CN114929190A - 防止脱矿质的个人牙齿护理产品 - Google Patents

Abstract

本发明提供了新的牙齿护理产品，包含能够在特定pH下进行自组装的自组装肽，可用于牙齿护理，特别是可用于减少或防止受试者牙齿脱矿质，特别是可用于减少或防止受试者牙齿进一步脱矿质。所述牙齿护理产品包含自组装肽，特别地，所述自组装肽包含SEQ ID NO:21的序列的自组装肽和药学上可接受的基质，所述自组装肽能够在低于7.5的pH下进行自组装，其中所述自组装肽基本上以组装形式存在于所述牙齿护理产品中。所述牙齿护理产品是选自口香糖、软嚼糖、乳脂糖、橡皮糖、耐嚼糖果、咀嚼玩具、锭剂的基本上固体的产品。优选地，它是耐嚼产品。本牙齿护理产品不是磨蚀性的。所述牙齿护理产品可用于减少或防止/进一步防止有诸如脱矿质牙的受试者、或患有口干症、缺涎症、磨牙症、胃食管反流病、牙本质过敏症和/或牙齿侵蚀的受试者的牙齿表面脱矿质。优选地，它也可用于清洁牙齿表面。本发明的产品可用于动物和人。本发明还提供了制备本发明牙齿护理产品的方法。本发明能够对多颗牙齿进行非靶向治疗，并且其独立于龋齿的诊断。

Description

防止脱矿质的个人牙齿护理产品

本发明提供了新的牙齿护理产品，包含能够在特定pH下进行自组装的自组装肽，所述产品可用于牙齿护理，特别是可用于减少或防止受试者牙齿脱矿质，特别是可用于减少或防止受试者牙齿进一步脱矿质。所述牙齿护理产品包含自组装肽和药学上可接受的基础成分(basis)，特别地，所述自组装肽包含SEQ ID NO:21的序列，所述自组装肽能够在低于7.5的pH下进行自组装，其中所述自组装肽基本上以组装形式存在于所述牙齿护理产品中。所述牙齿护理产品是选自口香糖、软嚼糖(soft chew)、乳脂糖、橡皮糖(geltin gum)、耐嚼糖果、咀嚼玩具、棉花糖、锭剂或片剂的基本上固体的产品。优选地，它是耐嚼产品。本牙齿护理产品不是磨蚀性的。所述牙齿护理产品可用于减少或防止/进一步防止有诸如脱矿牙的受试者、或患有口干症、缺涎症(hyopsalivation)、磨牙症、胃食管反流病、牙本质过敏症和/或牙齿侵蚀的受试者的牙齿表面脱矿质。优选地，在这些疾病中，自组装肽层形成在牙齿表面上，所述自组装肽层可被侵蚀或脱矿，即，其在牙齿本身受损之前充当牺牲层。优选地，本发明的牙齿护理产品也可用于清洁牙齿表面。本发明的产品可用于动物和人类。本发明还提供了制备本发明牙齿护理产品的方法。本发明能够对多颗牙齿进行非靶向治疗，并且其独立于龋齿的诊断。

牙齿脱矿质是指从任何硬组织(釉质、牙本质和牙骨质)中去除矿物质(主要是钙和磷酸盐)。它始于表面，除非被再矿化阻止或逆转，否则可能发展为蛀牙。

脱矿质是由细菌分泌的碳水化合物代谢产物酸引起的。通过降低个体饮食中碳水化合物的摄入频次，可增加再矿化，减少脱矿质。如果脱矿质阶段在很长一段时间内持续超过再矿化阶段，则可能发生牙釉质结构损失和空化。由可发酵碳水化合物的存在引起的再矿化/脱矿质平衡的这种干扰持续存在，直到唾液恢复到正常pH值，并有足够的时间渗透和中和存在的任何致龋生物膜内的酸(Arathi Rao等2011.The Role of RemineralizingAgents in dentistry:A Review.Volume 32,Number 6；Wikipedia onRemineralisation_of_teeth#Treatment_and_prevention)。

除了细菌入侵，牙釉质还容易受到其他破坏性力量的影响。磨牙症，也被称为咬紧牙齿或磨牙，破坏釉质非常快。釉质的磨耗率(wear rate)，称为耗损(attrition)，在正常因素下为每年8微米。一个常见的误解是，牙釉质主要在咀嚼过程中磨耗，但实际上牙齿在正常咀嚼过程中很少接触。此外，正常的牙齿接触通过牙周韧带和牙齿咬合的排列在生理上得到补偿。真正的破坏力是功能异常运动，如磨牙症，可对牙釉质造成不可逆的损伤。

釉质破坏的其他非细菌过程包括磨损(abrasion)(涉及外来因素，如牙刷)、侵蚀(涉及化学过程，如通过软饮料或柠檬和其他果汁溶解)(Larsen MJ等人，1999.Enamelerosion by some soft drinks and orange juices relative to their pH,bufferingeffect and contents ofcalcium phosphate.Caries Res.33(1):81–87)，可能还有磨折症(abfraction)(涉及压缩力和拉伸力)。胃食管反流病也可导致侵蚀性牙釉质丧失，因为酸会沿食管逆流至口中，多数发生在夜间睡眠期间。(关于Tooth_enamel#Enamel_loss的维基百科)。

酸侵蚀是牙齿磨损的一种。其定义为由于非细菌来源的酸的化学溶解而造成的不可逆的牙齿结构的丧失。牙侵蚀是5-17岁儿童最常见的慢性疾病，但直到最近才被视为牙齿健康问题。人们普遍忽视酸侵蚀的破坏性影响；由于果汁的侵蚀尤其如此，因为它们往往被视为健康的。酸侵蚀始于牙釉质，导致其变薄，并可发展至牙本质，使牙齿外观呈暗黄色，并导致牙本质过敏。

侵蚀最常见的原因是酸性食物和饮料。一般而言，已知pH值低于5.0–5.7的食物和饮料会引发牙侵蚀效应。大量临床和实验室报告将侵蚀与过度饮用饮料联系起来。那些被认为具有风险的是软饮料、一些酒精和水果饮料、果汁如橙汁(其中含有柠檬酸)和碳酸饮料如可乐(其中侵蚀的原因不是碳酸，而是柠檬酸和磷酸)。此外，研究显示葡萄酒会侵蚀牙齿，葡萄酒的pH值低至3.0–3.8。侵蚀性酸的其他可能来源是接触加氯消毒的游泳池水和胃酸返流。在患有慢性病的儿童中，使用含有酸性成分的药物也是一个风险因素。牙齿侵蚀也在化石记录中发现，很可能是由食用酸性水果或植物引起的(关于酸侵蚀的维基百科)。

为了防止口腔中的脱矿质作用，必须确保个人饮食均衡，包括含钙食物和低酸低糖食物。氟化物也被认为可以防止脱矿质，因为将氟化物结合到牙釉质中会形成氟化羟基磷灰石，这种氟化羟基磷灰石的耐酸性有所提高。氟化物可以在牙齿护理产品如牙膏中使用，或在食物或饮料中使用，例如，在一些地区，氟化物被添加到饮用水中。

在健康受试者中存在维持牙齿健康的脱矿质和再矿质平衡。因此，有许多基于增加牙齿再矿化的策略来对抗脱矿质。

到目前为止，牙齿再矿化主要是通过将氟化物或钙和磷酸盐离子输送到牙齿损伤或龋齿上实现的(Arifa等人,Int J Clin Pediatr Dent 12(2):139-144)。牙膏中通常含有钙和磷酸盐离子，牙膏中还含有例如研磨剂、氟化物、表面活性剂和其他再矿化剂。钙和磷酸盐离子可以以各种结晶形式使用，例如作为基于羟基磷灰石的材料，或作为无定形磷酸钙，例如在一些基于酪蛋白磷酸肽的材料中。例如，WO 2013/050432描述了这种再矿化剂和将粘膜与这些试剂接触的选择。WO 2009/100276教导了与游离或盐形式的碱性氨基酸结合的牙线，例如用于促进再矿化。

最近，描述了一种牙齿再矿化的替代方法，该方法基于合理设计的短自组装肽。WO2004/007532公开了能够形成三维骨架(scaffold)的肽，从而促进从头磷酸钙的成核。这些人工肽组装形成β-片层(β-sheet)、带状组件。肽组件可响应化学或物理触发因子而从流体切换到向列、更硬的凝胶状态。所述肽被设计成在特定pH和/或离子强度响应按以下列分级顺序形成组件：条带、带、原纤维和纤维。Aggeli等人(2003,J.Am.Chem.Soc.125,9619-9628)分析了作为肽β-片层自组装触发因素的pH。

在现有技术中已经描述了几种其他的自组装肽。例如，WO 2010/041636 A1描述了一种生物可吸收的肽组织封闭剂，其包含具有8-200个亲水性氨基酸和疏水性氨基酸交替结合的氨基酸残基的人工肽，其在生理pH下自组装成β-结构。在WO 2008/113030 A2中还公开了具有交替的疏水和亲水性残基或与细胞外基质相互作用的延伸段的自组装肽。WO2010/103887 A1公开了自组装肽，其包含特定一级序列的碱性、疏水性和酸性氨基酸及其具有高强度的肽凝胶。

另一个申请，WO 2007/000979 A1，描述了具有极性和非极性氨基酸的自组装肽。这些肽能够形成β-片层结构，其中非极性氨基酸残基以组装形式排列在结构的一侧。专利US6,548,630中描述了用作稳定宏观膜的两亲性自组装肽，其用于生物材料应用，例如缓慢扩散药物递送。

EP2 327 428 A2涉及一种药物组合物，其包含彼此互补的自组装肽纳米纤维和至少一种用于修复受损组织如心肌梗死后组织的细胞。

自组装肽用于递送生物活性剂的用途已有描述，例如在US 2008/199431 A1和WO2009/026729 A1中。WO 2006/073889 A2涉及一种组合物，其中人PDGF直接与肽结合，所述肽组装成凝胶，在体内缓慢释放PDGF。WO 2006/047315 A2提出使用生物素/链霉亲和素键将治疗剂结合到自组装肽上。

Kirkham等人和Kind等人涉及促进釉质再矿化的自组装肽骨架(Kirkham等人,2007,Dent.Res.86(5),426-430；Kind等人,2017,Journal of Dental Research 1-8,doi10.1177/0022034517698419)。

为了有效地导致再矿化，例如，为了治疗牙齿病变，特别是亚表面病变(即，早期龋齿病变或白斑)，自组装肽需要在牙齿病变外部呈单体形式，以能够扩散到病变部位，并且其需要一旦进入牙齿病变内部就转变为组装形式。如果所述肽在病变外组装，则它不能促进具有低pH值和高离子强度的病变内的再矿化，因为形成的三维结构太大而无法通过孔扩散。因此，应阻止肽的组装，直至其到达其作用位点。

例如，WO 2014/027012 A1和EP 2 698 162 A1提供了用于靶向治疗牙齿损伤的包含单体自组装肽的冻干溶液。由于必须将包含单体肽的溶液直接施加到早期龋损的表面，因此该用途仅限于专业使用者，例如牙医。此外，待治疗牙齿的预处理非常复杂，包括专业清洁牙齿以去除牙斑、食物残渣和污渍，以及用次氯酸钠和磷酸处理，随后用水冲洗并干燥牙齿表面。Brunton等人(2013,Br.Dent.J.215(4):E6,doi:10.1038/sj.bdj.2013.741)证实，在治疗前，用磨砂膏清洁病灶，用蚀刻溶液处理20秒以打开表面病灶下的孔，然后清洗并干燥。将单体形式的冻干自组装肽用无菌水再水合，并将所得溶液的一滴立即直接应用于病灶表面。确保水分控制，直到看不到P11-4溶液(约两分钟)。要求受试者在治疗后4天不要在治疗部位刷牙。Schlee等人,2014,Stomatologie 111:175-181confirms the needfor pre-treatment and moisture control。

由于治疗复杂，给患者和/或相关卫生系统带来高额成本。此外，由于心理原因，有些受试者会逃避或延迟到牙科医生就诊，直到龋齿病变广泛发展，以至于牙科医生可能更喜欢钻孔和填充而不是使用自组装肽的治疗方法。

WO 2017/202940 A1或WO 2017/202943 A1提供了个人牙齿护理产品，可被受试者使用，而不需要诊断龋齿或干预，或被牙科专业人员用于治疗或预防牙齿损伤和/或再矿化牙齿表面，所述产品包含单体形式的自组装肽，其中强调了在施用到受试者口腔后，单体形式必须保持尽可能长的时间。

组装形式的自组装肽(也称为聚合自组装肽)也可应用于牙齿表面。pH循环模型显示，自组装肽P11-4(Curodont Protect,Credentis,Switzerland)会导致矿化增加(Soares等人，2017.Journal of Clinical and Diagnostic Research 11(4):ZC136-ZC141)。进一步发现自组装肽基质可预防人工龋损并导致正畸托槽周围釉质再矿化(Jablonsky-Momeni等人,2019.Randomised in situ clinical trial investigating self-assemblingpeptide matrix P11-4 in the prevention of artificial carieslesions.Scientific Reports 9:269)。包含组装的自组装肽的凝胶(Curodont D'Senz,credentisAG,Windisch,CH)也有效地阻断牙本质小管，因此可用于治疗牙本质过敏(Schlee等人,Journal ofPeriodontology 89(6):653-660)。

EP 2 853 256 A1和WO 2015/044268 A1教导了自组装肽水凝胶，即包含组装的(聚合的)自组装肽并且还包含特定尺寸的矿物颗粒以及荧光团(其可以是自组装肽的氨基酸)的牙齿护理产品，其可用于牙齿美白，其中自组装肽和矿物颗粒具有协同作用。

鉴于现有技术水平，本发明人解决了想要提供用于牙齿脱矿质处理，或用于减少或防止具有脱矿质牙齿的受试者的牙齿进一步脱矿质的牙齿护理产品的问题。有利地，本发明的牙齿护理产品易于施用，优选地用于OTC或零售，并且患者或消费者可应用于防止牙齿脱矿质。

本发明解决了这一问题，尤其是所要求保护的主题解决了这一问题。

第一方面，本发明提供了一种适于防止具有脱矿质牙齿受试者的牙齿进一步脱矿质的牙齿护理产品，包括

(i)自组装肽，优选地，包含SEQ ID NO:3的序列，其能够在低于7.5的pH下进行自组装，其中所述自组装肽基本上以组装形式(即，至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，或最优选至少99％)存在于所述牙齿护理产品中，和

(ii)药学上可接受的基础成分，

其中所述牙齿护理产品是选自口香糖、软嚼糖、乳脂糖、橡皮糖、耐嚼糖果、咀嚼玩具、棉花糖、锭剂或片剂的基本上固体的产品，

并且其中所述牙齿护理产品不是磨蚀性的。

本发明人已经发现，施用(优选通过咀嚼)本发明的牙齿护理产品导致在受试者的牙齿上形成保护层或膜。然后，所述保护层可防止进一步脱矿质，并保护牙齿免受酸侵蚀。这在牙齿的再矿化减少的条件下尤其重要，因此，诸如施用单体自组装肽的再矿化策略的效率低于正常条件(例如，在健康受试者中)，或者根本不可行。

优选地，所述牙齿护理产品是耐嚼产品，即适合咬嚼(mastication)或咀嚼(chewing)的产品。特别地，优选地，如果所述牙齿护理产品是锭剂或片剂，则其是可咀嚼的锭剂(例如，Umashankar等人,2016.International Research Journal of Pharmacy.7.9-16)或咀嚼片剂(例如，基于Dewsbury等人，BMC Vet Res.2019；15(1):394；Fasoulas等人，2019.Heliyon 5(7):e02064.；Jagdale等人,2010.Int.J.Res.Pharm.Sci.1(3),282-289,2010中公开的组合物)。例如，其可以是软产品。牙齿护理产品通常包含相应牙齿护理产品的一种或多种典型成分，例如典型的pH值小于7.5的药学上可接受的基料(bases)，其中可加入自组装肽。

组装形式的自组装肽优选包埋在药学上可接受的基础成分中，优选例如包埋在胶基中。所述胶基可以包括聚合物(或弹性体)、增塑剂和/或树脂，例如，如果产品是口香糖，则它们是典型的成分。

例如，弹性体可以是本领域已知的任何水不溶性聚合物，并且包括用于口香糖和泡泡糖的那些树胶聚合物，其在美国食品药品监督管理局，CFR，第21篇，第172,615节中被列为“天然植物来源的咀嚼物质”和“合成的咀嚼物质”。

例如，所述胶基可以包括

a)选自丁二烯-苯乙烯橡胶、异丁烯-异戊二烯共聚物(丁基橡胶)、石蜡(通过费-托法生产)、石油蜡、石油蜡合成物、聚异丁烯聚乙酸乙烯酯、聚异丁二烯和异丁烯-异戊二烯共聚物、低分子量弹性体如聚丁烯、聚丁二烯和聚异丁烯、乙烯基聚合物弹性体如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯、乙烯基共聚弹性体如乙酸乙烯酯/月桂酸乙烯酯、乙酸乙烯酯/硬脂酸乙烯酯、乙烯/乙酸乙烯酯、聚乙烯醇或其混合物的合成成分，

和/或

b)选自以下的天然成分

-糖胶树脂(chicle)、冠树胶(crown gum)、芡茨棕树胶(chiquibul)、古塔胶(Gutta hang kang)、二齿铁线子胶(massarandubabalata)、巧克力铁线子(massarandubachocolate)、尼斯佩罗胶(nispero)、山榄胶(rosdinha)、委内瑞拉糖树胶(Venezuelanchicle)(均来自山榄科(Sapotaceae))，

-节路顿胶(jelutong)、leche saspi(索马树胶，sorva)、pendare、香豆树胶(perillo)(均来自夹竹桃科)，

-莱切巴卡胶(Leche de vaca)、尼日尔杜仲胶(niger gutta)、美洲假树胶(tuno)(均来自桑科)，

-麻风树胶(chilte)和天然橡胶(均来自大戟科)。

如果需要天然胶基，例如，如果要避免使用合成成分(如矿物油残留物等)，糖胶树脂是最常用的胶基。天然成分的优势在于它们是可生物降解的，这对于通常在咀嚼后吐出的产品来说特别理想。

合成成分在商业上更容易获得，而且通常更便宜。

本发明的口香糖可以是硬的或软的口香糖。可以制备含有自组装肽的软口香糖，例如，根据Shivang A Chaudhary等人,Int J Pharm Investig.2012Jul-Sep；2(3)；123-133；Abolfazl Aslani等人,Adv Biomed Res.2013,2:72；Zumbé等人,2001,BritishJournal ofNutrition 85,Suppl.1,S31-S45(特别是，图8)；WO2014/152952A1；WO2006/127559A2或WO2007/143989A1。硬口香糖可以包括例如胶基、木糖醇、诸如P11-4的自组装肽(例如约100μg/口香糖)、碳酸氢钠、酒石酸、芳香剂例如柠檬芳香剂。

口香糖可以是压制的口香糖、夹心口香糖(在中心或在涂层中，优选在中心具有组装的自组装肽)或普通的口香糖。优选地，将组装的自组装肽包埋在牙科护理产品的基质中，即，对于口香糖而言，包埋在胶基中，其中均匀包埋的优点在于自组装肽在长期咀嚼时与人的牙齿连续接触。

或者，本发明的牙齿护理产品可包含明胶、白蛋白、卵磷脂、麦芽糖醇/山梨醇基质(matrix)、果胶或淀粉作为药学上可接受的基础成分，例如用于软嚼糖、橡皮糖、棉花糖或咀嚼玩具。例如，本发明的棉花糖通常包含白蛋白和/或明胶、甜味剂、水、自组装肽和空气。本发明的软嚼糖通常包含麦芽糖醇/山梨醇基质和自组装肽。

用于本发明的药学上可接受的基质例如橡皮糖，可以包括例如明胶和/或果胶、水、糖或糖替代物，例如以糖浆、酒石酸和/或柠檬酸的形式。本发明的橡皮糖包含组装的自组装肽，其中通常将自组装肽作为组装的预混合物添加。本发明的橡皮糖也可以用自组装肽包被。Zumbé等人,2001,British Journal ofNutrition 85,Suppl.1,S31-S45,教导了示例性的无糖橡皮糖及其制备，特别是表13或表14中，其中自组装肽以聚合状态加入，或自组装肽以任何形式加入，例如部分或完全单体形式，并且，当与基质的混合物中的pH低于7.5时，这导致自组装的进行。如果牙齿护理产品包含明胶，则其可以是A型或B型明胶。pH值不会降低到阻止明胶胶凝的程度。

所述受试者可以是人类受试者，但也可以是动物受试者，例如宠物，例如狗、马或猫。咀嚼玩具(或耐嚼动物饼干)可以是特别适合于动物使用的牙齿护理产品的合适形式，例如，用于宠物，例如用于猫、狗或马，特别是狗。咀嚼玩具可以涂覆有组装的自组装肽，和/或优选地，在咀嚼玩具中加入组装的自组装肽。这样的实施方案以低成本和付出为动物提供了获得用于牙齿脱矿质的治疗和预防手段的途径。本发明的咀嚼玩具可包含明胶或果胶，和自组装肽，通常带有动物喜欢的风味。

乳脂糖包含水体系中的脂肪乳液。除了自组装肽之外，本发明的自组装肽乳脂糖通常还包含糖或糖替代物(例如麦芽糖醇、山梨醇、木糖醇、乳糖醇和/或异麦芽糖醇，任选地，至少部分地以糖浆的形式，例如麦芽糖醇糖浆)、植物油(例如椰子油、大豆油、葵花籽油、菜籽油、橄榄油和/或花生油)、胶凝剂(例如明胶和/或果胶)，以及任选地，维生素、抗氧化剂(例如柠檬酸和/或抗坏血酸)、调味剂、着色剂、甜味剂(例如安赛蜜、阿斯巴甜和/或三氯蔗糖)。Zumbé等人,2001,British Journal of Nutrition 85,Suppl.1,S31-S45教导了示例性的无糖乳脂糖及其制备，特别是表12中，其中添加自组装肽并且调节pH以确保其组装状态，或者以组装状态添加自组装肽。

除了组装状态的自组装肽之外，本发明的肽咀嚼锭剂或咀嚼片剂还可以包含糖或糖替代物(例如麦芽糖醇、山梨醇、木糖醇、乳糖醇和/或异麦芽酮糖醇)，以及任选的成分，例如抗氧化剂(例如柠檬酸和/或抗坏血酸)、调味剂、着色剂和甜味剂(例如阿斯巴甜、安赛蜜和三氯蔗糖)。

本发明的牙齿护理产品中的肽浓度可以是0.1-5000mg肽/kg散装产品，例如0.1-1000mg肽/kg散装产品，0.1-500mg肽/kg散装产品，优选0.1-100mg肽/kg散装产品，0.5-50mg肽/kg散装产品，1-20mg肽/kg散装产品，或最优选5-15mg肽/kg散装产品或8-10mg肽/kg散装产品。以下实施例表明，此类浓度可减少或防止牙齿脱矿质。

作为本发明的优选肽的自组装肽在例如WO 2004/007532 A1中提供，其通过引用整体并入本文。WO 2004/007532 A1公开了能够形成三维支架的肽，从而促进从头磷酸钙的成核。这些人工肽在一个维度上组装形成β-片层和更高级的组件，如带状组件。可以形成自组装蛋白质的三维超分子结构，其对磷酸钙具有亲和力。

在现有技术中已经描述了几种可以使用的其它自组装肽(SAP)。例如，WO 2010/041636 A1描述了一种生物可吸收的肽组织封闭剂，其包含具有8-200个亲水性氨基酸和疏水性氨基酸交替结合的氨基酸残基的人工肽，其在生理pH下自组装成β-结构。在WO 2008/113030 A2中还公开了具有交替的疏水和亲水性残基或与细胞外基质相互作用的延伸段的自组装肽。WO 2010/103887 A1公开了自组装肽，其包含特定一级序列的碱性、疏水性和酸性氨基酸及其具有高强度的肽凝胶。WO2010/019651 A1涉及其它自组装肽。

另一个申请，WO 2007/000979 A1，描述了具有极性和非极性氨基酸的自组装肽。这些肽能够形成β-片层结构，其中非极性氨基酸残基以组装形式排列在结构的一侧。专利US6,548,630中描述了用作稳定宏观膜的两亲性自组装肽，其用于生物材料应用，例如缓慢扩散药物递送。

专利EP2 327 428 A2涉及一种药物组合物，其包含彼此互补的自组装肽纳米纤维和至少一种用于修复受损组织如心肌梗死后组织的细胞。

在本发明的上下文中，特别优选WO 2004/007532 A1中教导的自组装肽。最优选地，所述自组装肽是被称为寡肽104或P11-4(SEQ ID NO:1，QQRFEWEFEQQ)的自组装肽或具有SEQ ID NO:3，QQRFOWOFEQQ(也称为P11-8)的自组装肽，或具有SEQ ID NO:20，QQRQEQEQEQQ(也称为P11-20)的自组装肽，或其包含任何所述的肽。在本发明中最优选包含SEQ ID NO:1或由其组成的自组装肽。它也可以是与由SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20组成的肽具有至少60％的序列同一性的自组装肽。优选地，所述肽与由SEQ ID(优选SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:20)组成的肽具有至少70％、至少80％或至少90％的序列同一性。最优选地，所述肽与由SEQ ID NO:1组成的肽或所述SEQ ID NO:1的肽具有至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的序列同一性。或者，所述肽可以与由SEQ ID NO:3组成的肽或所述SEQ ID NO:3的肽具有至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的序列同一性。或者，所述肽可以与由SEQ ID NO:20组成的肽或所述SEQ ID NO:20的肽具有至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的序列同一性。下表1中提供了可用于本发明的自组装肽的实例。

自组装肽可以是包含Ac-N-末端和/或NH2-C-末端的修饰肽，或非修饰肽。

表1：

为了能够将矿物颗粒结合在牙齿表面，基质必须能够结合矿物颗粒并粘附在牙齿表面。因此，所述基质包含矿物颗粒的结合位点，使其能够结合牙齿表面上的颗粒，优选包含钙。例如，自组装肽表面上的带电氨基酸残基如Glu或Orn与羟基磷灰石颗粒和牙齿表面结合，牙齿表面也基本上由羟基磷灰石形成。不受该理论的束缚，据信两种反应都增加了形成的复合物的稳定性，以产生更持久的增白效果。三维自组织(例如在胶原蛋白、超分子组装体或自组装肽中发现的)的能力对于结合很重要。一般来说，高电荷表面会促进矿物颗粒的粘附。当蛋白质基质的表面显示谷氨酸或鸟氨酸残基(可能附着在磷酸钙或其他矿物颗粒上)时，它们的作用特别好。优选地，所述蛋白质包含5％或更多、10％或更多、20％或更多或30％或更多带电荷氨基酸残基，例如谷氨酸和/或鸟氨酸残基。

本发明优选的自组装肽具有可以在共有序列中概括的共同特征。特别地，本发明产品中使用的自组装肽包括式X1-X2-X1-X2-X1的序列，其中X1是具有酸性侧链或碱性侧链的氨基酸，X2是具有疏水性或极性侧链的氨基酸，所述氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和谷氨酰胺(SEQ ID NO:21)。X2可以是具有中性侧链的氨基酸。

在第一实施方案中，X1是具有碱性侧链的氨基酸。如果X1是具有碱性侧链的氨基酸，则所述氨基酸优选为鸟氨酸或精氨酸。当然，在同一自组装肽的不同位置，X1可以是不同的碱性氨基酸。优选地，SEQ ID NO:21的1位的X1是Arg，SEQ ID NO:21的3位和5位的X1是Orn。带有碱性侧链的氨基酸侧链将在pH值低于其标称pK值时被质子化。其中X1是具有碱性侧链的氨基酸时，自组装肽在高pH值下组装，例如在高于7.5的pH下。P11-8，即SEQ ID NO:3的肽是这种自组装肽的优选实例。

在本文优选的第二实施方案中，X1是具有酸性侧链的氨基酸，即包括-COOH基团的侧链。用于本发明这些产品的自组装肽包括式X1-X2-X1-X2-X1的序列，其中X1是具有酸性侧链的氨基酸，并且X2是具有疏水性或极性侧链的氨基酸，所述氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和谷氨酰胺(SEQ ID NO:22)。X2可以是具有中性侧链的氨基酸。

在高于标称pK值的pH值下，带有-COOH的氨基酸侧链将被去质子化。例如，在其侧链中包含-COOH基团的氨基酸，如天冬氨酸(Asp，D)和谷氨酸(Glu，E)，在高于中性的pH(即pH 7)下，基本上被去质子化，因为它们表现出低pKa(Asp:3.71；Glu:4.15)。在用于本发明产品的自组装肽中，含有-COOH基团的氨基酸侧链特异性地位于肽链中，以控制相邻肽之间的静电相互作用，即，使得当-COOH基团去质子化为-COO-时，相邻的、相同的自组装肽通过静电相互作用被排斥，并支配肽之间的键的缔合自由能。将pH值降低到低于某一阈值，即肽开始进行自组装的pH值，例如P11-4的约7.5的pH值(SEQ ID NO:1)，导致本发明的自组装肽中的一些-COOH基团质子化，这减少了肽之间的静电排斥作用并允许肽进行自组装。

能够在低于7.5的pH下进行自组装的本发明自组装肽(特别是具有SEQID NO:22)的优选实例是P11-4(SEQ ID NO:1)和P11-20(SEQ ID NO:20)。

例如，X2可以是具有极性中性侧链的氨基酸，例如谷氨酰胺。因此，本发明产品中使用的自组装肽可以包含序列Glu-Gln-Glu-Gln-Glu(SEQ ID NO:26)。在这种情况下，优选的自组装肽是P11-20。

本发明产品中使用的肽还可以包括式X1-X2-X1-X2-X1的序列，其中X1是具有酸性侧链的氨基酸，X2是具有疏水性侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(SEQ ID NO:23)。

在一个优选的实施方案中，用于本发明产品的自组装肽包括序列Glu-X2-Glu-X2-Glu，其中X2是具有疏水侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(SEQ ID NO:24)或Asp-X2-Asp-X2-Asp，其中X2是具有疏水侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(SEQ ID NO:25)。

互补的自组装肽也可用于本发明背景下。例如在EP 2 327 428 A2中提供了互补肽的实例。

优选地，本发明产品中使用的自组装肽包含Gln-Gln-Arg-Phe-Glu-Trp-Glu-Phe-Glu-Gln-Gln(P11-4,SEQ ID NO:1)序列或由其组成，或与其具有至少80％，优选90％序列同一性的序列。进一步优选的是，所述肽是修饰的P11-4，特别是在1位酰化并在11位酰胺化的肽，或与其具有至少80％，优选90％序列同一性的序列。SEQ ID NO:1是SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24的优选变体。

对于本文中称为P11-4的肽，从单体形式向组装的多聚体形式的转换受pH值控制。如果pH值低于7.5，则肽进行组装。如果pH值较高，则肽的状态为单体。

与SEQ ID NO:1具有至少80％或更多序列同一性的肽优选在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸5、7和9的位置包含谷氨酸或天冬氨酸。具体而言，与SEQ ID NO:1具有至少80％或更多序列同一性的肽序列优选在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸5、7和9的位置包含谷氨酸。优选地，剩余的氨基酸位置是具有疏水侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。优选地，剩余的氨基酸位置不是具有碱性侧链的氨基酸，即在中性附近的pH值下带正电荷的氨基酸。

在一个实施方案中，本发明产品中使用的肽包含与SEQ ID NO:1、3或20(优选SEQID NO:1)中描述的序列不同的序列或由其组成，其中1、2或3个氨基酸被取代。通常，SEQ IDNO:1、3或20的肽序列中的每个氨基酸残基都可以被另一个残基取代，只要得到的肽在pH值低于7.5时仍然能够进行自组装。优选的是，所述取代是保守性取代，即一个或多个氨基酸残基被类似极性的氨基酸取代，作为功能等同物。优选地，用作取代物的氨基酸残基选自与待取代的氨基酸残基相同的氨基酸组。例如，疏水性残基可以被另一个疏水性残基取代，或者极性残基可以被具有相同电荷的另一个极性残基取代。可用于保守取代的功能上同源的氨基酸包括例如非极性氨基酸，如甘氨酸、缬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。不带电荷的极性氨基酸的实例包括丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、酪氨酸和半胱氨酸。带电荷的极性(碱性)氨基酸的实例包括组氨酸、精氨酸和赖氨酸。带电荷极性(酸性)氨基酸的实例包括天冬氨酸和谷氨酸。

此外，本发明产品中使用的肽可以在一个或多个氨基酸位置进行结构修饰，例如通过引入一个或多个修饰的氨基酸。根据本发明，这些修饰的氨基酸可以是通过例如生物素化、磷酸化、糖基化、乙酰化、分支和/或环化而改变的氨基酸。此外，本发明的肽可另外或替代地包含其它修饰，例如末端封闭基团、甲酰基-、γ-羧基谷氨酸、羟基-、甲基-、磷酰基-、吡咯烷酮羧酸-、和/或硫酸根-基团。在一个优选的实施方案中，本发明的所有肽在其N-末端被乙酰化和/或在其C-末端被酰胺化，例如用NH₂-基团，最优选两端同时被修饰。一个特别优选的实施方案是肽P11-4，其N-末端被乙酰化，C-末端被NH₂-基团酰胺化。

本发明产品中使用的自组装肽的大小没有特别限制。本发明的肽可以是允许以pH依赖性的方式自组装的任何长度。优选地，肽的大小为约5-200个氨基酸，更优选9-100个氨基酸、10-50个氨基酸、10-30个氨基酸或11-20个氨基酸。甚至更优选地，自组装肽将具有约27个氨基酸、24个氨基酸、21个氨基酸、15个氨基酸或11个氨基酸的长度。在一个特别优选的实施方案中，自组装肽具有11个氨基酸的长度。

自组装肽可以通过肽合成领域中公知的任何合适的方法制备。例如，长度超过50个氨基酸的肽可以通过重组方法制备。在一个实施方案中，所述自组装肽作为融合肽制备。如本文所用，融合肽指包含N-末端或C-末端连接到第二氨基酸序列的目标自组装肽的第一氨基酸序列的融合物。第二氨基酸序列可以是亲和标签，即与自组装肽的N-末端或C-末端融合并对另一种化合物表现出增加的亲和力的氨基酸序列，从而允许纯化融合肽。优选地，在纯化后，例如通过在自组装肽和亲和标签之间提供蛋白水解切割位点，从目标自组装肽中除去标签序列。在一个实施方案中，自组装肽如Kyle等人，2010,Biomaterials 31,9395-9405和Kyle等人2009,Trends in Biotechnol.27(7),423-433中所公开的那样制备。

较小的自组装肽通常通过化学合成来制备。例如，可以通过固相或液相方法化学合成肽。已经描述了肽的溶液相化学合成方案(参见，例如，Andersson等人，Biopolymers55:227-250,2000)。对于固相合成，可以采用Merrifield(J.Am.Chem.Soc.,1964,85,2149-2154)中描述的方法。在此方法中，生长肽锚定在不溶性树脂上，未反应的可溶性试剂通过过滤或洗涤步骤除去，而不会造成人工损失。使用自动化设备可以很容易地进行固相肽合成。

本发明产品中使用的肽可以包含任何天然的蛋白氨基酸。此外，所述肽还可包含不常见的非蛋白氨基酸，例如肉毒碱、γ-氨基丁酸(GABA)、羟脯氨酸、硒蛋氨酸、高赖氨酸(hypusine)、羊毛硫氨酸、2-氨基异丁酸、脱氢丙氨酸、鸟氨酸(Orn，O)、瓜氨酸、β-丙氨酸(3-氨基丙酸)等。非蛋白氨基酸可通过翻译后修饰或在肽的化学合成过程中直接加入而纳入肽中。

用于本发明产品的自组装肽于一定的pH和离子强度下响应而进行自组装。在一个实施方案中，选择根据本发明使用的优选自组装肽，使得一旦它们的环境的pH降至低于某一pH，例如pH低于7.5，它们就进行自组装。本发明的自组装肽开始进行自组装的pH低于7.5，优选低于7.2，更优选低于7.0。例如，自组装肽P11-4(SEQ ID NO:1)和末端修饰的P11-4开始进行自组装的pH约为7.5。这意味着当pH值降至7.5以下时，自组装肽在很大程度上开始进行自组装。

如本文所用，自组装肽开始进行自组装的pH是指在低于该pH时观察到溶液中肽在很大程度上进行自组装，这意味着在牙齿护理产品中发现的肽至少约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或甚至约100％被自组装。一个优选的实施方案中，在牙齿护理产品中发现的至少约25％的肽在低于肽开始进行自组装的pH下组装。

优选地，在起始自组装的pH下，例如对于P11-4和修饰的P11-4，在pH约7.5时，仅约20％或更少，优选仅约15％或更少，更优选10％或更少，甚至更优选5％或更少的肽处于多聚体状态。

相反，在低于起始自组装的pH时，例如对于P11-4(SEQ ID NO:1)低于pH 7.5，观察到肽在溶液中明显的自组装，这意味着至少约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或甚至约100％的肽在溶液中被组装，即为多聚体或聚合体。

优选地，肽进行自组装的离子强度是生理离子强度。

如本文所用，所述肽的“自组装”是指肽与它们自身种类的其它肽(或具有类似结构的肽)通过非共价相互作用自发且可逆地组织成多聚体组装体。负责形成多聚体组装体的非共价相互作用包括范德华力、π-堆积、氢键、肽的氨基酸主链和/或氨基酸侧链之间的极性和离子相互作用。

本发明产品中使用的自组装肽优选组装成β-褶皱片层(β-pleated sheet)。在β-褶皱片层中，片状结构由不同多肽链中的残基之间或折叠多肽的不同部分中的残基之间的一系列氢键产生。通常，β-褶皱片层中的相邻多肽链是反向平行的，这意味着它们以相反的方向运行。然而，相邻的链条也可能并行运行。如果有几条多肽链参与片层的形成，那么片层就是一个刚性的壁状结构。多重褶皱片层提供了必要的韧性和刚性。可用于本发明产品的肽在自组装时形成稳定的二级结构。优选地，本发明中使用的肽将形成长的“β-带”，其包含厚度为单个分子的β-片层结构。肽在组装过程中可形成复杂结构，如螺旋带(单分子厚)、扭曲带(双带)、原纤维(带的扭曲堆叠)和纤维(缠绕的原纤维)。随着pH值的降低，可能会形成螺旋带、扭曲带、原纤维，最终形成纤维。优选地，本发明的牙齿护理产品包含自组装肽的纤维。

如本领域技术人员所知，肽的组装状态也受离子强度的影响。溶液的离子强度是溶液中所有离子浓度的函数。因此，即使在高于肽开始进行自组装的pH值下，即当肽在溶液中基本上是单体时，特别高的离子强度也能够触发肽的组装。

在生理范围内的离子强度下，即对应于150mMNaCl的离子强度下，P11-4在中性pH下组装(Carrick等人,2007.Tetrahedron 63(31):7457-7467)。技术人员将知道如何测定和测量溶液的离子强度。离子强度I通常根据公式I＝1/2∑z_i ²b_i计算，其中z是价因子，b_i是第i个离子浓度的摩尔浓度[mol/kg{H₂O}]。总和∑，是溶液中所有离子的总和。例如，150mMNaCl溶液的离子强度约为0.15。这也大约是血液的离子强度。口腔中存在的唾液的离子强度通常低得多，例如大约0.04。

本领域技术人员熟知多种测定制剂离子强度的方法。例如，离子强度可通过如下Russel因子测量溶液的电导(S＝1/Ω＝A/V)估算：I＝1.6x10^-5×电导率[μS/cm]。150mMNaCl溶液的电导约为80-100mS/cm。因此，根据以上和所述的电导估计，牙齿护理产品将具有低于100mS/cm，优选低于80mS/cm的电导。

此外，本领域技术人员知道多种测定本发明肽在给定离子强度下开始自组装的pH的方法。合适的方法在例如Aggeli等人的出版物(2003,JAm Chem Soc,125,9619-9628)中有描述。

本领域技术人员将能够通过常规实验确定是否基本上所有的自组装肽都处于组装形式。例如，可通过核磁共振(NMR)(如¹H-NMR)、圆二色光谱分析、动态光散射(DLS)分析、扩散波光谱法、天然电泳方法、粘度测量(流变性)、具有耗散监测的石英晶体微量天平(QCMD)等，优选通过天然电泳方法测定溶液中肽的组装状态。如以下实施例所述，可通过TEM检测自组装肽纤维的存在。

本领域技术人员已知，肽浓度可以影响肽的组装，即特别高的肽浓度可以触发组装。此外，异常低的肽浓度可阻止本发明的肽的组装，即即使在牙齿损伤和口腔中存在的低pH条件下也是如此。

通常，本发明牙齿护理产品的pH值在组装本发明牙齿护理产品的范围内。因此，对于包含SEQ ID NO:22的自组装肽，pH优选低于7.5，或者对于SEQ ID NO:21的自组装肽，其中X1是具有碱性侧链的氨基酸，pH高于7.5。然而，也可以改变pH值，例如，对于包含SEQ IDNO:22的自组装肽(例如P11-4)，pH值最高可达8.5或甚至最高可达11(Carrick等人，2007)，同时保持自组装肽处于组装形式，或者对于SEQ ID NO:21的自组装肽(其中X1是具有碱性侧链的氨基酸)，pH值最低可达5。例如，高离子强度和/或自组装肽的浓度可导致组装形式的维持。

因此，例如，可以制备具有弱碱性pH，例如pH 7.5-8或8-8.5的本发明牙齿护理产品，其包括组装形式的P11-4或P11-20(优选P11-4)。在这种情况下，将优选主要包含自组装肽纤维的组装肽预混物与在所需pH下缓冲的基质混合，其中自组装肽的离子强度和/或浓度高到足以维持组装形式的自组装肽。在使用时，例如在餐后或饮用酸性饮料后，牙齿护理产品的碱性pH值可中和口腔的pH值。在这种环境下，组装的自组装肽可以在牙齿上形成保护层。

关于包含SEQ ID NO:21(其中X1是具有碱性侧链的氨基酸，例如P11-8)的本发明牙齿护理产品，pH呈弱酸性(例如在7-7.5、6-7或甚至5-6的范围内保持组装形式)可能是有利的，因为人类通常认为酸性pH更可口。

用于获得所需pH值的合适缓冲剂和pH调节剂是本领域已知的。

为了防止对已经脱矿质的牙齿产生磨蚀作用，本发明的牙齿护理产品不是磨蚀性的。磨损通常是由颗粒引起的。特别地，本发明的牙齿护理产品不含或基本上不含相关浓度的研磨剂，特别是基本上不含颗粒，尤其是矿物颗粒。常用的研磨剂为碳酸钙、二氧化硅、氢氧化铝以及铝或钙的磷酸盐。如果本发明的牙齿护理产品是磨蚀性的(如典型的牙膏)，当它们用于咀嚼时，将导致已经脱矿质的牙齿的进一步磨蚀或侵蚀。

磨损取决于不同的参数，特别是颗粒的硬度、尺寸及形状。优选地，所述牙齿护理产品不包含显著量的硬颗粒，特别是具有比牙本质的莫氏(MOSH)硬度高3的莫氏硬度的颗粒。较大的颗粒比较小的颗粒更具磨蚀性。因此，牙齿护理产品优选不包含显著量的大颗粒，例如具有1μm或更大、0.5μm或更大或0.1μm或更大的尺寸。圆形颗粒比有边缘的颗粒更不易磨蚀。因此，可能包含的圆形颗粒的量高于其他类似的具有边缘的颗粒的量。

优选地，本发明的牙齿护理产品不包含0.4wt％或更多的具有至少0.1μm大小的矿物颗粒，更优选地，它们包含小于0.3wt％的具有至少0.1μm大小的矿物颗粒、小于0.2wt％的具有至少0.1μm大小的矿物颗粒或小于0.1wt％的具有至少0.1μm大小的矿物颗粒或小于0.01wt％的具有至少0.1μm大小的矿物颗粒。它们也可以不含矿物颗粒。

为了改善产品的味道和可接受性，本发明的牙齿护理产品可以包含糖和/或糖替代品，其优选不会引起蛀牙严重的糖和/或糖替代品，例如多元醇或糖醇如山梨醇、甘露醇、麦芽糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖醇、木糖醇和/或赤藓糖醇，或D-塔格糖和/或海藻糖。有利地，前述实施方案中任一个的牙齿护理产品不含致龋的糖如蔗糖。因此，优选地，产品是无糖产品，即，它们不包含大量的蔗糖或葡萄糖，或一点不含。可以使用基于例如Zumbé等人,2001,British Journal of Nutrition 85,Suppl.1,S31-S45公开的制剂中适当修饰的无糖产品，其进一步包含自组装肽并且具有控制的pH以确保肽的组装状态，如本文公开的，例如通过选择合适的缓冲剂和pH值。

特别有利的是，除了自组装肽之外，牙齿护理产品还包含多元醇，例如木糖醇、赤藓糖醇或山梨醇，其已显示出抗致龋性，优选木糖醇。它还减少生物膜和斑块，从而促进本发明的自组装肽接近牙齿表面和潜在的损伤。当然，木糖醇不适用于犬、牛、山羊、兔子或其他对其有毒的动物。木糖醇可用于本发明的产品中，用于人类受试者或用于例如猫，优选人类受试者。

本发明的牙齿护理产品可进一步包含，例如，芳香剂(如柠檬香精、焦糖、香草醛、薄荷醇)、防腐剂(如乙醇、苯甲酸钠)、着色剂(如溶剂红、酸性蓝3)、活性剂(如氟化物，优选以叔胺如氟化胺的形式、或有机氟化物如单氟磷酸钠)、硝酸钾和/或草酸盐。

只要本发明的牙齿护理产品不具有如上所定义的磨蚀性，它可以包含磷酸盐，例如磷酸钠、磷酸钙，例如羟基磷灰石。磷酸盐可能有助于再矿化，也可能有清洁作用。例如，磷酸盐可以存在于溶液中。

本发明的牙齿护理产品可以包含焦磷酸盐。它们对牙齿表面具有亲水作用，可防止外源性染色。

本发明的牙齿护理产品可以包含pH调节剂，例如碳酸钠/碳酸氢钠或尿素。

可用于本发明背景下的缓冲剂可以是例如碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、碱土金属碳酸盐、碱金属柠檬酸盐或碱金属磷酸盐中的一种或多种，或其任何混合物。优选的缓冲剂是碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钙、柠檬酸钾或磷酸氢二钾或其任意混合物。更优选地，缓冲剂是碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、柠檬酸钾和磷酸氢二钾或它们的任意混合物。特别地，所述缓冲剂是碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，或它们的任何混合物(例如，如在US 9,511,021中公开的)。

值得注意的是，即使牙齿护理产品的pH是碱性的，即pH高于7.5，例如pH为7.5-8，如果离子强度足够高，预配制的组装的自组装肽也能保持其组装形式。因此，可以在进食或饮用之后使用本发明的弱碱性的牙齿护理产品以中和酸性pH，同时仍然能够递送组装的自组装肽。然而，在人类食用的情况下，酸性pH值通常会产生更令人愉悦的味道。

另一方面，本发明提供了一种制备实施方案1-13中任一项的牙齿护理产品的方法，包括以下步骤

a)提供组装的自组装肽的第一基质，

b)提供药学上可接受的基质作为第二基质，其中步骤a)和b)可以以任何顺序进行，和

c)任选地将第一和第二基质与其它成分混合，

d)形成牙齿护理产品，

e)任选地，包装牙齿护理产品。

步骤a)中组装的自组装肽的第一基质可以例如通过干燥pH低于7.5的溶液来制备。基质可以是凝胶或干物质，例如，可通过喷雾干燥、冻干或蒸发获得。

优选地，对于步骤a)，首先通过将pH升高至至少8将肽单体化。然后，滴定pH，优选缓慢滴定至pH低于7.5，以允许有序形成自组装肽的β-片、原纤维和纤维。有利地，降低pH值直到基本上所有的自组装肽以组装(或聚合)形式存在。

或者，在产生自组装肽之后，调节pH，并且如果需要，将pH降低至小于7.5，从而形成自组装肽的β-片、原纤维和纤维(如果尚未存在的话)。优选先单体化随后滴定至低pH(<7.5)，因为自组装肽的结构更有序，并且避免了不规则的卷曲结构。这将使产品更加均一，重现性更高。

药学上可接受的基础成分，即第二基质，可以是本文所述的任何基础成分。优选地，它是如上定义的胶基。这种胶基的制备是本领域已知的。

在步骤c)中，混合第一和第二基质。优选地，它们是均质的。均质化导致在牙科护理产品中自组装肽在药学上可接受的基础成分中基本上均匀分布。均质化可以通过混合来进行，例如使用搅拌机、均质化设备、直通均化器、分散器或使用旋转膜等。优选使用搅拌机。

在任何情况下，优选自组装肽在与药学上可接受的基础成分混合之前已经处于组装形式。本发明人已经发现，这有助于自组装肽的基质的自组装，特别是自组装肽的原纤维和纤维的自组装。令人惊讶的是，均质化不会导致此类基质结构的崩解。因此，牙齿护理产品优选包含组装的自组装肽的原纤维和/或纤维，例如P11-4的原纤维。

随后可以形成牙齿护理产品，例如通过挤出、通过在模具中形成混合物(例如通过浇注或加压)、和/或通过切割、撕裂、或形成组装的自组装肽的基质和自组装肽的硬化混合物。例如，口香糖通常被切成条状，但也可以做成球状。

在一个实施方案中，例如如步骤a中制备的组装的自组装肽的基质可以在包衣步骤中应用于牙齿护理产品，例如口香糖，特别是本发明的口香糖。例如，可任选地通过喷雾干燥将包含优选具有pH低于7.5的组装的自组装肽(如P11-4)的溶液作为涂层应用。

之后可以包装牙齿护理产品。包装可以是每种产品的单独包装，例如在纸或箔或它们的组合中，例如口香糖的常规包装，和/或散装产品包装，例如几个单独的牙齿护理产品在一个包装中，例如在玻璃、纸质包装或塑料中。当然，几个包装可以进一步包装，例如用于零售。

包装的牙齿护理产品可包括如本文所公开的与产品的医疗和/或美容用途相关的印刷信息，例如传单或标签。

本发明还提供了一种可通过本发明方法获得的牙齿护理产品。

一方面，本发明提供了一种如本文所述的用于减少具有脱矿质牙齿的受试者的牙齿表面脱矿质的牙齿护理产品，特别是用于减少具有脱矿质牙齿的受试者的牙齿表面的进一步脱矿质。

在本发明的背景下，脱矿质牙齿不一定意味着龋齿的存在，而是脱矿质和再矿化的平衡向牙齿脱矿质的转变。例如，受试者可能患有倾向于脱矿质的疾病或病症，例如，在健康受试者中发生的防止或减少牙齿再矿化的疾病或病症。本发明人惊奇地发现，在再矿化通常不会导致令人满意的结果的情况下，应用本发明的牙齿护理产品可有助于防止或减少进一步的脱矿质。例如，所述牙齿护理产品可用于治疗患有口干症、缺涎症、磨牙症、牙本质过敏和/或牙齿侵蚀的受试者，即，具有脱矿质牙齿的受试者可以是患有一种或多种这些疾病或病症的受试者。优选地，通过施用本发明的牙齿护理产品，在这些疾病中，在牙齿表面上形成自组装肽层，所述自组装肽层可被侵蚀或脱矿质，即，其在牙齿本身被损坏之前充当牺牲层。

在一个实施方案中，受试者患有口干症。口干是口干症的主观感觉，通常(但不总是)与唾液腺功能减退有关。口干症可能与唾液中以下成分的变化或唾液流量减少有关，或没有确切的原因。

这种症状非常常见，通常被视为多种药物的副作用。这在老年人(主要是因为这一群体倾向于服用多种药物)或滥用药物者(例如甲基苯丙胺的长期使用者)或经口呼吸者中更为常见。脱水、涉及唾液腺的放疗、化疗和多种疾病可导致唾液分泌减少(缺涎症)，或唾液稠度改变，从而主诉口干。有时没有确切的原因，有时可能是主诉者的心理原因。

缺涎症是根据病史和检查做出的临床诊断，但已对唾液流速降低给出了客观定义。唾液腺功能减退已被定义为整体和/或单个腺体流速的任何客观可证明的降低。正常人的未刺激全唾液流速为0.3-0.4ml/分钟，低于0.1ml/分钟为明显异常。受刺激后唾液流速5分钟内每腺体低于0.5ml或10分钟内每腺体低于1ml时即为降低。主观口干症一词有时用于描述没有任何口干的临床证据的症状。口干症也可能由唾液成分的变化(从浆液变为粘液)引起。唾液腺功能障碍是存在口干症、缺涎症和多涎的总称(https://en.wikipedia.org/wiki/Xerostomia)。

因此，在一个实施方案中，口干症与缺涎症有关，例如，未刺激的全唾液流速低于0.1ml/分钟。受试者也可能缺涎症，但没有口干的主观感觉。

唾液分泌减少会显著降低牙齿的再矿化的速度，从而使平衡转向脱矿质。没有唾液的缓冲作用，蛀牙成为一种常见的特征，并可能比其他情况更积极的进展(“猖獗龋”)。它可能会影响正常情况下不受影响的牙齿表面，如牙颈龋齿和根面龋。这种情况常见于接受过累及大唾液腺的放疗的患者，称为放射性龋。

唾液分泌减少可能是由于生理效应，如焦虑或脱水，或由于干性用药，如抗胆碱能药、拟交感神经药物或利尿药。吸烟是另一个可能的原因。毒品滥用也可能导致口腔干燥和牙齿脱矿质。口干症也可能由自身免疫疾病引起，这些疾病会损害产唾液细胞，如干燥综合征(

syndrome)，如原发性或继发性干燥综合征。口干症也可能与乳糜泻有关。激素紊乱，如糖尿病控制不佳、慢性移植物抗宿主病或因肾功能损害而接受血液透析的患者液体摄入量低，也可能因脱水而导致口干。口干症可能是丙型肝炎病毒(HCV)感染的结果。唾液腺功能障碍的一个罕见原因可能是结节病。感染人类免疫缺陷病毒或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)可导致相关的唾液腺疾病，称为弥漫性浸润性淋巴细胞增多症(DILS)。

在一个实施方案中，受试者患有磨牙症，即，过度的牙齿研磨或颌骨咬紧。磨牙症通常与几种症状有关，包括牙齿过敏、颌骨肌肉疼痛、头痛、牙齿磨损和牙齿修复体(如牙冠和补牙)损坏。在这种情况下，本发明的牙齿护理产品不一定能减少牙齿研磨或颌骨咬紧，但其功能是防止或减少牙齿的进一步脱矿质。

受试者还可能患有牙本质过敏症。牙本质过敏与牙齿疼痛有关，牙齿锐痛且持续时间短，由暴露的牙本质表面对刺激(通常为热刺激、蒸发刺激、触觉刺激、渗透刺激、化学刺激或电刺激)的反应引起；并且其不能归因于任何其它牙科疾病。一定程度的牙本质过敏是正常的，但在日常活动(如喝冷饮)中通常不会感到疼痛。

受试者还可能有牙齿侵蚀。酸侵蚀是牙齿磨耗的一种。其定义为由于非细菌来源的酸的化学溶解而造成的不可逆的牙齿结构的丧失。酸侵蚀始于牙釉质，导致其变薄，并可发展至牙本质，使牙齿外观呈暗黄色，并导致牙本质过敏症。侵蚀最常见的原因是酸性食物和饮料。一般而言，已知pH值低于2-3的食物和饮料会引发牙侵蚀效应。胃食管反流病也可能与侵蚀相关。

优选地，施用所述牙齿护理产品的受试者在干燥量表(Challacombe Scale)上具有至少1、优选至少4或最优选至少7的临床口腔干燥量。

本发明的牙齿护理产品可施用于受试者的口腔并进行咀嚼。有利地，其在口中保持至少3分钟。牙齿护理产品也可以在口中保持至少4分钟，优选至少5分钟或至少10分钟。

本发明人已经发现，这允许牙齿护理产品的两种基质，即导致在牙齿表面上形成组装的自组装肽的保护层的组装的自组装肽的基质，和例如有助于清洁牙齿的牙齿护理产品的树胶基质的至少部分分离。自组装肽的保护层的形成减少了进一步的脱矿质。与增加的再矿化相反，这种效应不依赖于唾液的存在，因此也可用于唾液减少或消失的受试者中。

本发明的需要或允许咀嚼的牙齿护理产品，例如糖果、锭剂、橡皮糖、乳脂糖、口香糖、饼干或咀嚼玩具，特别地，与长时间(例如5分钟或更长)应用相关的此类形式，例如口香糖(用于人)或咀嚼玩具(用于动物)，具有特别的优点，因为它们的使用可以同时减少生物膜或牙斑，从而便于接近牙齿表面和潜在的损伤。此类产品还会增加唾液分泌。

因此，优选地，在咀嚼本发明的牙齿护理产品时，胶基清洁牙齿表面(例如，其减少表膜和/或生物膜/和/或食物碎屑和/或结石和/或污渍的存在，优选地，所有这些)，并且组装的自组装肽的基质在牙齿表面上提供减少或防止牙齿表面脱矿质的膜。

如果牙科护理产品被受试者咬嚼，即咀嚼，则是有利的。本发明人已经发现，优选地，咀嚼本发明的牙齿护理产品5分钟可使唾液流量增加至少10倍。

任选地，所述牙齿护理产品还包含催涎剂，例如副交感神经药。因此，所述牙齿护理产品除了可以减少进一步的脱矿质外，还可以减少口干症的其他症状，特别是口干的感觉。然而，这在本发明的背景下不是必需的。

与自组装肽的其它标准制剂形式(盖仑形式，galenic forms)(例如牙膏或凝胶)相比，本发明的牙齿护理产品可更容易地被受试者使用，例如，其可在工作场所或在旅行时使用，且其不需要使用脸盆或水。使用方便可提高受试者的依从性。与牙膏相比的另一个优点是不存在通常包含在牙膏中的研磨剂，这对于已经具有病理性脱矿质牙齿的受试者尤其有益。此外，本发明的牙齿护理产品的基本上干燥的制剂增加了产品的稳定性，其可以储存更长的时间。

本发明的牙齿护理产品可以例如每天至少使用1次，优选每天至少使用2次。也可每日至少使用3次、每日4次或每日5次。例如，可在受试者口干感增强时使用。所述牙齿护理产品也可以在餐后或食用零食后使用，任选地，代替刷牙。所述牙齿护理产品也可在睡醒后使用，以减轻口干症。优选地，受试者定期使用牙齿护理产品，因而通过使用本发明的产品可以避免进一步的脱矿质。例如，所述牙齿护理产品可以连续使用至少2天、连续使用至少3天或连续使用至少5天。该产品优选使用至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少1个月、至少2个月、至少6个月或至少1年。本产品可在余生使用，如每日1次。

有利地，所述牙齿护理产品降低了龋齿的发生率，并且优选地预防了龋齿，特别是在具有脱矿质牙齿的受试者中。本发明的牙齿护理产品还可以减轻与牙本质过敏相关的疼痛。

如本文所用，“受试者”是指具有牙齿的任何受试者，例如哺乳动物如人、狗、猫科动物如猫、啮齿动物如小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、牛、马、骆驼、绵羊、山羊或其他具有牙齿的宠物、农场或动物园的动物。优选地，受试者是人。

在本发明的上下文中，除非明确提及或从上下文中能够清楚，否则“一个”不限于单数，还可以表示“一个或多个”。例如，除非另外明确提及，否则提及“一颗牙齿”包括提及多于一颗牙齿，特别是受试者的所有牙齿。

以下实施例和实施方案旨在说明而非限制本发明。本文引用的所有参考文献均整体并入本文。

附图说明

图1：制备包衣口香糖的通用生产流程。

图2：生产乳脂糖的通用生产流程。可以在在线混合之后添加温度敏感材料。

图3：本发明的口香糖的实例。

图3A：包含组装的自组装肽和胶基(例如糖胶树脂)的口香糖产品。

图3B：口香糖A)外壳包含调味剂B)基质，调味剂B)基质包含组装的自组装肽和胶基，例如糖胶树脂。

图3C：包衣口香糖：A)包含调味剂和/或自组装肽的外壳/包衣。B)核包含组装的自组装肽和胶基基质。

图3D：包衣口香糖：A)外壳包含组装的自组装肽。B)核包含胶基，例如糖胶树脂。胶基可以由压缩的树胶制成。

图4：根据实施例1B最终制备的包含组装的P11-4的压制口香糖的示例。

图5：通过滴定根据实施例1A制备的包含组装的P11-4的乳脂糖的横截面。

图6：具有保护层的实施例2的SEM照片。a)完整的人牙釉质(在实验过程中用指甲油覆盖，并去除以进行检查)b)酸侵蚀实验后暴露的有保护层的人牙釉质，显示与图7相比脱矿质减少，证明了处理的保护作用。放大倍数：1000×，信号：SE2，EHT：10。

图7：无保护层的实施例2的kVSEM照片。a)完整的人牙釉质(在实验过程中用指甲油覆盖，并去除以进行检查)；b)在酸侵蚀实验后暴露的无保护层的人牙釉质，显示严重的脱矿质。放大倍数：1000×，信号：SE2，EHT：10kV。

图8：参考组件P11-4的TEM，TEM，50'000×，50kV，AMT。

图9：人工咀嚼的乳脂糖-唾液的TEM，显示P11-4的清晰的纤维束，参见实施例3。TEM，50'000×，50kV，AMT。

图10：根据实施例1通过预混合和滴定制备的溶液。含量为35mg×ml^-1。

图11：根据实施例1制备的溶液，未进行滴定，得到微黄色不透明溶液。含量为35mg×ml/L。

图12：用于人工咀嚼牙齿护理产品的设备。类似的设备是明尼苏达州大学的牙齿咀嚼机器，例如在https://www.youtube.com/watch？v＝LEJymW-g0B0上所示。

图13：单体和聚合自组装肽保护作用的比较。A：鸡蛋网格上的样本分布。左上格为原始未处理表面，涂有指甲油保护，右上格为带有聚合自组装肽的样本1。左下格为带有单体自组装肽的样本2，右下格为无保护层的表面。B：带有绘制网格的空鸡蛋，涂有美宝莲40s快干指甲油。顶部方块(用“V”表示)完全涂有指甲油，呈现出未受干扰的天然表面。其余的三个方块保留空白，以供后续研究使用。C：带网格的染色鸡蛋，用于样本分配。左上方略带白色的外观是由于指甲油的保护，因此不会导致颜色的良好粘附。D：在结晶皿中的Coca

中温育蛋壳。用2g铅平衡涂有样本的部位，以确保适当平衡并与液体中的酸充分接触。E：用水冲洗后，在Coca

中温育5分钟后加入鸡蛋3。左上：用指甲油保护的区域“V”，右上：聚合物P11-4“P”，左下：单体P11-4“M”，右下：对照“C”。F：包括待分析区域的黑白转换表面的示例(细线)。G:ImageJ输出的“分析颗粒”结果。在具有聚合自组装肽的样本和具有单体自组装肽的中间保护的侵蚀模型中观察到高百分比的受保护表面，并且大多数侵蚀是在没有保护的情况下，即在对照的情况下观察到的。值得注意的是，颜色没有粘附到指甲油上，这解释了指甲油样本显示的黑色区域为0％。

实施例

实施例1：本发明牙齿护理产品的制备

A)本发明乳脂糖的制备

在提供材料后，基于计算机的称重系统确保所有配料都经过精确称重，以用于生成第一基质的后续制备过程。在100-150℃搅拌下进行制备。

同时，制备预混物。将自组装肽(例如，P11-4)称重到合适的容器中。然后在搅拌下将粉末转移到另一个含有碱性溶剂的容器中，即用0.1N NaOH溶液调节pH值为8的水。添加自组装肽后，将溶液在碱性pH下保持5min，以确保单体肽。然后，用酸，优选磷酸或柠檬酸0.1N，将溶液缓慢滴定至pH 6，开始肽的自组装。这将产生稍微不透明的溶液。肽的浓度可以是例如20至100g/L。

为了满足产品要求，在在线混合期间或在线混合后直接在冷却通道中连续添加预混物。优选在最高温度为85℃的冷却阶段。将所得乳脂糖粗产品拉伸，用锥形辊成形为杆状，然后用平整辊成形为棒状。在这种形状转变之后，已经冷却的乳脂糖被切割并在线单个包装。包装好的乳脂糖可以散装包装或储存，等待进一步包装。

或者，无需滴定即可按如下方式制备散装产品：

在提供材料后，基于计算机的称重系统确保所有配料都经过精确称重，以用于生成第一基质的后续制备过程。在100-150℃搅拌下进行制备。

同时，制备预混物。将自组装肽(例如，P11-4)称重到合适的容器中。然后在搅拌下将粉末转移到另一个含有pH 6的酸溶液的容器中，优选磷酸或柠檬酸。如果需要，用相应的酸校正pH值。这将产生一种不透明的淡黄色粘性溶液。肽的浓度可以是例如20至60g/L。

为了满足产品要求，在在线混合期间或在线混合后直接在冷却通道中连续添加预混物。优选在最高温度为85℃的冷却阶段。将所得的乳脂糖粗产品拉伸，用锥形辊将其成型为杆形，然后用整平辊将其成型为棒状。在这种形状转变之后，已经冷却的乳脂糖被切割并在线单个包装。包装好的乳脂糖可以散装储存，等待进一步包装或包装。

B)本发明口香糖的制备

在提供材料之前，准备好SAP基质。将自组装肽称重到合适的容器中。然后在搅拌下将粉末转移到另一个装有碱性溶剂的容器中，即用0.1N NaOH溶液调节pH值为8的水。添加自组装肽后，溶液在碱性pH下保持5min，以确保单体肽。然后，用酸，优选磷酸或柠檬酸0.1N，将溶液缓慢滴定至pH值为6，开始肽的自组装。这将产生稍微不透明的溶液。肽的浓度可以是例如20至100g/L。然后将该溶液干燥，例如冷冻干燥或喷雾干燥，保留基质的原纤维结构。

提供材料后，基于计算机的称重系统可确保精确称量所有成分，以备后续混合工序使用。加入成粒剂(最优选山梨醇)和润滑剂(例如硬脂酸镁或滑石粉等)，然后在搅拌机中混合。之后，加入组装肽的粉末，并将自由流动的粉末直接加入压制设备中。

为了增加适口性，可在制备散装产品后包衣，即在单独的容器中。为此，可如上所述制备肽溶液。然后将该溶液通过均质化添加调味剂、着色剂等，并随后用于压制口香糖的包衣。

包衣后，口香糖直接进行泡罩(blister)并密封保存，也可选择进一步包装。

实施例2：酸侵蚀试验

样本制备

材料

牙釉质盘制备

-从冰箱中取出牙齿，最好是人的牙齿

○牙齿应具有完整的表面

-吸干

-切除部分牙釉质

-储存在PBS溶液中

温育

-从PBS溶液中取出切片

-用自来水冲洗

-在再矿化缓冲液中温育48h

-从溶液中移除

-用2K胶将牙釉质片涂在人工咀嚼设备的人工牙齿上

-用3mL人工唾液咀嚼含有或不含组装P11-4(33mg/ml)的人造乳脂糖5min

○去除“唾液”

○取1片釉质放入“唾液”中温育5min

-从牙齿上取下牙釉质片

-将釉质切片在可口可乐中温育30分钟

-将其放在吸水纸上

-风干24小时

扫描电镜准备

-将样本放在导电胶带上的SEM样本架上

-在氩气下的金等离子体中溅射样本30s

○ 8*10-2Pa 30s@20mA镀金层

在SEM“Carl Zeiss””中分析样本。

如上所述，用包含组装的P11-4或空白(仅唾液)的乳脂糖人工咀嚼釉质切片，然后通过在可口可乐中温育30分钟诱导酸侵蚀。图6(未形成保护层)和图7(具有P11-4，具有保护层)示出了具有或不具有通过咀嚼具有组装的P11-4的乳脂糖而形成的保护层的代表性釉质切片的SEM照片。具有酸保护/牺牲层的样本比没有保护的样本显示出更低的侵蚀。

实施例3：从基质中洗脱的纤维的测定

材料

-组装的P11-4作为对照

-uL-移液器Soccorex

-Cu-TEM模板200目EMS 215-412-810

-3％乙酸铀酰EMS 22400-2批号：1B155953/131007

-EM900 TEM Zeiss

样本：

-将1片含有或不含组装的P11-4(35mg/ml)的乳脂糖放入3mL人工唾液中(参见实施例2)

-在人工咀嚼设备中人工咀嚼5min。

-去除上清液(唾液)

方法透射电镜

-以1:63的比例用H₂O稀释样本(10mg/mL)

-将1μL对照溶液置于TEM网格样本上

-将20μL水放在封口膜上

-将TEM网格轻轻放置在封口膜上，深色部位朝上，靠近液滴

-在TEM碳涂层网格(六边形)上应用10μL样本

-温育10分钟

-用纸巾清除未结合的样本

-将网格放入20μL的3％乙酸铀酰溶液中

-温育40秒

-用纸巾清除未结合的乙酸铀酰

-用蒸馏水清洗温育2次

○用移液管将5μL液滴移至网格顶部并将其移除

-室温下干燥20分钟

-将样本引入TEM的样本架中

-在50kV下分析，真空度至少9*10-6hPa

人造唾液包括在咀嚼本发明的乳脂糖之后的自组装肽P11-4的组装纤维，即在整合到乳脂糖的基部中之后并且通过咀嚼从乳脂糖中提取之后，组装的自组装肽保持其组装形式。这允许在牙齿上形成保护性牺牲层，以保护牙齿免受侵蚀。

实施例4：单体和组装的自组装肽对酸侵蚀的保护作用的比较

本研究的目的是基于乳脂糖的示例性实验，确定与单体自组装肽相比，聚合自组装肽的保护作用。

由于可用的人类牙齿有限，已通过使用鸡蛋代替人类牙釉质进行侵蚀试验建立了替代模型。即使鸡蛋是由碳酸钙制成的，而不是像人类牙齿那样由磷酸钙制成，该模型仍适用于显示对酸性攻击的保护作用。鸡蛋的碳酸钙结构呈栅栏结构，类似于人牙齿中磷酸钙的晶体结构。此外，人类牙齿中也含有一定比例的碳酸钙(～4％)(Klimuszko等人,2018Odontology106:369-376)。

牙齿侵蚀中的酸性侵蚀可能由乙酸、磷酸或其他有机酸或无机酸引起。出于转化目的，使用了Coca

这是一种消费广泛的大幅降低口服pH值的饮料。全球每天使用17亿份可口可乐。

在该半定量酸侵蚀模型中检验的假设是，与单体自组装肽P11-4相比，聚合或聚集的自组装肽P11-4是否更好地保护蛋壳。

为了证明这一假设，制作了两组乳脂糖并进行比较。基本配方是相同的，然而，将肽作为单体添加到单体形式中，并作为水凝胶添加到聚合物形式中。该材料在乳脂糖生产过程中，在加热步骤之后，但在使用混合棒之前添加。

材料和方法

数字显微镜

切取乳脂糖，在15mL离心管中称取4.2g。加入3mL等渗NaCl溶液，模拟口腔中存在的天然唾液和体积，并将样本置于旋转轮中过夜。

将生鸡蛋小心地从一边打开，弃去蛋清和蛋黄。然后将空鸡蛋清洗并干燥。干燥后，在鸡蛋的两个地方，首先用细铅笔画出网格，然后涂上指甲油，见图13B。

指甲油干燥后，鸡蛋用蓝色食用染料“亮蓝FCF(brilliant blue FCF)”染色，用海绵将颜色直接涂在鸡蛋上，以提高可见度。然后用干净的海绵去除多余的颜色，使颜色均匀分布，见图13C。然后将部分着色的鸡蛋在40℃下干燥2小时。

干燥后，按照图13A中的定义分配样本

用移液管将25μL提取的样本或对照放在干燥的鸡蛋表面，让其浸入其中。以确保方块被完全覆盖。

在40℃干燥1h后，将蛋壳置于21℃的可口可乐(纯)中，并按照图13D培养5、10和20min。

温育后，取出蛋壳(图13E)，用水洗涤，然后用丙酮除去指甲油。之后将蛋壳风干。

随后，使用数字USB显微镜对应用样本的区域进行研究，以了解染料的分布情况。在酸性液体侵蚀蛋壳的区域，由于颜色会随着蛋壳表面侵蚀，因此在表面上发现的颜色较少。

使用ImageJ打开图片。选择每张图片并将其转换为二元图像，即外壳被保护的蓝色外壳较暗区域转换为黑色，外壳被侵蚀的较亮区域转换为白色。图13F中示出了示例性图片。在网格中，使用“分析-颗粒(Analyze-Particle)”功能分析尽可能大的方块。

应注意，指甲油可防止染料接触蛋壳表面，因此即使蛋壳在指甲油下得到最佳保护，洗涤后颜色也会消失。

结果

表2：通过ImageJ粒子分析获得的计算数据。根据网格定义，“V”代表指甲油(天然结构)，“P”代表聚合自组装肽，“M”代表单体自组装肽，“C”代表无保护表面。

ID	计数	总面积	平均大小	面积％
					12455_鸡蛋3_5min(3)_V.jpg	18	102	5.667	0.007
12455_鸡蛋3_5min(4)_P_bw	741	1011800	1365.452	88.384
					12455_鸡蛋3_5min(5)_M.jpg	310	130124	419.755	68.398
12455_鸡蛋3_5min(6)_C_bw.tif	386	213628	553.44	67.561
					12455_鸡蛋2_10min(4)_V_bw	5	8	1.6	6.59E-04
12455_鸡蛋2_10min(5)_P_BW	1450	580723	400.499	62.515
					12455_鸡蛋2_10min(7)_M_bw	3425	755952	220.716	57.699
12455_鸡蛋2_10min(1)_C_bw	1587	461484	290.79	50.656
					12455_鸡蛋4_20min-指甲油	缺失
12455_鸡蛋4_20min(2)_P_bw	614	660990	1076.531	53.782
					12455_鸡蛋4_20min(3)_M_bw	1450	546241	376.718	46.758
12455_鸡蛋4_20min(4)_C.jpg	6501	956391	147.114	39.988

结论

获得的数据证实了以下假设：与单体自组装肽P11-4“M”相比，聚合自组装肽P11-4“P”带来更好的侵蚀保护。与单体形式和对照“C”相比，在5分钟的短温育时间内效果最高，其中聚合材料保护大约20％以上的面积，图13G。随着温育时间的延长，效果以及数值之间的差异变小，但聚合自组装肽仍然比单体自组装肽具有更好的保护作用，单体自组装肽仍然比对照具有更好的保护作用。

本发明的实施方案

本发明提供了

1、一种牙齿护理产品，包括

(i)包含SEQ ID NO:21的序列的自组装肽，其中所述自组装肽基本上以组装形式存在于所述牙齿护理产品中(特别是，至少80％，优选至少90％或至少95％)，和

(ii)药学上可接受的基础成分，

其中所述牙齿护理产品是选自口香糖、软嚼糖、橡皮糖、耐嚼糖果、咀嚼玩具、乳脂糖、锭剂和片剂的基本上固体的产品，

并且其中所述牙齿护理产品不是磨蚀性的。

2、实施方案1的牙齿护理产品，其中将组装形式的自组装肽包埋在药学上可接受的基础成分中，优选包埋在胶基中。

3、实施方案2的牙齿护理产品，其中所述胶基包括聚合物、增塑剂和/或树脂。

4、根据实施方案2所述的牙齿护理产品，其中所述胶基包括

a)选自丁二烯-苯乙烯橡胶、异丁烯-异戊二烯共聚物(丁基橡胶)、石蜡(通过费-托法生产)、石油蜡、石油蜡合成物、聚异丁烯聚乙酸乙烯酯、聚异丁二烯和异丁烯-异戊二烯共聚物、低分子量弹性体如聚丁烯、聚丁二烯和聚异丁烯、乙烯基聚合物弹性体如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯、乙烯基共聚弹性体如乙酸乙烯酯/月桂酸乙烯酯、乙酸乙烯酯/硬脂酸乙烯酯、乙烯/乙酸乙烯酯、聚乙烯醇或其混合物的合成成分，和/或

b)选自以下的天然成分：糖胶树脂、冠树胶、芡茨棕树胶、古塔胶、二齿铁线子胶、巧克力铁线子、尼斯佩罗胶、山榄胶、委内瑞拉糖树胶、节路顿胶、leche saspi、pendare、香豆树胶、莱切巴卡胶、尼日尔杜仲胶、美洲假树胶、麻风树胶和天然橡胶。

5、前述实施方案中任一个的牙齿护理产品，包含明胶、白蛋白、卵磷脂、果胶或淀粉。

6、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中自组装肽的浓度为0.1-500mg/kg，优选约5-15mg/kg。

7、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:22的序列。

8、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:23的序列。

9、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:24的序列。

10、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:25的序列。

11、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:26的序列。

12、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:1-20中任一条的序列。

13、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述自组装肽包含与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20的其中一条序列具有至少80％序列同一性的序列，其中所述肽优选包含SEQ ID NO:1的序列。

14、实施方案13的牙齿护理产品，其中所述自组装肽包含与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性的序列，其中所述肽优选包含SEQ ID NO:1的序列。

15、实施方案13的牙齿护理产品，其中所述自组装肽包含与SEQ ID NO:3具有至少80％序列同一性的序列，其中所述肽优选包含SEQ ID NO:3的序列。

16、实施方案13的牙齿护理产品，其中所述自组装肽包含与SEQ ID NO:20具有至少80％序列同一性的序列，其中所述肽优选包含SEQ ID NO:20的序列。

17、实施方案1-15中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽能够在低于7.5的pH下进行自组装。

18、实施方案1-6、12或16中任一项的牙齿护理产品，其中所述肽能够在高于7.5的pH下进行自组装。

19、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，在所述牙齿护理产品中大小为至少0.1μm的矿物颗粒低于0.4wt％。

20、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品还包含a)多元醇，例如木糖醇、赤藓糖醇或山梨醇，优选木糖醇。

21、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品还包含b)磷酸盐，例如磷酸钠、磷酸钙，例如羟基磷灰石，

22、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品还包含c)焦磷酸盐。

23、前述实施方案中任一项的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品还包含d)pH调节剂，例如碳酸氢钠或尿素。

24、一种制备实施方案1-23中任一项的牙齿护理产品的方法，包括以下步骤：

a)提供组装的自组装肽的基质，

b)提供药学上可接受的基质，优选胶基，其中步骤a)和b)可以以任何顺序进行，

c)将组装的自组装肽的基质和药学上可接受的基础成分(优选胶基)均质化，任选地，连同其它成分，

d)形成牙齿护理产品，

e)任选地，包装牙齿护理产品。

25、实施方案24的方法，其中步骤a的基质通过例如喷雾干燥、冻干或蒸发来干燥具有自组装肽组装时的pH(例如，SEQ ID NO:22的肽的pH低于7.5)的溶液来制备。

26、实施方案1-23中任一项的牙齿护理产品，其可通过实施方案22或23中任一项的方法获得。

27、实施方案1-23或26中任一项所述的牙齿护理产品，用于减少具有脱矿质牙齿的受试者牙齿表面的脱矿质，优选用于减少具有脱矿质牙齿的受试者的牙齿表面的进一步脱矿质。

28、根据实施例27所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有与牙齿再矿化减少相关的疾病或病症。

29、根据实施例27或28中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有口干症、缺涎症、磨牙症、牙本质过敏和/或牙齿侵蚀。

30、实施方案27-29中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有口干症。

31、根据实施例30所述的使用的牙齿护理产品，其中所述口干症与唾液流量有关。

32、实施方案27-31中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有缺涎症。

33、根据实施例27-32中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有磨牙症。

34、根据实施例27-33中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者有牙齿侵蚀。

35、根据实施例34所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有胃食管反流病。

36、实施方案27-35中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有牙本质过敏症。

37、根据实施方案27-36中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者在干燥量表上具有至少1、优选至少4或至少7的临床口腔干燥量。

38、根据实施方案27-37中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品被施用于所述受试者的口腔，其中所述牙齿护理产品优选在所述口腔中保持至少3分钟。

39、根据实施方案26-37中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品由所述受试者咬嚼，其中优选地，咬嚼5分钟唾液流量增加至少10倍。

40、实施方案27-39中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中在咬嚼时，所述胶基清洁牙齿表面，并且所述组装的自组装肽的基质在牙齿表面上提供减少或防止牙齿表面进一步脱矿质的膜。

41、根据实施方案27-40中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品每天至少使用1次，优选每天至少使用2次。

42、实施方案27-41中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品在餐后或食用零食后使用，任选地，代替刷牙。

43、根据实施例27-42中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品在睡醒后使用以减轻口干症。

44、实施方案27-43中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品降低龋齿的发生率，并且优选预防龋齿。

45、实施方案27-44中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品减轻与牙本质过敏相关的疼痛。

序列表

<110> 克里登蒂斯股份公司

<120> 防止脱矿质的个人牙齿护理产品

<130> 12455 P 6575 WO

<160> 26

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽 P11-4

<400> 1

Gln Gln Arg Phe Glu Trp Glu Phe Glu Gln Gln

1 5 10

<210> 2

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<400> 2

Gln Gln Xaa Phe Xaa Trp Xaa Phe Gln Gln Gln

1 5 10

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽 P11-8

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<400> 3

Gln Gln Arg Phe Xaa Trp Xaa Phe Glu Gln Gln

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 4

Gln Gln Arg Phe Gln Trp Gln Phe Glu Gln Gln

1 5 10

<210> 5

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 5

Gln Gln Glu Phe Glu Trp Glu Phe Glu Gln Gln

1 5 10

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Orn

<400> 6

Gln Gln Xaa Phe Xaa Trp Xaa Phe Xaa Gln

1 5 10

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 7

Glu Gln Glu Phe Glu Trp Glu Phe Glu Gln Glu

1 5 10

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 8

Gln Gln Glu Phe Glu Trp Glu Phe Glu Gln Gln

1 5 10

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 9

Glu Ser Glu Phe Glu Trp Glu Phe Glu Ser Glu

1 5 10

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Orn

<400> 10

Gln Gln Xaa Phe Xaa Trp Xaa Phe Xaa Gln Gln

1 5 10

<210> 11

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (11)..(11)

<223> Orn

<400> 11

Xaa Gln Xaa Phe Xaa Trp Xaa Phe Xaa Gln Xaa

1 5 10

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Orn

<400> 12

Ser Ser Xaa Phe Xaa Trp Xaa Phe Xaa Ser Ser

1 5 10

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 13

Ser Ser Arg Phe Glu Trp Glu Phe Glu Ser Ser

1 5 10

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<400> 14

Ser Ser Arg Phe Xaa Trp Xaa Phe Glu Ser Ser

1 5 10

<210> 15

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (9)..(9)

<223> Orn

<400> 15

Gln Gln Xaa Phe Xaa Trp Xaa Phe Xaa Gln Gln

1 5 10

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 16

Asn Asn Arg Phe Glu Trp Glu Phe Glu Asn Asn

1 5 10

<210> 17

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<400> 17

Asn Asn Arg Phe Xaa Trp Xaa Phe Glu Asn Asn

1 5 10

<210> 18

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<400> 18

Thr Thr Arg Phe Glu Trp Glu Phe Glu Thr Thr

1 5 10

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> Orn

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> Orn

<400> 19

Thr Thr Arg Phe Xaa Trp Xaa Phe Glu Thr Thr

1 5 10

<210> 20

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 自组装肽 P11-20

<400> 20

Gln Gln Arg Gln Glu Gln Glu Gln Glu Gln Gln

1 5 10

<210> 21

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 设计的自组装肽，共有序列1

<220>

<221> VARIANT

<222> 1..1

<223> 具有酸性或碱性侧链的氨基酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 2..2

<223> 具有疏水性或极性侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和谷氨酰胺

<220>

<221> VARIANT

<222> 3..3

<223> 具有酸性或碱性侧链的氨基酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 4..4

<223> 具有疏水性或极性侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和谷氨酰胺

<220>

<221> VARIANT

<222> 5..5

<223> 具有酸性或碱性侧链的氨基酸

<400> 21

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 设计的在低于pH7.5时自组装的自组装肽

<220>

<221> VARIANT

<222> 1..1

<223> 具有酸性侧链的氨基酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 2..2

<223> 具有疏水性或极性侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和谷氨酰胺

<220>

<221> VARIANT

<222> 3..3

<223> 具有酸性侧链的氨基酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 4..4

<223> 具有疏水性或极性侧链的氨基酸，选自丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和谷氨酰胺

<220>

<221> VARIANT

<222> 5..5

<223> 具有酸性侧链的氨基酸

<400> 22

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 23

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 设计的自组装肽

<220>

<221> VARIANT

<222> 1..1

<223> 具有酸性侧链的氨基酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 2..2

<223> 具有疏水性侧链的氨基酸，选自

丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、

蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 3..3

<223> 具有酸性侧链的氨基酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 4..4

<223> 具有疏水性侧链的氨基酸，选自

丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、

蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 5..5

<223> 具有酸性侧链的氨基酸

<400> 23

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 24

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 设计的自组装肽

<220>

<221> VARIANT

<222> 2..2

<223> 具有疏水性侧链的氨基酸，选自

丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、

蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 4..4

<223> 具有疏水性侧链的氨基酸，选自

丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、

蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸

<400> 24

Glu Xaa Glu Xaa Glu

1 5

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 设计的自组装肽

<220>

<221> VARIANT

<222> 2..2

<223> 具有疏水性侧链的氨基酸，选自

丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、

蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸

<220>

<221> VARIANT

<222> 4..4

<223> 具有疏水性侧链的氨基酸，选自

丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、

蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸

<400> 25

Asp Xaa Asp Xaa Asp

1 5

<210> 26

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 设计的自组装肽

<400> 26

Glu Gln Glu Gln Glu

1 5

Claims (15)

1.一种牙齿护理产品，包括

(i)包含SEQ ID NO:21的序列的自组装肽，其中所述自组装肽基本上以组装形式存在于所述牙齿护理产品中，和

(ii)药学上可接受的基础成分，

其中所述牙齿护理产品是选自口香糖、软嚼糖、橡皮糖、耐嚼糖果、咀嚼玩具、乳脂糖、锭剂和片剂的基本上固体的产品，

并且其中所述牙齿护理产品不是磨蚀性的。

2.根据权利要求1所述的牙齿护理产品，其中将组装形式的自组装肽包埋在药学上可接受的基础成分中，所述基础成分优选为包含选自聚合物、增塑剂和/或树脂的成分的胶基。

3.根据权利要求2所述的牙齿护理产品，其中所述胶基包括

a)选自丁二烯-苯乙烯橡胶、异丁烯-异戊二烯共聚物、石蜡、石油途径、石油蜡合成物、聚异丁烯聚乙酸乙烯酯、聚异丁二烯和异丁烯-异戊二烯共聚物、低分子量弹性体如聚丁烯、聚丁二烯和聚异丁烯、乙烯基聚合物弹性体如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯、乙烯基共聚弹性体如乙酸乙烯酯/月桂酸乙烯酯、乙酸乙烯酯/硬脂酸乙烯酯、乙烯/乙酸乙烯酯、聚乙烯醇或其混合物的合成成分，和/或

b)选自以下的天然成分：糖胶树脂、冠树胶、芡茨棕树胶、古塔胶、巴拉塔树胶、圭亚那铁线木可可、欧查果、rosdinha、委内瑞拉糖树胶、节路顿胶、leche saspi、pendare、佩里洛、莱切巴卡胶、皂角胶、美洲假胶树树脂胶、托帕匡斯麻风树和天然橡胶。

4.前述权利要求中任一项所述的牙齿护理产品，包含明胶、果胶、白蛋白、卵磷脂、麦芽糖醇/山梨醇或淀粉。

5.前述权利要求中任一项所述的牙齿护理产品，其中所述自组装肽的浓度为0.1-500mg/kg，优选约5-15mg/kg。

6.前述权利要求中任一项所述的牙齿护理产品，其中所述肽包含SEQ ID NO:22的序列。

7.前述权利要求中任一项所述的牙齿护理产品，其中所述自组装肽包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:20的其中一条序列具有至少80％序列同一性的序列，其中所述肽优选包含SEQ ID NO:1的序列。

8.前述权利要求中任一项所述的牙齿护理产品，在所述牙齿护理产品中大小为至少0.1μm的矿物颗粒低于0.4wt％，

其中所述牙齿护理产品任选地包含至少一种选自以下的其它成分：

a)选自木糖醇、赤藓糖醇和山梨醇的多元醇，

b)选自碳酸钙和磷酸盐的盐，并且具有小于3的莫氏硬度，

c)焦磷酸盐，和

d)pH调节剂。

9.一种制备前述权利要求中任一项所述的牙齿护理产品的方法，包括以下步骤：

a)提供组装的自组装肽的基质，

b)提供药学上可接受的基础成分，优选胶基，其中步骤a)和b)可以以任何顺序进行，

c)将组装的自组装肽的基质和药学上可接受的基质均质化，任选地，连同其它成分，

d)形成牙齿护理产品，

e)任选地，包装牙齿护理产品。

10.权利要求1-8中任一项所述的牙齿护理产品，其可通过权利要求9的方法获得。

11.根据权利要求1-8和10中任一项所述的牙齿护理产品，用于减少具有脱矿质牙齿的受试者牙齿表面的进一步脱矿质，包括将所述牙齿护理产品口服施用至所述受试者的口腔，其中所述牙齿护理产品优选在口腔中保持至少3分钟。

12.根据权利要求11所述的使用的牙齿护理产品，其中所述受试者患有与牙齿再矿化减少相关的疾病或病症，所述牙齿再矿化减少减少相关的疾病或病症选自口干症、缺涎症、磨牙症、牙本质过敏和/或牙齿侵蚀，任选地，与缺涎症相关的口干症。

13.根据权利要求11或12中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品被所述受试者咬嚼，其中优选地，咬嚼5分钟唾液流量增加至少10倍。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中在咬嚼时，所述胶基清洁牙齿表面，并且所述组装的自组装肽的基质在牙齿表面上提供减少或防止牙齿表面进一步脱矿质的膜。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的使用的牙齿护理产品，其中所述牙齿护理产品降低龋齿的发生率。

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