CN114934102B - 基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒 - Google Patents

基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN114934102B
CN114934102B CN202210227613.3A CN202210227613A CN114934102B CN 114934102 B CN114934102 B CN 114934102B CN 202210227613 A CN202210227613 A CN 202210227613A CN 114934102 B CN114934102 B CN 114934102B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
kit
reverse primer
artificial sequence
quenching probe
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210227613.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114934102A (zh
Inventor
莫茜
陶悦
林协
安亦泰
戴珩
岳敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Flashdx Shenzhen Inc
Original Assignee
Flashdx Shenzhen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Flashdx Shenzhen Inc filed Critical Flashdx Shenzhen Inc
Priority to CN202210227613.3A priority Critical patent/CN114934102B/zh
Publication of CN114934102A publication Critical patent/CN114934102A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114934102B publication Critical patent/CN114934102B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开一种基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒，试剂盒包括甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)的正向引物、反向引物以及淬灭探针。本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒保持高特异性的同时显著提高检测的灵敏度，同时配合全封闭的样本处理到扩增一体化的全自动检测卡盒，适用于对呼吸道病原体的快速检测。

Description

基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组 及试剂盒
技术领域
本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒。
背景技术
呼吸道感染是世界上最常见的疾病之一。发病率在各国居民的总体发病率中占有重要地位。每年约有10％的居民患有呼吸道感染。呼吸道感染主要由各种呼吸道病毒和一些细菌、支原体和衣原体引起。常见的病毒有甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(hAdV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)。越来越多的新的致病性呼吸道病毒被发现，这使得临床相关疾病的诊断和治疗变得非常困难。呼吸道病毒种类繁多，有效识别呼吸道病原体，明确呼吸道感染病原体的种类。
国内外对呼吸道病原体的检测方法很多，包括传统的分离培养方法、免疫学检测技术和新兴的分子生物学技术。近年来，基于核酸的分子检测方法以其快速、灵敏、特异和省时的特点，成为检测呼吸道病原体的革命性技术。荧光定量qPCR反应最多能同时进行检测4～5重多重检测，但是该检测需要同时读取多个不同的荧光剂，其对应的光学检测设备设计服装，造价昂贵。当需要检测的病原体多于4～5重时就显得无能为力。
发明内容
本发明针对现有技术中多重qPCR检测需要读取多个不同荧光剂信号的技术问题，目的在于提供一种新的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒。
本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒可以同时检测9项呼吸道病原体，解决现有呼吸道病毒核酸检测难以同时检测多种病毒，且难以对检测过程进行有效把控的问题。本发明针对此类多重PCR来检测甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)做了引物的体系优化，并设计了全新的引物和淬灭探针池，可以达到在临床上灵敏、特异性地满足对这9项呼吸道病原体的早期检测。
本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组，包括如下引物对：
FluA-F正向引物、FluA-R反向引物，FluB-F正向引物、FluB-R反向引物，RSVA-F正向引物、RSVA-R反向引物，RSVB-F正向引物、RSVB-R反向引物，hPIV1-F正向引物、hPIV1-R反向引物，hPIV2-F正向引物、hPIV2-R 反向引物，hPIV3-F正向引物、hPIV3-R反向引物，hPIV4-F正向引物、hPIV4-R 反向引物，MP-F正向引物、MP-R反向引物，SARS-CoV-2-ORF正向引物、 SARS-CoV-2-ORF反向引物，SARS-CoV-2-N正向引物、SARS-CoV-2-N反向引物，SARS-CoV-2-E正向引物、SARS-CoV-2-E反向引物，HADV-F正向引物、HADV-R1反向引物、HADV-R2反向引物、HADV-R3反向引物、 HADV-R4反向引物，HRV/HEV-F正向引物、HRV/HEV-R反向引物，和， BP-F正向引物、BP-R反向引物。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组还包括如下淬灭探针：FluA-P淬灭探针、FluB-P淬灭探针、RSVA-P淬灭探针、RSVB-P 淬灭探针、hPIV1-P淬灭探针、hPIV2-P淬灭探针、hPIV3-P淬灭探针、hPIV4-P 淬灭探针、MP-P淬灭探针、SARS-CoV-2-ORF淬灭探针、SARS-CoV-2-N淬灭探针、SARS-CoV-2-E淬灭探针、HADV-P淬灭探针、HRV/HEV-P淬灭探针和BP-P淬灭探针。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组还包括如下引物组和淬灭探针：RP-F正向引物、RP-R反向引物和RP-P淬灭探针。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组具体包括如下引物对：
如SEQ ID NO:1所示的FluA-F正向引物，如SEQ ID NO:2所示的FluA-R 反向引物；
如SEQ ID NO:4所示的FluB-F正向引物，如SEQ ID NO:5所示的FluB-R 反向引物；
如SEQ ID NO:7所示的RSVA-F正向引物，如SEQ ID NO:8所示的 RSVA-R反向引物；
如SEQ ID NO:10所示的RSVB-F正向引物，如SEQ ID NO:11所示的 RSVB-R反向引物；
如SEQ ID NO:13所示的hPIV1-F正向引物，如SEQ ID NO:14所示的 hPIV1-R反向引物；
如SEQ ID NO:16所示的hPIV2-F正向引物，如SEQ ID NO:17所示的 hPIV2-R反向引物；
如SEQ ID NO:19所示的hPIV3-F正向引物，如SEQ ID NO:20所示的 hPIV3-R反向引物；
如SEQ ID NO:22所示的hPIV4-F正向引物，如SEQ ID NO:23所示的 hPIV4-R反向引物；
如SEQ ID NO:25所示的MP-F正向引物，如SEQ ID NO:26所示的MP-R 反向引物；
如SEQ ID NO:28所示的SARS-CoV-2-ORF-F正向引物，如SEQ ID NO:29所示的SARS-CoV-2-ORF-R反向引物；
如SEQ ID NO:31所示的SARS-CoV-2-N-F正向引物，如SEQ ID NO:32 所示的SARS-CoV-2-N-R反向引物；
如SEQ ID NO:34所示的SARS-CoV-2-E-F正向引物，如SEQ ID NO:35 所示的SARS-CoV-2-E-R反向引物；
如SEQ ID NO:37所示的HADV-F正向引物，如SEQ ID NO:38所示的 HADV-R1反向引物，SEQ ID NO:39所示的HADV-R2反向引物，SEQ ID NO:40所示的HADV-R3反向引物，SEQ IDNO:41所示的HADV-R4反向引物；
如SEQ ID NO:43所示的HRV/HEV-F正向引物，如SEQ ID NO:44所示的HRV/HEV-R1反向引物；如SEQ ID NO:45所示的HRV/HEV-R2反向引物；如SEQ ID NO:46所示的HRV/HEV-R3反向引物；如SEQ ID NO:47所示的 HRV/HEV-R4反向引物；
如SEQ ID NO:49所示的BP-F正向引物，如SEQ ID NO:50所示的BP-R 反向引物。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组还包括：
如SEQ ID NO:52所示的RP-F正向引物，如SEQ ID NO:53所示的RP-R 反向引物。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组还包括如下淬灭探针：
如SEQ ID NO:3所示的FluA-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:6所示的FluB-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:9所示的RSVA-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:12所示的RSVB-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:15所示的hPIV1-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:18所示的hPIV2-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:21所示的hPIV3-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:24所示的hPIV4-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:27所示的MP-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:30所示的SARS-CoV-2-ORF-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:33所示的SARS-CoV-2-N-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:36所示的SARS-CoV-2-E-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:42所示的HADV-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:48所示的HRV/HEV-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:51所示的BP-P淬灭探针。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组还包括如下淬灭探针：如SEQ ID NO:54所示的RP-P淬灭探针。
本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：本发明所述的引物组以及反应预混液。
较佳地是，本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒中，所述反应预混液包括酶混合液、核苷酸混合液、二价镁离子和缓存液。
所述酶混合液包括：0.01～1IU/μL优选0.01～0.1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为10～500μmol/L优选100～200μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为1～4mmol/L优选2.5～3.5mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各淬灭探针的浓度分别为 10～500nmol/L优选100～200nmol/L。
所述试剂盒还包括内参，所述内参为MS2噬菌体。
较佳地是，所述质粒假病毒标准品的DNA序列分别如SEQ ID NO:55、 SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70所示。
所述试剂盒还包括微阵列qPCR检测卡盒，所述微阵列qPCR检测卡盒中的每个子检测区分别固定有与对应的淬灭探针杂交的荧光核酸。
本发明的具体引物和淬灭探针如表1所示
表1各引物和淬灭探针
质粒假病毒DNA标准品的序列如表2所示:
本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒于室温避光保存。
本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒可以同时特异灵敏地检测9项呼吸道病原体。多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒包括9项呼吸道病原体的扩增引物和淬灭探针组合。其中，9项呼吸道病原体扩增反应中含有多条不同病原体靶标的淬灭探针、引物、酶混合液、核苷酸混合液、二价镁离子、缓存液等，可以在同一反应体系中检测是否存在甲型流感病毒 (FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)，卡盒设置有内参对照，包括人的保守基因RP片段；内参对照能够显示假阴性的发生，避免了因样品中存在的抑制物或操作失误所导致假阴性判读结果的出现，从而提高PCR检测的准确率。本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒保持高特异性的同时显著提高检测的灵敏度，同时配合全封闭的样本处理到扩增一体化的全自动检测卡盒，适用于对呼吸道病原体的快速检测。
附图说明
图1为FluA检测结果图；
图2为FluB检测结果图；
图3为RSV检测结果图；
图4为hPIV检测结果图；
图5为MP检测结果图；
图6为SARS-CoV-2检测结果图；
图7为hAdV检测结果图；
图8为HRV/HEV检测结果图；
图9为BP检测结果图；
图10为交叉反应检测结果图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实例进一步阐述本发明。
实施例1
多种呼吸道病原体核酸检测用试剂盒包括：从SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:54所示的各引物和各淬灭探针，分别200nmol/L，耐热DNA聚合酶的浓度为0.05IU/μL、逆转录酶125IU/μL、RNA酶抑制剂40U/μL、二价镁离子的浓度为3mmol/L、三磷酸脱氧核糖核苷酸的浓度为200μmol/L。
在专利文献CN2019107011550或其他相关专利所述的多重连接探针微阵列检测专利文献中公开的qPCR检测平台上进行检测，步骤流程如下：
步骤S1，加样：取出于室温下避光保存的上述试剂盒，在样本腔加入待测鼻咽拭子阳性样本(具体如表4所示)各120μL、盖紧管盖；
步骤S2，按FDx-1000或相应仪器操作手册，运行PCR程序，进行扩增和荧光信号检。
表3荧光定量qPCR仪的扩增检测循环参数
步骤S3，根据下述判定标准判断样本检测结果。
若Ct≤38，该样本为阳性；若38＜Ct＜40，灵敏度边缘样本，重新采样检测；若Ct≥40，该样本为阴性。
对甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)和阴性质控品(灭菌后焦碳酸二乙酯处理水)进行检测并分析结果，阴阳性对照品符合要求，因此说明实验有效。FluA、FluB、RSV、hPIV、MP、HADV、HRV/HEV、BP均在相应的靶标上面有检出，含有其它病毒的样本和阴性质控品中均无扩增，说明该检测试剂盒及方法具有较好的特异性(结果如表4所示)。
表4样本检测列表
实施例2灵敏度检测
将自制的13种靶标(包括各种病原体的亚型)的标准品8×108copy/mL 梯度稀释成1.5×105copy/mL、1.5×104copy/mL、1.5×103copy/mL作为模板。阴性样本为采集健康志愿者的鼻咽拭子样本。使用实施例1所述的试剂盒对上述稀释后的模板和阴性样本分别进行扩增，扩增条件同实施列1，根据实施例1中的结果判定标准进行判定，13种靶标检测灵敏度结果如表5所示。从表5可见，当病毒模板为1.5×103copy/mL时，实施例1所述试剂盒仍能利用其作为模板进行扩增，因此，在低浓度模板情况下，本发明所述试剂盒仍然能进行检测，因而具有很高的灵敏度。样本浓度为1.5×104copy/mL的病原体检测结果如图1～9所示。同时使用本发明的试剂盒，引物对之间无交叉反应，具有和普通qPCR一致高的灵敏度。
表5 9种呼吸道病毒核酸用本试剂盒检测灵敏度结果
实施例3特异性检测
选用部分灭活人类感染常见病原体，包括肺炎衣原体、结核分枝杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌(甲乙流国家药品标准物质阳性标准品)，以及FluA假病毒，浓度是1×104copies/μL，进行特异性检测，检测过程如实施列1所示，结果显示除FluA阳性样本为阳性结果外，其它样本结果均为阴性，证明本发明与本实施例中其他病原体核酸无交叉反应(如图10)。
表6特异性反应样本列表
结论：本发明提供的可同时检测多种呼吸道病原体的PCR检测试剂盒，能稳定检测出低拷贝的病毒。试剂盒具有全封闭、全自动的特点，使用范围广，具有广泛的应用前景。
序列表
<110> 深圳闪量科技有限公司
<120> 基于二十重PCR的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒
<130> P220025
<141> 2022-03-08
<160> 70
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
caagaccaat tctgtcacct 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
caaagcgtct acgctgcag 19
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ctcaccgtgc ccagtgagcg aggac 25
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
attcgagcag ctgaaactg 19
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tgtctccctc ttctggtgat 20
<210> 6
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tcttatccca atttggtcaa gagcaccga 29
<210> 7
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cacaatgaac agtttaacat tacc 24
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
cggagctgct tacatctgtt 20
<210> 9
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
atctctgcaa cattgacata ttcaaccc 28
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
cctcacctca agtcagaac 19
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gacactggta taccaacctg 20
<210> 12
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ctgaggagtt ttaccaatcg acatgt 26
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
gatccatgct cctctactac c 21
<210> 14
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
actgggagac attgaggtg 19
<210> 15
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
ccagccgact gagacaaggg atgat 25
<210> 16
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
tctgcagcta tgagtaatca cat 23
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
catctggaat gactcggaat g 21
<210> 18
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
atgcattcac cagaagccag catagataga g 31
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gatgccaaca aagttgctct 20
<210> 20
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
cgtacaattc acgaagatta ctct 24
<210> 21
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ctcctcaatg tcttccacta gataggagca taa 33
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
cctggagtcc catcaaaagt 20
<210> 23
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
gttccagaca aaatgggtct tg 22
<210> 24
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
cgtctcaaaa tttgttgatc aagacaatac aattacac 38
<210> 25
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
agtcaacaaa ccacgtatg 19
<210> 26
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
gtcgaggtcg tataaggc 18
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
gttacgccgg tatgacctcg ccgg 24
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
ccctgtgggt tttacactta a 21
<210> 29
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
acgattgtgc atcagctga 19
<210> 30
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
ccgtctgcgg tatgtggaaa ggttatgg 28
<210> 31
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
ggggaacttc tcctgctaga at 22
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
cagacatttt gctctcaagc tg 22
<210> 33
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
cttgctttgc tgctgcttga cagatt 26
<210> 34
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
acaggtacgt taatagttaa tagcgt 26
<210> 35
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
atattgcagc agtacgcaca ca 22
<210> 36
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ggtattcttg ctagttacac tagccatc 28
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
caacatgacc aaagactggt tc 22
<210> 38
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
gagtacatgc gatccttgta tc 22
<210> 39
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
gaatacatgc gatctttgta tc 22
<210> 40
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
gagtacatgc gatccttgta ac 22
<210> 41
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
ggagtacatg cggtcctt 18
<210> 42
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
ccaactacaa cattggctac cagggctt 28
<210> 43
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
tcctccggcc cctgaat 17
<210> 44
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
caaattgtca ccataagcag cc 22
<210> 45
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
caaattgtca ccataagcag tc 22
<210> 46
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
tatatatatt gtcaccataa gca 23
<210> 47
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
catatatgct gtgaccataa ga 22
<210> 48
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
cggaaccgac tactttgggt gtccgtgttt c 31
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
atatgccgag cacggacaac 20
<210> 50
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
gaatgcagcg gcaagcagg 19
<210> 51
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
gatgcgatgg tatgcatggg gttcgc 26
<210> 52
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
gacttcagca tggcggtgt 19
<210> 53
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
gtccgcgcag agccttcag 19
<210> 54
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
cagatttgga cctgcgagcg ggttctg 27
<210> 55
<211> 500
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
ttgaagatgt atttgctgga aagaataccg atcttgaggc tctcatggag tggctaaaga 60
caagaccaat cctgtcacct ctgactaagg ggattttagg atttgtgttc acgctcaccg 120
tgcccagtga gcgaggactg cagcgtagac gctttgtcca aaatgccctt aatgggaatg 180
gggatccaaa taatatggac agagcagtca aactttatcg aaagcttaag agggagataa 240
cattccatgg agccaaagaa atagcactca gttattctgc tggtgcactt gccagttgta 300
tgggactcat atacaacagg atgggggctg tgaccaccga atcagcattt ggccttatat 360
gtgcaacctg tgaacagatt gccgactccc agcataagtc tcacaggcaa atggtaacaa 420
caaccaatcc attgataaga catgagaaca gaatggttct ggccagcact acagctaagg 480
ctatggagca aatggctgga 500
<210> 56
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
gtaatgtatt gtccttgaga gtgttggtaa acggaacatt cctcaaacat cccaatggat 60
acaagtcctt atcaactctg catagattga atgcatatga ccagagtgga aggcttgttg 120
ctaaacttgt tgctactgat gatcttacag tggaggatga agaagatggc catcggatcc 180
tcaactcact cttcgagcgt cttaatgaag gacattcaaa gccaattcga gcagctgaaa 240
ctgcggtggg agtcttatcc caatttggtc aagagcaccg attatcacca gaagagggag 300
acaattagac tggtcacgga agaactttat cttttaagta aaagaattga tgataacata 360
ttgttccaca aaacagtaat agctaacagc tccataatag ctgacatggt tgtatcatta 420
tcattattag aaacattgta tgaaatgaag gatgtagttg aagtgtacag caggcagtgc 480
ttgtgaattt aaaataaa 498
<210> 57
<211> 500
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
tcttagcata tgtagtacaa ttaccactat atggtgtgat agatacacct tgttggaaat 60
tacacacatc ccctctatgt acaaccaaca caaaagaagg gtcaaacatc tgtttaacaa 120
gaactgacag aggatggtac tgtgacaatg caggatcagt atctttcttc ccacaagctg 180
aaacatgtaa agttcaatcg aatcgagtat tttgtgacac aatgaacagt ttaacattac 240
caagtgaagt aaatctctgc aatgttgaca tattcaatcc caaatatgat tgtaaaatta 300
tgacttcaaa aacagatgta agcagctccg ttatcacatc tctaggagcc attgtgtcat 360
gctatggcaa aactaaatgt acagcatcca ataaaaatcg tggaatcata aagacatttt 420
ctaacgggtg tgattatgta tcaaataaag gggtggacac tgtgtctgta ggtaacacat 480
tatattatgt aaataagcaa 500
<210> 58
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
cacaaatacc cacagcatcc gagccctcca cattaaatcc taattaaaaa acctagtcac 60
atgcttagtt attcaaaaac tacatcttag cagagaaccg tgatctatca agcaagaaca 120
aaattaaacc tggggcaaat aaccatggag ttgctgatcc acaggtcaag tgcaatcttc 180
ctaactcttg ctgttaatgc attgtacctc acctcaagtc agaacataac tgaggagttt 240
taccaatcga catgtagtgc agttagcaga ggttatttta gtgctttaag aacaggttgg 300
tataccagtg tcataacaat agaattaagt aatataaaag aaaccaaatg caatggaact 360
gacactaaag taaaacttat aaaacaagaa ttagataagt ataagaatgc agtaacagaa 420
ttacagctac ttatgcaaaa cacgccagct gccaacaacc gggccagaag agaagcacca 480
<210> 59
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
tctttgaaac acctaagcaa ggacctctat ctggcagcat atctgatctc acagaatcaa 60
ccagttattc aatctgtgga tccggatcct taccaattgg catagccaag tattacggca 120
cagatcaaga attattaaaa gcctgcattg acctcaaaat aactgtacga agaacagtta 180
gatctggaga aatgatagta tacatggtag attcgatcca tgctcctcta ctaccatggt 240
ccagccgact gagacaaggg atgatatata atgccaataa agtagctcta gcacctcaat 300
gtctcccagt cgacaaagac atcagattca gggttgtatt tgtcaatgga acatcactag 360
gtacaattac aattgctaag gtcccaaaaa ctcttgcaga tcttgcatta ccgaactcaa 420
tatcagtgaa tctgctggtt acacttaggg caggagtatc aacggaacaa aaaggaatcc 480
<210> 60
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
tgaaacaatc agacctacaa tcagagtatt tgtcatcaat aataatgatc ctattgtaag 60
atctagactt ttattcttta atctacgaat tattatgagt aacactgcaa gagagggaca 120
tagagctggt gctctcctca gtcttttatc actaccttct gcagctatga gtaatcacat 180
caaactagcc atgcattcac cagaagccag catagataga gtagaaataa cagggtttga 240
gaataattca ttccgagtta ttccagatgc tcgatcaact atgtccagag gagaagtgct 300
ggccttcgaa gcattagctg aggacattcc tgataccctt aatcaccaaa ctccatttgt 360
aaataatgat gtggaagatg acatatttga tgaaacagag aaattcttgg atgtttgcta 420
tagtgtactt atgcaggcat ggatagtaac atgcaagtgc atgactgctc ctgatcaacc 480
<210> 61
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
acaaatacgg gagtgtaaat gatctcgaca gtgacccgag ttacaaagtt tgtggctctg 60
gatcattacc aatcggattg gctaaataca ctgggaatga ccaggaatta ttacaagctg 120
caaccaaact ggacatagaa gtgagaagaa cagtcaaagc gaaagagatg gttgtgtata 180
cagtacaaaa tataaaacca gaactatacc catggtctaa tagactaaga aaaggaatgc 240
tgttcgatgc caacaaagtt gctcttgctc ctcaatgtct tccactagat aggagcataa 300
aatttagagt aatcttcgtg aattgtacgg caattggatc aataaccttg ttcaaaattc 360
ctaagtcaat ggcatcatta tctctaccca acacaatatc aatcaatctg caggtacata 420
tcaaaacagg ggttcagact gattccaaag ggatagttca aattttgaat gagaagggcg 480
<210> 62
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
caggattgag gggaaagttg acaaaattat gcttactcaa aatacaattc agcaaacaaa 60
gaatgacact caacaaatca aaggttcact tgccacaatt gagggcctaa tcacgacaat 120
gaaaataatg gatcctggag tcccatcaaa agtaagtctc aggagtttaa acaaagaatc 180
agaacaagtt cctataattg ttactggtaa cggagacgtc tcaaaatttg ttgatcaaga 240
caatacaatt acacttgact cattagcaag acccatatta tctggaacca aacaaaaaac 300
cgatgagaga cgagcaggtg ttcgtataga tgcacttaaa ataacagtct cagaaatgat 360
tcgggatcta tttggagact gtgataagag caaaaagctt cttgaatcaa taaatatggc 420
aactacagag caagacatca atctgatcaa aaccaatgcc cttagaagta tcacctaaat 480
<210> 63
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
aatcaaataa gtgtgggaac agaaaatcag gctttcaaca caaaattttc gtttttctgc 60
tctcactaaa taaattgagt tgggttttaa aaaccgccaa aaatttttaa tttagttttt 120
gctactttct catccctccc cctcacgggt gaaaaccccg gggcgtgggc cttagtgcgc 180
gataacactg ccaagggcat cactgccggc agtggcagtc aacaaaccac gtatgatcct 240
gcgcgaaccg aggccacctt gaccaccacc acctttgcgc tgcgccggta tgacctcgcc 300
gggcgcgcct tatacgacct cgacttttcg aagttaaacc cacaaacgcc aacgcgtgat 360
gccaacggcc agatcacctt taaccccttt ggcggctttg gtttgagtgg cagtgcaccc 420
caacagtgaa acgaggtcaa aaacaaggtc cccgtcgagg tggcccaaga ccccaccgat 480
<210> 64
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
tcgtgttgtc tgtactgccg ttgccacata gatcatccaa atcctaaagg attttgtgac 60
ttaaaaggta agtatgtaca aatacctaca acttgtgcta atgaccctgt gggttttaca 120
cttaaaaaca cagtctgtac cgtctgcggt atgtggaaag gttatggctg tagttgtgat 180
caactccgcg aacccatgct tcagtcagct gatgcacaat cgtttttaaa cgggtttgcg 240
gtgtgagtgc agcccgtctt acaccgtgcg gcacaggcac tagtactgat gtcgtataca 300
gggcttttga catctacaat gataaagtag ctggttttgc taaattccta aaaactaatt 360
gttgtcgctt ccaagaaaag gacgaagatg acaatttaat tgattcttac tttgtagtta 420
agagacacac tttctctaac taccaacatg aagaaacaat ttataattta cttagggatt 480
<210> 65
<211> 490
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
cctgctaaca atgctgcaat cgtgctacaa cttcctcaag gaacaacatt gccaaaaggc 60
ttctacgcag aagggagcag aggcggcagt caagcctctt ctcgttcctc atcacgtagt 120
cgcaacagtt caagaaattc aactccaggc agcagtatgg gaacttctcc tgctagaatg 180
gctggcaatg gcggtgatgc tgctcttgct ttgctgctgc ttgacagatt gaaccagctt 240
gagagcaaaa tgtctggtaa aggccaacaa caacaaggcc aaactgtcac taagaaatct 300
gctgctgagg cttctaagaa gcctcggcaa aaacgtactg ccactaaagc atacaatgta 360
acacaagctt tcggcagacg tggtccagaa caaacccaag gaaattttgg ggaccaggaa 420
ctaatcagac aaggaactga ttacaaacat tggccgcaaa ttgcacaatt tgcccccagc 480
gcttcagcgt 490
<210> 66
<211> 490
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
agcctgaaga acatgtccaa attcacacaa tcgacggttc atccggagtt gttaatccag 60
taatggaacc aatttatgat gaaccgacga cgactactag cgtgcctttg taagcacaag 120
ctgatgagta cgaacttatg tactcattcg tttcggaaga gacaggtacg ttaatagtta 180
atagcgtact tctttttctt gctttcgtgg tattcttgct agttacacta gccatcctta 240
ctgcgcttcg attgtgtgcg tactgctgca atattgttaa cgtgagtctt gtaaaacctt 300
ctttttacgt ttactctcgt gttaaaaatc tgaattcttc tagagttcct gatcttctgg 360
tctaaacgaa ctaaatatta tattagtttt tctgtttgga actttaattt tagccatggc 420
agattccaac ggtactatta ccgttgaaga gcttaaaaag ctccttgaac aatggaacct 480
agtaataggt 490
<210> 67
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
ctttcaagaa ggtctccatc atgtttgact cctcagtcag ctggcctggc aatgacaggc 60
tgttgtctcc aaatgagttt gaaatcaagc gcactgtgga tggggaagga tacaatgtgg 120
cccaatgcaa catgaccaaa gactggttcc tggttcagat gcttgccaac tacaacattg 180
gctaccaggg cttttacatc cctgagggat acaaggatcg catgtactcc tttttcagaa 240
acttccagcc tatgagcagg caggtggttg atgaggttaa ttacactgac tacaaagccg 300
tcaccttacc atatcaacac aacaactctg gctttgtagg ataccttgcg cctactatga 360
gacaagggga accttaccca gccaattatc catacccgct catcggaact actgccgtta 420
aaagtgttac ccaaaaaaag ttcctgtgcg acaggaccat gtggcgcata ccgttctcca 480
<210> 68
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
ggctaactac ttcgagaaac ctagtaacgc cattgaagtt gcagagtgtt tcgctcagca 60
ctccccccgt gtagatcagg tcgatgagtc accgcattcc ccacgggcga ccgtggcggt 120
ggctgcgttg gcggcctgcc tatggggtaa cccataggac gctctaatac ggacatggcg 180
tgaagagtct attgagctag ttagtagtcc tccggcccct gaatgcggtt aatcctaact 240
gcggagcaca cacccttaat ccaaagggca gtgtgtcgta acgggcaact ctgcagcgga 300
accgactact ttgggtgtcc gtgtttcttt ttattcttgt attggctgct tatggtgaca 360
attaaagaat tgttaccata tagctattgg attggccatc cagtgtcaaa cagagctatt 420
gtatatctct ttgttggatt cacacctctc actcttgaaa cgttacacac cctcaattac 480
<210> 69
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
gtgtcccgcg tcggacaggc acgcccggac caggcttctg cccgacatga aggcggtcag 60
gcagaactcc tgattcttgc ccttcagttt caaggccagc tcctggacag tgaagttctt 120
gtacagatgg gtcggcaagc cggcgacgtc agccgggctg tatatgccga gcacggacaa 180
caggatggat gcgatggtat gcatggggtt cgccttcagg ggcaatcctg cttgccgctg 240
cattcgacca tccggatcag ttcgagcgcg ggcttgcctt cgaaagtgag ttgcttggga 300
cccagaaaca tgcgcagcgg ccgttgttgc atgaagacgg cgcgcaacat gacttccatg 360
ggactgctgc cgggacgctt gagatccttg ccgaagcaga acggcacgtg cgcgtccggg 420
ctgctggccg cggcgcccag tttggcggcg atgccgcaga ccagcatgcg cgtcggggtg 480
<210> 70
<211> 480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
cccagcatgc ctgaggggcg ggctcagcgg ctgcgcagac tggcgcgcgc ggacggtcat 60
gggacttcag catggcggtg tttgcagatt tggacctgcg agcgggttct gacctgaagg 120
ctctgcgcgg acttgtggag acagccgctc accttggcta ttcagttgtt gctatcaatc 180
atatcgttga ctttaaggaa aagaaacagg aaattgaaaa accagtagct gtttctgaac 240
tcttcacaac tttgccaatt gtacagggaa aatcaagacc aattaaaatt ttaactagat 300
taacaattat tgtctcggat ccatctcact gcaatgtttt gagagcaact tcttcaaggg 360
cccggctcta tgatgttgtt gcagtttttc caaagacaga aaagcttttt catattgctt 420
gcacacattt agatgtggat ttagtctgca taactgtaac agagaaacta ccattttact 480

Claims (9)

1.一种多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组，其特征在于具体包括如下引物对和淬灭探针：
如SEQ ID NO:1所示的FluA-F正向引物，如SEQ ID NO:2所示的FluA-R反向引物，如SEQID NO:3所示的FluA-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:4所示的FluB-F正向引物，如SEQ ID NO:5所示的FluB-R反向引物，如SEQID NO:6所示的FluB-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:7所示的RSVA-F正向引物，如SEQ ID NO:8所示的RSVA-R反向引物，如SEQID NO:9所示的RSVA-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:10所示的RSVB-F正向引物，如SEQ ID NO:11所示的RSVB-R反向引物，如SEQ ID NO:12所示的RSVB-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:13所示的hPIV1-F正向引物，如SEQ ID NO:14所示的hPIV1-R反向引物，如SEQ ID NO:15所示的hPIV1-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:16所示的hPIV2-F正向引物，如SEQ ID NO:17所示的hPIV2-R反向引物，如SEQ ID NO:18所示的hPIV2-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:19所示的hPIV3-F正向引物，如SEQ ID NO:20所示的hPIV3-R反向引物，如SEQ ID NO:21所示的hPIV3-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:22所示的hPIV4-F正向引物，如SEQ ID NO:23所示的hPIV4-R反向引物，如SEQ ID NO:24所示的hPIV4-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:25所示的MP-F正向引物，如SEQ ID NO:26所示的MP-R反向引物，如SEQID NO:27所示的MP-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:28所示的SARS-CoV-2-ORF-F正向引物，如SEQ ID NO:29所示的SARS-CoV-2-ORF-R反向引物，如SEQ ID NO:30所示的SARS-CoV-2-ORF-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:31所示的SARS-CoV-2-N-F正向引物，如SEQ ID NO:32所示的SARS-CoV-2-N-R反向引物，如SEQ ID NO:33所示的SARS-CoV-2-N-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:34所示的SARS-CoV-2-E-F正向引物，如SEQ ID NO:35所示的SARS-CoV-2-E-R反向引物，如SEQ ID NO:36所示的SARS-CoV-2-E-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:37所示的HADV-F正向引物，如SEQ ID NO:38所示的HADV-R1反向引物，SEQ ID NO:39所示的HADV-R2反向引物，SEQ ID NO:40所示的HADV-R3反向引物，SEQ IDNO:41所示的HADV-R4反向引物，如SEQ ID NO:42所示的HADV-P淬灭探针；
如SEQ ID NO:43所示的HRV/HEV-F正向引物，如SEQ ID NO:44所示的HRV/HEV-R1反向引物；如SEQ ID NO:45所示的HRV/HEV-R2反向引物；如SEQ ID NO:46所示的HRV/HEV-R3反向引物；如SEQ ID NO:47所示的HRV/HEV-R4反向引物，如SEQ ID NO:48所示的HRV/HEV-P淬灭探针和
如SEQ ID NO:49所示的BP-F正向引物，如SEQ ID NO:50所示的BP-R反向引物，如SEQID NO:51所示的BP-P淬灭探针。
2.如权利要求1所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组，其特征在于还包括：
如SEQ ID NO:52所示的RP-F正向引物，如SEQ ID NO:53所示的RP-R反向引物，如SEQID NO:54所示的RP-P淬灭探针。
3.一种多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：权利要求1～2任一项所述的引物组，以及反应预混液。
4.如权利要求3所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于所述反应预混液包括酶混合液、核苷酸混合液、二价镁离子和缓存液。
5.如权利要求4所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括：0.01～1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为10～500μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为1～4mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各淬灭探针的浓度分别为10～500nmol/L。
6.如权利要求5所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括：0.01～0.1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为100～200μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为2.5～3.5mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各淬灭探针的浓度分别为100～200nmol/L。
7.如权利要求4所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括内参对照，所述内参为MS2噬菌体。
8.如权利要求7所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于，质粒假病毒标准品的DNA序列分别如SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69和SEQ IDNO:70所示。
9.如权利要求4所述的多种呼吸道病原体核酸同时检测用试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括微阵列qPCR检测卡盒，所述微阵列qPCR检测卡盒中的每个子检测区分别固定有与对应的淬灭探针杂交的荧光核酸。
CN202210227613.3A 2022-03-08 2022-03-08 基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒 Active CN114934102B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210227613.3A CN114934102B (zh) 2022-03-08 2022-03-08 基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210227613.3A CN114934102B (zh) 2022-03-08 2022-03-08 基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114934102A CN114934102A (zh) 2022-08-23
CN114934102B true CN114934102B (zh) 2024-09-03

Family

ID=82862419

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210227613.3A Active CN114934102B (zh) 2022-03-08 2022-03-08 基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114934102B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115992294B (zh) * 2022-10-17 2023-07-25 杭州遂真生物技术有限公司 用于多种呼吸道病原体核酸检测的组合物及一体式试剂盒
CN115852049B (zh) * 2022-10-27 2024-08-02 广州海关技术中心 一种检测新冠、呼吸道合胞、流感和呼吸道腺病毒的试剂盒及其应用
CN115838836B (zh) * 2022-11-14 2024-01-30 圣湘生物科技股份有限公司 不同类型病毒联检的组合物、试剂盒、方法及其用途
CN116144840B (zh) * 2022-12-26 2023-09-19 广州市宝创生物技术有限公司 引物组、探针组、检测产品及其应用
CN117144067A (zh) * 2023-10-31 2023-12-01 中国医学科学院北京协和医院 用于多重化核酸检测的组合物和方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110408726A (zh) * 2019-07-23 2019-11-05 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 利用Taqman低密度微流体芯片技术检测29种呼吸道病原体的方法
CN111876524A (zh) * 2020-06-22 2020-11-03 江苏康为世纪生物科技有限公司 基于多重pcr-飞行时间质谱检测34种呼吸道病原微生物的引物和探针组合及试剂盒

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX353878B (es) * 2011-10-04 2018-02-01 Genera Biosystems Ltd Composiciones y metodos de patogenos de deteccion respiratoria utilizando sondas de acido nucleico y subconjuntos de perlas.
CN105734168B (zh) * 2015-10-28 2019-05-17 南京美宁康诚生物科技有限公司 一种12种呼吸道病毒核酸多重pcr检测试剂盒
CN107937613B (zh) * 2017-12-21 2020-06-12 北京卓诚惠生生物科技股份有限公司 呼吸系统常见的七种流感病毒病原体实时荧光多重pcr引物探针及试剂盒
CN109457053A (zh) * 2018-12-28 2019-03-12 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 一种用于检测呼吸道病原体的引物组、试剂盒和方法
CN111621551B (zh) * 2019-07-31 2021-10-26 深圳闪量科技有限公司 多重连接探针微阵列检测
WO2021168427A1 (en) * 2020-02-20 2021-08-26 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for rapid detection of sars-cov-2
CN111187860A (zh) * 2020-02-25 2020-05-22 深圳闪量科技有限公司 新型冠状病毒多重pcr快速检测试剂盒
CN111394432B (zh) * 2020-03-27 2023-03-24 深圳闪量科技有限公司 基于通用探针芯片的多重定量pcr检测系统
CN111394514B (zh) * 2020-03-30 2023-01-06 杭州千基生物科技有限公司 一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒及方法
CN111378789A (zh) * 2020-06-01 2020-07-07 广州凯普医药科技有限公司 一种呼吸道感染病原体核酸联合检测试剂盒
CN112458212B (zh) * 2020-12-11 2024-01-26 郑州安图生物工程股份有限公司 同时检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒
CN113186342B (zh) * 2021-04-07 2023-03-14 吉林双正医疗科技有限公司 一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置
CN113278735A (zh) * 2021-05-26 2021-08-20 首都医科大学附属北京朝阳医院 一种人呼吸道病毒核酸多重检测引物、探针及试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110408726A (zh) * 2019-07-23 2019-11-05 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 利用Taqman低密度微流体芯片技术检测29种呼吸道病原体的方法
CN111876524A (zh) * 2020-06-22 2020-11-03 江苏康为世纪生物科技有限公司 基于多重pcr-飞行时间质谱检测34种呼吸道病原微生物的引物和探针组合及试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN114934102A (zh) 2022-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114934102B (zh) 基于二十重pcr的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒
CN111073989B (zh) 志贺氏菌核酸快速恒温检测方法及应用
CN107937613B (zh) 呼吸系统常见的七种流感病毒病原体实时荧光多重pcr引物探针及试剂盒
CN111321249A (zh) 一种SARS-CoV-2的环介导等温扩增检测引物组、试剂盒及方法
CN103320434A (zh) 一种沙门氏菌lamp引物组和试剂盒及检测方法
CN107245531B (zh) 腹泻病原体多重基因检测体系及其试剂盒和应用
CN108410957B (zh) 用于检测生殖支原体的荧光pcr引物、探针及检测试剂盒
US20220098645A1 (en) Fast and portable microfluidic detection system as an alternative to salmonella&#39;s classical culture method
CN113718045A (zh) 用于检测4种鲍特菌和特异性检测百日咳鲍特菌的dna片段、引物、探针和试剂盒及应用
CN112280879A (zh) 一种快速检测柑橘黄龙病亚洲种的rpa引物、试剂盒及其检测方法与应用
CN112301159A (zh) 一种快速检测乙型流感病毒的rda方法及试剂盒
EP2419524B1 (en) Detection of bacteria and fungi
CN113416797A (zh) 一种同时检测7种型别腺病毒的荧光定量pcr检测试剂盒
CN111073987B (zh) 小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒
CN114921587A (zh) 基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒
CN104342487A (zh) 支原体核酸恒温扩增方法
CN111088377B (zh) 金黄色葡萄球菌的快速恒温检测方法、引物组及应用
CN116103437A (zh) Lamp检测甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒及引物组合、方法
CN112266978A (zh) 引物探针组合、检测试剂盒及其应用
CN111778343A (zh) 一种检测布鲁氏菌s2疫苗株的引物对、试剂盒及其应用
Wolff et al. Multiplex Real-time PCR Assay for the Detection of all Chlamydia Species and Simultaneous Differentiation of C. psittaci and C. pneumoniae in Human Clinical Specimens
CN112301156A (zh) 一种快速检测人腺病毒的rda方法及试剂盒
CN105567867A (zh) 人类免疫缺陷病毒1型实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
CN117965800B (zh) 基于qpcr的烟曲霉、耶氏肺孢子菌及新生隐球菌检测的组合物和试剂盒
Xu et al. Single-tube Multiplex Nested PCR System for Efficient Detection of Pathogenic Microorganisms in SPF Rodents

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant