CN114921587A

CN114921587A - 基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒

Info

Publication number: CN114921587A
Application number: CN202210390181.8A
Authority: CN
Inventors: 莫茜; 陶悦; 林协; 安亦泰; 戴珩; 岳敏
Original assignee: Flashdx Shenzhen Inc
Current assignee: Flashdx Shenzhen Inc
Priority date: 2022-04-14
Filing date: 2022-04-14
Publication date: 2022-08-19

Abstract

本发明公开一种基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，包括下列互不混合：反应液A、反应液B和反应液C。反应液A包括甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒的正反向引物及荧光探针；反应液B包括人副流感病毒、肺炎支原体和新型冠状病毒的正反向引物及荧光探针；反应液C包括人呼吸道腺病毒、人呼吸道鼻/肠病毒及百日咳杆菌的正反向引物及荧光探针。在同一反应液中不同病原体所使用的荧光探针的荧光基团各不相同。本发明的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒具有高特异性和高灵敏度，适用于对呼吸道病原体的快速检测。

Description

基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒。

背景技术

呼吸道感染是世界上最常见的疾病之一。发病率在各国居民的总体发病率中占有重要地位。每年约有10％的居民患有呼吸道感染。呼吸道感染主要由各种呼吸道病毒和一些细菌、支原体和衣原体引起。常见的病毒有甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(hAdV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)。越来越多的新的致病性呼吸道病毒被发现，这使得临床相关疾病的诊断和治疗变得非常困难。呼吸道病毒种类繁多，有效识别呼吸道病原体，明确呼吸道感染病原体的种类，对临床诊治和疫情防控具有重要意义。

国内外对呼吸道病原体的检测方法很多，包括传统的分离培养方法、免疫学检测技术和新兴的分子生物学技术。近年来，基于核酸的分子检测方法以其快速、灵敏、特异和省时的特点，成为检测呼吸道病原体的革命性技术。普通荧光定量qPCR检测平台最多能同时进行检测4～5重多重检测，因此如何在普通qPCR检测平台能同时检测更多的病原体种类，提高检测效率是期待解决的技术问题。

发明内容

本发明针对现有技术中的荧光定量qPCR检测平台难以检测多于4～5重病原体的技术问题，目的在于提供一种基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒。本发明的试剂盒在普通qPCR检测平台上能够同时检测9种呼吸道病原体，是通过设置3组互相独立，互不混合的反应液，每组反应液中针对不同的病原体的荧光探针设置不同的荧光基团来进行区分，以达到同时检测9中呼吸道病原体的目的。

本发明的多种呼吸道病原体核酸同时检测用引物组及试剂盒可以同时检测9项呼吸道病原体，解决现有呼吸道病毒核酸检测难以同时检测多种病毒，且难以对检测过程进行有效把控的问题。本发明针对此类多重PCR来检测甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)做了引物的体系优化，并设计了全新的引物和荧光探针池，可以达到在临床上灵敏、特异性地满足对这9项呼吸道病原体的早期检测。

本发明的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，包括下列互不混合的混合液：反应液A、反应液B、反应液C；

本发明中，“互不混合”术语是指反应液A、反应液B、反应液C这三者互相不混合，是单独独立的；“互不混合的混合液”中的“混合液”是指反应液A，或者是指反应液B、或者是指反应液C，这三种物质本身是混合液形式；若试剂盒还包括阳性质控品和阴性质控品的话，则“混合液”还可以是指阳性质控品和阴性质控品。

所述反应液A包括反应预混液、FluA-F正向引物、FluA-R反向引物、FluA-P荧光探针、FluB-F正向引物、FluB-R反向引物、FluB-P荧光探针、RSVA-F正向引物、RSVA-R反向引物、RSVA-P荧光探针、RSVB-F正向引物、RSVB-R反向引物、RSVB-P荧光探针；

所述反应液B包括反应预混液、hPIV1-F上游引物、hPIV1-R下游引物、hPIV1-P荧光探针、hPIV2-F正向引物、hPIV2-R反向引物、hPIV2-P荧光探针、hPIV3-F正向引物、hPIV3-R反向引物、hPIV3-P荧光探针、hPIV4-F正向引物、hPIV4-R反向引物、hPIV4-P荧光探针、MP-F正向引物、MP-R反向引物、MP-P荧光探针、SARS-CoV-2-ORF正向引物、SARS-CoV-2-ORF反向引物、SARS-CoV-2-ORF荧光探针、SARS-CoV-2-N正向引物、SARS-CoV-2-N反向引物、SARS-CoV-2-N荧光探针、SARS-CoV-2-E正向引物、SARS-CoV-2-E反向引物、SARS-CoV-2-E荧光探针；

所述反应液C包括反应预混液、HADV-F上游引物、HADV-R1下游引物、HADV-R2下游引物、HADV-R3下游引物、HADV-R4下游引物、HADV-P荧光探针、HRV/HEV-F正向引物、HRV/HEV-R1反向引物、HRV/HEV-R2反向引物、HRV/HEV-R3反向引物、HRV/HEV-R4反向引物、HRV/HEV-P荧光探针、BP-F正向引物、BP-R反向引物、BP-P荧光探针。

在本发明中，

所述反应液A还可以包括RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针作为内参对照；

所述反应液B还可以包括RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针作为内参对照；

所述反应液C还可以包括RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针作为内参对照。

在本发明中，所述引物对和荧光探针具体如下：

如SEQ ID NO:1所示的FluA-F正向引物，如SEQ ID NO:2所示的FluA-R反向引物；如SEQ ID NO:3所示的FluA-P荧光探针；

如SEQ ID NO:4所示的FluB-F正向引物，如SEQ ID NO:5所示的FluB-R反向引物；如SEQ ID NO:6所示的FluB-P荧光探针；

如SEQ ID NO:7所示的RSVA-F正向引物，如SEQ ID NO:8所示的RSVA-R反向引物；如SEQ ID NO:9所示的RSVA-P荧光探针；

如SEQ ID NO:10所示的RSVB-F正向引物，如SEQ ID NO:11所示的RSVB-R反向引物；如SEQ ID NO:12所示的RSVB-P荧光探针；

如SEQ ID NO:13所示的hPIV1-F正向引物，如SEQ ID NO:14所示的hPIV1-R反向引物；如SEQ ID NO:15所示的hPIV1-P荧光探针；

如SEQ ID NO:16所示的hPIV2-F正向引物，如SEQ ID NO:17所示的hPIV2-R反向引物；如SEQ ID NO:18所示的hPIV2-P荧光探针；

如SEQ ID NO:19所示的hPIV3-F正向引物，如SEQ ID NO:20所示的hPIV3-R反向引物；如SEQ ID NO:21所示的hPIV3-P荧光探针；

如SEQ ID NO:22所示的hPIV4-F正向引物，如SEQ ID NO:23所示的hPIV4-R反向引物；如SEQ ID NO:24所示的hPIV4-P荧光探针；

如SEQ ID NO:25所示的MP-F正向引物，如SEQ ID NO:26所示的MP-R反向引物；如SEQ ID NO:27所示的MP-P荧光探针；

如SEQ ID NO:28所示的SARS-CoV-2-ORF-F正向引物，如SEQ ID NO:29所示的SARS-CoV-2-ORF-R反向引物；如SEQ ID NO:30所示的SARS-CoV-2-ORF-P荧光探针；

如SEQ ID NO:31所示的SARS-CoV-2-N-F正向引物，如SEQ ID NO:32所示的SARS-CoV-2-N-R反向引物；如SEQ ID NO:33所示的SARS-CoV-2-N-P荧光探针；

如SEQ ID NO:34所示的SARS-CoV-2-E-F正向引物，如SEQ ID NO:35所示的SARS-CoV-2-E-R反向引物；如SEQ ID NO:36所示的SARS-CoV-2-E-P荧光探针；

如SEQ ID NO:37所示的HADV-F正向引物，如SEQ ID NO:38所示的HADV-R1反向引物，SEQ ID NO:39所示的HADV-R2反向引物，SEQ ID NO:40所示的HADV-R3反向引物，SEQ IDNO:41所示的HADV-R4反向引物；如SEQ ID NO:42所示的HADV-P荧光探针；

如SEQ ID NO:43所示的HRV/HEV-F正向引物，如SEQ ID NO:44所示的HRV/HEV-R1反向引物；如SEQ ID NO:45所示的HRV/HEV-R2反向引物；如SEQ ID NO:46所示的HRV/HEV-R3反向引物；如SEQ ID NO:47所示的HRV/HEV-R4反向引物；如SEQ ID NO:48所示的HRV/HEV-P荧光探针；

如SEQ ID NO:49所示的BP-F正向引物，如SEQ ID NO:50所示的BP-R反向引物；如SEQ ID NO:51所示的BP-P荧光探针；

如SEQ ID NO:52所示的RP-F正向引物，如SEQ ID NO:53所示的RP-R反向引物；如SEQ ID NO:54所示的RP-P荧光探针。

在本发明中，

反应液A中，甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒与人保守基因RP片段这四者荧光探针的荧光基团各不相同；

反应液B中，人副流感病毒、肺炎支原体、新型冠状病毒与人保守基因RP片段这四者荧光探针的荧光基团各不相同；

反应液C中，人呼吸道腺病毒、人呼吸道鼻/肠病毒、百日咳杆菌与人保守基因RP片段这四者荧光探针的荧光基团各不相同。

但是反应液A、反应液B和反应液C中的荧光基团可以是一样的。

在本发明中，示例的一种情况是，

反应液A中，甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒与人保守基因RP片段这四者荧光探针的荧光基团各自选自FAM、VIC、CY5和ROX，并且各荧光探针的荧光基团各不相同；

反应液B中，人副流感病毒、肺炎支原体、新型冠状病毒与人保守基因RP片段这四者荧光探针的荧光基团各自选自FAM、VIC、CY5和ROX，并且各荧光探针的荧光基团各不相同；

反应液C中，人呼吸道腺病毒、人呼吸道鼻/肠病毒、百日咳杆菌与人保守基因RP片段这四者荧光探针的荧光基团各自选自FAM、VIC、CY5和ROX，并且各荧光探针的荧光基团各不相同。

在本发明中，具体地是

反应液A中，FluA的荧光探针连接的荧光基团标记为FAM，FluB荧光探针连接的荧光基团标记为VIC，RSVA和RSVB荧光探针连接的荧光基团标记都为CY5；

反应液B中，hPIV1、hPIV2、hPIV3和hPIV4荧光探针连接的荧光基团标记都为FAM，MP荧光探针连接的荧光基团标记为VIC，SARS-CoV-2-ORF、SARS-CoV-2-N和SARS-CoV-2-E荧光探针连接的荧光基团标记都为CY5；

反应液C中，HADV的荧光探针连接的荧光基团标记为FAM，HRV/HEV的荧光探针连接的荧光基团标记为VIC，BP的荧光探针连接的荧光基团标记为CY5；

反应液A、反应液B和反应液C中，人保守基因RP片段的荧光探针连接的荧光基团标记为ROX。

若在qPCR反应过程中，若待检样本包含FluA，则装有反应液A的A管的标记FAM探针产生荧光信号；若待检样本包含FluB，则A管的标记VIC探针产生荧光信号；若待检样本包含RSV，则A管的标记CY5探针产生荧光信号；

若待检样本包含hPIV，则装有反应液B的B管的标记FAM探针产生荧光信号；若待检样本包含MP，则B管的标记VIC探针产生荧光信号；若待检样本包含SARS-CoV-2，则B管的标记CY5探针产生荧光信号；

若待检样本包含HADV，则装有反应液C的C管的标记FAM探针产生荧光信号；若待检样本包含HRV/HEV，则C管的标记VIC探针产生荧光信号；若待检样本包含BP，则C管的标记CY5探针产生荧光信号。

另外，A、B、C管反应中均含有内参基因，则标记的ROX探针应产生荧光信号，用于检测仪器故障、试剂因素、聚合酶活性因素等。

在本发明中，所述反应预混液包括酶混合液、核苷酸混合液、二价镁离子和缓存液。

在本发明中，所述酶混合液包括：0.01～1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为10～500μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为1～4mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各荧光探针的浓度分别为10～500nmol/L。

优选地，所述酶混合液包括：0.01～0.1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为100～200μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为2.5～3.5mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各荧光探针的浓度分别为100～200nmol/L。

在本发明中，所述试剂盒还可以包括阳性质控品和阴性质控品。

在本发明中，所述阳性质控品为质粒假病毒标准品。

在本发明中，所述阴性质控品为灭菌后焦碳酸二乙酯处理水。

在本发明中，所述质粒假病毒标准品的DNA序列分别如SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70所示。

本发明的具体引物和荧光探针如表1所示。

表1各引物和荧光探针

质粒假病毒DNA标准品的序列如表2所示:

本发明的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒于室温避光保存。

本发明的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒可以同时特异灵敏地检测9项呼吸道病原体。同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒包括9项呼吸道病原体的扩增引物和荧光探针组合。其中，9项呼吸道病原体扩增反应中含有多条不同病原体靶标的荧光探针、引物、酶混合液、核苷酸混合液、二价镁离子、缓存液等，可以在同一反应体系中检测是否存在甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)，包括人的保守基因RP片段；试剂盒里还有阳性质控品和阴性质控品，从而提高PCR检测的准确率。本发明的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒保持高特异性的同时显著提高检测的灵敏度，适用于对呼吸道病原体的快速检测。

附图说明

图1为FluA检测结果图；

图2为FluB检测结果图；

图3为RSV检测结果图；

图4为hPIV检测结果图；

图5为MP检测结果图；

图6为SARS-CoV-2检测结果图；

图7为hAdV检测结果图；

图8为HRV/HEV检测结果图；

图9为BP检测结果图；

图10为交叉反应检测结果图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实例进一步阐述本发明。

实施例1

同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒包括：反应液A、反应液B、反应液C、阳性质控品和阴性质控品；

反应液A包括反应预混液、FluA-F正向引物、FluA-R反向引物、FluA-P荧光探针、FluB-F正向引物、FluB-R反向引物、FluB-P荧光探针、RSVA-F正向引物、RSVA-R反向引物、RSVA-P荧光探针、RSVB-F正向引物、RSVB-R反向引物、RSVB-P荧光探针、RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针；

反应液B包括反应预混液、hPIV1-F上游引物、hPIV1-R下游引物、hPIV1-P荧光探针、hPIV2-F正向引物、hPIV2-R反向引物、hPIV2-P荧光探针、hPIV3-F正向引物、hPIV3-R反向引物、hPIV3-P荧光探针、hPIV4-F正向引物、hPIV4-R反向引物、hPIV4-P荧光探针、MP-F正向引物、MP-R反向引物、MP-P荧光探针、SARS-CoV-2-ORF正向引物、SARS-CoV-2-ORF反向引物、SARS-CoV-2-ORF荧光探针、SARS-CoV-2-N正向引物、SARS-CoV-2-N反向引物、SARS-CoV-2-N荧光探针、SARS-CoV-2-E正向引物、SARS-CoV-2-E反向引物、SARS-CoV-2-E荧光探针、RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针；

反应液C包括反应预混液、HADV-F上游引物、HADV-R1下游引物、HADV-R2下游引物、HADV-R3下游引物、HADV-R4下游引物、HADV-P荧光探针、HRV/HEV-F正向引物、HRV/HEV-R1反向引物、HRV/HEV-R2反向引物、HRV/HEV-R3反向引物、HRV/HEV-R4反向引物、HRV/HEV-P荧光探针、BP-F正向引物、BP-R反向引物、BP-P荧光探针、RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针。

上述正反向引物以及荧光探针序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:54所示，分别200nmol/L。

反应预混液包括：耐热DNA聚合酶的浓度为0.05IU/μL、逆转录酶125IU/μL、RNA酶抑制剂40U/μL、二价镁离子的浓度为3mmol/L、三磷酸脱氧核糖核苷酸的浓度为200μmol/L，缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液

阳性质控品为质粒假病毒标准品。假病毒标准品的序列分别如SEQ ID NO:55～SEQ ID NO:70所示。

阴性质控品为灭菌后焦碳酸二乙酯处理水。

在同一反应体系A、B、C三管中检测是否存在甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)，A管为FluA、FluB分别标记FAM、VIC，RSVA和RSVB都标记为CY5；B为hPIV1/hPIV2/hPIV3和hPIV4标记为FAM，MP标记为VIC、SARS-CoV-2-ORF/SARS-CoV-2-N和SARS-CoV-2-E标记为CY5；C管为HADV、HRV/HEV、BP分别标记FAM、VIC、CY5；反应液A装在A中，反应液B装在B中，反应液C装在C管中，均设置有内参对照，为人保守基因RP片段，标记ROX。内参对照能够显示假阴性的发生，避免了因样品中存在的抑制物或操作失误所导致检测结果呈现假阴性而做出的结果误判，从而提高PCR检测的准确率。

在普通qPCR检测平台上进行检测，步骤流程如下：

步骤S1、预处理，分别取出阳性质控品(即阳性对照)和阴性质控品(即阴性对照)，并在室温下融化，充分振荡混匀后瞬间离心，转速3000rpm/min,离心时间20s；

步骤S2、核酸提取：待测鼻咽拭子阳性样本(如表5所示)与阳性对照、阴性对照同步进行核酸提取，具体使用QIAGEN凯杰MinElute PCR Purification Kit进行核酸提取，操作参考QIAGEN凯杰MinElute PCR Purification Kit说明书；

步骤S3、加样：取出试剂盒的预分装冻干八连管，加入步骤2提取的核酸、阳性对照和阴性对照核酸各5μL，盖紧管盖，振荡均匀后瞬时离心，转速3000rpm/min，离心时间20s；

步骤S4、按照表3的参数扩增和荧光信号检测，将步骤S4得到的PCR反应管放置在荧光定量PCR仪中进行扩增和荧光信号检测；

表3荧光定量qPCR仪的扩增检测循环参数

步骤S5，根据表4判定标准判断样本检测结果。

表4判定标准

对甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(hPIV)、肺炎支原体(MP)、人呼吸道腺病毒(HADV)、人呼吸道鼻/肠病毒(HRV/HEV)及百日咳杆菌(BP)和阴性质控品(灭菌后焦碳酸二乙酯处理水)进行检测并分析结果，阴阳性对照品符合要求，因此说明实验有效。FluA、FluB、RSV、hPIV、MP、HADV、HRV/HEV、BP均在相应的靶标上面有检出，含有其它病毒的样本和阴性质控品中均无扩增，说明该检测试剂盒及方法具有较好的特异性(结果如表4所示)。

表4样本检测列表

实施例2灵敏度检测

将自制的13种靶标(包括各种病原体的亚型)的标准品8×10⁸copy/mL梯度稀释成8×10⁴copy/mL、8×10³copy/mL、8×10²copy/mL作为模板。阴性样本为采集健康志愿者的鼻咽拭子样本。使用实施例1所述的试剂盒对上述稀释后的模板和阴性样本分别进行扩增，扩增条件同实施列1，根据实施例1中的结果判定标准进行判定，13种靶标检测灵敏度结果如表5所示。从表6可见，当病毒模板为8×10²copy/mL时，实施例1所述试剂盒仍能利用其作为模板进行扩增，因此，在低浓度模板情况下，本发明所述试剂盒仍然能进行检测，因而具有很高的灵敏度。样本浓度为8×10³copy/mL的病原体检测结果如图1～9所示。同时使用本发明的试剂盒，引物对之间无交叉反应，具有和普通qPCR一致高的灵敏度。

表6 9种呼吸道病毒核酸用本试剂盒检测灵敏度结果

实施例3特异性检测

选用部分灭活人类感染常见病原体，包括肺炎衣原体、结核分枝杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌(甲乙流国家药品标准物质阳性标准品)，以及FluA假病毒，浓度是1×10⁴copies/μL，进行特异性检测，检测过程如实施列1所示，结果显示除FluA阳性样本为阳性结果外，其它样本结果均为阴性，证明本发明与本实施例中其他病原体核酸无交叉反应(如图10)。

表5特异性反应样本列表

结论：本发明提供的可同时检测多种呼吸道病原体的PCR检测试剂盒，能稳定检测出低拷贝的病毒。试剂盒具有全封闭、全自动的特点，使用范围广，具有广泛的应用前景。

序列表

<110> 深圳闪量科技有限公司

<120> 基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒

<130> P220036

<160> 70

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

caagaccaat tctgtcacct 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

caaagcgtct acgctgcag 19

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctcaccgtgc ccagtgagcg aggac 25

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

attcgagcag ctgaaactg 19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

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<400> 5

tgtctccctc ttctggtgat 20

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<212> DNA

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tcttatccca atttggtcaa gagcaccga 29

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<212> DNA

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cacaatgaac agtttaacat tacc 24

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<211> 20

<212> DNA

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<400> 8

cggagctgct tacatctgtt 20

<210> 9

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atctctgcaa cattgacata ttcaaccc 28

<210> 10

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cctcacctca agtcagaac 19

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<211> 20

<212> DNA

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<400> 11

gacactggta taccaacctg 20

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<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ctgaggagtt ttaccaatcg acatgt 26

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

gatccatgct cctctactac c 21

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

actgggagac attgaggtg 19

<210> 15

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

ccagccgact gagacaaggg atgat 25

<210> 16

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

tctgcagcta tgagtaatca cat 23

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

catctggaat gactcggaat g 21

<210> 18

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

atgcattcac cagaagccag catagataga g 31

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

gatgccaaca aagttgctct 20

<210> 20

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

cgtacaattc acgaagatta ctct 24

<210> 21

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

ctcctcaatg tcttccacta gataggagca taa 33

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

cctggagtcc catcaaaagt 20

<210> 23

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

gttccagaca aaatgggtct tg 22

<210> 24

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

cgtctcaaaa tttgttgatc aagacaatac aattacac 38

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

agtcaacaaa ccacgtatg 19

<210> 26

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

gtcgaggtcg tataaggc 18

<210> 27

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

gttacgccgg tatgacctcg ccgg 24

<210> 28

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

ccctgtgggt tttacactta a 21

<210> 29

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

acgattgtgc atcagctga 19

<210> 30

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

ccgtctgcgg tatgtggaaa ggttatgg 28

<210> 31

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

ggggaacttc tcctgctaga at 22

<210> 32

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 32

cagacatttt gctctcaagc tg 22

<210> 33

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 33

cttgctttgc tgctgcttga cagatt 26

<210> 34

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 34

acaggtacgt taatagttaa tagcgt 26

<210> 35

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 35

atattgcagc agtacgcaca ca 22

<210> 36

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 36

ggtattcttg ctagttacac tagccatc 28

<210> 37

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 37

caacatgacc aaagactggt tc 22

<210> 38

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 38

gagtacatgc gatccttgta tc 22

<210> 39

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 39

gaatacatgc gatctttgta tc 22

<210> 40

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 40

gagtacatgc gatccttgta ac 22

<210> 41

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 41

ggagtacatg cggtcctt 18

<210> 42

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 42

ccaactacaa cattggctac cagggctt 28

<210> 43

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 43

tcctccggcc cctgaat 17

<210> 44

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 44

caaattgtca ccataagcag cc 22

<210> 45

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 45

caaattgtca ccataagcag tc 22

<210> 46

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 46

tatatatatt gtcaccataa gca 23

<210> 47

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 47

catatatgct gtgaccataa ga 22

<210> 48

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 48

cggaaccgac tactttgggt gtccgtgttt c 31

<210> 49

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 49

atatgccgag cacggacaac 20

<210> 50

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 50

gaatgcagcg gcaagcagg 19

<210> 51

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 51

gatgcgatgg tatgcatggg gttcgc 26

<210> 52

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 52

gacttcagca tggcggtgt 19

<210> 53

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 53

gtccgcgcag agccttcag 19

<210> 54

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 54

cagatttgga cctgcgagcg ggttctg 27

<210> 55

<211> 500

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 55

ttgaagatgt atttgctgga aagaataccg atcttgaggc tctcatggag tggctaaaga 60

caagaccaat cctgtcacct ctgactaagg ggattttagg atttgtgttc acgctcaccg 120

tgcccagtga gcgaggactg cagcgtagac gctttgtcca aaatgccctt aatgggaatg 180

gggatccaaa taatatggac agagcagtca aactttatcg aaagcttaag agggagataa 240

cattccatgg agccaaagaa atagcactca gttattctgc tggtgcactt gccagttgta 300

tgggactcat atacaacagg atgggggctg tgaccaccga atcagcattt ggccttatat 360

gtgcaacctg tgaacagatt gccgactccc agcataagtc tcacaggcaa atggtaacaa 420

caaccaatcc attgataaga catgagaaca gaatggttct ggccagcact acagctaagg 480

ctatggagca aatggctgga 500

<210> 56

<211> 498

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 56

gtaatgtatt gtccttgaga gtgttggtaa acggaacatt cctcaaacat cccaatggat 60

acaagtcctt atcaactctg catagattga atgcatatga ccagagtgga aggcttgttg 120

ctaaacttgt tgctactgat gatcttacag tggaggatga agaagatggc catcggatcc 180

tcaactcact cttcgagcgt cttaatgaag gacattcaaa gccaattcga gcagctgaaa 240

ctgcggtggg agtcttatcc caatttggtc aagagcaccg attatcacca gaagagggag 300

acaattagac tggtcacgga agaactttat cttttaagta aaagaattga tgataacata 360

ttgttccaca aaacagtaat agctaacagc tccataatag ctgacatggt tgtatcatta 420

tcattattag aaacattgta tgaaatgaag gatgtagttg aagtgtacag caggcagtgc 480

ttgtgaattt aaaataaa 498

<210> 57

<211> 500

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 57

tcttagcata tgtagtacaa ttaccactat atggtgtgat agatacacct tgttggaaat 60

tacacacatc ccctctatgt acaaccaaca caaaagaagg gtcaaacatc tgtttaacaa 120

gaactgacag aggatggtac tgtgacaatg caggatcagt atctttcttc ccacaagctg 180

aaacatgtaa agttcaatcg aatcgagtat tttgtgacac aatgaacagt ttaacattac 240

caagtgaagt aaatctctgc aatgttgaca tattcaatcc caaatatgat tgtaaaatta 300

tgacttcaaa aacagatgta agcagctccg ttatcacatc tctaggagcc attgtgtcat 360

gctatggcaa aactaaatgt acagcatcca ataaaaatcg tggaatcata aagacatttt 420

ctaacgggtg tgattatgta tcaaataaag gggtggacac tgtgtctgta ggtaacacat 480

tatattatgt aaataagcaa 500

<210> 58

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 58

cacaaatacc cacagcatcc gagccctcca cattaaatcc taattaaaaa acctagtcac 60

atgcttagtt attcaaaaac tacatcttag cagagaaccg tgatctatca agcaagaaca 120

aaattaaacc tggggcaaat aaccatggag ttgctgatcc acaggtcaag tgcaatcttc 180

ctaactcttg ctgttaatgc attgtacctc acctcaagtc agaacataac tgaggagttt 240

taccaatcga catgtagtgc agttagcaga ggttatttta gtgctttaag aacaggttgg 300

tataccagtg tcataacaat agaattaagt aatataaaag aaaccaaatg caatggaact 360

gacactaaag taaaacttat aaaacaagaa ttagataagt ataagaatgc agtaacagaa 420

ttacagctac ttatgcaaaa cacgccagct gccaacaacc gggccagaag agaagcacca 480

<210> 59

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 59

tctttgaaac acctaagcaa ggacctctat ctggcagcat atctgatctc acagaatcaa 60

ccagttattc aatctgtgga tccggatcct taccaattgg catagccaag tattacggca 120

cagatcaaga attattaaaa gcctgcattg acctcaaaat aactgtacga agaacagtta 180

gatctggaga aatgatagta tacatggtag attcgatcca tgctcctcta ctaccatggt 240

ccagccgact gagacaaggg atgatatata atgccaataa agtagctcta gcacctcaat 300

gtctcccagt cgacaaagac atcagattca gggttgtatt tgtcaatgga acatcactag 360

gtacaattac aattgctaag gtcccaaaaa ctcttgcaga tcttgcatta ccgaactcaa 420

tatcagtgaa tctgctggtt acacttaggg caggagtatc aacggaacaa aaaggaatcc 480

<210> 60

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 60

tgaaacaatc agacctacaa tcagagtatt tgtcatcaat aataatgatc ctattgtaag 60

atctagactt ttattcttta atctacgaat tattatgagt aacactgcaa gagagggaca 120

tagagctggt gctctcctca gtcttttatc actaccttct gcagctatga gtaatcacat 180

caaactagcc atgcattcac cagaagccag catagataga gtagaaataa cagggtttga 240

gaataattca ttccgagtta ttccagatgc tcgatcaact atgtccagag gagaagtgct 300

ggccttcgaa gcattagctg aggacattcc tgataccctt aatcaccaaa ctccatttgt 360

aaataatgat gtggaagatg acatatttga tgaaacagag aaattcttgg atgtttgcta 420

tagtgtactt atgcaggcat ggatagtaac atgcaagtgc atgactgctc ctgatcaacc 480

<210> 61

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 61

acaaatacgg gagtgtaaat gatctcgaca gtgacccgag ttacaaagtt tgtggctctg 60

gatcattacc aatcggattg gctaaataca ctgggaatga ccaggaatta ttacaagctg 120

caaccaaact ggacatagaa gtgagaagaa cagtcaaagc gaaagagatg gttgtgtata 180

cagtacaaaa tataaaacca gaactatacc catggtctaa tagactaaga aaaggaatgc 240

tgttcgatgc caacaaagtt gctcttgctc ctcaatgtct tccactagat aggagcataa 300

aatttagagt aatcttcgtg aattgtacgg caattggatc aataaccttg ttcaaaattc 360

ctaagtcaat ggcatcatta tctctaccca acacaatatc aatcaatctg caggtacata 420

tcaaaacagg ggttcagact gattccaaag ggatagttca aattttgaat gagaagggcg 480

<210> 62

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 62

caggattgag gggaaagttg acaaaattat gcttactcaa aatacaattc agcaaacaaa 60

gaatgacact caacaaatca aaggttcact tgccacaatt gagggcctaa tcacgacaat 120

gaaaataatg gatcctggag tcccatcaaa agtaagtctc aggagtttaa acaaagaatc 180

agaacaagtt cctataattg ttactggtaa cggagacgtc tcaaaatttg ttgatcaaga 240

caatacaatt acacttgact cattagcaag acccatatta tctggaacca aacaaaaaac 300

cgatgagaga cgagcaggtg ttcgtataga tgcacttaaa ataacagtct cagaaatgat 360

tcgggatcta tttggagact gtgataagag caaaaagctt cttgaatcaa taaatatggc 420

aactacagag caagacatca atctgatcaa aaccaatgcc cttagaagta tcacctaaat 480

<210> 63

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 63

aatcaaataa gtgtgggaac agaaaatcag gctttcaaca caaaattttc gtttttctgc 60

tctcactaaa taaattgagt tgggttttaa aaaccgccaa aaatttttaa tttagttttt 120

gctactttct catccctccc cctcacgggt gaaaaccccg gggcgtgggc cttagtgcgc 180

gataacactg ccaagggcat cactgccggc agtggcagtc aacaaaccac gtatgatcct 240

gcgcgaaccg aggccacctt gaccaccacc acctttgcgc tgcgccggta tgacctcgcc 300

gggcgcgcct tatacgacct cgacttttcg aagttaaacc cacaaacgcc aacgcgtgat 360

gccaacggcc agatcacctt taaccccttt ggcggctttg gtttgagtgg cagtgcaccc 420

caacagtgaa acgaggtcaa aaacaaggtc cccgtcgagg tggcccaaga ccccaccgat 480

<210> 64

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 64

tcgtgttgtc tgtactgccg ttgccacata gatcatccaa atcctaaagg attttgtgac 60

ttaaaaggta agtatgtaca aatacctaca acttgtgcta atgaccctgt gggttttaca 120

cttaaaaaca cagtctgtac cgtctgcggt atgtggaaag gttatggctg tagttgtgat 180

caactccgcg aacccatgct tcagtcagct gatgcacaat cgtttttaaa cgggtttgcg 240

gtgtgagtgc agcccgtctt acaccgtgcg gcacaggcac tagtactgat gtcgtataca 300

gggcttttga catctacaat gataaagtag ctggttttgc taaattccta aaaactaatt 360

gttgtcgctt ccaagaaaag gacgaagatg acaatttaat tgattcttac tttgtagtta 420

agagacacac tttctctaac taccaacatg aagaaacaat ttataattta cttagggatt 480

<210> 65

<211> 490

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 65

cctgctaaca atgctgcaat cgtgctacaa cttcctcaag gaacaacatt gccaaaaggc 60

ttctacgcag aagggagcag aggcggcagt caagcctctt ctcgttcctc atcacgtagt 120

cgcaacagtt caagaaattc aactccaggc agcagtatgg gaacttctcc tgctagaatg 180

gctggcaatg gcggtgatgc tgctcttgct ttgctgctgc ttgacagatt gaaccagctt 240

gagagcaaaa tgtctggtaa aggccaacaa caacaaggcc aaactgtcac taagaaatct 300

gctgctgagg cttctaagaa gcctcggcaa aaacgtactg ccactaaagc atacaatgta 360

acacaagctt tcggcagacg tggtccagaa caaacccaag gaaattttgg ggaccaggaa 420

ctaatcagac aaggaactga ttacaaacat tggccgcaaa ttgcacaatt tgcccccagc 480

gcttcagcgt 490

<210> 66

<211> 490

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 66

agcctgaaga acatgtccaa attcacacaa tcgacggttc atccggagtt gttaatccag 60

taatggaacc aatttatgat gaaccgacga cgactactag cgtgcctttg taagcacaag 120

ctgatgagta cgaacttatg tactcattcg tttcggaaga gacaggtacg ttaatagtta 180

atagcgtact tctttttctt gctttcgtgg tattcttgct agttacacta gccatcctta 240

ctgcgcttcg attgtgtgcg tactgctgca atattgttaa cgtgagtctt gtaaaacctt 300

ctttttacgt ttactctcgt gttaaaaatc tgaattcttc tagagttcct gatcttctgg 360

tctaaacgaa ctaaatatta tattagtttt tctgtttgga actttaattt tagccatggc 420

agattccaac ggtactatta ccgttgaaga gcttaaaaag ctccttgaac aatggaacct 480

agtaataggt 490

<210> 67

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 67

ctttcaagaa ggtctccatc atgtttgact cctcagtcag ctggcctggc aatgacaggc 60

tgttgtctcc aaatgagttt gaaatcaagc gcactgtgga tggggaagga tacaatgtgg 120

cccaatgcaa catgaccaaa gactggttcc tggttcagat gcttgccaac tacaacattg 180

gctaccaggg cttttacatc cctgagggat acaaggatcg catgtactcc tttttcagaa 240

acttccagcc tatgagcagg caggtggttg atgaggttaa ttacactgac tacaaagccg 300

tcaccttacc atatcaacac aacaactctg gctttgtagg ataccttgcg cctactatga 360

gacaagggga accttaccca gccaattatc catacccgct catcggaact actgccgtta 420

aaagtgttac ccaaaaaaag ttcctgtgcg acaggaccat gtggcgcata ccgttctcca 480

<210> 68

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 68

ggctaactac ttcgagaaac ctagtaacgc cattgaagtt gcagagtgtt tcgctcagca 60

ctccccccgt gtagatcagg tcgatgagtc accgcattcc ccacgggcga ccgtggcggt 120

ggctgcgttg gcggcctgcc tatggggtaa cccataggac gctctaatac ggacatggcg 180

tgaagagtct attgagctag ttagtagtcc tccggcccct gaatgcggtt aatcctaact 240

gcggagcaca cacccttaat ccaaagggca gtgtgtcgta acgggcaact ctgcagcgga 300

accgactact ttgggtgtcc gtgtttcttt ttattcttgt attggctgct tatggtgaca 360

attaaagaat tgttaccata tagctattgg attggccatc cagtgtcaaa cagagctatt 420

gtatatctct ttgttggatt cacacctctc actcttgaaa cgttacacac cctcaattac 480

<210> 69

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 69

gtgtcccgcg tcggacaggc acgcccggac caggcttctg cccgacatga aggcggtcag 60

gcagaactcc tgattcttgc ccttcagttt caaggccagc tcctggacag tgaagttctt 120

gtacagatgg gtcggcaagc cggcgacgtc agccgggctg tatatgccga gcacggacaa 180

caggatggat gcgatggtat gcatggggtt cgccttcagg ggcaatcctg cttgccgctg 240

cattcgacca tccggatcag ttcgagcgcg ggcttgcctt cgaaagtgag ttgcttggga 300

cccagaaaca tgcgcagcgg ccgttgttgc atgaagacgg cgcgcaacat gacttccatg 360

ggactgctgc cgggacgctt gagatccttg ccgaagcaga acggcacgtg cgcgtccggg 420

ctgctggccg cggcgcccag tttggcggcg atgccgcaga ccagcatgcg cgtcggggtg 480

<210> 70

<211> 480

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 70

cccagcatgc ctgaggggcg ggctcagcgg ctgcgcagac tggcgcgcgc ggacggtcat 60

gggacttcag catggcggtg tttgcagatt tggacctgcg agcgggttct gacctgaagg 120

ctctgcgcgg acttgtggag acagccgctc accttggcta ttcagttgtt gctatcaatc 180

atatcgttga ctttaaggaa aagaaacagg aaattgaaaa accagtagct gtttctgaac 240

tcttcacaac tttgccaatt gtacagggaa aatcaagacc aattaaaatt ttaactagat 300

taacaattat tgtctcggat ccatctcact gcaatgtttt gagagcaact tcttcaaggg 360

cccggctcta tgatgttgtt gcagtttttc caaagacaga aaagcttttt catattgctt 420

gcacacattt agatgtggat ttagtctgca taactgtaac agagaaacta ccattttact 480

Claims

1.一种基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于包括互不混合的混合液：反应液A、反应液B和反应液C；

2.如权利要求1所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于

所述反应液A还包括RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针作为内参对照；

所述反应液B还包括RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针作为内参对照；

所述反应液C还包括RP-F上游引物、RP-R下游引物和RP-P荧光探针作为内参对照。

3.如权利要求2所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于所述引物对和荧光探针具体如下：

如SEQ ID NO:1所示的FluA-F正向引物，如SEQ ID NO:2所示的FluA-R反向引物；如SEQID NO:3所示的FluA-P荧光探针；

如SEQ ID NO:4所示的FluB-F正向引物，如SEQ ID NO:5所示的FluB-R反向引物；如SEQID NO:6所示的FluB-P荧光探针；

如SEQ ID NO:7所示的RSVA-F正向引物，如SEQ ID NO:8所示的RSVA-R反向引物；如SEQID NO:9所示的RSVA-P荧光探针；

如SEQ ID NO:25所示的MP-F正向引物，如SEQ ID NO:26所示的MP-R反向引物；如SEQID NO:27所示的MP-P荧光探针；

如SEQ ID NO:49所示的BP-F正向引物，如SEQ ID NO:50所示的BP-R反向引物；如SEQID NO:51所示的BP-P荧光探针；

如SEQ ID NO:52所示的RP-F正向引物，如SEQ ID NO:53所示的RP-R反向引物；如SEQID NO:54所示的RP-P荧光探针。

4.如权利要求2或3所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于

5.如权利要求4所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于

6.如权利要求5所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于

7.如权利要求1所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于所述反应预混液包括酶混合液、核苷酸混合液、二价镁离子和缓存液。

8.如权利要求7所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括：0.01～1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为10～500μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为1～4mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各荧光探针的浓度分别为10～500nmol/L。

9.如权利要求8所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括：0.01～0.1IU/μL的耐热DNA聚合酶、100-400U/μL的逆转录酶、30-50U/μL的RNA酶抑制剂；所述核苷酸混合液为三磷酸脱氧核糖核苷酸，浓度为100～200μmol/L；二价镁离子选自氯化镁或硫酸镁，浓度为2.5～3.5mmol/L；缓存液为pH＝8.0的Tris缓冲液；各引物和各荧光探针的浓度分别为100～200nmol/L。

10.如权利要求1所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括阳性质控品和阴性质控品。

11.如权利要求10所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于所述阳性质控品为质粒假病毒标准品。

12.如权利要求10所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于所述阴性质控品为灭菌后焦碳酸二乙酯处理水。

13.如权利要求11所述的基于普通qPCR检测平台的同时检测9种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于，所述质粒假病毒标准品的DNA序列分别如SEQ ID NO:55、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70所示。