组载体Kap-pPICZαA的重组菌株，表达宿主优选为毕赤酵母X33。
本发明还提供了一种工业制备蜜蜂抗菌肽AP2的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用上述重组载体Kap-pPICZαA转化宿主细胞，得到重组菌株；
2)培养重组菌株，诱导蜜蜂抗菌肽AP2的表达；以及
3)采用喷雾干燥法进行后处理，得到最终产品。
本发明还提供了上述蜜蜂抗菌肽AP2的应用，优选其作为饲料添加剂应用于饲料及养殖行业。
本发明合成蜜蜂抗菌肽基因，构建毕赤酵母重组工程菌株，通过高密度液体发酵进行高效表达，制备出作为饲料添加剂的蜜蜂抗菌肽AP2，代替饲用抗生素，防治动物疾病，克服抗生素滥用带来的不良后果，并降低生产成本。蜜蜂抗菌肽AP2效价检测结果显示，AP2除对弧菌无明显抑制效果外，对多种细菌均有效果，尤其是对金黄色葡萄球菌效果最佳。高温处理对AP2抗菌性能的影响很小，AP2耐高温性能非常优良。蜜蜂抗菌肽AP2抗胃蛋白酶及胰蛋白酶的性能良好，AP2具有作为饲料添加剂使用的优势，产品应用时在动物胃肠道中不会被消化酶水解。
附图说明
图1显示蜜蜂抗菌肽AP2生产菌株的筛选结果；
图2为Kap-pPICZαA-X33在50L罐中高密度液体发酵曲线。
具体实施方式
以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实验材料和试剂：
1、菌株与载体
大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、土拉弗朗西斯菌、副溶血弧菌、流感嗜血杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、链球菌均由市售购得，毕赤酵母X33、载体pPICZαA购自Invitrogen公司。
2、酶与试剂盒
DNAMarker、博莱霉素(Zeocin)、胶回收试剂盒，PCR纯化试剂盒等购自上海生工公司。限制性内切酶EcoR I与Not I、T4 DNA连接酶等购自TaKaRa(大连宝生物工程有限公司)。Sac I购自NEB公司(中国)。胃蛋白酶、胰蛋白酶购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
3、培养基
BSM发酵培养基(基础盐培养基，Basal Salts Medium)：85％磷酸26.7mL，二水硫酸钙0.9g，硫酸钾18.2g，七水硫酸镁14.9g，氢氧化钾4.13g，微量元素(PTM1)4.4mL，加水定容至1L。
微量元素PTM1：七水硫酸亚铁65g，五水硫酸铜6g，碘化钠0.08g，一水硫酸锰3.0g，氯化钴0.5g，氯化锌20g，硼酸0.02g，二水钼酸钠0.2g，生物素0.2g，98％浓硫酸5mL，采用纯净水定容至1L。其中生物素于PTM1高温灭菌并冷却至室温后加入。
实施例1、蜜蜂抗菌肽的提取、纯化及测序
(1)蜜蜂抗菌肽的提取：将100只左右中华蜜蜂(Apis cerana)烘干、粉碎后，采用80％的甲醇溶液进行提取，在常温下提取条件如下：甲醇与蜜蜂干粉用量：6：1；提取次数：3次；提取时间：24小时。
(2)蜜蜂抗菌肽提取液浓缩：收集3次提取液，过滤后将滤液于15000r/min下离心10min，离心上清液浓缩。
(3)蜜蜂抗菌肽的纯化：通过3个步骤进行：①采用Sephadex G-75凝胶柱进行柱层析(洗脱液为0.5％的甲醇)，紫外检测器于280nm测吸收峰，收集具有抗菌性能的活性组分，冷冻干燥，得到蜜蜂抗菌肽粗品；②取该粗品用0.5％甲醇溶解(总体积为1mL)，继续采用Sephadex G-50凝胶柱再次进行纯化(洗脱液为0.5％的甲醇)，于280nm测紫外吸收峰，收集具有抗菌性能的活性组分，浓缩后冷冻干燥；③将冷冻干燥组分最后进行SDS-PAGE电泳，得到单一组分条带，切取该条带，回收组分。
(4)蜜蜂抗菌肽测序：将SDS-PAGE电泳纯化后的组分进行氨基酸测序，获得该抗菌肽序列为：RVRRPVYIPQPRPPHPRL(SEQID NO:1)，由18个氨基酸组成，并将该来源于蜜蜂的抗菌肽命名为AP2。
实施例2、蜜蜂抗菌肽AP2表达载体构建
参照毕赤酵母偏爱性密码子，在不改变蜜蜂抗菌肽AP2氨基酸序列的前提下，采用毕赤酵母偏好性密码子替代使用频率低或稀有密码子，设计出蜜蜂抗菌肽AP2的基因序列，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，并在序列5’端、3’端分别加上限制性内切酶EcoR I和Not I酶切位点(SEQID NO:3)。
Kap经过EcoR I和Not I双酶切后与经过相同双酶切的pPICZαA质粒连接，构建得到重组质粒Kap-pPICZαA。
实施例3、包含蜜蜂抗菌肽AP2编码基因的毕赤酵母重组工程菌的构建、筛选
将构建好的重组质粒Kap-pPICZαA采用限制性内切酶Sac I线性化后，电转化毕赤酵母X33感受态细胞并涂布含有不同浓度Zeocin的YPD平板。
30℃静置培养2-3天后，从含有不同浓度Zeocin的YPD平板上随机挑取单菌落，采用YPD培养基进行摇瓶发酵培养。
YPD培养基(g·L-1)：胰蛋白胨20.0，酵母粉10.0，葡萄糖20.0
培养条件：250mL三角瓶装液量为30mL，温度30℃，转速220rpm，培养24h后，每12h加一次甲醇进行诱导，每次甲醇添加量为0.5％，共加4次，整个培养时间为72h。
甲醇诱导表达结束后，对发酵液进行离心，取上清液进行平板抑菌实验，挑选出抑菌圈最大的菌株，并命名为Kap-pPICZαA-X33，菌株筛选的抑菌结果参见图1。
实施例4、蜜蜂抗菌肽AP2的高效表达
配制20L基本盐培养基，装入50L自动液体发酵罐中，121℃灭菌30min，冷却至30℃。用氨水或磷酸调节发酵液的pH值至4.6-4.8，控制溶氧大于20％，发酵温度为30℃，搅拌转速500rpm。
整个液体发酵过程分3个阶段：
第一阶段为菌体培养阶段，将重组工程菌Kap-pPICZαA-X33接种至发酵罐中，接种量为10％，然后流加已灭菌的4L 50％的葡萄糖或甘油，培养24小时左右，以补完葡萄糖或甘油为标志；
第二阶段为饥饿阶段，当葡萄糖或甘油补完之后，不流加任何碳源，当溶氧上升至80％以上即表明该阶段结束，为期约30-60min；
第三阶段为诱导表达阶段，流加诱导培养基，保持溶氧在20％以上，整个发酵的培养时间控制在180-200小时之间。
在发酵过程中的不同时间取样，离心取上清液，进行抗菌效价检测，Kap-pPICZαA-X33在50L罐中高密度液体发酵曲线参见图2。
通过高密度液体发酵，Kap-pPICZαA-X33表达蜜蜂抗菌肽AP2的生产性能可达到2712U。
实施例5、蜜蜂抗菌肽AP2效价的检测
检测方法：管碟法。
1.材料和仪器
(1)指示菌悬液：金黄色葡萄球菌，致病性大肠杆菌；
(2)培养基及配制方法：效价检定用培养基(上层、底层)；
培养基配制方法：LB营养琼脂培养基(以配制100mL为例)：胰蛋白胨1.0g，酵母粉0.5g，氯化钠(NaCl)0.5g，琼脂1.8g，加水定容至100mL。121℃、0.1MPa高压灭菌15min；
(3)抗菌肽：实施例4制备的抗菌肽样品及标准品(高剂量、低剂量，高剂量与低剂量之比为2:1)；
(4)试剂与器材：灭菌生理盐水，无菌平皿，无菌牛津杯，镊子，移液枪，游标卡尺；
2.检测方法
(1)先在灭菌后的平皿底部四边，分别对角注明“SH”、“SL”、“UH”和“UL”标记，并各竖立放置牛津杯(内径6mm，外径8mm，高15mm左右)1个，然后每平皿先倒15mL营养琼脂培养基作为下层，凝固后，保证牛津杯与培养基之间无空隙；
(2)用灭菌后的生理盐水(0.9％氯化钠溶液)将指示菌的悬液稀释至一定浓度，然后取稀释后的菌悬液与冷却至48-50℃左右的LB营养琼脂培养基混合均匀，快速加5mL至已经凝固的培养基上作为上层；
(3)培养基再次凝固后，用镊子将牛津杯夹出，形成8mm左右的孔洞；
(4)分别在每个孔内加入相应的待检抗菌肽及标准品溶液200μL；
(5)将平皿置于37℃恒温培养箱培养18-24h，量取各抑菌圈直径(SH、SL、UH、UL)，以毫米为单位，误差不超过0.1mm；
注：UH：供试品高剂量抑菌菌直径；UL：供试品低剂量抑菌圈直径；SH：标准品高剂量抑菌圈直径；SL：标准品低剂量抑菌圈直径。
3.抗菌肽效价计算
待测样品抗菌肽效价：
Figure BDA0003658773610000061
式中：
S＝SH-SL；U＝UH-UL；Ar：标准品效价(U)；Pr：待检样品中抗菌肽效价(U)。
实施例6、蜜蜂抗菌肽AP2的性质测定
1.蜜蜂抗菌肽AP2最低抑菌浓度(MIC)测定
选取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、伤寒杆菌等作为参照指示菌，进行蜜蜂抗菌肽AP2的最低抑菌浓度(MIC)的对比实验。具体过程如下：
(1)分别培养以上各种细菌，取菌液均匀涂布LB固体琼脂平板，晾干；
(2)取晾干的平板，用牛津杯打孔，然后向各孔中分别加入制备好的不同稀释浓度的蜜蜂抗菌肽AP2溶液200μL，并做好标识；
(3)将加好抗菌肽的平板置于37℃培养箱中，过夜培养；
(4)根据抑菌圈情况，确定蜜蜂抗菌肽AP2的最低抑菌浓度。
蜜蜂抗菌肽AP2的最低抑菌浓度(MIC)结果参见表1。
表1.AP2对各菌种的最小抑制浓度(MIC)
Figure BDA0003658773610000062
Figure BDA0003658773610000071
注：ND表示未出现抑菌圈。
从检测结果中可以看出，AP2除对弧菌无明显抑制效果外，对本次所测试的各G+、G-菌均有效果，尤其是对金黄色葡萄球菌效果最佳，其最低抑菌浓度仅为0.19U/mL。
2.耐高温性能测定
取适量抗菌肽发酵离心液，于100℃条件下，加热处理10min，然后快速降至室温。取等量离心液，不经高温处理，作为对照实验样本。
将实验组及对照组样本各取150μL分别加入涂布有指标菌(大肠杆菌K88及金黄色葡萄球菌)的LB平板孔中，置于37℃培养箱中，过夜培养，测量抑菌圈大小。测试结果参见表2。
表2.AP2的耐高温性能
Figure BDA0003658773610000072
。
从检测结果中可以发现，高温处理对AP2抗菌性能的影响很小，这说明AP2耐高温性能非常优良。
3.抗消化酶对比实验
根据单胃动物消化道特点，分别配备胃蛋白酶及胰蛋白酶如下：
(1)胃消化液：胃蛋白酶80U/mL，pH调整为2.0；
(2)胰消化液：胰蛋白酶150U/mL，pH调整为6.8。
取上述抗菌肽，按1：1与分别与上述消化液混合均匀，并将最终pH调至2.0与6.8。消化处理4h后，取消化处理后的各抗菌肽150μL分别加入涂布有指标菌的LB平板的孔中，置于37℃培养箱中，过夜培养。检测结果参见表3。
表3.AP2抗消化性能
Figure BDA0003658773610000081
。
结果显示，蜜蜂抗菌肽AP2抗胃蛋白酶及胰蛋白酶的性能良好，这说明AP2具有作为饲料添加剂使用的优势，产品应用时在动物胃肠道中不会被消化酶水解。
以上为本申请的具体实施方式，仅用于理解本申请的技术方案，不限制本申请的保护范围。
序列表
<110> 江西科诺生物科技有限公司
<120> 一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 蜜蜂(bee)
<400> 1
Arg Val Arg Arg Pro Val Tyr Ile Pro Gln Pro Arg Pro Pro His Pro
1 5 10 15
Arg Leu
<210> 2
<211> 60
<212> DNA
<213> 蜜蜂(bee)
<400> 2
atgagggtaa gacgaccagt ctatatacct cagccccgcc ctccgcaccc acggctatga 60
<210> 3
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gaattcatga gggtaagacg accagtctat atacctcagc cccgccctcc gcacccacgg 60
ctatgagcgg ccgc 74

Claims (10)

1.一种蜜蜂抗菌肽AP2，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种蜜蜂抗菌肽基因Kap，其特征在于，编码权利要求1所述的蜜蜂抗菌肽AP2。
3.根据权利要求2所述的蜜蜂抗菌肽基因Kap，其特征在于，所述蜜蜂抗菌肽基因Kap的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。
4.包含权利要求2所述蜜蜂抗菌肽基因Kap的重组载体。
5.包含权利要求2所述蜜蜂抗菌肽基因Kap的重组菌株。
6.一种制备蜜蜂抗菌肽AP2的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用包含权利要求2所述蜜蜂抗菌肽基因Kap的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；
2)培养获得的重组菌株，诱导蜜蜂抗菌肽AP2的表达；以及
3)回收并纯化所表达的蜜蜂抗菌肽AP2。
7.根据权利要求6所述的制备蜜蜂抗菌肽AP2的方法，其特征在于，所述宿主细胞为毕赤酵母X33。
8.权利要求1所述蜜蜂抗菌肽AP2的应用。
9.权利要求1所述蜜蜂抗菌肽AP2用于抑制细菌的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述细菌为大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、溶血性葡萄球菌、空肠弯曲杆菌、流感嗜血杆菌、李斯特菌、土拉弗朗西斯菌、副溶血弧菌、肺炎克雷伯菌、链球菌、破伤风杆菌、白喉杆菌、炭瘟杆菌、肺炎双球菌。
CN202210570094.0A 2022-01-05 2022-05-24 一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用 Pending CN114957395A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2022100036506 2022-01-05
CN202210003650 2022-01-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114957395A true CN114957395A (zh) 2022-08-30

Family

ID=82956262

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210570094.0A Pending CN114957395A (zh) 2022-01-05 2022-05-24 一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114957395A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116121221A (zh) * 2023-02-03 2023-05-16 集美大学 一种蜡样芽孢杆菌DEAD-box RNA解旋酶蛋白抗菌肽DB16及其应用
CN116121221B (zh) * 2023-02-03 2024-07-02 集美大学 一种蜡样芽孢杆菌DEAD-box RNA解旋酶蛋白抗菌肽DB16及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101988038A (zh) * 2009-07-31 2011-03-23 广东中大南海海洋生物技术工程中心有限公司 一种海马抗菌肽毕赤酵母工程菌及其在养殖中的应用
CN103352046A (zh) * 2013-05-23 2013-10-16 甘肃智信达生物科技有限公司 Apidaecin型抗菌肽在毕赤酵母菌中的表达及扩大培养

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101988038A (zh) * 2009-07-31 2011-03-23 广东中大南海海洋生物技术工程中心有限公司 一种海马抗菌肽毕赤酵母工程菌及其在养殖中的应用
CN103352046A (zh) * 2013-05-23 2013-10-16 甘肃智信达生物科技有限公司 Apidaecin型抗菌肽在毕赤酵母菌中的表达及扩大培养

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"利牲健-促生长、增加营养物质吸收", Retrieved from the Internet <URL:http://www.1866.tv/pro/411631.html> *
XIMING CHEN等: "High-level heterologous production and Functional Secretion by recombinant Pichia pastoris of the shortest proline-rich antibacterial honeybee peptide Apidaecin", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 7, pages 1 - 9 *
雷东风;赵刚;彭峰;: "泰诺灵(蜜蜂肽)对保育猪生长性能的影响", 养猪, no. 05 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116121221A (zh) * 2023-02-03 2023-05-16 集美大学 一种蜡样芽孢杆菌DEAD-box RNA解旋酶蛋白抗菌肽DB16及其应用
CN116121221B (zh) * 2023-02-03 2024-07-02 集美大学 一种蜡样芽孢杆菌DEAD-box RNA解旋酶蛋白抗菌肽DB16及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110643612B (zh) 一种卵形鲳鲹抗菌肽NK-lysin基因及应用
CN108794635B (zh) 一种牛乳铁蛋白肽-人溶菌酶融合蛋白、基因及其应用
CN111420037B (zh) 噬菌体裂解酶Lysep3在制备广谱抗菌药物中的应用
CN110551732A (zh) 一种卵形鲳鲹抗菌肽leap-2基因及应用
CN112111474B (zh) 一种酶活性提高的重组溶菌酶lyz-2及其突变体和应用
CN108342340B (zh) 一种产细菌素的凝结芽孢杆菌及其制备方法和应用
CN104962566A (zh) 一种重组细菌素及其制备方法和应用
CN117384267A (zh) 一种脊尾白虾抗菌肽、编码基因EcCrustin、重组菌及其应用
CN114957395A (zh) 一种蜜蜂抗菌肽的基因及其应用
CN115725551B (zh) MmBBK2在制备胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制剂中的应用
CN115925847B (zh) MmPI在制备胰蛋白酶抑制剂中的应用
CN115747075A (zh) 一种能胞外分泌抗菌肽的三角褐指藻构建方法
CN112321697B (zh) 一种黑水虻抗菌肽Cecropin-α及其应用
CN108690140A (zh) 一种杂合肽及其在抑菌中的应用
CN101921788B (zh) 文蛤溶菌酶基因及其编码蛋白和应用
AU2002328340B2 (en) Nucleic acid free ghost preparations
CN100543138C (zh) 重组鸡-β防御素蛋白Gal-9的制备方法
CN114874934A (zh) 一种植物乳杆菌及其在制备对虾养殖用益生菌制剂中的应用
CN113527461A (zh) 一种马铁菊头蝠来源抗菌肽rf-cath1及其应用
AU2002328340A1 (en) Nucleic acid free ghost preparations
CN111202169B (zh) 一种包含牦牛β-防御素4的非蛋白氮饲料添加剂
CN109180794B (zh) 一种新型斑节对虾ALFpm12抗菌肽、制备方法及其应用
CN111424023B (zh) 产酰胺酶类溶菌酶的蓝藻工程菌及其应用
KR102346499B1 (ko) 페리틴 단백질 대량생산을 위한 재조합 벡터 및 이를 이용한 페리틴 단백질의 대량생산방법
CN118272283A (zh) 一种高效表达抗菌肽Mytimacin-4重组菌株的构建及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination