CN104069204B - 一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种应用黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂的制备方法，其特点在于包括下述工艺步骤：1.取黄芩300g，白芍200g，炙甘草和大枣分别加6-8倍50%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用提取液回收至适量浓度，加8-10倍量95%乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以95%乙醇去杂，备用。5.合并以上活性部位，按提取物、糊精、微晶纤维素1:1:0.05制备颗粒，所得颗粒剂经实验证明具有更好的治疗溃疡性结肠炎的作用。

Description

一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药制药新工艺，具体是黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂的制备方法。

背景技术

溃疡性结肠炎是一种局限于结肠黏膜及黏膜下层的炎症过程，多位于乙状结肠和直肠，甚至整个结肠。本病病程漫长，常反复发作，无特效药物，故被世界卫生组织列为现代难治病之一。

总体而言，西医把溃疡性结肠炎的病因病机归结于感染、免疫功能紊乱和遗传缺陷等。中医学虽无溃疡性结肠炎病名，但多数患者发病或急性发作时伴有情志异常、感受外邪等诱因，结合溃疡性结肠炎活动期常见腹痛、腹泻、黏液脓血便等症，认为病位主要在大肠，涉及脾、肝、胃等脏腑。

西医主要用氨基水杨酸类药物、激素类药物、免疫抑制剂等为主的二联或三联疗法对症治疗，主要有氨基水杨酸类药物如5–氨基水杨酸制剂，如奥沙拉秦钠胶囊，用于轻、中度患者；糖皮质激素及促肾上腺皮质激素，此类药物能抑制免疫反应，减轻炎症，用氨基水杨酸类药物于治疗无效、急性发作期或暴发型病例；免疫抑制剂，可试用于氨基水杨酸类药物及皮质激素治疗无效者。西药治疗短期可取得较满意的短期疗效。但停药后易复发.长期用药不良反应多。

黄芩汤出自《伤寒论》，由黄芩、芍药、甘草、大枣4味中药组成，是“医圣”张仲景传世的“经方”之一，已有1800多年的历史，主治太阳与少阳合病。但作为传统古方，存在着煎煮麻烦，药材量大，服用不方便等缺点，能否寻找到其有效组分，代替原药材，并且达到原处方的药效，一直是中医和中药界难以解决的难题。

本发明依据中医药原理，对黄芩汤的有效部位物质基础、作用机理及指纹图谱谱效相关性研究基础上，突出中药整体调节优势，制备质量稳定可控的治疗溃疡性结肠炎颗粒剂，可满足患者长期服用的需求。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，以黄芩、白芍、炙甘草和大枣为原料，分别提取并富集主要活性成分的部位并制备颗粒剂，该制备方法制备得到的黄芩汤颗粒，药效活性高、活性成分含量增多、服用量减少。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂，其特征在于由黄芩提取物1g，白芍提取物0.35g，炙甘草提取物0.93g，大枣提取物2.7g，加入糊精、微晶纤维素等药学可以接受的辅料构成；

其中所述黄芩提取物，按如下方法制得：取黄芩300g，加6-8倍70-80％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用；

白芍提取物，按如下方法制得：取白芍200g，加6-8倍50-60％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用；

炙甘草提取物，按如下方法制得：取炙甘草200g，加6-8倍70-80乙醇％，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用；

大枣提取物，按如下方法制得：取大枣300g，加8-10倍95％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加8-10倍量水，煎煮提取3次，每次1小时。提取液回收至适量浓度，加8-10倍量95％乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以90％-95％乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用。

所述的药学可以接受辅料为糊精、微晶纤维素等。

一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂制的备方法，其特征在于包括下述工艺步骤：

①取黄芩、白芍、炙甘草、大枣分别进行粉碎，过40-80目筛，备用；

②取黄芩300g，加6-8倍70-80％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用；

③取白芍200g，加6-8倍50-60％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用；

④取炙甘草200g，加6-8倍70-80乙醇％，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用；

⑤大枣提取物，按如下方法制得：取大枣300g，加6-8倍95％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加8-10倍量水，煎煮提取3次，每次1小时。提取液回收至适量浓度，加8-10倍量95％乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以90-95％乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用。

⑥合并以上活性部位，按提取物、糊精、微晶纤维素1:1:0.05制备颗粒，既得。

作为优选方案，以上所述的用黄芩汤制备颗粒剂的方法，步骤(2)所述的大孔树脂为D101型，提取溶剂为70％乙醇；步骤(3)所述的白芍提取液为50％乙醇；步骤(4)所述的原料为炙甘草，经AB-8型树脂纯化，步骤(4)所述的大枣为黄河流域(山东、河南等地)所产大枣。

有益效果：本发明提供的用黄芩汤制备的抗溃疡性结肠炎颗粒剂具有如下优点：

1、本发明采用新型组方，即将提取物按一定配方形成新的处方，该处方比传统制剂具有更好疗效，同时服用量少，携带方便，适合生产和运输。

2、本发明提供的以黄芩汤制备的抗溃疡性结肠炎颗粒剂工艺设计合理，可操作性强，既提高了提取物中主要有效成分的含量，也最大程度的保留了原处方中有效成分的种类，更能体现复方的效果。根据黄芩、白芍、炙甘草和大枣中各类化学成分的特征和理化性质，通过大量实验优选出制备工艺，制备得到的颗粒，活性高，服用量减少。

附图说明

图1.黄芩汤提取物HPLC-MS总离子流图，其中A为混标，B为合并后的提取物，C为黄芩提取物，D为白芍提取物，E为炙甘草提取物，F为大枣提取物。混标中化合物分别为1.氧化芍药苷2.羟基芍药苷3.芍药苷4.异类叶升麻苷5.甘草苷6.类叶升麻苷7.黄芩苷8.甘草素9.黄芩素10.甘草酸11.千层纸素A12.白杨素13.汉黄芩素14.甘草黄酮A15.甘草次酸16.乌苏酸17.白桦脂酸18.齐墩果酸；

图2为Realtime-PCR预实验反应条件；

图3为Realtime-PCR正式实验反应条件；

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

黄芩汤为古方，本实施例参照古方处方煎煮而成。

实施例1

一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂的制备方法，其包括下述工艺步骤：

①取黄芩、白芍、炙甘草、大枣分别进行粉碎，过60目筛，备用；

②取黄芩300g，加7倍70％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含黄芩苷含量为17.16％；

③取白芍200g，加7倍50％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含芍药苷含量为10.83％；

④取炙甘草200g，加7倍70％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含甘草酸铵盐含量为10.12％；

⑤取大枣300g，加7倍95％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加8倍量水，煎煮提取3次，每次1小时。提取液回收至适量浓度，加9倍量95％乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以95％乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用，所得浸膏中含多糖为44.10％；

⑥上述黄芩、白芍、炙甘草、大枣浸膏重量比为2.8:1：2.9:7.7，混合之后按混合物、糊精、微晶纤维素1:1:0.05制备颗粒，既得。

实施例2

一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂的制备方法，其包括下述工艺步骤：

①取黄芩、白芍、炙甘草、大枣分别进行粉碎，过60目筛，备用；

②取黄芩300g，加6倍80％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含黄芩苷含量为16.35％；

③取白芍200g，加6倍60％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含芍药苷含量为11.42％；

④取炙甘草200g，加6倍80％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含甘草酸铵盐含量为11.58％；

⑤取大枣300g，加6倍95％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加8倍量水，煎煮提取3次，每次1小时。提取液回收至适量浓度，加8倍量95％乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以90％乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用，所得浸膏中含多糖为39.12％；

⑥上述黄芩、白芍、炙甘草、大枣浸膏重量比为2.7:1:3.1:7.4，混合之后按混合物、糊精、微晶纤维素1:1:0.05制备颗粒，既得。

实施例3

一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂的制备方法，其包括下述工艺步骤：

①取黄芩、白芍、炙甘草、大枣分别进行粉碎，过60目筛，备用；

②取黄芩300g，加8倍70％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含黄芩苷含量为19.87％；

③取白芍200g，加8倍50％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含芍药苷含量为12.04％；

④取炙甘草200g，加8倍70％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至适量，备用，所得浸膏含甘草酸铵盐含量为12.33％；

⑤取大枣300g，加8倍95％乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加10倍量水，煎煮提取3次，每次1小时。提取液回收至适量浓度，加10倍量95％乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以95％乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用，所得浸膏中含多糖为49.98％；

⑥上述黄芩、白芍、炙甘草、大枣浸膏重量比为3.1:1:2.7:7.8，混合之后与糊精、微晶纤维素按1:1:0.05制备颗粒，既得。

实施例5液质分析实施例3

结果：本发明所制备的颗粒剂中各主要成分含量高。黄芩中黄芩苷、白芍中芍药苷、甘草中甘草苷和甘草酸含量经过大孔树脂的纯化，比原药材明显提高，见表1。

表1.黄芩汤中四味药物浸膏中主要活性成分纯化前后的含量

	黄芩苷	芍药苷	甘草酸	大枣多糖
					原药材	11.8％	1.88％	3.87％	3.65％
富集后浸膏	19.87％	12.04％	12.33％	49.98％

纯化后的浸膏合并后液质图谱见图1。液质分析条件如下，结果见图1.

安捷伦1290液相色谱系统，质谱为安捷伦6460三重四级杆质谱系统，数据采集和处理应用安捷伦MassHunter工作站软件(VersionB.03.00)完成。

液相色谱条件KromasilC18(250mm×6mm,5μm)色谱柱，柱温30℃，流动相A为0.05％甲酸，B为乙腈，梯度洗脱(0～10min,85％→80％A；10–35min,80→75％A；35–55min,75→70％A；55–65min,70→60％A；65–90min,60→35％A；90–92.5min,35→5％A；92.5–102.5min,5％A；102.5–110min,5→85％A；110–115min,85％A)；体积流量0.6mL/min，进样3μL，检测波长254nm。

质谱条件电喷雾离子源，负离子模式扫描；干燥气温度350℃，干燥气流量10L/min，离子源温度320℃，雾化气电压40psi(1psi＝6.895×103Pa)，毛细管电压3500V。

实施例5考察实施例1-3药效考察

雄性Balb/c90只，随机分成9组，每组10只。戊巴比妥钠50mg/Kg麻醉后，三硝基本磺酸(TNBS)100mg/Kg通过PE管注入小鼠结肠4cm处造模。本发明采用的分别提取纯化法获得实施例1-3,剂量为1g/kg，黄芩汤水煎液分别分成高、中、低三个剂量(具体剂量为4g/kg，2g/kg,1g/kg)给药，结果表明本发明实施例1-3药效最好，即由TNBS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的实验表明，实施例1-3在小鼠的总体表现，造模小鼠的结肠长度、小鼠体重、MPO活力等方面的测试较黄芩汤水煎液相比具有明显优势。见表2。小鼠造模后结肠长度明显缩短，经药物治疗后结肠长度有所增长。与阴性对照组相比较，本实施例的三个组对比TNBS模型组增长明显，而且比水煎液高剂量效果还好。造模后小鼠出现体重下降、厌食、懒动等状况，与模型组相比较，本实施例1-3中制备的药物使小鼠体重增加，一般情况明显好转，而且较水煎液组效果好。造模后小鼠MPO值明显增加，说明炎症明显，经本实施例所制备药物治疗后MPO值下降明显，且较水煎液各种效果好。综合各项指标说明经过本实施例制备的黄芩汤药物具有较好的治疗溃疡性结肠炎的作用。

数据表示为means±SD.#P<0.05,##P<0.01vs.shamcontrol；*P<0.05,**P<0.01vs.

TNBScontrol.

表2.不同提取方法所得药物在TNBS诱导的balb/c小鼠溃疡性结肠炎活性作用结果：

此外，黄芩汤复方直接提取后以大孔树脂纯化则多糖部分全部损失，而本发明方法提取物中含有大枣多糖，经换算因子换算后达49％，充分保留了原方的一个重要效应成分，对提高活性具有重要作用。不同提取方法中黄芩苷、白芍苷、甘草酸铵和大枣多糖的含量和比值见表3，通过比较可见，黄芩汤中各药物分别提取纯化得到的浸膏中主要成分的含量比值明显有别于其他方法。

表3中总体纯化指的是参照实施例2原料投料，黄芩300g,白芍200g，炙甘草200g,大枣300g，混合后粉碎后经70％乙醇提取三次，蒸馏去除乙醇后以D101大孔树脂纯化，以80％乙醇洗脱所获得的提取物。

表3：不同提取方法所得浸膏中主要成分含量和各成分含量比值

进一步药效学研究证明，实施例1-3在TNBS造模小鼠的TNF-α,IL-1β和IL-6表达的抑制方面有着重要的作用，步骤如下，结果见表4。

PCR实验步骤：

1.RNA的提取：取适量样品迅速与冰冷的组织匀浆器中，加入1ml冰冷的TRIzol，冰上研磨至无颗粒状澄清液，然后转移至1.5ml离心管中，在室温下放置5min，使得核酸蛋白复合物完全分离；然后加入氯仿(每使用1mlTRIzol加0.2ml氯仿)，盖紧离心管管盖，用手上下振荡15s，溶液呈乳白状，无分层现象，室温静置3min；12,000g，4℃离心15min；取出离心管，样品分为三层：无色的上清水相、中间的白色层及粉红色的下层有机相。小心吸取无色上清水相移至另一离心管，水相的体积约为所用Trizol试剂的60％；向得到的上清水相加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，室温静置10min；12,000g，4℃离心10min；小心去除上清，缓慢沿管壁加入1ml75％的乙醇(用DEPC处理过的水配制)，轻轻混匀。每使用1mlTrizol试剂至少加1ml75％的乙醇；12000g，4℃离心10min；小心吸尽上清；室温干燥沉淀5min左右，适量而定(不可晾得太干，否则RNA将会很难溶解)，加入30～50μL的无RNase水溶解RNA沉淀，待完全溶解后于-70℃保存。

2.RNA浓度和纯度的测定：取RNA样品用1×TEBuffer稀释样品100倍或适当的倍数，测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。按以下计算RNA的浓度＝OD₂₆₀×稀释倍数×0.04μg/μL，比色皿光径1cm，OD_260/280在1.8～2.1视为抽提的RNA的纯度很高。

3.cDNA第一链合成(20μL体系)：使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；

取灭过菌且无核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入如下组份：RNA(2μg)nμL,OligodT₍₁₈₎(50μM)2μL,无核酸酶的双蒸水至总体积12.5μL。65℃保温5min，然后冰浴5min；往步骤3中的0.2mlPCR管依次加入如下组份：RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL，5×ReactionBuffer4.0μL，dNTPs(10mM)2.0uL，M-MuLV1.0μL，轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；先在42℃保温1h，然后70℃保温10min,然后置于冰上5min；上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。

4.Realtime-PCR预实验：为了保证样品的可靠性，对反转录好的cDNA进行预实验。实验步骤：为减少干扰，每个cDNA样本都稀释10倍(5ulcDNA+45ulH₂O)引物MIX(引物的F和R在同一管中)，浓度各为10μM。上样：一个样本基因做3个复孔。反应体系：2XRealltimePCRMasterMix(SYBRGreen)10ul模板(cDNA稀释10倍)1ul，引物MIX(F/R各为10μM)2ulDEPC水7ul，Total20ul。

PCR程序如图2

5.Realtime-PCR正式实验：

a)上样：每个样本基因做3个复孔。反应体系：2XRealltimePCRMasterMix(SYBRGreen)10ul，模板(cDNA稀释10倍)1ul，引物MIX(F/R各为10μM)2ul，DEPC水7ul，Total20ul。PCR程序：如图3。

经过TNBS造模后，小鼠炎症明显，各炎症因子表达明显增强。经药物治疗后，炎症因子TNF-α，IL-1β，IL-6表达明显下降，而且本实施例所制备药物效果较水煎液要好，说明具有较好的治疗溃疡性结肠炎的作用。

数据表示为means±S.E.M#P<0.05,##P<0.01vs.shamcontrol；*P<0.05,**P<0.01vs.

TNBScontrol.

表4.分别提取的浸膏对TNBS造模小鼠的TNF-α,IL-1β和IL-6抑制作用

并且本发明所制备的颗粒与原方相比，用量更少，便于携带与服用，药物中主要成分含量具有特殊比值，对治疗溃疡性结肠炎具有更好的作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂，其特征在于由黄芩提取物，白芍提取物，炙甘草提取物，大枣提取物，按重量比2.7-3.1：1-1：3.1-2.7：7.4-7.8混合，再加入糊精、微晶纤维素构成；

所述的黄芩提取物，白芍提取物，炙甘草提取物，大枣提取物由如下方法制备而得：

①取黄芩、白芍、炙甘草、大枣分别进行粉碎，过40-80目筛，备用；

②取黄芩300g，加6-8倍70-80%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，备用；

③取白芍200g，加6-8倍50-60%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，备用；

④取炙甘草200g，加6-8倍70-80%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，备用；

⑤取大枣300g，加8-10倍95%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加8-10倍量水，煎煮提取3次，每次1小时；提取液回收，加8-10倍量95%乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以90%-95%乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用。

2.根据权利要求1所述的一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂，其特征在于，由黄芩提取物，白芍提取物，炙甘草提取物，大枣提取物，按重量比2.7-3.1：1-1：3.1-2.7：7.4-7.8混合，按混合物、糊精、微晶纤维素重量比1:1:0.05制备颗粒，即得。

3.如权利要求2所述的一种黄芩汤治疗溃疡性结肠炎颗粒剂的制备方法，其特征在于按如下步骤实现：

由黄芩提取物，白芍提取物，炙甘草提取物，大枣提取物，按重量比2.7-3.1：1-1：3.1-2.7：7.4-7.8混合，按混合物、糊精、微晶纤维素重量比1:1:0.05制备颗粒，即得；其中上述的提取物按如下制备：

①取黄芩、白芍、炙甘草、大枣分别进行粉碎，过40-80目筛，备用；

②取黄芩300g，加6-8倍70-80%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上D101型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，备用；

③取白芍200g，加6-8倍50-60%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，备用；

④取炙甘草200g，加6-8倍70-80%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇上AB-8型大孔树脂，以80%乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，备用；

⑤取大枣300g，加8-10倍95%乙醇，回流提取2次，每次1小时，提取液回收乙醇至适量，得大枣醇溶性成分；剩余残渣，加8-10倍量水，煎煮提取3次，每次1小时；提取液回收，加8-10倍量95%乙醇沉淀过夜，离心、滤去上清液，沉淀部分以90%-95%乙醇去杂，得大枣多糖，合并大枣醇溶性部分和大枣多糖，备用。