CN114957184A - 一种葛根异黄酮苷提取物制备方法及应用 - Google Patents

一种葛根异黄酮苷提取物制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种葛根异黄酮苷提取物的制备方法，由以下步骤组成：(1)取药材，粉碎或者不粉碎，加入8～20倍的乙醇提取1到3次，每次提取1到5个小时，合并提取液，将提取液减压浓缩得到粗提物浸膏；(2)向粗提物浸膏中加入纯化水溶解，过滤除去水不溶性杂质，收集滤液，将滤液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用20～50％乙醇洗脱，洗脱液压强为‑0.01MPa，温度为60℃，减压浓缩、干燥，最终得到葛根异黄酮苷类提取物。本发明可避免有机试剂的使用从而缓解环保压力并减少生产风险，简化工业生产操作步骤，因此实现降低耗能、降低溶剂损耗、提高产品收率，最终能制备出的葛根提取物的总异黄酮量苷质量含量大于90.0％。

Description

一种葛根异黄酮苷提取物制备方法及应用
技术领域
本发明属于植物提取物制备技术领域，具体涉及一种葛根异黄酮苷提取物制备方法及应用。
背景技术
葛根是我国最常见的中药之一，具有悠久的临床使用历史。其始载于我国汉代的《神农本草经》，均味甘、辛，性凉，归脾、胃、肺经，具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒的功效。而现代医学则认为，葛根是一种富含异黄酮类、三萜及三萜皂苷类、香豆素类、生物碱、葛根多糖等多种活性成分的中草药食品。大量研究表明葛根异黄酮在缓解酒精性肝损伤方面有着显著的功效，因此葛根异黄酮的研究开发受到了行业的广泛关注。
葛根异黄酮包括葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基大豆苷、葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、染料木苷等。文献报道的传统的葛根总异黄酮的制备方法有水提法、醇提法、水提醇沉法、醇提水沉法，由于葛根药材的成分复杂，含有很多其他的成分，所以传统的制法得到的葛根总异黄酮的含量一般较低且颜色很深。目前现有技术对葛根异黄酮提取工艺的研究一方面制备工艺简单，所得提取物中异黄酮含量很低，提取物颜色较深，限制了在白酒以及无色饮料等产品中的应用；另一方面虽然制备的葛根异黄酮含量很高，可是制作工艺复杂，且涉及大量有机试剂，所以高成本、高污染最终限制了制备工艺在生产中的应用。
中国发明专利申请CN202111037071.5通过氯化胆碱/乙二醇溶液辅助提取、AB-8分离纯化、调节pH冷却析出沉淀、石灰水溶解沉淀除杂、冷冻干燥得到精制葛根异黄酮，该工艺制备的葛根异黄酮虽然含量较高，但是操作繁琐，且涉及氯化胆碱、乙二醇等试剂的使用，并不适用于工业化大生产。
中国发明专利申请CN200510041214.4提供了一种葛根总黄酮提取物及其制备方法，其制备过程如下：取葛根药材，30％～90％的乙醇溶液提取，将提取液浓缩上大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，乙醇洗脱液浓缩后，加乙醇使醇浓度达70－80％，滤去沉淀物，滤液浓缩，加正丁醇萃取，回收正丁醇，浓缩、干燥。该工艺虽然操作简便，但是制备的总黄酮含量相对偏低，且涉及有机试剂正丁醇，并不适用食品生产企业的应用。
目前仅仅采用水和乙醇为溶剂，一次富集纯化及可制得总异黄酮苷含量大于90％葛根提取物的研究尚未见报道。
发明内容
一种以葛根为原料适用于工业生产的异黄酮苷的制备方法，该方法可避免有机试剂的使用从而缓解环保压力并减少生产风险，简化工业生产操作步骤，因此实现降低耗能、降低溶剂损耗、提高产品收率，最终能制备出的葛根提取物的总异黄酮量苷质量含量大于90.0％。
本发明提供的技术方案如下：
一种葛根异黄酮苷提取物的制备方法，由以下步骤组成：
(1)取药材，粉碎或者不粉碎，加入8～20倍的乙醇提取1到3次，每次提取1到5个小时，合并提取液，将提取液减压浓缩得到粗提物浸膏；
(2)向粗提物浸膏中加入纯化水溶解，过滤除去水不溶性杂质，收集滤液，将滤液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用20～50％乙醇洗脱，洗脱液压强为-0.01MPa，温度为60℃，减压浓缩、干燥，最终得到葛根异黄酮苷类提取物。
作为优选的技术方案，步骤(1)中的乙醇的体积浓度为80-95％。
作为优选的技术方案，步骤(1)中的提取温度为25-45℃。
作为优选的技术方案，步骤(2)中加入纯化水的质量为药材量的8～10倍。
作为优选的技术方案，步骤(2)中的大孔树脂型号为AB-8、D101。
作为本发明的另一项发明目的，本发明还提供了利用上述方法制备得到的葛根提取物，其中总异黄酮含量大于90％。
作为本发明的另一项发明目的，本发明还提供了上述葛根提取物在制备白酒及无色饮料中的应用，每1000ml基体中，加入0.5-1.2g葛根提取物。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
(1)本发明所述的方法仅仅使用大孔树脂富集纯化葛根中的异黄酮苷，一次富集纯化过程就能使葛根提取物中总异黄酮苷的质量含量均能达到90％以上。方法绿色环保、易于放大、工艺简单。
(2)本发明所述的方法使用的溶剂主要为水和乙醇，操作安全、易于从产品中除去且避免溶剂残留。
(3)本发明所述的方法利用葛根异黄酮苷类化合物在水、乙醇中均可溶的性质，通过醇提结合纯化水萃取，通过醇提可高效提取葛根素有效避免葛根中大分子糖、大分子蛋白、淀粉、水溶性色素等化合物浸出。通过纯化水萃取可高效萃取出醇提物中的葛根异黄酮苷类化合物，并避免水不溶性色素等杂质的浸出。
(4)本发明所述的方法所得产品得率、纯度高，本方法提取的得率在5-8％之间，产品总异黄酮苷含量大于90.0％。
(5)本发明所述的方法利用葛根异黄酮苷类化合物成分丰富，主要包含葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基大豆苷、葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、染料木苷、大豆苷、芒柄花苷中的至少一种组成；
(6)本发明所述的方法利用葛根异黄酮苷类化合物中葛根素的重量百分比大于总异黄酮苷的50％。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
以下实施例及对比例采用如下方法进行检测：
1、异黄酮成分含量检测
制备所得的葛根异黄酮提取物使用高效液相色谱法(HPLC)对异黄酮含量进行分析：所述的液相色谱测定条件为，柱温为40℃；检测波长为250nm；进样量为10μL；流动相：乙腈(A)-0.05％磷酸二氢钠水溶液(B)；梯度洗脱:0～10min,8％～8％A；10～30min,8％～12％A；30～40min,12％～15％B；40～70min,15％～95％A。
2、色差值测定：
采用色差值通过色差仪测量，提取葛根异黄酮苷溶液的色差通过便携式色差仪(ColorQuest XE色差仪,美国HunterLab公司生产)测量色差值。具体做法是将制备所得葛根异黄酮苷溶液与去离子水参比，测试葛根异黄酮苷溶液的色差值dE*，dE*越低说明颜色越浅。
实施例1
一种从葛根中制备葛根异黄酮的方法，取10kg葛根破碎处理后，加入溶媒倍量为10倍的体积分数为90％的乙醇水溶液混合，在35℃条件下提取2h，提取两次，合并两次提取液，提取液在压强为-0.01MPa，温度为60℃条件下浓缩干燥得1.5kg葛根粗提物，向粗提物中加入5L纯化水溶解，过滤，收集滤液，以流速为10L/h的速度上AB-8树脂层析柱，上柱完成后，使用50L纯化水冲洗AB-8树脂层析柱，弃去水洗液，继续使用体积浓度20％乙醇水水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，在压强为-0.01MPa，温度为60℃条件下浓缩干燥，最终得到葛根异黄酮苷类提取物420g浅黄色提取物。
经HPLC法测定：上述方法所得葛根提取物中总异黄酮含量90.3％，葛根素含量为50.2％，3＇-羟基葛根素含量为7.44％、3＇-甲氧基葛根素含量为8.26％、葛根素-6″-O-木糖苷含量为3.28％、葛根素芹菜糖苷含量为11.10％、大豆苷含量为4.40％、染料木苷含量为0.75％、芒柄花苷含量为1％、大豆苷元含量为0.8％。
色差值测定：上述方法所得葛根提取物1g，加入1000mL体积分数为50％的乙醇水溶液，过滤后得到澄清透亮的浅淡黄色溶液，测定色差值为1.23。
实施例2
一种从葛根中制备葛根异黄酮的方法，取10kg葛根破碎处理后，加入溶媒倍量为10倍的体积分数为85％的乙醇水溶液混合，在45℃条件下提取2h，提取两次，合并两次提取液，提取液在压强为-0.01MPa，温度为60℃条件下浓缩干燥得1.7kg葛根粗提物，向粗提物中加入5L纯化水溶解，过滤，收集滤液，以流速为10L/h的速度上AB-8树脂层析柱，上柱完成后，使用50L纯化水冲洗AB-8树脂层析柱，弃去水洗液，继续使用体积浓度30％乙醇水水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，在压强为-0.01MPa，温度为60℃条件下浓缩干燥，最终得到葛根异黄酮苷类提取物511g浅黄色提取物。
经HPLC法测定：上述方法所得葛根提取物中总异黄酮含量91.96％，葛根素含量为53.1％，3＇-羟基葛根素含量为7.33％、3＇-甲氧基葛根素含量为8.55％、葛根素-6″-O-木糖苷含量为2.97％、葛根素芹菜糖苷含量为11.22％、大豆苷含量为5.90％、染料木苷含量为0.89％、芒柄花苷含量为0.8％、大豆苷元含量为1.2％。
色差值测定：上述方法所得葛根提取物1g，加入1000mL体积分数为50％的乙醇水溶液，过滤后得到澄清透亮的浅黄色溶液，测定色差值为2.56。
实施例3
一种从葛根中制备葛根异黄酮的方法，取10kg葛根破碎处理后，加入溶媒倍量为8倍的体积分数为95％的乙醇水溶液混合，在25℃条件下提取5h，提取三次，合并两次提取液，提取液在压强为-0.01MPa，温度为60℃条件下浓缩干燥得1.3kg葛根粗提物，向粗提物中加入5L纯化水溶解，过滤，收集滤液，以流速为10L/h的速度上AB-8树脂层析柱，上柱完成后，使用50L纯化水冲洗AB-8树脂层析柱，弃去水洗液，继续使用体积浓度30％乙醇水水溶液洗脱树脂柱，收集洗脱液，在压强为-0.01MPa，温度为60℃条件下浓缩干燥，最终得到葛根异黄酮苷类提取物489g浅黄色提取物。
经HPLC法测定：上述方法所得葛根提取物中总异黄酮含量94.4％，葛根素含量为56.1％，3＇-羟基葛根素含量为7.22％、3＇-甲氧基葛根素含量为8.15％、葛根素-6″-O-木糖苷含量为2.87％、葛根素芹菜糖苷含量为10.78％、大豆苷含量为6.80％、染料木苷含量为0.98％、芒柄花苷含量为0.9％、大豆苷元含量为0.6％。
色差值测定：上述方法所得葛根提取物1g，加入1000mL体积分数为50％的乙醇水溶液，过滤后得到澄清透亮的浅黄色溶液，测定色差值为1.06。
对比例1
与实施例1相比，按照实例1制备葛根提取液后，浓缩至无醇味后得葛根浓缩液，不进行干燥，浓缩液直接上AB-8树脂层析柱，其他制备方法与实施例1相同，最终得到556g褐色固体，经HPLC法测定：上述方法所得葛根提取物中总异黄酮含量86.6％，葛根素含量为49.1％。色差值测定后，质量浓度为1‰时的溶液为深黄色，色差值为dE*为10.77。说明未使用纯化水对葛根粗提物进行萃取葛根异黄酮苷从而对其水不溶物进行除杂，所制备的提取物虽然葛根异黄酮苷含量大于80％，但是制备提取物调配成的溶液颜色较深，不利于白酒及无色饮料中的应用。
对比例2
与实施例1相比，按照实例1将10kg葛根药材破碎后，加入10倍的体积分数为90％的乙醇水溶液混合，在80℃条件下加热回流提取2h，其他制备方法与实施例1相同，最终得到512g褐色固体，经HPLC法测定：上述方法所得葛根提取物中总异黄酮含量75.4％，葛根素含量为44.1％。色差值测定后，质量浓度为1‰时的溶液为深黄色，色差值为dE*为9.55。说明加热回流提取虽然可以提高提取物得率，但是制备所得提取物中葛根异黄酮含量相对偏低，且使用该提取物调配成的溶液颜色较深，不利于白酒及无色饮料中的应用。
对比例3
与实施例2相比，按照实例2将10kg葛根药材破碎后，加入10倍的纯化水溶液混合，其他制备方法与实施例2相同，最终得到656g褐色固体，经HPLC法测定：上述方法所得葛根提取物中总异黄酮含量59.94％，葛根素含量为35.2％。色差值测定后，质量浓度为1‰时的溶为褐色，色差值为dE*为23.11。说明使用纯化水代替乙醇进行提取实验，取虽然可以提高提取物得率，但是制备所得提取物中葛根异黄酮含量相对偏低，且使用该提取物调配成的溶液颜色较深，不利于白酒及无色饮料中的应用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种葛根异黄酮苷提取物的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：
(1)取药材，粉碎或者不粉碎，加入8～20倍的乙醇提取1到3次，每次提取1到5个小时，合并提取液，将提取液减压浓缩得到粗提物浸膏；
(2)向粗提物浸膏中加入纯化水溶解，过滤除去水不溶性杂质，收集滤液，将滤液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用20～50％乙醇洗脱，洗脱液压强为-0.01MPa，温度为60℃，减压浓缩、干燥，最终得到葛根异黄酮苷类提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的乙醇的体积浓度为80-95％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的提取温度为25-45℃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中加入纯化水的质量为药材量的8～10倍。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的大孔树脂型号为AB-8、D101。
6.根据权利要求1-5任一项方法制备得到的葛根提取物，其特征在于，葛根提取物中总异黄酮含量大于90％。
7.权利要求6所述的葛根提取物在制备白酒及无色饮料中的应用，其特征在于，每1000ml白酒或饮料基液中，加入0.5-1.2g葛根提取物。
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