CN114949063A - 大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法及应用 - Google Patents

大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法及应用，将枳实加水煎煮至少两次，每次1‑2小时，合并煎液，过滤，滤液通过常压蒸发，浓缩成相对密度为1.20‑1.40的浓缩液，冷却后，加等体积的乙醇，搅拌，静置，过滤，得滤渣和滤液，得枳实样液，减压浓缩枳实样液浓缩成稠膏A，回收乙醇；大黄、厚朴分别用体积百分比为75‑85％的乙醇溶液浸渍24‑36小时，过滤，将大黄、厚朴的滤液合并，并通过减压浓缩成稠膏B，回收乙醇；将稠膏A和稠膏B混合加水稀释后上D101大孔树脂，用乙醇水溶液洗脱，得到乙醇洗脱液，将50％乙醇洗脱液收集并浓缩后得到样品A。样品A与苯唑西林钠联合使用，对耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)具有协同的抑菌活性。

Description

大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法及应用
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及一种承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法及应用。
背景技术
大承气汤为《伤寒论》名方，为泻法的代表方剂，素以疗效卓著、药味精简、配伍严谨著称。泻下作用是本方发挥多种治疗作用的药效学基础。
对本方泻下作用的配伍关系认识:君药大黄含大黄素型蒽醌类成分，通过局部刺激、增强大肠蠕动而导泻；芒硝所含Na2SO4不被肠粘膜吸收而形成高渗溶液，增加肠内容，引起机械性刺激，致排稀便；厚朴含厚朴酚类成分，兴奋肠道平滑肌；枳实含黄酮苷及黄酮苷元等成分，使胃肠运动收缩节律增加而有力，四药合用能产生强大的荡涤肠道、峻下热结的作用。
自1961年发现了第一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)后，20世纪80年代至今MRSA已成为全球医院感染的重要病原菌。MRSA对包括青霉素、头孢菌素和头霉素类等β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类、喹诺酮类甚至糖肽类抗菌药物都存在不同程度的耐药。因此，寻找开发新的抗菌药物迫在眉睫。
大承气汤中不同中药中的化学成分分布及其抑菌活性成分，枳实中主要成分为辛弗林等生物碱类成分和橙皮苷等黄酮类成分，大黄中的主要成分为大黄酸、大黄素等蒽醌类成分，厚朴中主要含有厚朴酚等木脂素类成分，上述化学成分也具有不同程度的抑菌活性。
发明内容
针对现有技术问题，本发明的第一目的在于提供了一种大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，第二目的在于提供其应用。
为实现以上第一目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，其特征在于，按照如下步骤制备：
1)将枳实加水煎煮至少两次，每次1-2小时，合并煎液，过滤，滤液通过常压蒸发，浓缩成相对密度为1.20-1.40的浓缩液，冷却后，加等体积的乙醇，搅拌，静置，过滤，得滤渣和滤液，得枳实样液，减压浓缩枳实样液浓缩成稠膏A，回收乙醇；
2)大黄、厚朴分别用体积百分比为75-85％的乙醇溶液浸渍24-36小时，过滤，将大黄、厚朴的滤液合并，并通过减压浓缩成稠膏B，回收乙醇；
3)将稠膏A和稠膏B混合加水稀释后上D101大孔树脂，用乙醇水溶液洗脱，得到乙醇洗脱液，浓缩后得到样品，大黄、厚朴枳实按如下重量份数添加大黄200-400份、厚朴400-800份、枳实200-400份。
上述方案中，步骤1)中，枳实加水煎煮三次。
上述方案中，步骤1)中，滤渣用体积百分比50％的乙醇洗涤2-3次，合并洗涤液与滤液成为枳实样液。
上述方案中，步骤3)中乙醇水溶液的体积百分比分别为10％，30％，50％，70％。
上述方案中，步骤3)中乙醇水溶液的体积百分比为50％。
本发明的第二目的是这样实现的：所述制备得到的样品与苯唑西林作为协同抑制耐甲氧西林金葡球菌药物的应用。
本发明对枳实采用水提醇沉，充分将其含有的生物碱和黄酮类成分与其他杂质分离。大黄、厚朴使用75-85％乙醇回流提取，可以更高效的获得大黄中脂溶性较强的大黄素、大黄酸等成分和厚朴中脂溶性较强的厚朴酚等木脂素类成分，此法比原有大承气汤仅适用水提取获取的有效部位的含量更高。
混合3种中药材的浸膏，水稀释后上D101大孔树脂得到的50％乙醇洗脱液，即样品A与苯唑西林钠联合使用，对耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)具有协同的抑菌活性。
具体实施方式
下面将结合实施例，对本发明做进一步的描述。
实施例1
大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，按照如下步骤制备：
1)将枳实加水煎煮至少两次，一般我们选择煎煮3次，能更充分的提取有效部位，每次1-2小时，合并煎液，过滤，滤液通过常压蒸发，浓缩成相对密度为1.20-1.40的浓缩液，冷却后，加等体积的乙醇，搅拌，静置，过滤，得滤渣和滤液，滤渣用体积百分比50％的乙醇洗涤2-3次，合并洗涤液与滤液成为枳实样液，减压浓缩枳实样液浓缩成稠膏A，回收乙醇。
2)大黄、厚朴分别用体积百分比为75-85％的乙醇溶液浸渍24-36小时，过滤，将大黄、厚朴的滤液合并，并通过减压浓缩成稠膏B，回收乙醇。
3)将稠膏A和稠膏B混合加水稀释后上D101大孔树脂，分别用体积百分比10％、30％、50％和70％乙醇水溶液洗脱，得到不同的乙醇洗脱液，浓缩10％乙醇水洗脱液得到样品B，浓缩30％乙醇水洗脱液得到样品C，浓缩50％乙醇水洗脱液得到样品A，浓缩70％乙醇水洗脱液得到样品D，大黄、厚朴枳实按如下重量份数添加大黄400份、厚朴800份、枳实400份。
对样品A-D、稠膏B和稠膏A分别与苯唑西林联合做抑制耐甲氧西林金葡球菌的试验。
样品A(50％乙醇洗脱液)的抑菌活性
Figure BDA0003745838080000031
注：①本次所用金葡球菌为耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)。
②联合抑菌指数计算：FIC＝2.56/10.24+64/256＝0.5，FIC指数≤0.5提示样品A与苯唑西林为协同作用。
稠膏A的抑菌活性
Figure BDA0003745838080000041
注：①本次所用金葡球菌为耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)。
②联合抑菌指数计算：FIC＝5.12/10.24+64/256＝0.75<1，提示稠膏A与苯唑西林为为相加作用。
稠膏B的抑菌活性
Figure BDA0003745838080000042
注：①本次所用金葡球菌为耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)。
②联合抑菌指数计算：FIC＝5.12/10.24+32/256＝0.625<1，提示稠膏B与苯唑西林为为相加作用。
从上面表可以看出，虽然厚朴酚抑制耐甲氧西林金葡球菌有所报道，但是稠膏B与苯唑西林联合用药对耐甲氧西林金葡球菌的抑制效果没有本发明的过大孔树脂得到的样品A的抑菌效果好。稠膏A和稠膏B混合后过大孔树脂，与苯唑西林联合起到了协同抑菌效果。
样品B(10％乙醇洗脱液)的抑菌活性
Figure BDA0003745838080000043
注：①本次所用金葡球菌为耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)。
②联合抑菌指数计算：FIC＝5.12/10.24+32/256＝0.625<1，提示稠膏B与苯唑西林为为相加作用。
样品C(30％乙醇洗脱液)的抑菌活性
Figure BDA0003745838080000044
注：①本次所用金葡球菌为耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)。
②联合抑菌指数计算：FIC＝5.12/10.24+64/256＝0.75，FIC指数<1，提示样品C与苯唑西林为为相加作用。
样品D(70％乙醇洗脱液)的抑菌活性
Figure BDA0003745838080000045
注：①本次所用金葡球菌为耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)。
②联合抑菌指数计算：FIC＝5.12/10.24+128/256＝1，FIC指数＝1，提示样品D与苯唑西林无相加作用也无协同作用。
通过实验发现，过大孔树脂时，采用50％的乙醇洗脱，抑菌效果最好。
实施例2
大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，按照如下步骤制备：
1)将枳实加水煎煮至少两次，一般我们选择煎煮3次，能更充分的提取有效部位，每次1-2小时，合并煎液，过滤，滤液通过常压蒸发，浓缩成相对密度为1.20-1.40的浓缩液，冷却后，加等体积的乙醇，搅拌，静置，过滤，得滤渣和滤液，滤渣用体积百分比50％的乙醇洗涤2-3次，合并洗涤液与滤液成为枳实样液，减压浓缩枳实样液浓缩成稠膏A’，回收乙醇。
2)大黄、厚朴分别用体积百分比为75-85％的乙醇溶液浸渍24-36小时，过滤，将大黄、厚朴的滤液合并，并通过减压浓缩成稠膏B’，回收乙醇。
3)将稠膏A和稠膏B混合加水稀释后上D101大孔树脂，分别用体积百分比50％的乙醇水溶液洗脱，得到乙醇洗脱液，浓缩50％乙醇水洗脱液后得到样品A’，大黄、厚朴枳实按如下重量份数添加大黄200份、厚朴400份、枳实200份。样品A’与样品A的抑菌效果相当。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，其特征在于，按照如下步骤制备：
1)将枳实加水煎煮至少两次，每次1-2小时，合并煎液，过滤，滤液通过常压蒸发，浓缩成相对密度为1.20-1.40的浓缩液，冷却后，加等体积的乙醇，搅拌，静置，过滤，得滤渣和滤液，得枳实样液，减压浓缩枳实样液浓缩成稠膏A，回收乙醇；
2)大黄、厚朴分别用体积百分比为75-85％的乙醇溶液浸渍24-36小时，过滤，将大黄、厚朴的滤液合并，并通过减压浓缩成稠膏B，回收乙醇；
3)将稠膏A和稠膏B混合加水稀释后上D101大孔树脂，用乙醇水溶液洗脱，得到乙醇洗脱液，浓缩后得到样品，大黄、厚朴枳实按如下重量份数添加大黄200-400份、厚朴400-800份、枳实200-400份。
2.根据权利要求1所述大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤1)中，枳实加水煎煮三次。
3.根据权利要求1所述大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤1)中，滤渣用体积百分比50％的乙醇洗涤2-3次，合并洗涤液与滤液成为枳实样液。
4.根据权利要求1-3任一项所述大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤3)中乙醇水溶液的体积百分比为10％-70％。
5.根据权利要求4所述大承气汤具有协同抑菌作用的有效部位的制备方法，其特征在于，步骤3)中乙醇水溶液的体积百分比为50％。
6.权利要求5所述制备得到的样品与苯唑西林作为协同抑制耐甲氧西林金葡球菌药物的应用。
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