CN114901277A - 用于egfr降解的异吲哚啉酮和吲唑化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了通过EGFR蛋白的泛素化和随后的蛋白酶体降解来降解包括突变体形式在内的表皮生长因子受体(EGFR)的化合物。所述化合物可用于治疗各种癌症。

Description

用于EGFR降解的异吲哚啉酮和吲唑化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月20日提交的美国临时申请62/951,464和2019年12月20日提交的美国临时申请62/951,467的权益；所述临时申请中的每一个的全部内容出于所有目的通过引用并入本文。
技术领域
本发明提供了通过EGFR蛋白的泛素化和随后的蛋白酶体降解来降解包括突变体形式在内的表皮生长因子受体(EGFR)的化合物。所述化合物可用于治疗各种癌症。
背景技术
HER家族受体酪氨酸激酶是细胞生长、分化和存活的介质。受体家族包括四个不同的成员，即表皮生长因子受体(EGFR、ErbBl或HER1)、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4)。配体结合后，受体形成同二聚体和异二聚体并且固有酪氨酸激酶活性的随后激活导致受体自身磷酸化和下游信号传导分子的激活(Yarden,Y.,Sliwkowski,MX.Untanglingthe ErbB signaling network.Nature Review Mol Cell Biol.2001Feb；2(2):127-37)。这些信号传导分子促进细胞生长和增殖。EGFR通过过表达或突变去调节已经牵涉许多类型的人类癌症，包括结肠直肠癌、胰腺癌、神经胶质瘤、头颈癌和肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)。这些年来已开发了若干EGFR靶向剂(Ciardiello,F.,and Tortora,G.(2008).EGFR antagonists in cancer treatment.The New England journal of medicine358,1160-1174)。厄洛替尼
Figure BDA0003698737280000011
是一种可逆性EGFR酪氨酸激酶抑制剂，在许多国家被批准用于复发性NSCLC的治疗。
在肿瘤携带体细胞激酶结构域突变的NSCLC患者亚组中观察到EGFR酪氨酸激酶抑制剂令人印象深刻的单一药剂活性，而在野生型EGFR患者中的临床益处大大减小(Paez,J.et al.(2004).EGFR mutations in lung cancer:correlation with clinicalresponse to gefitinib therapy.Science(New York,NY 304,1497-1500)。EGFR最常见的体细胞突变为外显子19缺失(其中δ746-750是最普遍的突变)和外显子21氨基酸取代(其中L858R是最常见的突变)(Sharma SV,Bell DW,Settleman J,Haber DA.Epidermal growthfactor receptor mutations in lung cancer.Nat Rev Cancer.2007Mar；7(3):169-81)。
常常由于受体ATP位点内的二次T790M突变而频繁出现治疗抗性。开发的一些突变体选择性不可逆抑制剂针对T790M突变体具有高活性，但其功效可因C797S的获得性突变而受损，该突变为与它们形成关键共价键的半胱氨酸残基(Thress,K.S.et al.AcquiredEGFR C797S mutation mediates resistance to AZD9291 in non-small cell lungcancer harboring EGFR T790M.Nat.Med.21,560–562(2015))。Wang进一步报道C797S突变是对靶向T790M的EGFR抑制剂的抗性的主要机制(Wang et al.EGFR C797S mutationmediates resistance to third-generation inhibitors in T790M-positive non-small cell lung cancer,JHematol Oncol.2016；9:59)。Yang描述了导致对奥希替尼(Osimertinib)的抗性的其他突变，例如L718Q。(Yang et al,Investigating NovelResistance Mechanisms to Third-Generation EGFR Tyrosine Kinase InhibitorOsimertinib in Non–Small Cell Lung Cancer Patients,Clinical Cancer Research,DOI:10.1158/1078-0432.CCR-17-2310)。也已知其他突变靶向策略，包括在NSCLC治疗中靶向EGFRL858R/T790M和EGFRL858R/T790M/C797S抗性突变(Lu et al.Targeting EGFRL858R /T790M and EGFRL858R/T790M/C797S resistance mutations in NSCLC:Current developmentsin medicinal chemistry,Med Res Rev 2018；1-32)。
EGFR抑制剂的其他实例，特别是含有EGFR突变体的T790M的选择性抑制剂，也已经描述，包括WO2014081718、WO2014210354、WO2018/115218、WO2018220149、WO2020002487和ZHOU et al.,"Novel mutant-selective EGFR kinase inhibitors against EGFRT790M",NATURE,(20091224),vol.462,no.7276,doi:10.1038/nature08622,ISSN 0028-0836,1070–1074页中描述的那些。
由于大多数可用的EGFR酪氨酸激酶抑制剂靶向激酶的ATP位点，因此需要例如通过靶向抗药性EGFR突变体而起不同作用的新治疗剂。
最近的研究表明，有目的地靶向变构位点可产生突变体选择性抑制剂(Jia etal.Overcoming EGFR(T790M)and EGFR(C797S)resistance with mutant-selectiveallosteric inhibitors,June 2016,Nature 534,129-132)。
小分子促进的靶向蛋白质降解领域已得到深入研究(Collins et al.,BiochemJ,2017,474(7),1127-47)。蛋白质降解在各种细胞功能中发挥作用。例如，身体利用蛋白质降解来调节调节蛋白的浓度，其中通过降解成小肽来维持细胞的健康和生产力。
Cereblon是一种形成E3泛素连接酶复合物的蛋白质，其将各种其他蛋白质泛素化。Cereblon已知是抗癌沙利度胺类似物的主要靶点。Cereblon的较高表达与沙利度胺类似物在癌症治疗中的效率有关联。
化合物已被描述为靶向泛素化的有用调节剂，例如WO2013020557、WO2013063560、WO2013106643、WO/2013170147、WO2016011906和WO/2019183523中描述的化合物可用于靶向泛素化。用于靶向泛素化的其他调节剂包括Ranok Therapeutics HangzhouWO2020206608和WO2020207396中描述的那些；Arvinas在WO2015160845、WO2016149668、WO2016197032、WO2017011590、WO2017030814、WO2018144649、WO2018226542和WO2019199816中描述的那些；Dana-Farber Cancer Institute在WO2016105518、WO2017007612、WO2017024317、WO2017024318、WO2017117473、WO2017117474、WO2018148443、WO2018148440和WO2019165229中描述的那些；Kymera在WO2019/060742、WO2019/140387和WO2020/01022中描述的那些；以及C4Therapeutics Inc.在WO2017197036、WO2017197046、WO2017197051、WO2017197055、WO2018237026、WO2019099868、WO2019191112、WO2019204353、WO2019236483、WO2020132561、WO2020181232和WO2020210630中描述的那些。
一些用于EGFR降解的特定分子也已见描述，例如，Dana-Farber CancerInstitute在WO2017185036中描述了EGFR降解剂。F.Hoffman-La-Roche在WO2019121562和WO2019149922中描述了EGFR降解剂。Arvinas在WO2018119441中描述了EGFR降解剂。
尽管有这些努力，但仍需要新的EGFR调节剂来治疗有此需要的宿主、特别是人类中由EGFR介导的病症。
发明内容
提供了通过泛素蛋白酶体通路(UPP)降解表皮生长因子受体蛋白(EGFR)的化合物及其用途和制造。本发明提供了式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐，其包含与EGFR结合的靶向配体、E3连接酶结合部分(通常通过cereblon亚基)和共价连接靶向配体与E3连接酶结合部分的接头。在某些实施方案中，E3连接酶结合部分为A或A*部分，接头为L1或L2部分，并且分子的其余部分为EGFR靶向配体部分。在某些实施方案中，本发明的化合物降解具有突变或突变的组合的EGFR，例如选自T790M、L858R和C797S的突变；选自T790M、L858R和C797S的两个突变的组合；或选自T790M、L858R和C797S的三个突变的组合。在某些实施方案中，本发明的化合物为含有T790M/L858R、T790M/L858R/C797S、L858R或L858R/C797S的EGFR突变体的选择性降解剂。
本文提供的本发明化合物或其药学上可接受的盐和/或其药学上可接受的组合物可用于治疗由EGFR介导的病症。在一些实施方案中，提供了一种治疗患有由EGFR介导的病症的患者的方法，该方法包括向患者(通常是人)施用有效量的一种或多种如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药学上可接受的组合物中。
在一个方面，本发明提供了式I的化合物
Figure BDA0003698737280000031
或其药学上可接受的盐；
其中：
A选自环系AF和AG；
Figure BDA0003698737280000041
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CR52-；
A3选自
i)-N-，和
ii)-CR53-；
A4选自
i)-N-，和
ii)-CR54-；
A5选自
i)-N-，和
ii)-CR55-；
R1选自
i)H，
ii)卤素
iii)C1-6-烷基；
R52选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R53、R54和R55独立地选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R2选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R3选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R4和R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1或2；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R7选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R70选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R8为H；
R9选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
L1为
Figure BDA0003698737280000061
C不存在或选自环系F、G和H；
Figure BDA0003698737280000062
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)-H-，
ii)卤素，和
iii)羟基-C1-6-烷基；
R16选自
i)-H-，
ii)羟基，和
iii)氟；
L3不存在或选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，
iv)-NR10-C(O)-，
v)-C(O)-NR10-，
vi)-C(O)O-，
vii)-CH2-CF2-CH2-，
viii)-CH2-，
ix)
Figure BDA0003698737280000071
x)
Figure BDA0003698737280000072
和
xi)
Figure BDA0003698737280000073
m为0、1或2；
p为0、1、2或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X，所有环系任选被一至三个选自R80、R81和R82的取代基所取代；
Figure BDA0003698737280000081
R80、R81和R82独立地选自
i)卤素，
ii)氰基，
iii)羟基，
iv)羟基-C1-6-烷基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
L4不存在或选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure BDA0003698737280000082
L5不存在或为
Figure BDA0003698737280000083
B选自环系AD和AE；
Figure BDA0003698737280000091
在本发明的另一个方面，提供了式II的化合物或其药学上可接受的盐
Figure BDA0003698737280000092
其中
A’选自环系AF、AG和AH；
Figure BDA0003698737280000093
R1’选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基
iv)氰基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
其余的变量为如本文所定义。
在某些方面，提供了式I的同位素、N-氧化物或立体异构体，或其药学上可接受的盐或组合物。在其他方面，提供了式II的同位素、N-氧化物或立体异构体，或其药学上可接受的盐或组合物。
本发明的其他方面提供了式III或式IV的化合物：
Figure BDA0003698737280000101
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、其立体异构体，其任选地作为药物组合物的一部分；
其中：
A*选自：
Figure BDA0003698737280000102
Figure BDA0003698737280000111
B*为杂芳基或芳基，其任选被1、2或3个R31取代基所取代；在某些实施方案中，B*选自
Figure BDA0003698737280000112
y为0、1、2或3；
R31在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基并且当存在于双环上时可位于任一环上，例如
Figure BDA0003698737280000113
包括
Figure BDA0003698737280000114
Figure BDA0003698737280000115
R32为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基或卤代-C3-8-环烷基；
R33为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基或卤代-C3-8-环烷基并且可位于二氢吡咯或咪唑环上；
R34在每次出现时独立地选自H、F、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
R35在每次出现时选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基和C3-8-环烷基；
或者R34和R35结合形成–(CH2)q-；
R36和R37独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基(例如，F、Cl或Br)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基(例如，F、Cl或Br)、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
或者R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-或6-元环；
R42在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
R90为H、C1-6-烷基或C3-6-环烷基；
环G为任选被1或2个R42取代基所取代的杂芳基，例如具有1、2或3个N杂原子的5-或6-元杂芳基环；
A21为-NH-、-O-、-CH2-或-NR100-；
R100为烷基、环烷基、芳基或杂芳基；或者在化合价允许的情况下，R100可与R37结合形成5-8元杂环或5元杂芳基；
A32、A33、A34和A35独立地选自-N-和-CR42-；
A36为-N-或-CR35-；
L2为连接A*与异吲哚啉酮或吲唑的二价连接基团(接头)，例如但不限于式LI的二价连接基团；并且其中其余变量为如本文所定义。
在某些实施方案中，L2具有式：
Figure BDA0003698737280000121
其中，
X1和X2在每次出现时独立地选自键、杂环、芳基、杂芳基、双环、烷基、脂族、杂脂族、-NR27-、-CR40R41-、-O-、-C(O)-、-C(NR27)-、-C(S)-、-S(O)-、-S(O)2-和–S-；杂环、芳基、杂芳基和双环中的每一个任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基所取代；
R20、R21、R22、R23和R24在每次出现时独立地选自键、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR27-、-NR27C(O)-、-O-、-S-、-NR27-、氧基亚烷基(oxyalkylene)、-C(R40R40)-、-P(O)(OR26)O-、-P(O)(OR26)-、双环、烯烃、炔烃、卤代烷基、烷氧基、芳基、杂环、脂族、杂脂族、杂芳基、乳酸、乙醇酸和碳环；其每一个任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基所取代；
R26在每次出现时独立地选自氢、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、烯烃、炔烃、芳基、杂芳基、杂环、脂族和杂脂族；
R27在每次出现时独立地选自氢、烷基、脂族、杂脂族、杂环、芳基、杂芳基、-C(O)(脂族、芳基、杂脂族或杂芳基)、-C(O)O(脂族、芳基、杂脂族或杂芳基)、烯烃和炔烃；
R40在每次出现时独立地选自氢、R27、烷基、烯烃、炔烃、氟、溴、氯、羟基、烷氧基、叠氮化物、氨基、氰基、-NH(脂族，包括烷基)、-N(脂族，包括烷基)2、-NHSO2(脂族，包括烷基)、-N(脂族，包括烷基)SO2烷基、-NHSO2(芳基、杂芳基或杂环)、-N(烷基)SO2(芳基、杂芳基或杂环)、-NHSO2烯基、-N(烷基)SO2烯基、-NHSO2炔基、-N(烷基)SO2炔基、卤代烷基、脂族、杂脂族、芳基、杂芳基、杂环、氧代和环烷基；另外，在化合价允许的情况下，与同一个碳结合的两个R40基团可接合在一起形成3-8元螺环；和
R41为脂族、芳基、杂芳基或氢。
变量、取代基、实施方案和由这些组合产生的化合物的每个组合都被认为是明确且单独公开的，因为这样的描绘只是为了空间的便利而不旨在描述化合物的仅一个属或甚至一个亚属。
本发明的化合物可用于治疗EGFR介导的病症如结肠癌；直肠癌；肺癌，包括非小细胞肺癌；乳腺癌，包括HER-2阳性乳腺癌、ER+(雌激素阳性)乳腺癌、PR+(黄体酮阳性)乳腺癌或三阴性乳腺癌；头颈癌；胶质母细胞瘤；胰腺癌；甲状腺癌；星形细胞瘤；食管癌；子宫颈癌；滑膜肉瘤；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；或肾癌。
在某些实施方案中，提供了一种治疗方法，其包括向有此需要的患者、例如人施用有效量的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药学上可接受的载体中。例如，在某些实施方案中，向人施用式I、II、III或IV的化合物以治疗癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗肺癌。在某些实施方案中，肺癌为非小细胞肺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗乳腺癌。在某些实施方案中，乳腺癌为HER-2阳性乳腺癌。在某些实施方案中，乳腺癌为ER+乳腺癌。在某些实施方案中，乳腺癌为PR+乳腺癌。在某些实施方案中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗结肠直肠癌或直肠癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗头颈癌或食管癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗胶质母细胞瘤。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗胰腺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗甲状腺癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗卵巢癌、子宫癌或子宫颈癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗肾癌、肝癌或膀胱癌。
在某些实施方案中，本发明的化合物提供了一种或多种、甚至可以提供多重优于采用EGFR配体的传统治疗的优点。例如，本发明的EGFR降解化合物可以a)在某些情况下克服抗性；b)通过破坏蛋白质来延长药物作用的动力学，因此即使在化合物已被代谢后也需要重新合成蛋白质；c)同时靶向蛋白质的所有功能而不是特定的催化活性或结合事件；和/或d)由于小分子以催化方式起作用的可能性，故与抑制剂相比具有增加的效力。
在一个方面，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的癌症，其中EGFR已从野生型突变。EGFR突变有多种可能性。在某些非限制性实施方案中，突变存在于外显子18、外显子19、外显子20或外显子21或其任何组合中。在某些非限制性实施方案中，突变在位置L858、E709、G719、C797、L861、T790或L718或其任何组合处。在某些实施方案中，突变为L858R、T790M、L718Q、L792H和/或C797S突变或其任何组合。
在某些方面，癌症在用至少一种EGFR抑制剂治疗后已发生一个或多个EGFR突变，所述抑制剂可为非共价抑制剂(包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼或凡德他尼)或共价抑制剂(如阿法替尼、奥希替尼或达克替尼)。在另一个方面，癌症在用抗体如西妥昔单抗、帕尼单抗或耐昔妥珠单抗治疗后已发生一个或多个EGFR突变。在还另一个方面，癌症具有使癌症对EGFR抑制剂治疗具有内在抗性的一个或多个EGFR突变或非EGFR突变，例如，体细胞外显子20插入、体细胞PIK3CA突变、PTEN表达丧失、MET扩增、或KRAS突变。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第一代EGFR抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼和/或拉帕替尼具有抗性或已获得抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第二代EGFR抑制剂如阿法替尼和/或达克替尼具有抗性或已获得抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第三代EGFR抑制剂如奥希替尼具有抗性或已获得抗性的癌症。
在一些实施方案中，患病组织中的突变EGFR蛋白具有L858突变，例如L858R。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗突变EGFR介导的病症，其中EGFR具有下列氨基酸位点中的至少一个或其组合的突变。突变可例如选自所列示例性突变中之一，或者可以是不同的突变。
氨基酸 示例性突变
C797 C797S
E709 E709A、E709G、E709K、E709V
G719 G719A、G719S、G719C、G719D
G724 G724S
G119 G119A
G796 G796S、G796C
L718 L718V、L718Q
L792 L792H、L792V
L858 L858R
L861 L861Q
S768 S768I
T790 T790M
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有选自上表的两个突变。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有选自上表的三个突变。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有四个或更多个突变，其可任选地选自上表。
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L858R突变和一个另外的突变，所述一个另外的突变可任选地选自上表。在这些实施方案中的一些中，突变EGFR介导的病症具有L858R突变和两个另外的突变，所述两个另外的突变可任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L858R突变和三个另外的突变，所述三个另外的突变可任选地选自上表。
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有T790M突变和一个另外的突变，所述一个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有T790M突变和两个另外的突变，所述两个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有T790M突变和三个另外的突变，所述三个另外的突变任选地选自上表。
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L718Q突变和一个另外的突变，所述一个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L718Q突变和两个另外的突变，所述两个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L718Q突变和三个另外的突变，所述三个另外的突变任选地选自上表。
在某些实施方案中，EGFR介导的病症为突变EGFR介导的癌症。
在某些实施方案中，EGFR介导的癌症具有S768I、L718V、L792H、L792V、G796S、G796C、G724S和/或G719A的突变。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的具有移码突变、例如短的框内缺失的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR具有外显子19缺失的癌症。在某些实施方案中，外显子19缺失为包括氨基酸LREA(L747-A750)的缺失。在某些实施方案中，外显子19缺失为包括氨基酸ELREA(E746-A750)的缺失。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR在外显子21中具有L858R突变的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物对由突变EGFR驱动的病症比对由野生型EGFR驱动的病症更有活性。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR具有一个或多个外显子18缺失的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有E709突变的EGFR，例如E709A、E709G、E709K或E709V。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有L718突变的EGFR，例如L718Q。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有G719突变的EGFR，例如G719S、G719A、G719C或G719D。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR具有一个或多个外显子19插入和/或一个或多个外显子20插入的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗S7681突变EGFR癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR L861Q突变EGFR癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗C797S突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗T790M、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗L718Q、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗L792H、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗C797S、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物相对于至少一种已知的EGFR抑制剂提供了改进的功效和/或安全性。例如，本发明的降解剂具有仅蛋白结合部分的抑制剂效率以及cereblon激活的蛋白酶体降解的催化降解活性。这通过可快速“恢复作用”并重复催化功能的活性部分提供针对过表达EGFR的靶标的快速活性。这样，EGFR会像使用共价自杀性抑制剂如奥希替尼时一样被快速破坏，但不会同时破坏活性药物。
在某些实施方案中，与仅使用酶抑制剂相比，本发明的降解剂化合物在EGFR介导病症的治疗中具有一个或多个优势。
在某些实施方案中，与单独的EGFR靶向配体部分的摩尔相比，EGFR介导病症的治疗需要较少的本文所述化合物。
在某些实施方案中，与单独的EGFR靶向配体部分的摩尔相比，本发明的化合物在EGFR介导病症的治疗中具有较小的至少一种副作用。
在某些实施方案中，与单独的EGFR靶向配体部分的摩尔给药相比，EGFR介导病症的治疗需要较不频繁的选定本文所述化合物的给药方案。
本发明的另一个方面提供了如本文所述的化合物，或者其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，或者药物组合物，用于制造用于抑制或预防由EGFR介导的病症或用于调节或减小EGFR的量的药剂。
本发明的另一个方面提供了如本文所述的化合物，或者其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，或者其药物组合物，用于制造用于治疗或预防由EGFR介导的疾病的药剂。
在某些实施方案中，选定的如本文所述的化合物可用于治疗包括异常细胞增殖的病症，如肿瘤或癌症，在其中，EGFR是致癌蛋白或异常细胞增殖通路的信号传导介质并且其降解减少异常细胞生长。
在某些实施方案中，选定的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐具有原子的至少一个所需同位素取代，以高于该同位素的天然丰度、即富集的量。
在某些实施方案中，式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐包含氘原子或多个氘原子。
在某些实施方案中，本发明的化合物可用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
在某些实施方案中，本发明的化合物具有与和靶蛋白质EGFR结合的部分连接的E3泛素连接酶结合部分，其中靶蛋白质靠近泛素连接酶以实现所述蛋白质的降解。
本申请的其他特征和优点将从以下具体实施方式变得显而易见。
因此，本发明至少包括以下特征：
(a)如本文所述的式I、II、III或IV的化合物，或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)；
(b)用于治疗EGFR介导病症如异常细胞增殖(包括癌症)的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐；
(c)式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)，其用于治疗由EGFR介导的病症，例如异常细胞增殖如肿瘤或癌症；
(d)有效量的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐在治疗有此需要的患有EGFR介导病症、例如异常细胞增殖如肿瘤或癌症的患者、通常人中的用途；
(e)式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)在制造用于治疗EGFR介导病症、例如异常细胞增殖如肿瘤或癌症的药剂中的用途；
(f)用于治疗突变EGFR介导病症如异常细胞增殖(包括癌症)的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐；
(g)式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)，用于治疗由突变EGFR介导的病症，例如异常细胞增殖如肿瘤或癌症；
(h)有效量的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐在治疗有此需要的患有突变EGFR介导病症、例如异常细胞增殖如肿瘤或癌症的患者、通常人中的用途；
(i)式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐或同位素衍生物(包括氘代衍生物)在制造用于治疗突变EGFR介导病症、例如异常细胞增殖如肿瘤或癌症的药剂中的用途；
(j)药物组合物，其包含有效治疗患者的量的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐、同位素衍生物；和任选地药学上可接受的载体或稀释剂；
(k)如本文所述的式I、II、III或IV的化合物，作为对映异构体或非对映异构体(根据相关情况(as relevant))的混合物，包括作为外消旋物；
(l)如本文所述的式I、II、III或IV的化合物，呈对映异构体或非对映异构体(根据相关情况)富集的形式，包括分离的对映异构体或非对映异构体(即，纯度约大于85％、90％、95％、97％或99％)；和
(m)用于制备治疗产品的方法，所述治疗产品含有有效量的如本文所述的式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐。
具体实施方式
提供了通过泛素蛋白酶体通路(UPP)降解表皮生长因子受体蛋白(EGFR)的化合物及其用途和制造。本发明提供了式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐，其包含与EGFR结合的靶向配体、E3连接酶结合部分(通常通过cereblon亚基)和共价连接靶向配体与E3连接酶结合部分的接头。在某些实施方案中，E3连接酶结合部分为A或A*部分，接头为L1或L2部分，并且分子的其余部分为EGFR靶向配体部分。在某些实施方案中，本发明的化合物降解具有突变或突变的组合的EGFR，例如选自T790M、L858R和C797S的突变；选自T790M、L858R和C797S的两个突变的组合；或选自T790M、L858R和C797S的两个突变的组合。在某些实施方案中，本发明的化合物为含有T790M/L858R、T790M/L858R/C797S、L858R和/或L858R/C797S的EGFR突变体的选择性降解剂。
在某些实施方案中，本发明的化合物相对于至少一种已知的EGFR抑制剂提供了改进的功效和/或安全性。例如，本发明的降解剂具有仅蛋白结合部分的抑制剂效率以及cereblon激活的蛋白酶体降解的催化降解活性。这通过可快速“恢复作用”并重复催化功能的活性部分提供针对过表达EGFR的靶标的快速活性。这样，EGFR会像使用共价自杀性抑制剂如奥希替尼时一样被快速破坏，但不会同时破坏活性药物。
I.定义
无论术语单独出现还是与其他组组合出现，本说明书中使用的通用术语的以下定义均适用。
除非另有说明，否则本申请(包括说明书和权利要求书)中使用的以下术语具有下文给出的定义。必须注意的是，如说明书和所附权利要求书中所使用，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该(the)”包括复数指示物。
术语“C1-6-烷氧基”表示式-O-R’的基团，其中R’为C1-6-烷基基团，特别是C1-3-烷基。C1-6-烷氧基基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基。具体的实例为甲氧基、乙氧基和异丙氧基。更具体的实例为甲氧基。
术语"C1-6-烷基"，单独地或与其他基团组合，代表可为直链或支链、具有单支链或多支链的烃基团，其中烷基基团通常包含1至6个碳原子，例如甲基(Me)、乙基(Et)、丙基、异丙基(异-丙基)、正丁基、异-丁基(异丁基)、2-丁基(仲丁基)、叔-丁基(叔丁基)、异戊基、2-乙基-丙基(2-甲基-丙基)、1,2-二甲基-丙基等。一种特定的基团为甲基。
术语“氰基”表示-C≡N基团。
术语“C3-8-环烷氧基”表示式-O-R’的基团，其中R’为C3-8-环烷基基团。环烷氧基基团的实例包括环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、环庚氧基和环辛氧基。具体的实例为环丙氧基。
术语“C3-8-环烷基”表示具有3至8个环碳原子的一价饱和单环或双环烃基团。双环指的是由两个具有一个或两个共同碳原子的饱和碳环组成的环系。单环C3-8-环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。双环C3-8-环烷基的实例为螺[3.3]庚基。具体的单环C3-8-环烷基基团为环丙基、环丁基。更具体的单环C3-8-环烷基基团包括环丙基。
术语“卤代-C1-6-烷氧基”表示其中C1-6-烷氧基基团的氢原子中的至少一个已被替换为相同或不同的卤素原子的C1-6-烷氧基基团。术语“全卤代-C1-6-烷氧基”表示其中C1-6-烷氧基基团的所有氢原子已被替换为相同或不同的卤素原子的C1-6-烷氧基基团。卤代-C1-6-烷氧基的实例包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氟乙氧基、二氟乙氧基、三氟乙氧基、三氟甲基乙氧基、三氟二甲基乙氧基和五氟乙氧基。具体的卤代-C1-6-烷氧基基团包括氟甲氧基、三氟乙氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基、三氟甲氧基、三氟甲基乙氧基和三氟二甲基乙氧基。更具体的实例为氟甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基。
术语“卤代-C1-6-烷基”表示其中C1-6-烷基基团的氢原子中的至少一个已被替换为相同或不同的卤素原子的C1-6-烷基基团。术语“全卤代-C1-6-烷基-C1-6-烷基”表示其中烷基基团的所有氢原子已被替换为相同或不同的卤素原子的-C1-6-烷基-C1-6-烷基基团。卤代-C1-6-烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲基乙基和五氟乙基。具体的卤代-C1-6-烷基基团包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、三氟乙基和二氟乙基。更具体的卤代-C1-6-烷基基团包括氟甲基。
术语“卤代-C3-8-环烷氧基”表示其中C3-8-环烷氧基基团的氢原子中的至少一个已被替换为相同或不同的卤素原子的C3-8-环烷氧基基团。术语“全卤代-C3-8-环烷氧基”表示其中C3-8-环烷氧基基团的所有氢原子已被替换为相同或不同的卤素原子的C3-8-环烷氧基基团。卤代-C3-8-环烷氧基的实例包括氟环丙氧基、氟环丁氧基、氟环戊氧基、氟环己氧基、氟环庚氧基、二氟环丙氧基、二氟环丁氧基、二氟环戊氧基、二氟环己氧基和二氟环庚氧基。
术语“卤代-C3-8-环烷基”表示其中C3-8-环烷基基团的氢原子中的至少一个已被替换为相同或不同的卤素原子的C3-8-环烷基基团。术语“全卤代-C3-8-环烷基”表示其中烷基基团的所有氢原子已被替换为相同或不同的卤素原子的-C3-8-环烷基基团。卤代-C3-8-环烷基的实例包括氟环丙基、氟环丁基、氟环戊基、氟环己基、氟环庚基、二氟环丙基、二氟环丁基、二氟环戊基、二氟环己基和二氟环庚基。
术语"卤素"，单独地或与其他基团组合，表示氯(Cl)、碘(I)、氟(F)和溴(Br)。特定的基团为F和Cl。
术语“羟基”表示-OH基团。
术语“羟基-C1-6-烷基烷基”表示其中C1-6-烷基烷基基团的氢原子中的至少一个已被替换为羟基基团的C1-6-烷基烷基基团。羟基-C1-6-烷基的实例包括羟甲基、羟乙基和羟丙基。具体的实例为羟甲基。
术语“药学上可接受的”表示可用于制备药物组合物的材料的属性，其一般是安全的、无毒的，在生物学上或在其他方面都不是不合需要的，并且对于兽医以及人类药物用途都是可接受的。
术语“药学上可接受的盐”是指适合用于与人和动物的组织接触的盐。合适的无机和有机酸的盐的实例为但不限于乙酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对甲苯磺酸、琥珀酸、硫酸(sulfuric acid/sulphuric acid)、酒石酸、三氟乙酸等。具体的酸为甲酸、三氟乙酸和盐酸。一种特定的酸为三氟乙酸。
术语“药学上可接受的辅助物质”是指与制剂的其他成分相容的载体和辅助物质，如稀释剂或赋形剂。
术语“药物组合物”涵盖以预定的量或比例包含指定成分的产品，以及直接或间接地由以指定的量组合指定成分产生的任何产品。特别地，其涵盖包含一种或多种活性成分和包含惰性成分的任选载体的产品，以及直接或间接地由任何两种或更多种成分的组合、络合或聚集、或由一种或多种成分的解离、或由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用产生的任何产品。
“治疗有效量”指的是当施用于受试者以治疗疾病状态时足以实现对疾病状态的这种治疗的化合物的量。“治疗上有效量”将随化合物、所治疗的疾病状态、所治疗的疾病的严重性、受试者的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医生或兽医的判断及其他因素而异。
在提及变量时，术语“如本文所定义”和“如本文所述”通过引用并入该变量的广义定义以及特别的、更特别的和最特别的定义(如果有的话)。
在涉及化学反应时，术语“处理”、“接触”和“反应”指的是在适当的条件下添加或混合两种或更多种试剂以产生指示的和/或所需的产物。应理解，产生指示的和/或所需的产物的反应不一定直接由最初添加的两种试剂的组合产生，即，可能在混合物中产生一种或多种中间体，所述中间体最终导致指示的和/或所需的产物的形成。
术语“药学上可接受的赋形剂”表示没有治疗活性且无毒的任何成分，如用于配制药物产品的崩解剂、粘结剂、填充剂、溶剂、缓冲剂、张度剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂或润滑剂。
术语“药物组合物”涵盖以预定的量或比例包含指定成分的产品，以及直接或间接地由以指定的量组合指定成分产生的任何产品。特别地，其涵盖包含一种或多种活性成分和包含惰性成分的任选载体的产品，以及直接或间接地由任何两种或更多种成分的组合、络合或聚集、或由一种或多种成分的解离、或由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用产生的任何产品。
术语“抑制剂”表示与特定配体竞争、减少或阻止特定配体与特定受体的结合或者减少或阻止特定蛋白质的功能的化合物。
术语“半数最大抑制浓度”(IC50)表示在体外获得50％的生物过程抑制所需的特定化合物的浓度。IC50值可对数转换为pIC50值(-log IC50)，其中较高的值指示成指数级地高的效力。IC50值不是绝对值，而是取决于实验条件，例如所采用的浓度。可以使用Cheng-Prusoff方程(Biochem.Pharmacol.(1973)22:3099)将IC50值转换为绝对抑制常数(Ki)。
“治疗有效量”指的是当施用于受试者以治疗疾病状态时足以实现对疾病状态的这种治疗的化合物的量。“治疗上有效量”将随化合物、所治疗的疾病状态、所治疗的疾病的严重性、受试者的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医生或兽医的判断及其他因素而异。
术语“芳族”表示如文献中、特别是在IUPAC-Compendium of ChemicalTerminology,2nd,A.D.McNaught&A.Wilkinson(Eds).Blackwell ScientificPublications,Oxford(1997)中所定义的芳香性的常规概念。
任何时候当化学结构中存在手性碳时，意指与该手性碳相关的所有立体异构体都以纯立体异构体以及其混合物由该结构所涵盖。
在某些实施方案中，向本发明的化合物中引入同位素。这些同位素包括但不限于氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、18F、35S和36Cl。在一个非限制性实施方案中，同位素标记的化合物可用于代谢研究(用例如14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射治疗。另外，本发明的化合物中存在的任何氢原子都可被18F原子取代，这种取代对于PET或SPECT研究来说可能是特别理想的。
在一个非限制性实施方案中，可在本文描述的任何化合物中提供氘原子对氢原子的取代。例如，当任何基团为或含有(例如通过取代)甲基、乙基或甲氧基时，烷基残基可以是氘代的(在非限制性实施方案中，CDH2、CD2H、CD3、CH2CD3、CD2CD3、CHDCH2D、CH2CD3、CHDCHD2、OCDH2、OCD2H或OCD3等)。在某些其他实施方案中，当两个取代基组合形成环时，未取代的碳可以是氘代的。在某些实施方案中，将至少一个氘置于具有在化合物体内代谢期间断裂的键的原子上，或者为远离代谢键的一个、两个或三个原子(例如，其可称为α、β或γ或者一级、二级或三级同位素效应)。
在某些实施方案中，本发明的化合物是同位素标记的。在某些实施方案中，在化合价允许的情况下，至少一个独立地选自R1、R2、R3、R4、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R20、R21、R22、R23、R24、R26、R27、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R40、R41、R42、R52、R53、R54、R55、R70、R80、R81、R82、R90或R100的R基团被1种、2种或更多种同位素同位素标记。在某些实施方案中，同位素标记为氘。在某些实施方案中，将至少一个氘置于具有在化合物体内代谢期间断裂的键的原子上，或者为远离代谢键的一个、两个或三个原子(例如，其可称为α、β或γ或者一级、二级或三级同位素效应)。在另一个实施方案中，同位素标记为13C。在其他实施方案中，同位素标记为18F。
在某些实施方案中，本发明的化合物可与溶剂(包括水)形成溶剂化物。因此，在一个非限制性实施方案中，本发明包括本文描述的化合物的溶剂化形式。术语“溶剂化物”是指本发明的化合物(包括其盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。溶剂的非限制性实例为水、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜、丙酮和其他常见的有机溶剂。
在某些实施方案中，“烯基”为具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链脂族烃基团，所述碳-碳双键可出现在沿链的稳定点处。在一个非限制性实施方案中，烯基含有2至约12个碳原子，更通常2至约6个碳原子或2至约4个碳原子。在某些实施方案中，烯基为C2、C2-C3、C2-C4、C2-C5或C2-C6。在某些实施方案中，烯基基团的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基和4-甲基丁烯基。在某些实施方案中，术语“烯基”还体现了“顺式”和“反式”烯基几何形状，或替代地，“E”和“Z”烯基几何形状。在某些实施方案中，术语“烯基”还涵盖具有至少一个不饱和点的环烷基或碳环基团。
在某些实施方案中，“炔基”为具有一个或多个碳-碳三键的支链或直链脂族烃基团，所述碳-碳三键可出现在沿链的任何稳定点处。在一个非限制性实施方案中，炔基含有2至约12个碳原子，更通常2至约6个碳原子或2至约4个碳原子。在某些实施方案中，炔基为C2、C2-C3、C2-C4、C2-C5或C2-C6。在某些实施方案中，炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。在某些实施方案中，术语“炔基”还涵盖具有至少一个三键不饱和点的环烷基或碳环基团。
II.式I、II、III和IV的化合物
本发明提供了式I、II、III和IV的化合物、这些化合物的药物组合物、使用这些化合物的方法及制备这些化合物的方法。
式I的实施方案
可以组合所有单独的实施方案。
E1:本发明的一个实施方案为式I的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003698737280000221
其中
A选自环系AF和AG；
Figure BDA0003698737280000222
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CR52-；
A3选自
i)-N-，和
ii)-CR53-；
A4选自
i)-N-，和
ii)-CR54-；
A5选自
i)-N-，和
ii)-CR55-；
R1选自
i)H，
ii)卤素
iii)C1-6-烷基；
R52选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R53、R54和R55独立地选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R2选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R3选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；；
R4和R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1或2；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R7选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R70选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R8为H；
R9选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
L1为
Figure BDA0003698737280000251
C不存在或选自环系F、G和H；
Figure BDA0003698737280000252
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)-H-，
ii)卤素，和
iii)羟基-C1-6-烷基；
R16选自
i)-H-，
ii)羟基，和
iii)氟；
L3不存在或选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，
iv)-NR10-C(O)-，
v)-C(O)-NR10-，
vi)-C(O)O-，
vii)-CH2-CF2-CH2-，
viii)-CH2-，
ix)
Figure BDA0003698737280000261
x)
Figure BDA0003698737280000262
和
xi)
Figure BDA0003698737280000263
m为0、1或2；
p为0、1、2或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X，所有环系任选被一至三个选自R80、R81和R82的取代基所取代；
Figure BDA0003698737280000264
R80、R81和R82独立地选自
i)卤素，
ii)氰基，
iii)羟基，
iv)羟基-C1-6-烷基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
L4不存在或选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure BDA0003698737280000271
L5不存在或为
Figure BDA0003698737280000272
B选自环系AD和AE；
Figure BDA0003698737280000273
E2:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中
A选自环系AF和AG；
Figure BDA0003698737280000281
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
R1选自
i)H，和
ii)卤素；
R2为H；
R3选自
i)H，和
ii)卤素；
R4为H
R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)n-；
n为1；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，和
iv)卤代-C1-6-烷基；
R7为H；
R8为H；
R9为C1-6-烷基；
L1为
Figure BDA0003698737280000291
C不存在或为环系F；
Figure BDA0003698737280000292
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)H，和
ii)卤素；
R16选自
i)H，和
ii)羟基；
L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，和
iv)-NR10-C(O)-；
m为1；
p为1或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L和M；
Figure BDA0003698737280000301
L4选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z及AA、AB和AC；
Figure BDA0003698737280000302
L5为
Figure BDA0003698737280000303
B选自环系AD和AE；
Figure BDA0003698737280000304
E3:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中
A选自环系AF和AG；
Figure BDA0003698737280000311
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
R1选自
i)H，和
ii)氟；
R2为H；
R3选自
i)H，和
ii)氟；
R4为H
R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1；
R6选自
i)H，
ii)氟，
iii)氰基，
iv)二氟甲基，和
v)三氟甲基；
R7为H；
R8为H；
R9为甲基；
L1为
Figure BDA0003698737280000321
C为环系F；
Figure BDA0003698737280000322
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12和R13为氟；
R14和R15为H；
R16选自
i)H，和
ii)羟基；
L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，和
iv)-NR10-C(O)-；
m为1；
p为1或3；
R10为H；
D选自环系I、J、K、L和M；
Figure BDA0003698737280000331
L4选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure BDA0003698737280000332
L5为
Figure BDA0003698737280000333
B选自环系AD和AE；
Figure BDA0003698737280000334
E4:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中A为环系AF。
E5:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-N-。
E6:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-CH-。
E7:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自
i)H，和
ii)卤素。
E8:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自
i)H，和
ii)氟。
E9:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为氟。
E10:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为H。
E11:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自
i)H，和
ii)卤素。
E12:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自
i)H，和
ii)氟。
E13:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为H。
E14:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为H。
E15:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，和
iv)卤代-C1-6-烷基。
E16:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为H。
E17:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为H。
E18:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为C1-6-烷基。
E19:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为甲基。
E20:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。
E21:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中C不存在或为环系F。
E22:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中C为环系F。
E23:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R12和R13为氟。
E24:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R14和R15为H。
E25:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R16选自
i)H，和
ii)羟基。
E26:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R16为H。
E27:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，和
iv)-NR10-C(O)-。
E28:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中m为1。
E29:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为1或3。
E30:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基。
E31:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中D选自环系I、J、K、L和M。
E32:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中L4选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-。
E33:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中L4为
Figure BDA0003698737280000361
E34:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其选自
5-((2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺；
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺；
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)-4-氧代丁基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)环己基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-氰基-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-(三氟甲基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(吡啶-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(1-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-((1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-1-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3S)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺。
E35:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗活性物质。
E36:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗性和/或预防性治疗癌症，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R。
E37:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗性和/或预防性治疗非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R。
E38:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于治疗性和/或预防性治疗癌症的药剂，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R。
E39:本发明的某个实施方案为药物组合物，其包含如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅助物质。
E40:本发明的某个实施方案为用于治疗性和/或预防性治疗癌症的方法，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R，做法是向患者施用如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
E41:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗性和/或预防性治疗具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
E42:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗性和/或预防性治疗具有EGFR突变T790M/L858R、T790M/L858R/C797S、L858R和/或L858R/C797S的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
E43:本发明的某个实施方案为如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗性和/或预防性治疗如用
Figure BDA0003698737280000411
EGFR突变测试v2确定具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用如本文所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
E44:在适用的情况下，本发明包括式I的化合物的其相应氘代形式的所有取代基。
E45:在适用的情况下，本发明包括式I的化合物的所有光学异构体，即非对映异构体、非对映异构体混合物、外消旋混合物、所有它们的相应对映异构体和/或互变异构体以及它们的溶剂化物。
式II的实施方案
可以组合所有单独的实施方案。
E1:本发明的一个实施方案为式II的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003698737280000421
其中
A’选自环系AF、AG和AH；
Figure BDA0003698737280000422
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CR52-；
A3选自
i)-N-，和
ii)-CR53-；
A4选自
i)-N-，和
ii)-CR54-；
A5选自
i)-N-，和
ii)-CR55-；
R1’选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基
iv)氰基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
R52选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R53、R54和R55独立地选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R2选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R3选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；；
R4和R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1或2；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R7选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R70选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R8为H；
R9选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
L1为
Figure BDA0003698737280000451
C不存在或选自环系F、G和H；
Figure BDA0003698737280000452
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)-H-，
ii)卤素，和
iii)羟基-C1-6-烷基；
R16选自
i)-H-，
ii)羟基，和
iii)氟；
L3不存在或选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，
iv)-NR10-C(O)-，
v)-C(O)-NR10-，
vi)-C(O)O-，
vii)-CH2-CF2-CH2-，
viii)-CH2-，
ix)
Figure BDA0003698737280000461
x)
Figure BDA0003698737280000462
和
xi)
Figure BDA0003698737280000463
m为0、1或2；
p为0、1、2或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X，所有环系任选被一至三个选自R80、R81和R82的取代基所取代；
Figure BDA0003698737280000464
Figure BDA0003698737280000471
R80、R81和R82独立地选自
i)卤素，
ii)氰基，
iii)羟基，
iv)羟基-C1-6-烷基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
L4不存在或选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure BDA0003698737280000481
L5不存在或为
Figure BDA0003698737280000482
B选自环系AD和AE；
Figure BDA0003698737280000483
或其药学上可接受的盐。
E2:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中
A’选自环系AF、AG和AH；
Figure BDA0003698737280000484
A1为-NH-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
R1’选自
i)H，和
ii)卤素；
R2选自
i)H，和
ii)卤素；
R3为H；
R4为H；
R5为H；
R6选自
i)H，和
ii)卤素；
R7为H；
R8为H；
R9为C1-6-烷基；
L1为
Figure BDA0003698737280000491
C为环系F；
Figure BDA0003698737280000492
Y1为-CH-；
Y2为-N-；
R12、R13、R14和R15为H；
L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，和
ii)-C(O)-(CH2)p-；
m为1；
p为3；
D选自环系I和J；
Figure BDA0003698737280000501
L4不存在；
E选自环系Y和Z；
Figure BDA0003698737280000502
L5不存在；
或其药学上可接受的盐。
E3:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A选自环系AG和AF。
E4:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A为环系AF。
E5:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-NH-。
E6:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-CH-。
E7:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1’选自
i)H，和
ii)卤素。
E8:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1’选自
i)H，
ii)氯，和
iii)氟。
E9:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自
i)H，和
ii)卤素。
E10:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自
i)H，
ii)氯，和
iii)氟。
E11:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自
i)H，和
ii)卤素。
E12:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为H。
E13:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为H。
E14:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为H。
E15:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自
i)H，
ii)卤素。
E16:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为H。
E17:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为H。
E18:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为C1-6-烷基。
E19:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为甲基。
E20:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中C为环系F。
E21:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1为-CH-。
E22:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y2为-N-。
E23:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R12、R13、R14和R15为H。
E24:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，和
-C(O)-(CH2)p-。
E25:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中m为1。
E26:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为1或3。
E27:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中D选自环系I和J。
E28:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中D为环系J。
E29:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中L4不存在。
E30:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中E选自环系Y和Z。
E31:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中L5不存在。
E32:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其选自
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)哌啶-1-基)-4-氧代丁基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-[4,7-二氯-6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
或其药学上可接受的盐。
E33:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗活性物质。
E34:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗性和/或预防性治疗癌症，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R。
E35:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗性和/或预防性治疗非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R。
E36:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于治疗性和/或预防性治疗癌症的药剂，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R。
E37:本发明的某个实施方案为药物组合物，其包含如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅助物质。
E38:本发明的某个实施方案为用于治疗性和/或预防性治疗癌症的方法，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR突变的非小细胞肺癌，其中激活突变为L858R，做法是向患者施用如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐。
E39:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗性和/或预防性治疗具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐。
E40:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗性和/或预防性治疗具有EGFR突变T790M/L858R、T790M/L858R/C797S、L858R和/或L858R/C797S的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐。
E41:本发明的某个实施方案为如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗性和/或预防性治疗如用
Figure BDA0003698737280000531
EGFR突变测试v2确定具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用如本文所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐。
E42:在适用的情况下，本发明包括式II的化合物的其相应氘代形式的所有取代基。
E43:在适用的情况下，本发明包括式II的化合物的所有光学异构体，即非对映异构体、非对映异构体混合物、外消旋混合物、所有它们的相应对映异构体和/或互变异构体以及它们的溶剂化物。
式III和式IV的实施方案
E1:在某些实施方案中，本发明提供了一种式III或式IV的化合物：
Figure BDA0003698737280000541
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、其立体异构体，任选地作为药物组合物的一部分；
其中：
A*选自：
Figure BDA0003698737280000542
Figure BDA0003698737280000551
B*为杂芳基或芳基，其各自任选被1、2或3个R31取代基所取代；
y为0、1、2或3；
R31在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基并且当存在于双环上时可位于任一环上；
R32为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基或卤代-C3-8-环烷基；
R33为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基或卤代-C3-8-环烷基并且可位于二氢吡咯或咪唑环上；
R34在每次出现时独立地选自H、F、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
R35在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基和C3-8-环烷基；
或者R34和R35结合形成–(CH2)q-；
q为1或2；
R36和R37独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
或者R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-或6-元环；
R90为H、C1-6-烷基或C3-6-环烷基；
环G为杂芳基，任选被1或2个R42取代基所取代；
A21为-NH-、-O-、-CH2-或-NR100-；
R100为烷基、环烷基、芳基或杂芳基；或者在化合价允许的情况下，R100可与R37结合形成5-8元杂环或5元杂芳基；
A32、A33、A34和A35独立地选自-N-和-CR42-；
R42在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
A36为-N-或-CR35-；
L2为连接A*与异吲哚啉酮或吲唑的二价连接基团。
E2:实施方案1的化合物，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003698737280000561
或其药学上可接受的盐。
E3:实施方案1的化合物，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003698737280000562
或其药学上可接受的盐。
E4:实施方案1-3中任一项的化合物，其中R33为H。
E5:实施方案1-3中任一项的化合物，其中R33为F。
E6:实施方案1-5中任一项的化合物，其中y为1。
E7:实施方案1-5中任一项的化合物，其中y为2。
E8:实施方案1-7中任一项的化合物，其中至少一个R31为卤素。
E9:实施方案1-7中任一项的化合物，其中至少一个R31为F。
E10:实施方案1-5中任一项的化合物，其中y为0。
E11:实施方案1-10中任一项的化合物，其中R32为H。
E12:实施方案1-10中任一项的化合物，其中R32为F。
E13:实施方案1的化合物，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003698737280000563
Figure BDA0003698737280000571
E14:实施方案1的化合物，其中所述化合物选自：
Figure BDA0003698737280000572
E15:实施方案1-14中任一项的化合物，其中A*为：
Figure BDA0003698737280000573
E16:实施方案1-14中任一项的化合物，其中A*为：
Figure BDA0003698737280000574
E17:实施方案1-16中任一项的化合物，其中A34为CH。
E18:实施方案1-16中任一项的化合物，其中A34为N。
E19:实施方案1-16中任一项的化合物，其中A34为CR42。
E20:实施方案1-16中任一项的化合物，其中A34为CF。
E21:实施方案1-20中任一项的化合物，其中A35为CH。
E22:实施方案1-20中任一项的化合物，其中A35为N。
E23:实施方案1-20中任一项的化合物，其中A35为CR42。
E24:实施方案1-20中任一项的化合物，其中A35为CF。
E25:实施方案1-14中任一项的化合物，其中A*为：
Figure BDA0003698737280000581
E26:实施方案1-14中任一项的化合物，其中A*为：
Figure BDA0003698737280000582
E27:实施方案25或26的化合物，其中A21为NH。
E28:实施方案25或26的化合物，其中A21为O。
E29:实施方案1-14中任一项的化合物，其中A*为：
Figure BDA0003698737280000583
E30:实施方案1-29中任一项的化合物，其中A32为CH。
E31:实施方案1-29中任一项的化合物，其中A32为N。
E32:实施方案1-29中任一项的化合物，其中A32为CR42。
E33:实施方案1-29中任一项的化合物，其中A32为CF。
E34:实施方案1-33中任一项的化合物，其中A33为CH。
E35:实施方案1-33中任一项的化合物，其中A33为N。
E36:实施方案1-33中任一项的化合物，其中A33为CR42。
E37:实施方案1-33中任一项的化合物，其中A33为CF。
E38:实施方案1-14中任一项的化合物，其中A*为：
Figure BDA0003698737280000591
E39:实施方案38的化合物，其中A21为NH。
E40:实施方案38的化合物，其中A21为O。
E41:实施方案1-40中任一项的化合物，其中R34为H。
E42:实施方案1-40中任一项的化合物，其中R34为F。
E43:实施方案1-40中任一项的化合物，其中R34为CH3。
E44:实施方案1-43中任一项的化合物，其中R35为H。
E45:实施方案1-43中任一项的化合物，其中R35为F。
E46:实施方案1-43中任一项的化合物，其中R35为CH3。
E47:实施方案1-40中任一项的化合物，其中R34和R35结合形成-CH2-。
E48:实施方案1-47中任一项的化合物，其中R31在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)和C1-6-烷基。
E49:实施方案1-48中任一项的化合物，其中R42在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)和C1-6-烷基。
E50:实施方案1-49中任一项的化合物，其中B*为
Figure BDA0003698737280000592
E51:实施方案1-49中任一项的化合物，其中B*为
Figure BDA0003698737280000593
E52:实施方案1-49中任一项的化合物，其中B*为
Figure BDA0003698737280000594
E53:实施方案1-49中任一项的化合物，其中B*为
Figure BDA0003698737280000595
E54:实施方案1-53中任一项的化合物，其中L2具有式：
Figure BDA0003698737280000596
其中，
X1和X2在每次出现时独立地选自键、杂环、芳基、杂芳基、双环、烷基、脂族、杂脂族、-NR27-、-CR40R41-、-O-、-C(O)-、-C(NR27)-、-C(S)-、-S(O)-、-S(O)2-和–S-；杂环、芳基、杂芳基和双环中的每一个任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基所取代；
R20、R21、R22、R23和R24在每次出现时独立地选自键、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR27-、-NR27C(O)-、-O-、-S-、-NR27-、氧基亚烷基(oxyalkylene)、-C(R40R40)-、-P(O)(OR26)O-、-P(O)(OR26)-、双环、烯烃、炔烃、卤代烷基、烷氧基、芳基、杂环、脂族、杂脂族、杂芳基、乳酸、乙醇酸和碳环；其每一个任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基所取代；
R26在每次出现时独立地选自氢、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、烯烃、炔烃、芳基、杂芳基、杂环、脂族和杂脂族；
R27在每次出现时独立地选自氢、烷基、脂族、杂脂族、杂环、芳基、杂芳基、-C(O)(脂族、芳基、杂脂族或杂芳基)、-C(O)O(脂族、芳基、杂脂族或杂芳基)、烯烃和炔烃；
R40在每次出现时独立地选自氢、R27、烷基、烯烃、炔烃、氟、溴、氯、羟基、烷氧基、叠氮化物、氨基、氰基、-NH(脂族)、-N(脂族)2、-NHSO2(脂族)、-N(脂族)SO2烷基、-NHSO2(芳基、杂芳基或杂环)、-N(alk基)SO2(芳基、杂芳基或杂环)、-NHSO2烯基、-N(烷基)SO2烯基、-NHSO2炔基、-N(烷基)SO2炔基、卤代烷基、脂族、杂脂族、芳基、杂芳基、杂环、氧代和环烷基；另外，在化合价允许的情况下，与同一个碳结合的两个R40基团可接合在一起形成3-8元螺环；和
R41为脂族、芳基、杂芳基或氢。
E55:实施方案54的化合物，其中L2具有式：
Figure BDA0003698737280000601
E56:实施方案54或55的化合物，其中X1为键。
E57:实施方案54或55的化合物，其中X1为杂环。
E58:实施方案54或55的化合物，其中X1为NR2。
E59:实施方案54或55的化合物，其中X1为C(O)。
E60:实施方案54-59中任一项的化合物，其中X2为键。
E61:实施方案54-59中任一项的化合物，其中X2为杂环。
E62:实施方案54-59中任一项的化合物，其中X2为NR2。
E63:实施方案54-59中任一项的化合物，其中X2为C(O)。
E64:实施方案54-63中任一项的化合物，其中R20为键。
E65:实施方案54-63中任一项的化合物，其中R20为CH2。
E66:实施方案54-63中任一项的化合物，其中R20为杂环。
E67:实施方案54-63中任一项的化合物，其中R20为芳基。
E68:实施方案54-63中任一项的化合物，其中R20为苯基。
E69:实施方案54-63中任一项的化合物，其中R20为双环。
E70:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R21为键。
E71:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R21为CH2。
E72:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R21为杂环。
E73:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R21为芳基。
E74:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R21为苯基。
E75:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R21为双环。
E76:实施方案54的化合物，其中L为具有下式的接头：
Figure BDA0003698737280000611
E77:实施方案54-76中任一项的化合物，其中R22为键。
E78:实施方案54-76中任一项的化合物，其中R22为CH2。
E79:实施方案54-76中任一项的化合物，其中R22为杂环。
E80:实施方案54-76中任一项的化合物，其中R22为芳基。
E81:实施方案54-69中任一项的化合物，其中R22为苯基。
E82:实施方案54-76中任一项的化合物，其中R22为双环。
E83:实施方案54的化合物，其中L为具有下式的接头：
Figure BDA0003698737280000612
E84:实施方案54-83中任一项的化合物，其中R23为键。
E85:实施方案54-83中任一项的化合物，其中R23为CH2。
E86:实施方案54-83中任一项的化合物，其中R23为杂环。
E87:实施方案54-83中任一项的化合物，其中R23为芳基。
E88:实施方案54-83中任一项的化合物，其中R23为苯基。
E89:实施方案54-83中任一项的化合物，其中R23为双环。
E90:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为键。
E91:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为CH2。
E92:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为杂环。
E93:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为芳基。
E94:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为苯基。
E95:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为双环。
E96:实施方案54-89中任一项的化合物，其中R24为C(O)。
E97:在某些实施方案中，提供了选自以下的化合物：
Figure BDA0003698737280000621
Figure BDA0003698737280000631
Figure BDA0003698737280000641
Figure BDA0003698737280000651
Figure BDA0003698737280000661
Figure BDA0003698737280000671
Figure BDA0003698737280000681
Figure BDA0003698737280000691
Figure BDA0003698737280000701
Figure BDA0003698737280000711
Figure BDA0003698737280000721
Figure BDA0003698737280000731
Figure BDA0003698737280000741
Figure BDA0003698737280000751
Figure BDA0003698737280000761
Figure BDA0003698737280000771
Figure BDA0003698737280000781
或其药学上可接受的盐。
E98:在某些实施方案中，提供了选自以下的化合物：
Figure BDA0003698737280000782
Figure BDA0003698737280000791
Figure BDA0003698737280000801
Figure BDA0003698737280000811
Figure BDA0003698737280000821
Figure BDA0003698737280000831
Figure BDA0003698737280000841
Figure BDA0003698737280000851
Figure BDA0003698737280000861
Figure BDA0003698737280000871
Figure BDA0003698737280000881
Figure BDA0003698737280000891
Figure BDA0003698737280000901
Figure BDA0003698737280000911
Figure BDA0003698737280000921
Figure BDA0003698737280000931
Figure BDA0003698737280000941
Figure BDA0003698737280000951
Figure BDA0003698737280000961
Figure BDA0003698737280000971
Figure BDA0003698737280000981
Figure BDA0003698737280000991
Figure BDA0003698737280001001
Figure BDA0003698737280001011
Figure BDA0003698737280001021
Figure BDA0003698737280001031
Figure BDA0003698737280001041
Figure BDA0003698737280001051
Figure BDA0003698737280001061
Figure BDA0003698737280001071
Figure BDA0003698737280001081
Figure BDA0003698737280001091
Figure BDA0003698737280001101
Figure BDA0003698737280001111
Figure BDA0003698737280001121
或其药学上可接受的盐。
E99:在某些实施方案中，本发明为实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，任选地在药物组合物中，其用作治疗活性物质。
E100:在某些实施方案中，本发明为实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，任选地在药物组合物中，其用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
E101:在某些实施方案中，本发明为治疗患有EGFR介导病症的患者的方法，其包括施用实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，任选地在药物组合物中。
E102:实施方案101的方法，其中所述患者为人。
E103:实施方案101或102的方法，其中所述EGFR介导病症为癌症、肿瘤或异常细胞增殖。
E104:实施方案103的方法，其中所述EGFR介导病症为癌症或肿瘤。
E105:实施方案103的方法，其中所述EGFR介导病症为异常细胞增殖。
E106:实施方案104的方法，其中所述癌症为肺癌。
E107:实施方案106的方法，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
E108:实施方案103-107中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着至少一个突变的EGFR蛋白。
E109:实施方案103-108中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R突变的EGFR蛋白。
E110:实施方案103-109中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M突变的EGFR蛋白。
E111:实施方案103-110中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着C797S突变的EGFR蛋白。
E112:实施方案103-111中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L792H突变的EGFR蛋白。
E113:实施方案103-112中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L718Q突变的EGFR蛋白。
E114:实施方案103-108中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R突变的EGFR蛋白。
E115:实施方案103-108中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
E116:实施方案103-108中任一项的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
E117:实施方案101-116中任一项的方法，其中施用另外的EGFR抑制剂。
E118:实施方案117的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
E119:实施方案118的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为奥希替尼。
E120:实施方案118的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为罗西替尼(rociletinib)。
E121:实施方案118的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为艾维替尼(avitinib)。
E122:实施方案118的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为拉泽替尼(lazertinib)。
E123:实施方案118的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为纳扎替尼(nazartinib)。
E124:实施方案117的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为针对EGFR的突变形式的抗体。
E125:实施方案124的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。
E126:实施方案124的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为帕尼单抗。
E127:实施方案124的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为耐昔妥珠单抗。
E128:实施方案101-127中任一项的方法，其中还施用MET抑制剂。
E129:实施方案101-128中任一项的方法，其中患者接受另外的化疗剂。
E130:在某些实施方案中，本发明为实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于治疗患者的EGFR介导病症的药剂。
E131:实施方案130的用途，其中所述患者为人。
E132:实施方案130或131的用途，其中所述EGFR介导病症为癌症、肿瘤或异常细胞增殖。
E133:实施方案132的用途，其中所述EGFR介导病症为癌症或肿瘤。
E134:实施方案132的用途，其中所述EGFR介导病症为异常细胞增殖。
E135:实施方案132的用途，其中所述癌症为肺癌。
E136:实施方案135的用途，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
E137:实施方案132-136中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着至少一个突变的EGFR蛋白。
E138:实施方案132-137中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R突变的EGFR蛋白。
E139:实施方案132-138中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M突变的EGFR蛋白。
E140:实施方案132-139中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着C797S突变的EGFR蛋白。
E141:实施方案132-140中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L792H突变的EGFR蛋白。
E142:实施方案132-141中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L718Q突变的EGFR蛋白。
E143:实施方案132-136中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R突变的EGFR蛋白。
E144:实施方案132-136中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
E145:实施方案132-136中任一项的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
E146:实施方案130-145中任一项的用途，其中施用另外的EGFR抑制剂。
E147:实施方案146的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
E148:实施方案147的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为奥希替尼。
E149:实施方案147的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为罗西替尼。
E150:实施方案147的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为艾维替尼。
E151:实施方案147的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为拉泽替尼。
E152:实施方案147的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为纳扎替尼。
E153:实施方案146的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为针对EGFR的突变形式的抗体。
E154:实施方案153的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。
E155:实施方案153的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为帕尼单抗。
E156:实施方案153的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为耐昔妥珠单抗。
E157:实施方案130-156中任一项的用途，其中还施用MET抑制剂。
E158:实施方案130-157中任一项的用途，其中患者接受另外的化疗剂。
E159:在某些实施方案中，本发明为实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，任选地在药物组合物中，其用于患者的EGFR介导病症的治疗。
E160:实施方案159的化合物，其中所述患者为人。
E161:实施方案159或160的化合物，其中所述EGFR介导病症为癌症、肿瘤或异常细胞增殖。
E162:实施方案161的化合物，其中所述EGFR介导病症为癌症或肿瘤。
E163:实施方案161的化合物，其中所述EGFR介导病症为异常细胞增殖。
E164:实施方案162的化合物，其中所述癌症为肺癌。
E165:实施方案164的化合物，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
E166:实施方案161-165中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着至少一个突变的EGFR蛋白。
E167:实施方案161-166中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R突变的EGFR蛋白。
E168:实施方案161-167中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M突变的EGFR蛋白。
E169:实施方案161-168中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着C797S突变的EGFR蛋白。
E170:实施方案161-169中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L792H突变的EGFR蛋白。
E171:实施方案161-170中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L718Q突变的EGFR蛋白。
E172:实施方案161-166中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R突变的EGFR蛋白。
E173:实施方案161-166中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
E174:实施方案161-166中任一项的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
E175:实施方案159-174中任一项的化合物，其中施用另外的EGFR抑制剂。
E176:实施方案175的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
E177:实施方案175的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为奥希替尼。
E178:实施方案175的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为罗西替尼。
E179:实施方案175的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为艾维替尼。
E180:实施方案175的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为拉泽替尼。
E181:实施方案175的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为纳扎替尼。
E182:实施方案174的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为针对EGFR的突变形式的抗体。
E183:实施方案182的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。
E184:实施方案182的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为帕尼单抗。
E185:实施方案182的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为耐昔妥珠单抗。
E186:实施方案159-185中任一项的化合物，其中还施用MET抑制剂。
E187:实施方案159-186中任一项的化合物，其中患者接受另外的化疗剂。
E188:在某些实施方案中，本发明为实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，任选地在药物组合物中，其用作治疗性和/或预防性治疗如用
Figure BDA0003698737280001163
EGFR突变测试v2确定具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用实施方案1-98中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，任选地在药物组合物中。
E189:在某些实施方案中，本发明为药物组合物，其包含实施方案1-98中任一项的化合物和药学上可接受的赋形剂。
本发明的另外的实施方案
手性实施方案
本发明的化合物可具有多个立体中心(例如，手性碳原子)，包括例如在E3连接酶结合部分中的一个或多个立体中心(例如，
Figure BDA0003698737280001161
)、在接头中的一个或多个立体中心和/或在分子的EGFR结合配体部分中的至少一个立体中心(例如，
Figure BDA0003698737280001162
)。在某些实施方案中，提供了本发明的降解EGFR的化合物而不考虑立体化学。在其他实施方案中，降解EGFR的化合物可具有一个或多个手性碳，其以对映异构体富集的(即，纯度大于约50％、60％、70％、80％或90％)或甚至基本上纯的(纯度大于约95％、98％或99％)的R和S立体化学形式存在。在某些方面，降解EGFR的化合物具有两个对映异构体富集的和/或基本上纯的立体中心。在此的一个子方面，两个对映异构体富集的和/或基本上纯的立体中心位于化合物和接头的连接酶结合部分中；或者接头中存在两个。在另一个子方面，存在三个对映异构体富集的和/或基本上纯的立体中心，其中一个在化合物的连接酶结合部分中，两个在接头中。在此的还另一个子方面，存在三个对映异构体富集的和/或基本上纯的立体中心，其中一个在化合物的连接酶结合部分中，两个在接头中。在另一个方面，在任何这些实施方案、方面或子方面中，另外，EGFR结合配体部分呈对映异构体富集的或基本上纯的形式。
已观察到，在一些实施方案中，与酰胺相邻的EGFR结合配体部分中的手性碳在使用条件下可容易地在立体异构体之间消旋，并因此在某些实施方案中，就立体化学命名的目的而言不考虑。
在某些实施方案中，一个立体中心呈R构型，并且存在的任何其他立体中心或者是对映异构体富集的或者是基本上纯的。在某些实施方案中，一个立体中心呈S构型，并且存在的任何其他立体中心或者是对映异构体富集的或者是基本上纯的。
在某些实施方案中，一个立体中心呈R构型，并且存在的任何其他立体中心不考虑立体化学、是对映异构体富集的或是基本上纯的。在某些实施方案中，一个立体中心呈S构型，并且存在的任何其他立体中心不考虑立体化学、是对映异构体富集的或是基本上纯的。
在某些实施方案中，在E3连接酶结合部分中存在一个立体中心(不考虑EGFR结合配体部分中的立体中心)并且其在R-构型中是对映异构体富集的或是基本上纯的，如下所示。在另一个实施方案中，在E3连接酶结合部分中存在一个立体中心(不考虑EGFR结合配体部分中的立体中心)并且其在S-构型中是对映异构体富集的或是基本上纯的，如下所示。
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001171
为
Figure BDA0003698737280001172
其中R34为氢。
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001173
为
Figure BDA0003698737280001174
其中R34为氢。
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001175
为
Figure BDA0003698737280001176
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001177
为
Figure BDA0003698737280001178
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001179
为
Figure BDA00036987372800011710
在某些实施方案中，
Figure BDA00036987372800011711
为
Figure BDA00036987372800011712
在某些实施方案中，接头部分中存在一个立体中心并且其为R-和S-构型的混合物。在另一个实施方案中，接头部分中存在一个立体中心并且其为对映异构体富集的或基本上纯的R-构型。在另一个实施方案中，接头部分中存在一个立体中心并且其为对映异构体富集的或基本上纯的S-构型。
在某些实施方案中，接头含有一个或多个具有手性中心的部分。非限制性实例包括具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的杂环，例如具有与氮间位或邻位或以间位或邻位构型连接的取代基的哌啶；以间位或邻位构型具有取代基或连接的哌嗪；具有或不具有取代基的吡咯烷酮；和具有或不具有取代基的吡咯烷。
具有至少一个手性中心的接头部分的另外的非限制性实例包括具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的烷基；具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的烯烃；具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的炔烃；具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的卤代烷基；具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的烷氧基；具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的脂族基团；具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的杂脂族基团；和具有对映异构体富集的或基本上纯的立体中心的环烷基
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001181
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001182
Figure BDA0003698737280001183
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001184
Figure BDA0003698737280001185
在某些实施方案中，接头包括或
Figure BDA0003698737280001186
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001187
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001188
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001189
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA00036987372800011810
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA00036987372800011811
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001191
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001192
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001193
在某些实施方案中，接头包括
Figure BDA0003698737280001194
在某些实施方案中，在EGFR配体部分中存在至少一个立体中心，其为R和S的混合物。在另一个实施方案中，在EGFR配体部分中存在至少一个立体中心并且其在R-构型中是对映异构体富集的或基本上纯的。在另一个实施方案中，在EGFR配体部分中存在至少一个立体中心并且其在S-构型中是对映异构体富集的或基本上纯的。
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001195
为
Figure BDA0003698737280001196
其中R33为氢。
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001197
为
Figure BDA0003698737280001198
其中R33为氢。
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001199
为
Figure BDA00036987372800011910
在某些实施方案中，
Figure BDA00036987372800011911
为
Figure BDA00036987372800011912
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001201
为
Figure BDA0003698737280001202
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001203
为
Figure BDA0003698737280001204
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001205
为
Figure BDA0003698737280001206
在某些实施方案中，
Figure BDA0003698737280001207
为
Figure BDA0003698737280001208
烷基的实施方案
在某些实施方案中，“烷基”为C1-C10烷基、C1-C9烷基、C1-C8烷基、C1-C7烷基、C1-C6烷基、C1-C5烷基、C1-C4烷基、C1-C3烷基或C1-C2烷基。
在某些实施方案中，“烷基”具有一个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有两个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有三个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有六个碳。
“烷基”的非限制性实例包括：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：异丙基、异丁基、异戊基和异己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：仲丁基、仲戊基和仲己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：叔丁基、叔戊基和叔己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：新戊基、3-戊基和活性戊基。
在一个替代的实施方案中，“烷基”“任选”被1、2、3或4个R31取代基“所取代”。
环烷基的实施方案
在某些实施方案中，“环烷基”为C3-C8环烷基、C3-C7环烷基、C3-C6环烷基、C3-C5环烷基、C3-C4环烷基、C4-C8环烷基、C5-C8环烷基或C6-C8环烷基。
在某些实施方案中，“环烷基”具有三个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有六个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有七个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有八个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有九个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有十个碳。
“环烷基”的非限制性实例包括：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基和环癸基。
在一个替代的实施方案中，“环烷基”“任选”被1、2、3或4个R31取代基“所取代”。
卤代烷基的实施方案
在某些实施方案中，“卤代烷基”为C1-C10卤代烷基、C1-C9卤代烷基、C1-C8卤代烷基、C1-C7卤代烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C5卤代烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C2卤代烷基。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和一个卤素。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和两个卤素。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和三个卤素。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有两个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有三个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有六个碳。
“卤代烷基”的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001211
“卤代烷基”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001212
Figure BDA0003698737280001213
“卤代烷基”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001214
“卤代烷基”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001221
杂环的实施方案
在某些实施方案中，“杂环”是指具有一个氮和3、4、5、6、7或8个碳原子的环状环。
在某些实施方案中，“杂环”是指具有一个氮和一个氧及3、4、5、6、7或8个碳原子的环状环。
在某些实施方案中，“杂环”是指具有两个氮和3、4、5、6、7或8个碳原子的环状环。
在某些实施方案中，“杂环”是指具有一个氧和3、4、5、6、7或8个碳原子的环状环。
在某些实施方案中，“杂环”是指具有一个硫和3、4、5、6、7或8个碳原子的环状环。
“杂环”的非限制性实例包括氮杂环丙烷、环氧乙烷、环硫乙烷、氮杂环丁烷、1,3-二氮杂环丁烷、氧杂环丁烷和硫杂环丁烷。
“杂环”的另外的非限制性实例包括吡咯烷、3-吡咯啉、2-吡咯啉、吡唑烷和咪唑烷。
“杂环”的另外的非限制性实例包括四氢呋喃、1,3-二氧戊环、四氢噻吩、1,2-氧硫杂环戊烷和1,3-氧硫杂环戊烷。
“杂环”的另外的非限制性实例包括哌啶、哌嗪、四氢吡喃、1,4-二噁烷、噻烷、1,3-二噻烷、1,4-二噻烷、吗啉和硫代吗啉。
“杂环”的另外的非限制性实例包括二氢吲哚、四氢喹啉、四氢异喹啉和二氢苯并呋喃，其中每个基团的连接点在杂环环上。
“杂环”的非限制性实例还包括：
Figure BDA0003698737280001222
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001223
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001224
“杂环”的非限制性实例还包括：
Figure BDA0003698737280001225
“杂环”的非限制性实例还包括：
Figure BDA0003698737280001231
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001232
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001233
在一个替代的实施方案中，“杂环”“任选”被1、2、3或4个R31取代基“所取代”。
杂芳基的实施方案
在某些实施方案中，“杂芳基”为含有1、2、3或4个氮原子的5元芳族基团。
5元“杂芳基”基团的非限制性实例包括吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、三唑、四唑、异噁唑、噁唑、噁二唑、噁三唑、异噻唑、噻唑、噻二唑和噻三唑。
5元“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001234
在某些实施方案中，“杂芳基”为含有1、2或3个氮原子的6元芳族基团(即，吡啶基、哒嗪基、三嗪基、嘧啶基和吡嗪基)。
具有1或2个氮原子的6元“杂芳基”基团的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001235
在某些实施方案中，“杂芳基”为含有1或2个选自氮、氧和硫的原子的9元双环芳族基团。
为双环的“杂芳基”基团的非限制性实例包括吲哚、苯并呋喃、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、氮杂吲哚、氮杂吲唑、嘌呤、异苯并呋喃、苯并噻吩、苯并异噁唑、苯并异噻唑、苯并噁唑和苯并噻唑。
为双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001241
为双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001242
为双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001243
在某些实施方案中，“杂芳基”为含有1或2个选自氮、氧和硫的原子的10元双环芳族基团。
为双环的“杂芳基”基团的非限制性实例包括喹啉、异喹啉、喹喔啉、酞嗪、喹唑啉、噌啉和萘啶。
为双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001244
在一个替代的实施方案中，“杂芳基”“任选”被1、2、3或4个R31取代基“所取代”。
芳基的实施方案
在某些实施方案中，芳基为苯基。
在某些实施方案中，芳基为萘基。
在一个替代的实施方案中，“芳基”“任选”被1、2、3或4个R31取代基“所取代”。
双环的实施方案
术语“双环”是指其中两个环共用至少一个原子的环系。这些环可为螺环或稠合在一起并且每个环独立地选自碳环、杂环、芳基和杂芳基。双环基团的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001245
当在二价残基如接头的上下文中使用术语“双环”时，连接点可在单独的环上或在同一个环上。在某些实施方案中，两个连接点在同一个环上。在某些实施方案中，两个连接点在不同的环上。二价双环基团的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001251
二价双环的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001252
在一个替代的实施方案中，“双环”“任选”被1、2、3或4个R31取代基“所取代”。
任选的取代基的实施方案
在其中变量可任选被取代的某些实施方案中，其不被取代。
在其中变量可任选被取代的某些实施方案中，其被1个取代基所取代。
在其中变量可任选被取代的某些实施方案中，其被2个取代基所取代。
在其中变量可任选被取代的某些实施方案中，其被3个取代基所取代。
在其中变量可任选被取代的某些实施方案中，其被4个取代基所取代。
在一个替代的实施方案中，任何合适的基团可以存在于“被取代的”或“任选被取代的”位置上(如果表明形成稳定的分子并满足本发明的所需目的的话)并包括但不限于例如卤素(其可独立地为F、Cl、Br或I)；氰基；羟基；硝基；叠氮基；链烷酰基(如C2-C6链烷酰基基团)；甲酰胺；烷基、环烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基如苯氧基；硫代烷基，包括具有一个或多个硫醚键的那些；烷基亚磺酰基；烷基磺酰基基团，包括具有一个或多个磺酰基键的那些；氨基烷基，包括具有多于一个N原子的基团；芳基(例如，苯基、联苯基、萘基等，每个环是取代或未取代的)；具有例如1至3个单独的或稠合的环和6至约14或18个环碳原子的芳基烷基，其中苄基为示例性的芳基烷基基团；芳基烷氧基，例如具有1至3个单独的或稠合的环，其中苄氧基为示例性的芳基烷氧基基团；或具有1至3个具有一个或多个N、O或S原子的单独的或稠合的环的饱和或部分不饱和杂环，或具有1至3个具有一个或多个N、O或S原子的单独的或稠合的环的杂芳基，例如香豆素基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基和吡咯烷基。这样的基团可例如被羟基、烷基、烷氧基、卤素和氨基进一步取代。
脂族和杂脂族的实施方案
在某些实施方案中，“脂族”是指饱和或不饱和的直链、支链或环状烃。在这些实施方案中，脂族旨在包括但不限于烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基和环炔基部分，并因此并入了这些定义中的每一个。在某些实施方案中，“脂族”用于指示具有1-20个碳原子的那些脂族基团。脂族链可以是例如单不饱和的、二不饱和的、三不饱和的或多不饱和的，或可为炔基。不饱和脂族基团可为顺式或反式构型。在某些实施方案中，脂族基团含有1至约12个碳原子，更通常1至约6个碳原子或1至约4个碳原子。在某些实施方案中，脂族基团含有1至约8个碳原子。在某些实施方案中，脂族基团为C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5或C1-C6。如本文所用的特定范围指示具有所述范围的每一成员的脂族基团，所述范围的每一成员被描述为独立的物质。例如，如本文所用的术语C1-C6脂族指示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烷基、烯基或炔基基团并且旨在意指这些中的每一个被描述为独立的物质。例如，如本文所用的术语C1-C4脂族指示具有1、2、3或4个碳原子的直链或支链烷基、烯基或炔基基团并且旨在意指这些中的每一个被描述为独立的物质。在某些实施方案中，脂族基团被一个或多个导致形成稳定部分的官能团所取代。
在某些实施方案中，“杂脂族”是指在链中含有至少一个杂原子的脂族部分，例如胺、羰基、羧基、氧代、硫代、磷酸酯、膦酸酯、氮、磷、硅或硼原子，代替碳原子。在某些实施方案中，唯一的杂原子为氮。在某些实施方案中，唯一的杂原子为氧。在某些实施方案中，唯一的杂原子为硫。在某些实施方案中，“杂脂族”在本文中旨在包括但不限于杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基和杂环炔基部分。在某些实施方案中，“杂脂族”用于指示具有1-20个碳原子的杂脂族基团(环状的、无环的、取代的、未取代的、支链的或无支链的)。在某些实施方案中，杂脂族基团任选以导致形成稳定部分的方式被取代。杂脂族部分的非限制性实例为聚乙二醇、聚亚烷基二醇、酰胺、聚酰胺、聚丙交酯、聚乙交酯、硫醚、醚、烷基-杂环-烷基、-O-烷基-O-烷基、烷基-O-卤代烷基等。
A和A*的实施方案
在某些实施方案中，A*为
Figure BDA0003698737280001261
在某些实施方案中，A*为
Figure BDA0003698737280001262
在某些实施方案中，A*为
Figure BDA0003698737280001271
在某些实施方案中，A*为
Figure BDA0003698737280001272
在某些实施方案中，A*为
Figure BDA0003698737280001273
在某些实施方案中，A*为
Figure BDA0003698737280001274
在某些实施方案中，R34和R35结合形成CH2。
在某些实施方案中，R34为H。
在某些实施方案中，R35为H。
在某些实施方案中，A1为NH。
在某些实施方案中，A1为O。
在某些实施方案中，A21为NH。
在某些实施方案中，A21为O。
在某些实施方案中，A21为CH2。
在某些实施方案中，A21为NR100。
在某些实施方案中，A32、A33、A34和A35各选自CH、C-卤素和CF。
在某些实施方案中，A32为CH。
在某些实施方案中，A32为CF。
在某些实施方案中，A32为CR42。
在某些实施方案中，A32为N。
在某些实施方案中，A33为CH。
在某些实施方案中，A33为CF。
在某些实施方案中，A33为CR42。
在某些实施方案中，A33为N。
在某些实施方案中，A34为CH。
在某些实施方案中，A34为CF。
在某些实施方案中，A34为CR42。
在某些实施方案中，A34为N。
在某些实施方案中，A35为CH。
在某些实施方案中，A35为CF。
在某些实施方案中，A35为CR42。
在某些实施方案中，A35为N。
在某些实施方案中，A36为N。
在某些实施方案中，R90为氢。
在某些实施方案中，R90为C1-C3烷基。
在某些实施方案中，R90为C3-6-环烷基。
在某些实施方案中，R90为甲基。
在某些实施方案中，A或A*为
Figure BDA0003698737280001281
在某些实施方案中，A或A*为
Figure BDA0003698737280001282
在某些实施方案中，A或A*为
Figure BDA0003698737280001291
在某些实施方案中，A或A*选自：
Figure BDA0003698737280001292
B和B*的实施方案
在某些实施方案中，B或B*为
Figure BDA0003698737280001301
在某些实施方案中，B或B*为
Figure BDA0003698737280001302
在某些实施方案中，B*为杂芳基。
在某些实施方案中，B*为被一个R31基团所取代的杂芳基。
在某些实施方案中，B*为芳基。
在某些实施方案中，B*为被一个R31基团所取代的芳基。
在某些实施方案中，B*为
Figure BDA0003698737280001303
在某些实施方案中，B*为
Figure BDA0003698737280001304
在某些实施方案中，B*为
Figure BDA0003698737280001305
在某些实施方案中，B*为
Figure BDA0003698737280001306
在某些实施方案中，B*为
Figure BDA0003698737280001307
在某些实施方案中，B*为
Figure BDA0003698737280001308
y的实施方案
在某些实施方案中，y为0。
在某些实施方案中，y为1。
在某些实施方案中，y为2。
在某些实施方案中，y为3。
R31的实施方案
在某些实施方案中，至少一个R31为卤素。
在某些实施方案中，至少一个R31为F。
在某些实施方案中，至少一个R31为Cl。
在某些实施方案中，至少一个R31为C1-6-烷基。
在某些实施方案中，至少一个R31为卤代-C1-6-烷基。
在某些实施方案中，一个R31为卤素。
在某些实施方案中，一个R31为F。
在某些实施方案中，一个R31为Cl。
在某些实施方案中，一个R31为C1-6-烷基。
在某些实施方案中，一个R31为氰基。
在某些实施方案中，一个R31为C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，一个R31为卤代-C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，一个R31为C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，一个R31为卤代-C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R31选自卤素、C1-6-烷氧基和C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R31选自F、Cl、甲氧基和甲基。
R36和R37的实施方案
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-元环。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的6-元环。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-元环烷基。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的6-元环烷基。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-元杂芳基。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的6-元杂芳基。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-元杂环。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的6-元杂环。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的吗啉。
在某些实施方案中，R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的苯基。
在某些实施方案中，通过结合R36与R37形成的环是未取代的。
在某些实施方案中，通过结合R36与R37形成的环被1个R31取代基所取代。
在某些实施方案中，通过结合R36与R37形成的环被2个R31取代基所取代。
在某些实施方案中，通过结合R36与R37形成的环被3个R31取代基所取代。
在某些实施方案中，R36为氢。
在某些实施方案中，R36为卤素。
在某些实施方案中，R36为F。
在某些实施方案中，R36为Cl。
在某些实施方案中，R36为C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R36为氰基。
在某些实施方案中，R36为C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，R36为卤代-C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，R36为C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R36为卤代-C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R36选自氢、卤素、C1-6-烷氧基和C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R36选自氢、F、Cl、甲氧基和甲基。
在某些实施方案中，R37为氢。
在某些实施方案中，R37为卤素。
在某些实施方案中，R37为F。
在某些实施方案中，R37为Cl。
在某些实施方案中，R37为C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R37为氰基。
在某些实施方案中，R37为C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，R37为卤代-C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，R37为C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R37为卤代-C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R37选自氢、卤素、C1-6-烷氧基和C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R37选自氢、F、Cl、甲氧基和甲基。
R42的实施方案
在某些实施方案中，至少一个R42为卤素。
在某些实施方案中，至少一个R42为F。
在某些实施方案中，至少一个R42为Cl。
在某些实施方案中，至少一个R42为C1-6-烷基。
在某些实施方案中，至少一个R42为卤代-C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R42为氢。
在某些实施方案中，R42为卤素。
在某些实施方案中，R42为F。
在某些实施方案中，R42为Cl。
在某些实施方案中，R42为C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R42为氰基。
在某些实施方案中，R42为C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，R42为卤代-C1-6-烷氧基。
在某些实施方案中，R42为C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R42为卤代-C3-8-环烷基。
在某些实施方案中，R42选自氢、卤素、C1-6-烷氧基和C1-6-烷基。
在某些实施方案中，R42选自氢、F、Cl、甲氧基和甲基。
环G的实施方案
在某些实施方案中，环G为5-元杂芳基环，任选被1或2个R42取代基所取代。
在某些实施方案中，环G为6-元杂芳基环，任选被1或2个R42取代基所取代。
在某些实施方案中，环G选自：
Figure BDA0003698737280001331
EGFR靶向配体的实施方案
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001332
Figure BDA0003698737280001341
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001342
Figure BDA0003698737280001351
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001352
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001353
Figure BDA0003698737280001361
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001362
Figure BDA0003698737280001371
Figure BDA0003698737280001381
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001382
Figure BDA0003698737280001391
式III的化合物
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001392
Figure BDA0003698737280001401
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001402
Figure BDA0003698737280001411
式IV的化合物
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001412
Figure BDA0003698737280001421
III.本发明的另外的化合物
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001431
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001432
Figure BDA0003698737280001441
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001442
Figure BDA0003698737280001451
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001461
Figure BDA0003698737280001471
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001472
Figure BDA0003698737280001481
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001482
Figure BDA0003698737280001491
Figure BDA0003698737280001501
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001502
Figure BDA0003698737280001511
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001512
Figure BDA0003698737280001521
Figure BDA0003698737280001531
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001532
Figure BDA0003698737280001541
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001542
Figure BDA0003698737280001551
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001561
Figure BDA0003698737280001571
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001572
Figure BDA0003698737280001581
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001591
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001592
Figure BDA0003698737280001601
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001602
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001611
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001612
Figure BDA0003698737280001621
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001622
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001631
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001632
Figure BDA0003698737280001641
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001642
Figure BDA0003698737280001651
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001661
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001662
Figure BDA0003698737280001671
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001681
Figure BDA0003698737280001691
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001692
Figure BDA0003698737280001701
Figure BDA0003698737280001711
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001712
Figure BDA0003698737280001721
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001722
Figure BDA0003698737280001731
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001732
Figure BDA0003698737280001741
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001742
Figure BDA0003698737280001751
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001752
Figure BDA0003698737280001761
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001762
在某些实施方案中，本发明的化合物选自：
Figure BDA0003698737280001763
Figure BDA0003698737280001771
Figure BDA0003698737280001781
Figure BDA0003698737280001791
IV.接头
本发明的化合物中包括接头(L1或L2)或键。接头为化学稳定的二价基团，可将E3连接酶结合部分连接到EGFR靶向配体。根据本发明，可使用如本文所述的任何所需的接头，只要作为药学上可接受的剂型的一部分，所得化合物具有稳定的货架寿命，例如至少1个月、2个月、3个月、6个月或1年，并且其本身是药学上可接受的。
如本文所述的接头可以任一方向使用，即，或左端与E3连接酶结合部分相连而右端与EGFR靶向配体相连，或左端与EGFR靶向配体相连而右端与E3连接酶结合部分相连。
在某些实施方案中，接头为键。
在某些实施方案中，接头具有2至14、15、16、17、18或20个或更多个碳原子的链，其中一个或多个碳可被替换为杂原子如O、N、S或P。
在某些实施方案中，该链在链中具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续原子。例如，该链可包括1个或多个乙二醇单元，这些单元可以是连续的、部分连续的或不连续的(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个乙二醇单元)。
在某些实施方案中，该链具有至少1、2、3、4、5、6、7或8个可具有分支的连续链，所述分支可独立地为烷基、芳基、杂芳基、烯基或炔基、脂族、杂脂族、环烷基或杂环取代基。
在其他实施方案中，接头可包含乙二醇、丙二醇、乳酸和/或乙醇酸中的一种或多种或者由乙二醇、丙二醇、乳酸和/或乙醇酸中的一种或多种组成。乳酸链段往往比乙醇酸链段具有更长的半衰期。嵌段和无规乳酸-共-乙醇酸部分以及乙二醇和丙二醇在本领域中已知是药学上可接受的并且可被改性或排列以获得所需的半衰期和亲水性。在某些方面，这些单元可根据需要侧接或散布有其他部分，如脂族，包括烷基、杂脂族、芳基、杂芳基、杂环、环烷基等，以取得适宜的药物性质。
在某些实施方案中，L2为选自以下的接头：
Figure BDA0003698737280001801
在一个方面，接头(L2)选自式LI、式LII、式LIII、式LIV、式LV、式LVI、式LVII、式LVIII、式IX和式LX的部分：
Figure BDA0003698737280001802
Figure BDA0003698737280001811
其中所有变量为如本文所定义。
在某些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001812
在一个方面，接头(L2)选自式LDI、式LDII、式LDIII、式LDIV、式LDV、式LDVI和式LDVII的部分：
Figure BDA0003698737280001813
其中所有变量为本文所述。
以下为可用于本发明的接头的非限制性实例。基于该详尽阐述，本领域技术人员将理解如何使用将实现本发明的目标的全部范围的接头。
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001814
Figure BDA0003698737280001821
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001822
Figure BDA0003698737280001831
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001841
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001842
Figure BDA0003698737280001851
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001852
Figure BDA0003698737280001861
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001862
Figure BDA0003698737280001871
在某些实施方案中，L2选自：
Figure BDA0003698737280001872
R20、R21、R22、R23和R24部分的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001873
Figure BDA0003698737280001881
R20、R21、R22、R23和R24部分的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001882
R20、R21、R22、R23和R24部分的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0003698737280001883
在另外的实施方案中，接头(L2)部分为具有至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10个乙二醇单元的任选被取代的(聚)乙二醇，或散布有任选被取代的O、N、S、P或Si原子的任选被取代的烷基基团。
在某些实施方案中，接头(L2)侧接、被取代或散布有芳基、苯基、苄基、烷基、亚烷基或杂环基团。
在某些实施方案中，接头(L2)可以是不对称的或对称的。
在某些实施方案中，接头(L2)可以是非线性链，并且可以是或包括脂族或芳族或杂芳族环状部分。
在本文描述的化合物的任何实施方案中，接头基团可以是如本文所述的任何合适的部分。
在某些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001891
在一些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001892
在一些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001893
Figure BDA0003698737280001901
在一些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001902
Figure BDA0003698737280001911
在一些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001912
Figure BDA0003698737280001921
在一些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001922
在一些实施方案中，接头(L2)选自：
Figure BDA0003698737280001923
Figure BDA0003698737280001931
在某些实施方案中，接头(L2)或其部分选自：
Figure BDA0003698737280001932
V.治疗方法
本发明的化合物可以有效的量用于治疗有此需要的患者，或治疗由EGFR介导的任何病症。
本发明的另一个方面提供了如本文所述的化合物，或者其对映异构体、非对映异构体或立体异构体，或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，或者药物组合物，用于制造用于治疗或预防有此需要的患者的癌症的药剂；其中需要EGFR抑制来治疗或预防癌症。
在一个方面，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的癌症，其中EGFR已从野生型突变。EGFR突变有多种可能性。在某些非限制性实施方案中，突变存在于外显子18、外显子19、外显子20或外显子21或其任何组合中。在某些非限制性实施方案中，突变在位置L858、E709、G719、C797、L861、T790或L718或其任何组合处。在某些实施方案中，突变为L858R、T790M、L718Q、L792H和/或C797S突变或其任何组合。
在某些方面，癌症在用至少一种EGFR抑制剂治疗后已发生一个或多个EGFR突变，所述抑制剂可为非共价抑制剂(包括但不限于吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼或凡德他尼)或共价抑制剂(如阿法替尼、奥希替尼或达克替尼)。在另一个方面，癌症在用抗体如西妥昔单抗、帕尼单抗或耐昔妥珠单抗治疗后已发生一个或多个EGFR突变。在还另一个方面，癌症具有使癌症对EGFR抑制剂治疗具有内在抗性的一个或多个EGFR突变或非EGFR突变，例如，体细胞外显子20插入、体细胞PIK3CA突变、PTEN表达丧失、MET扩增、或KRAS突变。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第一代EGFR抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼和/或拉帕替尼具有抗性或已获得抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第二代EGFR抑制剂如阿法替尼和/或达克替尼具有抗性或已获得抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第三代EGFR抑制剂如奥希替尼具有抗性或已获得抗性的癌症。
在一些实施方案中，患病组织中的突变EGFR蛋白具有L858突变，例如L858R。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗突变EGFR介导的病症，其中EGFR在下列氨基酸位点中之一处具有突变。突变可例如选自所列示例性突变中之一，或者可以是不同的突变。
氨基酸 示例性突变
C797 C797S
E709 E709A、E709G、E709K、E709V
G719 G719A、G719S、G719C、G719D
G724 G724S
G119 G119A
G796 G796S、G796C
L718 L718V、L718Q
L792 L792H、L792V
L858 L858R
L861 L861Q
S768 S768I
T790 T790M
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有选自上表的两个突变。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有选自上表的三个突变。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有四个或更多个突变，其可任选地选自上表。
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L858R突变和一个另外的突变，所述一个另外的突变可任选地选自上表。在这些实施方案中的一些中，突变EGFR介导的病症具有L858R突变和两个另外的突变，所述两个另外的突变可任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L858R突变和三个另外的突变，所述三个另外的突变可任选地选自上表。
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有T790M突变和一个另外的突变，所述一个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有T790M突变和两个另外的突变，所述两个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有T790M突变和三个另外的突变，所述三个另外的突变任选地选自上表。
在某些实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L718Q突变和一个另外的突变，所述一个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L718Q突变和两个另外的突变，所述两个另外的突变任选地选自上表。在其他实施方案中，突变EGFR介导的病症具有L718Q突变和三个另外的突变，所述三个另外的突变任选地选自上表。
在某些实施方案中，EGFR介导的病症为突变EGFR介导的癌症。
在某些实施方案中，EGFR介导的癌症具有S768I、L718V、L792H、L792V、G796S、G796C、G724S和/或G719A的突变。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的具有移码突变、例如短的框内缺失的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR具有外显子19缺失的癌症。在某些实施方案中，外显子19缺失为包括氨基酸LREA(L747-A750)的缺失。在某些实施方案中，外显子19缺失为包括氨基酸ELREA(E746-A750)的缺失。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR在外显子21中具有L858R突变的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物对由突变EGFR驱动的病症比对由野生型EGFR驱动的病症更有活性。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR具有一个或多个外显子18缺失的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有E709突变的EGFR，例如E709A、E709G、E709K或E709V。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有L718突变的EGFR，例如L718Q。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗具有G719突变的EGFR，例如G719S、G719A、G719C或G719D。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR介导的其中EGFR具有一个或多个外显子19插入和/或一个或多个外显子20插入的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗S7681突变EGFR癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗EGFR L861Q突变EGFR癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗C797S突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗T790M、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗L718Q、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗L792H、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗C797S、L858R突变EGFR癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对至少一种EGFR抑制剂具有抗性的癌症，例如对第一代EGFR抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼和/或拉帕替尼具有抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第一代EGFR抑制剂具有获得性抗性的癌症，例如对第一代EGFR抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼和/或拉帕替尼具有获得性抗性的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第二代EGFR抑制剂如阿法替尼和/或达克替尼具有抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第二代EGFR抑制剂具有获得性抗性的癌症，例如对第二代EGFR抑制剂如阿法替尼和/或达克替尼具有获得性抗性的癌症。
在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第三代EGFR抑制剂如奥希替尼具有抗性的癌症。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗对第三代EGFR抑制剂具有获得性抗性的癌症，例如对第三代EGFR抑制剂如奥希替尼具有获得性抗性的癌症。
在某些实施方案中，方法包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐，任选地包括药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂(即，药学上可接受的组合物)，或任选地与另一生物活性剂或剂的组合相组合或交替。
在某些实施方案中，本发明提供了一种在有此需要的患者中治疗本文描述的任何病症的方法。
在其他实施方案中，向患者施用另外的治疗剂。在其他实施方案中，如本文所述的化合物和另外的治疗剂同时或依序施用。
在某些实施方案中，本申请提供了一种在有此需要的患者中预防本文描述的任何病症的方法。
在某些实施方案中，患者为人。
作为EGFR的降解剂，本申请的化合物和组合物特别可用于治疗其中EGFR与疾病、病患或病症有关的疾病、病患或病症或者减轻其中EGFR与疾病、病患或病症有关的疾病、病患或病症的严重性。
在一个方面，本发明提供了一种治疗其中EGFR与疾病状态有关的疾病、病患或病症或者减轻其中EGFR与疾病状态有关的疾病、病患或病症的严重性的方法。
本发明的另一个方面提供了一种治疗或预防增殖性疾病的方法。所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物和任选地药学上可接受的载体。
在一些实施方案中，所述疾病由EGFR介导。在其他实施方案中，EGFR在疾病的开始或发展中起作用。
在某些实施方案中，所述疾病或病症为癌症或增殖性疾病。
在某些实施方案中，EGFR介导病症为异常细胞增殖，包括但不限于实体癌或血液癌。
在某些实施方案中，血液癌为急性髓性白血病(AML)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、淋巴母细胞T细胞白血病、慢性髓性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病、慢性嗜中性粒细胞白血病(CNL)、急性淋巴母细胞T细胞白血病、急性单核细胞性白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核母细胞白血病、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、混合谱系白血病(MLL)、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、B细胞急性淋巴母细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Myc和B-细胞白血病(BCL)2和/或CL6重排/过表达[双重和三重打击淋巴瘤]、骨髓发育不良性/骨髓增生性肿瘤、套细胞淋巴瘤(包括耐硼替佐米套细胞淋巴瘤)。
可用本文描述的化合物治疗的实体瘤包括但不限于：肺癌，包括小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)；乳腺癌，包括炎性乳腺癌、ER-阳性乳腺癌(包括耐他莫昔芬的ER-阳性乳腺癌)和三阴性乳腺癌；结肠癌；中线癌；肝癌；肾癌；前列腺癌(包括去势抵抗性前列腺癌(CRPC))；脑癌，包括神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤和成神经管细胞瘤(包括MYC-扩增成神经管细胞瘤)；结肠直肠癌；Wilm's肿瘤；尤因氏肉瘤；横纹肌肉瘤；室管膜瘤；头颈癌；黑色素瘤；鳞状细胞癌；卵巢癌；胰腺癌，包括胰腺导管腺癌(PDAC)和胰腺神经内分泌肿瘤(PanNET)；骨肉瘤；骨巨细胞瘤；甲状腺癌；膀胱癌；尿路上皮癌；外阴癌；子宫颈癌；子宫内膜癌；间皮瘤；食管癌；唾液腺癌；胃癌；鼻咽癌；颊癌；口腔癌；GIST(胃肠道间质瘤)；NUT-中线癌；睾丸癌；鳞状细胞癌；肝细胞癌(HCC)；MYCN驱动实体瘤；和NUT中线癌(NMC)。
在进一步的实施方案中，疾病或病症为骨骼、肌肉、肌腱、软骨、神经、脂肪或血管的肉瘤。
在进一步的实施方案中，疾病或病症为软组织肉瘤、骨骼肉瘤或骨肉瘤。
在进一步的实施方案中，疾病或病症为血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、Karposi's肉瘤、骨肉瘤、胃肠道间质瘤、滑膜肉瘤、多形性肉瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤、网状细胞肉瘤、脑膜肉瘤、葡萄样肉瘤、横纹肌肉瘤或胚胎性横纹肌肉瘤。
在某些实施方案中，病症为骨骼、肌肉、肌腱、软骨、神经、脂肪或血管肉瘤。
在进一步的实施方案中，疾病或病症为多发性骨髓瘤。
在某些实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用作治疗性和/或预防性治疗如通过下一代测序(NGS)确定具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，包括确定所述患者的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在其他实施方案中，疾病或病症为炎症、关节炎、类风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎、骨关节炎、幼年型关节炎和其他关节炎病患、神经性炎症、过敏反应、疼痛、神经性疼痛、发烧、肺部病症、肺炎症、成人呼吸窘迫慢性肺部炎症性疾病和慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肝疾病和肾炎、胃肠道病患、炎症性肠疾病、克罗恩氏病、胃炎、肠易激综合征、溃疡性结肠炎、溃疡性疾病、胃溃疡、自身免疫疾病、移植物与宿主的反应和同种异体移植物排斥反应、癌症、白血病、淋巴瘤、结肠直肠癌、脑癌、骨癌、上皮细胞源性肿瘤(上皮癌)、基底细胞癌、腺癌、胃肠癌、唇癌、口腔癌、食管癌、小肠癌、胃癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、鳞状细胞和/或基底细胞癌、前列腺癌、肾细胞癌和影响全身上皮细胞的其他已知癌症、慢性髓性白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)和急性早幼粒细胞白血病(APL)、血管生成(包括瘤形成、转移、中枢神经系统病症)、具有炎症或凋亡成分的中枢神经系统病症、周围神经病或B细胞淋巴瘤。
在其他实施方案中，包含如本文所述的化合物和另外的治疗剂的药物组合物同时或依序施用。
在其他实施方案中，疾病或病症为癌症。在进一步的实施方案中，癌症为肺癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、肾癌、卵巢癌、胃癌(stomach cancer)、皮肤癌、骨癌、胃癌(gastric cancer)、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝细胞癌、乳头状肾癌、头颈部鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、实体瘤、血液癌或实体癌。
在一些实施方案中，所述方法用于治疗或预防选自自身免疫疾病、炎症性疾病、增殖和过度增殖疾病以及免疫介导疾病的病患。在其他实施方案中，所述病患选自增殖性病症。
本申请的一个方面提供了可用于治疗以过度或异常细胞增殖为特征的疾病、病症和病患的化合物。这样的疾病包括但不限于增殖性或过度增殖性疾病。增殖性和过度增殖性疾病的实例包括但不限于癌症。术语“癌症”包括但不限于以下癌症：乳腺癌；卵巢癌；宫颈癌；前列腺癌；睾丸癌、泌尿生殖道癌；食道癌；喉癌、胶质母细胞瘤；神经母细胞瘤；胃癌；皮肤角化棘皮瘤；肺表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌；骨癌；结肠癌；结肠直肠癌；腺瘤；胰腺癌、腺癌；甲状腺滤泡状癌、未分化的癌、乳头状癌；精原细胞瘤、黑色素瘤；肉瘤；膀胱癌；肝癌和胆道癌；肾癌；骨髓病症；淋巴病症、霍奇金氏病、毛细胞癌；颊腔和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口腔癌、咽癌；小肠癌；结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌；慢性骨髓性白血病(CML)和白血病。术语“癌症”包括但不限于以下癌症：骨髓瘤、淋巴瘤或选自胃癌、肾癌或/和以下癌症的癌症：头颈癌、口咽癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、子宫内膜癌、肝癌、非霍奇金氏淋巴瘤和肺癌。
术语“癌症”是指由恶性肿瘤细胞的增殖引起的任何癌症，如肿瘤、赘生物、癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤等。例如，癌症包括但不限于间皮瘤、白血病和淋巴瘤如皮肤T-细胞淋巴瘤(CTCL)、非皮肤外周T-细胞淋巴瘤、与人类T-细胞嗜淋巴细胞病毒(HTLV)相关的淋巴瘤如成人T-细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、B-细胞淋巴瘤、急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成人T-细胞白血病淋巴瘤、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)或肝细胞癌。其他实例包括骨髓增生异常综合征、儿童实体瘤如脑肿瘤、神经母细胞瘤、成视网膜细胞瘤、Wilms肿瘤、骨肿瘤和软组织肉瘤、常见的成人实体瘤如头颈癌(如口腔癌、喉癌、鼻咽癌和食道癌)、泌尿生殖道癌(如前列腺癌、膀胱癌、肾癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌)、肺癌(如小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤和其他皮肤癌、胃癌、脑肿瘤、与Gorlin综合征有关的肿瘤(如成神经管细胞瘤或脑膜瘤)和肝癌。
癌症的另外的示例性形式包括但不限于骨骼肌或平滑肌癌、胃癌、小肠癌、直肠癌、唾液腺癌、子宫内膜癌、肾上腺癌、肛门癌、直肠癌、甲状旁腺癌和垂体癌。
本文描述的化合物可用于预防、治疗和研究的另外的癌症有例如结肠癌、家族性腺瘤性息肉病性癌和遗传性非息肉病性结肠直肠癌或黑色素瘤。此外，癌症包括但不限于唇癌、喉癌、下咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺癌(甲状腺髓样癌和甲状腺乳头状癌)、肾癌、肾实质癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、睾丸癌、尿道癌、黑色素瘤、脑肿瘤如胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤和外周原始神经外胚层肿瘤、胆囊癌、支气管癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、畸胎瘤、成视网膜细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、颅咽管瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤因氏肉瘤和浆细胞瘤。在本申请的一个方面，本申请提供了一种或多种如本文所述的化合物在制造用于治疗癌症的药剂中的用途，所述癌症包括但不限于本文公开的各种类型的癌症。
在一些实施方案中，本申请的化合物可用于治疗癌症，如结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌和肺癌；和骨髓增殖性病症，如真性红细胞增多症、血小板增多症，伴骨髓纤维化的髓样化生、慢性髓性白血病、慢性粒单核细胞白血病、嗜酸细胞增多综合征、幼年型粒单核细胞白血病和系统性肥大细胞病。在一些实施方案中，如本文所述的化合物可用于治疗造血功能障碍，特别是急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性早幼粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病(ALL)。
在某些实施方案中，如本文所述的化合物或其相应的药学上可接受的盐或同位素衍生物可以有效量使用以治疗患有淋巴瘤或淋巴细胞或髓细胞增殖病症或异常的宿主，例如人。例如，如本文所述的化合物可施用于患有霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤的宿主。例如，宿主可患有非霍奇金氏淋巴瘤，如但不限于：AIDS-相关淋巴瘤；间变性大细胞淋巴瘤；自身免疫母细胞性淋巴瘤；母细胞性NK细胞淋巴瘤；伯基特淋巴瘤；伯基特样淋巴瘤(小无裂细胞淋巴瘤)；弥漫性小裂细胞淋巴瘤(DSCCL)；慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞白血病；皮肤T-细胞淋巴瘤；弥漫性大B细胞淋巴瘤；肠病型T-细胞淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；肝脾γ-δT-细胞淋巴瘤；淋巴母细胞淋巴瘤；套细胞淋巴瘤；边缘区淋巴瘤；鼻T-细胞淋巴瘤；小儿淋巴瘤；外周T-细胞淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；T-细胞白血病；转化型淋巴瘤；治疗相关T-细胞淋巴瘤；朗格汉斯细胞组织细胞增生症；或华氏巨球蛋白血症。
在另一个实施方案中，如本文所述的化合物或其相应的药学上可接受的盐或同位素衍生物可以有效量使用以治疗患有霍奇金氏淋巴瘤的患者，例如人，所述霍奇金氏淋巴瘤如但不限于：结节硬化型经典霍奇金氏淋巴瘤(CHL)；混合细胞型CHL；淋巴细胞耗竭型CHL；淋巴细胞丰富型CHL；淋巴细胞优势型霍奇金氏淋巴瘤；或结节性淋巴细胞优势型HL。
本申请还包括细胞增殖性病症如增生、异型增生和癌前病变的治疗或预防。异型增生是病理学家在活检中可识别的癌前病变的最早形式。化合物可出于防止所述增生、异型增生或癌前病变继续发展或变成癌性的目的施用。癌前病变的实例可发生在皮肤、食管组织、乳腺和宫颈上皮内组织中。
作为EGFR蛋白的抑制剂，本申请的化合物和组合物也可用于生物样品中。本申请的一个方面为抑制生物样品中的蛋白质活性，该方法包括使所述生物样品与如本文所述的化合物或组合物接触。如本文所用，术语“生物样品”指的是体外或离体样品，包括但不限于细胞培养物或其提取物；得自哺乳动物或其提取物的活检材料；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其他体液或其提取物。生物样品中蛋白质活性的抑制可用于本领域技术人员已知的多种目的。这样的目的的实例包括但不限于输血、器官移植和生物样本储存。
本申请的另一个方面为EGFR蛋白在生物学和病理现象中的研究；由这样的蛋白质介导的细胞内信号转导途径的研究；以及新型蛋白质抑制剂的对比评价。这样的用途的实例包括但不限于生物测定，如酶测定和基于细胞的测定。
根据前述内容，本申请还提供了一种在需要这样的治疗的患者中预防或治疗任何上述疾病或病症的方法，该方法包括向所述患者施用治疗有效量的如本文所述的化合物或其对映异构体、非对映异构体或立体异构体或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。对于任何上述用途，所需剂量将随施用方式、待治疗的具体病患和期望的效果而异。
VI.组合疗法
本文描述的所公开化合物可以有效量单独地或与本发明的另一化合物或另一生物活性剂或第二治疗剂组合地使用以治疗患有EGFR介导病症的患者如人，所述病症包括但不限于本文描述的那些。
术语“生物活性剂”用于描述非根据本发明选择的化合物的可与本发明的化合物组合或交替使用以实现期望的治疗结果的剂。在某些实施方案中，本发明的化合物和生物活性剂以它们在交叠的时间段内具有体内活性的方式施用，例如，具有时间段交叠的Cmax、Tmax、AUC或其他药代动力学参数。在另一个实施方案中，将本发明的化合物和生物活性剂施用于有此需要的患者，它们不具有交叠的药代动力学参数，然而，一种对另一种的治疗功效具有治疗影响。
在该实施方案的一个方面，生物活性剂为免疫调节剂，包括但不限于检查点抑制剂，作为非限制性实例，包括PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-L2抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM-3抑制剂、T-细胞活化的V-结构域Ig抑制因子(VISTA)抑制剂、小分子、肽、核苷酸或其他抑制剂。在某些方面，免疫调节剂为抗体，如单克隆抗体。
通过与PD-1受体结合来阻断PD-1和PD-L1的相互作用、进而抑制免疫抑制的PD-1抑制剂包括例如纳武单抗(Opdivo)、派姆单抗(Keytruda)、匹地利珠单抗AMP-224(AstraZeneca and MedImmune)、PF-06801591(Pfizer)、MEDI0680(AstraZeneca)、PDR001(Novartis)、REGN2810(Regeneron)、SHR-12-1(Jiangsu Hengrui Medicine Company andIncyte Corporation)、TSR-042(Tesaro)和PD-L1/VISTA抑制剂CA-170(Curis Inc.)。通过与PD-L1受体结合来阻断PD-1和PD-L1的相互作用、进而抑制免疫抑制的PD-L1抑制剂包括例如阿替利珠单抗(Tecentriq)、度伐利尤单抗(AstraZeneca and MedImmune)、KN035(Alphamab)和BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)。与CTLA-4结合并抑制免疫抑制的CTLA-4检查点抑制剂包括但不限于伊匹单抗、曲美木单抗(AstraZeneca and MedImmune)、AGEN1884和AGEN2041(Agenus)。LAG-3检查点抑制剂包括但不限于BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)、GSK2831781(GlaxoSmithKline)、IMP321(Prima BioMed)、LAG525(Novartis)及PD-1和LAG-3双重抑制剂MGD013(MacroGenics)。TIM-3抑制剂的一个实例为TSR-022(Tesaro)。
在某些实施方案中，检查点抑制剂选自纳武单抗/
Figure BDA0003698737280002011
派姆单抗/
Figure BDA0003698737280002012
和匹地利珠单抗/CT-011、MPDL3280A/RG7446；MEDI4736；MSB0010718C；BMS936559，一种PDL2/lg融合蛋白如AMP 224，或者B7-H3(例如，MGA271)、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG 3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体的抑制剂，或其组合。
在又一个实施方案中，本文描述的活性化合物之一可与有效量的雌激素抑制剂组合或交替地以有效量施用以治疗雌性生殖系统的异常组织如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌或子宫癌，所述雌激素抑制剂包括但不限于SERM(选择性雌激素受体调节剂)、SERD(选择性雌激素受体降解剂)、完全雌激素受体降解剂或者另一形式的部分或完全雌激素拮抗剂或激动剂。部分抗雌激素比如雷洛昔芬和他莫昔芬保留了一些雌激素样作用，包括对子宫生长的雌激素样刺激，以及在一些情况下，在乳腺癌进展过程中的雌激素样作用，其实际上刺激肿瘤生长。相反，氟维司群，一种完全抗雌激素，没有对子宫的雌激素样作用并且在他莫昔芬耐药性肿瘤中是有效的。
抗雌激素化合物的非限制性实例在以下中提供：转让给Astra Zeneca的WO 2014/19176；转让给Olema Pharmaceuticals的WO2013/090921、WO 2014/203129、WO 2014/203132和US2013/0178445；美国专利号9,078,871、8,853,423和8,703,810；以及US 2015/0005286、WO 2014/205136和WO 2014/205138。
抗雌激素化合物的另外的非限制性实例包括：SERMS如双炔失碳酯、巴多昔芬、broparestriol、氯烯雌醚(chlorotrianisene)、柠檬酸克罗米芬、环芬尼、拉索昔芬、奥美昔芬、雷洛昔芬、他莫昔芬、托瑞米芬和氟维司群；芳香酶抑制剂如氨鲁米特、睾内酯、阿那曲唑、依西美坦、法倔唑、福美司坦和来曲唑；和抗促性腺激素如亮丙瑞林、西曲瑞克、烯丙雌醇、醋酸氯地孕酮、醋酸环丙孕酮、醋酸地马孕酮、地屈孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸诺美孕酮、醋酸炔诺酮、黄体酮和螺内酯。
可根据本发明使用的其他雌激素配体见述于美国专利号4,418,068、5,478,847、5,393,763和5,457,117；WO2011/156518；美国专利号8,455,534和8,299,112；美国专利号9,078,871、8,853,423、8,703,810；US 2015/0005286；WO 2014/205138；US2016/0175289；US2015/0258080；WO 2014/191726；WO 2012/084711；WO 2002/013802；WO 2002/004418；WO2002/003992；WO 2002/003991；WO 2002/003990；WO 2002/003989；WO 2002/003988；WO2002/003986；WO 2002/003977；WO 2002/003976；WO 2002/003975；WO 2006/078834；US6821989；US 2002/0128276；US 6777424；US 2002/0016340；US 6326392；US 6756401；US2002/0013327；US 6512002；US 6632834；US 2001/0056099；US 6583170；US 6479535；WO1999/024027；US 6005102；EP 0802184；US 5998402；US 5780497；US 5880137；WO 2012/048058和WO 2007/087684中。
在另一个实施方案中，本文描述的活性化合物可与有效量的雄激素(如睾酮)抑制剂组合或交替地以有效量施用以治疗雄性生殖系统的异常组织如前列腺癌或睾丸癌，所述雄激素抑制剂包括但不限于选择性雄激素受体调节剂、选择性雄激素受体降解剂、完全雄激素受体降解剂或者另一形式的部分或完全雄激素拮抗剂。在某些实施方案中，前列腺癌或睾丸癌是雄激素抗性的。
抗雄激素化合物的非限制性实例在WO 2011/156518及美国专利号8,455,534和8,299,112中有提供。抗雄激素化合物的另外的非限制性实例包括：恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、醋酸环丙孕酮、醋酸氯地孕酮、螺内酯、烯睾丙内酯、屈螺酮、酮康唑、topilutamide、醋酸阿比特龙和西咪替丁。
在某些实施方案中，生物活性剂为ALK抑制剂。ALK抑制剂的实例包括但不限于克唑替尼、阿来替尼、色瑞替尼、TAE684(NVP-TAE684)、GSK1838705A、AZD3463、ASP3026、PF-06463922、恩曲替尼(RXDX-101)和AP26113。
在某些实施方案中，生物活性剂为HER-2抑制剂。HER-2抑制剂的实例包括曲妥珠单抗、拉帕替尼、恩美曲妥珠单抗和帕妥珠单抗。
在某些实施方案中，生物活性剂为CD20抑制剂。CD20抑制剂的实例包括奥妥珠单抗、利妥昔单抗、奥法木单抗、替伊莫单抗、托西莫单抗和奥瑞珠单抗(ocrelizumab)。
在某些实施方案中，生物活性剂为JAK3抑制剂。JAK3抑制剂的实例包括托法替尼。
在某些实施方案中，生物活性剂为BCL-2抑制剂。BCL-2抑制剂的实例包括维奈托克(venetoclax)、ABT-199(4-[4-[[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基环己-1-烯-1-基]甲基]哌嗪-l-基]-N-[[3-硝基-4-[[(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基]氨基]苯基]磺酰]-2-[(lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基]苯甲酰胺)、ABT-737(4-[4-[[2-(4-氯苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-[[(2R)-4-(二甲基氨基)-1-苯基磺酰丁烷-2-基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰苯甲酰胺)(navitoclax)、ABT-263((R)-4-(4-((4'-氯-4,4-二甲基-3,4,5,6-四氢-[l,l'-联苯]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-((4-吗啉代-1-(苯硫基)丁烷-2-基)氨基)-3((三氟甲基)磺酰)苯基)磺酰)苯甲酰胺)、GX15-070(甲磺酸奥巴克拉(obatoclax mesylate)，(2Z)-2-[(5Z)-5-[(3,5-二甲基-lH-吡咯-2-基)亚甲基]-4-甲氧基吡咯-2-亚基]吲哚甲磺酸)))、2-甲氧基-抗霉素A3、YC137(4-(4,9-二氧代-4,9-二氢萘并[2,3-d]噻唑-2-基氨基)-苯基酯)、pogosin、2-氨基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4H-色烯-3-甲酸乙酯、尼洛替尼-d3、TW-37(N-[4-[[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]磺酰]苯基]-2,3,4-三羟基-5-[[2-(1-甲基乙基)苯基]甲基]苯甲酰胺)、Apogossypolone(ApoG2)、HA14-1、AT101、sabutoclax、藤黄酸或G3139(Oblimersen)。
在某些实施方案中，生物活性剂为激酶抑制剂。在某些实施方案中，激酶抑制剂选自磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、或脾酪氨酸激酶(Syk)抑制剂或其组合。
PI3激酶抑制剂的实例包括但不限于渥曼青霉素(Wortmannin)、脱甲绿胶霉素、哌立福新、艾代拉里斯(idelalisib)、Pictilisib、Palomid 529、ZSTK474、PWT33597、CUDC-907和AEZS-136、杜韦利西布(duvelisib)、GS-9820、BKM120、GDC-0032(Taselisib)(2-[4-[2-(2-异丙基-5-甲基-1,2,4-三唑-3-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-d][1,4]苯并氧氮杂
Figure BDA0003698737280002031
-9-基]吡唑-1-基]-2-甲基丙酰胺)、MLN-1117((2R)-1-苯氧基-2-丁烷基氢(S)-甲基膦酸酯；或甲基(氧代){[(2R)-l-苯氧基-2-丁烷基]氧基}鏻))、BYL-719((2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-4-吡啶基]-2-噻唑基]-1,2-吡咯烷二甲酰胺)、GSK2126458(2,4-二氟-N-{2-(甲基氧基)-5-[4-(4-哒嗪基)-6-喹啉基]-3-吡啶基}苯磺酰胺)(omipalisib)、TGX-221((±)-7-甲基-2-(吗啉-4-基)-9-(l-苯基氨基乙基)-吡啶并[l,2-a]-嘧啶-4-酮)、GSK2636771(2-甲基-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苄基)-6-吗啉代-lH-苯并[d]咪唑-4-甲酸二盐酸盐)、KIN-193((R)-2-((l-(7-甲基-2-吗啉代-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基)乙基)氨基)苯甲酸)、TGR-1202/RP5264、GS-9820((S)-l-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-羟基丙烷-1-酮)、GS-1101(5-氟-3-苯基-2-([S)]-1-[9H-嘌呤-6-基氨基]-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮)、AMG-319、GSK-2269557、SAR245409(N-(4-(N-(3-((3,5-二甲氧基苯基)氨基)喹喔啉-2-基)氨磺酰)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲酰胺)、BAY80-6946(2-氨基-N-(7-甲氧基-8-(3-吗啉代丙氧基)-2,3-二氢咪唑并[l,2-c]quinaz)、AS 252424(5-[l-[5-(4-氟-2-羟基-苯基)-呋喃-2-基]-甲基-(Z)-亚基]-噻唑烷-2,4-二酮)、CZ 24832(5-(2-氨基-8-氟-[l,2,4]三唑并[l,5-a]吡啶-6-基)-N-叔-丁基吡啶-3-磺酰胺)、Buparlisib(5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺)、GDC-0941(2-(lH-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰)-l-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶)、GDC-0980((S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-l-基)-2-羟基丙烷-l-酮(也称为RG7422))、SF1126((8S,14S,17S)-14-(羧甲基)-8-(3-胍基丙基)-17-(羟甲基)-3,6,9,12,15-五氧代-1-(4-(4-氧代-8-苯基-4H-色烯-2-基)吗啉-4-鎓)-2-氧杂-7,10,13,16-四氮杂十八烷-18-酸酯)、PF-05212384(N-[4-[[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]羰基]苯基]-N'-[4-(4,6-二-4-吗啉基-l,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲)(gedatolisib)、LY3023414、BEZ235(2-甲基-2-{4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-l-基]苯基}丙腈)(dactolisib)、XL-765(N-(3-(N-(3-(3,5-二甲氧基苯基氨基)喹喔啉-2-基)氨磺酰)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲酰胺)和GSK1059615(5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮)、PX886([(3aR,6E,9S,9aR,10R,11aS)-6-[[双(丙-2-烯基)氨基]亚甲基]-5-羟基-9-(甲氧基甲基)-9a,11a-二甲基-l,4,7-三氧代-2,3,3a,9,10,ll-六氢茚并[4,5h]异色烯-10-基]乙酸酯(也称为sonolisib))、LY294002、AZD8186、PF-4989216、pilaralisib、GNE-317、PI-3065、PI-103、NU7441(KU-57788)、HS 173、VS-5584(SB2343)、CZC24832、TG100-115、A66、YM201636、CAY10505、PIK-75、PIK-93、AS-605240、BGT226(NVP-BGT226)、AZD6482、voxtalisib、alpelisib、IC-87114、TGI100713、CH5132799、PKI-402、copanlisib(BAY 80-6946)、XL 147、PIK-90、PIK-293、PIK-294、3-MA(3-甲基腺嘌呤)、AS-252424、AS-604850、apitolisib(GDC-0980；RG7422)。
BTK抑制剂的实例包括伊布替尼(也称为PCI-32765)(ImbruvicaTM)(1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基-苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮)、基于二苯胺基嘧啶的抑制剂如AVL-101和AVL-291/292(N-(3-((5-氟-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺)(Avila Therapeutics)(参见美国专利公开号2011/0117073，其全文并入本文)、达沙替尼([N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺]、LFM-A13(α-氰基-β-羟基-β-甲基-N-(2,5-二溴苯基)丙烯酰胺)、GDC-0834([R-N-(3-(6-(4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺]、CGI-560 4-(叔-丁基)-N-(3-(8-(苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)苯基)苯甲酰胺、CGI-1746(4-(叔-丁基)-N-(2-甲基-3-(4-甲基-6-((4-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)苯甲酰胺)、CNX-774(4-(4-((4-((3-丙烯酰胺基苯基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶甲酰胺)、CTA056(7-苄基-1-(3-(哌啶-1-基)丙基)-2-(4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-g]喹喔啉-6(5H)-酮)、GDC-0834((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基)氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺)、GDC-0837((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基)氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺)、HM-71224、ACP-196、ONO-4059(Ono Pharmaceuticals)、PRT062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)氨基)-2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐)、QL-47(1-(1-丙烯酰吲哚啉-6-基)-9-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[h][1,6]萘啶-2(1H)-酮)和RN486(6-环丙基-8-氟-2-(2-羟甲基-3-{1-甲基-5-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基}-苯基)-2H-异喹啉-1-酮)及能够抑制BTK活性的其他分子，例如，Akinleye etah,Journal of Hematology&Oncology,2013,6:59中公开的那些BTK抑制剂，其全部内容通过引用并入本文。
Syk抑制剂包括但不限于Cerdulatinib(4-(环丙基氨基)-2-((4-(4-(乙基磺酰)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、entospletinib(6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-吗啉代苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺)、福坦替尼(fostamatinib)([6-({5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基}氨基)-2,2-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4-基]甲基二氢磷酸盐)、福坦替尼二钠盐((6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基-3-氧代-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4(3H)-基)甲基磷酸钠)、BAY 61-3606(2-(7-(3,4-二甲氧基苯基)-咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基氨基)-烟酰胺HCl)、RO9021(6-[(1R,2S)-2-氨基-环己基氨基]-4-(5,6-二甲基-吡啶-2-基氨基)-哒嗪-3-甲酸酰胺)、伊马替尼(Gleevac；4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)苯甲酰胺)、十字孢碱、GSK143(2-(((3R,4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-(对-甲苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、PP2(1-(叔-丁基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)、PRT-060318(2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-4-(间-甲苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、PRT-062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)氨基)-2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐)、R112(3,3'-((5-氟嘧啶-2,4-二基)双(氮烷二基))二酚)、R348(3-乙基-4-甲基吡啶)、R406(6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮)、白皮杉醇(3-羟基白藜芦醇)、YM193306(参见Singh et al.Discovery andDevelopment of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643)、7-氮杂吲哚、白皮杉醇、ER-27319(参见Singh et al.Discovery and Developmentof Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、化合物D(参见Singh et al.Discovery and Development of SpleenTyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、PRT060318(参见Singh et al.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、木犀草素(参见Singh et al.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、芹菜素(参见Singh etal.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、槲皮素(参见Singh et al.Discoveryand Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、漆黄素(参见Singh et al.Discovery and Development ofSpleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、杨梅素(参见Singh et al.Discovery and Development of Spleen TyrosineKinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)、桑黄素(参见Singh et al.Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643，其全文并入本文)。
在某些实施方案中，生物活性剂为MEK抑制剂。MEK抑制剂是公知的并包括例如曲美替尼/GSKl120212(N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-l(2H-基}苯基)乙酰胺)、司美替尼(selumetinib)(6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-N-(2-羟基乙氧基)-3-甲基苯并咪唑-5-甲酰胺)、pimasertib/AS703026/MSC1935369((S)-N-(2,3-二羟基丙基)-3-((2-氟-4-碘苯基)氨基)异烟酰胺)、XL-518/GDC-0973(l-({3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]苯基}羰基)-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-3-醇)、瑞法替尼(refametinib)/BAY869766/RDEAl 19(N-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-6-甲氧基苯基)-1-(2,3-二羟基丙基)环丙烷-1-磺酰胺)、PD-0325901(N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺)、TAK733((R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮)、MEK162/ARRY438162(5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺)、R05126766(3-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰氨基)-4-吡啶基]甲基]-4-甲基-7-嘧啶-2-基氧基色烯-2-酮)、WX-554、R04987655/CH4987655(3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-5-((3-氧代-l,2-噁嗪烷-2-基)甲基)苯甲酰胺)或AZD8330(2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代-l,6-二氢吡啶-3-甲酰胺)、U0126-EtOH、PD184352(CI-1040)、GDC-0623、BI-847325、考比替尼、PD98059、BIX 02189、BIX 02188、比美替尼、SL-327、TAK-733、PD318088。
在某些实施方案中，生物活性剂为Raf抑制剂。Raf抑制剂是已知的并包括例如维罗非尼(Vemurafinib)(N-[3-[[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]羰基]-2,4-二氟苯基]-1-丙烷磺酰胺)、甲苯磺酸索拉非尼(4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨甲酰基氨基]苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐)、AZ628(3-(2-氰基丙烷-2-基)-N-(4-甲基-3-(3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基氨基)苯基)苯甲酰胺)、NVP-BHG712(4-甲基-3-(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺)、RAF-265(1-甲基-5-[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]吡啶-4-基]氧基-N-[4-(三氟甲基)苯基]苯并咪唑-2-胺)、2-Bromoaldisine(2-溴-6,7-二氢-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮杂
Figure BDA0003698737280002061
-4,8-二酮)、Raf激酶抑制剂IV(2-氯-5-(2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-4-基)苯酚)、索拉非尼N-氧化物(4-[4-[[[[4-氯-3(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-甲基-2-吡啶甲酰胺1-氧化物)、PLX-4720、达拉非尼(GSK2118436)、GDC-0879、RAF265、AZ 628、SB590885、ZM336372、GW5074、TAK-632、CEP-32496、LY3009120和GX818(康奈非尼)。
在某些实施方案中，生物活性剂为EGFR抑制剂，包括例如吉非替尼(Iressa)、厄洛替尼(Tarceva)、拉帕替尼(Tykerb)、奥希替尼(Tagrisso)、来那替尼(Nerlynx)、凡德他尼(Caprelsa)、达克替尼(Vizimpro)、罗西替尼(Xegafri)、阿法替尼(Glotriff、Giotriff、Afanix)、拉泽替尼或nazartib。
EGFR抑制剂的另外的实例包括罗西替尼(CO-1686)、奥莫替尼(Olita)、naquotinib(ASP8273)、纳扎替尼(EGF816)、PF-06747775、埃克替尼(BPI-2009)、来那替尼(HKI-272；PB272)；艾维替尼(AC0010)、EAI045、他索替尼(TH-4000；PR-610)、PF-06459988(Pfizer)、tesevatinib(XL647；EXEL-7647；KD-019)、transtinib、WZ-3146、WZ8040、CNX-2006、达克替尼(PF-00299804；Pfizer)、布加替尼(Alunbrig)、劳拉替尼和PF-06747775(PF7775)。
在某些实施方案中，生物活性剂为第一代EGFR抑制剂如厄洛替尼、吉非替尼或拉帕替尼。在某些实施方案中，生物活性剂为第二代EGFR抑制剂如阿法替尼和/或达克替尼。在某些实施方案中，生物活性剂为第三代EGFR抑制剂如奥希替尼。
在某些实施方案中，本发明的化合物与奥希替尼组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与罗西替尼组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与艾维替尼组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与拉泽替尼组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与纳扎替尼组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与EGFR抗体例如西妥昔单抗、帕尼单抗或耐昔妥珠单抗组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与西妥昔单抗组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与帕尼单抗组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，本发明的化合物与耐昔妥珠单抗组合地施用于有此需要的患者。
在某些实施方案中，生物活性剂为c-MET抑制剂，例如，克唑替尼(Xalkori、Crizonix)、特泊替尼(XL880、EXEL-2880、GSK1363089、GSK089)或替万替尼(tivantinib)(ARQ197)。
在某些实施方案中，生物活性剂为AKT抑制剂，包括但不限于MK-2206、GSK690693、哌立福新、(KRX-0401)、GDC-0068、曲西立滨、AZD5363、和厚朴酚、PF-04691502和米替福新(一种FLT-3抑制剂)，包括但不限于P406、多韦替尼、奎扎替尼(AC220)、Amuvatinib(MP-470)、坦度替尼(MLN518)、ENMD-2076和KW-2449或其组合。
在某些实施方案中，生物活性剂为mTOR抑制剂。mTOR抑制剂的实例包括但不限于雷帕霉素及其类似物、依维莫司(Afinitor)、替西罗莫司、利达福莫司(ridaforolimus)、西罗莫司和地磷莫司(deforolimus)。
在某些实施方案中，生物活性剂为RAS抑制剂。RAS抑制剂的实例包括但不限于Reolysin和siG12D LODER。
在某些实施方案中，生物活性剂为HSP抑制剂。HSP抑制剂包括但不限于格尔德霉素或17-N-烯丙基氨基-17-脱甲氧格尔德霉素(17AAG)和Radicicol。
另外的生物活性化合物包括例如依维莫司、曲贝替定、abraxane、TLK 286、AV-299、DN-101、帕唑帕尼、GSK690693、RTA 744、ON 0910.Na、AZD 6244(ARRY-142886)、AMN-107、TKI-258、GSK461364、AZD 1152、enzastaurin、凡德他尼、ARQ-197、MK-0457、MLN8054、PHA-739358、R-763、AT-9263、FLT-3抑制剂、VEGFR抑制剂、aurora激酶抑制剂、PIK-1调节剂、HDAC抑制剂、c-MET抑制剂、PARP抑制剂、Cdk抑制剂、IGFR-TK抑制剂、抗-HGF抗体、局灶性粘附激酶抑制剂、Map激酶激酶(mek)抑制剂、VEGF trap抗体、培美曲塞、帕尼单抗、氨柔比星、奥戈伏单抗(oregovomab)、Lep-etu、诺拉曲塞、azd2171、巴他布林(batabulin)、atumumab、扎木单抗(zanolimumab)、edotecarin、汉防己甲素、；鲁比替康(rubitecan)、帕托珠利、奥利默森(oblimersen)、替西木单抗、伊匹单抗、棉子酚、Bio 111、131-I-TM-601、ALT-110、BIO 140、CC 8490、cilengitide、吉马替康、IL13-PE38QQR、INO 1001、IPdR1 KRX-0402、硫蒽酮(lucanthone)、LY317615、纽迪(neuradiab)、维特斯潘(vitespan)、Rta 744、Sdx 102、他仑帕奈(talampanel)、阿曲生坦(atrasentan)、Xr 311、罗咪酯肽(romidepsin)、ADS-100380、舒尼替尼、5-氟尿嘧啶、伏立诺他(vorinostat)、依托泊苷、吉西他滨、多柔比星、多柔比星脂质体、5′-脱氧-5-氟尿苷、长春新碱、替莫唑胺、ZK-304709、塞利西利；PD0325901、AZD-6244、卡培他滨、L-谷氨酸、N-[4-[2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰]-二钠盐七水合物、喜树碱、PEG标记的伊立替康、他莫昔芬、柠檬酸托瑞米芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、DES(己烯雌酚)、雌二醇、雌激素、缀合雌激素、贝伐珠单抗、IMC-1C11、CHIR-258)；3-[5-(甲基磺酰哌啶甲基)-吲哚基-喹诺酮、瓦他拉尼(vatalanib)、AG-013736、AVE-0005、醋酸戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、醋酸甲羟孕酮、己酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、雷洛昔芬、比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特(nilutamide)、醋酸甲地孕酮、CP-724714；TAK-165、HKI-272、厄洛替尼、拉帕替尼、卡拉替尼(canertinib)、ABX-EGF抗体、爱必妥(erbitux)、EKB-569、PKI-166、GW-572016、Ionafarnib、BMS-214662、替吡法尼(tipifarnib)；阿米福汀(amifostine)、NVP-LAQ824、辛二酰苯胺异羟肟酸、丙戊酸、曲古抑菌素A、FK-228、SU11248、索拉非尼、KRN951、氨鲁米特、安吖啶、阿那格雷、L-天冬酰胺酶、卡介苗(BCG)、阿霉素、博来霉素、布舍瑞林、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、己烯雌酚、表柔比星、氟达拉滨、氟氢可的松、氟甲睾酮、氟他胺、格列卫(gleevac)、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、亮丙瑞林、左旋四咪唑、洛莫司汀、氮芥、美法仑、6-巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特(nilutamide)、奥曲肽、奥沙利铂、帕米膦酸盐、喷司他丁、普卡霉素、叶吩姆钠(porfimer)、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、链佐星、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替派、维甲酸、长春地辛、13-顺式-视黄酸、苯丙氨酸氮芥、尿嘧啶氮芥、雌氮芥、六甲蜜胺、氟尿苷、5-脱氧尿苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、6-巯基嘌呤、脱氧助间型霉素、骨化三醇、戊柔比星、光神霉素、长春碱、长春瑞滨、拓扑替康、razoxin、马立马司他、COL-3、新伐司他、BMS-275291、角鲨胺、内皮抑素、SU5416、SU6668、EMD121974、白介素-12、IM862、血管抑素、vitaxin、屈洛昔芬、idoxyfene、螺内酯、非那雄胺、西咪替丁、曲妥珠单抗、白介素融合毒素(denileukin diftitox)、吉非替尼、硼替佐米(bortezimib)、紫杉醇、不含聚氧乙烯蓖麻油的紫杉醇、多西紫杉醇、埃坡霉素B、BMS-247550、BMS-310705、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、哌喷昔芬(pipendoxifene)、ERA-923、阿佐昔芬、氟维司群、阿考比芬、拉索昔芬、吲哚昔酚(idoxifene)、TSE-424、HMR-3339、ZK186619、拓扑替康、PTK787/ZK 222584、VX-745、PD184352、雷帕霉素、40-O-(2-羟乙基)-雷帕霉素、替西罗莫司(temsirolimus)、AP-23573、RAD001、ABT-578、BC-210、LY294002、LY292223、LY292696、LY293684、LY293646、渥曼青霉素、ZM336372、L-779,450、PEG-非格司亭、达贝泊汀(darbepoetin)、红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、唑来膦酸、强的松、西妥昔单抗、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、组氨瑞林、PEG化干扰素α-2a、干扰素α-2a、PEG化干扰素α-2b、干扰素α-2b、阿扎胞苷、PEG-L-天冬酰胺酶、来那度胺、吉妥单抗、氢化可的松、白介素-11、右雷佐生、阿仑单抗、全反式维甲酸、酮康唑、白介素-2、甲地孕酮、免疫球蛋白、氮芥、甲基强的松龙、替伊莫单抗(ibritgumomabtiuxetan)、雄激素、地西他滨、六甲蜜胺、蓓萨罗丁、托西莫单抗、三氧化二砷、可的松、editronate、米托坦、环孢霉素、柔红霉素脂质体、Edwina-天冬酰胺酶、锶89、卡索匹坦、奈妥匹坦、NK-1受体拮抗剂、帕洛诺司琼、阿瑞吡坦、苯海拉明、羟嗪、甲氧氯普胺、劳拉西泮、阿普唑仑、氟哌啶醇、氟哌利多、屈大麻酚、地塞米松、甲基强的松龙、普鲁氯嗪、格拉司琼、昂丹司琼、多拉司琼、托烷司琼、PEG非格司亭、红细胞生成素、依泊汀α、达贝泊汀α及其混合物。
在某些实施方案中，化合物与异环磷酰胺组合施用。
在某些实施方案中，生物活性剂选自但不限于甲磺酸伊马替尼
Figure BDA0003698737280002091
达沙替尼
Figure BDA0003698737280002092
尼洛替尼
Figure BDA0003698737280002093
博舒替尼
Figure BDA0003698737280002094
曲妥珠单抗
Figure BDA0003698737280002095
曲妥珠单抗-DM1、帕妥珠单抗(PerjetaTM)、拉帕替尼
Figure BDA0003698737280002096
吉非替尼
Figure BDA0003698737280002097
厄洛替尼
Figure BDA0003698737280002098
西妥昔单抗
Figure BDA0003698737280002099
帕尼单抗
Figure BDA00036987372800020910
凡德他尼
Figure BDA00036987372800020911
维莫非尼
Figure BDA00036987372800020912
伏立诺他
Figure BDA00036987372800020913
罗米地辛
Figure BDA00036987372800020914
贝沙罗汀
Figure BDA00036987372800020915
阿利维甲酸
Figure BDA00036987372800020916
维甲酸
Figure BDA00036987372800020917
卡非佐米(KyprolisTM)、普拉曲沙
Figure BDA00036987372800020918
贝伐珠单抗
Figure BDA00036987372800020919
阿柏西普
Figure BDA00036987372800020920
索拉非尼
Figure BDA00036987372800020921
舒尼替尼
Figure BDA00036987372800020922
帕唑帕尼
Figure BDA00036987372800020923
瑞戈非尼
Figure BDA00036987372800020924
和卡博替尼(CometriqTM)。
在某些方面，生物活性剂为抗炎剂、化学治疗剂、放射治疗剂、另外的治疗剂或免疫抑制剂。
合适的化学治疗生物活性剂包括但不限于放射性分子、毒素(也称为细胞毒素或细胞毒性剂)，其包括对细胞活力有害的任何剂，以及含有化学治疗化合物的脂质体或其他囊泡。一般的抗癌药物包括：长春新碱
Figure BDA00036987372800020925
或长春新碱脂质体
Figure BDA00036987372800020926
柔红霉素(柔红霉素或
Figure BDA00036987372800020927
)或多柔比星
Figure BDA00036987372800020928
阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷、ara-C或
Figure BDA00036987372800020929
)、L-天冬酰胺酶
Figure BDA00036987372800020930
或PEG-L-天冬酰胺酶(培门冬酶或
Figure BDA00036987372800020931
)、依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷
Figure BDA00036987372800020932
6-巯基嘌呤(6-MP或
Figure BDA00036987372800020933
)、甲氨蝶呤、环磷酰胺
Figure BDA00036987372800020934
泼尼松、地塞米松(地卡特隆)、伊马替尼
Figure BDA00036987372800020935
达沙替尼
Figure BDA00036987372800020936
尼洛替尼
Figure BDA00036987372800020937
博舒替尼
Figure BDA00036987372800020938
和普纳替尼(IclusigTM)。
另外的合适的化学治疗剂的实例包括但不限于1-去氢睾丸素、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、放线菌素D、阿霉素、阿地白介素、烷化剂、别嘌醇钠、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、安曲霉素(AMC))、抗有丝分裂剂、顺式-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、二氨基二氯铂、蒽环类药物、抗生素、抗代谢物、天冬酰胺酶、活BCG(膀胱内)、倍他米松磷酸钠和醋酸倍他米松、比卡鲁胺、硫酸博来霉素、白消安、甲酰四氢叶酸钙、卡奇霉素、卡培他滨、卡铂、洛莫司汀(CCNU)、卡莫司汀(BSNU)、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、秋水仙碱、缀合雌激素、环磷酰胺、Cyclothosphamide、阿糖胞苷、阿糖胞苷、细胞松弛素B、Cytoxan、达卡巴嗪、更生霉素、更生霉素(以前为放线菌素)、盐酸柔红霉素、柠檬酸柔红霉素(daunorucbicin citrate)、地尼白介素(denileukin diftitox)、右雷佐生、二溴甘露醇、二羟基炭疽菌素二酮、多西他赛、甲磺酸多拉司琼、盐酸多柔比星、屈大麻酚、大肠杆菌L-天冬酰胺酶、吐根素、依泊汀-α、欧文氏菌L-天冬酰胺酶、酯化雌激素、雌二醇、雌氮芥磷酸钠、溴化乙锭、乙炔雌二醇、依替膦酸盐、依托泊苷嗜橙菌因子、磷酸依托泊苷、非格司亭、氟尿苷、氟康唑、磷酸氟达拉宾、氟尿嘧啶、氟他胺、亚叶酸、盐酸吉西他滨、糖皮质激素、醋酸戈舍瑞林、短杆菌肽D、盐酸格拉司琼、羟基脲、盐酸伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α-2b、盐酸伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸钙、醋酸亮丙瑞林、盐酸左旋咪唑、利多卡因、洛莫司汀、maytansinoid、盐酸氮芥、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、盐酸美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲睾酮、光辉霉素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、尼鲁米特、醋酸奥曲肽、盐酸昂丹司琼、紫杉醇、帕米膦酸二钠、喷司他丁、盐酸毛果芸香碱、普利霉素、具有卡莫司汀植入物的聚苯丙生20、卟吩姆钠、普鲁卡因、盐酸甲基苄肼、普萘洛尔、利妥昔单抗、沙莫司亭、链脲佐菌素、他莫昔芬、紫杉醇、替尼泊苷、替尼泊苷(teniposide)、替尼泊苷(tenoposide)、睾内酯(testolactone)、丁卡因(tetracaine)、噻依派(thioepa)苯丁酸氮芥、硫鸟嘌呤、噻替派、盐酸拓扑替康、柠檬酸托瑞米芬、曲妥珠单抗、维甲酸、戊柔比星、硫酸长春碱、硫酸长春新碱和酒石酸长春瑞滨。
在一些实施方案中，本发明的化合物与化学治疗剂(例如，细胞毒性剂或可用于治疗癌症的其他化学化合物)组合施用。化学治疗剂的实例包括烷化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和相关抑制剂、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位络合物、蒽二酮取代脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质激素、黄体酮、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素类似物。还包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、亚叶酸钙(LV)、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨、紫杉醇和多西他赛。化学治疗剂的非限制性实例包括烷化剂如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氯丙啶类如苯佐替哌、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌(uredopa)；亚乙基亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；番荔枝内酯(尤其是布拉他辛和布拉他辛酮)；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；隐藻素类(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；葡枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲类如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类如烯二炔类抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γll和加利车霉素ωll)(参见例如Agnew,Chem.Inti.EdEngl.33:183-186(1994))；蒽环类(dynemicin)，包括dynemicin A；双膦酸盐类，如氯膦酸盐；埃斯波霉素；以及新抑癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素(authramycin)、氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、
Figure BDA0003698737280002111
(多柔比星，包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素、培洛霉素、potfiromycin、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他汀、佐柔比星；抗代谢物如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸、三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿啶、依诺他滨、氟尿苷；雄激素类如卡鲁睾酮、羟甲雄酮丙酸酯、表硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类如氨鲁米特、曼托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂如亚叶酸；醋葡内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；氨苯吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；defofamine；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞(elfomithine)；醋酸羟吡咔唑；epothilone；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登木素生物碱类如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶；喷司他丁；氮氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；
Figure BDA0003698737280002112
多糖复合物(JHS NaturalProducts,Eugene,OR)；雷佐生；根霉素；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢菌素(尤其是T-2霉素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷("Ara-C")；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如，
Figure BDA0003698737280002113
(紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,NJ)、
Figure BDA0003698737280002114
紫杉醇的不含聚氧乙烯蓖麻油的白蛋白工程纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,IL)和
Figure BDA0003698737280002115
多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；
Figure BDA0003698737280002116
吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂配位络合物如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；
Figure BDA0003698737280002117
长春瑞滨；诺安托；替尼泊甙；依达曲沙；柔红霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊拜膦酸盐；伊立替康(例如，CPT-1 1)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇如视黄酸；卡培他滨；和上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。两种或多种化学治疗剂可以混合使用以与本发明的化合物组合施用。组合化学疗法的合适给药方案是本领域已知的。例如，组合给药方案见述于Saltz et al.,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.18:233a(1999)和Douillard et al.,Lancet 355(9209):1041-1047(2000)中。
可与本文公开的化合物组合施用的另外的治疗剂可包括贝伐珠单抗、苏尼替尼、索拉非尼、2-甲氧基雌二醇或2ME2、finasunate、瓦他拉尼、凡德他尼、aflibercept、伏洛昔单抗、埃达组单抗(MEDI-522)、cilengitide、厄洛替尼、西妥昔单抗、帕尼单抗、吉非替尼、曲妥珠单抗、多韦替尼、芬妥木单抗、atacicept、利妥昔单抗、阿仑单抗、阿地白介素、阿替利珠单抗、托珠单抗、替西罗莫司、依维莫司、卢卡木单抗、达西组单抗、HLL1、huN901-DM1、atiprimod、那他珠单抗、硼替佐米、卡非佐米、马里佐米、坦螺旋霉素、甲磺酸沙奎那韦、利托那韦、甲磺酸奈非那韦、硫酸茚地那韦、贝利司他、帕比司他、马帕木单抗、来沙木单抗、度拉纳明、ABT-737、奥利默森、plitidepsin、talmapimod、P276-00、enzastaurin、tipifarnib、哌立福新、伊马替尼、达沙替尼、来那度胺、沙利度胺、辛伐他汀、塞来昔布、巴多昔芬、AZD4547、利妥木单抗、奥沙利铂(Eloxatin)、PD0332991、瑞博西尼(LEE011)、玻玛西尼(LY2835219)、HDM201、氟维司群(Faslodex)、依西美坦(Aromasin)、PIM447、鲁索替尼(INC424)、BGJ398、耐昔妥珠单抗、培美曲塞(Alimta)和雷莫芦单抗(IMC-1121B)。
在某些实施方案中，另外的治疗为单克隆抗体(MAb)。一些MAb会刺激免疫反应，从而破坏癌细胞。与B细胞自然产生的抗体类似，这些MAb可能会“包裹”癌细胞表面，从而引发免疫系统对其的破坏。例如，贝伐珠单抗靶向血管内皮生长因子(VEGF)，这是一种由肿瘤细胞和肿瘤微环境中的其他细胞分泌的蛋白质，其可促进肿瘤血管的发育。当与贝伐珠单抗结合时，VEGF不能与其细胞受体相互作用，从而阻止导致新血管生长的信号传导。与细胞表面生长因子受体结合的MAb会阻止靶向受体发送其正常生长促进信号。它们还可能引发细胞凋亡并激活免疫系统以破坏肿瘤细胞。
在本发明的一个方面，生物活性剂为免疫抑制剂。免疫抑制剂可为钙调神经磷酸酶抑制剂，例如，环孢素或子囊霉素，例如环孢素A
Figure BDA0003698737280002121
FK506(他克莫司)、吡美莫司，mTOR抑制剂，例如，雷帕霉素或其衍生物，例如西罗莫司
Figure BDA0003698737280002122
依维莫司
Figure BDA0003698737280002123
替西罗莫司、佐他莫司、优美莫司-7、优美莫司-9，雷帕霉素类似物，例如利达福莫司、硫唑嘌呤、campath 1H，S1P受体调节剂，例如芬戈莫德或其类似物，抗IL-8抗体，霉酚酸或其盐，例如钠盐，或其前药，例如霉酚酸酯
Figure BDA0003698737280002124
OKT3(ORTHOCLONE
Figure BDA0003698737280002125
)、泼尼松、
Figure BDA0003698737280002126
布喹那钠、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-脱氧精胍菌素、曲培莫司、来氟米特
Figure BDA0003698737280002127
CTLAI-Ig、抗-CD25、抗-IL2R、巴利昔单抗
Figure BDA0003698737280002128
达利珠单抗
Figure BDA0003698737280002129
咪唑立宾、甲氨蝶呤、地塞米松、ISAtx-247、SDZASM 981(吡美莫司、
Figure BDA00036987372800021210
)、CTLA4lg(阿巴西普)、贝拉希普、LFA3lg、依那西普(由Immunex以
Figure BDA00036987372800021212
出售)、阿达木单抗
Figure BDA00036987372800021213
英夫利昔单抗
Figure BDA00036987372800021211
抗-LFA-1抗体、那他珠单抗
Figure BDA00036987372800021214
恩莫单抗、戈利木单抗、抗胸腺细胞免疫球蛋白、西利珠单抗、阿法西普、依法利珠单抗、颇得斯安、美沙拉嗪、阿肠克锭、磷酸可待因、扑炎痛(benorylate)、芬布芬、萘普生、双氯芬酸、依托度酸和吲哚美辛、阿司匹林和布洛芬。
在一些实施方案中，生物活性剂为治疗剂，其为用于癌症治疗中的生物制剂如细胞因子(例如，干扰素或白介素(例如，IL-2))。在一些实施方案中，所述生物制剂为抗血管生成剂，如抗-VEGF剂，例如贝伐珠单抗
Figure BDA00036987372800021215
在一些实施方案中，所述生物制剂为基于免疫球蛋白的生物制剂，例如，激动靶标以刺激抗癌反应或拮抗对癌症重要的抗原的单克隆抗体(例如，人源化抗体、完全人抗体、Fc融合蛋白或其功能片段)。这样的剂包括
Figure BDA0003698737280002131
(利妥昔单抗)；
Figure BDA0003698737280002132
(达利珠单抗)；
Figure BDA0003698737280002133
(巴利昔单抗)；
Figure BDA0003698737280002134
(帕利珠单抗)；
Figure BDA0003698737280002135
(英夫利昔单抗)；
Figure BDA0003698737280002136
(曲妥珠单抗)；
Figure BDA0003698737280002137
(吉妥珠单抗奥佐米星)；
Figure BDA0003698737280002138
(阿仑单抗)；
Figure BDA0003698737280002139
(替伊莫单抗)；
Figure BDA00036987372800021310
(阿达木单抗)；
Figure BDA00036987372800021311
(奥马珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021312
(托西莫单抗-l-131)；
Figure BDA00036987372800021313
(依法利珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021314
(西妥昔单抗)；
Figure BDA00036987372800021315
(贝伐珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021316
(那他珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021317
(托珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021318
(帕尼单抗)；
Figure BDA00036987372800021319
(兰尼单抗)；
Figure BDA00036987372800021320
(伊库珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021321
(赛妥珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021322
(戈利木单抗)；
Figure BDA00036987372800021323
(卡那单抗)；
Figure BDA00036987372800021324
(乌司奴单抗)；
Figure BDA00036987372800021325
(奥法木单抗)；
Figure BDA00036987372800021326
(地舒单抗)；
Figure BDA00036987372800021327
(莫维组单抗)；
Figure BDA00036987372800021328
(雷昔库单抗)；
Figure BDA00036987372800021329
(贝利尤单抗)；
Figure BDA00036987372800021330
(伊匹单抗)；
Figure BDA00036987372800021331
(本妥昔单抗)；
Figure BDA00036987372800021332
(帕妥珠单抗)；
Figure BDA00036987372800021333
(恩美曲妥珠单抗)；和
Figure BDA00036987372800021334
(奥妥珠单抗)。还包括抗体-药物缀合物。
组合疗法可包括为非药物治疗的治疗剂。例如，除了放射疗法、冷冻疗法、热疗和/或肿瘤组织的手术切除之外，还可以施用所述化合物。
在某些实施方案中，第一和第二治疗剂同时或以任一顺序依序施用。第一治疗剂可在第二治疗剂之前或之后即刻、至多1小时、至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、至多14小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、至多24小时或至多1-7天、1-14天、1-21天或1-30天施用。
在某些实施方案中，第二治疗剂以与本发明的化合物不同的剂量日程施用。例如，第二治疗剂可具有每个治疗周期1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、或14天的治疗假期(treatment holiday)。在另一个实施方案中，第一治疗剂具有治疗假期。例如，第一治疗剂可具有每个治疗周期1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、或14天的治疗假期。在某些实施方案中，第一和第二治疗剂都具有治疗假期。
VII.药物组合物
式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐可用作治疗活性物质，例如以药物制剂的形式。药物制剂可以口服施用，例如以片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬明胶胶囊剂和软明胶胶囊剂、溶液剂、乳液剂或混悬剂的形式。在其他实施方案中，化合物胃肠外(paternally)施用，例如通过静脉内施用。然而，施用也可以直肠方式实现，例如以栓剂的形式，或者以肠胃外方式实现，例如以注射溶液的形式。
式I、II、III或IV的化合物及其药学上可接受的盐可与药学上惰性的无机或有机载体一起加工以产生药物制剂。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等可例如用作片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬明胶胶囊剂的此类载体。用于软明胶胶囊剂的合适载体有例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。然而，取决于活性物质的性质，在软明胶胶囊剂的情况下通常不需要载体。用于产生溶液剂和糖浆剂的合适载体有例如水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的合适载体有例如天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。
而且，药物制剂可含有药学上可接受的辅助物质，如防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们也可含有还其他的有治疗价值的物质。
本发明还提供了含有式I、II、III或IV的化合物或其药学上可接受的盐和治疗惰性载体的药剂，以及它们的生产方法，其包括将一种或多种式I、II、III或IV的化合物和/或其药学上可接受的盐和(如果需要)一种或多种其他有治疗价值的物质与一种或多种治疗惰性载体一起制成盖仑施用形式。
剂量可在宽范围内变化，并且当然必须根据每种特定情况的个体需要进行调整。在口服施用的情况下，成年人的剂量可在每天约0.01mg至约1000mg通式I、II、III或IV的化合物或相应量的其药学上可接受的盐之间变动。日剂量可以一次剂量或分次剂量施用，另外，当发现需要时也可以超过上限。
以下实施例示意本发明，不限制本发明，而是仅充当其代表。药物制剂方便地含有约1-500mg、特别是1-100mg的式I、II、III或IV的化合物。根据本发明的组合物的实例有：
在某些实施方案中，药物组合物呈在单位剂型中含有约0.1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg、或约200mg至约600mg的活性化合物和任选地约0.1mg至约2000mg、约10mg至约1000mg、约100mg至约800mg、或约200mg至约600mg的另外的活性剂的剂型。实例有具有至少0.1、1、5、10、25、50、100、200、250、300、400、500、600、700或750mg的活性化合物或其盐的剂型。
在一些实施方案中，本文公开的或如所述使用的化合物每天一次(QD)、每天两次(BID)或每天三次(TID)施用。在一些实施方案中，本文公开的或如所述使用的化合物至少每天一次施用至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少26天、至少27天、至少28天、至少29天、至少30天、至少31天、至少35天、至少45天、至少60天、至少75天、至少90天、至少120天、至少150天、至少180天或更长时间。
在某些实施方案中，本发明的化合物每天一次、每天两次、每天三次或每天四次施用。
在某些实施方案中，本发明的化合物每天一次口服施用。在某些实施方案中，本发明的化合物每天两次口服施用。在某些实施方案中，本发明的化合物每天三次口服施用。在某些实施方案中，本发明的化合物每天四次口服施用。
在某些实施方案中，本发明的化合物每天一次静脉内施用。在某些实施方案中，本发明的化合物每天两次静脉内施用。在某些实施方案中，本发明的化合物每天三次静脉内施用。在某些实施方案中，本发明的化合物每天四次静脉内施用。
在一些实施方案中，本发明的化合物的施用在治疗周期之间具有治疗假期。例如，化合物可具有每个治疗周期1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、或14天的治疗假期。
在一些实施方案中，施用负荷剂量以开始治疗。例如，化合物可在治疗的第一天以比治疗周期中的其余治疗日高约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、或约10倍的剂量施用。另外的示例性负荷剂量包括在治疗的前2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天比治疗周期中的其余治疗日高约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、或约10倍的剂量。
药物组合物还可包含一定摩尔比的活性化合物和另外的活性剂。例如，药物组合物可含有摩尔比为约0.5:1、约1:1、约2:1、约3:1或约1.5:1至约4:1的抗炎剂或免疫抑制剂。
这些组合物可含有任何量的达到所需结果的活性化合物，例如0.1至99重量％(wt.％)的化合物，通常至少约5重量％的化合物。一些实施方案含有约25重量％至约50重量％或约5重量％至约75重量％的化合物。
将药物或治疗有效量的组合物递送至患者。确切的有效量将随患者而异，并将取决于物种、年龄、受试者的体型和健康状况、所治疗的病患的性质和程度、治疗医师的建议以及选择施用的治疗剂或治疗剂组合。给定情况的有效量可通过常规实验确定。就本公开的目的而言，在至少一次给药中，治疗量可例如在约0.01mg/kg至约250mg/kg体重的范围内，更通常约0.1mg/kg至约10mg/kg。可以需要多少就向受试者施用多少次给药以减少和/或减轻考虑之中的病症的体征、症状或病因，或引起生物系统的任何其他所需改变。当需要时，可以制备具有适于活性成分的持续或受控释放施用的肠溶衣的制剂。
在某些实施方案中，剂量在约0.01-100mg/kg患者体重的范围内，例如约0.01mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约3.5mg/kg、约4mg/kg、约4.5mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、或约100mg/kg。
药物制剂优选为单位剂型。在这样的剂型中，制剂被细分成含有适宜量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，所述包装包含离散量的制剂，如包装在小瓶或安瓿中的片剂、胶囊和粉末。另外，单位剂型本身可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂，或者其可以是适宜量的任何这些的包装形式。
在某些实施方案中，化合物以药学上可接受的盐施用。药学上可接受的盐的非限制性实例包括：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐和戊酸盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙和镁以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺和乙胺。
因此，本公开的组合物可以药物制剂施用，包括适合于口服(包括含服和舌下)、直肠、鼻腔、局部、透皮、肺部、阴道或肠胃外(包括肌肉内、动脉内、鞘内、皮下和静脉内)、注射、吸入或喷雾、主动脉内、颅内、真皮下、腹膜内、皮下或通过含有常规药学上可接受的载体的其他施用手段的药物制剂。典型的施用方式为口服、局部或静脉内施用，使用方便的每日给药方案，该给药方案可根据痛苦程度进行调整。
取决于预期的施用模式，药物组合物可呈固体、半固体或液体剂型的形式，例如片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、散剂、液体剂、糖浆剂、混悬剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂、泡沫剂、或油剂、注射剂或输注溶液剂、透皮贴剂、皮下贴剂、吸入制剂、医疗器械、栓剂、含服或舌下制剂、肠胃外制剂或滴眼液等，优选呈适合单次施用精确剂量的单位剂型。
一些剂型，如片剂和胶囊剂，被细分成适当大小的单位剂量，其中含有适宜的量的活性组分，例如达到所需目的的有效量。组合物将包含有效量的所选药物与药学上可接受的载体的组合，另外，还可以包含其他药剂、佐剂、稀释剂、缓冲剂等。
载体包括赋形剂和稀释剂，并且必须具有足够高的纯度和足够低的毒性以使得其适合施用于被治疗的患者。载体可以是惰性的，也可以具有自身的药学益处。与化合物结合使用的载体的量足以为每单位剂量的化合物提供实际的量的施用材料。
载体的类别包括但不限于佐剂、粘结剂、缓冲剂、着色剂、稀释剂、崩解剂、赋形剂、乳化剂、调味剂、凝胶、助流剂、润滑剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、增溶剂、压片剂、润湿剂或固化材料。
一些载体可能被列在不止一个类别中，例如植物油可在一些制剂中用作润滑剂，而在其他制剂中用作稀释剂。
示例性的药学上可接受的载体包括糖、淀粉、纤维素、粉状黄蓍胶、麦芽、明胶；滑石、凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇类、透皮促进剂和植物油。药物组合物中可包含任选的活性剂，其基本上不干扰本发明的化合物的活性。
一些赋形剂包括但不限于液体如水、盐水、甘油、聚乙二醇、透明质酸、乙醇等。根据治疗目标的需要，化合物可例如以固体、液体、喷雾干燥材料、微米颗粒、纳米颗粒、受控释放体系等的形式提供。适用于非液体制剂的赋形剂也是本领域技术人员已知的。药学上可接受的赋形剂和盐的详尽讨论可在Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版)(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company,1990)中获得。
另外，辅助物质，如润湿剂或乳化剂、生物缓冲物质、表面活性剂等，可以存在于这样的媒介物中。生物缓冲剂可以是药理学上可接受的任何溶液，并且其为制剂提供所需的pH，即生理学上可接受的范围内的pH。缓冲溶液的实例包括盐水、磷酸盐缓冲盐水、Tris缓冲盐水、Hank’s缓冲盐水等。
对于固体组合物，常规的无毒固体载体包括例如药物级的甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。可以液体药物施用的组合物可例如通过将如本文所述的活性化合物和任选的药物佐剂溶解、分散等在赋形剂例如水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等中从而形成溶液或悬浮液来制备。如果需要，待施用的药物组合物还可含有少量的无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如乙酸钠、失水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、三乙醇胺油酸盐等。制备这样的剂型的实际方法对于本领域技术人员来说是已知的或将是显而易见的；例如，参见上面引用的Remington’sPharmaceutical Sciences。
在还另一个实施方案中，提供了渗透促进剂赋形剂的使用，所述渗透促进剂赋形剂包括聚合物如：聚阳离子(壳聚糖及其季铵衍生物、聚-L-精氨酸、胺化明胶)；聚阴离子(N-羧甲基壳聚糖、聚丙烯酸)；和硫醇化聚合物(羧甲基纤维素-半胱氨酸、聚卡波非-半胱氨酸、壳聚糖-硫代丁基脒、壳聚糖-巯基乙酸、壳聚糖-谷胱甘肽缀合物)。
在某些实施方案中，赋形剂选自丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸氢钙、硬脂酸钙、交联甲羧纤维素、交联聚乙烯基吡咯烷酮、柠檬酸、交聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、蛋氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚维酮、预糊化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羟基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E、维生素C和木糖醇。
药物组合物/组合可配制用于口服施用。对于口服施用，组合物通常采用片剂、胶囊、软凝胶胶囊的形式，或者可为水性或非水性溶液、悬浮液或糖浆。片剂和胶囊是典型的口服施用形式。用于口服使用的片剂和胶囊可包含一种或多种常用的载体，如乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂，如硬脂酸镁。通常，本公开的组合物可与口服的、无毒的、药学上可接受的惰性载体如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露糖醇、山梨糖醇等组合。此外，当需要或必要时，也可向混合物中引入合适的粘结剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。合适的粘结剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶如阿拉伯树胶、黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
当使用液体悬浮液时，活性剂可与任何口服的、无毒的、药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油、水等以及与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，也可添加调味剂、着色剂和/或甜味剂。引入到本文的口服制剂中的其他任选组分包括但不限于防腐剂、悬浮剂、增稠剂等。
对于眼部递送，可根据需要施用化合物，例如经由玻璃体内、基质内、前房内、筋膜下、视网膜下、球后、球周、脉络膜上腔(suprachorodial)、结膜、结膜下、巩膜上、眼周、透巩膜、球后、后部巩膜旁(posterior juxtascleral)、角膜周围或泪管注射，或通过粘液、粘蛋白或粘膜屏障，以立即或受控释放方式或经由眼部装置。
肠胃外制剂可以常规形式制备，或者制备为液体溶液或悬浮液、适合在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或者制备为乳液。通常，根据本领域已知的技术使用合适的载体、分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制无菌可注射混悬剂。无菌可注射制剂也可以是在可接受的无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液。可采用的可接受的媒介物和溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌的非挥发性油、脂肪酯或多元醇作为溶剂或悬浮介质。另外，肠胃外施用可涉及缓慢释放或持续释放体系的使用以维持恒定的剂量水平。
肠胃外施用包括关节内、静脉内、肌肉内、真皮内、腹膜内和皮下途径，并且包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌混悬剂，其可包含悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。经由某些肠胃外途径的施用可涉及通过针或导管向患者体内引入本公开的制剂，所述针或导管由无菌注射器或一些其他机械装置如连续输注系统推动。本公开提供的制剂可使用注射器、喷注器、泵或本领域公认的用于肠胃外施用的任何其他装置施用。
根据本公开的用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液或乳液。非水性溶剂或媒介物的实例有丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油和玉米油)、明胶以及可注射的有机酯如油酸乙酯。这样的剂型还可含有佐剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。它们可通过例如通过细菌截留滤器(bacteria retaining filter)过滤、通过向组合物中引入灭菌剂、通过辐照组合物或通过加热组合物来灭菌。它们也可在临用前使用无菌水或一些其他无菌可注射介质制造。
无菌可注射溶液通过将所需量的一种或多种本公开的化合物根据需要与上面列举的各种其他成分一起引入到适宜的溶剂中并然后过滤灭菌来制备。通常，分散体通过将各种已灭菌的活性成分引入到含有基础分散介质和来自上文列举的那些的所需其他成分的无菌媒介物中来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，典型的制备方法为真空干燥和冷冻干燥技术，所述技术从其先前经无菌过滤的溶液产生活性成分外加任何另外的所需成分的粉末。因此，例如，通过在按体积计10％的丙二醇和水中搅拌按重量计1.5％的活性成分来制备适合通过注射施用的肠胃外组合物。用氯化钠使溶液等渗并灭菌。
或者，本公开的药物组合物可以栓剂的形式施用以便直肠施用。栓剂可通过将剂与合适的无刺激赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体并因此会在直肠中熔化以释放药物。这样的材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本公开的药物组合物也可通过鼻气雾剂或吸入施用。这样的组合物根据药物制剂领域公知的技术制备并且可制备为在盐水中的溶液，其采用苯甲醇或其他合适的防腐剂、吸收促进剂以提高生物利用度、推进剂如碳氟化合物或氮和/或其他常规的增溶或分散剂。
用于含服施用的制剂包括片剂、锭剂、凝胶等。或者，可使用本领域技术人员已知的透粘膜递送系统实现含服施用。本公开的化合物还可使用常规的透皮药物递送系统即透皮“贴剂”通过皮肤或粘膜组织递送，其中通常将剂含在用作药物递送装置的层合结构中以固定到体表。在这样的结构中，药物组合物通常含在上背衬层下面的层或“储库”中。层合装置可含有单个储库，或者其可含有多个储库。在某些实施方案中，储库包含药学上可接受的接触粘合剂材料的聚合物基质，其用于在药物递送期间将系统固定到皮肤上。合适的皮肤接触粘合剂材料的实例包括但不限于聚乙烯、聚硅氧烷、聚异丁烯、聚丙烯酸酯、聚氨酯等。
或者，含有药物的储库和皮肤接触粘合剂作为单独且不同的层存在，储库下面的粘合剂在这种情况下可以是如上所述的聚合物基质，或者可以是液体或凝胶储库，或者可以采取其他形式。这些层合物中充当装置的上表面的背衬层起到层合结构的主要结构元件的作用并为装置提供了很大的灵活性。为背衬层选择的材料应对活性剂和存在的任何其他材料基本上不可渗透。
本公开的组合物可配制用于气雾剂施用，特别是施用于呼吸道，包括鼻内施用。化合物可例如通常具有例如约5微米或更小的小粒度。这样的粒度可通过本领域已知的手段获得，例如通过微细化。活性成分与合适的推进剂如氯氟烃(CFC)如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体一起提供在加压包装中。气雾剂还可方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可通过计量阀来控制。
或者，活性成分可以干粉的形式提供，例如化合物在合适的粉末基料如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷(PVP)中的粉末混合物。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以单位剂量形式存在，例如在例如明胶或泡罩包装的胶囊或药筒中，粉末可借助于吸入器自其施用。
适合于直肠施用的制剂通常以单位剂量栓剂存在。这些栓剂可通过将活性化合物与一种或多种常规的固体载体例如可可脂混合并然后将所得混合物成型来制备。
在某些实施方案中，药物组合物适合使用上文定义的施用模式局部施加到皮肤。
在某些实施方案中，药物组合物适合于透皮施用并可呈离散的贴剂，所述贴剂适于长时间与接受者的表皮保持密切接触。适合于透皮施用的制剂也可通过离子导入法递送(参见例如Pharmaceutical Research 3(6):318(1986))并且通常呈活性化合物的任选缓冲水溶液的形式。
在某些实施方案中，提供微针贴剂或装置来将药物递送穿过或进入生物组织、特别是皮肤。微针贴剂或装置允许以临床相关的速率递送药物穿过或进入皮肤或其他组织屏障，而对组织的损伤、疼痛或刺激最小或没有。
适合于施用到肺的制剂可通过广泛的被动呼吸驱动和主动功率驱动的单/多剂量干粉吸入器(DPI)来递送。最常用于呼吸递送的装置包括雾化器、计量吸入器和干粉吸入器。有若干类型的雾化器可供使用，包括喷射雾化器、超声雾化器和振动筛网雾化器。合适的肺递送装置的选择取决于参数如药物的性质及其配制、作用部位和肺的病理生理学。
在某些实施方案中，提供了口服制剂。
实施例A
以常见方式制造以下组成的片剂：
Figure BDA0003698737280002201
表1：可能的片剂组成
制造程序
1.混合成分1、2、3和4并用纯净水造粒。
2.于50℃干燥粒子。
3.使粒子通行经过合适的碾磨设备。
4.加入成分5并混合三分钟；在合适的压机上压缩。
实施例B-1
制造以下组成的胶囊：
Figure BDA0003698737280002202
Figure BDA0003698737280002211
表2：可能的胶囊成分组成
制造程序
1.在合适的混合器中将成分1、2和3混合30分钟。
2.加入成分4和5并混合3分钟。
3.填充到合适的胶囊中。
式I、II、III或IV的化合物、乳糖和玉米淀粉首先在混合器中混合，然后在粉碎机中混合。将混合物返回到混合器；向其中加入滑石并充分混合。通过机器将混合物填充到合适的胶囊中，例如，硬明胶胶囊。
实施例B-2
制造以下组成的软明胶胶囊：
成分 mg/胶囊
式I、II、III或IV的化合物 5
黄蜡 8
氢化大豆油 8
部分氢化植物油 34
大豆油 110
总计 165
表3：可能的软明胶胶囊成分组成
成分 mg/胶囊
明胶 75
85％甘油 32
Karion 83 8(干物质)
二氧化钛(Titan dioxide) 0.4
氧化铁黄 1.1
总计 116.5
表4：可能的软明胶胶囊组成
制造程序
将式I、II、III或IV的化合物溶解在其他成分的温热熔体中并将混合物填充到适宜大小的软明胶胶囊中。按照通常的程序处理填充的软明胶胶囊。
实施例C
制造以下组成的栓剂：
成分 mg/栓剂
式I、II、III或IV的化合物 15
栓剂质 1285
总计 1300
表5：可能的栓剂组成
制造程序
将栓剂质在玻璃或钢容器中熔化，充分混合并冷却至45℃。随后，向其中加入式I、II、III或IV的细粉状化合物并搅拌直至其完全分散。将混合物倒入合适尺寸的栓剂模具中，让其冷却；然后从模具取出栓剂并单独包装在蜡纸或金属箔中。
实施例D
制造以下组成的注射溶液：
成分 mg/注射溶液
式I、II、III或IV的化合物 3
聚乙二醇400 150
乙酸 适量，至pH 5.0
注射溶液用水 至1.0ml
表6：可能的注射溶液组成
制造程序
将式I、II、III或IV的化合物溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。用乙酸将pH调节至5.0。通过加入剩余量的水将体积调节至1.0ml。过滤溶液，使用适宜的过量填充到小瓶中并灭菌。
实施例E
制造以下组成的小袋：
成分 mg/小袋
式I、II、III或IV的化合物 50
乳糖细粉 1015
微晶纤维素(AVICEL PH 102) 1400
羧甲基纤维素钠 14
聚乙烯基吡咯烷酮K 30 10
硬脂酸镁 10
调味添加剂 1
总计 2500
表7：可能的小袋组成
制造程序
将式I、II、III或IV的化合物与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合并用聚乙烯基吡咯烷酮在水中的混合物制粒。将粒子与硬脂酸镁和调味添加剂混合并填充到小袋中。
VIII.药理学试验
式I、II、III或IV的化合物及其药学上可接受的盐具有有价值的药理学性质。根据下文给出的试验研究化合物。
材料
NCI-H1975(携带EGFR杂合T790M/L858R突变)和NCI-H3255(携带EGFR杂合L858R突变)分别购自ATCC和NCI。NCI-H1975+CS(携带EGFR杂合T/790M/L858R/C797S突变)由Horizon Discovery使用CRISPR技术生成以引入另外的C797S突变。RPMI 1640无酚红培养基和胎牛血清(FBS)购自Gibco(Grand Island,NY,USA)。细胞培养瓶和384孔微孔板得自VWR(Radnor,PA,USA)。总EGFR(L858R)HTRF测定试剂盒购自Cisbio(Bedford,MA,USA)。
EGFR(L858R)降解分析
使用总EGFR(L858R)HTRF测定试剂盒基于FRET信号的定量确定含有L858R突变的EGFR蛋白的降解。将测试化合物以10μΜ的最高浓度添加到384孔板中，含11个点，一式两份进行半对数滴定。将NCI-H1975、NCI-H1975+CS或NCI-H3255细胞以每孔10000、10000或1000个细胞的细胞密度分别加到384孔板中。将板在37℃和5％C02下保持6小时。在没有测试化合物的情况下处理的细胞为阴性对照。阳性对照由含有所有试剂但不含细胞的孔设置。在EnVisionTM Multilabel Reader(PerkinElmer,Santa Clara,CA,USA)上采集FRET信号。
表1：DC50值
Figure BDA0003698737280002231
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表2
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Figure BDA0003698737280002661
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Figure BDA0003698737280002701
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Figure BDA0003698737280003001
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Figure BDA0003698737280003031
Figure BDA0003698737280003041
Figure BDA0003698737280003051
Figure BDA0003698737280003061
Figure BDA0003698737280003071
在上表中，***<50nM；**为50-150nM；*>150nM
IX.合成方法
式I、II、III或IV的化合物可能含有一个或多个不对称中心并因此可以外消旋物、外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体存在。取决于分子上各种取代基的性质，可能存在另外的不对称中心。每个这样的不对称中心将独立地产生两种光学异构体，并且旨在混合物中所有可能的光学异构体和非对映异构体以及纯的或部分纯化的化合物都包括在本发明中。本发明意在涵盖这些化合物的所有此类异构体形式。这些非对映异构体的独立合成或它们的色谱分离可如本领域已知的那样通过适当修改本文公开的方法来实现。它们的绝对立体化学可通过结晶产物或结晶中间体的x-射线晶体学来确定，如果需要，用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂将其衍生化。如果需要，可以分离化合物的外消旋混合物，从而分离出单独的对映异构体。可以通过本领域公知的方法进行分离，如将化合物的外消旋混合物偶联至对映异构体纯的化合物以形成非对映异构体混合物，然后通过标准方法如分级结晶或色谱法分离各个非对映异构体。
在提供光学纯对映异构体的实施方案中，光学纯对映异构体指的是化合物含有按重量计>90％的所需异构体，特别是按重量计>95％的所需异构体，或更特别地按重量计>99％的所需异构体，所述重量百分数基于化合物的异构体的总重量。手性纯的或手性富集的化合物可通过手性选择性合成或通过对映异构体的分离来制备。对映异构体的分离可对最终产物进行，或者可对合适的中间体进行。
式I的化合物的制备在以下方案中更详细地进一步描述。
Figure BDA0003698737280003081
Figure BDA0003698737280003091
一般而言，用于合成式I的化合物的步骤顺序在某些情况下也可改变。
式II的化合物的制备在以下方案中更详细地进一步描述。
Figure BDA0003698737280003092
Figure BDA0003698737280003101
一般而言，用于合成式I的化合物的步骤顺序在某些情况下也可改变。在某些情况下，针对式I或式II示出的步骤顺序可应用于式III和式IV的化合物的合成或可针对式III和式IV的化合物的合成加以修改。
化合物的分离和纯化
如果需要，本文描述的化合物和中间体的分离和纯化可通过任何合适的分离或纯化程序来进行，例如过滤、萃取、结晶、柱色谱、薄层色谱、厚层色谱、制备低压或高压液相色谱或这些程序的组合。可通过参考下文的制备和实施例来获得合适的分离和隔离程序的具体说明。然而，当然也可以使用其他等效的分离或隔离程序。式I、II、III或IV的手性化合物的外消旋混合物可以使用手性HPLC分离。手性合成中间体的外消旋混合物也可以使用手性HPLC分离。
式I、II、III或IV的化合物的盐
在式I、II、III或IV的化合物为碱性的情况下，它们可被转化为相应的酸加成盐。转化通过用至少化学计量量的适当的酸处理来实现，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，和有机酸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。一种特定的盐为富马酸盐。通常，将游离碱溶解在惰性有机溶剂如乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中，并将酸加入类似溶剂中。温度保持在0℃至50℃之间。产生的盐自发沉淀，或者可用极性较低的溶剂从溶液中提出来。
在实施例中未描述它们的制备的情况下，式I、II、III或IV的化合物以及所有中间产物可根据类似方法或根据本文阐述的方法制备。起始材料是可商购获得的、本领域已知的或可通过本领域已知的方法或与其类似的方法制备。
应理解，本发明中通式I、II、III或IV的化合物可在官能团处衍生化以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。
X.实验程序
缩写
Figure BDA0003698737280003111
Figure BDA0003698737280003121
Figure BDA0003698737280003131
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Figure BDA0003698737280003151
Figure BDA0003698737280003161
合成实施例
提供以下实施例以说明本发明。它们不应被视为限制本发明的范围，而仅是其代表。
中间体
方案1：
Figure BDA0003698737280003162
一般程序–A
向1-1(1mmol)和1-2(2mmol)在二噁烷(3mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2mmol)。所得溶液在密封管中于70-110℃加热24小时以产生1-3。然后将反应混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取物，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(二氧化硅，梯度：0-3％的甲醇/二氯甲烷)，得到1-3。
中间体4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003163
按一般程序A(N,N-二异丙基乙胺/二噁烷)由4-(4-氨基苯基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(CAS#170011-57-1)合成4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。收率-45％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),6.94(d,J＝8.16Hz,2H),6.60(d,J＝7.88Hz,2H),5.64(d,J＝6.96Hz,1H),4.28-4.24(m,1H),4.07-4.00(m,2H),2.79-2.64(m,4H),2.53-2.48(m,2H),2.11-2.05(m,1H),1.89-1.81(m,1H),1.71-1.64(m,2H0,1.40-1.34(m,10H)；LC MS：ES+386.3。
中间体3-((3-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003171
按一般程序A由4-[3-氨基苯基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(CAS#387827-19-2)合成4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。收率：25％LCMS(ESI+):388.2(M+H)
中间体3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003172
按一般程序由4-(5-氨基吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS#885693-48-1)合成4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯：收率：14％，LCMS(ESI+):389.2(M+H)。
方案2：
Figure BDA0003698737280003173
一般程序B：
于室温向溶解在甲醇中的2-1(0.1M)中加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，5当量)并将反应混合物于40℃加热2小时。减压蒸发挥发物，得到2-2。
中间体3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003174
按一般程序(一般程序-B)由4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯合成3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐。收率-88％；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),8.84(brs,1H),8.77(brs,1H),6.95(d,J＝8.44Hz,2H),6.66(d,J＝8.48Hz,2H),4.29(dd,J＝11.4,4.72Hz,1H),3.35-3.29(m,2H),2.99-2.91(m,2H),2.71-2.53(m,3H),2.10-2.05(m,1H),1.89-1.71(m,5H)；LC MS:ES+288.2。
中间体3-((3-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003181
按一般程序B由4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯合成3-((3-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐。收率：76％1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),9.00(br.s,1H),8.85(br.S,1H),1.02(t,J＝7.6Hz,1H),6.57-6.55(m,2H),6.47(d,J＝7.6Hz,1H),4.32(dd,J＝11.2Hz,4.6Hz,1H),3.45-3.39(m,2H),2.80-2.65(m,2H),2.79-2.67(m,2H),2.61-2.53(M,1H),2.11-2.07(m,1H),1.94-1.80(m,5H)。LCMS(ESI+):288.2(M+H)。
中间体3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003182
按一般程序B由4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯合成3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐。收率：83％，LCMS(ESI+):289.0(M+H)。
中间体4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯和4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯通过手性SFC分离的合成
Figure BDA0003698737280003191
通过手性SFC分离4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4g，10.32mmol)，得到两组级分。
使用以下制备规模SFC方法来分离对映异构体：
柱子：Chiralpak ID(250x21mm)5um
流速：35g/min
流动相：45％CO2+55％异丙醇
ABPR：100巴
温度：35℃
将较早的洗脱级分冻干以提供4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.44g，3.70mmol，收率35.88％，对映异构体过量99.66％，手性SFC Rt＝4.31min)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ10.77(s,1H),6.94(d,J＝8.1Hz,2H),6.60(d,J＝8.2Hz,2H),5.68-5.66(m,1H),4.29-4.23(m,1H),4.05-4.02(m,2H),2.78-2.54(m,5H),2.11-2.07(m,1H),1.89-1.83(m,1H),1.69-1.66(m,2H),1.40-1.36(m 11H)。
将较晚的级分冻干以提供4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.56g，3.95mmol，收率38.24％，对映异构体过量98.06％，手性SFC Rt＝5.96min)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ10.77(s,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,2H),6.60(d,J＝8.3Hz,2H),5.68-5.66(m,1H),4.29-4.23(m,1H),4.05-4.02(m,2H),2.78-2.58(m,5H),2.11-2.07(m,1H),1.87-1.83(m,1H),1.70-1.67(m,2H),1.40-1.35(m 11H)。
2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐和2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐的合成
2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003192
向3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(2.0g，6.96mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(3.52g，34.80mmol，4.85mL)，然后加入2-溴乙酸叔丁酯(1.49g，7.66mmol，1.12mL)并将反应混合物于室温搅拌16小时。加入水(75mL)并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取产物。合并有机层并用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，使用30％的乙酸乙酯-石油醚作为洗脱剂，得到呈绿色固体的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.40g，3.36mmol，收率48.33％)。
获得(S)-2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯和(R)-2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]叔丁酯的SFC分离条件
Figure BDA0003698737280003201
使用手性SFC方法使用Chiralcel OD-H柱子(250mm x 30mm；5micron)、用40％的异丙醇/CO2(流速：3ml/min；出口压力：100巴)洗脱来拆分外消旋中间体2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.40g，3.36mmol)。减压蒸发第一组洗脱级分，得到(S)-2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(500mg，收率36％，Rt＝3.36min，纯度96.22％，对映异构体过量>99％)。减压蒸发第二组级分，得到500mg(R)-2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(500mg，收率36％，Rt＝4.84min，纯度96.22％，对映异构体过量99.04％)。第一洗脱物的LCMS(m/z:402.4[M+H])，第二洗脱物的LCMS(m/z:402.2[M+H])。
2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280003202
将2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(500mg，1.25mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，于0℃逐滴加入三氟乙酸(12.26g，107.51mmol，8mL)，并将反应于室温搅拌3小时。反应完成后，浓缩反应混合物。该物质加甲醇:MTBE混合物(1:4)研磨，收集固体，并减压蒸发挥发物，得到呈灰白色固体的2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(600mg，1.24mmol，收率99.6％)。LCMS(ESI+):346.1(M+H)
2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸:三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280003211
以类似于2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐的方式处理2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(500.00mg，1.25mmol)以得到呈灰白色固体的2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(600mg，1.24mmol，收率99.63％)。LCMS(ESI+):346.1(M+H)
中间体3-(3-氟-4-哌啶-4-基-苯基氨基)-哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003212
步骤-1：4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003698737280003213
向4-溴-3-氟-苯胺(5.00g，26.3mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(8.95g，29.0mmol)在水(12mL)、THF(60mL)和甲醇(24mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(6.14g，57.89mmol，2.43mL)并用氩气彻底吹扫烧瓶。加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(430mg，526μmol)，反应混合物用氮气脱气，然后于80℃加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机萃取物，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(15％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈浅黄色固体的4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(6.1g，20.9mmol，收率79％)。LCMS:ESI+293(M+Hs)
步骤-2：4-[4-(2,6-双-苄氧基-吡啶-3-基氨基)-2-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003221
向4-(4-氨基-2-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5.9g，20.2mmol)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(9.26g，22.2mmol)在t-BuOH(60mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(19.73g，60.54mmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(924mg，1.01mmol)、Ruphos(942mg，2.02mmol)。所得混合物于100℃加热18小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机萃取物，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(15％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈浅黄色固体的4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5.9g，10.1mmol，收率50％)。LCMS:ES+582(M+H+)
步骤-3：4-[4-(2,6-二氧代-哌啶-3-基氨基)-2-氟-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003222
向4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(4.6g，7.91mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的经氮气脱气的搅拌溶液中加入10％的Pd-C(50％湿态，4.6g)。所得混合物在环境温度和氢气球压力下搅拌20小时。反应混合物通过硅藻土小垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。减压蒸发合并的滤液并通过柱色谱法纯化(40％的乙酸乙酯/己烷)，得到呈蓝色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.6g，6.41mmol，收率81％)。LCMS:ES+406(M+H+)。
步骤-4：3-(3-氟-4-哌啶-4-基-苯基氨基)-哌啶-2,6-二酮盐酸盐的制备。
Figure BDA0003698737280003231
于10℃向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.3g，3.21mmol)中加入二噁烷-HCl(4M，30mL，130mmol)。将所得混合物温热至环境温度并搅拌16小时。减压浓缩反应混合物，加醚研磨并冻干，得到呈绿色固体的3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(840mg，2.73mmol，收率85.25％)。LC MS:ES+306(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-D6)10.79(s,1H),9.00(br s,1H),8.85-8.83(m,1H),6.96-6.91(m,1H),6.50-6.45(m,2H),4.34-4.30(m,1H),3.32-3.29(m,2H),2.98-2.93(m,3H),2.77-2.69(m,1H),2.60-2.56(m,1H),2.08-2.05(m,1H),1.92-1.81(m,5H)。
3-(2-氟-4-哌啶-4-基-苯基氨基)-哌啶-2,6-二酮盐酸盐的中间体合成
步骤-1：4-(4-氨基-3-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003232
向4-溴-2-氟-苯胺(5.00g，26.3mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(8.95g，29.0mmol)在水(12mL)、THF(60mL)和甲醇(24mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(6.14g，57.89mmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(430mg，526μmol)。所得混合物于80℃加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机萃取物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(15％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈浅黄色固体的4-(4-氨基-3-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(6.1g，20.9mmol，收率79％)。LC MS:ES+293(M+H+)。
步骤-2：4-[4-(2,6-双-苄氧基-吡啶-3-基氨基)-3-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003241
向4-(4-氨基-3-氟-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5.9g，20.2mmol)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(9.26g，22.2mmol)在t-BuOH(60mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(19.73g，60.54mmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(924mg，1.01mmol)和RuPhos(942mg，2.02mmol)。所得混合物于100℃加热18小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机萃取物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(10％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈浅黄色固体的4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5.9g，10.1mmol，收率50％)。LC MS:ES+582(M+H+)。
步骤-3：4-[4-(2,6-二氧代-哌啶-3-基氨基)-3-氟-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003242
向4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(4.6g，7.91mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的经脱气的搅拌溶液中加入10％的Pd-C(50％湿态，4.6g)。所得混合物在环境温度和氢气球压力下搅拌20小时。反应混合物通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。减压蒸发合并的滤液并通过柱色谱法纯化(40％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈蓝色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.6g，6.41mmol，收率81％)。LC MS:ES+406(M+H+)。
步骤-4：3-(2-氟-4-哌啶-4-基-苯基氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐的制备
Figure BDA0003698737280003251
于10℃向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.3g，3.21mmol)中加入二噁烷HCl(4M，10mL，40mmol)。将所得混合物温热至环境温度并搅拌16小时。减压浓缩反应混合物，加醚研磨并冻干，得到呈绿色固体的3-[2-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(840mg，2.73mmol，收率85％)。LC MS:ES+306(M+H+)。1HNMR(400MHz,DMSO-D6)10.82(s,1H),8.85(br s,1H),8.69-8.68(m,1H),6.92-6.89(m,1H),6.83-6.77(m,2H),4.40-4.36(m,2H),3.37-3.31(m,2H),2.98-2.90(m,2H),2.76-2.71(m,2H),2.58-2.56(m,1H),2.05-1.73(m,6H)。
(S)-4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶盐酸盐和(R)-4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶盐酸盐的合成
步骤1：手性分离以提供4-(4-(((3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和4-(4-(((3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003252
使用以下方法通过手性SFC进行外消旋4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.96g)的分离。
柱子：ChiralCel OJ-H(250x21mm),5um二氧化硅
流速：70mL/min
流动相：65％CO2+35％异丙醇
ABPR：100巴
温度：35℃
SFC分离提供两组级分。将较早的洗脱级分冻干以提供4-(4-(((3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.51g，收率42％，对映异构体过量>99％，手性SFC保留时间＝0.91min)。
将较晚的洗脱级分冻干以提供4-(4-(((3R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.69g，收率45％，对映异构体过量99.6％，手性SFC保留时间＝1.26min)。
两种分离出的异构体的保留时间和对映异构体过量通过分析手性SFC使用以下条件测定：
柱子：ChiralCel OJ-H(100x4.6mm)
流速：4mL/min
压力：100巴
温度：40℃
步骤2：(S)-4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003261
使用一般程序B由4-(4-(((3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯以定量收率获得(S)-4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶盐酸盐。LCMS(ESI+):306.3[M+H+]
步骤3：(R)-4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003262
使用一般程序B由4-(4-(((3S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯以定量收率获得(R)-4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶盐酸盐。LCMS(ESI+):306.3(M+H+)
中间体：2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸
步骤-1：2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003698737280003263
在密封管中向2-(4-氨基苯基)乙酸叔丁酯(10.0g，48.3mmol)在DMF(80mL)中的搅拌溶液中加入3-溴哌啶-2,6-二酮(13.9g，72.4mmol)，然后加入碳酸氢钠(12.2g，145mmol)。所得混合物于70℃加热24小时。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(35％的乙酸乙酯-己烷)，得到2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸叔丁酯(7.5g，23.6mmol，收率49％)。LC MS:ES+319(M+H+)
步骤-2：2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸的制备
Figure BDA0003698737280003271
于0℃向2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸叔丁酯(3.5g，10.99mmol)在二氯甲烷(45mL)中的搅拌溶液中逐滴加入TFA(8.47mL，110mmol)。将所得混合物温热至环境温度并搅拌5小时。将反应混合物减压浓缩，加MTBE研磨并冻干，得到呈灰色固体的2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸(2.9g，10.9mmol，收率99％)。LCMS:ES+263(M+H+)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)10.79(s,1H),6.97(d,J＝8.36Hz,2H),6.63(d,J＝8.36Hz,2H),4.32-4.28(m,1H),3.37(s,2H),2.78-2.71(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.13-2.07(m,1H),1.92-1.81(m,1H)
中间体：1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的合
Figure BDA0003698737280003272
步骤-1：6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺的制备：
Figure BDA0003698737280003281
于0℃向6-溴-1H-吲唑-3-胺(7g，33.0mmol，439μL)在DMF(150mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氢化钠(60％，在油中，2.38g，59.4mmol)并将混合物搅拌40分钟。在冷却下逐滴加入碘甲烷(5.15g，36.3mmol，2.26mL)，将所得混合物温热至环境温度并搅拌16小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(50％的乙酸乙酯-己烷)，得到6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺(4.2g，18.6mmol，收率56％)。LC MS:ES+227(M+H+)
步骤-2：3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯的制备：
Figure BDA0003698737280003282
于80℃向6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺(4.2g，18.6mmol)、[DBU][Lac](通过将DBU和乳酸的等摩尔混合物于室温于搅拌下混合16小时来制备，2.09g，14.9mmol)的混合物中于5天内分5份(每份2.8g)加入丙烯酸乙酯(14.0g，139mmol)。完成(LCMS)后，反应混合物用次氯酸钠(30％水溶液，5mL)淬灭并用乙酸乙酯稀释。合并有机物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(50％的乙酸乙酯-己烷)，得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(2.9g，8.89mmol，收率48％)。LCMS(ESI+):327(M+H+)。
步骤-3：3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯的制备：
Figure BDA0003698737280003283
于环境温度向3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基]丙酸乙酯(2.9g，8.89mmol)在乙醇(40mL)中的搅拌溶液中加入无水乙酸钠(1.46g，17.8mmol)，然后加入溴化氰(1.41g，13.3mmol)。将所得混合物加热回流48小时。减压浓缩反应混合物并用乙酸乙酯稀释。合并有机物，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(45％的乙酸乙酯-己烷)，得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(1.65g，4.70mmol，收率53％)。LC MS:ES+352(M+H+)。
步骤-4：3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯的制备：
Figure BDA0003698737280003291
于环境温度向3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-氨基]丙酸乙酯(2g，5.69mmol)在甲苯(60mL)中的搅拌溶液中加入(1E)-乙醛肟(1.01g，17.1mmol)，然后加入氯化铟(III)(126mg，569μmol)。将所得混合物加热回流1小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥有机物，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(60％的乙酸乙酯-己烷)，得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(1.4g，3.79mmol，收率67％)。LC MS:ES+370(M+H+)。
步骤-5：1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的制备
Figure BDA0003698737280003292
于环境温度向3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氨基甲酰基-氨基]丙酸乙酯(1.40g，3.79mmol)在MeCN(70mL)中的搅拌溶液中逐滴加入Triton-B(40％，在甲醇中，2.4mL，5.69mmol)。所得混合物于环境温度搅拌45分钟。真空浓缩反应混合物并用乙酸乙酯稀释。有机层用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(30％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈白色固体的1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(910mg，2.81mmol，收率74％)。LC MS:ES+324(M+H+)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)10.60(s,1H),7.97(s,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),7.26-7.23(m,1H),3.98(s,3H),3.93(t,J＝6.6Hz,2H),2.76(t,J＝6.6Hz,2H)。
1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐的制备
步骤1：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003293
将1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1.25g，3.87mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(2.39g，7.74mmol)的溶液用N2鼓泡10分钟。然后，加入氟化铯(1.18g，7.74mmol)和Pd(dppf)Cl2(566mg，774μmol)并将混合物于85℃搅拌2小时。将混合物冷却至环境温度，用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土/硅胶过滤。用乙酸乙酯洗涤后，滤液用水稀释并分层，有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过正相色谱法纯化(5-100％的乙酸乙酯/己烷)，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.04g，2.44mmol，收率63％)。LCMS(ESI+):426.3(M+H+)
步骤2：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003301
向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.44g，3.38mmol)在甲醇(30mL)中的溶液中加入钯(10％/碳，487型，干，1.08g，1.02mmol)，混合物在氢气球气氛下于环境温度搅拌。24小时后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用二氯甲烷/甲醇(1:1)的混合物洗涤，并真空浓缩，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.42g，3.32mmol，收率98％)。LCMS(ESI+):372.3(M-叔丁基+H+)。
步骤3：1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003302
使用一般方法B进行叔丁氧基羰基保护基团脱保护，从4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯以定量收率获得1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐。LCMS(ESI+):328.1(M+H+)。
1-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-2,4-二酮盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003311
步骤-1：3-氰基-3-(4-碘-苯基氨基)-环丁烷甲酸甲酯的制备：
Figure BDA0003698737280003312
向3-氧代环丁烷甲酸甲酯(7g，54.6mmol)在甲醇(270mL)中的搅拌溶液中加入4-碘苯胺(13.2g，60.1mmol)，然后加入三甲基氰硅烷(10.8g，109mmol，13.7mL)。所得混合物于环境温度搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(5-10％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈灰白色固体的3-氰基-3-(4-碘苯胺基)环丁烷甲酸甲酯(15.2g，42.7mmol，收率78％)。LCMS ES+357(M+H+)
步骤-2：3-氨基甲酰基-3-(4-碘-苯基氨基)-环丁烷甲酸甲酯的制备：
Figure BDA0003698737280003313
于环境温度向3-氰基-3-(4-碘苯胺基)环丁烷甲酸甲酯(10g，28.1mmol)在甲苯(120mL)中的搅拌溶液中加入乙醛肟(4.98g，84.2mmol)，然后加入氯化铟(62.1mg，281μmol)。将所得混合物加热至回流1小时。完成后，将反应混合物冷却至环境温度，过滤由此形成的沉淀物，用甲苯:醚(1:1)洗涤并干燥，得到3-氨基甲酰基-3-(4-碘苯胺基)环丁烷甲酸甲酯(8.4g，22.5mmol，收率80％)。其不经进一步纯化即用于下一步中。LCMS(ESI+):375(M+H+)
步骤-3：1-(4-碘-苯基氨基)-3-氮杂-双环[3.1.1]庚烷-2,4-二酮的制备：
Figure BDA0003698737280003321
于0℃向3-[2-氨基-1-(4-碘苯胺基)-2-氧代-乙基]环丁烷甲酸甲酯(8g，20.6mmol)在THF(150mL)中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(4.62g，41.2mmol)，并将反应混合物于0℃搅拌1小时。用1M柠檬酸溶液中和反应混合物，调节至pH～6并用乙酸乙酯萃取。合并有机层并用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物质通过柱色谱法纯化(40％的乙酸乙酯/己烷)，得到5-(4-碘苯胺基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-2,4-二酮(2.9g，8.48mmol，收率41％)。LCMS(ESI+):343(M+H+)
步骤-4：4-[4-(2,4-二氧代-3-氮杂-双环[3.1.1]庚-1-基氨基)-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003322
向5-(4-碘苯胺基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-2,4-二酮(2.9g，8.48mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5.24g，17.0mmol)在DMF(32mL)和水(8mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(1.98g，18.7mmol)并用氩气对反应脱气。在惰性气氛下加入Pd(dppf)Cl2(692mg，848μmol)。所得混合物于80℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土短垫过滤。滤液用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(5-10％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[4-[(2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-5-基)氨基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.91g，4.81mmol，收率57％)。LCMS ES+398(M+H+)
步骤-5：4-[4-(2,4-二氧代-3-氮杂-双环[3.1.1]庚-1-基氨基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003698737280003323
向4-[4-[(2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-5-基)氨基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.91g，4.81mmol)在乙醇(20mL)中的经脱气的溶液中加入10％的Pd-C(50％湿态，1g)。所得混合物在环境温度和氢气球气氛下搅拌3小时。完成(通过LCMS确认)后，将反应混合物通过硅藻土短垫过滤，用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(60-70％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[4-[(2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-5-基)氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g，3.50mmol，收率73％)LCMS ES+400(M+H+)
步骤-6：5-(4-哌啶-4-基-苯基氨基)-3-氮杂-双环[3.1.1]庚烷-2,4-二酮盐酸盐的制备
Figure BDA0003698737280003331
于10℃向4-[4-[(2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-5-基)氨基]苯基]吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g，3.50mmol)中加入二噁烷HCl(4M，15mL，60mmol)。将所得混合物温热至环境温度并搅拌5小时。减压浓缩反应混合物，加醚研磨并冻干，得到呈灰白色固体的5-[4-(4-哌啶基)苯胺基]-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-2,4-二酮盐酸盐(1.08g，3.34mmol，收率95％)。LCMS ES+300(M+H+),1H-NMR(400MHz,DMSO-D6)10.72(s,1H),8.95(br s,1H),8.81-8.79(m,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),6.44(d,J＝8.16Hz,2H),3.32-3.29(m,2H),2.95-2.91(m,3H),2.73-2.62(m,3H),2.49(br m,2H),1.85-1.72(m,4H)。
3-[3-(二氟甲基)-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003332
Figure BDA0003698737280003341
步骤-1：1-溴-2-二氟甲基-4-硝基-苯的合成：
Figure BDA0003698737280003342
于0℃向2-溴-5-硝基-苯甲醛(7g，30.4mmol)在二氯甲烷(350mL)中的搅拌溶液中加入DAST(24.13mL，182.60mmol)并将所得反应混合物于环境温度搅拌16小时。完成后，将反应混合物用10％NaHCO3溶液碱化并用二氯甲烷萃取。合并有机萃取物，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(10％的乙酸乙酯/己烷)，得到1-溴-2-(二氟甲基)-4-硝基-苯(6g，23.8mmol，收率78％)。
步骤-2：4-溴-3-二氟甲基-苯胺的合成：
Figure BDA0003698737280003343
于环境温度向1-溴-2-(二氟甲基)-4-硝基-苯(6.0g，23.8mmol)在THF(70mL)和乙醇(70mL)中的搅拌溶液中加入氯化铵(12.7g，238mmol)和锌(15.6g，238mmol)。所得混合物于环境温度搅拌4小时。完成后，反应混合物通过硅藻土短垫过滤并用乙醇洗涤。减压浓缩滤液，残余物通过柱色谱法纯化(40％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-溴-3-(二氟甲基)苯胺(3.95g，17.8mmol，收率75％)。LC MS:ES+221(M+H+)。
步骤-3：4-(4-氨基-2-二氟甲基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0003698737280003344
向4-溴-3-(二氟甲基)苯胺(3.2g，14.4mmol)和4-甲基-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3.08g，15.9mmol)在THF(20mL)、甲醇(10mL)和水(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(3.06g，28.82mmol)，混合物用氩气彻底吹扫。在惰性气氛下加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(2.35g，2.88mmol)。所得混合物于80℃加热12小时。完成后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机部分，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(20％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[4-氨基-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(2.24g，6.91mmol，收率48％)。LC MS:ES+325(M+H+)。
步骤-4：4-[4-(2,6-双-苄氧基-吡啶-3-基氨基)-2-二氟甲基-苯基]-3,6-二氢-2H吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0003698737280003351
向4-[4-氨基-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.7g，5.24mmol)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(2.41g，5.77mmol)在叔丁醇(40mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(5.12g，15.72mmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(96mg，1.05mmol)、Ruphos(978mg，2.10mmol)。所得混合物于100℃加热18小时。完成后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。滤液用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(25％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.23g，2.00mmol，收率38％)。LC MS:ES+614(M+H+)。
步骤-5：4-[2-二氟甲基-4-(2,6-二氧代-哌啶-3-基氨基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003352
向4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(2g，3.26mmol)在乙酸乙酯(15mL)中的经脱气的溶液中加入10％的Pd-C(50％湿态，2g)。所得混合物在环境温度和氢气球气氛下搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土短垫过滤，用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(60％的乙酸乙酯/己烷)，得到呈淡蓝色固体的4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(880mg，1.99mmol，收率61％)。LC MS:ES+438(M+H+)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)10.77(s,1H),7.26-6.98(m,2H),6.81(s,1H),6.77(d,J＝8.8Hz,1H),6.03(d,J＝7.8Hz,1H),4.34(bs,1H),4.06-4.03(m,2H),2.90-2.70(m,4H),2.60-2.56(m,1H),2.09-2.06(m,1H),1.91-1.87(m,1H),1.61-1.59(m,2H),1.51-1.46(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤6：3-[3-(二氟甲基)-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003361
将4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(191mg，436.59μmol)溶解在甲醇(3mL)中并加入氯化氢溶液(4.0M，在二噁烷中，1.09mL)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使材料经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到呈致密灰白色固体的3-[3-(二氟甲基)-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(145mg，388μmol，收率89％)。LCMS(ESI+):Rt＝0.954min.，MS(ESI+):338.3(M+H+)。
5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(4-哌啶基)苯甲腈盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003362
Figure BDA0003698737280003371
步骤-1：4-(4-氨基-2-氰基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0003698737280003372
向5-氨基-2-溴-苯甲腈(5g，25.38mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(11.77g，38.06mmol)在DMF(60mL)中的搅拌溶液中加入氟化铯(7.71g，50.75mmol，1.87mL)并将反应混合物用氩气脱气。在惰性气氛下加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(4.14g，5.08mmol)。所得混合物于90℃加热16小时。完成后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机部分，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗物质通过柱色谱法纯化(20％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-(4-氨基-2-氰基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(4.3g，14.36mmol，收率56.60％)。LC MS:ES+300(M+H)。
步骤-2：4-[4-(2,6-双-苄氧基-吡啶-3-基氨基)-2-氰基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003373
向4-(4-氨基-2-氰基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3g，10.02mmol)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(4.60g，11.02mmol)在t-BuOH(50mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(9.80g，30.06mmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(458.83mg，501.06μmol)、RuPhos(467.62mg，1.00mmol)。所得混合物于100℃加热18小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机部分，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗物质通过柱色谱法纯化(25％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[2-氰基-4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3g，5.10mmol，收率50.85％)LC MS:ES+589(M+H)。
步骤-3：4-[2-氰基-4-(2,6-二氧代-哌啶-3-基氨基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003381
向4-[2-氰基-4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3g，5.10mmol)在乙酸乙酯(60mL)中的经脱气的溶液中加入10％的Pd-C(50％湿态，3g)。所得混合物在环境温度和氢气球压力下搅拌16小时。反应混合物通过硅藻土短垫过滤，用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩。粗物质通过硅胶柱色谱法纯化(60％的乙酸乙酯/己烷)，得到呈浅绿色固体的4-[2-氰基-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.1g，2.65mmol，收率52.07％)。LCMS:ES+413(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)10.81(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,1H),6.96(t,J＝8.7Hz,2H),6.26(d,J＝7.9Hz,1H),4.43-4.37(m,1H),4.09-4.06(m,2H),2.87-2.69(m,4H),2.60-2.55(m,1H),2.10-2.06(m,1H),1.92-1.87(m,1H),1.70-1.67(m,2H),1.57-1.46(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤-4：5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(4-哌啶基)苯甲腈盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003382
将4-[2-氰基-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg，290.92μmol)溶解在甲醇混合物(3mL)mL)中并加入在二噁烷中的4.0M氯化氢溶液(4M，727.31μL)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使材料经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到呈致密固体的5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(4-哌啶基)苯甲腈盐酸盐(107mg，277.51μmol，收率95％)。LCMS(ESI+):313.2(M+H)
3-[3-甲基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003391
步骤-1：4-(4-氨基-2-甲基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0003698737280003392
向4-溴-3-甲基-苯胺(5g，26.87mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(9.14g，29.56mmol)在THF(60mL)、水(12mL)和甲醇(24mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(6.27g，59.12mmol)并用氩气彻底吹扫。在惰性气氛下加入PdCl2(dppf).CH2Cl2(438.94mg，537.49μmol)。所得混合物于80℃加热12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机部分，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗物质通过柱色谱法纯化(15％的乙酸乙酯-己烷)，得到呈致密固体的4-(4-氨基-2-甲基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5g，17.34mmol，收率64.51％)。LC MS:ES+289(M+H)。
步骤-2：4-[4-(2,6-双-苄氧基-吡啶-3-基氨基)-2-甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0003698737280003401
向4-(4-氨基-2-甲基-苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5g，17.34mmol)和2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(7.96g，19.07mmol)在t-BuOH(80mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(16.95g，52.01mmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入Pd2(dba)3(793.83mg，866.90μmol)、RuPhos(809.04mg，1.73mmol)。所得混合物于100℃加热18小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机部分，用水、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗物质通过柱色谱法纯化(25％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3g，5.19mmol，收率29.95％)LCMS(ESI+):578(M+H+)。
步骤-3：4-[4-(2,6-二氧代-哌啶-3-基氨基)-2-甲基-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003402
向4-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2-甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3g，5.19mmol)在乙酸乙酯(60mL)中的经脱气的溶液中加入10％的Pd-C(50％湿态，3g)。所得混合物在环境温度和气球压力的氢气氛下搅拌16小时。完成后，将反应混合物通过硅藻土短垫过滤，用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化(60％的乙酸乙酯/己烷)，得到呈浅蓝色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1020mg，2.53mmol，收率48.78％)。LC MS:ES+402(M+H)。
步骤4：3-[3-甲基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003411
将4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(180mg，448.32μmol)溶解在甲醇(3mL)中并加入在二噁烷中的4.0M氯化氢溶液(4M，1.12mL)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使材料经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到呈致密固体的3-[3-甲基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(145mg，429.19μmol，收率95.73％)。LCMS(ESI+):302.3(M+H)。
4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶盐酸盐的合成
步骤1：3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003412
于0℃向3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5g，10.6mmol)在二氯甲烷(25mL)中的搅拌溶液中逐滴加入N,N-二乙基乙胺(3.23g，31.9mmol，4.44mL)，然后逐滴加入三氟甲基磺酸酐(4.50g，15.9mmol，2.68mL)。反应于环境温度搅拌16小时。然后，用NaHCO3水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(100％的己烷到4:1的己烷:乙酸乙酯)，得到3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g，2.29mmol，收率21％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.59(s,1H),4.29(q,J＝4.3Hz,2H),4.04(t,J＝11.0Hz,2H),1.51(s,9H)。
步骤2：1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280003413
向1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1.0g，3.09mmol)和双(频哪醇合)二硼(1.18g，4.64mmol)在二噁烷(15mL)中的溶液中加入乙酸钾(911mg，9.28mmol)和Pd(dppf)Cl2(113mg，155μmol)。将混合物于85℃在氮气氛下搅拌16小时。将混合物冷却至环境温度并通过硅胶垫过滤。滤饼用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法纯化(100％的己烷到100％的乙酸乙酯)，得到1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(1.1g，2.97mmol，收率96％)。LCMS(ESI+):371(M+H)。
步骤3：4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003421
向1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(677mg，1.83mmol)和3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(560mg，1.52mmol)在二噁烷(10mL)和水(2.5mL)中的溶液中加入碳酸钠(485mg，4.57mmol)并用N2气对溶剂鼓泡10分钟。加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(111mg，152μmol)并将反应混合物于55℃搅拌2小时。然后，冷却反应混合物并用水/乙酸乙酯稀释。萃取后，有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(100％的己烷到100％的乙酸乙酯)，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(480mg，1.04mmol，收率68％)。LCMS(ESI+):462.2(M+H)
步骤4：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003422
向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(478mg，1.04mmol)在甲醇(10.3mL)中的溶液中加入10％钯/碳(487型，干，331mg，311μmol)，混合物在氢气球气氛下于环境温度搅拌。24小时后，取走氢气球，混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，浆液再搅拌24小时。然后，将混合物通过硅藻土垫过滤，使用二氯甲烷/甲醇(3:1)的溶液洗涤，并浓缩，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(450mg，收率94％)。LCMS(ESI+):408.2(M–叔丁基+H)。
步骤5：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶盐酸盐
Figure BDA0003698737280003423
使用一般方法B进行叔丁氧基羰基基团的去除，从4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯以定量收率获得4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶盐酸盐。LCMS(ESI+):354.2(M+H)
3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)和3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)的合成
步骤1：4-(4-硝基苯基)-3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003431
将3-羟基-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(19.5g，60.5mmol)(CAS#1232788-17-8)溶解在二氯甲烷(200mL)中并冷却至0℃。分批加入Dess-Martin高碘烷(38.5g，90.7mmol)。在初始添加过程中，内部温度从0℃增至2.2℃。反应溶液在该温度下搅拌2小时并继续搅拌，同时温度逐渐升至环境温度。17小时后，由于一些溶剂蒸发，反应溶液变为浆液。加入二氯甲烷(100mL)，随后于16℃加入Dess-Martin高碘烷(8.3g，19.6mmol)并将反应搅拌17小时。将反应溶液冷却回4℃。小心加入饱和NaHCO3溶液(250mL)，然后加入溶解在175mL水中的硫代硫酸钠五水合物(13.8g，48.4mmol)。混合物用二氯甲烷(150mL)稀释。过滤除去所得沉淀，滤饼用二氯甲烷(75mL×3)洗涤。让滤液分层并用Na2SO4干燥有机层，过滤并浓缩，得到4-(4-硝基苯基)-3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(19.4g，60.5mmol，定量收率)。LCMS(ESI+):354.1(M+Na)/221.0(M-Boc+H)。
步骤2：3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003432
将4-(4-硝基苯基)-3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.78g，11.8mmol)溶解在二氯甲烷(40mL)中并将溶液冷却至0℃。通过注射器缓慢加入DAST(3.80g，23.6mmol，3.12mL)。将反应混合物缓慢升温至室温，同时搅拌过夜。将反应溶液冷却至-1.3℃并通过加料漏斗小心地加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)(放热)。在添加过程中，内部温度保持在18℃以下。反应混合物用乙酸乙酯(80mL)稀释并温热至环境温度。分离各层并用乙酸乙酯(80mL)洗涤水层。合并有机物，用18％的NaCl水溶液洗涤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(梯度：10-30％的乙酸乙酯/己烷，得到3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.50g，收率62％)LCMS(ESI+):280.2(M-叔丁基+H)/243.1(M-Boc+H)。
步骤3：手性分离以获得3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)和3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
Figure BDA0003698737280003441
在以下条件下，使外消旋的3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.49g)经受手性SFC分离：
柱子：ChiralPak IC-H 21x250mm
流动相：10％的2-丙醇/二氧化碳。
流速：70mL/min
检测：220nm UV
压力：100巴
减压蒸发第一组洗脱级分，得到3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(800mg，收率32％，Rt＝1.74min，对映异构体过量>99％)LCMS:280.2(M-tBu+H)/243.1(M-Boc+H)。
减压蒸发第二组洗脱级分，得到3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(800mg，收率32％，Rt＝2.31min，对映异构体过量99.6％)。LCMS 280.2(M-叔丁基+H)/243.1(M-Boc+H)。
使用以下分析SFC方法测定经纯化对映异构体的对映异构体过量。
柱子：ChiralPak IC-H 4.6x100mm
流动相：10％的异丙醇/二氧化碳。
流速：4mL/min
压力：100巴
3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐(异构体1)的合成
步骤1：4-(4-氨基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯，异构体1
Figure BDA0003698737280003442
将3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(0.8g，2.34mmol)溶解在乙醇(12mL)中并用氮气对溶液脱气。然后加入10％钯/碳E101 NE/W型(125mg，1.17mmol)。在用氮气再次脱气几次后，将反应混合物在氢气球气氛下搅拌16小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(12mL×3)洗涤并浓缩滤液，得到4-(4-氨基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(722mg，收率98％)。LCMS(ESI+):257(M-tBu+H)
步骤2：(4S)-4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯，异构体1
Figure BDA0003698737280003451
在小瓶中向4-(4-氨基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(520mg，1.66mmol)、3-溴哌啶-2,6-二酮(478mg，2.49mmol)和NaHCO3(418mg，4.98mmol)中加入乙腈(3.5mL)。将反应混合物加热至70℃保持45小时。加入3-溴哌啶-2,6-二酮(92mg，0.28当量)和NaHCO3(110mg，0.78当量)并继续再加热72小时，此时，将反应冷却至环境温度并缓慢加入水(18mL)。将混合物搅拌4小时，然后通过过滤收集沉淀物，用水(10mL×3)洗涤，然后用9:1的己烷:乙酸乙酯洗涤(5mL×3)。滤饼在真空下干燥，得到呈绿色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(577mg，收率78％)。LCMS(ESI+):446(M+Na)
步骤3：3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐，异构体1
Figure BDA0003698737280003452
将4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(300mg，709μmol)溶解在二氯甲烷(3.4mL)中，并在搅拌下加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，850μL，3.4mmol)。1小时后，浓缩反应混合物，以定量收率得到3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐(异构体1)。LCMS(ESI+):324(M+H)。
3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐(异构体2)的合成
步骤1：4-(4-氨基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)的合成
Figure BDA0003698737280003461
将3,3-二氟-4-(4-硝基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(800mg，2.34mmol)溶解在乙醇(12mL)中。抽空溶液并用氮气回填几次。然后加入10％钯/碳E101 NE/W型(124.35mg，1.17mmol)。在抽空并用氮气回填多次后，将反应混合物于环境温度进行氢化(H2气球)，持续16小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物。用乙酸乙酯(12mL×3)洗涤硅藻土饼。真空浓缩滤液并在真空下进一步干燥，静置后得到半固体(油状)；4-(4-氨基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(724mg，收率94％)。LCMS(ESI+):257.1(M-tBu+H)
步骤2：4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)的合成
Figure BDA0003698737280003462
向小瓶中加入4-(4-氨基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(721.54mg，2.31mmol)、3-溴哌啶-2,6-二酮(665.32mg，3.47mmol)和碳酸氢钠(582.19mg，6.93mmol，269.53μL)。加入乙腈(5mL)。将反应混合物温热至70℃(块温度)过夜。48小时后，加入另外的量的3-溴哌啶-2,6-二酮(129mg，0.28当量)、NaHCO3(129mg，0.66当量)。再过72小时后，冷却至环境温度。缓慢加入水(25mL)。于环境温度搅拌几小时。过滤反应混合物，收集固体。用水(12mL×3)、9:1的己烷:乙酸乙酯(5mL×2)洗涤，并真空干燥，得到呈绿色固体的4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(838mg，收率81.4％)。LCMS(ESI+):446.4(M+Na)
步骤3：3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐(异构体2)的合成
Figure BDA0003698737280003463
将4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(300mg，708.5μmol)溶解在二氯甲烷(3.4mL)中，并在搅拌下加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，850μL，3.4mmol)。1小时后，将反应混合物减压蒸发至干，以定量收率得到3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐(异构体2)。LCMS(ESI+):324.1(M+H)
2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸的合成
步骤1：2-[4-羟基-1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003471
于-78℃向乙酸叔丁酯(1.76g，15.1mmol，2.04mL)在干燥的THF(40ml)中的搅拌溶液中逐滴加入二异丙基酰胺锂(0.7M，在THF中，54mL，37.82mmol)，10分钟加完。反应混合物搅拌1小时。缓慢加入溶解在THF(20ml)中的1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-酮(4.36g，15.1mmol)。将反应于-78℃搅拌1小时。于-78℃用氯化铵水溶液淬灭反应，将混合物温热至环境温度并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤并浓缩，得到残余物，其无需进一步纯化即使用。LCMS(ESI-):m/z 403.1[M-H+]。
步骤2：2-[1-[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003472
将2-[4-羟基-1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2g，4.95mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫5分钟。向反应混合物中加入以干基计10％的Pd/C(1.05g，9.89mmol)。将反应混合物置于氢气氛(气球)下。将反应混合物搅拌4小时。通过用二氯甲烷:乙酸乙酯混合物(1:1，500mL)冲洗来经硅藻土床过滤反应混合物。减压浓缩滤液得到褐色固体，将其溶解在二氯甲烷(20mL)中并在减压下干法装填在二氧化硅上。使用乙酸乙酯:石油醚通过硅胶(230-400目)柱色谱法纯化化合物。合并纯级分并减压浓缩，得到纯红棕色固体2-[1-[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.1g，1.96mmol，收率40％)。LCMS(m/z:375.2(M+H+))。
步骤3：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003481
于室温向2-[1-[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.1g，2.94mmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(846.21mg，4.41mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(740.45mg，8.81mmol)，10分钟后将反应的温度升至60℃并继续反应约12小时。反应混合物用冰冷水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(2*100mL)萃取，用盐水(10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。用10％至100％的乙酸乙酯/石油醚洗脱剂梯度洗脱，使用硅胶色谱法纯化粗产物。合并纯级分并减压浓缩，得到呈褐绿色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(300mg，468.45μmol，收率16％)。LCMS(ESI+)m/z:486.2(M+H+)。
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸的合成
Figure BDA0003698737280003482
在氮气氛下于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(620mg，1.28mmol)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，0.32mL，6.39mmol)，将其于室温搅拌6小时。真空蒸馏反应混合物并加乙醚研磨，倾析乙醚，然后干燥，得到呈绿色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(345mg，661μmol，收率52％)。LCMS(m/z:430.1(M+H))
用2-溴乙酸叔丁酯烷基化中间体的一般程序C：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003483
将3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(1g，3.09mmol)溶解在N,N-二甲基乙酰胺(15mL)中并加入N,N-二异丙基乙胺(1.60g，12.4mmol，2.15mL)。将混合物冷却至0℃，并加入2-溴乙酸叔丁酯(663mg，3.40mmol，498μL)。将混合物于0℃搅拌4小时。反应用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。浓缩有机层并通过硅胶色谱法纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈白色固体的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.84g，2.09mmol，收率68％)。LCMS(ESI+):402.2(M+H+)
使用一般程序C合成以下化合物，如针对从3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐合成2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯所用。
Figure BDA0003698737280003491
Figure BDA0003698737280003501
Figure BDA0003698737280003511
Figure BDA0003698737280003521
中间体的叔丁酯裂解的一般程序D：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280003522
将2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯溶解在二氯甲烷(5mL)中并加入TFA(1.61mL，20.9mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。将物质冷冻至-78℃，经受高真空，并解冻，得到致密固体。将固体重新溶解在甲醇:二氯甲烷(1:4)中，逐滴加入MTBE，直至形成沉淀。对悬浮液进行超声处理，并抽滤固体。过滤收集绿色固体，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(0.95g，2.07mmol，收率97％)。LCMS(ESI+):346.4(M+H+)
使用针对2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐合成的一般程序D从适当的起始材料合成以下中间体。
Figure BDA0003698737280003523
Figure BDA0003698737280003531
Figure BDA0003698737280003541
Figure BDA0003698737280003551
使用以下SFC方法，测得中间体(S)-2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸的对映异构体过量>99.9％ee(Rt＝2.11分钟)：
柱子：Lux A1
洗脱剂：含0.5％异丙胺的50％异丙醇CO2溶液(等度)
压力：100巴
温度：35℃
运行时间：7分钟
使用以下SFC方法，测得中间体(R)-2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸的对映异构体过量为98％ee(Rt＝3.93分钟)：
柱子：Lux A1
洗脱剂：含0.5％异丙胺的50％异丙醇CO2溶液(等度)
压力：100巴
温度：35℃
运行时间：7分钟
一般程序E：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐的合成
Figure BDA0003698737280003552
将2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(228mg，568μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入4M的盐酸/1,4-二噁烷(8mmol，2mL)。所得混合物于室温搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，残余物加乙醚研磨，然后过滤，得到呈灰色固体的2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(210mg，428μmol)。LCMS m/z:345(M+H+)。
使用针对2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐合成的一般程序E从适当的起始材料合成以下中间体。
Figure BDA0003698737280003561
中间体的合成：2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐
Figure BDA0003698737280003571
步骤1：(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在氩气氛下，向氯化镁(31.0g，325mmol)在THF(1400mL)中的搅拌溶液中加入丙二酸乙酯钾(85.8g，504mmol)并将反应混合物于50℃加热6小时。在单独的烧瓶中，将(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-甲酸(70.0g，325mmol)溶解在THF(1400mL)中，冷却至0℃并分批加入羰基二咪唑(81.7g，504mmol)，20分钟加完。将反应混合物温热至室温并再搅拌2小时。将加热的反应混合物冷却至室温，逐滴加入活化酯溶液，20分钟加完，并将反应混合物搅拌20小时。反应完成后，减压蒸馏除去溶剂，得到稠厚的白色半固体。将该残余物溶解在半饱和硫酸氢钾溶液中并用乙酸乙酯萃取两次。合并有机层，用饱和NaHCO3溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗制浅棕色透明油。通过硅胶色谱法纯化该油(10％的乙酸乙酯:石油醚)，得到呈无色透明油的(S)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(76g，213mmol，收率66％)。LCMS:(ESI-)(m/z:284.0[M-1])。
步骤2：3-氧代-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸乙酯盐酸盐
在2L RBF中将(2S)-2-(3-乙氧基-3-氧代-丙酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(67.4g，236mmol)溶解在乙酸乙酯(70mL)中。加入氯化氢(4M，在二噁烷中，207mL)。反应于室温搅拌过夜，然后浓缩。将残余油与MTBE(200mL)一起搅拌过夜。倾析出MTBE上清液，弃去MTBE上清液，将残余物减压浓缩，得到呈棕色油的3-氧代-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸乙酯盐酸盐(52.4g，228mmol，97％)。LCMS(m/z:186.1[M+H+])
步骤3：2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
向3-氧代-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸乙酯盐酸盐(50.6g，228.26mmol)在乙醇(250mL)中的溶液中加入硫氰酸钾(23.3g，240mmol，12.3mL)。将该非均相混合物于80℃搅拌2小时，然后冷却并浓缩。将残余物溶解在乙酸乙酯(500mL)和水(500mL)中。向混合物中加入饱和NaHCO3水溶液(500mL)并用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。合并有机层，浓缩，然后与500mL MTBE混合并于室温搅拌过夜。通过过滤收集形成的沉淀，得到呈黄色固体的2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(47.1g，208mmol，收率91％)。LCMS(m/z:227.1[M+H])
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-乙酸乙酯
向3-颈2L RBF中装入活性催化剂Raney
Figure BDA0003698737280003581
2800在H2O中的浆液(51.00g，595.27mmol)并用EtOH(100mL)冲洗。弃去乙醇层。加入2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(51g，225.37mmol)在EtOH(400mL)中的浆液。将混合物于80℃回流2小时。冷却反应混合物，通过硅藻土垫过滤并用EtOH洗涤。浓缩滤液，得到呈棕色油的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-乙酸乙酯(45.6g，235mmol，定量收率)。LCMS(ESI+):m/z:194.9[M+1]
步骤5：(2Z)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(20g，102.97mmol)在乙醇(100mL)中的溶液中逐滴加入21％w/w的乙醇钠/乙醇(21.02g，308.91mmol，24.22mL)。将反应混合物搅拌30分钟。将反应混合物冷却至0℃，随后在该温度下逐滴加入亚硝酸异戊酯(41mL，309mmol)，3小时后，向反应混合物中加入另外的亚硝酸异戊酯(27mL，206mmol)。让反应混合物缓慢达到室温并在氮气氛下搅拌。用乙醇(80mL)稀释反应混合物。通过于0℃逐滴加入4M的盐酸/甲醇来中和反应混合物，直至使用pH试纸测定获得为6的pH。混合物变成浅黄色悬浮液。抽滤固体，用乙醇洗涤(两次)，并减压浓缩滤液。将粗物质用水稀释并用二氯甲烷萃取两次，合并有机层，浓缩，得到呈棕色胶的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯(17.2g，67.16mmol，收率65.22％)，其不经进一步纯化即用于下一步中。LCMS(ESI+)m/z 224.0(M+H)。
步骤6：2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯盐酸盐和2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐
在氮气下在具有机械搅拌的2L 3-颈RBF中将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯(30.40g，136.18mmol)溶解在AcOH(300mL)中。加入锌(26.72g，408.55mmol，3.74mL)。反应混合物于50℃加热过夜。通过硅藻土过滤反应混合物并用另外的AcOH洗涤。减压除去溶剂，得到棕色粗残余物。在单独的反应容器中，在3-颈500mL RBF中将乙醇(125mL)冷却至0℃。逐滴加入乙酰氯(28.14g，358.43mmol，21.81mL)，同时保持内部温度低于10℃。将溶液搅拌15分钟。将粗残余物加入该溶液中。反应于室温搅拌16小时。混合物于50℃加热24小时。减压浓缩反应混合物。将粗品溶解在150mL乙腈中并加入150mL H2O。形成白色沉淀并过滤混合物。滤饼得到呈白色固体的2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯盐酸盐(2.77g，11.3mmol，收率8.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,3H),7.65(s,1H),5.16(s,1H),4.57–4.10(m,2H),4.01(t,J＝7.3Hz,2H),2.75(h,J＝8.4Hz,2H),2.55(q,J＝7.1Hz,2H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H).LCMS(ESI+):m/z 210.1[M+H]。浓缩母液并与IPA(3×)共沸，得到所需产物的2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐形式(32.7g，116.4mmol，收率86％)，呈棕色固体。LCMS(ESI+):m/z 210.1[M+H].1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,4H),8.56(s,1H),5.46(s,1H),4.45–4.05(m,5H),3.06–2.69(m,3H),2.58(q,J＝7.3Hz,2H),1.23(t,J＝7.1Hz,4H)。
中间体的合成：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280003591
将2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐(4.02g，12.62mmol)溶解在DMF(36mL)中。加入2-(溴甲基)-3-氟-5-碘-苯甲酸甲酯(3.81g，10.22mmol)，然后加入N-乙基-N-异丙基-丙烷-2-胺(6.52g，50.47mmol，8.79mL)。反应混合物于室温搅拌16小时。反应混合物于45℃搅拌。用乙酸乙酯稀释反应混合物并用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层并浓缩，得到棕色油，其通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈黄色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(2.03g，4.33mmol，收率34.29％)。LCMS(ESI+):470.2(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04–7.82(m,2H),7.56(s,1H),5.85(s,1H),4.60(d,J＝18.0Hz,1H),4.31–4.06(m,3H),3.98(q,J＝6.9Hz,2H),2.92–2.71(m,1H),2.69–2.53(m,3H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体的合成：2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280003592
将2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐(6.2g，21.97mmol)溶解在DMF(55mL)中。加入5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯(5.73g，17.58mmol)，然后加入N-乙基-N-异丙基-丙烷-2-胺(11.36g，87.89mmol，15.31mL)。反应混合物于室温搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水(2×)洗涤。干燥有机层并浓缩，得到棕色油，其通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈黄色固体的2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(3.2g，7.58mmol，收率34.49％)。LCMS(ESI+):422.0/424.0(M+H,Br模式)
实施例1.
5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺(化合物1)的合成
步骤1：4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003601
将4-(4-氨基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 170011-57-1)(798mg，2.89mmol)溶解在10ml乙腈中。加入碳酸氢钠(485mg，5.77mmol，2当量)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(CAS62595-74-8)(610mg，3.18mmol，1.1当量)。反应混合物于90℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，吸附在
Figure BDA0003698737280003603
上并通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷30:70至100:0梯度洗脱。获得呈灰白色固体的所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg，收率76％)，MS:m/e＝359.4(([M-tBu+H]+)。
步骤2：(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003602
在冰浴中于0-5℃将4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg，2.19mmol)和HCl(4M，在二噁烷中)(5.48ml，21.9mmol，10当量)与10ml甲醇合并。反应混合物于室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩至干并无需进一步纯化即使用。得到呈灰白色固体的所需(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(818mg，定量，纯度＝87％)，MS:m/e＝286.1([M+H]+)。
步骤3：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003611
将(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(200mg，0.618mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(CAS 5292-43-3)(157mg，0.119ml，0.803mmol，1.3当量)和Hunig’s碱(399mg，0.539ml，3.09mmol，5当量)在4.0ml N,N-二甲基甲酰胺中的混合物于室温搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯和水萃取。水层用乙酸乙酯反萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷50:50至100:0梯度洗脱。获得呈白色固体的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(164mg，收率66％)，MS:m/e＝402.2([M+H]+)。
步骤4：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280003612
将2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(164mg，0.408mmol)与3.0ml二氯甲烷合并。于0-5℃加入三氟乙酸(1.48g，1ml，13mmol，31.8当量)。反应混合物于室温搅拌6小时。真空浓缩反应混合物，在高真空下干燥并无需进一步纯化即使用。得到呈淡蓝色泡沫的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(定量收率)，MS:m/e＝346.2([M+H]+)。
中间体：4-[[5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280003621
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(250mg，477.72μmol)和4-[(5-乙炔基吡啶-2-羰基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(188.83mg，573.26μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(370.45mg，2.87mmol，499.26μL)并将混合物用氮气脱气15分钟。加入双(三苯基膦)氯化钯(II)(16.77mg，23.89μmol)、碘化铜(I)(4.55mg，23.89μmol)、三苯基膦(12.53mg，47.77μmol)。反应混合物用氮气进一步脱气5分钟并在微波辐射下于80℃加热2小时。向反应混合物中加入水并用10％的甲醇/二氯甲烷(3×50ml)萃取反应混合物。有机层用盐水(20ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗品通过快速柱色谱法用0至3％的甲醇/乙酸乙酯纯化，得到呈淡黄色固体的4-[[5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(280mg，376.86μmol，收率78.89％)。LCMS(ESI+):725.3[M+H+]。
中间体的合成：5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003698737280003631
将4-[[5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(360mg，0.497mmol)溶解在3.0ml二氯甲烷和1.5ml甲醇中。于室温加入HCl(4M，在二噁烷中)(1.24ml，4.97mmol，10当量)，并将反应混合物于室温搅拌6小时。用饱和NaHCO3溶液萃取反应混合物并用二氯甲烷:甲醇(9:1)的混合物萃取三次。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。该粗产物不经进一步纯化即使用。得到呈淡棕色固体的所需5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺(300mg，收率97％)，MS:m/e＝625.4([M+H]+)。
5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺的合成
Figure BDA0003698737280003632
将2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(61.3mg，0.080mmol，1当量)和5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺(50mg，0.080mmol)溶解在1.0ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入Hunig’s碱(155mg，0.210ml，1.2mmol，15当量)，然后加入TBTU(30.8mg，0.096mmol，1.2当量)。反应混合物于室温搅拌2小时。用饱和NaHCO3溶液萃取反应混合物并用二氯甲烷:甲醇(9:1)的混合物萃取三次。用水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度洗脱，得到呈灰白色固体的所需化合物1(28mg，收率37％)，MS:m/e＝952.6([M+H]+)。
实施例2.
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺，化合物2
Figure BDA0003698737280003641
将5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(40mg，60.50μmol)和2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酸(19.04mg，72.60μmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向该反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(48.13mg，151.25μmol)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(46.92mg，363.01μmol，63.23μL)。反应混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水(2ml)中，并用乙酸乙酯(2*10ml)萃取。有机层用盐水溶液(10ml)洗涤，用Na2SO4干燥并减压浓缩。粗品通过制备HPLC纯化(0-100％的0.1％NH4OAc/水和乙腈)，得到呈灰白色固体的化合物2(20mg，22.76μmol，收率37.62％)。LCMS m/z 869.2(M+H)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.55(s,1H),10.79(s,1H),8.86(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H),8.76(d,J＝8.4Hz,1H),8.21(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),8.09(t,J＝8.4Hz,1H),7.84-7.79(m,2H),7.61(s,1H),7.48(s,1H),7.26(bs,1H),6.97(d,J＝8.40Hz,2H),6.64(d,J＝8.80Hz,2H),6.13(s,1H),5.75(d,J＝7.60Hz,1H),4.89(d,J＝16.8Hz,1H),4.45-4.35(m,1H),4.31-4.26(m,2H),4.05-3.98(m,4H),3.56-3.55(m,2H),3.15-3.08(m,1H),2.78-2.71(m,2H),2.68-2.60(m,2H),2.57-2.55(m,3H),2.11-2.10(m,1H),1.91-1.90(m,1H),1.78-1.75(m,2H),1.53-1.45(m,2H)。
实施例3.
5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺(化合物3)的合成
步骤1：4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003651
将4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(CAS 158985-25-2)(500mg，1.8mmol)溶解在8.0ml N,N-二甲基甲酰胺中并冷却至0-5℃。分批加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体)(180mg，4.49mmol，2.5当量)。反应混合物于0-5℃搅拌30分钟。加入3-溴哌啶-2,6-二酮(CAS 62595-74-8)(517mg，2.69mmol，1.5当量)并将反应混合物于0-5℃搅拌1小时。通过加入碎冰淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。有机层用水和盐水洗涤。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干，得到呈白色固体的所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(634mg，收率91％)，MS:m/e＝390.1([M+H]+)。
步骤2：(3RS)-3-(4-哌嗪-1-基苯氧基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280003652
将4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(634mg，1.63mmol)溶解在5.0ml二氯甲烷和2.5ml甲醇中。加入HCl(4M，在二噁烷中)(4.07ml，16.3mmol，10当量)，并将反应混合物于室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩至干并无需进一步纯化即使用。得到呈灰白色固体的所需(3RS)-3-(4-哌嗪-1-基苯氧基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(720mg，收率88％，纯度＝65％)，MS:m/e＝290.2([M+H]+)。
步骤3：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003661
使用类似于实施例1步骤3中描述的化学方法从(3RS)-3-(4-哌嗪-1-基苯氧基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐和2-溴乙酸叔丁酯(CAS 5292-43-3)开始获得呈无色固体的标题化合物，MS:m/e＝404.3([M+H]+)。
步骤4：5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺
Figure BDA0003698737280003662
将2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(48.4mg，0.120mmol，1.5当量)溶解在1.0ml二氯甲烷中并加入三氟乙酸(183mg，0.123ml，1.6mmol，20当量)。反应混合物于室温搅拌2小时。加入三氟乙酸(183mg，0.123ml，1.6mmol，20当量)并将反应混合物于室温搅拌16小时。将反应混合物浓缩至干。将残余物和5-[2-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺(实施例1，步骤5)(50mg，0.080mmol)溶解在1.0ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入Hunig’s碱(155mg，0.210ml，1.2mmol，15当量)，然后加入TBTU(30.8mg，0.096mmol，1.2当量)。反应混合物于室温搅拌2小时。用饱和NaHCO3溶液萃取反应混合物并用二氯甲烷:甲醇(9:1)的混合物萃取三次。用水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度洗脱，得到呈灰白色固体的所需化合物3(31mg，收率41％)，MS:m/e＝954.7([M+H]+)。
实施例4.
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺，化合物4
Figure BDA0003698737280003671
将5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(120mg，181.50μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(87.09mg，217.80μmol)混合在DMF(2mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(140.75mg，1.09mmol，189.69μL)。于0℃向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(144.38mg，453.76μmol)。反应混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水(5ml)中，沉淀出固体化合物。过滤固体化合物并干燥。粗固体通过制备HPLC纯化(柱子：X-Bridge C8(50x4.6mm,3.5μm)(流动相A：10mM的乙酸铵/milli-q水，流动相B：乙腈，流速：1.0ml/min)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物4(55mg，55.68μmol，收率31％)。LCMS(ESI+):970.2[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.55(s,1H),10.79(s,1H),8.88-8.83(m,2H),8.23-8.21(m,1H),8.12-8.10(m,1H),7.82-7.79(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.20Hz,1H),7.26-7.25(m,1H),7.02-6.97(m,1H),6.97-6.42(m,2H),6.13(s,1H),6.01(d,J＝7.60Hz,1H),4.85-4.99(m,1H),4.46-4.28(m,3H),4.26-4.01(m,2H),3.99-3.98(m,2H),3.33-3.27(m,1H),3.05-3.02(m,2H),2.93-2.91(m,2H),2.77-2.71(m,2H),2.68-2.67(m,2H),2.59-2.53(m,2H),2.53-2.51(m,4H),2.10-2.07(m,3H),1.91-1.85(m,3H),1.71-1.59(m,4H)。
实施例5.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物5
Figure BDA0003698737280003681
Figure BDA0003698737280003691
步骤1：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在100-mL圆底烧瓶中，将2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.25g，5.33mmol)和4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.79g，7.19mmol)溶解在二噁烷(36mL)中并加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(217.58mg，266.43μmol)和tBuXPhos(336.37mg，532.86μmol)，然后加入溶解在水(9mL)中的碳酸钠(1.24g，11.72mmol，491.11μL)。混合物用氮气脱气。用配备有氮气入口的隔膜盖住反应并在加热块上于80℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，混合物用乙酸乙酯稀释，将有机层与水层以及固体沉淀物分离。减压浓缩混合物。粗残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(40g柱子，0-10％的甲醇/乙酸乙酯)，得到呈浅橙色泡沫的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.70g，4.25mmol，收率79.74％)。LCMS(ESI+):604.8(M+H)/504.7(M-Boc+H)
步骤2：2-(6-(4-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂
将4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2700mg，4.47mmol)溶解在乙醇(20mL)中。在0℃加入氢氧化锂(1M水溶液，4.47mL)。将反应混合物温热并于20℃搅拌4小时。真空浓缩反应混合物，悬浮在苯中，蒸发，然后经受高真空，得到呈淡棕色固体的[2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(2.51g，4.32mmol，收率96.50％)。LCMS(ESI+):576.7(M+H)/476.6(M-Boc+H)
步骤3：4-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将[2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(410mg，705.00μmol)和噻唑-2-胺(75.54mg，754.35μmol)混合在DMF中；将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(455.58mg，3.52mmol，613.99μL)，并加入HATU(321.67mg，846.00μmol)，将反应混合物搅拌4小时。加入饱和NaHCO3溶液，并用乙酸乙酯萃取混合物两次。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗物质通过快速色谱法在硅胶上纯化(24g，0-10％的甲醇/二氯甲烷)。合并含有产物的级分并浓缩，得到呈橙色粘性油的4-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(195mg，297μmol，收率66.3％)。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
将4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(350mg，532.11μmol)溶解在甲醇中并加入氯化氢溶液(4.0M，在二噁烷中，1mL，4mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使该物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻得到致密的琥珀色固体以得到呈黄色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(316mg，478.71μmol，收率89.96％)。LCMS(ESI+):558.3(M+H)/279.9(M+2H/2)
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，168.32μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(81.20mg，176.74μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(108.77mg，841.61μmol，146.59μL)，并加入HATU(76.80mg，201.99μmol)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到C18柱子(50gC18)上进行低压液相色谱纯化(5％至100％的ACN(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用饱和碳酸氢钠水溶液(大约60mL)中和纯级分，并用异丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取两次。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入1mL水+1mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液于-78℃冷冻并冻干，得到化合物5(45mg，49.83μmol，收率29.60％)。LCMS(ESI+):885.9(M+H),LCMS(ESI-):883.5(M-H)。
实施例6
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物6
Figure BDA0003698737280003711
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，168.32μmol)和2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(81.20mg，176.74μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(108.77mg，841.61μmol，146.59μL)，并加入HATU(76.80mg，201.99μmol)，将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用异丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。所需产物较晚出来。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。将该化合物悬浮在乙腈:水混合物中，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液于-78℃冷冻并冻干，得到化合物6(44mg，49.47μmol，收率29.39％)LCMS：Rt＝1.155分钟，MS(ESI+):885.6(M+H),MS(ESI-):883.5(M-H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),10.75(s,1H),7.78(d,J＝1.3Hz,1H),7.74(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.69(d,J＝8.9Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.5Hz,1H),7.08(d,J＝9.0Hz,2H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.60(d,J＝8.5Hz,2H),6.15(s,1H),5.63(d,J＝7.5Hz,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.37–4.09(m,2H),4.09–3.86(m,2H),3.76(s,2H),3.62(s,2H),3.25(d,J＝37.3Hz,5H),2.92(d,J＝10.7Hz,2H),2.83–2.62(m,2H),2.62–2.51(m,2H),2.47(d,J＝6.0Hz,1H),2.39–2.23(m,2H),2.10(d,J＝6.7Hz,2H),1.85(qd,J＝12.6,5.1Hz,1H),1.70(d,J＝12.3Hz,2H),1.57(q,J＝11.9Hz,2H)。发现47个质子/预期49个(溶剂、水遮蔽)
实施例7
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-(2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物7
Figure BDA0003698737280003721
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，168.32μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(81.20mg，176.74μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(108.77mg，841.61μmol，146.59μL)，并加入HATU(76.80mg，201.99μmol)，将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。所需产物较晚出来。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。将该化合物悬浮在乙腈:水混合物中，对该混合物彻底超声处理并涡旋。将悬浮液于-78℃冷冻并冻干，得到化合物7(22.8mg，25.50μmol，收率15.15％)。LCMS(ESI+):885.9(M+H)/443.8(M+2H/2),MS(ESI-):883.5(M-H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),10.75(s,1H),7.78(d,J＝1.3Hz,1H),7.74(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.71–7.63(m,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,2H),7.01–6.82(m,2H),6.72–6.49(m,2H),6.15(s,1H),5.63(d,J＝7.4Hz,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.37–4.15(m,2H),4.05–3.88(m,2H),3.76(s,2H),3.62(s,2H),3.25(d,J＝37.1Hz,4H),2.92(d,J＝10.7Hz,2H),2.82–2.65(m,2H),2.56(dq,J＝17.5,4.2Hz,1H),2.47–2.39(m,1H),2.39–2.22(m,1H),2.08(d,J＝7.4Hz,3H),1.98–1.75(m,1H),1.70(d,J＝12.1Hz,2H),1.57(q,J＝12.1Hz,2H)。
实施例8
(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[4-[4-氧代-4-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]丁基]哌嗪-1-基]苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物8
步骤1：4-[4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-基]丁酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003731
将(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(实施例5，步骤9)(60mg，0.108mmol)和Hunig’s碱(69.5mg，0.094ml，0.538mmol，5当量)溶解在1.0ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入4-溴丁酸叔丁酯(CAS 110661-91-1)(38.4mg，0.028ml，0.172mmol，1.6当量)并将反应混合物于60℃搅拌20小时。反应混合物用饱和NaHCO3溶液萃取并用乙酸乙酯萃取两次。用水和盐水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度洗脱，得到呈淡黄色油的所需4-[4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-基]丁酸叔丁酯(30mg，收率40％)，MS:m/e＝700.6([M+H]+)。
步骤2：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[4-[4-氧代-4-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]丁基]哌嗪-1-基]苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280003741
使用类似于实施例4步骤4中描述的化学方法从4-[4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-基]丁酸叔丁酯(实施例6，步骤1)和(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(实施例1，步骤2)开始获得呈灰白色固体的标题化合物化合物8，MS:m/e＝913.7([M+H]+)。
实施例9
(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物9
步骤1：2-[4-(4-硝基苯基)亚环己基]乙酸甲酯
Figure BDA0003698737280003742
将4-(4-硝基苯基)环己烷-1-酮(CAS 124500-60-3)(2.00g，9.12mmol)悬浮在15ml THF中并冷却至0-5℃。分四批加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体)(365mg，9.12mmol，1当量)并将反应混合物于室温搅拌2.5小时(悬浮液A)。在第二个烧瓶中，将氢化钠(在矿物油中的60％分散体)(620mg，15.5mmol，1.7当量)悬浮在10ml THF中并冷却至0-5℃。于0-5℃加入溶解在15ml THF中的膦酰基乙酸三甲酯(1.99g，10.9mmol，1.2当量)并将反应混合物于室温搅拌5小时(悬浮液B)。将悬浮液A(与20ml THF一起)逐滴加到悬浮液B中并将反应混合物于室温搅拌1.5小时。用水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。水层用乙酸乙酯反萃取。用盐水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并在
Figure BDA0003698737280003754
上浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷0:100至20:80梯度洗脱，得到呈白色固体的所需2-[4-(4-硝基苯基)亚环己基]乙酸甲酯(1.822g，收率73％)，MS:m/e＝276.2([M+H]+)。
步骤2：2-[4-(4-氨基苯基)环己基]乙酸甲酯
Figure BDA0003698737280003751
将2-(4-(4-硝基苯基)亚环己基)乙酸甲酯(实施例8，步骤1)(900mg，3.27mmol)溶解在10ml乙酸乙酯中。将烧瓶交替抽空和用氩气回填，重复两次。加入钯/碳(10％Pd)(80mg，0.08mmol，0.023当量，10％)。将烧瓶抽空，用氩气冲洗，抽空并用氢气冲洗。反应混合物在氢气氛(气球)下于室温搅拌4小时。过滤反应混合物并将滤液浓缩至干。得到呈淡红色固体的所需2-[4-(4-氨基苯基)环己基]乙酸甲酯(741mg，收率92％)，MS:m/e＝248.3([M+H]+)。
步骤3：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酸甲酯
Figure BDA0003698737280003752
将2-[4-(4-氨基苯基)环己基]乙酸甲酯(实施例8，步骤2)(370mg，1.5mmol)溶解在6.2ml乙腈中。加入碳酸氢钠(503mg，5.98mmol，4当量)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(CAS62595-74-8)(316mg，1.65mmol，1.1当量)。反应混合物于85℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，吸附在
Figure BDA0003698737280003755
上并通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷0:100至50:50梯度洗脱。得到呈淡蓝色固体的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酸甲酯(355mg，收率66％)，MS:m/e＝359.4([M+H]+)。
步骤4：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酸
Figure BDA0003698737280003753
将2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酸甲酯(实施例8，步骤3)(352mg，0.98mmol)溶解在磷酸(5.71g，3.4ml，49.5mmol，50.5当量)中并将反应混合物于90℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至0-5℃并加入10ml水。将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物小心地加到冷的饱和NaHCO3溶液(15ml)中。然后，于0-5℃逐滴加入饱和Na2CO3溶液(5ml)。用乙酸乙酯萃取反应混合物。水层用乙酸乙酯反萃取。有机层用水和盐水洗涤。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并在
Figure BDA0003698737280003763
上浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷0:100至65:35梯度洗脱，得到呈淡蓝色固体的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酸(151mg，收率40％，纯度＝90％)，MS:m/e＝345.3([M+H]+)。
步骤5：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280003761
使用类似于实施例1步骤5中描述的化学方法从(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(实施例5，步骤3)和2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]环己基]乙酸(实施例8，步骤4)开始获得呈白色泡沫的标题化合物化合物9，MS:m/e＝884.7([M+H]+)。
实施例10.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物10
步骤1：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280003762
向溶解在200ml 1,4-二噁烷中的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(CAS 869113-97-3)(20.0g，102.97mmol)的溶液中加入二氧化硒(22.85g，205.94mmol，2当量)。将反应混合物于80℃搅拌5小时。真空浓缩反应混合物，得到残余物。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用石油醚:乙酸乙酯2:1至乙酸乙酯:乙醇10:1梯度洗脱，得到呈淡棕色油的所需2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-乙酸乙酯(定量收率)，MS:m/e＝209.1([M+H]+)。
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280003771
于室温向溶解在145ml乙醇中的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-乙酸乙酯(17.5g，84.05mmol)的溶液中加入羟胺盐酸盐(6.42g，92.45mmol，1.1当量)和乙酸钠(13.79g，168.1mmol，2当量)。反应混合物于80℃搅拌3.5小时。浓缩反应混合物，用水萃取，并用乙醇/THF/乙酸乙酯1:1:8的混合物萃取五次。将有机层浓缩至干。得到呈黄色固体的所需2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯(15g，收率80％)，MS:m/e＝224.1([M+H]+)，并直接用于下一步中。
步骤3：(2RS)-2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280003772
于室温向溶解在225ml乙醇和120ml THF中的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯(15.0g，67.2mmol)的溶液中加入Pd/C(30.0g，67.2mmol，1当量，10％)。混合物于45℃用H2氢化24小时。过滤反应混合物并真空浓缩滤液。得到呈棕色油的所需(2RS)-2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(定量收率)，MS:m/e＝210.1([M+H]+)，并直接用于下一步中。
步骤4：(2RS)-2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯盐酸盐
Figure BDA0003698737280003773
将(2RS)-2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(15.0g，82.79mmol)在HCl/EtOH(300ml，1200mmol，14.5当量，2.5mol/L)中的溶液于25℃搅拌36小时。在低于25℃下真空浓缩反应混合物，得到呈棕色油的残余物。向该残余物中加入150ml乙腈，收集沉淀的黄色固体，并在低于25℃下真空干燥，得到呈黄色固体的所需(2RS)-2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯盐酸盐(定量收率)，MS:m/e＝210.1([M+H]+)。
步骤5：5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯
Figure BDA0003698737280003781
将5-溴-3-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(CAS 2090424-20-5)(5.91g，23.9mmol)溶解在100ml三氟甲苯中并于室温加入N-溴琥珀酰亚胺(4.26g，23.9mmol，1当量)和AIBN(393mg，2.39mmol，0.1当量)。混合物于110℃搅拌3小时。冷却反应混合物，用水萃取并用乙酸乙酯萃取两次。用硫酸钠干燥有机层并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷0:100至50:50梯度洗脱，得到呈淡黄色液体的所需5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯(7.29g，收率94％)，MS:m/e＝326.8([M+H]+)。
步骤6：(2RS)-2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280003782
将(2RS)-2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯盐酸盐(4.15g，16.9mmol，1当量)溶解在35mL N,N-二甲基甲酰胺中。于室温加入5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯(5.0g，15.3mmol)和三乙胺(10.7ml，76.7mmol，5当量)。混合物于80℃搅拌16小时。反应混合物用水萃取并用乙酸乙酯萃取两次。用盐水萃取有机层，用硫酸钠干燥并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度洗脱，得到呈黄色固体的所需(2RS)-2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.6g，收率40％)，MS:m/e＝422.1/424.1([M+H]+)。
步骤7：4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003783
将(2RS)-2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(56mg，0.133mmol)和(4-(4-(叔-丁氧基羰基)哌嗪-1-基)苯基)硼酸(CAS 457613-78-4)(41mg，0.133mmol，1.0当量)溶解在1.0ml 1,2-二甲氧基乙烷和2MNa2CO3水溶液(0.199ml，0.398mmol，3.0当量)中。加入四(三苯基膦)钯(0)(15mg，0.0133mmol，0.1当量)并将反应混合物于80℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温并然后用乙酸乙酯和饱和NaHCO3溶液萃取。水层用乙酸乙酯反萃取。有机层用水和盐水洗涤。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷5:95至100:0梯度洗脱。得到呈淡棕色油的所需4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(48mg，收率60％)，MS:m/e＝604.4([M+H]+)。
步骤8：4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003791
将4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(48mg，0.0795mmol)与11ml乙醇合并，得到淡黄色溶液。加入LiOH(1M，在水中)(0.0954ml，0.0954mmol，1.2当量)。反应混合物于室温搅拌2小时。真空浓缩反应混合物。将残余物吸收在乙醇中并真空浓缩，然后溶解在7.0ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入噻唑-2-胺(9.55mg，0.0954mmol，1.2当量)和Hunig’s碱(0.0694ml，0.398mmol，5当量)，然后加入HATU(36.3mg，0.0954mmol，1.2当量)。混合物于室温搅拌1小时。用乙酸乙酯和饱和NaHCO3溶液萃取反应混合物。水层用乙酸乙酯反萃取。有机层用水和盐水洗涤。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度洗脱，得到呈黄色油的所需4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(22mg，收率42％)，MS:m/e＝658.3([M+H]+)。
步骤9：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280003801
将4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(26mg，0.0395mmol)溶解在0.5ml二氯甲烷和0.25ml甲醇中。于室温加入HCl(4M，在二噁烷中)(0.099ml，0.395mmol，10当量)，并将反应混合物于室温搅拌16小时。反应混合物用饱和NaHCO3溶液萃取并用二氯甲烷萃取两次。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。得到呈淡黄色油的所需(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(22mg，收率99.8％)，MS:m/e＝558.2([M+H]+)。
步骤10：2-[4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003802
使用类似于实施例1步骤3中描述的化学方法从(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺和2-溴乙酸叔丁酯(CAS 5292-43-3)开始获得呈黄色油的标题化合物。
步骤11：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[4-[2-氧代-2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙基]哌嗪-1-基]苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280003811
使用类似于实施例3步骤4中描述的化学方法从2-[4-[4-[7-氟-3-氧代-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯和(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(实施例1，步骤2)开始获得呈灰白色固体的标题化合物化合物10，MS:m/e＝885.6([M+H]+)。
实施例11.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物11)的合成
Figure BDA0003698737280003812
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(75mg，126.24μmol)和2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸双(三氟乙酸)盐(79.77mg，138.87μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(81.58mg，631.21μmol，109.94μL)，并加入HATU(62.40mg，164.11μmol)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化并直接进样到RP C18柱子(50gC18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液(60mL)中和纯级分，用异丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物/二氯甲烷转移至8mL小瓶，并减压蒸发。将该化合物悬浮在乙腈:水混合物中，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物11(35mg，39.11μmol，收率30.98％)。LCMS(ESI+):886.6(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.97(t,J＝1.8Hz,1H),7.78(d,J＝1.3Hz,1H),7.76(s,1H),7.72–7.65(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.97(d,J＝1.8Hz,2H),6.16(s,1H),5.92(d,J＝7.8Hz,1H),4.81(d,J＝17.7Hz,1H),4.33(ddd,J＝12.2,7.8,4.9Hz,1H),4.23(d,J＝17.7Hz,1H),4.11–3.85(m,2H),3.70(d,J＝58.2Hz,4H),3.21(s,4H),2.93(d,J＝10.7Hz,2H),2.85–2.65(m,2H),2.67–2.52(m,1H),2.49(m,2H),2.12(m,2H),1.90(qd,J＝12.3,4.7Hz,1H),1.84–1.48(m,4H)。
实施例12.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物12)的合成
Figure BDA0003698737280003821
Figure BDA0003698737280003831
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(51.85mg，87.28μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(50mg，104.73μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(56.40mg，436.39μmol，76.01μL)，并加入HATU(43.14mg，113.46μmol)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化并直接进样到RP C18柱子(50gC18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入1mL水+1mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物12(20mg，21.48μmol，收率24.62％)。LCMS(ESI+):903.7(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),10.77(s,1H),7.93–7.63(m,4H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.36(s,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.14–7.02(m,2H),6.98(t,J＝8.8Hz,1H),6.58–6.32(m,2H),6.15(s,1H),5.99(d,J＝7.7Hz,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.30(td,J＝7.5,3.9Hz,1H),4.22(d,J＝17.7Hz,1H),3.98(m,2H),3.85–3.45(m,4H),3.25(d,J＝34.8Hz,6H),2.93(d,J＝10.7Hz,2H),2.83–2.65(m,2H),2.64–2.51(m,2H),2.47(m,1H),2.18–1.97(m,3H),1.95–1.76(m,1H),1.66(m,4H)。
实施例13.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物13)的合成
Figure BDA0003698737280003841
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(48.5mg，81.64μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(46.77mg，97.96μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(52.75mg，408.18μmol，71.10μL)，并加入HATU(40.35mg，106.13μmol)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化并直接进样到RP C18柱子(50gC18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(60mL)中和纯级分，用异丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。将该化合物溶解在水:乙腈混合物(1mL:1mL)中，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物13(15.5mg，16.65μmol，收率20.40％)。LCMS(ESI+):903.6(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.80(s,1H),7.78(d,J＝1.3Hz,1H),7.74(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.37(s,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,2H),6.94(dd,J＝13.3,1.9Hz,1H),6.84(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),6.75(t,J＝8.9Hz,1H),6.15(s,1H),5.38(dd,J＝7.9,2.4Hz,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.35(ddd,J＝12.6,7.9,5.2Hz,1H),4.23(d,J＝17.7Hz,1H),4.10–3.88(m,2H),3.69(d,J＝54.2Hz,4H),3.26(d,J＝31.5Hz,6H),2.93(d,J＝10.7Hz,2H),2.83–2.69(m,1H),2.63–2.52(m,1H),2.50–2.25(m,2H),2.25–1.88(m,4H),1.73(d,J＝12.1Hz,2H),1.58(q,J＝12.1Hz,2H)。
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸偶联的一般程序A1
Figure BDA0003698737280003851
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(1当量)和适当的酸中间体(1.2当量)混合在DMF(0.2M)中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(5当量)，并加入HATU(1.3当量)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液中和纯级分，用异丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。将该化合物悬浮在乙腈:水混合物中，对该混合物彻底超声处理并涡旋。将悬浮液冷冻并冻干，得到标题化合物。
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸偶联的一般程序B1
Figure BDA0003698737280003861
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(1当量)和适当的酸中间体(1.2当量)在DMAc(0.2M)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(34.77mg，268.99μmol，46.85μL)和(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(57.60mg，134.50μmol)，将反应混合物搅拌3小时。减压蒸发挥发物，粗品通过制备HPLC在以下条件下纯化：柱子：Agilent preparative C18(50*21.2mm,5μm)。洗脱剂混合物：10mM的乙酸铵/(水:乙腈)。将纯级分冻干，得到标题化合物。
实施例14.
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-氰基-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物14
Figure BDA0003698737280003862
一般程序A1
LCMS(ESI+):910.5(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.79(s,1H),7.78(d,J＝1.3Hz,1H),7.74(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.36(s,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,2H),6.96(d,J＝8.2Hz,2H),6.23(d,J＝7.9Hz,1H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.39(ddd,J＝12.3,7.9,4.9Hz,1H),4.22(d,J＝17.7Hz,1H),3.98(ddd,J＝10.2,8.0,4.8Hz,2H),3.74(s,2H),3.61(d,J＝6.1Hz,2H),3.27(dd,J＝32.1,12.0Hz,3H),2.97(d,J＝10.7Hz,2H),2.85–2.52(m,3H),2.30–1.96(m,3H),1.89(dt,J＝12.3,6.1Hz,1H),1.69(s,4H)。
收率50％。
实施例15.
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物15
Figure BDA0003698737280003871
一般程序A1
LCMS(ESI+):935.7(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.79(d,J＝1.3Hz,1H),7.75(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.72–7.65(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.37(s,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.15(d,J＝8.5Hz,1H),7.12–7.01(m,2H),6.87–6.68(m,2H),6.16(s,1H),6.00(d,J＝7.8Hz,1H),4.81(d,J＝17.7Hz,1H),4.33(ddd,J＝12.2,7.8,4.9Hz,1H),4.23(d,J＝17.7Hz,1H),4.15–3.90(m,2H),3.77(s,2H),3.63(s,2H),3.23(s,3H),2.93(d,J＝10.7Hz,2H),2.75(dtt,J＝19.2,12.6,6.4Hz,2H),2.63–2.52(m,3H),2.47(m,1H),2.25–1.98(m,3H),1.90(tt,J＝12.0,6.1Hz,1H),1.65(d,J＝21.2Hz,4H)。
收率26％。
实施例16.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物16
Figure BDA0003698737280003881
一般程序A1
LCMS(ESI+)885.2(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.89–7.65(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.37(s,3H),7.26(d,J＝3.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),6.99(t,J＝7.8Hz,1H),6.57(t,J＝1.9Hz,1H),6.54–6.38(m,2H),6.16(s,1H),5.73(d,J＝7.6Hz,1H),4.81(d,J＝17.7Hz,1H),4.32(ddd,J＝11.9,7.5,4.8Hz,1H),4.23(d,J＝17.7Hz,1H),4.09–3.87(m,2H),3.77(d,J＝5.7Hz,2H),3.62(d,J＝5.5Hz,2H),3.33–3.25(m,7H),3.22(d,J＝7.4Hz,4H),2.95(d,J＝10.7Hz,2H),2.88–2.68(m,2H),2.58(m,1H),2.47(d,J＝5.7Hz,1H),2.44–2.28(m,1H),2.10(m,3H),1.86(m,1H),1.80–1.53(m,4H)。
收率15％。
实施例17.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物17
Figure BDA0003698737280003882
一般程序A1
LCMS(ESI+)925.4(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),10.52(s,1H),7.82–7.64(m,4H),7.61(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.43(s,1H),7.36(s,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.06(dd,J＝18.9,8.5Hz,3H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.8Hz,1H),4.22(d,J＝17.7Hz,1H),4.00(s,4H),3.90(t,J＝6.7Hz,2H),3.77(s,2H),3.63(s,2H),3.27–3.12(m,4H),2.99(s,2H),2.74(t,J＝6.9Hz,3H),2.17(s,2H),1.80(d,J＝20.6Hz,4H)。
收率25％。
实施例18.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-(三氟甲基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物18
Figure BDA0003698737280003891
一般程序B1
LCMS(ESI+)969.3(M+H)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.48(s,1H),10.79(s,1H),7.78-7.69(m,4H),7.57(s,1H),7.39(bs,1H),7.32(d,J＝9.20Hz,1H),7.07(d,J＝8.80Hz,3H),6.92-6.88(m,2H),6.16(d,J＝8.00Hz,1H),6.05(bs,1H),4.93-4.90(m,2H),4.41-4.35(m,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,2H),4.00-3.97(m,2H),3.71(bd,J＝26.00Hz,3H),3.25-3.19(m,3H),3.05-2.89(m,2H),2.79-2.70(m,3H),2.68-2.67(m,5H),2.10-2.07(m,1H),2.06-1.92(m,1H),1.26-1.15(m,6H)。
收率12％。
实施例19.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(吡啶-2-基)乙酰胺(化合物19)的合成
步骤1：2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280003892
于0℃向4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(实施例5，步骤2)(1.1g，1.82mmol)在THF(6mL)和甲醇(6mL)中的溶液中加入1M 98％的氢氧化锂一水合物(76.46mg，1.82mmol)、水(6mL)。将反应混合物于室温搅拌3小时。浓缩反应混合物得到粗品，将其溶解在5mL水中并通过使用硫酸氢钾盐(pH 1-2)酸化。水层用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到2-[6-[4-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(700mg，942.2μmol，收率50.7％)。LCMS(ESI+):m/z 576.1(M+H+)
步骤2：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003901
于0℃向2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(250mg，434.31μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(378.23μL，280.65mg，2.17mmol)和丙基膦酸酐在乙酸乙酯中的50％溶液(276.38mg，868.61μmol)。15分钟后，加入吡啶-2-胺(40.87mg，434.31μmol)并将反应混合物于60℃加热16小时。浓缩反应混合物，用二氯甲烷稀释，用水和盐水洗涤，有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用3％的甲醇/二氯甲烷洗脱。合并适当的级分并真空蒸发，得到4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(105mg，161μmol，收率37％)LCMS m/z 652.3(M+H+)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280003902
使用与(实施例5，步骤4)相同的程序从4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯获得2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺盐酸盐，收率83％。LCMS(ESI+):552.3(M+H)。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(吡啶-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280003911
于0℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(61.38mg，177.70μmol)在DMAc(1mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(104.39mg，807.72μmol，140.69μL)和COMU(83.02mg，193.85μmol)。15分钟后，加入2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺(95mg，161.54μmol)。将反应混合物搅拌2小时。用冰冷水淬灭反应混合物并沉淀出固体。粗品通过反相色谱法使用C-18(30g)柱子(0-100％的0.1％NH4OAc/水和乙腈)纯化。冻干级分，得到呈白色固体的所需产物化合物19(14mg，14.81μmol，收率9.2％)。LCMS(ESI+):879.3(M+H)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):10.82(s,1H),10.69(s,1H),8.26-8.25(m,1H),8.00(d,J＝8.1Hz,1H),7.75-7.71(m,2H),7.69-7.58(m,3H),7.54(s,1H),7.07-7.00(m,3H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H),6.53(d,J＝8.5Hz,2H),6.13(s,1H),5.58(d,J＝7.5Hz,1H),4.73(d,J＝17.7Hz,1H),4.20-4.15(m,2H),3.96-3.90(m,2H),3.69-3.65(m,2H),3.59-3.55(m,2H),3.27-3.20(m,2H),3.13-3.05(m,5H),2.89-2.84(m,2H),2.72-2.69(m,2H),2.25-2.20(m,4H),2.02-2.00(m,2H),1.85-1.83(m,1H),1.80-1.80(m,1H),1.69-1.61(m,2H),1.58-1.49(m,2H)。
实施例20.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺(化合物20)的合成
Figure BDA0003698737280003921
于0℃向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(27.19mg，74.82μmol)在DMAc(1mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(43.95mg，340.09μmol，59.24μL)和COMU(37.29mg，87.06μmol)。15分钟后，加入2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺(40mg，68.02μmol)并将反应搅拌2小时。在发生沉淀时向反应混合物中加入水(2mL)。通过过滤收集固体沉淀物并溶解在二氯甲烷中，然后浓缩溶液。粗品通过反相C-18色谱法纯化(0-100％的0.1％NH4OAc/水和乙腈)。冻干级分，得到呈白色固体化合物20的所需产物(2.5mg，2.70μmol，收率4％)，为灰白色固体。LCMS(ESI+):897.3(M+H+),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):10.82(s,1H),10.71(s,1H),8.26-8.25(m,1H),8.00(d,J＝8.2Hz,1H),7.75-7.61(m,6H),7.54(s,1H),7.07-7.00(m,3H),6.91(t,J＝8.4Hz,1H),6.38-6.35(m,2H),6.13(s,1H),5.93(d,J＝7.7Hz,1H),4.73(d,J＝17.6Hz,1H),4.24-4.20(m,1H),4.15(d,J＝17.6Hz,1H),4.01-3.87(m,3H),3.71-3.69(m,2H),3.02-3.55(m,2H),3.27-3.18(m,2H),3.18-3.10(m,4H),2.86(d,J＝10.4Hz,1H),2.74-2.70(m,2H),2.69-2.61(m,4H),2.13-2.03(m,3H),1.84-1.81(m,1H),1.69-1.58(m,4H)。
实施例21.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物21)的合成
Figure BDA0003698737280003931
步骤1：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
在100-mL圆底烧瓶中，将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(0.48g，1.02mmol)和4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(534.86mg，1.38mmol)溶解在二噁烷(8.11mL)中并加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(41.77mg，51.15μmol)和tBuXPhos(64.57mg，102.29μmol)，然后加入溶解在水(2.03mL)中的碳酸钠(238.52mg，2.25mmol)。混合物用氮气脱气。用带有氮气入口的隔膜盖住反应并在加热块上于80℃加热3小时。混合物用乙酸乙酯稀释，并将有机层与水层以及固体沉淀物分离。粗残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/乙酸乙酯)，得到呈浅橙色泡沫的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.364g，603.95μmol，收率59.04％)。LCMS:Rt＝1.473min.,MS(ESI+):603.8(M+H)/503.7(M-Boc+H)。
步骤2：[2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
使用与实施例5步骤2所用相似的程序由4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯以定量收率获得[2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂。LCMS(ESI+):575.4(M+H)
步骤3：使用与实施例5步骤3所用相似的程序从2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸获得4-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯，收率为66％。LCMS(ESI+):657.2(M+H+)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
使用与实施例5步骤4所用相似的程序由4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯获得2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐。
酸与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺偶联的一般程序
Figure BDA0003698737280003941
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(1当量)和适当的酸中间体(1.2当量)混合在DMF中并将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(5当量)，并加入HATU(1.3当量)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿(1:1)混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中，进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，并使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到标题化合物。
实施例21.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物21
Figure BDA0003698737280003951
使用酸与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺偶联的一般程序制备。
LCMS(ESI+)884.6(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.94–7.78(m,2H),7.77–7.68(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.45–7.31(m,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.06–6.84(m,2H),6.72–6.50(m,2H),6.16(s,1H),5.64(d,J＝7.4Hz,1H),4.83(d,J＝17.8Hz,1H),4.54(d,J＝12.5Hz,1H),4.29–4.13(m,3H),4.10–3.86(m,2H),3.28(s,1H),3.22–3.02(m,2H),3.02–2.53(m,6H),2.50–2.43(m,1H),2.33(ddd,J＝11.8,9.6,5.9Hz,1H),2.19–1.99(m,3H),1.94–1.34(m,9H)。
收率24.5％
实施例22.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物22
Figure BDA0003698737280003961
使用酸与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺偶联的一般程序制备。
LCMS(ESI+)884.6(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.86–7.77(m,2H),7.77–7.71(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.40–7.34(m,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.98–6.92(m,2H),6.65–6.57(m,2H),6.16(s,1H),5.65(d,J＝7.5Hz,1H),4.83(d,J＝17.8Hz,1H),4.54(d,J＝12.6Hz,1H),4.31–4.20(m,3H),4.05–3.93(m,3H),3.28(s,1H),3.09(m,2H),3.01–2.56(m,8H),2.42–2.28(m,1H),2.09(m,3H),2.00–1.35(m,8H)。
收率15.5％
实施例23.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物23
Figure BDA0003698737280003962
使用酸与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺偶联的一般程序制备。
LCMS(ESI+)884.5(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.86–7.77(m,2H),7.77–7.71(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.40–7.34(m,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.98–6.92(m,2H),6.65–6.57(m,2H),6.16(s,1H),5.65(d,J＝7.5Hz,1H),4.83(d,J＝17.8Hz,1H),4.54(d,J＝12.6Hz,1H),4.31–4.20(m,3H),4.05–3.93(m,3H),3.28(s,1H),3.09(m,2H),3.01–2.56(m,8H),2.42–2.28(m,1H),2.09(m,3H),2.00–1.35(m,8H)。
收率26.6％
实施例24.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物24
Figure BDA0003698737280003971
使用酸与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺偶联的一般程序制备。
LCMS(ESI+)902.1(M+H)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.51(s,1H),10.79(s,1H),δ7.81(d,J＝13.7Hz,2H),7.74(d,J＝8.1Hz,2H),7.61(s,1H),7.48(d,J＝3.5Hz,1H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),7.25(d,J＝3.1Hz,1H),6.97(t,J＝8.3Hz,1H),6.45(s,1H),6.42(d,J＝4.8Hz,1H),6.14(s,1H),6.01(d,J＝8.0Hz,1H),4.83(d,J＝17.6Hz,1H),4.55-4.52(m,1H),4.32-4.22(m,3H),4.00-3.94(m,2H),3.31-2.25(m,1H),3.11-3.07(m,2H),2.94-2.77(m,3H),2.75-2.68(m,2H),2.65-2.60(m,3H),2.09-2.07(m,4H),1.90-1.85(m,4H),1.75-1.66(m,5H),1.56-1.41(m,1H)。
收率12％
实施例25.
2-(6-(4-(1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物25
Figure BDA0003698737280003981
使用酸与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺偶联的一般程序制备。
LCMS(ESI+)909.4(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.80(s,1H),7.92–7.77(m,2H),7.75(d,J＝8.1Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.19(d,J＝8.5Hz,1H),7.04–6.83(m,2H),6.24(d,J＝7.9Hz,1H),6.16(s,1H),4.83(d,J＝17.8Hz,1H),4.55(d,J＝12.5Hz,1H),4.40(ddd,J＝12.3,7.8,4.9Hz,1H),4.25(d,J＝17.7Hz,2H),4.05–3.85(m,2H),3.22–3.05(m,3H),3.04–2.93(m,2H),2.93–2.52(m,9H),2.27–1.99(m,3H),1.98–1.80(m,3H),1.70(s,5H),1.49(q,J＝12.3Hz,1H)。
收率18.6％
实施例26.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物26)的合成
步骤1：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280003982
向4-[4-[2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例21，步骤3)(189mg，288μmol)在二氯甲烷(1.5ml)和甲醇(750μl)中的溶液中逐滴加入4M的HCl/二噁烷(719μl，2.88mmol，当量数：10)。
反应混合物于室温搅拌1小时。蒸发溶剂，将残余物溶解在二氯甲烷中，并用饱和NaHCO3溶液洗涤。水层用二氯甲烷第二次萃取。合并有机层，用水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈橙色固体的(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(180mg，291μmol，收率101％)。MS:m/e＝557.5([M+H]+)。
步骤2：2-[4-[4-[2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280003991
使用类似于实施例1步骤3中描述的化学方法从(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(实施例11，步骤1)和2-溴乙酸叔丁酯(CAS 5292-43-3)开始获得呈黄色油的标题化合物。MS:m/e＝671.4([M+H]+)。
步骤3：2-[4-[4-[2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1-哌啶基]乙酸2,2,2-三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280003992
向2-(4-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(10mg，14.9μmol，当量数：1)在二氯甲烷(0.1ml)中的搅拌溶液中加入TFA(34mg，23μl，298μmol，当量数：20)。将反应混合物于室温搅拌16小时。真空浓缩反应混合物，得到呈灰白色固体的2-[4-[4-[2-[(1S)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(15mg，20.6μmol，收率138％)。MS:m/e＝613.5([M+H]+)。
步骤4：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004001
使用类似于实施例4步骤4中描述的化学方法从2-[4-[4-[2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1-哌啶基]乙酸2,2,2-三氟乙酸盐(实施例11，步骤3)和(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(实施例1，步骤2)开始获得呈白色树胶的标题化合物化合物26，MS:m/e＝884.7([M+H]+)。
实施例27.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物27
步骤1：4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004011
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(1.5g，3.20mmol)和4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.87g，4.79mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)中的溶液用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入碳酸钠(677.61mg，6.39mmol)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气吹扫5分钟，然后在惰性气氛下于80℃加热2小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰水(5ml)洗涤滤液并使用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。有机层用盐水(15ml)洗涤，用Na2SO4干燥并减压浓缩，得到4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯和2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(2.2g，1.83mmol，收率57.14％)的混合物，其不经进一步纯化即用于下一步中。LCMS(ESI+):m/z 605.3(M+H+)和酯水解产物质量LCMS(ESI+):m/z 577.3(M+H)
步骤2：2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280004012
于0℃向溶解在THF(20mL)和甲醇(20mL)中的4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.2g，3.64mmol)的溶液中加入溶解在水(20mL)中的1M 98％的氢氧化锂一水合物(152.68mg，3.64mmol)。将反应混合物于室温搅拌3小时。浓缩反应混合物，然后将残余物溶解在50mL水中并通过使用KHSO4盐(pH 1-2)酸化。过滤固体沉淀物并真空干燥，得到所需产物2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(800mg，1.31mmol，收率36.12％)。LCMS(ESI+):[m/z:577.0(M+H+)]
步骤3：4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004021
于0℃向2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(700mg，1.21mol)在DMF(10mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(627.59mg，4.86mmol，845.81μL)和丙基膦酸酐(T3P)在乙酸乙酯中的50％溶液(772.36mg，2.43mmol)。将反应混合物搅拌15分钟。在氮气氛下加入噻唑-2-胺(145.88mg，1.46mmol)。将反应混合物于室温搅拌16小时。将反应混合物倒入冰水(35ml)中，并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。用盐水(45mL)洗涤有机层，用Na2SO4干燥并减压浓缩。粗残余物通过二氧化硅柱色谱法使用甲醇:二氯甲烷洗脱剂混合物纯化并浓缩收集的级分，得到4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(490mg，641.93μmol，收率52.88％)。LCMS(ESI+):(m/z:659.2[M+H])
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004022
于0℃向4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(480mg，728.66μmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入在二噁烷中的4.0M氯化氢溶液(1.46mmol，66.42μL)。2小时后，浓缩反应混合物，得到呈盐酸盐的粗产物2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(440mg，692.06μmol，收率94.98％)。LCMS(m/z:558.9[M+1])
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280004031
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(50mg，84.02μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(36.64mg，76.74μmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向该反应混合物中加入COMU(46.78mg，109.23μmol)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(65.15mg，504.13μmol，87.81μL)。反应混合物于室温搅拌5小时。减压浓缩反应混合物。粗品通过反相C-18色谱法纯化(0-100％的0.1％NH4OAc/水和乙腈)，得到化合物27(18.2mg，19.3μmol，收率12％)。LCMS(ESI+)(m/z:904.8[M+1]),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.78(s,1H),8.60(d,J＝2.0Hz,1H),8.04(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.81(d,J＝11.2Hz,2H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.02-6.97(m,2H),6.53-6.45(m,2H),6.16(s,1H),6.00(d,J＝7.6Hz,1H),4.82(d,J＝17.6Hz,1H),4.30-4.28(m,1H),4.24(d,J＝17.6Hz,1H),4.02-3.97(m,2H),3.75-3.67(m,4H),3.59(s,4H),3.23(s,2H),2.94(d,J＝9.2Hz,2H),2.77-2.68(m,2H),2.59-2.58(m,4H),2.10-2.07(m,4H),1.92-1.84(m,1H),1.66(s,4H)。
实施例28.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物28)的合成
步骤1：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004041
在100-mL圆底烧瓶中，将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(530mg，1.13mmol)和4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(575.28mg，1.52mmol)溶解在二噁烷(6.4mL)中并加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(46.12mg，56.47μmol)和tBuXPhos(71.30mg，112.95μmol)，然后加入溶解在水(1.6mL)中的碳酸钠(263.37mg，2.48mmol)。混合物用氮气脱气。用带有氮气入口的隔膜盖住反应并于80℃加热2小时。用乙酸乙酯稀释该混合物，并将有机层与水层分离。粗残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/乙酸乙酯)，得到呈灰白色泡沫的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(550mg，0.928mmol，收率82％)。LCMS(ESI+):593.8(M+H)。
步骤2：[2-[6-[1-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280004042
向4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(550mg，928.02μmol)在乙醇(4mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，1.02mL)并于环境温度搅拌过夜。将反应混合物温热至30℃并搅拌3小时。减压蒸发挥发物，得到呈灰白色固体的[2-[6-[1-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(529.47mg，928.02μmol，定量收率)。LCMS(ESI+):565.8(M+H)。
步骤3：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004051
将[2-[6-[1-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(529.47mg，928.02μmol)和噻唑-2-胺(97.58mg，974.42μmol)混合在DMF(5mL)中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(479.75mg，3.71mmol，646.56μL)，并加入HATU(458.72mg，1.21mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取反应(×2)。用水和盐水萃取有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗物质通过快速色谱法在硅胶上纯化(24g，0-10％的甲醇/二氯甲烷)。合并含有产物的级分并浓缩，得到呈灰白色固体的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基]吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(520mg，804.04μmol，收率86.64％)。LCMS(ESI+):647.7(M+H)。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004061
将4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(515mg，796.31μmol)溶解在1,4-二噁烷:甲醇混合物中并加入氯化氢溶液(4.0M，在二噁烷中，1.4mL，5.6mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时。减压蒸发挥发物。使该物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到呈灰白色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(415mg，收率90.1％)。LCMS(ESI+):547.3(M+H)。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004062
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(55.4mg，95.01μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(56.75mg，123.52μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(61.40mg，475.06μmol，82.75μL)，并加入HATU(46.96mg，123.52μmol)，将反应混合物在冰浴中搅拌1小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中，进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g高度球形硅胶柱上，使用0％至30％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入1mL水+1mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到呈白色固体的化合物28(31.3mg，35.45μmol，收率37.32％)。LCMS(ESI+):874.6(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),8.53(s,1H),8.10(s,1H),7.84(d,J＝1.3Hz,1H),7.75(dd,J＝10.4,1.3Hz,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.2Hz,2H),6.61(d,J＝8.1Hz,2H),6.15(s,1H),5.64(d,J＝7.3Hz,1H),4.78(d,J＝17.7Hz,1H),4.45(d,J＝12.2Hz,2H),4.31–4.14(m,3H),4.00(td,J＝10.6,5.7Hz,2H),3.28–3.17(m,2H),3.17–3.06(m,1H),2.93(s,2H),2.88–2.66(m,4H),2.62–2.41(m,3H),2.39–2.28(m,2H),2.22–2.04(m,4H),2.04–1.77(m,3H),1.77–1.66(m,2H),1.66–1.50(m,2H)。
实施例29.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物29)的合成
步骤1：4-[1-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004081
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(205mg，436.87μmol)和4-(1H-吡唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS#278798-15-5)(109.80mg，436.87μmol)在甲苯(2.2mL)中的溶液用N2鼓泡10分钟。然后，依次加入反式-N,N′-二甲基环己烷-1,2-二胺(12.43mg，87.37μmol，13.78μL)、碳酸钾(120.76mg，873.74μmol，52.73μL)和碘化铜(I)(8.32mg，43.69μmol，1.48μL)并将混合物于100℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至环境温度并通过硅胶垫过滤，用EA洗涤，并浓缩。粗混合物通过硅胶色谱法分离(100％的二氯甲烷到二氯甲烷:甲醇＝4:1)，得到呈黄褐色固体的4-[1-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(185mg，312.15μmol，收率71.45％)。LCMS(ESI+):593.8(M+H)。
步骤2：[2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]
Figure BDA0003698737280004082
向4-[1-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(245mg，413.39μmol)在乙醇(1.6mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，475.40μL)并将混合物于20℃搅拌过夜。将反应减压蒸发至干，得到呈棕色固体的[2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(236mg，413μmol，定量收率)。LCMS(ESI+):565.8(M+H)。
步骤3：4-[1-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004091
将[2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(235.85mg，413.38μmol)和噻唑-2-胺(43.47mg，434.05μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(213.71mg，1.65mmol，288.02μL)，并加入HATU(204.34mg，537.39μmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。用NaHCO3水溶液稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗物质通过硅胶色谱法纯化(24g，0-10％的甲醇/二氯甲烷)。合并含有产物的级分并浓缩，得到呈灰白色固体的4-[1-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-4-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(88mg，136.07μmol，收率32.92％)。LCMS(ESI+):647.7(M+H)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)吡唑-1-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004092
将4-[1-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]吡唑-4-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(88.00mg，136.07μmol)溶解在1,4-二噁烷:甲醇混合物中并加入在二噁烷中的4.0M氯化氢溶液(4M，239.22μL)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使该物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到致密灰白色固体：呈灰白色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)吡唑-1-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(67mg，定量收率)。LCMS(ESI+):547.3(M+H)。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004101
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基)吡唑-1-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(44.00mg，75.46μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(45.07mg，98.10μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(48.76mg，377.31μmol，65.72μL)，并加入HATU(37.30mg，98.10μmol)，将反应混合物在冰浴中搅拌1小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入1mL水+1mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物29(28mg，31.72μmol，收率42.03％)。LCMS(ESI+):874.8(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),10.76(s,1H),8.62(s,1H),8.05(d,J＝1.8Hz,1H),7.98(dd,J＝10.4,1.8Hz,1H),7.75(s,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,2H),6.60(d,J＝8.5Hz,2H),6.16(s,1H),5.63(d,J＝7.4Hz,1H),4.82(d,J＝17.8Hz,1H),4.39(d,J＝12.7Hz,1H),4.30–4.12(m,3H),4.06–3.93(m,2H),3.28–3.07(m,3H),2.92(s,2H),2.89–2.67(m,4H),2.63–2.42(m,3H),2.39–2.28(m,2H),2.17–1.93(m,5H),1.85(qd,J＝12.2,4.7Hz,1H),1.71(d,J＝12.1Hz,2H),1.66–1.50(m,3H),1.44(dd,J＝24.0,12.2Hz,1H)。
实施例30.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(1-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物30)的合成
步骤1：[2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280004111
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(1g，2.13mmol)在乙醇(9mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，2.34mL，2.34mmol)并将混合物于环境温度搅拌过夜。将反应混合物蒸发至干，得到呈黄褐色固体的[2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酰基]氧基锂(952mg，2.13mmol，定量收率)。LCMS(ESI+):442.1(M+H)
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004112
将[2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酰基]氧基锂(952.38mg，2.13mmol)和噻唑-2-胺(223.97mg，2.24mmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.10g，8.52mmol，1.48mL)，并加入HATU(1.05g，2.77mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。用NaHCO3水溶液稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取两次。合并有机层，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗物质通过快速色谱法在硅胶上纯化(24g，0-10％的甲醇/二氯甲烷)。合并含有产物的级分并浓缩，得到呈黄褐色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(1.2g，2.29mmol，定量收率)。LCMS(ESI+):524.5(M+H)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004121
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(500mg，955.44μmol)在DMF(3.5mL)中的溶液中加入乙炔基(三甲基)硅烷(469.21mg，4.78mmol，675.13μL)。加入三乙胺(290.04mg，2.87mmol，399.51μL)。反应混合物用氮气脱气10分钟，向反应混合物中加入PdCl2(PPh3)2(67.06mg，95.54μmol)和碘化铜(I)(18.20mg，95.54μmol，3.24μL)并加热至60℃。30分钟后，用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化(100％的二氯甲烷到10:1的二氯甲烷:甲醇)，得到2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(270mg，546.97μmol，收率57％)。LCMS(ESI+):494.7(M+H)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-乙炔基-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004122
于环境温度向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(268mg，542.92μmol)在甲醇(5.4mL)中的溶液中加入碳酸钾(90.04mg，651.50μmol)。将混合物于环境温度搅拌40分钟。通过硅胶垫过滤反应混合物，用二氯甲烷/甲醇(4:1)洗涤。真空浓缩滤液，然后通过硅胶柱色谱法纯化(100％的二氯甲烷到10:1的二氯甲烷:甲醇＝10:1)，得到2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-乙炔基-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(215mg，510.15μmol，收率94％)。
步骤5：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]三唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004131
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-乙炔基-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(55mg，130.50μmol)和(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)-叠氮基-氨基负离子(35.44mg，156.60μmol)在水(0.3mL)和叔丁醇(0.3mL)中的溶液中加入硫酸铜(II)五水合物(651.69ug，2.61μmol)和抗坏血酸钠(1.29mg，6.53μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌18小时。混合物用水/EA稀释并用盐水洗涤分离的有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，粗混合物通过硅胶柱色谱法纯化(100％的二氯甲烷到5:1的二氯甲烷:甲醇)，得到4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]噻唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(57mg，88.00μmol，收率67％)。
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)三唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004132
将4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]三唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(56mg，86.46μmol)溶解在1,4-二噁烷:甲醇混合物中并加入氯化氢溶液(4.0M，在二噁烷中，0.15mL，0.6mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使该物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到呈致密灰白色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)三唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(50mg，86.4μmol，定量收率)，其原样用于下一步中。LCMS(ESI+):548.3(M+H)。
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(1-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280004141
使用2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(实施例29，步骤5)所用的方法从5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)三唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐合成化合物30，收率为23.4％。LCMS(ESI+):875.6(M+H),1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.54(s,1H),10.76(s,1H),8.97(s,1H),8.08(d,J＝1.2Hz,1H),7.95(dd,J＝10.0,1.2Hz,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.3Hz,2H),6.60(d,J＝8.3Hz,2H),6.16(s,1H),5.63(d,J＝7.4Hz,1H),4.93–4.79(m,2H),4.46(d,J＝12.9Hz,1H),4.33–4.20(m,3H),3.99(ddt,J＝17.3,10.9,6.1Hz,2H),3.31–3.22(m,1H),3.14(d,J＝12.5Hz,1H),3.01–2.82(m,3H),2.83–2.66(m,2H),2.63–2.44(m,5H),2.40–2.30(m,1H),2.22(q,J＝13.0,10.9Hz,2H),2.16–1.94(m,4H),1.94–1.78(m,2H),1.77–1.66(m,2H),1.67–1.53(m,2H)。
实施例31.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物31
步骤1：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004151
在100-mL圆底烧瓶中，将2-(6-溴-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(3.1g，7.34mmol)和4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.00g，9.91mmol)溶解在二噁烷(44mL)中并加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(299.77mg，367.08μmol)和tBuXPhos(463.44mg，734.17μmol)，然后加入溶解在水(11mL)中的碳酸钠(1.71g，16.15mmol)。混合物用氮气脱气。用配备有氮气入口的隔膜盖住反应，并在加热块上于80℃加热5小时。混合物用乙酸乙酯稀释，并将有机层与水层以及固体沉淀物分离。粗残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/乙酸乙酯)，得到呈浅橙色泡沫的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.6g，5.82mmol，收率79.26％)。LCMS:619.4(M+H)
步骤2：[2-[6-[4-[(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]
Figure BDA0003698737280004161
向4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.6g，5.82mmol)在乙醇(25mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M，5.82mL)。将反应混合物加热至40℃，保持16小时。真空浓缩反应混合物，悬浮在苯中并蒸发。使残余物经受高真空，得到[2-[6-[4-[(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(3.47g，定量收率)。LCMS(ESI+):590.9(M+H)
步骤3：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004162
将[2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(3.47g，5.82mmol)和噻唑-2-胺(640.73mg，6.40mmol)混合在DMF中并将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(3.01g，23.27mmol，4.05mL)，并加入HATU(2.88g，7.56mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液。反应混合物用乙酸乙酯萃取(2×)。用水、盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗物质通过快速色谱法在硅胶上纯化(24g，0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3g，4.46mmol，收率77％)。LCMS(ESI+):673.2(M+H)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004171
将4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3g，4.46mmol)溶解在1,4-二噁烷(10mL)和甲醇(10mL)中。加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，8mL，32mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时。减压蒸发挥发物。使该物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到呈致密固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(3.2g，5.25mmol，定量收率)。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004172
Figure BDA0003698737280004181
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，164.17μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(98.05mg，213.43μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(106.09mg，820.87μmol，142.98μL)，并加入HATU(81.15mg，213.43μmol)，将反应混合物在冰浴中搅拌1小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用异丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取两次。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中，进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，并使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物31(62mg，68.20μmol，收率41％)。LCMS(ESI+):900.7(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),10.76(s,1H),7.82–7.74(m,3H),7.76–7.71(m,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.15–7.08(m,2H),7.00–6.93(m,2H),6.66–6.59(m,2H),6.16(s,1H),5.65(d,J＝7.5Hz,1H),4.82(d,J＝17.7Hz,1H),4.74(dq,J＝8.1,3.9Hz,1H),4.32–4.20(m,2H),3.99(dddd,J＝11.2,8.2,6.3,3.1Hz,2H),3.89(d,J＝12.0Hz,2H),3.45(t,J＝10.2Hz,1H),3.31–3.10(m,3H),2.91(d,J＝10.7Hz,2H),2.75(ddt,J＝23.3,11.9,5.7Hz,2H),2.63–2.44(m,4H),2.40–2.28(m,1H),2.16–2.00(m,4H),2.00–1.89(m,1H),1.86(qd,J＝12.2,4.8Hz,1H),1.77–1.64(m,3H),1.57(q,J＝12.2Hz,3H)。
实施例32.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物32)的合成
Figure BDA0003698737280004191
使用与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺相同的程序，使用2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐代替2-[4-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐，制备化合物32，收率为47％。LCMS(ESI+):900.3(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.82–7.72(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.12(d,J＝8.5Hz,2H),6.96(d,J＝8.2Hz,2H),6.62(d,J＝8.2Hz,2H),6.16(s,1H),5.65(d,J＝7.5Hz,1H),4.82(d,J＝17.7Hz,1H),4.77–4.68(m,1H),4.32–4.19(m,2H),4.08–3.95(s,2H),3.95–3.83(m,2H),3.52–3.08(m,4H),2.92(m,2H),2.83–2.67(m,2H),2.64–2.42(m,4H),2.40–2.28(m,1H),2.18–2.02(m,4H),1.99–1.79(m,2H),1.79–1.65(m,3H),1.63-1.50(m,3H)。
实施例33.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物33)的合成
Figure BDA0003698737280004201
使用与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺相同的程序，使用2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐代替2-[4-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐，制备化合物33，收率为36％(54mg，59.40μmol，收率36.18％)。LCMS(ESI+):900.6(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.82–7.73(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.15–7.09(m,2H),6.96(d,J＝8.2Hz,2H),6.62(d,J＝8.2Hz,2H),6.16(s,1H),5.65(d,J＝7.5Hz,1H),4.82(d,J＝17.8Hz,1H),4.74(m,1H),4.32–4.21(m,2H),4.06–3.95(m,2H),3.89(m,2H),3.46(m,1H),3.33–3.10(m,3H),2.91(d,J＝10.5Hz,2H),2.82–2.66(m,3H),2.62–2.42(m,3H),2.33(dd,J＝3.8,1.9Hz,1H),2.17–2.01(m,4H),1.88(ddd,J＝20.1,15.0,9.8Hz,2H),1.77–1.64(m,3H),1.64–1.49(m,3H)。
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法A
使用合成实施例31步骤5中使用的方法从2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐合成化合物。
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法B
于环境温度向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(1当量)和酸中间体(1.1当量)在DMF(0.1M)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(5当量)，然后加入HATU(1.3当量)。将反应于环境温度再搅拌16小时。用冰冷水淬灭反应混合物并用10％的甲醇/二氯甲烷(50ml)萃取。减压浓缩有机层，得到粗品。将粗品在反相柱上纯化，用40-50％的乙腈/水(+0.1％的TFA相改性剂)洗脱。冻干纯级分，得到固体，其通过制备HPLC进一步纯化。纯化方法：柱子：Zorbax Extend C18(50x4.6mm)5μm，流动相A：10mM的乙酸铵/水，流动相B：乙腈。将纯级分冷冻并冻干，得到标题化合物。
实施例34.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物34)的合成
Figure BDA0003698737280004211
按2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法A合成，收率为52％。
LCMS(ESI+)918.7(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.82–7.70(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.15–7.09(m,2H),6.99(t,J＝8.8Hz,1H),6.49–6.40(m,2H),6.16(s,1H),6.00(d,J＝7.8Hz,1H),4.82(d,J＝17.7Hz,1H),4.73(t,J＝3.7Hz,1H),4.31(td,J＝7.4,3.8Hz,1H),4.24(d,J＝17.8Hz,1H),4.06–3.95(m,2H),3.89(m,2H),3.51–3.40(m,1H),3.30–3.08(m,3H),2.92(d,J＝10.7Hz,2H),2.83–2.66(m,2H),2.62–2.41(m,3H),2.15–2.02(m,5H),1.88–1.79(m,1H),1.87(qd,J＝12.3,4.6Hz,3H),1.74–1.59(m,6H),1.59–1.47(m,1H)。
实施例35.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物35)的合成
Figure BDA0003698737280004221
按2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法A合成，收率为52％。
LCMS(ESI+)918.7(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.82–7.70(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.15–7.09(m,2H),6.99(t,J＝8.8Hz,1H),6.49–6.40(m,2H),6.16(s,1H),6.00(d,J＝7.8Hz,1H),4.82(d,J＝17.7Hz,1H),4.73(t,J＝3.7Hz,1H),4.31(td,J＝7.4,3.8Hz,1H),4.24(d,J＝17.8Hz,1H),4.06–3.95(m,2H),3.89(m,2H),3.51–3.40(m,1H),3.30–3.08(m,3H),2.92(d,J＝10.7Hz,2H),2.83–2.66(m,2H),2.62–2.41(m,3H),2.15–2.02(m,5H),1.88–1.79(m,1H),1.87(qd,J＝12.3,4.6Hz,3H),1.74–1.59(m,6H),1.59–1.47(m,1H)。
实施例36.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物36)的合成
Figure BDA0003698737280004222
按2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法A合成，收率为30％。
LCMS(ESI+)901.5(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.79(s,1H),7.98(t,J＝1.8Hz,1H),7.82–7.72(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.15–7.09(m,2H),6.98(d,J＝1.8Hz,2H),6.16(s,1H),5.93(d,J＝7.8Hz,1H),4.82(d,J＝17.7Hz,1H),4.78–4.69(m,1H),4.34(ddd,J＝12.2,7.8,4.9Hz,1H),4.24(d,J＝17.7Hz,1H),4.06–3.84(m,4H),3.45(t,J＝10.0Hz,1H),3.31–3.07(m,2H),2.91(d,J＝10.7Hz,2H),2.83–2.67(m,2H),2.64–2.42(m,6H),2.17–2.01(m,4H),2.00–1.83(m,2H),1.82–1.60(m,5H),1.60–1.47(m,1H)。
实施例37.
2-(6-(4-((1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物37)的合成
Figure BDA0003698737280004231
按2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法A合成，收率为46％。
LCMS(ESI+)925.5(M+H)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.80(s,1H),7.82–7.71(m,4H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,1H),7.15–7.09(m,2H),6.97(d,J＝7.6Hz,2H),6.25(d,J＝7.9Hz,1H),6.16(s,1H),4.82(d,J＝17.7Hz,1H),4.78–4.70(m,1H),4.40(ddd,J＝12.3,7.9,4.9Hz,1H),4.24(d,J＝17.7Hz,1H),4.00(ddt,J＝10.5,7.5,4.6Hz,2H),3.93–3.83(m,2H),3.46(t,J＝10.4Hz,1H),3.30–3.13(m,3H),2.96(d,J＝10.2Hz,2H),2.83–2.64(m,3H),2.64–2.45(m,3H),2.20–2.02(m,4H),2.02–1.83(m,2H),1.70(s,5H),1.55(d,J＝8.8Hz,1H)。
实施例38.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-1-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物38)的合成
Figure BDA0003698737280004241
按2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法B合成，收率为4.47％。
LCMS(ESI+)912.2(M+H)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.71(s,1H),7.78(dd,J＝1.2,12.4Hz,4H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.27(d,J＝3.6Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,2H),6.92(d,J＝8.4Hz,2H),6.40(d,J＝8.4Hz,2H),6.15(s,1H),6.08(s,1H),4.82(d,J＝17.6Hz,1H),4.77-4.68(m,1H),4.24(d,J＝17.6Hz,1H),4.05-3.98(m,2H),3.97-3.88(m,2H),3.28-3.27(m,3H),2.97-2.81(m,4H),2.80-2.71(m,3H),2.15-2.01(m,4H),1.95-1.88(m,2H),1.75-1.61(m,4H),1.61-1.49(m,4H)。
实施例39.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物39)的合成
Figure BDA0003698737280004242
按2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐与酸中间体的酰胺偶联的一般方法B合成，收率为39％。
LCMS(ESI+)919.0(M+H)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.56(s,1H),10.79(s,1H),7.80-7.73(m,4H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.27(d,J＝3.6Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(d,J＝9.2Hz,1H),6.47-6.43(m,2H),6.16(s,1H),6.02(d,J＝7.6Hz,1H),4.84-4.74(m,2H),4.31-4.22(m,2H),4.03-3.97(m,4H),3.48-3.41(m,1H),3.34-3.12(m,3H),2.92-2.88(m,2H),2.78-2.67(m,2H),2.61-2.54(m,3H),2.11-2.06(m,4H),1.92-1.86(m,3H),1.76-1.51(m,7H)。
实施例40.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物40)的合成
步骤1：2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004251
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(58mg，95.22μmol)在二氯甲烷(1mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(24.09mg，238.05μmol，33.18μL)和2-氯-2-氧代-乙酸乙酯(14.30mg，104.74μmol，11.72μL)并于环境温度搅拌该混合物。完成后，用氯仿/异丙醇(4:1)和NaHCO3(水溶液)稀释反应混合物。分离有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。混合物通过硅胶柱色谱法使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷洗脱剂梯度纯化，得到2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酸乙酯(37mg，55.00μmol，收率58％)。LCMS(ESI+):673.2(M+H)。
步骤2：2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酸锂盐
Figure BDA0003698737280004261
向2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-噻吩基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酸乙酯(37mg，55.08μmol)在乙醇(0.5mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，61μmol，61μL)并将混合物于环境温度搅拌2小时。将反应混合物减压蒸发至干，得到2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酸锂盐(35.9mg，55.08μmol，定量收率)。LCMS(ESI+):645.2(M+H)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004262
将2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酸锂盐(35.9mg，55.08μmol)在3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(21.40mg，66.09μmol)混合在DMF(0.5mL)中并将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(35.59mg，275.39μmol，47.97μL)，并加入HATU(27.23mg，71.60μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用异丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发所需级分，然后溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和(1mL)乙腈，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物40(25.7mg，27.84μmol，收率50％)。LCMS(ESI+):914.3(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.57(s,1H),10.82(d,J＝2.9Hz,1H),7.86(s,1H),7.85–7.77(m,3H),7.67(s,1H),7.55(d,J＝3.6Hz,1H),7.32(d,J＝3.6Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(d,J＝8.1Hz,2H),6.68(dd,J＝8.7,2.9Hz,2H),6.22(s,1H),5.75(dd,J＝7.5,3.6Hz,1H),4.94–4.79(m,2H),4.48(d,J＝12.6Hz,1H),4.37–4.25(m,2H),4.13–3.99(m,2H),3.99–3.84(m,1H),3.64(t,J＝14.8Hz,2H),3.57–3.34(m,3H),3.28(t,J＝13.3Hz,1H),2.92–2.68(m,4H),2.68–2.57(m,3H),2.21–2.01(m,3H),1.99–1.81(m,3H),1.81–1.65(m,2H),1.53(dd,J＝15.6,7.9Hz,2H)。
实施例41.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物41)的合成
步骤1：4-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004271
使用实施例31步骤1中使用的程序从2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯和(R)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(Cas#1383793-73-4)制备(3R)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，收率为43％。LCMS(ESI+):605.3(M+H)
步骤2：2-[6-[4-[(3R)-1-叔-丁氧基羰基吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280004281
于0℃向(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(600mg，992.28μmol)在THF(3mL)和甲醇(3mL)及水(3mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(41.64mg，992.28μmol)。将反应混合物于室温搅拌3小时，然后浓缩反应混合物。将粗残余物溶解在5ml水中并通过使用KHSO4盐(pH 1-2)酸化。过滤溶液，得到固体化合物2-[6-[4-[(3R)-1-叔-丁氧基羰基吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑基-1-基)乙酸(450mg，522μmol，收率53％)。LCMS(ESI+):577.0(M+H)。
步骤3：(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯烷-1-甲酸酯
Figure BDA0003698737280004282
于0℃向2-[6-[4-[(3R)-1-叔-丁氧基羰基吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(200mg，346.85μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(224.14mg，1.73mmol，302.08μL)和丙基膦酸酐在乙酸乙酯中的50％溶液(220.72mg，693.70μmol)。15分钟后，加入噻唑-2-胺(34.73mg，346.85μmol)并将混合物于50℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水，得到沉淀。通过过滤收集沉淀物，然后溶解在二氯甲烷中并浓缩溶液。粗产物通过快速柱色谱法纯化，产物在3％的甲醇/二氯甲烷中洗脱。合并适当的级分并浓缩，得到(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(110mg，111.9μmol，收率32％)。LMCS(ESI+):659.2(M+H)。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[(3R)-吡咯烷-3-基]氧基苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004291
于0℃向(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(150mg，227.71μmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中加入氯化氢溶液(4.0M，在二噁烷中，426μL，1.71mmol)。2小时后，减压浓缩反应混合物并用乙醚洗涤固体残余物，得到2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[(3R)-吡咯烷-3-基]氧基苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(140mg，174,1μmol，收率76.5％)。LCMSm/z 559.2(M+H)
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004292
于0℃向2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(63.84mg，138.97μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(119.45mg，924.24μmol，160.99μL)和COMU(118.75mg，277.27μmol)。15分钟后，加入2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-[(3R)-吡咯烷-3-基]氧基苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(110mg，184.85μmol)。搅拌1小时后，向反应混合物中加入5ml水并形成固体沉淀物。通过过滤收集固体，然后溶解在二氯甲烷中并浓缩溶液。粗品通过反相C-18色谱法纯化(0-100％的0.1％乙酸铵/水和乙腈)。冻干级分，得到呈白色固体的化合物41。LCMS(ESI+):887.0(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.53(s,1H),10.77(s,1H),7.80-7.77(m,4H),7.64(s,1H),7.55(s,1H),7.26(s,1H),7.11-7.02(m,2H),6.97-6.95(m,1H),6.91-6.87(m,1H),6.62(d,J＝8.4Hz,1H),6.56(s,1H),6.15(s,1H),5.72-5.65(m,1H),5.23-5.13(m,1H),4.82(d,J＝17.6Hz,1H),4.44-4.24(m,2H),4.04-3.92(m,2H),3.90-3.61(m,3H),3.61-3.45(m,2H),3.61-3.45(m,4H),3.11-2.88(m,2H),2.90-2.85(m,1H),2.71-2.67(m,2H),2.65-2.58(m,2H),2.12-2.42(m,4H),1.85-1.78(m,1H),1.72-1.64(m,2H)
实施例42.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3S)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物42)的合成
步骤1：(3S)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004301
使用实施例31步骤1中使用的程序从2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯和(S)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(CAS#1383793-75-6)制备(3S)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，收率为68.5％。LCMS(ESI+):605.3(M+H)
步骤2：2-(6-(4-(((S)-1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280004311
使用与实施例41步骤2相同的程序从(3S)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯制备2-(6-(4-(((S)-1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸，收率为84％。LCMS(ESI+):576.8(M+H)
步骤3：(3S)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004312
使用与实施例41步骤3相同的程序从2-(6-(4-(((S)-1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸合成(3S)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，收率为44％。LCMS(ESI+):659.2(M+H)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(((S)-吡咯烷-3-基)氧基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004321
使用与实施例41步骤4相同的程序从(3S)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯烷[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯制备2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(((S)-吡咯烷-3-基)氧基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺盐酸盐，收率为94.56％。LCMS(ESI+):558.8(M+H)。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3S)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004322
使用与实施例41步骤5相同的程序从2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-氧代-6-(4-(((S)-吡咯烷-3-基)氧基)苯基)异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺盐酸盐制备化合物42，为白色固体，收率为15.2％。LCMS(ESI+):886.2(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)12.53(s,1H),10.77(s,1H),7.81-7.75(m,4H),7.61(s,1H),7.49(s,1H),7.26(s,1H),7.11-7.07(m,2H),6.97(s,1H),6.91(s,1H),6.62(d,J＝8.4Hz,1H),6.59(s,1H),6.16(s,1H),5.72-5.65(m,1H),5.26-5.16(m,1H),4.82(d,J＝17.6Hz,1H),4.24(d,J＝18.0Hz,2H),4.04-3.99(m,2H),3.98-3.97(m,1H),3.72-3.61(m,2H),3.61-3.45(m,6H),2.78-2.71(m,5H),2.12-2.05(m,5H),1.92-1.84(m,2H),1.69-1.64(m,4H)
实施例43.
(2RS)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物43)的合成
Figure BDA0003698737280004331
步骤1：(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
使用类似于中间体2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐步骤1所用的程序，使用(2S,4R)-1-(叔-丁氧基羰基)-4-氟吡咯烷-2-羧酸(CAS#203866-14-2)代替(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，以定量收率获得(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。LCMS(ESI+):304.1(M+H)
步骤2：3-((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)-3-氧代丙酸乙酯三氟乙酸盐
将(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(11克，36mmol)溶解在二氯甲烷(150mL)中并加入三氟乙酸(50mL)。反应混合物于22℃搅拌2小时，并蒸发挥发物，得到3-((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)-3-氧代丙酸乙酯三氟乙酸盐(7.36g，36mmol，定量收率)。LCMS(ESI+):204.1(M+H)。
步骤3：(R)-2-(6-氟-3-硫代-2,5,6,7-四氢-3H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
使用类似于中间体2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐步骤3所用的程序从3-((2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-基)-3-氧代丙酸乙酯三氟乙酸盐获得(R)-2-(6-氟-3-硫代-2,5,6,7-四氢-3H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯，收率为88％。LCMS(ESI+):245.1(M+H)
步骤4：(R)-2-(6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
使用类似于中间体2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯烷[1,2-c]咪唑基-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐的合成步骤4所用的程序获得(R)-2-(6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯，收率为47％。LCMS(ESI+)m/z＝213[M+H+],1H-NMR(400MHz,CDCl3:7.51(br.s,1H),5.79(d,J＝51Hz,1H),4.30-4.09(m,4H),3.59(br,s,2H),3.25-3.02(m,2H),1.28(t,J＝6.7Hz,3H)。
步骤5：2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004341
使用类似于中间体2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐步骤5所用的程序从(R)-2-(6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯获得2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯，收率为77.5％。LCMS(ESI+):242.1(M+H+)
步骤6：2-氨基-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004342
使用类似于中间体2-氨基-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二盐酸盐步骤6所用的程序从2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-羟基亚氨基-乙酸乙酯获得2-氨基-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酸乙酯二盐酸盐，收率为29％。LCMS(ESI+):228.1(M+H)。
步骤7：2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸酯
Figure BDA0003698737280004343
将2-氨基-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酸乙酯二盐酸盐(3.9g，4.02mmol)溶解在DMF(10mL)中。加入2-(溴甲基)-3-氟-5-碘-苯甲酸甲酯(1.20g，3.22mmol)，然后加入N-乙基-N-异丙基-丙烷-2-胺(2.08g，16.08mmol，2.80mL)。反应混合物于室温搅拌30分钟。将反应混合物于80℃加热4小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。分离出有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(40g柱子，0％至25％的甲醇/乙酸乙酯)。蒸发纯级分，得到2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(951mg，1.95mmol，收率48.55％)。LCMS:1.253min.,MS(ESI+):488(M+H)
步骤8：4-[4-[2-[2-乙氧基-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯烷[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004351
将2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(951mg，1.95mmol)和4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(833.70mg，2.15mmol)混合在水(2.5mL)和1,4-二噁烷(7.5mL)中。加入Pd(dppf)Cl2(99.97mg，136.63μmol)和碳酸钾(269.75mg，1.95mmol，117.80μL)，并将反应混合物在超声下用氮气脱气15分钟。将反应混合物于80℃加热4小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(40g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。蒸发纯级分，得到4-[4-[2-[2-乙氧基-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯烷[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(436mg，701.33μmol，收率35.93％)。LCMS(ESI+):622.2(M+H)/522(M-Boc+H)
步骤9：[2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280004361
将4-[4-[2-[2-乙氧基-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(435mg，699.73μmol)溶解在乙醇(5mL)中，冷却至0℃并加入1M氢氧化锂(1M，699.73μL)。将反应混合物搅拌3小时。将粗残余物溶解在具有0.5mL苯的二氯甲烷中并减压蒸发，然后经受高真空，得到[2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酰基]氧基锂(410mg，683.84μmol，收率97.73％)。LCMS(ESI+):594.2(M+H,游离酸)。
步骤10：4-[4-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004362
将[2-[6-[4-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酰基]氧基锂(410mg，683.84μmol)和噻唑-2-胺(82.18mg，820.61μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(265.15mg，2.05mmol，357.34μL)，并加入HATU(312.02mg，820.61μmol)，将反应混合物搅拌4小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。蒸发纯级分，得到4-[4-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(315mg，419.54μmol，收率61.35％)。LCMS(ESI+):676.2(M+H)。
步骤11：2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
步骤11：(2RS)-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004371
向4-[4-[7-氟-2-[(1RS)-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(25mg，37μmol)在二氯甲烷(0.5ml)中的溶液中加入4M的HCl/二噁烷(46.2μl，185μmol，当量数：5)。反应混合物于室温搅拌3小时。将反应混合物浓缩至干，得到呈灰白色固体的粗制(2RS)-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(22.6mg，36.9μmol，99.7％)。MS:m/e＝576.4([M+H]+)。
步骤12：2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280004372
于室温向2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(543mg，1.35mmol，当量数：1)在乙酸乙酯(8ml)中的溶液中加入在1,4-二噁烷中的4M氯化氢溶液(6.3g，6ml，24mmol，当量：17.7)并继续搅拌过周末。通过过滤收集产物，用乙酸乙酯洗涤并在高真空下干燥，得到呈淡红色固体的2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(537mg，1.27mmol，收率93.6％)。MS:m/e＝346.2([M+H]+)。
步骤13：(2RS)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004381
使用类似于实施例1步骤6中描述的化学方法从(2RS)-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(实施例10，步骤1)和2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(实施例10，步骤2)开始获得呈淡黄色固体的标题化合物化合物43，MS:m/e＝903.7([M+H]+)。
实施例44.
2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物44)的合成
步骤1：2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004391
将4-[4-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(315mg，466.15μmol)溶解在甲醇(3mL)中并加入在二噁烷中的4.0M氯化氢溶液(4M，5.6mmol，1.40mL)。将反应混合物于40℃加热4小时，反应完成。减压蒸发挥发物。使该物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(237mg，387.20μmol，收率83.06％)。LCMS(ESI+):576.2(M+H)
步骤2：2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004392
将2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(63mg，102.93μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(51.59mg，108.07μmol)混合在DMAc(0.6mL)中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(66.51mg，514.63μmol，89.64μL)，并加入HATU(50.88mg，133.80μmol)，在温热的同时将反应混合物搅拌4小时。将混合物进样到50g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水+0.1％TFA水洗脱梯度纯化。汇集所需级分并在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。蒸发纯级分；将固体物质溶解在乙腈:水(1:1)中，冷冻并冻干，得到化合物44(22mg，23.41μmol，收率22.74％)。LCMS(ESI+):921.2(M+H)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.56(d,J＝6.7Hz,1H),10.77(s,1H),7.89–7.72(m,2H),7.68(d,J＝4.8Hz,2H),7.49(dd,J＝3.6,2.0Hz,1H),7.26(dd,J＝3.6,1.8Hz,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,2H),6.98(t,J＝8.8Hz,1H),6.56–6.31(m,2H),6.17(d,J＝5.1Hz,1H),5.99(d,J＝7.7Hz,1H),5.82(d,J＝51.1Hz,1H),4.82(dd,J＝17.6,6.0Hz,1H),4.45–4.16(m,4H),4.08(q,J＝5.3Hz,1H),3.75(s,2H),3.62(s,2H),3.26–3.18(m,2H),3.19–3.09(m,3H),3.01–2.83(m,2H),2.82–2.52(m,2H),2.26–2.01(m,4H),1.85(qd,J＝12.1,4.6Hz,1H),1.65(m,4H)。
实施例45.
2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物45)的合成
Figure BDA0003698737280004401
将2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(120mg，196.05μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-3a,7a-二氢吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(83.10mg，196.05μmol)混合在DMF(1.2mL)中。将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(170.74μL，980.24μmol)，并加入HATU(96.91mg，254.86μmol)。在温热的同时将反应混合物搅拌4小时。将混合物进样到50g C18柱子上并使用0％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱梯度纯化。汇集所需级分并在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。蒸发纯级分，得到化合物45(49mg，50.92μmol，收率25.97％)。LCMS(ESI+):943.3(M+H+),LCMS(ESI-):941.1(M-H),1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),10.53(s,1H),7.99–7.61(m,5H),7.56(d,J＝8.5Hz,1H),7.51–7.45(m,1H),7.44(s,1H),7.22(s,1H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),7.04(dd,J＝8.6,1.3Hz,1H),6.15(s,1H),5.95–5.66(m,1H),4.86(d,J＝17.6Hz,1H),4.47–4.07(m,3H),3.97(s,3H),3.90(t,J＝6.7Hz,2H),3.78(s,2H),3.64(s,2H),3.29–3.08(m,4H),3.13–2.84(m,3H),2.75(t,J＝6.7Hz,2H),2.72–2.55(m,1H),2.18(t,J＝10.9Hz,2H),1.97–1.55(m,4H)。
实施例46.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物46)的合成
步骤1：7-(4-溴苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004411
将1-溴-4-碘-苯(1.25g，4.40mmol)和2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(453mg，2.00mmol)混合在甲苯(10mL)中。加入叔丁醇钠(423.19mg，4.40mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(146.46mg，200.16μmol)，反应混合物用氮气脱气。将反应混合物于65℃加热60小时。将反应混合物干法装填在硅胶上，并使用0％至100％的乙酸乙酯:己烷梯度纯化产物。蒸发纯级分，得到呈白色固体的7-(4-溴苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(452mg，1.19mmol，收率59.22％)。LCMS(ESI+):381.1/383.1(M+H,溴模式)。
步骤2：7-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004421
在圆底烧瓶中，将7-(4-溴苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(452.00mg，1.19mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(391.32mg，1.54mmol)混合在1,4-二噁烷(6mL)中。反应混合物用氮气流脱气，并加入乙酸钾(349.01mg，3.56mmol，222.30μL)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(48.40mg，59.27μmol)。将反应混合物置于氮气氛下并在搅拌下于80℃加热16小时。将反应混合物冷却，减压蒸发，粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化(5％至50％的乙酸乙酯/己烷洗脱剂梯度)。蒸发所需级分，得到呈白色固体的7-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-甲酸叔丁酯(321mg，749.35μmol，收率63.22％)。LCMS(ESI+):428.4/429.4/430.4(M+H,Br模式)。
步骤3：7-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004422
使用类似于实施例5步骤1的程序，使用7-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯代替4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯，从2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯获得7-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯。LCMS(ESI+):644.2(M+H+)
步骤4：2-(6-(4-(2-(叔-丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂
Figure BDA0003698737280004431
使用类似于实施例5步骤2的程序从7-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯获得2-(6-(4-(2-(叔-丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂。LCMS(ESI+):616.2(M+H)。
步骤5：7-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004441
使用类似于实施例5步骤3的程序从2-(6-(4-(2-(叔-丁氧基羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂获得7-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯。LCMS(ESI+):698.3(M+H)。
步骤6：2-(6-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004442
使用类似于实施例5步骤4所用的程序获得2-(6-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺盐酸盐。LCMS(ESI+):598.2(M+H+)
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280004451
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(0.117g，184.49μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(77.10mg，212.17μmol)混合在DMF(2mL)中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(119.22mg，922.47μmol，160.67μL)，并加入HATU(98.21mg，258.29μmol)，将反应混合物搅拌4小时。将混合物进样到50g C18柱子上并使用0％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱梯度纯化。汇集纯级分并在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。蒸发纯级分；将固体物质溶解在乙腈:水(1:1)中，冷冻并冻干，得到化合物46(36mg，收率21％)。LCMS(ESI+):943.2(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.77(s,1H),7.73(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.06(d,J＝8.7Hz,2H),7.00(t,J＝8.8Hz,1H),6.54–6.32(m,2H),6.16(s,1H),6.00(d,J＝7.7Hz,1H),4.81(d,J＝17.7Hz,1H),4.42–4.27(m,1H),4.23(d,J＝17.7Hz,1H),3.98(s,3H),3.63(s,2H),3.25(s,5H),3.01(s,2H),2.92(d,J＝10.8Hz,2H),2.84–2.62(m,2H),2.63–2.53(m,2H),2.09(d,J＝11.6Hz,4H),1.95–1.72(m,5H),1.72–1.50(m,4H)。
实施例47.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物47)的合成
步骤1：6-(4-溴苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004461
将1-溴-4-碘-苯(9.06g，32.01mmol)和2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐(6.49g，13.34mmol)悬浮在甲苯(48mL)中，并将反应混合物用氮气流脱气。加入叔丁醇钠(12.82g，133.39mmol)，在氮气氛下对反应混合物进行超声处理，直至固体大部分溶解并且溶液均匀。加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(1.95g，2.67mmol)，并将反应混合物在氮气下于90℃加热16小时。溶液通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤并减压蒸发滤液。粗残余物通过硅胶色谱法纯化，使用0％至50％的乙酸乙酯/己烷洗脱剂梯度，得到6-(4-溴苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(6.25g，17.69mmol，收率66.32％)。LCMS(ESI+):353/355(M+H,Br模式),1H-NMR(400MHz,CDCl3):7.31(d,J＝8.4Hz,2H),6.34(d,J＝8.4Hz,2H),4.11(s,4H),3.96(s,4H),1.47(s,9H)。
步骤2：6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004462
向6-(4-溴苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(6.2g，17.55mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(5.79g，22.82mmol)和乙酸钾(5.17g，52.65mmol，3.29mL)在1,4-二噁烷(48mL)中的溶液中加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷(716.65mg，877.56μmol)并将混合物于80℃搅拌16小时。将混合物冷却并通过硅藻土垫过滤，然后减压浓缩。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(0％至50％的乙酸乙酯/己烷)，得到6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(6.32g，15.79mmol，收率89.95％)。LCMS(ESI+):MS(ESI+):400.3/401.3/402.3(M+H,硼模式)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.48(d,J＝8.3Hz,2H),6.38(d,J＝8.3Hz,2H),4.03(s,4H),3.96(s,4H),1.39(s,9H),1.26(s,12H)。
步骤3：6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004471
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(1.57g，3.35mmol)和6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基l]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.74g，4.35mmol)溶解在二噁烷(10mL)中并加入tBuXPhos(422.40mg，669.16μmol)，然后加入溶解在水(2.5mL)中的碳酸钠(780.16mg，7.36mmol)。混合物用氩气脱气并加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(293.69mg，401.49μmol)。将反应密封并在加热块上于80℃加热4小时。浓缩混合物并通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-100％的乙酸乙酯/己烷)，得到呈黄色油的6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.8g，2.92mmol，收率87.38％)。LCMS(ESI+):616.2(M+H)
步骤4：[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280004481
以与实施例5步骤2相似的方式以定量收率制备[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂。LCMS(ESI+):588.3(M+H)
步骤5：6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004482
将噻唑-2-胺(106.29mg，1.06mmol)和[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(600mg，1.01mmol)混合在DMAc(5mL)中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(522.56mg，4.04mmol，704.26μL)，并加入HATU(499.65mg，1.31mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。将反应混合物温热至20℃并搅拌2小时。用饱和NaHCO3水溶液稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。该粗物质通过硅胶色谱法纯化(0-20％的甲醇/二氯甲烷)，得到6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(630mg，940.63μmol，收率93.06％)。LCMS(ESI+):670.3(M+H)。
步骤6：2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280004491
将6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(86mg，128.40μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入三氟乙酸(585.64mg，5.14mmol，395.70μL)。将反应混合物搅拌2小时。在搅拌下将反应混合物逐滴加到MTBE(10mL)中。让沉淀物沉降，倾析上清液并弃去。使所得固体经受高真空，得到2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(107mg，134.14μmol，定量收率)。LCMS(ESI+):564.2(M+H)
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004501
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(113mg，165.28μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(91.12mg，198.34μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(106.81mg，826.42μmol，143.94μL)，并加入HATU(81.70mg，214.87μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和所需级分并用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中，并通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发所需级分，然后溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入4mL水+4mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物47(56mg，59.31μmol，收率35.88％)。LCMS(ESI+):897.4(M+H),LCMS(ESI-):895.3(M-H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),10.69(s,1H),7.67(s,1H),7.63(d,J＝10.7Hz,2H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.54(s,1H),7.42(d,J＝3.5Hz,1H),7.19(d,J＝3.6Hz,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),6.54(d,J＝8.3Hz,2H),6.47(d,J＝8.3Hz,2H),6.08(s,1H),5.57(d,J＝7.4Hz,1H),4.73(d,J＝17.7Hz,1H),4.36(s,2H),4.30–4.07(m,2H),4.01(s,2H),3.96(s,6H),3.91(m,1H),2.92(s,2H),2.82(m,2H),2.76–2.58(m,2H),2.56–2.46(m,1H),2.01(m,3H),1.80(m,1H),1.55(m,4H)。
实施例48.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物48)的合成
Figure BDA0003698737280004511
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(40mg，58.51μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(33.52mg，70.21μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(37.81mg，292.54μmol，50.95μL)，并加入HATU(28.92mg，76.06μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和所需级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中，并通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发所需级分，然后溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物48(27.9mg，30.19μmol，收率51.59％)。LCMS(ESI+):915.3(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),10.77(s,1H),7.74(d,J＝1.3Hz,1H),7.70(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.5Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),7.01(t,J＝8.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.4Hz,2H),6.50–6.34(m,2H),6.15(s,1H),5.99(d,J＝7.7Hz,1H),4.79(d,J＝17.7Hz,1H),4.43(s,2H),4.30(ddd,J＝12.1,7.7,4.8Hz,1H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.08(s,2H),4.02(s,3H),4.01–3.87(m,2H),3.16–2.83(m,4H),2.83–2.64(m,2H),2.64–2.52(m,1H),2.49–2.38(m,1H),2.22–1.97(m,3H),1.86(qd,J＝12.0,4.5Hz,1H),1.65(s,4H)。
实施例49.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物49)的合成
Figure BDA0003698737280004521
将2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(52.89mg，125.36μmol)溶解在DMF(0.5mL)中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(40.50mg，313.40μmol，54.59μL)。加入HATU(35.75mg，94.02μmol)并将反应混合物于35℃搅拌10分钟。将溶液冷却至0℃并加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺双三氟乙酸盐(50mg，62.68μmol，062)。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。将混合物进样到50g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水+0.1％TFA水洗脱梯度纯化。汇集所需级分并在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。蒸发所需级分，得到化合物49(35mg，37.35μmol，收率59.59％)。LCMS(ESI+):937.2(M+H),LCMS(ESI-):935.2(M-H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.45(s,1H),10.46(s,1H),7.67(s,1H),7.63(d,J＝11.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,2H),7.54(s,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),7.42(d,J＝3.6Hz,1H),7.38(s,1H),7.19(d,J＝3.5Hz,1H),6.99(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝8.5Hz,2H),6.08(s,1H),4.72(d,J＝17.7Hz,1H),4.39(s,2H),4.15(d,J＝17.6Hz,1H),4.02(s,2H),3.97(s,3H),3.97–3.91(m,1H),3.90(s,3H),3.84(t,J＝6.7Hz,2H),3.03–2.79(m,4H),2.68(t,J＝6.6Hz,3H),2.60–2.45(m,1H),2.38–2.25(m,1H),2.19–2.02(m,2H),1.99–1.85(m,1H),1.73(s,5H)。
实施例50.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物50)的合成
Figure BDA0003698737280004531
于0℃向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-5-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(43.53mg，95.07μmol)在DMF(0.8mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(47.26mg，365.67μmol，63.69μL)。于0℃加入HATU(30.59mg，80.45μmol)并将混合物于环境温度搅拌10分钟。然后，加入溶解在DMF(0.4mL)中的2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(50mg，73.13μmol)。将反应混合物搅拌30分钟。将混合物进样到50g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水+0.1％TFA水洗脱梯度纯化。汇集所需级分并在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。蒸发纯级分，得到呈灰白色固体的化合物50(30.3mg，29μmol，收率41％)。LCMS(ESI+):973.2(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),10.48(s,1H),7.67(d,J＝1.4Hz,1H),7.63(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.6Hz,2H),7.54–7.48(m,3H),7.41(d,J＝3.5Hz,1H),7.19(d,J＝3.6Hz,1H),7.03(d,J＝8.5Hz,1H),6.51–6.46(m,2H),6.08(s,1H),4.72(d,J＝17.7Hz,1H),4.37(s,2H),4.15(d,J＝17.7Hz,1H),4.06–3.94(m,6H),3.96–3.88(m,5H),3.85(t,J＝6.7Hz,2H),3.19–3.07(m,4H),2.92(d,J＝10.8Hz,1H),2.76–2.65(m,3H),2.65–2.55(m,1H),2.51–2.44(m,1H),2.43–2.33(m,3H),2.20(dd,J＝27.1,14.4Hz,1H),1.77(m,1H)。
实施例51.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(异构体1，化合物51)的合成
Figure BDA0003698737280004541
向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐异构体1(47.67mg，114.09μmol)(47.67mg，114.09μmol)在DMF(0.8mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(56.71mg，438.81μmol，76.43μL)。于0℃加入HATU(36.71mg，96.54μmol)并将混合物于环境温度搅拌10分钟。加入溶解在DMF(0.4ml)中的2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(60mg，87.76μmol)。将反应混合物搅拌2小时。将混合物进样到50g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水+0.1％TFA水洗脱梯度纯化。汇集所需级分并在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。蒸发所需级分并将固体溶解在乙腈:水混合物(1:1，2mL)中。将溶液冷冻并冻干，得到化合物51(19.2mg，20.37μmol，23.2％)。LCMS(ESI+):933.3(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.75(d,J＝1.4Hz,1H),7.71(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.68–7.62(m,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.5Hz,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,2H),6.64(d,J＝8.6Hz,2H),6.55(d,J＝8.6Hz,2H),6.15(s,1H),5.81(d,J＝7.5Hz,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.42(s,2H),4.30(ddd,J＝12.0,7.5,4.8Hz,1H),4.22(d,J＝17.7Hz,1H),4.10(s,2H),4.07–3.93(m,6H),3.21–3.08(m,3H),2.97–2.87(m,2H),2.88–2.67(m,3H),2.67–2.44(m,4H),2.42–2.30(m,1H),2.16–1.97(m,2H),1.89(tt,J＝12.1,6.2Hz,1H),1.71(d,J＝13.1Hz,1H)。
实施例52.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(异构体2，化合物52)的合成
Figure BDA0003698737280004551
使用与2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(异构体1)(实施例51)相同的程序，使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体2)代替2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)，获得化合物52，收率为19.5％。LCMS(ESI+):933.4(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.75(d,J＝1.3Hz,1H),7.71(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,2H),6.64(d,J＝8.4Hz,2H),6.55(d,J＝8.7Hz,2H),6.15(s,1H),5.80(d,J＝7.5Hz,1H),4.80(d,J＝17.7Hz,1H),4.42(s,2H),4.30(ddd,J＝12.0,7.6,4.9Hz,1H),4.22(d,J＝17.7Hz,1H),4.10(s,2H),4.07–3.93(m,6H),3.23–3.07(m,3H),2.97–2.87(m,2H),2.88–2.67(m,3H),2.67–2.44(m,4H),2.43–2.31(m,1H),2.16–1.97(m,2H),1.88(qd,J＝12.2,4.8Hz,1H),1.71(d,J＝13.3Hz,1H)。
实施例53
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺(化合物53)的合成
步骤1：6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004561
于环境温度向1-氧化吡啶-1-鎓-2-胺(43.67mg，396.58μmol)和[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(214mg，360.53μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(186.38mg，1.44mmol，251.18μL)和HATU(178.21mg，468.69μmol)。15分钟后，加入四羟基二硼(96.96mg，1.08mmol)并搅拌30分钟。反应混合物用水:盐水混合物(1:1)稀释，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩。粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化(24克，0％至20％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈黄色固体的6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(175mg，263.66μmol，收率73.13％)。LCMS(ESI+):664.3(M+H)/608.3(M-tBu+H)
步骤2：2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺双-三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280004571
将6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(2-吡啶基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(120mg，180.79μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中。加入三氟乙酸(278μL，3.61mmol)，并将反应混合物于35℃搅拌4小时。减压蒸发反应混合物，冷冻，并经受高真空，得到2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺双-三氟乙酸盐(144mg，181.89μmol，定量收率)。LCMS(ESI+):564.3(M+H)
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280004572
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺双-三氟乙酸盐(111mg，163.80μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(93.84mg，196.56μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(105.85mg，819.01μmol，142.65μL)，并加入HATU(80.97mg，212.94μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化，使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和所需级分并用1:4的异丙醇:氯仿萃取。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中，并通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发所需级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物53(4mg，4.18μmol，收率2.55％，纯度95％)。LCMS(ESI+):909.4(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),10.71(s,2H),8.37–8.09(m,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.89–7.31(m,7H),7.05(dd,J＝7.3,4.8Hz,1H),6.92(q,J＝11.4,10.2Hz,1H),6.48(d,J＝8.3Hz,2H),6.43–6.21(m,2H),6.12(s,1H),5.94(d,J＝7.6Hz,1H),4.72(d,J＝17.7Hz,1H),4.35(s,2H),4.23(dt,J＝12.2,6.8Hz,1H),4.14(d,J＝17.7Hz,1H),4.03(s,2H),3.96(s,4H),3.95–3.77(m,1H),3.11–2.46(m,4H),2.20–1.87(m,2H),1.88–1.24(m,7H)。
实施例54.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺(化合物54)的合成
Figure BDA0003698737280004581
将2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(28.61mg，67.87μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(22.04mg，170.53μmol，29.70μL)，并加入HATU(19.45mg，51.16μmol)，将反应混合物于35℃搅拌10分钟。将反应混合物冷却至0℃。一次性加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺双三氟乙酸盐(27mg，34.11μmol)，并在温热至20℃的同时将反应混合物搅拌2小时。将混合物进样到50g C18柱子上并使用0％至100％的乙腈/水+0.1％TFA水洗脱梯度纯化。用碳酸氢钠(水溶液，水溶液)中和所需级分，并用异丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取该水性混合物两次。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)，得到化合物54(16mg，16.33μmol，收率47.87％)。LCMS(ESI+):931.3(M+H),LCMS(ESI-):929.3(M-H),1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.88(s,1H),10.53(s,1H),8.32(ddd,J＝4.9,1.9,0.9Hz,1H),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.87–7.75(m,1H),7.74(d,J＝1.4Hz,1H),7.69(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),7.67–7.61(m,2H),7.60(s,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(s,1H),7.12(ddd,J＝7.4,4.9,1.0Hz,1H),7.05(dd,J＝8.6,1.3Hz,1H),6.68–6.36(m,2H),6.19(s,1H),4.79(d,J＝17.7Hz,1H),4.45(s,2H),4.21(d,J＝17.7Hz,1H),4.09(s,2H),4.04(s,3H),4.01(s,1H),3.97(s,3H),3.90(t,J＝6.7Hz,2H),3.18–2.87(m,4H),2.87–2.70(m,3H),2.70–2.57(m,1H),2.59–2.50(m,5H),2.31–2.08(m,2H),1.92–1.60(m,4H)。
实施例55.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺(化合物55)的合成
Figure BDA0003698737280004591
向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(45.11mg，98.53μmol)(55.64mg，82.11μmol)/DMF(0.5mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(53.06mg，410.55μmol，71.51μL)。于0℃加入HATU(34.34mg，90.32μmol)并于环境温度搅拌10分钟。加入在DMF(0.4ml)中的2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺三氟乙酸盐。在温热至20℃的同时将反应混合物搅拌2小时。将混合物进样到50gC18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水+0.1％TFA水洗脱梯度纯化。用碳酸氢钠(水溶液，水溶液)中和所需级分，并用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取该水性混合物两次。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)，得到化合物55(47.3mg，48.42μmol，收率58.98％)。LCMS(ESI+):967.3(M+H),1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.96(s,1H),10.61(s,1H),8.38(dd,J＝5.3,1.9Hz,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.86(ddd,J＝8.8,7.3,2.0Hz,1H),7.81(d,J＝1.3Hz,1H),7.76(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.73–7.68(m,2H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.62(s,1H),7.21–7.14(m,2H),6.64–6.59(m,2H),6.26(s,1H),4.86(d,J＝17.7Hz,1H),4.51(s,2H),4.28(d,J＝17.7Hz,1H),4.17(s,2H),4.10(d,J＝5.9Hz,4H),4.08–4.02(m,4H),3.98(t,J＝6.7Hz,2H),3.33–3.21(m,4H),3.06(d,J＝10.9Hz,1H),2.91–2.79(m,3H),2.78–2.68(m,1H),2.64–2.46(m,2H),2.41–2.27(m,1H),1.91(d,J＝12.5Hz,1H)。
实施例56.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物56)的合成
步骤1：4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004611
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(260.05mg，554.18μmol)和[4-[(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]硼酸(239.55mg，748.14μmol)溶解在二噁烷(3.2mL)中并加入tBuXPhos(34.98mg，55.42μmol)，然后加入溶解在水(0.8mL)中的碳酸钠(139mg，1.31mmol)。混合物用氩气脱气并加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(22.30mg，30.48μmol)。将反应密封并在加热块上于80℃加热2小时。浓缩混合物并通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-100％的乙酸乙酯/己烷)。浓缩所需级分并通过硅胶色谱法(0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)再纯化，得到4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(243mg，393.39μmol，收率70.99％)。LCMS(ESI+):618.5(M+H+)。
步骤2：[2-[6-[4-[(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280004612
将4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(243mg，393.39μmol)溶解在乙醇(3mL)中，冷却至0℃并加入氢氧化锂水溶液(1M，393.39μL)。将反应混合物搅拌3小时。加入二氯甲烷和0.5mL苯并浓缩混合物，得到[2-[6-[4-[(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(215mg，360.99μmol，收率91.76％)。LCMS(ESI+):590.4(M+H+)。
步骤3：4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004621
将[2-[6-[4-[(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(260mg，440.94μmol)和噻唑-2-胺(44.16mg，440.94μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。加入N,N-二异丙基乙胺(142.47mg，1.10mmol，192.01μL)和HATU(201.19mg，529.12μmol)并将反应混合物搅拌3小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，水溶液)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)，得到4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(211mg，314.09μmol，收率71.23％)。LCMS(ESI+):672.2(M+H+)。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺二盐酸盐
Figure BDA0003698737280004622
使用与实施例5步骤2相同的程序从4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯以定量收率制备2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺二盐酸盐。LCMS(ESI+):572.1(M+H)
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004631
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺二盐酸盐(60mg，93.08μmol，022)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(42.76mg，93.08μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(60.15mg，465.41μmol，81.06μL)，并加入HATU(46.01mg，121.01μmol)，在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50gC18)上使用5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)洗脱剂梯度进行纯化。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取。减压蒸发有机层，得到固体。通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)该固体。减压蒸发所需级分。将残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物56(10.5mg，11.21μmol，收率12.05％，纯度96％)。LCMS(ESI+):899.4(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),10.76(s,1H),7.98–7.70(m,4H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.5Hz,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,2H),7.37(s,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),6.61(d,J＝8.4Hz,2H),6.16(s,1H),5.64(d,J＝7.5Hz,1H),4.84(d,J＝17.8Hz,1H),4.41–4.16(m,2H),4.15–3.87(m,3H),3.74–3.52(m,4H),3.47(s,2H),3.14(s,2H),2.88(d,J＝10.6Hz,2H),2.84–2.64(m,2H),2.63–2.53(m,1H),2.48–2.19(m,4H),2.22–1.94(m,3H),1.95–1.77(m,1H),1.77–1.63(m,2H),1.63–1.42(m,1H)。
实施例57.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物57)的合成
Figure BDA0003698737280004641
使用与实施例56步骤5(2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺)相同的程序，使用2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐代替2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐，制备化合物57，收率为23％。LCMS(ESI+):917.2(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),7.77(s,1H),7.70–7.61(m,3H),7.59(s,1H),7.44(d,J＝3.5Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,2H),7.33(s,2H),7.19(d,J＝3.6Hz,1H),6.91(t,J＝8.7Hz,1H),6.48–6.27(m,2H),6.09(s,1H),5.80(dd,J＝7.9,3.6Hz,1H),4.74(d,J＝17.9Hz,1H),4.27–4.15(m,2H),3.60–3.31(m,6H),3.12(s,2H),2.89–2.63(m,4H),2.63–2.53(m,1H),2.48–2.22(m,7H),2.07(m,3H),1.95–1.74(m,1H),1.65–1.40(m,4H)。
实施例58.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物58)的合成
Figure BDA0003698737280004651
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺二盐酸盐(48mg，74.47μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(42.66mg，89.36μmol)混合在DMF(0.5mL)中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(57.74mg，446.80μmol，77.82μL)，并加入HATU(36.81mg，96.81μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化，并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％TFA)/水(+0.1％TFA)，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和纯级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)该固体。减压蒸发所需级分。将残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入1mL水+1mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物58(19.2mg，20.73μmol，收率27.84％)。LCMS(ESI+):917.2(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),10.78(s,1H),7.84(s,1H),7.81(d,J＝10.4Hz,1H),7.77(d,J＝7.9Hz,2H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.9Hz,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.98(t,J＝8.7Hz,1H),6.50–6.40(m,2H),6.16(s,1H),5.99(d,J＝7.7Hz,1H),4.84(d,J＝17.8Hz,1H),4.37–4.21(m,2H),4.00(td,J＝14.1,11.6,6.5Hz,2H),3.58(d,J＝13.2Hz,5H),3.47(s,3H),3.14(s,2H),2.88(d,J＝10.9Hz,3H),2.83–2.41(m,4H),2.34(s,3H),2.16–1.99(m,4H),1.87(ddd,J＝25.0,12.1,4.1Hz,1H),1.72–1.51(m,4H)。
实施例59.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物59)的合成
步骤1：2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004661
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺二盐酸盐(109.5mg，160.78μmol)在DMAc(1mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(72.73mg，562.73μmol，98.02μL)和2-溴乙酸叔丁酯(34.50mg，176.86μmol，25.94μL)。将反应混合物于环境温度搅拌。完成后，用氯仿/异丙醇(4:1)稀释反应混合物并加入碳酸氢钠水溶液。分离有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。混合物通过硅胶柱色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇)，得到2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(64mg，93.32μmol，收率58％)。LCMS(ESI+):686.3(M+H)
步骤2：2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙酸双-三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280004662
使用针对实施例10步骤3的程序从2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯以定量收率获得2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙酸双-三氟乙酸盐。LCMS(ESI+):630.3(M+H)
步骤3：N2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004671
将2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙酸三氟乙酸盐(78.79mg，91.86μmol)和(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(37.68mg，110.23μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(83.10mg，643.00μmol，112.00μL)，并加入HATU(45.40mg，119.41μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化并直接进样到RP C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈/水+0.1％TFA，用时12分钟)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和所需级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。通过硅胶柱色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)该固体。减压蒸发所需级分。将残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入1mL水+1mL乙腈，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物59(45mg，48.58μmol，收率52.89％)。LCMS(ESI+):917.3(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.79(s,1H),7.85–7.79(m,2H),7.76(d,J＝7.9Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.42(d,J＝7.9Hz,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(t,J＝8.7Hz,1H),6.48(s,1H),6.45(d,J＝6.3Hz,1H),6.16(s,1H),6.03(d,J＝7.7Hz,1H),4.83(d,J＝17.8Hz,1H),4.48(d,J＝12.9Hz,1H),4.37–4.20(m,2H),4.16(d,J＝12.7Hz,1H),4.07–3.93(m,2H),3.59–3.46(m,3H),3.44–3.23(m,2H),3.13–2.98(m,2H),2.88(t,J＝10.8Hz,2H),2.82–2.36(m,10H),2.14–2.03(m,2H),1.93–1.81(m,1H),1.77–1.57(m,4H),1.42(m,1H)。
实施例60.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物60)的合成
步骤1：4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004681
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(400mg，852.43μmol)和4-[[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(461.86mg，1.15mmol)溶解在二噁烷(4.8mL)中并加入tBuXPhos(53.81mg，85.24μmol)，然后加入溶解在水(1.2mL)中的碳酸钠(198.77mg，1.88mmol，78.56μL)。混合物用氩气脱气并加入Pd(dppf)Cl2(31.18mg，42.62μmol)。将反应密封并在加热块上于80℃加热2小时。浓缩混合物并通过硅胶色谱法用0至100％的乙酸乙酯/己烷纯化。浓缩所需级分并通过硅胶色谱法(0-20％的甲醇/乙酸乙酯)再纯化，得到4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(380mg，616.16μmol，收率72.28％)。LCMS(ESI+):617.3(M+H)
步骤2：[2-[6-[4-[(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280004691
向4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(380mg，616.16μmol)在乙醇(2.8mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，678μmol，678μL)并于环境温度搅拌。将反应混合物蒸发至干，以定量收率得到呈黄色固体的[2-[6-[4-[(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(366mg，616μmol)。LCMS(ESI+):589.2(M+H)
步骤3：4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004692
将[2-[6-[4-[(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(366.37mg，616.16μmol)和噻唑-2-胺(64.79mg，646.97μmol)混合在DMF中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(318.53mg，2.46mmol，429.29μL)，并加入HATU(304.57mg，801.01μmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。用饱和NaHCO3水溶液淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，372.69μmol，收率60.49％)LCMS(ESI+):671.2(M+H)。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004701
将4-[[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，372.69μmol)溶解在甲醇(3mL)中并加入氯化氢溶液(4.0M，在二噁烷中，652.67μL，2.62mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时。减压蒸发挥发物。使物质经受高真空，冷冻至-78℃并解冻，得到致密固体。粗物质通过ISCO柱子纯化(二氯甲烷:甲醇＝100:0-->50:50)，得到2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(157mg，258.59μmol，收率69.38％)。LCMS(ESI+):571.2(M+H)
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004711
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基甲基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(47mg，77.41μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(44.35mg，92.89μmol)混合在DMF中并冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(50.02mg，387.06μmol，67.42μL)，并加入HATU(38.26mg，100.64μmol)，将反应混合物于0℃搅拌1小时。该反应混合物用4-5滴TFA酸化并直接进样到C18柱子(50g C18)上进行纯化(5％至100％的乙腈/水+0.1％TFA)。用NaHCO3水溶液(大约60mL)中和所需级分，用1:4的异丙醇:氯仿混合物萃取两次。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压蒸发，得到固体。通过硅胶色谱法纯化(0％至20％的甲醇/二氯甲烷)该固体。减压蒸发所需级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，将混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到化合物60(44.9mg，48.52μmol，收率62.68％)。LCMS(ESI+):916.3(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.82(s,1H),7.78(d,J＝10.4Hz,1H),7.72(d,J＝7.9Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.98(t,J＝8.6Hz,1H),6.50–6.40(m,2H),6.16(s,1H),5.99(d,J＝7.8Hz,1H),4.83(d,J＝17.8Hz,1H),4.36–4.29(m,2H),4.25(d,J＝17.8Hz,1H),4.12–3.93(m,3H),3.21(d,J＝13.1Hz,1H),3.10–2.84(m,4H),2.82–2.66(m,3H),2.65–2.54(m,6H),2.07(d,J＝10.7Hz,3H),1.94–1.78(m,2H),1.75–1.54(m,6H),1.30–1.13(m,2H),1.02(m,1H)。
实施例61.
(2RS)-2-[4,7-二氯-6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物61)的合成
步骤1：4-溴-3,6-二氯-2-氟苯甲醛
Figure BDA0003698737280004721
将1-溴-2,5-二氯-3-氟苯(CAS 202865-57-4)(9.414g，38.6mmol)在四氢呋喃(70ml)中的溶液在干冰/丙酮浴中冷却。加入2mol/l的LDA/THF(21.2ml，42.5mmol，当量数：1.1)并将混合物于-75℃搅拌20分钟。逐滴加入N,N-二甲基甲酰胺(2.82g，2.99ml，38.6mmol，当量数：1)并搅拌1小时。加入乙酸在乙醚中的溶液(1:1，10ml)。让混合物温热至室温。加入水并用乙酸乙酯萃取混合物。有机层用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到呈淡黄色固体的粗品4-溴-3,6-二氯-2-氟苯甲醛(11.3g，41.6mmol，>100％)。该化合物不经进一步纯化即用于下一步。
步骤2：6-溴-4,7-二氯-1H-吲唑
Figure BDA0003698737280004722
向4-溴-3,6-二氯-2-氟苯甲醛(实施例61，步骤1)(10.5g，38.6mmol)在二噁烷(50ml)中的溶液中加入水合肼(CAS 10217-52-4)(3.86g，3.78ml，77.2mmol，当量数：2.0)。混合物于室温搅拌3天。加入水合肼(3.86g，3.78ml，77.2mmol，当量数：2.0)并将混合物温热至70℃，保持7小时。冷却至室温后，加入水并通过过滤收集沉淀的固体。向固体中加入少量乙腈并搅拌2小时。通过过滤收集固体，用少量乙腈洗涤并干燥，得到呈灰白色固体的6-溴-4,7-二氯-1H-吲唑(7.84g，29.5mmol，76.4％)。MS:m/e＝267.0([M+H]+)。
步骤3：2-(6-溴-4,7-二氯-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004723
将6-溴-4,7-二氯-1H-吲唑(实施例61，步骤2)(7.84g，29.5mmol)和2-溴乙酸乙酯(CAS105-36-2)(9.85g，6.53ml，59mmol，当量数：2)在N,N-二甲基乙酰胺(11.5ml)中的混合物加热至100℃，保持25小时。冷却至室温后，加入冰，通过过滤收集沉淀的固体并用水洗涤。将粗品溶解在沸腾的乙醇中。冷却后过滤固体，用乙醇洗涤并干燥，得到2-(6-溴-4,7-二氯-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯(7.511g，21.3mmol，70.9％)MS:m/e＝267.0([M+H]+)。
步骤4：(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-4,7-氯-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004731
将(叔-丁氧基羰基)-L-脯氨酸(CAS 15761-39-4)(4.93g，22.9mmol，当量数：1.55)在四氢呋喃(25ml)中的溶液在冰浴中冷却。加入羰基二咪唑(3.71g，22.9mmol，当量数：1.55)。移除冷却浴并将混合物搅拌3小时，得到溶液A。将2-(6-溴-4,7-二氯-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯(实施例61，步骤3)(5.2g，14.8mmol，当量数：1)在四氢呋喃(7.5ml)中的溶液冷却至-75℃。在5分钟内逐滴加入2mol/l的LDA/THF(11.4ml，22.9mmol，当量数：1.55)。混合物于-75℃搅拌30分钟。在5分钟内逐滴加入溶液A。让混合物在冷却浴中温热至室温过夜。加入饱和NH4Cl水溶液后，混合物用乙酸乙酯萃取两次。有机层用水洗涤，合并，用硫酸钠干燥并浓缩至干，得到(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-4,7-氯-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(10.06g，>100％)，其不经进一步纯化即用于下一步。MS:m/e＝550.2([M+H]+)。
步骤5：(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004732
将(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-6,7-氯-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(实施例61，步骤4)(10g，18.2mmol)在4M HCl/二噁烷(31.9ml)中的溶液于室温搅拌1小时。将混合物浓缩至干。将残余物溶解在乙醇(87.5ml)中，加入硫氰酸钾(2.35g，24.2mmol，当量数：1.33)和0.5M的HCl/乙醇(36.4ml，18.2mmol，当量数：1)并搅拌36小时。加入水并用乙酸乙酯萃取混合物。有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩并干燥，得到(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(8.534g，17.4mmol，95.6％)，其不经进一步纯化即用于下一步。MS:m/e＝491.1([M+H]+)。
步骤6：(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004741
于40℃，(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例61，步骤5)(8.53g，17.4mmol)在AcOH(32.2ml)中的溶液。冷却至室温后，逐滴加入35％的过氧化氢(6.76g，6.09ml，69.6mmol，当量数：4)。反应混合物于室温搅拌1小时。通过加入饱和亚硫酸钠溶液破坏过量的过氧化氢。在加入一些水(刚好足以溶解所有盐)和乙酸乙酯后，通过小心加入固体碳酸钠使混合物的pH达到9。用乙酸乙酯萃取该混合物。用水洗涤有机层，用硫酸钠干燥并浓缩。粗产物通过色谱法纯化(SiO2，0-100％的乙酸乙酯/庚烷)，得到呈淡黄色固体的(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(3.21g，6.67mmol，40.3％)。MS:m/e＝457.1([M+H]+)。
步骤7：4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]吲唑-6-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004742
将(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸酯(实施例61，步骤6)(200mg，437μmol)和(4-(4-(叔-丁氧基羰基)哌嗪-1-基)苯基)硼酸(CAS457613-78-4)(401mg，1.31mmol，当量数：3)与甲苯(5.3ml)混合，在超声波处理下通过使氩气鼓泡通过混合物来脱气。加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(31.9mg，43.7μmol，当量数：0.1)并将混合物在密封管中于115℃搅拌40分钟。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用半浓碳酸钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。粗物质通过快速色谱法纯化(SiO2，0％至100％的乙酸乙酯:甲醇(3:2)/乙酸乙酯)，得到呈淡棕色固体的4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]吲唑-6-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(191.5mg，29.9mmol，63.1％)。MS:m/e＝639.5([M+H]+)。
步骤8：4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]吲唑-6-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004751
将4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]吲唑-6-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(实施例61，步骤7)(190mg，0.297mmol)溶解在3ml THF中。加入LiOH(1M，在水中)(0.45ml，0.446mmol，1.5当量)。反应混合物于室温搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物。将残余物溶解在3ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入噻唑-2-胺(36mg，0.356mmol，1.2当量)和Hunig’s碱(0.156ml，0.89mmol，3当量)，然后加入HATU(136mg，0.356mmol，1.2当量)。混合物于室温搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯和水萃取。水层用乙酸乙酯反萃取。有机层用水和盐水洗涤。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:甲醇100:0至70:30梯度洗脱，得到呈淡棕色固体的所需产物(94mg，收率44％)，MS:m/e＝691.5([M+H]+)。
步骤9：(2RS)-2-[4,7-二氯-6-(4-哌嗪-1-基苯基)吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280004752
将4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]吲唑-6-基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(实施例61，步骤9)(92mg，0.133mmol)和HCl(4M，在二噁烷中)(1.7ml，6.63mmol，50当量)与3ml二氯甲烷和1.8ml甲醇合并。反应混合物于室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩至干并无需进一步纯化即使用。得到呈淡黄色固体的所需产物(93mg，定量)，MS:m/e＝591.4([M+H]+)。
步骤10：4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004761
将4-(4-氨基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 170011-57-1)(798mg，2.89mmol)溶解在10ml乙腈中。加入碳酸氢钠(485mg，5.77mmol，2当量)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(CAS62595-74-8)(610mg，3.18mmol，1.1当量)。反应混合物于90℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，吸附在
Figure BDA0003698737280004764
上并通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷30:70至100:0梯度洗脱。获得呈灰白色固体的所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg，收率76％)，MS:m/e＝359.4(([M-tBu+H]+)。
步骤11：(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280004762
在冰浴中于0-5℃将4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例61，步骤10)(850mg，2.19mmol)和HCl(4M，在二噁烷中)(5.48ml，21.9mmol，10当量)与10ml甲醇合并。反应混合物于室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩至干并无需进一步纯化即使用。得到呈灰白色固体的所需(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(818mg，定量，纯度＝87％)，MS:m/e＝286.1([M+H]+)。
步骤12：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004763
将(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(实施例61，步骤11)(200mg，0.618mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(CAS 5292-43-3)(157mg，0.119ml，0.803mmol，1.3当量)和Hunig’s碱(399mg，0.539ml，3.09mmol，5当量)在4.0ml N,N-二甲基甲酰胺中的混合物于室温搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯和水萃取。水层用乙酸乙酯反萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷50:50至100:0梯度洗脱。获得呈白色固体的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(164mg，收率66％)，MS:m/e＝402.2([M+H]+)。
步骤13：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280004771
于室温向2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(实施例61，步骤12)(543mg，1.35mmol，当量数：1)在乙酸乙酯(8ml)中的溶液中加入在1,4-二噁烷中的4M氯化氢溶液(6.3g，6ml，24mmol，当量数：17.7)并继续搅拌过周末。通过过滤收集产物，用乙酸乙酯洗涤并真空干燥。获得呈淡红色固体的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(537mg，1.27mmol，收率93.6％)。MS:m/e＝346.2([M+H]+)。
步骤14：(2RS)-2-[4,7-二氯-6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004772
将(2RS)-2-[4,7-二氯-6-(4-哌嗪-1-基苯基)吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(实施例61，步骤9)(50mg，0.08mmol)和2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(实施例61，步骤13)(30mg，0.08mmol，1.0当量)溶解在0.5ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入Hunig’s碱(0.07ml，0.4mmol，5当量)，然后加入TBTU(45mg，0.12mmol，1.5当量)。反应混合物于室温搅拌2小时。用饱和NaHCO3溶液萃取反应混合物并用二氯甲烷:甲醇(9:1)的混合物萃取三次。用水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至80:20梯度洗脱，得到呈灰白色固体的化合物61(17mg，收率23％)，MS:m/e＝920.5([M+H]+)。
实施例62.
(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-[6-[4-[4-氧代-4-[4-[1-氧代-2-[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-4-基]氧基-1-哌啶基]丁基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物62)的合成
步骤1：2-(6-溴-7-氟-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004781
使用类似于实施例1步骤3中描述的化学方法从6-溴-7-氟-1H-吲唑开始得到呈淡黄色固体的标题化合物，MS:m/e＝302.9(M+H+)。
步骤2：(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004782
使用类似于实施例61步骤4中描述的化学方法从2-(6-溴-7-氟-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯(实施例62，步骤1)开始得到呈淡黄色固体的标题化合物，MS:m/e＝498.2/500.2([M+H]+)Br同位素。
步骤3：(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004783
使用类似于实施例62步骤5中描述的化学方法从(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(实施例62，步骤2)开始得到呈淡黄色固体的标题化合物，MS:m/e＝439.2/441.2([M+H]+溴同位素)。
步骤4：(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004784
使用类似于实施例62步骤6中描述的化学方法从(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸酯(实施例62，步骤3)开始得到呈淡棕色无定形固体的标题化合物，MS:m/e＝407.2/409.2([M+H]+)溴同位素。
步骤5：4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004791
使用类似于实施例62步骤7中描述的化学方法从(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例62，步骤4)开始得到呈淡棕色无定形固体的标题化合物，MS:m/e＝590.5([M+H]+)。
步骤6：4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004792
使用类似于实施例62步骤8中描述的化学方法从4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(实施例62，步骤5)和噻唑-2-胺开始获得呈淡棕色固体的标题化合物，MS:m/e＝644.4([M+H]+)。
步骤7：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004801
使用类似于实施例62步骤9中描述的化学方法从4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(实施例62，步骤6)开始获得呈淡棕色固体的标题化合物，MS:m/e＝544.4([M+H]+)。
步骤8：4-[4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-基]丁酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004802
将(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(实施例62，步骤7)(50mg，0.092mmol)和Hunig’s碱(0.080ml，0.046mmol，5当量)溶解在1.0ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入4-溴丁酸叔丁酯(CAS110661-91-1)(33mg，0.024ml，0.147mmol，1.6当量)并将反应混合物于60℃搅拌7小时。反应混合物用水萃取并用乙酸乙酯萃取两次。用水和盐水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至95:5梯度洗脱，得到呈淡棕色油的所需产物(43mg，收率68％)。
步骤9：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-[6-[4-[4-氧代-4-[4-[1-氧代-2-[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-4-基]氧基-1-哌啶基]丁基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004811
将4-[4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-基]丁酸叔丁酯(实施例62，步骤8)(43mg，0.062mmol)溶解在0.3ml二氯甲烷中并加入三氟乙酸(148mg，0.10ml，1.3mmol，20当量)。反应混合物于室温搅拌90分钟。将反应混合物浓缩至干。将残余物和(3RS)-3-[1-氧代-4-(4-哌啶基氧基)异吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(CAS 1061605-57-9)(25mg，0.065mmol，1当量)溶解在0.6ml N,N-二甲基甲酰胺中。加入Hunig’s碱(0.11ml，0.62mmol，10当量)，然后加入TBTU(22mg，0.069mmol，1.1当量)。反应混合物于室温搅拌2小时。用水萃取反应混合物并用二氯甲烷:甲醇(9:1)的混合物萃取三次。用水洗涤有机层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在氨基-硅胶柱上纯化，用二氯甲烷:甲醇100:0至95:5梯度洗脱，得到呈灰白色泡沫的化合物62(30mg，收率50％)，MS:m/e＝955.6([M+H]+)。
实施例63.
(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺的合成
步骤1：4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004812
将4-(4-氨基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS 170011-57-1)(798mg，2.89mmol)溶解在10ml乙腈中。加入碳酸氢钠(485mg，5.77mmol，2当量)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(CAS62595-74-8)(610mg，3.18mmol，1.1当量)。反应混合物于90℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，吸附在
Figure BDA0003698737280004824
上并通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷30:70至100:0梯度洗脱。获得呈灰白色固体的所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg，收率76％)，MS:m/e＝359.4(([M-tBu+H]+)。
步骤2：(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280004821
在冰浴中于0-5℃将4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例63，步骤1)(850mg，2.19mmol)和HCl(4M，在二噁烷中)(5.48ml，21.9mmol，10当量)与10ml甲醇合并。反应混合物于室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩至干并无需进一步纯化即使用。得到呈灰白色固体的所需(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(818mg，定量，纯度＝87％)，MS:m/e＝286.1([M+H]+)。
步骤3：2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004822
将(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(实施例63，步骤2)(200mg，0.618mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(CAS 5292-43-3)(157mg，0.119ml，0.803mmol，1.3当量)和Hunig’s碱(399mg，0.539ml，3.09mmol，5当量)在4.0ml N,N-二甲基甲酰胺中的混合物于室温搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯和水萃取。水层用乙酸乙酯反萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物通过快速色谱法在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯:庚烷50:50至100:0梯度洗脱。获得呈白色固体的所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(164mg，收率66％)，MS:m/e＝402.2([M+H]+)。
步骤4：2-[4-[4-[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280004823
于室温向2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(实施例63，步骤3)(543mg，1.35mmol)在8.0ml乙酸乙酯中的溶液中加入HCl(4M，在二噁烷中)(6.3g，6ml，24mmol，17.7当量)并继续搅拌72小时。通过过滤收集产物，用乙酸乙酯洗涤并高真空干燥。得到呈淡红色固体的所需2-[4-[4-[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(定量收率)，MS:m/e＝346.2([M+H]+)。
步骤5：(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004831
使用类似于实施例1步骤14中描述的化学方法从(2RS)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(实施例62，步骤7)和2-[4-[4-[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(实施例63，步骤4)开始获得呈淡灰色固体的标题化合物化合物63，MS:m/e＝871.7([M+H]+)。
实施例64.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物64)的合成
步骤1：2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004832
将6-溴-4-氟-1H-吲唑(15.0g，69.76mmol)和2-溴乙酸乙酯(46.60g，279.04mmol，30.86mL)在N,N-二甲基甲酰胺(170mL)中于100℃搅拌35小时。将反应混合物冷却至环境温度并倒到碎冰上。用乙酸乙酯(300mL×3)萃取该混合物。合并有机层，用10％的碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，减压浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(10-30％的乙酸乙酯:石油醚)，得到呈灰白色固体的2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯(11g，30.69mmol，收率44％)。LCMS(ESI+)m/z:303.0[M+H],1H-NMR(DMSO-d6)δ8.66(s,1H0,7.77(s,1H),7.08(d,J＝9.9Hz,1H),5.44(s,2H),4.18(q,J＝6.6Hz,2H),1.22(t,J＝6.9Hz,3H)。
步骤2：2-[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004841
将2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯(10g，33.21mmol)溶解在四氢呋喃(100mL)中并将溶液冷却至-78℃。向反应混合物中加入二异丙基酰胺锂(0.7M，在四氢呋喃中，142mL，99.63mmol)，其时观察到黄色沉淀物。将反应混合物在-78℃搅拌1小时。在单独的容器中，将N-(叔-丁氧基羰基)-L-脯氨酸溶解在四氢呋喃(100mL)中并在搅拌下加入1,1'-羰基二咪唑(8.08g，49.82mmol)。将反应混合物搅拌1小时。向含有2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯和二异丙基酰胺锂的250mL圆底烧瓶中缓慢加入N-(叔-丁氧基羰基)-L-脯氨酸/1,1'-羰基二咪唑反应混合物。将反应混合物于-78℃搅拌1小时，温热至室温并于室温搅拌30小时。向反应混合物中加入饱和氯化铵溶液，并分离有机层。水层用乙酸乙酯(250mL×2)萃取两次。合并有机层，用硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(0至100％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈白色固体的2-[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8g，14.45mmol，收率44％)。LCMS(ESI+):m/z 498.0/500.0[M+H,Br模式]
步骤3：2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-氧代-3-吡咯烷-2-基-丙酸乙酯盐酸盐
Figure BDA0003698737280004842
将2-[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-氧代-丙酰基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16g，32.11mmol)溶解在二氯甲烷(160mL)中并将溶液冷却至0℃。于0℃逐滴加入HCl(4.0M，在二噁烷中，32.1mL，128.43mmol)。将反应混合物于室温搅拌9小时。将反应混合物蒸发至干，得到呈黄色固体的2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-氧代-3-吡咯烷-2-基-丙酸乙酯盐酸盐(13.5g，23.29mmol，收率72.55％)。LCMS(ESI+):398.0/400.1(M+H,Br模式)。
步骤4：2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004851
在氮气氛下向2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-氧代-3-[吡咯烷-2-基]丙酸乙酯(6.75g，16.95mmol)在水(75mL)和叔丁醇(24.5mL)中的搅拌溶液中加入硫氰酸钾(2.47g，25.43mmol，1.31mL)。将反应混合物加热至90℃，保持8小时。将反应混合物冷却至室温并用10％的甲醇/二氯甲烷溶液萃取。用无水硫酸钠干燥有机层并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(0至100％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈黄色固体的2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.9g，6.40mmol，收率38％)。LCMS(ESI+)M/z:439.0/441.0[M+H,Br模式],1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),8.69(s,1H),7.81(s,1H),7.11(d,J＝9.6Hz,1H),6.65(s,1H),4.31-4.19(m,2H),3.81-3.69(m,2H),2.62-2.80(m,2H),2.49-2.39(m,2H),1.20(t,J＝6.8Hz,3H)。
步骤5：2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280004852
将2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫代-2,5,6,7-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(5.9g，13.43mmol)溶解在乙酸(56mL)和水(19mL)中。将溶液冷却至-10℃。在氮气氛下逐滴加入过氧化氢(27％w/w水溶液，经稳定，1.37g，40.29mmol，1.25mL)。将反应于-10℃搅拌100分钟。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液。用乙酸乙酯萃取反应混合物。用盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色树胶的2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(4.1g，7.65mmol，收率69％)。LCMS(ESI+)M/z:407[M+H])
步骤6：2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280004861
在100-mL密封管中，将2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.2g，5.40mmol)和4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.52g，6.48mmol)溶解在二噁烷(32mL)和水(8mL)中。加入碳酸钠(1.15g，10.80mmol，452.64μL)并将反应混合物用氮气吹扫5分钟。在氮气氛下加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(379.29mg，540.23μmol)并将管密封。反应在加热块中于90℃搅拌16小时。反应混合物经硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。分离有机层，用盐水洗涤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(1％至5％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈灰白色固体的4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.1g，1.36mmol，收率25.2％)。LCMS m/z:590.0[M+H]
步骤7：2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280004862
将4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.1g，1.87mmol)溶解在乙醇(8mL)、四氢呋喃(8mL)和水(8mL)中。于环境温度加入98％的氢氧化锂一水合物(156.56mg，3.73mmol)并将反应混合物于环境温度进一步搅拌5小时。用硫酸氢钾水溶液将反应混合物调节至pH 5-6并用10％的甲醇-二氯甲烷(100ml×2)萃取混合物。减压浓缩有机层。将所得固体在醚中搅拌，倾析出醚层并弃去，将固体残余物真空干燥，得到呈浅黄色固体的化合物2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(0.75g，1.07mmol，收率57％)。LCMS(ESI+):561.9(M+H)。
步骤8：4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004871
于室温向2-[6-[6-(4-叔-丁氧基羰基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(0.2g，356.12μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中的搅拌溶液中加入羰基二咪唑(115.49mg，712.24μmol)并将混合物搅拌2小时。加入噻唑-2-胺(46.36mg，462.96μmol)并将反应混合物于环境温度搅拌16小时。将反应混合物于50℃再搅拌3小时。用水淬灭反应混合物并用10％的甲醇/二氯甲烷萃取。减压浓缩有机层，残余物通过硅胶色谱法纯化(3％至8％的甲醇/二氯甲烷)，得到4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-甲基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.16g，245μmol，收率69％)。LCMS(ESI+)m/z:644.2(M+H)。
步骤9：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004881
于0℃向4-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.15g，233.02μmol)在二氯甲烷(8mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，0.5mL，2.0mmol)。加入后将反应混合物温度缓慢升高至室温并再搅拌5小时。减压浓缩反应混合物。向固体残余物中加入乙醚(15mL)并将混合物搅拌15分钟。倾析出醚层并弃去。真空干燥固体，得到呈棕色固体的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(0.13g，221.9μmol，收率95.2％)。LCMS(ESI+):m/z544.2(M+H)。
步骤10：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280004882
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(90mg，155.15μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(56.38mg，141.00μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(189.17μL，140.37mg，1.09mmol)。将混合物搅拌10分钟。加入COMU(99.67mg，232.73μmol)，并将反应混合物再搅拌2小时。浓缩反应混合物，残余物通过反相硅胶色谱法纯化(C18，0:100至100:0的乙腈:0.1％乙酸铵/水)。汇集所需级分，冷冻并冻干。残余物通过制备HPLC进一步纯化。(纯化方法：柱子：X-Bridge C8(50X4.6mm)，3.5μm；流动相A：10mM的乙酸铵/milli-q水；流动相B：乙腈)，得到呈灰白色固体的化合物64(26mg，29.04μmol，收率19％)。LCMS(m/z:889.2,[M+H]),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.01–12.66(br.S,1H),10.79(s,1H),8.57(d,J＝2.6Hz,1H),8.28(s,1H),7.99(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.69(d,J＝6.1Hz,2H),7.50(d,J＝3.7Hz,1H),7.39–7.09(m,2H),6.99(t,J＝8.6Hz,2H),6.68(s,1H),6.61–6.26(m,2H),6.00(d,J＝7.8Hz,1H),4.30(dt,J＝11.8,6.2Hz,1H),4.14–3.90(m,2H),3.68(d,J＝30.0Hz,5H),3.58(s,4H),3.22(s,2H),2.94(d,J＝10.7Hz,2H),2.89–2.65(m,1H),2.58(m,4H),2.09(d,J＝8.8Hz,2H),1.91–1.80(m,1H),1.66(s,5H)。
实施例65.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物65)的合成
Figure BDA0003698737280004891
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(0.085g，146.53μmol)和2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(50.61mg，110.16μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(151.51mg，1.17mmol，204.19μL)。将混合物搅拌15分钟。加入COMU(94.12mg，219.80μmol)，将温度缓慢升高至室温并搅拌3小时。浓缩反应混合物，残余物在反相柱(C18)上纯化，用10至50％的乙腈(0.1％TFA)/水(0.1％TFA)梯度洗脱。冻干所需级分，得到干燥固体。加入10％的碳酸氢钠溶液，并用乙酸乙酯(×2)萃取水层。合并有机层，浓缩并冻干，得到呈灰白色固体的化合物65(10mg，9.84μmol，收率6.7％)。LCMS m/z:871.1[M+H],1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,1H),10.78(s,1H),8.58(d,J＝2.6Hz,1H),8.29(d,J＝0.9Hz,1H),8.00(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.70(d,J＝3.7Hz,2H),7.52(d,J＝3.6Hz,1H),7.29(d,J＝3.6Hz,1H),7.20(dd,J＝12.2,1.1Hz,1H),6.98(dd,J＝11.7,8.6Hz,3H),6.71(s,1H),6.61(d,J＝8.1Hz,2H),5.67(d,J＝7.2Hz,1H),4.27(dt,J＝11.9,6.7Hz,1H),4.13–3.91(m,2H),3.62(q,J＝31.7,26.3Hz,9H),3.22(s,2H),2.95(s,1H),2.85–2.69(m,1H),2.64–2.55(m,2H),2.52(s,4H),2.20–2.01(m,2H),1.95–1.79(m,1H),1.78–1.47(m,3H)。
实施例66.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物66)的合成
Figure BDA0003698737280004901
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(0.085g，146.53μmol)和2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(50.76mg，110.24μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(151.51mg，1.17mmol，204.19μL)。将反应混合物搅拌15分钟。然后加入COMU(94.12mg，219.80μmol)并将温度缓慢升高至室温。将反应混合物搅拌3小时。减压浓缩反应混合物。粗残余物在反相柱(C18)上纯化，用10至50％的乙腈(0.1％TFA)/水(0.1％TFA)梯度洗脱。冻干所需级分。残余物通过制备HPLC进一步纯化(纯化方法：柱子：XBRIDGE C8(4.6x50mm)，3.5μm；流动相A：10mM的乙酸铵/水；流动相B：乙腈)，得到呈灰白色固体的化合物66(15.5mg，16.85μmol，收率11.50％)。LCMS(ESI+):m/z 872.1[M+H]；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(br.s,1H),10.80(s,1H),8.57(d,J＝2.6Hz,1H),8.28(s,1H),8.08–7.84(m,2H),7.69(d,J＝4.8Hz,2H),7.50(d,J＝3.6Hz,1H),7.42–7.08(m,2H),7.05–6.79(m,3H),6.69(s,1H),5.93(d,J＝7.8Hz,1H),4.33(dt,J＝12.5,6.0Hz,1H),4.14–3.92(m,2H),3.85–3.44(m,8H),3.21(s,2H),2.93(d,J＝10.7Hz,2H),2.87–2.52(m,2H),2.50–2.40(m,4H),2.17–2.00(m,3H),2.00–1.38(m,5H)。
实施例67.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(化合物67)的合成
Figure BDA0003698737280004911
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(0.075g，129.29μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(71.03mg，142.22μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(133.68mg，1.03mmol，180.16μL)。将反应混合物搅拌5分钟。于0℃加入COMU(83.06mg，193.94μmol)并将反应再搅拌2小时。浓缩反应混合物，残余物通过反相硅胶色谱法纯化(C18，1:1的0.1％乙酸铵/水:乙腈)。冻干所需级分，得到呈灰白色固体的化合物67(38.4mg，41.11μmol，收率32％)。LCMS(ESI-):m/z 909.3[M-H]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),10.54(s,1H),8.57(d,J＝2.6Hz,1H),8.29(d,J＝0.9Hz,1H),8.00(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.70(d,J＝3.8Hz,2H),7.61–7.47(m,2H),7.44(s,1H),7.29(d,J＝3.5Hz,1H),7.20(dd,J＝12.2,1.1Hz,1H),7.13–7.02(m,1H),6.99(d,J＝8.9Hz,1H),6.71(s,1H),4.09–3.98(m,2H),3.97(s,3H),3.91(t,J＝6.6Hz,2H),3.71(d,J＝29.0Hz,4H),3.60(s,5H),3.26(s,3H),3.01(d,J＝10.6Hz,2H),2.89–2.71(m,3H),2.67–2.53(m,2H),2.27–2.12(m,2H),1.89–1.68(m,4H)。
实施例68.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物68)的合成
Figure BDA0003698737280004921
使用类似于实施例64步骤10所用的程序，使用(S)-2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸代替2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸，从2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐合成化合物68，收率为35％。LCMS(ESI+):889.3(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),10.79(s,1H),8.57(d,J＝2.6Hz,1H),8.28(d,J＝0.9Hz,1H),7.99(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.80–7.57(m,2H),7.51(d,J＝3.6Hz,1H),7.27(s,1H),7.20(dd,J＝12.1,1.1Hz,1H),7.00(t,J＝8.6Hz,2H),6.70(s,1H),6.55–6.25(m,2H),6.00(d,J＝7.7Hz,1H),4.30(ddd,J＝12.3,7.7,4.8Hz,1H),4.13–3.90(m,2H),3.69(d,J＝30.1Hz,4H),3.58(s,4H),3.22(s,2H),2.94(d,J＝10.7Hz,2H),2.90–2.52(m,3H),2.21–1.96(m,4H),1.91–1.76(m,1H),1.66(s,4H)。
实施例69.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物69
步骤1：6-(5-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-氟-2H-吲唑-6-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280004931
在50-mL密封管中，向在1,4-二噁烷(8mL)中的2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例2步骤4，0.83g，2.04mmol)和[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]硼酸(780.59mg，2.45mmol)中加入在水(2ml)中的碳酸钠(540.05mg，5.10mmol，213.46μL)。反应混合物用氮气脱气10分钟。在氮气氛下加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(166.43mg，203.81μmol)和2-二-叔-丁基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(86.55mg，203.81μmol)并将混合物用氮气再脱气5分钟。将管密封并在加热块中于80℃搅拌5小时。反应混合物经硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将有机层与水层分离。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]-庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.43g，630.35μmol，收率30.93％)。LCMS(ESI+)m/z:602.3[M+H]+
步骤2：2-(6-(6-(6-(叔-丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂的合成
Figure BDA0003698737280004941
于环境温度向6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.42g，698.06μmol)在乙醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，0.9mL，907.47μmol)并将反应混合物搅拌3小时。减压浓缩混合物，得到固体，加乙醚对其进一步研磨，倾析并干燥，得到呈棕色固体的2-(6-(6-(6-(叔-丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂(0.38g，529.13μmol，收率93.9％)。LCMS(ESI+)m/z:574.3[M+H]+
步骤3：6-(5-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-2H-吲唑-6-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004942
于0℃向[2-[6-[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(0.37g，638.43μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(495.07mg，3.83mmol，667.21μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟-磷酸盐(364.12mg，957.64μmol)。加入噻唑-2-胺(95.90mg，957.64μmol)并将反应混合物于室温搅拌16小时。向反应混合物中加入冰冷水并过滤获得的固体，用水洗涤，并通过空气流干燥。粗固体残余物通过使用二氧化硅的快速色谱法纯化(0-8％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.23g，323.74μmol，收率50.71％)。LCMS(ESI+)m/z:656.3[M+H]+。
步骤4：2-(6-(6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺三氟乙酸的合成
Figure BDA0003698737280004951
于0℃向6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.12g，183.00μmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入溶解在二氯甲烷(2mL)中的三氟乙酸(83.46mg，731.99μmol，56.39μL)。将反应混合物的温度缓慢升高至环境温度并搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，加乙醚于-40℃研磨，倾析得到呈棕色固体的2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐。LCMS(ESI+)m/z:556.2[M+H]+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280004961
向处于0℃的2-[4-[4-[[(3S)-2，6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(48.84mg，122.14μmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(138.96mg，1.08mmol，187.28μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(76.65mg，201.60μmol)。加入2-[6-[6-(2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(0.09g，134.40μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌2小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(50g)上进行纯化，用(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时15分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)洗脱。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物69(60mg，64.82μmol，收率48.23％)。LCMS(ESI+)m/z：899.3[M-H]+。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6：δ12.81(s，1H)，10.79(s，1H)，8.33(t，J＝Hz，2H)，7.79(d，J＝10.00Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.59(d，J＝8.80Hz，1H)，7.52(d，J＝3.60Hz，1H)，7.28(d，J＝3.60Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.60，6.80Hz，1H)，7.02(t，J＝8.40Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.53(d，J＝8.80Hz，1H)，6.48(m，2H)，6.01(d，J＝7.60Hz，1H)，4.45(s，2H)，4.31 4.30(m，1H)，4.16 4.14(m，4H)，4.09(s，2H)，4.02(m，2H)，3.00(s，2H)，2.92 2.89(m，2H)，2.68 2.84(m，2H)，2.52 2.60(m，4H)，2.07 2.10(m，3H)，1.88(m，1H)，1.69 1.65(m，4H)。
实施例70.
2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[3-(2，4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3，3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物70
步骤1：3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004971
于0℃向3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5g，10.6mmol)在二氯甲烷(25mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(3.23g，31.9mmol，4.44mL)。向反应混合物中逐滴加入三氟甲磺酸酐(4.50g，15.9mmol，2.68mL)。将反应于环境温度搅拌16小时。然后，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(100％的己烷到4:1的己烷:乙酸乙酯)，得到3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g，2.29mmol，收率21％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ6.59(s,1H),4.29(q,J＝4.3Hz,2H),4.04(t,J＝11.0Hz,2H),1.51(s,9H)。
步骤2：1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280004972
向1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1.0g，3.09mmol)和双(频哪醇合)二硼(1.18g，4.64mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中加入乙酸钾(911mg，9.28mmol)和Pd(dppf)Cl2(113mg，155μmol)。将混合物于85℃在氮气氛下搅拌16小时。将混合物冷却至环境温度并通过硅胶垫过滤。滤饼用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法纯化(100％的己烷到100％的乙酸乙酯)，得到1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(1.1g，2.97mmol，收率96％)。LCMS(ESI+):371(M+H)。
步骤3：4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004973
向1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(677mg，1.83mmol)和3,3-二氟-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(560mg，1.52mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(2.5mL)中的溶液中加入碳酸钠(485mg，4.57mmol)并用N2气对溶剂鼓泡10分钟。加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(111mg，152μmol)并将反应混合物于55℃搅拌2小时。冷却反应混合物并用水/乙酸乙酯稀释。萃取后，有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(100％的己烷到100％的乙酸乙酯)，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(480mg，1.04mmol，收率68％)。LCMS(ESI+):462.2(M+H)
步骤4：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004981
向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氢吡啶-1-甲酸叔丁酯(478mg，1.04mmol)在甲醇(10.3mL)中的溶液中加入10％钯/碳(487型，干)(331mg，311μmol)，混合物在氢气球气氛下于环境温度搅拌24小时。取走氢气球，混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，浆液再搅拌24小时。然后，将混合物通过硅藻土垫过滤，使用二氯甲烷/甲醇(3:1)的溶液洗涤，并浓缩，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(450mg，收率94％)。LCMS(ESI+):408.2(M-叔丁基+H)。
步骤5：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶盐酸盐
Figure BDA0003698737280004982
使用一般方法B进行叔丁氧基羰基基团的去除，从4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯以定量收率获得4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶盐酸盐。LCMS(ESI+):354.2(M+H)
步骤6：2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280004991
将1-(6-(3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐(1.75g，4.38mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中并加入N,N-二异丙基乙胺(3.43mL，2.55g，19.7mmol)。将混合物冷却至0℃，并加入2-溴乙酸叔丁酯(770μL，1.02g，5.25mmol)。将混合物于0℃搅拌4小时。反应用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。浓缩有机层并通过硅胶色谱法纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈白色固体的2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(1.90g，3.97mmol，90.6％)。LCMS(ESI+):478.3(M+H)+
步骤7：2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280004992
于0℃向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(100mg，209.42μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(1.48g，1.0mL，12.98mmol)。将反应混合物于环境温度搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到呈灰白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(90mg，155.00μmol，收率74.01％)。LCMS(ESI+):422.2(M+H)+
步骤8：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005001
向处于0℃的2-[4-[3-(2，4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3，3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(48.45mg，90.50μmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(108.08mg，836.26μmol，145.66μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(39.75mg，104.53μmol)。加入2-[6-[6-(2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(实施例9步骤4，70mg，104.53μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌2小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(50g)上进行纯化，同时洗脱(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物70(41mg，42.08μmol，收率40.25％)。LCMS(ESI+)m/z：959.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6：δ12.85(s，1H)，10.58(s，1H)，8.34(dd，J＝9.60，2.80Hz，2H)，7.80(d，J＝9.60Hz，1H)，7.69(s，1H)，7.61(s，1H)，7.58(d，J＝6.00Hz，2H)，7.527.51(m，1H)，7.29(bs，1H)，7.147.09(m，2H)，6.72(bs，1H)，6.55(d，J＝8.80Hz，1H)，4.45(s，2H)，4.164.12(m，6H)，4.044.02(m，2H)，4.00(s，3H)，3.93(t，J＝6.80Hz，2H)，3.263.23(m，4H)，3.012.98(m，1H)，2.842.83(m，1H)，2.76(t，J Hz，2H)，2.52 2.51(m，2H)，2.50 2.40(m，2H)，2.33 2.30(m，1H)，1.89 1.81(m，1H)(由于水遮蔽，一个质子信号不能观察到)。
实施例71.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物71
步骤1：1-(3-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-酮。
Figure BDA0003698737280005011
向哌啶-4-酮(13g，131.14mmol)、2,4-二氟-1-硝基-苯(20.86g，131.14mmol，14.39mL)在N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(67.80g，524.56mmol，91.37mL)。将反应混合物在加热块中于110℃搅拌16小时。反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用冷水(150mL)洗涤。用盐水溶液(150mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗品。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，用40％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈棕色固体的1-(3-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-酮(9.0g，36.65mmol，收率27.95％)。LCMS(ESI+)m/z:239.1[M+H]+。
步骤2：2-[1-(3-氟-4-硝基苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005012
在圆底烧瓶中装入乙酸叔丁酯(4.39g，37.78mmol，5.09mL)/四氢呋喃(150mL)并将溶液冷却至-78℃。逐滴加入二异丙基酰胺锂(2M溶液，在四氢呋喃中，75.56mmol，38mL)，15分钟加完。溶液于-78℃搅拌1小时。于-78℃向反应混合物中加入1-(3-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(9.00g，37.78mmol)/四氢呋喃(50ml)并在相同的反应温度下搅拌2小时。将反应混合物缓慢温热至-40℃。用氯化铵溶液淬灭反应混合物并用乙酸乙酯(600mL)萃取。用盐水(150mL)洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗产物。粗残余物使用硅胶柱色谱法纯化，用0-50％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈棕色固体的2-[1-(3-氟-4-硝基苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(11.91g，29.56mmol，收率77.28％)。LCMS(ESI+)m/z:355.1[M+H]+。
步骤3：2-[1-(4-氨基-3-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯。
Figure BDA0003698737280005021
向圆底烧瓶中装入2-[1-(3-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(11.91g，33.62mmol)/水(4mL)，加入乙醇(20mL)、Fe粉(9.39g，168.11mmol，1.19mL)、氯化铵(5.40g，100.87mmol，3.53mL)并于70℃搅拌4小时。反应完成后，通过硅藻土过滤反应混合物并用乙酸乙酯(200mL)洗涤。用水(80mL)、碳酸氢钠溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤滤液。用硫酸钠干燥有机层并减压浓缩，得到粗品。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，用70％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈褐色固体的2-[1-(4-氨基-3-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(8.5g，24.63mmol，收率73.26％)。LCMS(ESI+)m/z:325.2[M+H]+。
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005022
在密封管中，向2-[1-(4-氨基-3-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.50g，13.87mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(4.08g，48.55mmol，1.89mL)和3-溴哌啶-2,6-二酮(6.66g，34.68mmol)。将反应管密封并在加热块上于70℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，用冰冷水淬灭，用乙酸乙酯(200ml)萃取并用盐水溶液(50ml)洗涤。收集有机层并减压浓缩，得到粗残余物。粗产物使用快速硅胶色谱法纯化，用0至70％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈绿色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(5g，10.22mmol，收率73.66％)。LCMS(ESI+)m/z:436.3[M+H]+
步骤5：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280005031
向处于氮气下0℃的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(300mg，688.88μmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，1.38mL，201.15mg，5.51mmol)。减压浓缩反应混合物，得到固体残余物。将固体残余物在乙醚中搅拌10分钟，倾析并干燥，得到2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸盐酸盐(250.0mg，581.95μmol，收率84.48％)。LCMS(ESI+)m/z:380.1[M+H]+
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005041
向处于0℃的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(43.47mg，104.53μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(108.08mg，836.26μmol，145.66μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(59.62mg，156.80μmol)。加入2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(实施例9步骤4，0.07g，104.53μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌2小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(50g)上进行纯化，用0％至60％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)洗脱，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的产物化合物71(45mg，48.19μmol，收率46.10％)。LCMS(ESI+)m/z:917.3[M+H]+；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6:δ12.80(s,1H),1081(s,IH),8.338.32(m,2H),7.79(dJ＝9.20Hz,2H),7.69(s,1H),7.59(d,J＝8.80Hz,1H),7.52(d,J＝3.60Hz,1H),7.29(d,J＝3.60Hz,1H),7.12(dd,J＝1.60,Hz,1H),6.74-6.73(m,3H),6.59(d,J＝2.00Hz,1H),6.54(d,J＝8.80Hz,1H),5.04(d,J＝6.00Hz,1H),4.78(s,1H),4.38(s,2H),4.31-4.26(m，lH)，4.15(s，4H)，4.09(s，2H)，4.044.02(m，2H)，3.183.15(m，2H)，2.952.93(m，2H)，2.842.76(m，2H)，2.522.51(m，2H)，2.22(s，2H)，2.092.08(m，1H)，1.98-1.97(m，1H)，1.751.73(m，2H)，1.641.61(m，2H)(水遮蔽)。
实施例72.
2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2，4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3，3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物72
Figure BDA0003698737280005051
向处于0℃的2-[4-[3-(2，4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3，3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(71.07mg，132.74μmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(124.77mg，965.39μmol，168.15μL)。向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(57.59mg，181.01μmol)并搅拌15分钟。加入2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(实施例4步骤9，0.07g，120.67μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌5小时。粗混合物通过C18柱子(50g)进行纯化(0％至60％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时45分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的产物化合物72(49mg，50.45μmol，收率41.81％)。LCMS(ESI+)m/z：947.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.85(s,1H),10.57(s,1H),8.58(d,J＝2.80Hz,1H),8.28(s,1H),8.00(dd,J＝9.00,2.80Hz,1H),7.69(d,J＝8.40Hz,2H),7.60(d,J＝8.40Hz,1H),7.55(s,1H),7.50(s,1H),7.27(bs,1H),7.20(d,J＝12.40Hz,1H),7.10(d,J＝8.80Hz,1H),7.00(d,J＝8.80Hz,1H),6.71(bs,1H),4.01(m,2H),3.99(s,3H),3.92(t,J＝6.80Hz,2H),3.69(s,4H),3.61(s，4H)，3.47 3.44(m，2H)，3.29 3.26(m，2H)，3.05 3.02(m，1H)，2.83(m，1H)，2.76(t,J＝6.80Hz,3H),2.56-2.56(m,3H),2.29(m,1H),1.43(m,1H)(由于水遮蔽，一个质子信号未观察到)。
实施例73
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[6-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物73
步骤1：6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280005061
在50-mL密封管中，向在1,4-二噁烷(40mL)中的2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例2步骤4，1.1g，2.70mmol)和[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]硼酸(1.03g，3.24mmol)中加入在水(10ml)中的碳酸钠(715.73mg，6.75mmol，282.90μL)。反应混合物用氮气脱气10分钟。在氮气氛下加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(220.57mg，270.11μmol)和2-二-叔-丁基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(114.70mg，270.11μmol)并将混合物用氮气再脱气5分钟。将管密封并在加热块中于80℃搅拌5小时。反应混合物经硅藻土过滤并用10％的甲醇/二氯甲烷洗涤。分离有机层，用盐水洗涤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]-庚烷-2-甲酸叔丁酯(650mg，985.26μmol，36.48％)。LCMS(ESI+)m/z:602.3[M+H]+。
步骤2：2-(6-(6-(6-(叔-丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂。
Figure BDA0003698737280005071
于环境温度向6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.65g，1.08mmol)在乙醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)中的搅拌溶液中加入LiOH(1M)(49.86mg，1.19mmol)并再搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到固体，加乙醚对其进一步研磨，倾析并干燥，得到呈棕色固体的2-(6-(6-(6-(叔-丁氧基羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸锂(600mg，852.04μmol，78.87％)。LCMS(ESI+)m/z:574.2[M+H]+。
步骤3：6-(5-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-2H-吲唑-6-基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280005081
于0℃向[2-[6-[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(0.35g，603.92μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(390.25mg，3.02mmol，525.95μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟-磷酸盐(364.12mg，957.64μmol)。10分钟后，加入噻唑-2-胺(60.48mg，603.92μmol)并将反应混合物于室温搅拌16小时。向反应混合物中加入冰冷水并过滤获得的固体，用水洗涤，并干燥。该粗固体残余物通过硅胶色谱法纯化(3-8％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(230mg，310.76μmol，51.46％)。LCMS(ESI+)m/z:656.3[M+H]+。
步骤4：2-(6-(6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺三氟乙酸盐的合成
Figure BDA0003698737280005082
于0℃向6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.20g，305.00μmol)在二氯甲烷(8mL)中的搅拌溶液中逐滴加入溶解在2mL二氯甲烷中的三氟乙酸(278.21mg，2.44mmol，187.98μL)。让反应混合物的温度升至环境温度并搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，加乙醚于-40℃研磨，并倾析，得到呈棕色固体的2-(6-(6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺三氟乙酸盐(190mg，258.19μmol，收率84.65％)。LCMS(ESI+)m/z:554.2[M-H]+。
步骤5：2-[2-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸的合成
Figure BDA0003698737280005091
向在甲醇(4mL)中的2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(0.1g，149.33μmol)和乙醛酸(16.58mg，224.00μmol，12.38μL)中加入催化量的乙酸并于环境温度搅拌4小时。加入甲基吡啶硼烷(23.28mg，224.00μmol)并继续于室温下再搅拌16小时。浓缩反应混合物并在C18反相柱上纯化，用(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)洗脱。冷冻纯级分并冻干，得到呈白色固体的产物2-[2-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(50mg，74.72μmol，收率50.03％)。LCMS(ESI+)m/z:614.2[M+H]+。
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[6-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺的合成。
Figure BDA0003698737280005101
向处于0℃的2-[2-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(0.04g，65.18μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(42.12mg，325.91μmol，56.77μL)。在相同的温度下加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(31.11mg，29.1μL，97.77μmol)。在保持0℃的同时向反应混合物中加入1-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮三氟乙酸盐(34.23mg，71.70μmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌16小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(50g)中进行纯化，同时用(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)洗脱。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的产物化合物73(24mg，23.65μmol，收率36.28％)。LCMS(ESI+)m/z:960.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.81(s,1H),10.58(s,1H),8.32(d,J＝2.80Hz,2H),7.78(d,J＝8.40Hz,1H),7.70(s,1H),7.63-7.56(m,4H),7.52(d,J＝3.60Hz,1H),7.29(d,J＝3.20Hz,1H),7.14-7.07(m,2H),6.72(s,1H),6.54(d,J＝3.60Hz,1H),4.79-4.49(m,1H),4.12-3.98(m,10H),3.93(t,J＝6.40Hz,2H),3.65-3.51(m,5H),2.96-2.79(m,1H),2.77(t,J＝6.40Hz,2H),2.09-1.81(m,1H),1.24(s,2H),1.19-1.06(m,1H)(由于水遮蔽，未观察到质子信号)。
实施例74.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物74
步骤1：1-(2-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-酮
Figure BDA0003698737280005111
向哌啶-4-酮(15.0g，151.31mmol)、1,2-二氟-4-硝基-苯(24.07g，151.31mmol，16.72mL)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(78.22g，605.26mmol，105.42mL)并于110℃加热14小时。反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释并用冷水(150mL)洗涤。用盐水溶液(150mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(40％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈棕色固体的1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(21g，77.93mmol，收率51.50％)。LCMS,m/z:238.9[M+H]+
步骤2：2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280005112
于-78℃向乙酸叔丁酯(1.76g，15.11mmol，2.03mL)在四氢呋喃(25mL)中的搅拌溶液中逐滴加入二异丙基酰胺锂(2M，12.59mL)。反应混合物于-78℃搅拌45分钟。于-78℃向其加入溶解在四氢呋喃(15mL)中的1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(3g，12.59mmol)。反应混合物于-78℃搅拌2小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取该混合物。有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过硅胶(100-200目)柱色谱法纯化(洗脱剂：30％至40％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈淡黄色粘性固体的2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.7g，7.01mmol，收率55.66％)。LCMS:355.1(M+H)+
步骤3：2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005113
向2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.5g，4.23mmol)在乙醇(10mL)和水(2mL)中的溶液中加入铁粉(1.18g，21.16mmol，150.37μL)和氯化铵(679.26mg，12.70mmol，443.96μL)。反应于70℃搅拌4小时。反应混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯(60mL)洗涤滤饼。用水(20mL)、碳酸氢钠水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤滤液。用硫酸钠干燥有机层并减压浓缩，得到粗品，其通过柱色谱法在硅胶上纯化，用70％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈棕色粘性固体的2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.2g，3.44mmol，收率81.28％)。LCMS m/z:325.1[M+H],1HNMR(DMSO-d6)8.02-7.89(m,2H),7.23-7.05(m,1H),4.69(s,1H),3.55-3.43(m,2H),3.22-3.19(m,2H),2.36(s,2H),1.88-1.64(m,3H),1.41(s,9H)。
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005121
在氮气氛下在25ml密封管中向2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1g，3.08mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(517.94mg，6.17mmol，239.79μL)。密封小瓶并于60℃加热过夜。反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤2次并于35℃减压浓缩滤液。粗残余物用二氧化硅柱(100-200目)纯化，在65-70％的乙酸乙酯/石油醚中洗脱化合物。减压蒸发纯级分，得到呈灰白色固体的所需化合物2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(760mg，1.67mmol，收率54.11％)。LCMS m/z:436.0[M+H],1H-NMR(DMSO-d6):10.79(s,1H),6.87-6.80(m,1H),6.52(dd,J＝13.6Hz,3.6Hz,1H),6.41(dd,J＝3.7Hz,1.6Hz,1H),4.89(d,J＝3.6Hz,1H),4.45(s,1H),4.30-4.19(m,1H),2.90-2.80(m,4H),2.78-2.51(m,3H),2.49-2.41(m,1H),2.13-2.01(m,2H),1.95-1.63(m,4H),1.42(s,9H)。
步骤5：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280005122
于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.0g，2.30mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，8.00g，219.41mmol，10mL)。反应混合物于25℃搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(900mg，2.16mmol，收率93.89％)。LCMS m/z 380.2(M+H)+。
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005131
于0℃向2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(100mg，149.33μmol)和2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(56.65mg，136.24μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(57.90mg，447.99μmol，78.03μL)。加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟-磷酸盐(85.17mg，224.00μmol)并将反应混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(50g)上进行纯化，同时用(0％至55％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)洗脱。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰色固体的化合物74(37.01mg，37.12μmol，收率24.86％)。LCMS(ESI+)m/z:915.3[M-H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.81(s,1H),10.79(s,1H),8.33(d,J＝4.80Hz,2H),7.80(d,J＝4.80Hz,1H),7.69(s,1H),7.59(d,J＝8.80Hz,1H),7.52(d,J＝3.60Hz,1H),7.30(s,1H),7.12(d,J＝1.60Hz，tH)，6.526.41(m，3H)，5.78(d，J＝7.6Hz,1H),4.77(s,1H),4.40(s,2H),4.294.20(m，1H)，4.09(bs，4H)，4.02(d，J＝7.6Hz，2H)，4.00(bs，2H)，2.90 2.56(m，12H)，2.33(s,2H),2.12-2.01(m,1H),1.90-1.71(m,3H),1.69-1.56(m,1H)(水遮蔽)。
实施例75.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物75
步骤1：2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005141
通过手性SFC拆分外消旋混合物2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2g，4.59mmol)。将2.0g 2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯溶解在22.0ml乙腈中。SFC分离条件：柱子：LUX A1[250x10mm,5-微米粒度]；流动相：CO2:异丙醇(45:55)；流速：12g/min；循环时间：11.0分钟；背压：100巴UV采集，波长：254nm；量：每次进样0.4ml
于压力下蒸发第一组洗脱级分，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(850mg，1.84mmol，收率40.04％)。LCMS m/z:436.0[M+H],LCMS(ESI+)m/z:436.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.77(s,1H),6.83(t,J＝12.00Hz,1H),6.49(d,J＝20.00Hz,1H),6.41(d,J＝12.00Hz,1H),5.77(d,J＝7.60Hz,1H),4.44(s,1H),4.29-4.12(m,1H),2.91-2.79(m,5H),2.74-2.70(m,1H),2.34(s,2H),2.16-2.02(m,1H),1.89-1.69(m,3H),1.65(d,J＝16.80Hz,2H),1.42(s,9H),99.18％ee(通过手性SFC)(Rt＝2.33分钟)，比旋光度:-46.2°[α]20 D
于压力下蒸发第二组洗脱级分，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(530mg，1.17mmol，收率25.52％)。LCMS(ESI+)m/z:436.0[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.78(s,1H),6.84(t,J＝13.20Hz,1H),6.49(d,J＝20.00Hz,1H),6.41(d,J＝12.40Hz,1H),5.77(d,J＝10.40Hz,1H),4.44(s,1H),4.27-4.22(m,1H),2.92-2.77(m,5H),2.73-2.63(m,1H),2.34(s,2H),2.18-2.03(m,1H),1.87-1.73(m,3H),1.64(d,J＝18.00Hz,2H),1.48(s,9H),99.13％ee(通过手性SFC)(Rt＝4.92分钟)，比旋光度:+46.8°[α]20 D
步骤2：2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280005151
向处于0℃的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(600mg，1.38mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(在1,4-二噁烷中的4M溶液，1.72mL，6.89mmol)。将反应混合物于室温搅拌6小时。通过减压旋转蒸发除去挥发物。残余物加乙醚(2×10ml)研磨两次。真空干燥固体残余物，得到呈灰色固体的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(610mg，1.09mmol，收率78.96％)。LCMS(ESI+)m/z:380.0[M+H]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.03(bs,1H),10.86(s,1H),7.63(s,1H),6.70(d,J＝15.20Hz,1H),6.58(dd,J＝11.40,6.80Hz,1H),4.43(dd,J＝11.60,4.40Hz,1H),3.88-3.65(m,5H),3.41-3.36(m,2H),2.74-2.68(m,1H),2.59-2.54(m,1H),2.46(s,2H),2.33(bs,2H),2.10-2.08(m,1H),1.94-1.88(m,2H)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005161
于0℃向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(29.34mg，70.56μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(69.48mg，537.59μmol，93.64μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟-磷酸盐(38.33mg，100.80μmol)。加入2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(45mg，67.20μmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌5小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(120g)上进行纯化(0％至60％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时45分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的产物化合物75(38mg，40.98μmol，收率60.99％)。LCMS(ESI+)m/z:917.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.83(s,1H),10.79(s,1H),8.51(d,J＝2.40Hz,1H),8.28(s,1H),7.95(dd,J＝8.80,2.40Hz,1H),7.68(d,J＝11.20Hz,1H),7.51(d,J＝3.60Hz,1H),7.29(s,1H),7.16(d,J＝12.00Hz,1H),6.85(t,J＝9.60Hz,1H),6.70(s,1H),6.50(d,J＝9.20Hz,2H),6.45(d,J＝Hz,1H),5.79(d,J＝7.60Hz,1H),4.77(s,1H),4.39(s，1H)，4.29 4.21(m，lH)，4.14(s，4H)，4.12(s，2H)，4.09(m，2H)，2.85(m，7H)，2.51(m，2H),2.22(s,2H),2.09(m,1H),1.87(m,1H),1.80(m,2H),1.62(br d,J＝12.8Hz,2H)。
实施例76.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物76
步骤1：1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮和1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮通过手性SFC分离
Figure BDA0003698737280005171
在以下条件下使用SFC分离拆分外消旋4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.06g，1g/50mL乙醇:二氯甲烷(50％:50％))。柱子：ChiralCel OD-H 21x250mm；流动相：20％2-丙醇/CO2；流速：70mL/min；检测：220nm；样品：1mL/次进样
使用以下分析条件，收集第一组洗脱级分并蒸发，得到1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(2.21g，收率43％，100％ee)。SFC保留时间：3.18分钟(25％的异丙醇/超临界CO2，OD-H 4.6x100mm，40℃4ml/min，100psi，5μL(乙醇)进样)，LCMS:464(M+H)
使用以下分析条件，收集第二组洗脱级分并蒸发，得到1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(2.21g，收率43％，100％ee)。SFC保留时间：4.07分钟(25％的异丙醇/超临界CO2，OD-H 4.6x100mm，40℃4ml/min，100psi，5μL(乙醇)进样)，LCMS:464(M+H)
步骤2：1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280005172
将(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(325mg，701.22μmol)溶解在1,4-二噁烷:甲醇混合物(1:1，3mL)中并加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，3.51mL，14mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时。减压蒸发挥发物。使固体残余物经受高真空，得到1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(280mg，665.30μmol，收率94.88％)。LCMS(ESI+):364.1(M+H)
步骤3：2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005181
将1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(285mg，784.34μmol)和N,N-二异丙基乙胺(304.11mg，2.35mmol，409.85μL)混合在DMAc(0.5mL)中。将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入2-溴乙酸叔丁酯(168.29mg，862.78μmol，126.53μL)，并将混合物温热至23℃，同时搅拌4小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至10％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发纯级分，得到2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(330mg，656.54μmol，收率83.71％)。LCMS(ESI+):478.2(M+H)/422.2(M-tBu+H)
步骤4：2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280005182
将2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(330mg，691.09μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入三氟乙酸(1.42g，12.44mmol，958.39μL)。将反应混合物于40℃加热4小时。冷却反应混合物，于0-5℃在搅拌下加到甲基叔丁基醚(20mL)中。将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以2400rpm离心5分钟。倾析出上清溶剂并弃去。向固体中加入甲基叔丁基醚(20mL)并将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以2400rpm离心5分钟。倾析出上清溶剂并弃去。真空蒸发挥发物，并使化合物经受1小时的高真空，得到2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(150mg，274.55μmol，收率39.73％)。LCMS(ESI+):422.2(M+H)
步骤5：2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280005191
向2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例4步骤5，1.5g，3.68mmol)和6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.92g，4.79mmol)在1,4-二噁烷(21mL)中的溶液中加入在水(9mL)中的碳酸钠(1.17g，11.05mmol，462.92μL)。将反应混合物用氮气脱气15分钟。加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气再脱气5分钟。反应混合物在加热块中在氮气下于80℃加热16小时。减压浓缩反应混合物。粗品用水(50ml)稀释并用乙酸乙酯(50ml)洗涤。水层用5％的硫酸氢钾水溶液酸化至pH 5-6并用二氯甲烷萃取三次(3×50mL)。有机层用盐水(75ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈深棕色固体的2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(2.0g，2.51mmol，收率68.07％)。LCMS(ESI+)m/z:573.2(M+H)+和m/z:529.2(M-CO2+H)+。
步骤6：6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005201
于0℃向2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(2.0g，2.51mmol)和噻唑-2-胺(326.39mg，3.26mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.94g，15.04mmol，2.62mL)。于0℃加入丙基膦酸酐溶液(50％，在乙酸乙酯中)(39.89mg，6.27mmol，37.28μL)并将反应混合物于室温搅拌5小时。将反应混合物倒到冰水(150ml)中并过滤固体，用水洗涤，并干燥。残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-10％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(720mg，981.22μmol，收率39.14％)。LCMS(ESI+)m/z:655.2(M+H)+。
步骤7：2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280005211
于0℃向6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(700mg，1.07mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(10.36g，90.86mmol，7mL)。将反应混合物于环境温度搅拌3小时。减压浓缩反应混合物。所得固体加乙醚(2×25ml)研磨，倾析并减压干燥，得到呈灰白色固体的2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(820mg，931.56μmol，收率87.13％)。LCMS(ESI+)m/z:555.2[M+H]+。
步骤8：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005221
将2-[6-[4-(2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(150mg，224.33μmol)和2-[(4R)-4-[3-(2，4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3，3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(132.12mg，246.76μmol)混合在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中并将反应混合物冷却至0℃。在相同的温度下向反应混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(173.96mg，1.35mmol，234.44μL)。在相同的温度下加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(178.44mg，560.82μmol)并在温热至室温的同时搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物76(78mg，79.69μmol，收率35.52％)。LCMS(ESI+)m/z：958.8(M+H)+。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.82(s，1H)，10.58(s，1H)，8.26(s，1H)，7.69(s，1H)，7.62 7.57(m，5H)，7.52(d，J＝3.60Hz，1H)，7.30(d，J＝3.20Hz，1H)，7.14 7.09(m，2H)，6.70(s，1H)，6.55(d，J＝8.80Hz，2H)，4.45(s，2H)，4.11(s，3H)，4.04 4.00(m，10H)，3.94 3.91(m，2H)，3.28 3.17(m，4H)，3.01 2.99(m，1H)，2.86-2.64(m，6H)，2.34 2.26(m，1H)，1.86 1.83(m，1H)。
实施例77.
2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2，6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物77
Figure BDA0003698737280005231
将2-[6-[4-(2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(实施例16步骤7，300mg，448.66μmol)和2-[1-[4-[[(3S)-2，6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(223.88mg，538.39μmol)混合在N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中。将反应混合物冷却至0℃并加入N，N-二异丙基乙胺(347.91mg，2.69mmol，468.89μL)。加入HATU(221.77mg，583.25μmol)，并在温热至室温的同时搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物77(102mg，108.41μmol，收率24.16％)。LCMS(ESI+)m/z：916.8[M+H]+，1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.81(s，1H)，10.78(s，1H)，8.25(s，1H)，7.68(s，1H)，7.60(d，J＝8.40Hz，3H)，7.49(d，J＝2.80Hz，1H)，7.28-7.21(m，1H)，7.11(d，J＝12.40Hz，1H)，6.86(t，J＝9.60Hz，1H)，6.68 6.62(m，1H)，6.55 6.48(m，3H)，6.43 6.41(m，1H)，5.78(d，J＝7.60Hz，1H)，4.77(s，1H)，4.41 4.37(m，2H)，4.27 4.24(m，1H)，4.09 4.01(m，8H)，2.92-2.83(m，5H)，2.80 2.70(m，1H)，2.61 2.52(m，4H)，2.34 2.33(m，2H)，2.12 2.08(m，1H)，1.90 1.84(m，1H)，1.80 1.74(m，2H)，1.63(s,2H)。
实施例78.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物78
步骤1：2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280005241
向2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例2步骤4，1g，2.46mmol)和6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.18g，2.95mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中加入在水(2ml)中的碳酸钠(780.79mg，7.37mmol，308.61μL)。混合物用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(400.75mg，491.12μmol)，用氮气再脱气15分钟并在氮气下于90℃加热16小时。减压浓缩反应混合物。减压浓缩反应混合物。粗品用水(50ml)稀释并用乙酸乙酯(50ml)洗涤。水层用5％的硫酸氢钾水溶液酸化至pH 5-6并使用二氯甲烷(100mL)萃取三次。有机层用盐水溶液(75ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈深棕色固体的所需产物2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(1.7g，2.21mmol，收率90.07％)。LCMS(ESI+)m/z:573.2[M+H]+。
步骤2：6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005251
向处于0℃的2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(1.6g，2.79mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(16mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.08g，8.38mmol，1.46mL)。在相同的温度下加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(1.79g，4.19mmol)。加入噻唑-2-胺(419.71mg，4.19mmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌4小时。向反应混合物中加入冰冷水并用10％的甲醇/二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗残余物通过使用二氧化硅的快速柱色谱法纯化(5-8％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.25g，1.39mmol，收率49.71％)。LCMS(ESI+)m/z:655.2[M+H]+
步骤3：2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280005261
向处于0℃的6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(400.00mg，610.92μmol)在二氯甲烷(6mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(1.74g，15.27mmol，1.18mL)。反应混合物于0℃搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，残余物加乙醚(2×50ml)研磨，倾析并干燥，得到呈棕色固体的2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(410mg，373.23μmol，收率61.09％)。LCMS(ESI+)m/z:555.2[M+H]+
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005271
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(200mg，299.10μmol)和2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(99.50mg，239.28μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。将混合物冷却至0℃并加入N,N-二异丙基乙胺(193.29mg，1.50mmol，260.49μL)。在相同的温度下加入丙基膦酸酐(50重量％，在乙酸乙酯中)(114.20mg，358.93μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物78(28.21mg，30.64μmol，收率10.24％)。LCMS(ESI+):915.8[M+H]；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.81(s,1H),10.79(s,1H),8.29(s,1H),7.68(s,1H),7.55(d,J＝8.80Hz,1H),7.50(s,1H),7.45(d,J＝7.60Hz,2H),7.26(s,1H),7.10(t,J＝8.00Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.69(s,1H),6.57(dd,J＝8.40,Hz,3H),6.51(d,J＝15.20Hz,1H),5.78(d,J＝7.20Hz,1H),4.77(s,1H),4.39(s,2H),4.29-4.21(m,1H),4.02-4.09(m,8H),2.92-2.84(m,5H),2.23(s,3H),2.13-2.05(m,2H),1.89-1.71(m,4H),1.63(d,J＝11.20Hz,2H)(水遮蔽)。
实施例79.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物79
步骤1：[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280005281
于0℃向2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(实施例4步骤5，1.4g，3.44mmol)在四氢呋喃(10mL)和乙醇(10mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，4.13mL，4.13mmol)并于室温搅拌2小时。减压干燥反应混合物。向残余物中加入甲苯，并减压蒸发挥发物(2×20mL)。所得粗残余物加乙醚(2×25ml)研磨，并在减压下完全干燥，得到呈浅棕色固体的2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(1.1g，2.77mmol，收率80.59％)，其在不脱盐的情况下进行下一步。LCMS m/z:379.1/381.1[M+1],Br模式
步骤2：2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005282
于0℃向[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(1.1g，2.86mmol)和2-氨基噻唑(429.05mg，4.28mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.11g，8.57mmol，1.49mL)，并在相同的温度下加入1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(1.59g，3.71mmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。高真空浓缩反应以除去N,N-二异丙基乙胺并加入冰冷水。将所得沉淀物搅拌10分钟，过滤并高真空干燥，得到呈浅棕色固体的产物2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(950mg，1.69mmol，收率59.12％)。LCMS(m/z:460.0/462.0(M+H),溴化物模式)
步骤3：2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005291
向2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(0.5g，1.08mmol)和2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(557.16mg，1.30mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(344.63mg，3.25mmol，136.22μL)。反应混合物在氮气下脱气25分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(177.03mg，216.77μmol)并继续脱气10分钟。反应混合物在氮气下于90℃加热18小时。将反应混合物冷却至环境温度并在硅藻土上过滤。用10％的甲醇/二氯甲烷(100ml)洗涤硅藻土。减压浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法纯化(0％至10％的甲醇/二氯甲烷)该化合物。减压蒸发纯级分，得到呈淡棕色固体的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(255mg，155.21μmol，收率14.32％)。LCMS(m/z:683.2[M+1])
步骤4：2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005301
向处于0℃的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(300mg，439.36μmol)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(250.49mg，2.20mmol，169.25μL)。加入后让反应于室温搅拌4小时。减压蒸发反应混合物至干。所得残余物加乙醚(2×30ml)研磨。真空干燥固体，得到2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(305mg，278.68μmol，收率63.43％)，为灰白色固体化合物。LCMS(m/z:583.2,[M+1])
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005302
于0℃向2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯烷[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(252.22mg，362.02μmol)和2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(150mg，360.71μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N-乙基-N-异丙基-丙烷-2-胺(233.09mg，1.80mmol，314.14μL)，在相同的温度下加入COMU(185.38mg，432.86μmol)并将反应混合物于环境温度搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-55％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰色固体的化合物79(51.84mg，52.99μmol，收率14.69％)。LCMS m/z:943.8(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.82(s,1H),10.79(s,1H),8.25(s,1H),7.69-7.51(m,5H),7.29(d,J＝3.2Hz,1H),7.11(d,J＝12.4Hz,1H),6.89-6.81(m,1H),6.70(s,1H),6.53-6.40(m,4H),5.78(d,J＝7.6Hz,1H),4.94(s,1H),4.29-4.19(m,1H),4.07-4.00(m,2H),3.70-3.52(m,4H),3.39-3.31(m,4H),2.93-2.51(m,6H),1.87-1.63(m,10H)(溶剂和水遮蔽)。
中间体
中间体Z1和Z2通过手性SFC分离制备(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯和(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005311
在以下条件下使用SFC分离拆分外消旋4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯：
样品重量：5.06g
柱子：ChiralCel OD-H 21x250mm
流动相：20％的2-丙醇/CO2
流速：70mL/min
样品：将每1g样品溶解在25mL乙醇和25mL二氯甲烷中
进样：1mL
检测：220nm
使用以下分析条件，收集第一组洗脱级分并蒸发，得到(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.21g，收率43％，100％ee)。SFC保留时间：3.18分钟(25％的异丙醇/超临界CO2，OD-H 4.6x100mm，40℃4mL/min，100psi，5μL(乙醇)进样)，LCMS:464(M+H)
使用以下分析条件，收集第二组洗脱级分并蒸发，得到(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.21g，收率43％，100％ee)。SFC保留时间：4.07分钟(25％的异丙醇/超临界CO2，OD-H 4.6x100mm，40℃4mL/min，100psi，5μL(乙醇)进样)，LCMS:464(M+H)
中间体Y：1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
Figure BDA0003698737280005321
步骤1：2,5-二氟-4-碘苯甲腈
Figure BDA0003698737280005322
将化合物4-氨基-2,5-二氟苯甲腈(52.0g，0.33mol)、4-甲基苯磺酸(208g，1.21mol)在乙腈(1.06L)中的混合物于15℃搅拌4小时。于0℃向反应器中加入亚硝酸钠(39.6g，0.57mol)和碘化钾(95.2g，0.57mol)。然后将混合物于15℃搅拌12小时。用亚硫酸氢钠水溶液(200mL，3.85X体积)淬灭混合物。水相用乙酸乙酯(500mL，9.61X体积)萃取。合并有机相，用盐水(200mL，3.85X体积)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到2,5-二氟-4-碘苯甲腈(40g，收率47.7％)。1H NMR:400MHz,CDCl3.δ7.39(s,1H),7.12-7.00(m,1H)。
步骤2：1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
Figure BDA0003698737280005331
于15℃将2,5-二氟-4-碘苯甲腈(60.0g，0.22mol)和化合物甲基肼(59.6mL，0.45mol)在乙醇(600mL)中的混合物用N2脱气并吹扫3次，并将混合物于80℃在N2气氛下搅拌16小时。减压真空浓缩反应混合物。将残余物黄色固体加乙醇(120mL)于15℃研磨5小时并过滤，得到呈白色固体的化合物5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-胺(54.5g，收率82.7％)。LCMS(ESI+):292.1(M+H)。
步骤3：3-((5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)氨基)丙酸乙酯
Figure BDA0003698737280005332
将化合物5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-胺(54.5g，220mmol)、化合物丙烯酸乙酯(142mL，1.31mol)和[DBU]·[Lac](26.4g，180mmol)的混合物用N2脱气并吹扫3次，所得混合物于80℃在N2气氛下搅拌120小时。残余物用二氯甲烷(500mL)和水(500mL)稀释，有机层用盐水(300mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩滤液，得到残余物。残余物通过柱色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝50/1至1/1)。得到呈黄色固体的3-((5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)氨基)丙酸乙酯(35g，89.2mmol，收率47.7％)。LCMS(ESI+):392.0(M+H)。
步骤4：3-(1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲基)丙酸乙酯
Figure BDA0003698737280005333
将3-((5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)氨基)丙酸乙酯(50.0g，0.39mol，1.00当量)、氰酸钠(24.9g，0.38mol，3.00当量)在乙酸(225mL)和水(75.0mL)中的混合物于15℃搅拌3小时。水相用乙酸乙酯(150mL，3.X体积)萃取。合并有机相，用饱和碳酸氢钠水溶液(150mL，3.00X体积)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈白色固体的3-(1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲基)丙酸乙酯(32.0g，收率56.6％)。LCMS(ESI+):417.1(M+H)。
步骤5：1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
Figure BDA0003698737280005341
将3-(1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲基)丙酸乙酯(32.0g，73.0mmol，1.00当量)和Triton B(22.0mmol，4.02mL，0.30当量)在乙腈(320mL)中的混合物于15℃搅拌3小时。过滤反应混合物，得到滤饼，将滤饼减压浓缩，得到呈灰白色固体的1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(24.0g，收率83.9％)。LCMS(ESI+):389.0(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.56(s,1H),8.27-8.01(m,1H),7.51-7.45(m,1H),3.97(s,3H),3.95-3.90(m,2H),2.79-2.73(m,2H)
实施例80.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(1R,4R)-2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物80
步骤1：(1R,4R)-5-(4-溴苯基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005342
于环境温度在氮气氛下向含有(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.00g，5.04mmol)和1-溴-4-碘-苯(3.57g，12.61mmol)在无水甲苯(20mL)中的充分搅拌溶液的100mL密封管中加入叔丁醇钠(1.45g，15.13mmol)并将所得混合物通过氮气鼓泡脱气10分钟。向反应混合物中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(230.94mg，252.19μmol)、rac-BINAP(314.07mg，504.38μmol)并用氮气再脱气5分钟。将反应混合物在加热块中于90℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰冷水(100mL)洗涤滤液并使用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。用盐水溶液(150mL)进一步洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。所得粗残余物通过使用二氧化硅的柱色谱法纯化(0-20％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈灰白色固体的(1R,4R)-5-(4-溴苯基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.45g，3.79mmol，收率75.11％)。LCMS(ESI+)m/z:353.1[M+H]+。
步骤2：(1R,4R)-5-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005351
于环境温度在氮气氛下向含有(1R,4R)-5-(4-溴苯基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.45g，4.10mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-氧杂硼戊环(1.04g，4.10mmol)在无水1,4-二噁烷(20mL)中的充分搅拌溶液的100mL双颈圆底烧瓶中加入乙酸钾(1.21g，12.31mmol)并将所得混合物通过氮气鼓泡脱气10分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气再脱气5分钟。在惰性气氛下将反应混合物加热至90℃，保持16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰冷水(50mL)洗涤滤液并使用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用盐水溶液(100mL)进一步洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗品通过使用硅胶的柱色谱法纯化(0-10％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈灰白色固体的(1R,4R)-5-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(720mg，1.43mmol，收率34.72％)。LCMS(ESI+)m/z:401.2[M+H]+。
步骤3：(1R,4R)-5-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005361
于环境温度在氮气氛下向含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(800mg，1.53mmol)和(1R,4R)-5-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(795.55mg，1.99mmol)在无水1,4-二噁烷(15mL)中的充分搅拌溶液的100mL双颈圆底烧瓶中加入在水(3mL)中的碳酸钠(405.07mg，3.82mmol，160.11μL)。所得混合物通过氮气鼓泡脱气10分钟。向其中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气再脱气5分钟。在惰性气氛下将反应混合物在加热块中于80℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰冷水(50mL)洗涤滤液并使用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水溶液(100mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗品通过使用二氧化硅的柱色谱法纯化(0-3％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈灰白色固体的(1R,4R)-5-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(420mg，570.28μmol，收率37.30％)。LCMS(ESI+)m/z:670.0[M+H]+。
步骤4：2-[6-[4-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005371
于0℃在氮气氛下向含有(1R,4R)-5-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(420mg，627.08μmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的充分搅拌溶液的50mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，228.64mg，6.27mmol，285.80μL)。所得反应混合物于环境温度搅拌2小时。从反应混合物减压除去溶剂。残余物加乙醚研磨，得到呈灰白色固体的2-[6-[4-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(370mg，598.33μmol，收率95.41％)。LCMS(ESI+)m/z:570.0[M+H]+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(1R,4R)-2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005381
于0℃向含有氮气氛下2-[6-[4-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，164.99μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(79.16mg，197.98μmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入无水N,N-二异丙基乙胺(127.94mg，989.92μmol，172.42μL)。在相同的温度下加入丙基膦酸酐溶液(≥50重量％，在乙酸乙酯中，131.24mg，412.46μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物再搅拌1小时。将反应混合物倒到冰冷水(10mL)中，并过滤沉淀的固体。用水洗涤固体并干燥。粗品使用制备HPLC纯化(纯化方法：柱子：X-Bridge C8(50x4.6mm)，3.5微米；(流动相A：10mM的乙酸铵/milli-q水；流动相B：乙腈)；流速：15mL\min。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物80(67mg，73.17μmol，收率44.35％)。LCMS(ESI+)m/z:916.4[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.49(s,1H),10.75(s,1H),7.75-7.72(m,1H),7.72-7.68(m,3H),7.60(s,1H),7.47(bs,1H),7.23(bs,1H),7.03(t,J＝8.80Hz,1H),6.73(t,J＝8.40Hz,2H),6.47(t,J＝14.40Hz,1H),6.36(d,J＝13.60Hz,1H),6.20-6.13(m,2H),6.02(d,J＝7.60Hz,1H),5.84(d,J＝6.80Hz,1H),4.92-4.79(m,2H),4.66(d,J＝27.60Hz,1H),4.38-4.29(m,1H),4.23-4.19(m,1H),4.00-3.98(m,2H),3.89-3.68(m,1H),3.65-3.54(m,1H),3.37-3.33(m,1H),3.30-3.21(m,2H),3.04-3.00(m,2H),2.83-2.72(m,3H),2.68-2.51(m,1H),2.34-2.11(m,3H),2.11-1.87(m,4H),1.68-1.66(m,2H),1.59-1.25(m,2H)。[预期48H，观察到47H(水遮蔽)]。
实施例81.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物81
步骤1：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酸苄酯
Figure BDA0003698737280005391
于25℃向2-[4-(4-氨基苯基)苯基]乙酸苄酯(CAS#70957-50-5，1.6g，5.04mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(2.54g，30.25mmol，1.18mL)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(3.87g，20.17mmol)。将反应混合物于70℃加热12小时。减压浓缩反应混合物。粗品使用Isolera仪器通过柱色谱法纯化。产物在60％的乙酸乙酯/石油醚中洗脱，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酸苄酯(1.5g，2.69mmol，收率53.33％)。LCMS m/z 429.1(M+H+)。
步骤2：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酸
Figure BDA0003698737280005392
于室温向2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酸苄酯(1.5g，3.50mmol)在四氢呋喃(100mL)和甲醇(50mL)中的搅拌溶液中加入10％钯/碳(487型，干)(372.55mg，3.50mmol)。对反应混合物脱气并在氢气球压力下于室温搅拌2小时。通过硅藻土床过滤反应混合物并用甲醇洗涤。减压浓缩滤液。固体用乙醚洗涤，得到2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酸(600mg，1.48mmol，收率42.30％)。LCMS m/z339.1(M+H+)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005401
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺(0.1g，164.17μmol，021)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]苯基]乙酸(66.66mg，197.01μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(104.47mg，328.35μmol)并搅拌5分钟。加入N,N-二异丙基乙胺(63.65mg，492.52μmol，85.79μL)并将混合物于0℃搅拌2小时。减压除去溶剂。残余物通过制备HPLC纯化(AGILENT C18柱子，使用(55％的水+0.1％的乙酸铵)/乙腈作为洗脱剂)。冻干收集的级分，得到呈灰白色固体的所需产物化合物81(15.63mg，17.00μmol，收率10.36％)。LCMS m/z:893.3(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.48(s,1H),10.82(s,1H),7.78-7.71(m,4H),7.58(s,1H),7.52(d,J＝8.40Hz,2H),7.43(d,J＝8.80Hz,3H),7.26(d,J＝8.40Hz,2H),7.08(d,J＝8.80Hz,2H),6.76(d,J＝8.80Hz,2H),6.04-6.02(m,2H),4.90-4.86(m,1H),4.70-4.67(m,1H),4.43-4.37(m,1H),4.24-4.20(m,1H),4.02-3.92(m,3H),3.90.1-3.75(m,3H),2.78-2.76(m,1H),2.75-2.73(m,1H),2.69-2.61(m,2H),2.59-2.51(m,4H),2.34-2.33(m,1H),1.95-1.76(m,3H),1.54-1.51(m,2H)。
实施例82.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(1R,4R)-2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物82
Figure BDA0003698737280005411
于0℃向含有氮气氛下2-[6-[4-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，164.99μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(83.52mg，197.98μmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入无水N,N-二异丙基乙胺(127.94mg，989.92μmol，172.43μL)。在相同的温度下加入在乙酸乙酯中的≥50重量％的丙基膦酸酐溶液(131.24mg，412.46μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物再搅拌1小时。将反应混合物倒到冰冷水(10mL)上，并过滤固体。用水洗涤固体并干燥。粗品使用制备HPLC纯化(纯化方法：柱子：X-Bridge C8(50x4.6)mm，3.5微米；(流动相A：10mM的乙酸铵/水；流动相B：乙腈)；流速：15mL/min。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物82(30mg，31.07μmol，收率18.83％)。LCMS(ESI+)m/z:937.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.49(s,1H),10.55(s,1H),7.74-7.70(m,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,1H),7.61(d,J＝6.00Hz,1H),7.60-7.58(m,1H),7.49-7.45(m,1H),7.46(s,1H),7.38(d,J＝8.40Hz,1H),7.30(s,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),7.08(d,J＝8.00Hz,1H),6.87(d,J＝8.40Hz,1H),6.74(t,J＝8.40Hz,1H),6.14(d,J＝4.80Hz,1H),4.93(s,1H),4.81-4.71(m,2H),4.63(bs,1H),4.20(dd,J＝17.80,4.40Hz,1H),3.99-3.87(m,7H),3.81-3.58(m,2H),3.41-3.33(m,1H),3.28-3.24(m,2H),3.22-2.89(m,4H),2.78-2.72(m,3H),2.68-2.57(m,1H),2.45-2.34(m,1H),2.25-2.05(m,3H),1.97-1.91(m,2H),1.41-1.83(m,4H)。
实施例83.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物83
步骤1：1-(2-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-酮
Figure BDA0003698737280005421
向哌啶-4-酮(15.0g，151.31mmol)、1,2-二氟-4-硝基-苯(24.07g，151.31mmol，16.72mL)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(78.22g，605.26mmol，105.42mL)并于110℃加热14小时。反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释并用冷水(150mL)洗涤。用盐水溶液(150mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(40％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈棕色固体的1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(21g，77.93mmol，收率51.50％)。LCMS,m/z:238.9[M+H]+
步骤2：2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280005422
于-78℃向乙酸叔丁酯(1.76g，15.11mmol，2.03mL)在四氢呋喃(25mL)中的搅拌溶液中逐滴加入二异丙基酰胺锂(2M，在四氢呋喃中，12.59mL)。反应混合物于-78℃搅拌45分钟。于-78℃加入溶解在四氢呋喃(15mL)中的1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(3g，12.59mmol)。反应混合物于-78℃搅拌2小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取该混合物。有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过硅胶(100-200目)柱色谱法纯化(洗脱剂：30％至40％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈淡黄色粘性固体的2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.7g，7.01mmol，收率55.66％)。LCMS(355.1(M+H)+)
步骤3：2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005431
向2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.5g，4.23mmol)在乙醇(10mL)和水(2mL)中的溶液中加入铁粉(1.18g，21.16mmol，150.37μL)和氯化铵(679.26mg，12.70mmol，443.96μL)。反应于70℃搅拌4小时。反应混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯(60mL)洗涤滤饼。用水(20mL)、碳酸氢钠水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤滤液。用硫酸钠干燥有机层并减压浓缩，得到残余物，其通过柱色谱法在硅胶上纯化，用70％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈棕色粘性固体的2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.2g，3.44mmol，收率81.28％)。LCMS m/z:325.1[M+H],1HNMR(DMSO-d6)8.02-7.89(m,2H),7.23-7.05(m,1H),4.69(s,1H),3.55-3.43(m,2H),3.22-3.19(m,2H),2.36(s,2H),1.88-1.64(m,3H),1.41(s,9H)。
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005432
在氮气氛下在25ml密封管中向2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1g，3.08mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(517.94mg，6.17mmol，239.79μL)。密封小瓶并于60℃加热过夜。反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤2次并于35℃减压浓缩滤液。粗残余物用硅胶柱(100-200目)纯化，用65-70％的乙酸乙酯:石油醚洗脱，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(760mg，1.67mmol，收率54.11％)。LCMSm/z:436.0[M+H]。1H-NMR(DMSO-d6):10.79(s,1H),6.87-6.80(m,1H),6.52(dd,J＝13.6Hz,3.6Hz,1H),6.41(dd,J＝3.7Hz,1.6Hz,1H),4.89(d,J＝3.6Hz,1H),4.45(s,1H),4.30-4.19(m,1H),2.90-2.80(m,4H),2.78-2.51(m,3H),2.49-2.41(m,1H),2.13-2.01(m,2H),1.95-1.63(m,4H),1.42(s,9H)。
步骤5：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280005441
于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.0g，2.30mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，400mmol，10mL)。反应混合物于25℃搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(900mg，2.16mmol，收率93.89％)。LCMS m/z 380.2(M+H)+。
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005442
于0℃在圆底烧瓶中向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(115.49mg，277.73μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入N,N-二异丙基乙胺(195.79mg，1.51mmol，263.87μL)。将反应混合物搅拌5分钟。加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(324.39mg，757.45μmol)，并将反应混合物搅拌5分钟。加入2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(150mg，252.48μmol)。反应于0℃继续约40分钟。向反应混合物中加入冷水，沉淀出固体，通过过滤收集，用水洗涤并抽吸干燥。沉淀通过制备HPLC纯化。纯化条件：柱子：Agilent C18(50*21.2mm)，5微米粒度。流动相：10mM的乙酸铵/水:乙腈。将收集的纯级分冻干，得到呈浅黄色固体的化合物83(47mg，51.00μmol，收率20.20％)。LCMS(m/z:917.3(M-1))1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.78(s,1H),7.79-7.69(m,4H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),7.07(d,J＝8.80Hz,2H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.50(dd,J＝2.40,14.80Hz,1H),6.42(dd,J＝6.00,Hz,1H),6.16(s,1H),5.78(d,J＝7.60Hz,1H),4.83(t,J＝17.60Hz,2H),4.25-4.21(m,2H),4.02-3.96(m,2H),3.73-3.68(m,4H),3.44-3.34(m,2H),3.44-3.23(m,5H),2.91-2.84(m,4H),2.78-2.67(m,2H),2.58-2.52(m,3H),2.13-2.02(m,1H),1.89-1.65(m,5H)。
实施例84.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物84
步骤1：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005451
在含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(800mg，1.53mmol)和4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(CAS#1042917-51-0，799.56mg，1.99mmol)在无水1,4-二噁烷(10mL)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中加入在水(2mL)中的碳酸钠(486.08mg，4.59mmol，192.13μL)并将所得混合物用氮气鼓泡脱气15分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)，用氮气再脱气5分钟并在氮气氛下在加热块中于80℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰冷水(50mL)洗涤滤液并使用乙酸乙酯(3×75mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗品通过使用二氧化硅的柱色谱法纯化(0-5％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈棕色固体的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(520mg，561.83μmol，收率36.75％)。LCMS(ESI+)m/z:672.3[M+H]+。
步骤2：2-[6-[4-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005461
于0℃向含有4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(520mg，774.06μmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的充分搅拌溶液的50mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，282.22mg，7.74mmol，352.78μL)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，加乙醚研磨，倾析并干燥，得到呈淡黄色固体的2-[6-[4-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(480mg，684.78μmol，收率88.47％)。LCMS(ESI+)m/z:572.2[M+H]+。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005471
于0℃向含有氮气氛下2-[6-[4-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(100mg，164.44μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(78.90mg，197.33μmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(21.25mg，164.44μmol，28.64μL)。在相同的温度下加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(52.32mg，164.44μmol)。在温热至室温的同时将反应混合物再搅拌0.5小时。将反应混合物倒到冰冷水(10mL)中，并过滤沉淀的固体。用水洗涤固体并干燥。粗品使用制备HPLC纯化(纯化方法：柱子：X-Bridge C8(50x4.6)mm，3.5微米；(流动相A：10mM的乙酸铵/milli-q水；流动相B：乙腈)；流速：15mL\min。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物84(50mg，54.39μmol，收率33.07％)。LCMS(ESI+)m/z:917.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.49(s,1H),10.80(s,1H),7.74-7.70(m,1H),7.66(d,J＝5.60Hz,1H),7.62(d,J＝11.20Hz,1H),7.57(s,1H),7.40(s,1H),7.10(bs,1H),6.96-6.83(m,3H),6.46-6.42(m,2H),6.06(s,1H),6.00(t,J＝4.00Hz,1H),4.90-4.86(m,1H),4.30-4.29(m,1H),4.19(dd,J＝17.40,4.80Hz,1H),4.00-3.96(m,2H),3.83-3.75(m,1H),3.71-3.68(m,2H),3.67-3.67(m,1H),3.62-3.57(m,2H),3.52-3.22(m,1H),3.33-3.28(m,2H),3.12(s,1H),3.07(s,1H),2.87-2.85(m,1H),2.81-2.79(m,1H),2.73-2.69(m,2H),2.59-2.54(m,1H),2.08-1.99(m,4H),2.22-1.84(m,2H),1.81(s,2H),1.61-1.54(m,4H)。[观察到48H/预期50H(水遮蔽)]。
实施例85.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物85
Figure BDA0003698737280005481
于0℃向2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(130mg，199.65μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(129.01mg，998.23μmol，173.87μL)和1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(171.01mg，399.30μmol)。将反应混合物搅拌15分钟。加入1-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(72.64mg，199.65μmol)。将反应混合物搅拌1小时。减压浓缩反应混合物。残余物通过反相色谱法纯化(C18柱子，0-100％的0.1％乙酸铵/水和乙腈)。冷冻含化合物的级分并冻干。通过反相制备HPLC纯化残余物，使用柱子：Zorbax Extend C18(50x4.6mm)5μm，流动相A：10mM乙酸铵/水，流动相B：乙腈。将纯级分冻干，得到呈白色固体的化合物85(4.81mg，5.07μmol，收率2.54％)，对其进行分析。LCMS(ESI+):924.3(M+H)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.50(s,1H),10.55(d,J＝10.0Hz,1H),7.81(d,J＝5.6Hz,2H),7.73(d,J＝8.0Hz,2H),7.63(s,1H),7.59(d,J＝8.40Hz,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.45(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.15(s,1H),4.83(d,J＝17.6Hz,1H),4.61-4.53(m,1H),4.27-4.22(m,2H),4.01-3.91(m,7H),3.34-3.17(m,3H),3.00-2.97(m,5H),2.78-2.75(m,4H),2.33-2.17(m,3H),1.91-1.70(m,9H)。
实施例86.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-1-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物86
步骤1：2-(1-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)哌啶-4-基)乙酸甲酯
Figure BDA0003698737280005491
于环境温度在氮气氛下向含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(400mg，764.35μmol)和2-[1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(411.91mg，1.15mmol)在无水甲苯(5mL)和水(1.5mL)中的充分搅拌溶液的100mL密封管中加入乙酸钾(225.04mg，2.29mmol，143.34μL)。所得混合物用N2脱气10分钟。加入双(三-叔-丁基膦)钯(0)(78.12mg，152.87μmol)并将反应混合物于95℃搅拌64小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。减压蒸发滤液。粗残余物加乙醚研磨，得到2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(205mg，295μmol，收率42.7％)。LCMS(ESI+)m/z:629.2[M+H]+。
步骤2：2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280005501
于0℃向2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(200mg，318.11μmol)在四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)及水(2mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1M水溶液，318μL，318.11μmol)。将反应混合物于室温搅拌3小时。浓缩反应混合物，得到粗品，将其再溶解于5mL水中并使用硫酸氢钠水溶液(pH 5-6)酸化。过滤沉淀出的固体，得到2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸(150mg，244.03μmol，收率39.9％)。LCMS(ESI+)m/z:615.2[M+H]+。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-1-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005502
于0℃向2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸(150mg，244.03μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(157.69mg，1.22mmol，212.52μL)和1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(209.02mg，488.05μmol)。加入3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(74.51mg，218.00μmol)并搅拌1小时。粗品通过反相色谱法纯化(C18柱子，0-100％的0.1％甲酸/水和乙腈)。将收集的级分冻干。通过反相制备HPLC纯化残余物，使用柱子：Zorbax Extend C18(50x4.6mm)，5μm，(流动相A：10mM的乙酸铵/milli-q水；流动相B：乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈白色固体的化合物86(4.57mg，5.04μmol，收率2.06％)。LCMS(ESI+)m/z:902.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.61(s,1H),10.80(s,1H),7.76(s,1H),7.73(d,J＝10.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.48(s,1H),7.25(s,1H),7.02(d,J＝6.40Hz,2H),6.97(d,J＝8.80Hz,1H),6.47(s,1H),6.44(d,J＝4.00Hz,1H),6.14(s,1H),6.04(d,J＝8.00Hz,1H),4.81(d,J＝17.20Hz,1H),4.60(d,J＝8.40Hz,1H),4.32(m,1H),4.33(d,J＝16.00Hz,1H),4.20-3.99(m,3H),3.81(d,J＝12.00Hz,2H),3.11(t,J＝13.20Hz,1H),2.87(t,J＝10.40Hz,1H),2.79-2.71(m,4H),2.68-2.61(m,3H),2.33(d,J＝6.80Hz,2H),2.09-2.07(m,1H),1.92-1.90(m,2H),1.88-1.71(m,5H),1.68-1.32(m,2H),1.31-1.24(m,3H)。
实施例87.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物87
步骤1：6-(5-溴-2-吡啶基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005511
向2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.69g，8.52mmol)在二甲亚砜(10mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(5.51g，42.62mmol，7.42mL)和5-溴-2-氟-吡啶(1.5g，8.52mmol，877.19μL)。将反应混合物于90℃加热4小时。将反应混合物冷却至室温并在碎冰中淬灭。沉淀出固体，将其过滤并干燥，得到呈白色固体的6-(5-溴-2-吡啶基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(1.5g，4.14mmol，收率48.57％)。LCMS(m/z:356.1[M+1])。
步骤2：[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]硼酸
Figure BDA0003698737280005521
在密封管中向6-(5-溴-2-吡啶基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(650mg，1.83mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的搅拌溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(698.93mg，2.75mmol)，然后向反应混合物中加入乙酸钾(360.16mg，3.67mmol，229.40μL)。反应混合物用氮气脱气20分钟，然后向反应混合物中加入Pd(dppf)2Cl2.CH2Cl2(449.52mg，550.47μmol)并用氮气脱气10分钟。反应混合物在加热块上于90℃加热16小时。将反应混合物冷却至环境温度，混合物通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。减压蒸发滤液，得到[6-(2-t叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]硼酸(810mg，1.14mmol，收率62.17％)，对其进行分析。LCMS数据(m/z:320.2[M+1])。
步骤3：6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005522
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(350mg，668.80μmol)和[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]硼酸(298.84mg，936.33μmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的溶液用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入碳酸钠(212.66mg，2.01mmol，84.06μL)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在氮气下于80℃加热16小时。将反应混合物倒到冰水中，过滤固体，用水洗涤固体，并干燥。粗品通过硅胶柱色谱法纯化(0-7％的二氯甲烷和甲醇)，得到呈棕色固体的6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(160mg，224.60μmol，收率34％)。LCMS m/z 671.3(M+H)+。
步骤4：[2-[6-[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280005531
向6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(440mg，713.50μmol)在乙醇(3.2mL)中的溶液中加入氢氧化锂水溶液(1M，784.85μL)并于22℃搅拌1小时。减压蒸发挥发物，得到[2-[6-[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(420mg，698μmol，收率98％)LCMS:598.2(M+H)
步骤5：6-(6-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280005541
于0℃在氮气氛下向含有[2-[6-[6-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(400.00mg，672.77μmol)和2-噻唑胺(87.58mg，874.59μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中的充分搅拌溶液的50mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(542.95mg，672.77μmol，117.18μL)。于0℃加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(521μL，874.59μmol)并将所得反应混合物于室温搅拌4小时。向反应混合物中加入冰冷水，过滤沉淀出的固体并减压干燥，得到呈灰白色固体的6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(290mg，380.47μmol，收率56.55％)。LCMS(ESI+)m/z:671.3[M+H]+。
步骤6：2-(6-(6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺的合成
Figure BDA0003698737280005542
于0℃向含有6-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(280.00mg，417.44μmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入三氟乙酸(475.97mg，4.17mmol，321.60μL)。将混合物于环境温度搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到粗品，与二氯甲烷共蒸馏，加乙醚研磨，并倾析，得到呈灰白色固体的2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(270mg，345.06μmol，收率82.66％)。LCMS(ESI+)m/z:571.2[M+H]+。
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺的合成
Figure BDA0003698737280005551
于0℃向含有2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(120mg，175.27μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸2,2,2-三氟乙酸(80.25mg，175.27μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(113.26mg，876.34μmol，152.64μL)。在相同的温度下向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(139.42mg，438.17μmol)并在温热至室温的同时搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％-50％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物87(48mg，48.95μmol，收率27.93％)。LCMS(ESI+)m/z:975.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.58(s,1H),8.54(d,J＝2.40Hz,1H),8.00(dd,J＝8.60,2.40Hz,1H),7.80(s,1H),7.77(s,1H),7.62(s,1H),7.60(d,J＝8.80Hz,1H),7.57(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),7.10(d,J＝8.40Hz,1H),6.52(d,J＝8.40Hz,1H),6.15(s,1H),4.81(d,J＝18.00Hz,1H),4.45(s,2H),4.25-4.15(m,6H),4.12(s,2H),4.02-4.00(m,5H),3.93(t,J＝6.80Hz,3H),3.21(d,J＝8.40Hz,4H),3.01-2.98(m,1H),2.78(t,J＝6.40Hz,4H),2.51-2.50(m,2H),2.35-2.30(m,1H),1.89-1.80(m,1H)。
实施例88.
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺，化合物88
Figure BDA0003698737280005561
将5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(100mg，151.25μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(80.98mg，151.25μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(117.29mg，907.51μmol，158.07μL)，然后加入丙烷膦酸酐(50％，在N,N-二甲基甲酰胺中)(96.25mg，302.50μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的水(0.1％乙酸铵)/乙腈，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物88(93mg，89.01μmol，收率58.85％)。LCMS m/z 1028.3(M+H)+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.58(s,1H),8.84(dd,J＝8.40,30.00Hz,2H),8.24-8.22(m,1H),8.13-8.10(m,1H),7.85-7.80(m,2H),7.61-7.49(m,4H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),7.10(d,J＝8.40Hz,1H),6.14(s,1H),4.86(d,J＝18.00Hz,1H),4.40-4.38(m,1H),4.28(d,J＝18.40Hz,1H),4.10-4.07(m,2H),3.98-3.91(m,7H),3.47(d,J＝13.20Hz,2H),3.28-3.12(m,3H),3.02-2.99(m,1H),2.78-2.73(m,4H),2.68-2.65(m,2H),2.51-2.50(m,2H),2.36-2.18(m,1H),1.92-1.45(m,6H)。
实施例89.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物89
Figure BDA0003698737280005571
于0℃向2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(100mg，146.27μmol)和2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(60.82mg，146.27μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(94.52mg，731.34μmol，127.39μL)，然后加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(66.74mg，175.52μmol)并于室温搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。收集纯级分，冷冻并冻干，得到呈白色固体的化合物89(21mg，22.24μmol，收率15.21％)。LCMS m/Z:931.3[M+H],1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.78(s,1H),7.75(s,1H),7.71(d,J＝11.20Hz,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.20Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.55(d,J＝8.80Hz,1H),6.50(dd,J＝2.40,14.8Hz,1H),6.42(d,J＝8.40Hz,2H),6.15(s,1H),5.78(d,J＝7.60Hz,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.76(s,1H),4.39(s,2H),4.27-4.24(m,2H),4.20-4.01(m,9H),2.90-2.60(m,8H),2.59(d,J＝4.00Hz,1H),2.23(s,2H),2.10-2.08(m,1H),1.80-1.74(m,3H),1.63-1.59(m,2H)。由于水遮蔽，一个质子信号不能观察到。
实施例90.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物90
Figure BDA0003698737280005581
Figure BDA0003698737280005591
步骤1：2-[1-(3-氟-5-硝基-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
向2-氯-3-氟-5-硝基-吡啶(2g，11.33mmol)和N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(2.20g，16.99mmol，2.96mL)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(2.68g，12.46mmol)。将混合物于70℃搅拌1小时。在冷却至室温后，将混合物倒入水(20mL)中。混合物于25℃搅拌10分钟。形成大量黄色沉淀。过滤混合物，用水(10mL)洗涤滤饼并真空干燥，得到呈黄色固体的2-[1-(3-氟-5-硝基-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.3g，10.89mmol，收率96％)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.84(dd,J＝1.2,2.4Hz,1H),7.91(d,J＝2.4Hz,1H),7.94(d,J＝2.4Hz,1H),4.37(d,J＝13.2Hz,2H),3.94(s,1H),3.58-3.46(m,2H),2.95(s,1H),2.88(s,1H),2.40(s,2H),1.85-1.77(m,2H),1.68-1.57(m,2H),1.47(s,9H)。
步骤2：2-[1-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
于0℃向2-[1-(3-氟-5-硝基-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.3g，12.10mmol)和10％钯/木炭(430mg，354.04μmol)在甲醇(8mL)和四氢呋喃(32mL)中的溶液中加入甲酸铵(3.83g，60.69mmol)。将混合物于25℃搅拌16小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤并减压浓缩滤液。残余物用乙酸乙酯(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)稀释。分离混合物，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取水层。合并萃取物，用盐水(40mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，得到呈黑色固体的2-[1-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2g，6.15mmol，收率51％，纯度67％)。LCMS(ESI):m/z 326.2[M+H]+
步骤3：2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
向2-[1-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.55g，4.76mmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(1.83g，9.53mmol)在乙腈(16mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(1.20g，14.30mmol，556.14μL)和四丁基碘化铵(176mg，476.49μmol)。将混合物于85℃搅拌16小时。减压浓缩混合物。粗产物通过柱色谱法在硅胶上纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至0/1)，得到呈深棕色固体的2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.42g，3.19mmol，收率67％)。LCMS(ESI):m/z 437.3[M+H]+
步骤4：2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸于室温向2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(9g，20.62mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，90mL，360mmol)。反应于室温搅拌16小时。通过减压浓缩除去溶剂并将残余物加乙醚(100mL)研磨0.5小时。干燥材料后，得到呈浅蓝色固体的2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(8.0g，17.93mmol，收率86.94％)。LCMS m/z＝381.0[M+H]+
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
向2-[1-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(47.62mg，125.19μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(49.78mg，385.20μmol，67.09μL)。加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(40.28mg，105.93μmol)并于环境温度搅拌15分钟。搅拌15分钟后固体大部分溶解。于0℃加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(65.84mg，96.30μmol)/N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)并温热至25℃。反应混合物用4-5滴三氟乙酸酸化，并直接进样到C18柱子(50g C18)上进行低压液相色谱法纯化(5％至100％的乙腈(+0.1％三氟乙酸)/水(+0.1％三氟乙酸)，用时12分钟)。用饱和碳酸氢钠水溶液(大约60mL)中和纯级分，并用异丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取两次。减压蒸发有机层，得到固体。将固体溶解在二氯甲烷中并进样到经用100％二氯甲烷冲洗的24g硅胶柱上，使用0％至20％的甲醇/二氯甲烷梯度纯化，用时20分钟。减压蒸发纯级分。将粗残余物溶解在二氯甲烷中，转移至8mL小瓶，并减压蒸发。加入水(1mL)和乙腈(1mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液于-78℃冷冻并冻干，得到化合物90(38.9mg，41.32μmol，收率42.91％)。LCMS(ESI+):932.3(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),10.73(s,1H),7.67(d,J＝1.3Hz,1H),7.63(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.60–7.54(m,2H),7.53(s,2H),7.49(dd,J＝2.5,1.0Hz,1H),7.41(d,J＝3.5Hz,1H),7.18(s,1H),6.91(dd,J＝14.8,2.4Hz,1H),6.47(d,J＝8.7Hz,2H),6.07(s,1H),5.81(d,J＝7.8Hz,1H),4.76–4.69(m,2H),4.30(s,2H),4.21(ddd,J＝12.1,7.7,4.8Hz,1H),4.14(d,J＝17.6Hz,1H),4.03–3.83(m,8H),3.16(d,J＝12.2Hz,2H),2.99(t,J＝11.3Hz,2H),2.74–2.57(m,2H),2.55–2.45(m,3H),2.14(s,2H),2.08–1.98(m,1H),1.81(qd,J＝12.3,4.7Hz,1H),1.66(t,J＝10.5Hz,2H),1.54(d,J＝12.6Hz,2H)。
实施例91.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物91
Figure BDA0003698737280005611
将2-[6-[4-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(120mg，197.33μmoll)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(84.52mg，157.86μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(153.02mg，1.18mmol，206.22μL)，然后加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(125.57mg，394.65μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的0.1％乙酸铵/水和乙腈，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈棕色固体的化合物91(95mg，96.45μmol，收率48.88％)。LCMS m/z 975.3(M+H)+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.58(s,1H),8.62-7.57(m,6H),7.49(d,J＝3.60Hz,2H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),7.05(t,J＝8.80Hz,1H),6.88(q,J＝9.20Hz,2H),6.14(d,J＝4.80Hz,1H),4.81-4.75(m,1H),4.23-4.19(m,1H),3.99-3.90(m,7H),3.68-3.44(m,6H),3.28-3.11(m,4H),2.76(t,J＝6.80Hz,3H),2.67-2.55(m,2H),2.48-2.32(m,3H),2.23-2.11(m,1H),2.08-1.96(m,1H),1.92-1.68(m,3H)。
实施例92.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物92
步骤1：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005621
将含有1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(300mg，928.38μmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(238mg，1.28mmol)在DMSO(4mL)中的充分搅拌溶液的10mL微波小瓶用氮气脱气10分钟。向反应混合物中加入叔丁醇钠(245.60mg，2.56mmol)和双(三-叔-丁基膦)钯(0)(21.77mg，42.59μmol)并用氮气再脱气5分钟。在微波辐照下将反应小瓶于100℃加热0.5小时。向反应混合物中加入水(20mL)。反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×50mL)。用盐水(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过使用硅胶的快速柱色谱法纯化并用80％的乙酸乙酯/石油醚洗脱所需产物，得到4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，415.48μmol，收率48.77％)。LCMS(ESI+)m/z:429.2[M+H]+。
步骤2：1-(1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280005631
于0℃向含有4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.25g，583.45μmol)在二氯甲烷(5mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，2.92mmol，730μL)。将悬浮液于室温搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，加乙醚研磨，并倾析，得到1-(1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(0.187g，183.60μmol，收率31.47％)。LCMS(ESI+)m/z:329.1[M+H]+。
步骤3：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005632
于0℃在氮气氛下向含有1-(1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(0.187g，512.57μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(331.23mg，2.56mmol，446.40μL)。向反应混合物中加入2-溴乙酸叔丁酯(109.98mg，563.83μmol，82.69μL)并将反应混合物于环境温度搅拌4小时。用冰冷水淬灭反应混合物并使用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。使用盐水溶液(25mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗品。粗残余物通过使用硅胶的快速柱色谱法纯化并用0至70％的乙酸乙酯/石油醚洗脱所需产物，得到呈灰白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(0.135g，271.82μmol，收率53.03％)。LCMS(ESI+)m/z:443.2[M+H]+。
步骤4：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸
Figure BDA0003698737280005633
于0℃向含有2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(0.135g，305.08μmol)在二氯甲烷(4mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，0.38mL，1.53mmol)。将悬浮液于环境温度搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，加乙醚研磨，并倾析，得到呈棕色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐(0.112g，214.38μmol，收率70.27％)。LCMS(ESI+)m/z:387.1[M+H]+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005641
于0℃在氮气氛下向含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-(4-哌嗪-1-基苯基)异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(120mg，201.99μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐(111.04mg，262.58μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(130.53mg，1.01mmol，175.91μL)。在相同的温度下加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中；128.54mg，403.97μmol)并让于室温搅拌2小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％-55％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物92(50mg，53.89μmol，收率26.68％)。LCMS m/z:924.3(M-H)-。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.48(s,1H),10.51(s,1H),7.78-7.73(m,4H),7.68-7.61(m,1H),7.70(s,1H),7.68(s,1H),7.49-7.50(m,1H),7.46(d,J＝8.80Hz,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,2H),7.08(s,1H),6.94(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.22(d,J＝17.60Hz,1H),4.03-3.98(m,4H),3.96(s,3H),3.89(d,J＝5.20Hz,2H),3.71(d,J＝50.40Hz,2H),3.34-3.31(m,4H),3.31-3.24(m,6H),2.75-2.74(m,3H),2.53-2.67(m,4H),2.53-2.50(m,3H)。
实施例93.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物93
Figure BDA0003698737280005651
Figure BDA0003698737280005661
步骤1：1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐
将(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体Z1，325mg，701.22μmol)溶解在1,4-二噁烷:甲醇混合物(1:1，3mL)中并加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，3.51mL，14mmol)。将反应混合物于40℃加热4小时。减压蒸发挥发物。使固体残余物经受高真空，得到1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(280mg，665.30μmol，收率94.88％)。LCMS(ESI+):364.1(M+H)
步骤2：2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
将1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(285mg，784.34μmol)和N,N-二异丙基乙胺(304.11mg，2.35mmol，409.85μL)混合在DMAc(0.5mL)中。将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入2-溴乙酸叔丁酯(168.29mg，862.78μmol，126.53μL)，并将混合物温热至23℃，同时搅拌4小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至10％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发纯级分，得到2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(330mg，656.54μmol，收率83.71％)。LCMS(ESI+):478.2(M+H)/422.2(M-t-Bu+H)
步骤3：2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐
将2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(330mg，691.09μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入三氟乙酸(1.42g，12.44mmol，958.39μL)。将反应混合物于40℃加热4小时。冷却反应混合物，于0-5℃在搅拌下加到甲基叔丁基醚(20mL)中。将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以2400rpm离心5分钟。倾析出上清溶剂并弃去。向固体中加入甲基叔丁基醚(20mL)并将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以2400rpm离心5分钟。倾析出上清溶剂并弃去。真空蒸发挥发物，并使固体经受1小时的高真空，得到2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(150mg，274.55μmol，收率39.73％)。LCMS(ESI+):422.2(M+H)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(240mg，351.04μmol)和2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(147.93mg，351.04μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(272.22mg，2.11mmol，366.87μL)，并加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(133.48mg，351.04μmol)，将反应混合物于4℃冷却16小时。向反应混合物中加入水(300μL)并搅拌2小时。将混合物进样到100g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水(+0.1％三氟乙酸)洗脱梯度纯化。汇集纯级分并在20:80的iPrOH:氯仿和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发纯级分。将固体溶解在70:30的乙腈:水中，超声处理以溶解，冷冻并冻干，得到化合物93(150mg，151.07μmol，收率43.04％)。LCMS(ESI+):973.2(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.45(s,1H),10.50(s,1H),7.67(d,J＝1.3Hz,1H),7.64(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,2H),7.55–7.45(m,3H),7.40(d,J＝3.5Hz,1H),7.16(s,1H),7.03(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝8.5Hz,2H),6.06(s,1H),4.75(d,J＝17.7Hz,1H),4.37(s,2H),4.14(d,J＝17.7Hz,1H),4.07–3.94(m,7H),3.92(s,4H),3.85(t,J＝6.7Hz,2H),3.16(qd,J＝14.9,14.3,7.1Hz,5H),2.92(d,J＝10.8Hz,1H),2.69(t,J＝6.8Hz,3H),2.65–2.45(m,2H),2.41–2.30(m,1H),2.28–2.11(m,1H),1.84–1.72(m,1H)。
实施例94.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物94
Figure BDA0003698737280005681
步骤1：1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
将(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体Z2，261.00mg，563.14μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入氯化氢溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，0.28mL，11.26mmol)。将反应混合物于40℃加热24小时。减压蒸发挥发物。使物质经受高真空，得到呈致密白色固体的1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(225mg，545.87μmol，收率96.93％)。LCMS(ESI+):364.2(M+Na)。
步骤2：2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
于0℃将1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(227.20mg，625.28μmol)溶解在DMAc(3.5mL)中。加入N,N-二异丙基乙胺(404.05mg，3.13mmol，544.55μL)，并将反应混合物冷却至0℃。加入2-溴乙酸叔丁酯(121.96mg，625.28μmol，91.70μL)。将反应温度升至35℃。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。减压蒸发纯级分，得到2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(298mg，605.36μmol，收率96.81％)。LCMS(ESI+):478.2(M+H)/422.2(M-tBu+H)
步骤3：2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐
将2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(286.50mg，600μmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中。加入三氟乙酸(752.55mg，6.60mmol，508.48μL)，并将反应混合物于35℃搅拌4小时。于0-5℃在搅拌下将反应混合物加到甲基叔丁基醚(20mL)中。将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以1600rpm离心3分钟。倾析出上清溶剂并弃去。向固体中加入甲基叔丁基醚(20mL)并将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以1600rpm离心3分钟。倾析出上清溶剂并弃去。真空蒸发挥发物，并使固体经受1小时的高真空，得到2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(320mg，567.78μmol，收率94.63％)。LCMS:Rt＝0.951min.，MS(ESI+):422.3(M+H)
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(354.03mg，517.83μmol)和2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(218.21mg，517.83μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(468.47mg，3.62mmol，631.36μL)，并加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(236.27mg，621.40μmol)，将反应混合物搅拌2小时。向反应混合物中加入水(1mL)和甲醇(0.5mL)。搅拌30分钟。将混合物进样到50g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水(+0.1％三氟乙酸)洗脱梯度纯化。汇集纯级分并在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(40g柱子，0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。蒸发纯级分。将固体溶解在乙腈:水混合物中。冷冻并冻干，得到化合物94(125mg，127.82μmol，收率24.68％)。LCMS:(ESI+):973.3(M+H)/482.5(M+2H/2)；MS(ESI-):971.0(M-H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),10.57(s,1H),7.74(d,J＝1.3Hz,1H),7.70(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.62–7.51(m,3H),7.48(d,J＝3.5Hz,1H),7.25(d,J＝3.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.55(d,J＝8.4Hz,2H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.43(s,2H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.10(s,2H),4.03(d,J＝6.0Hz,4H),3.99(s,3H),3.92(t,J＝6.7Hz,2H),3.29–3.11(m,3H),2.99(d,J＝10.7Hz,1H),2.87–2.53(m,4H),2.48–2.35(m,2H),2.34–2.16(m,1H),1.99–1.59(m,1H)(观察到溶剂遮蔽)。
实施例95.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物95
Figure BDA0003698737280005701
向处于0℃的2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(160mg，233.69μmol)和2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸(112.13mg，280.43μmol，021)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(151.02mg，1.17mmol，203.52μL)，然后加入丙烷膦酸酐(185.89mg，584.23μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。化合物通过反相柱制备HPLC纯化(柱子：C18 Gold柱，流动相：乙腈/(10mM的乙酸铵/水)。收集纯级分，冷冻并冻干，得到化合物95(50mg，54.23μmol，收率23.21％)，为灰白色固体化合物。LCMS m/Z:916.3,[M+1],1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.80(s,1H),8.54(d,J＝2.40Hz,1H),8.00(d,J＝2.40Hz,1H),7.79(s,1H),7.76(s,1H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),7.01(t,J＝8.80Hz,1H),6.52-6.46(m,3H),6.15(s,1H),6.05(d,J＝Hz,1H),4.81(d,J＝17.60Hz,1H),4.44(s,2H),4.31(m,1H),4.23(d,J＝17.60Hz,2H),4.17(s,4H),4.15(s,2H),4.10-3.98(m,2H),3.00(d,J＝Hz,3H),2.77-2.67(m,2H),2.60-2.57(m,2H),2.11-2.06(m,3H),1.92-1.66(m,5H),(由于溶剂和水遮蔽，质子信号丢失)。
实施例96.
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺，化合物96
Figure BDA0003698737280005711
向处于0℃的5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(170mg，257.13μmol)和2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(106.93mg，257.13μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(199.39mg，1.54mmol，268.72μL)，然后于0℃加入丙烷膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(163.63mg，514.26μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(梯度混合物：0-50％的0.1％乙酸铵/水/乙腈，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分，冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物96(125.5mg，126.93μmol)。LCMS(ESI-)m/z:984.3[M-H])；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.55(s,1H),10.79(s,1H),8.87(dd,J＝2.00,0.8Hz,1H),8.81(d,J＝8.0Hz,1H),8.22(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),8.10(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(s,1H),7.81(d,J＝9.2Hz,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(s,1H),6.86(t,J＝9.6Hz,1H),6.50(dd,J＝15.20,2.4Hz,1H),6.48-6.43(m,1H),6.13(s,1H),5.80-5.78(m,1H),4.97(s,1H),4.87(d,J＝18.8Hz,1H),4.30-4.26(m,2H),4.10-3.99(m,4H),3.15-3.19(m,1H),2.91-2.87(m,4H),2.77-2.67(m,3H),2.59-2.50(m,2H),2.25-2.08(m,1H),1.87-1.63(m,10H)。
实施例97.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物97
步骤1：2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005721
通过手性SFC拆分外消旋混合物2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(实施例70步骤3，2g，4.59mmol)。将2.0g样品溶解在22.0mL乙腈中。
SFC分离条件：柱子：LUX A1[250*10mm,5-微米粒度]；流动相：CO2:异丙醇(45:55)；流速：12g/min；循环时间：11.0min；背压：100巴UV采集，波长：254nm；量：每次进样0.4mL
于压力下蒸发第一组洗脱级分，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(850mg，1.84mmol，收率40.04％)。LCMS m/z:436.0[M+H],LCMS(ESI+)m/z:436.2[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.77(s,1H),6.83(t,J＝12.00Hz,1H),6.49(d,J＝20.00Hz,1H),6.41(d,J＝12.00Hz,1H),5.77(d,J＝7.60Hz,1H),4.44(s,1H),4.29-4.12(m,1H),2.91-2.79(m,5H),2.74-2.70(m,1H),2.34(s,2H),2.16-2.02(m,1H),1.89-1.69(m,3H),1.65(d,J＝16.80Hz,2H),1.42(s,9H),99.18％ee(通过手性SFC)(Rt＝2.33min)，比旋光度:-46.2°[α]20 D
于压力下蒸发第二组洗脱级分，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(530mg，1.17mmol，收率25.52％)。LCMS m/z:436.0[M+H],LCMS(ESI+)m/z:436.0[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.78(s,1H),6.84(t,J＝13.20Hz,1H),6.49(d,J＝20.00Hz,1H),6.41(d,J＝12.40Hz,1H),5.77(d,J＝10.40Hz,1H),4.44(s,1H),4.27-4.22(m,1H),2.92-2.77(m,5H),2.73-2.63(m,1H),2.34(s,2H),2.18-2.03(m,1H),1.87-1.73(m,3H),1.64(d,J＝18.00Hz,2H),1.48(s,9H),99.13％ee(通过手性SFC)(Rt＝4.92min)，比旋光度:+46.8°[α]20 D
步骤2：2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280005731
向处于0℃的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(600mg，1.38mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(在1,4-二噁烷中的4M溶液，1.72mL，6.89mmol)。将反应混合物于室温搅拌6小时。通过旋转蒸发除去挥发物。残余物加乙醚(2×10mL)研磨两次。旋转真空干燥固体残余物，得到呈灰色固体的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(610mg，1.09mmol，收率78.96％)。LCMS(ESI+)m/z:380.0[M+H]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.03(bs,1H),10.86(s,1H),7.63(s,1H),6.70(d,J＝15.20Hz,1H),6.58(dd,J＝11.40,6.80Hz,1H),4.43(dd,J＝11.60,4.40Hz,1H),3.88-3.65(m,5H),3.41-3.36(m,2H),2.74-2.68(m,1H),2.59-2.54(m,1H),2.46(s,2H),2.33(bs,2H),2.10-2.08(m,1H),1.94-1.88(m,2H)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺-[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005741
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(270mg，394.92μmol)和2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(197.07mg，473.91μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(357.29mg，2.76mmol，481.52μL)。于0℃向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中，176μL，188.49mg，592.39μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。粗混合物通过反相色谱法纯化(C18柱(100g)；0％至50％的乙腈/水(0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物97(143.5mg，150.39μmol，收率38.08％)，为灰白色固体化合物。LCMS(ESI+):931.3[M+H],1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.60-12.33(s,1H),10.79(br s,1H),7.77-7.59(m,5H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.85(t,J＝9.2Hz,1H),6.59-6.47(m,3H),6.42(br d,J＝8.8Hz,1H),6.15(s,1H),5.78(br d,J＝7.6Hz,1H),4.84-4.74(m,2H),4.39(s,2H),4.29-4.17(m,2H),4.12-3.93(m,8H),2.93-2.66(m,6H),2.62-2.54(m,2H),2.47(br d,J＝5.6Hz,2H),2.22(s,2H),2.09(td,J＝4.4,8.0Hz,1H),1.90-1.71(m,3H),1.68-1.57(m,2H)。
实施例98.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]-氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物98
步骤1：2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280005751
向处于0℃的2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(530mg，1.22mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，1.52mL，6.09mmol)。加入后让反应于室温搅拌6小时。通过旋转蒸发除去挥发物。所得残余物加乙醚(2×10mL)研磨两次。旋转真空干燥固体残余物，得到呈蓝灰色固体的2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(470mg，928.08μmol，收率76.26％)。LCMS(ESI+)m/z:380.0[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.01(bs,1H),10.86(s,1H),7.64(s,1H),6.70(d,J＝15.60Hz,1H),6.58(d,J＝8.80Hz,1H),4.43(dd,J＝12.00,4.40Hz,2H),3.79-3.61(m,2H),3.41-3.38(m,2H),2.74-2.68(m,1H),2.61-2.53(m,1H),2.46(s,3H),2.30-2.19(m,2H),2.09-2.06(m,1H),1.94-1.88(m,3H)。
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005752
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(220mg，321.79μmol)和2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(160.58mg，386.15μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(207.95mg，1.61mmol，280.25μL)。于0℃向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中，204.77mg，643.58μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物98(88.39mg，93.64μmol，收率29.10％)，为灰白色固体化合物。LCMS(ESI+):931.3[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.58(s,1H),10.78(s,1H),7.75-7.70(m,2H),7.65(d,J＝8.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.55(d,J＝8.40Hz,2H),6.50(dd,J＝2.40,14.80Hz,1H),6.42(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),6.15(s,1H),5.78(d,J＝7.60Hz,1H),4.82-4.76(m,2H),4.39(bs,2H),4.26-4.20(m,2H),4.09(bs,2H),4.05-3.96(m,6H),2.90-2.82(m,4H),2.77-2.68(m,3H),2.23(bs,2H),2.14-2.01(m,1H),1.92-1.81(m,1H),1.80-1.72(m,3H),1.67-1.56(m,2H)。(由于水遮蔽，未观察到质子信号)
实施例99.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺，化合物99
Figure BDA0003698737280005761
将2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(110mg，264.52μmol)和2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺三氟乙酸盐(179.25mg，264.52μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(170.93mg，1.32mmol，230.37μL)，并加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(110.64mg，290.98μmol)，将反应混合物搅拌4小时。将混合物进样到50g C18柱子上，并使用0％至100％的乙腈/水(+0.1％三氟乙酸)水洗脱梯度纯化。汇集纯级分，在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并减压蒸发。残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/乙酸乙酯)。减压蒸发纯级分，得到化合物99(80mg，83.89μmol，收率31.71％)。LCMS(ESI+):925.3(M+H)/463.4(M+2H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),10.71(s,1H),8.25(ddd,J＝4.9,2.0,0.9Hz,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(ddd,J＝8.7,7.4,2.0Hz,1H),7.67(s,1H),7.62(d,J＝10.7Hz,1H),7.60–7.42(m,3H),7.05(ddd,J＝7.4,4.9,1.1Hz,1H),6.78(dd,J＝10.0,8.7Hz,1H),6.47(d,J＝8.5Hz,2H),6.43(dd,J＝15.1,2.6Hz,1H),6.34(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),6.13(s,1H),5.70(d,J＝7.6Hz,1H),4.72(d,J＝17.7Hz,1H),4.69(s,1H),4.31(s,2H),4.23–4.09(m,2H),4.01(s,2H),3.99–3.84(m,6H),2.96–2.57(m,4H),2.57–2.45(m,2H),2.15(s,2H),2.08–1.91(m,1H),1.92–1.64(m,3H),1.55(d,J＝12.4Hz,2H)。
实施例100.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[6-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物100
步骤1：2-[2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280005771
在含有2-[2-(4-溴苯基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸乙酯(2.2g，6.50mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(2.48g，9.76mmol)在1,4-二噁烷(25mL)中的充分搅拌溶液的100mL密封管中加入乙酸钾(1.92g，19.51mmol，1.22mL)并将所得混合物用氮气脱气15分钟。随后，向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(531.17mg，650.43μmol)，用氮气再脱气5分钟并于90℃加热16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并通过硅藻土过滤。用冰冷水洗涤滤液并使用乙酸乙酯(3×75mL)萃取。再用盐水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗品。所得粗残余物通过使用二氧化硅(100-200目)的柱色谱法用0-6％的乙酸乙酯/石油醚纯化，得到2-[2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸乙酯(1.8g，3.83mmol，收率58.90％)。LCMS(ESI+)m/z:386.2[M+H]+。
步骤2：2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸乙酯
Figure BDA0003698737280005781
在含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(450mg，859.89μmol)和2-[2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸乙酯(397.58mg，1.03mmol)在DMSO(5mL)中的充分搅拌溶液的100mL两颈圆底烧瓶中加入在水(0.5mL)中的99％无水碳酸钾(297.11mg，2.15mmol，129.74μL)并将所得混合物用氮气鼓泡脱气10分钟。随后，向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(70.22mg，85.99μmol)，用氮气再脱气5分钟并在氮气氛下在加热块中于90℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰冷水洗涤滤液并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水层。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸酯(380mg，249.56μmol，收率29.02％)。LCMS(ESI+)m/z:655.3[M+H]+。
步骤3：2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸
Figure BDA0003698737280005791
于0℃向含有2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸乙酯(375mg，572.74μmol)在四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)及水(2mL)中的充分搅拌溶液的50mL单颈圆底烧瓶中加入1M LiOH(13.72mg，572.74μmol)。将反应混合物于室温搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，粗残余物使用反相色谱(30g HP Redisep Gold C18)柱进行纯化，同时洗脱(0-60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。收集粗级分并减压浓缩，得到2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(82mg，113.83μmol，收率19.88％)。LCMS(ESI+)m/z:627.2(M+H)+。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[6-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005801
于0℃向氮气氛下含有混合在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(80.00mg，127.65μmol)和(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(46.77mg，136.84μmol)的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中向所得混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(82.49mg，638.26μmol，111.17μL)。随后，加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(109.34mg，255.31μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌1小时。将粗品直接进样到反相C18色谱中(0-55％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物100(44.6mg，47.30μmol，收率37.1％)。LCMS(ESI+)m/z:914.0[M+H]+。LCMS(ESI-):912.2(M-H)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.52(s,1H),10.80(s,1H),7.73(s,1H),7.70(d,J＝10.80Hz,1H),7.68(s,1H),7.62(d,J＝3.60Hz,2H),7.47(s,1H),7.23(s,1H),6.98(t,J＝8.80Hz,1H),6.51(s,1H),6.48(d,J＝6.40Hz,2H),6.44(d,J＝2.00Hz,1H),6.13(s,1H),6.04(d,J＝7.60Hz,1H),4.80(d,J＝5.60Hz,1H),4.50(d,J＝4.00Hz,1H),4.38-4.32(m,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.02-3.97(m,3H),3.91(s,2H),3.78(s,2H),3.09(t,J＝8.80Hz,1H),2.91-2.87(m,1H),2.77-2.71(m,2H),2.68(s,1H),2.60-2.55(m,4H),2.46(m,2H),2.36-2.34(m,2H),2.15-2.08(m,1H),1.92-1.89(m,3H),1.72-1.65(m,2H),1.51-1.50(m,1H)。
实施例101.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物101
Figure BDA0003698737280005811
步骤1：2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯
在圆底烧瓶中向2-(4-哌啶基)乙酸甲酯(1.7g，10.81mmol)在DMSO(20mL)中的搅拌溶液中逐滴加入N,N-二异丙基乙胺(6.99g，54.07mmol，9.42mL)，并缓慢加入1,2,3-三氟-5-硝基-苯(2.30g，12.98mmol)，5分钟后，将反应的温度升至80℃并继续反应3小时。用冰冷水稀释反应混合物。过滤固体沉淀并用水洗涤固体，干燥固体，得到2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯(1.5g，4.49mmol，收率41.49％)，为黄色产物。LCMS m/z315.1(M+H+)
步骤2：2-[1-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯
将2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯(1.5g，4.77mmol)在乙酸乙酯(15mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫5分钟并加入10％钯/碳(487型，干)(558.71mg，5.25mmol)，反应混合物在球囊压力下氢化。将反应于室温搅拌5小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并通过硅藻土过滤。减压浓缩滤液，得到淡棕色固体，其加戊烷研磨并减压干燥，得到2-[1-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯(1.2g，4.01mmol，收率84.02％)。LCMS m/z 285.1(M+H+)。
步骤3：2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯
对2-[1-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯(800mg，2.81mmol)和2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(1.25g，3.38mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的溶液用氮气脱气10分钟。向反应混合物中加入碳酸铯(2.75g，8.44mmol)和4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽(162.82mg，281.39μmol)以及三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(128.84mg，140.70μmol)并用氮气吹扫5分钟。在惰性气氛下将反应混合物于100℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用乙酸乙酯洗涤滤液并减压浓缩，得到粗品。粗品通过(230-400)硅胶色谱法纯化，使用10％的乙酸乙酯/石油醚混合物作为洗脱剂。收集纯级分并减压蒸发，得到2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(570mg，944μmol，收率33.5％)。LCMS m/z 574.3(M+H+)
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯
将2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(500mg，871.64μmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫5分钟并加入10％氢氧化钯/碳(183.61mg，1.31mmol)，反应混合物在球囊压力下氢化。反应于室温搅拌16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。减压浓缩滤液，得到2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(330mg，742.79μmol，收率85.22％)。LCMS m/z 396.0(M+H+)
步骤5：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸
于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(320mg，809.31μmol)在盐酸(6N)(809.31μmol，7mL)中的搅拌溶液中加入并将反应混合物搅拌16小时。向反应混合物中加入1,4-二噁烷。减压蒸发挥发物。粗品通过反相色谱法纯化(C18柱子，0-100％的0.1％乙酸铵/水和乙腈)。浓缩级分，得到2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸(210mg，490μmol，收率60.5％)。LCMS:382.1(M+H+)
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸(170mg，445.76μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(288.05mg，2.23mmol，388.21μL)。在保持0℃的同时向混合物中加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(380.93mg，891.52μmol)。10分钟后，于0℃向反应混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(243.80mg，356.61μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物101(27mg，28.07μmol，收率6.30％)，为灰白色固体化合物。LCMS(ESI+):933.4[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.55(s,1H),10.82(s,1H),7.75-7.64(m,5H),7.49(d,J＝2.80Hz,1H),7.27(d,J＝3.20Hz,1H),6.54(d,J＝8.00Hz,2H),6.32(d,J＝12.00Hz,2H),6.24(d,J＝7.20Hz,1H),6.16(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.33-4.21(m,4H),4.13-4.02(m,8H),2.92(bs,4H),2.78-2.68(m,2H),2.65-2.57(m,2H),2.12-1.90(m,3H),1.92-1.65(m,5H),1.29(s,2H)(由于水遮蔽，一些质子信号未观察到)。
实施例102.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-氧代乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物102
Figure BDA0003698737280005841
将2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(160mg，255.31μmol)和1-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(91.87mg，229.78μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(164.98mg，1.28mmol，222.35μL)。在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(194.15mg，510.61μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(60g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物102(61mg，62.21μmol，收率24.37％)，为灰白色固体化合物。LCMS(ESI+):972.3,[M+H])；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.58(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.80Hz,1H),7.63-7.59(m,4H),7.56(d,J＝6.40Hz,1H),7.49(d,J＝3.20Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.09-7.06(m,1H),6.52-6.49(m,2H),6.15(s,1H),4.82-4.78(m,2H),4.62-4.53(m,1H),4.37-4.26(m,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.13-3.87(m,10H),3.79(d,J＝7.20Hz,2H),3.62-3.54(m,2H),3.09(dd,J＝13.20,32.60Hz,1H),2.85-2.77(m,4H),2.68-2.60(m,3H),2.46-2.34(m,2H),2.30-2.10(m,1H),1.94-1.90(m,3H)。
实施例103.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)-氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物103
Figure BDA0003698737280005851
步骤1：2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
向2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(6.69g，31.06mmol)和1,2,3-三氟-5-硝基-苯(5g，28.24mmol)在DMSO(50mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(10.95g，84.71mmol，14.75mL)。将混合物于80℃搅拌1小时。将混合物倒入水(200mL)中。通过过滤收集沉淀的固体并高真空干燥而不经纯化，得到呈黄色油的2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(10.5g，24.81mmol，收率87.88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.95(d,J＝10.4Hz,2H),4.66(s,1H),3.47-3.39(m,2H),3.25(d,J＝12.8Hz,2H),2.37(s,2H),1.82-1.72(m,2H),1.69-1.62(m,2H),1.41-1.40(s,9H)。
步骤2：2-(1-(4-氨基-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
在N2气氛下向2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(10g，26.86mmol)在乙酸乙酯(100mL)中的溶液中加入10％钯/木炭(6.00g，4.94mmol)。用H2对悬浮液脱气并吹扫3次。将混合物在H2(15Psi)下于25℃搅拌6小时。过滤反应混合物，真空浓缩滤液，得到呈黄色油的2-(1-(4-氨基-2,6-二氟苯基l)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(9.1g，25.24mmol，收率94.02％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝6.16-6.06(m,2H),5.38(s,2H),4.40(s,1H),3.17(d,J＝5.2Hz,2H),2.70-2.62(m,2H),2.32(s,2H),1.74-1.65(m,2H),1.58(br d,J＝12.4Hz,2H),1.41(s,9H)。
步骤3：2-(1-(4-((2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
2-[1-(4-氨基-2,6-二氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(8.7g，25.41mmol)、2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(12.47g，33.68mmol)和CS2CO3(27.41g，76.23mmol)在1,4-二噁烷(360mL)中的搅拌溶液，将反应混合物用氮气脱气15分钟。加入Xphos(1.34g，2.54mmol)和Pd2(dba)3(2.57g，2.54mmol)并将混合物用氮气脱气5分钟。将反应混合物加热至100℃，保持16小时。浓缩反应混合物，用水稀释。用乙酸乙酯(200mL×3)萃取该混合物。合并有机相，用盐水(200×2mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到残余物。残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)，得到呈黄色油的2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(12.75g，19.17mmol，收率75.5％)。LCMS(ESI):m/z 632.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.61(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.43-7.27(m,10H),6.44(d,J＝8.4Hz,1H),6.28-6.21(m,2H),5.38(s,2H),5.30(s,2H),4.44(s,1H),3.23(t,J＝10.4Hz,2H),2.76-2.68(m,2H),2.33(s,2H),1.77-1.67(m,2H),1.64-1.57(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤4：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
在N2气氛下向2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(12.75g，20.18mmol)在1,4-二噁烷(850mL)中的溶液中加入Pd/C(8.29g，68.24mmol)。用H2对悬浮液脱气并吹扫3次。将混合物在H2(15Psi)下于25℃搅拌16小时。过滤反应混合物，真空浓缩母液，得到2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(8.5g，16.49mmol，收率81.72％)。LCMS(ESI):m/z 454.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.80(s,1H),6.30(d,J＝12.0Hz,2H),6.20(d,J＝8.0Hz,1H),4.44-4.39(m,1H),4.35-4.26(m,1H),3.26-3.19(m,2H),2.74-2.66(m,1H),2.71-2.65(m,1H),2.61-2.56(m,1H),2.33(s,2H),2.11-2.01(m,1H),1.90-1.79(m,1H),1.75-1.66(m,2H),1.63-1.56(m,2H),1.41(s,9H)
步骤5：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
将2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(200mg，441.04μmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液于0℃冷却并向反应混合物中逐滴加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，1.1mL，4.41mmol)。加入后让反应混合物于室温搅拌16小时。减压蒸发反应混合物。所得固体用乙醚(30mL)洗涤，得到粗固体2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(182mg，394.97μmol，收率89.56％)。该粗化合物不经纯化即用于下一步。LCMS m/z:398.1[M+1]
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(98.81mg，227.76μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(128.55mg，994.63μmol，173.25μL)。于0℃向反应混合物中加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(159.74mg，372.98μmol)。10分钟后，在相同的温度下向反应混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(170mg，248.66μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(60g)上进行纯化，同时洗脱(0％至70％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物103(25.05mg，25.48μmol，收率10.25％)，为灰白色固体化合物。LCMS(ESI+):949.3[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.82(s,1H),7.75(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),6.55(d,J＝8.80Hz,2H),6.32(d,J＝12.40Hz,2H),6.32(d,J＝12.40Hz,1H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.75(s,1H),4.39(s,2H),4.38-4.27(m,1H),4.22(d,J＝17.60Hz,1H),4.09(s,2H),4.03-3.96(m,7H),3.30-3.21(m,3H),2.78-2.67(m,5H),2.22(s,2H),2.12-2.02(m,1H),1.89-1.79(m,1H),1.71-1.69(m,2H),1.59-1.56(m,2H)。
实施例104.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4xy-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物104
步骤1：1-[2-(二氟甲基)-4-硝基-苯基]哌啶-4-酮
Figure BDA0003698737280005881
在氮气氛下向含有哌啶-4-酮盐酸盐(3g，22.13mmol)和2-(二氟甲基)-1-氟-4-硝基-苯(4.23g，22.13mmol)在DMSO(30mL)中的充分搅拌溶液的250mL密封管中加入N,N-二异丙基乙胺(11.44g，88.50mmol，15.41mL)。所得混合物在加热块中于80℃加热5小时。将反应混合物倒入冰冷水中，沉淀出固体，过滤并减压干燥，得到呈黄色固体的1-[2-(二氟甲基)-4-硝基-苯基]哌啶-4-酮(4.7g，16.32mmol，收率73.74％)。LCMS(ESI):269.0[M-H]。
步骤2：2-[1-[2-(二氟甲基)-4-硝基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005882
向含有处于氮气氛下-78℃的乙酸叔丁酯(2.42g，20.87mmol，2.81mL)在四氢呋喃(30mL)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入在四氢呋喃中的2M二异丙基酰胺锂溶液(2.79g，26.09mmol，13mL)，10分钟加完。所得悬浮液于-78℃再搅拌1小时。然后在保持-78℃的同时向反应混合物中逐滴加入新制得的1-[2-(二氟甲基)-4-硝基-苯基]哌啶-4-酮(4.7g，17.39mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液并继续搅拌3小时。使反应混合物升至室温并用饱和氯化铵溶液淬灭。分离有机层，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水层。合并有机层，用盐水(100mL)洗涤，减压浓缩。粗残余物通过使用二氧化硅的柱色谱法纯化(0-40％的乙酸乙酯/石油醚)，得到2-[1-[2-(二氟甲基)-4-硝基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.55g，11.26mmol，收率64.73％)。LCMS(ESI+)m/z:387.2[M+H]+。
步骤3：2-[1-[4-氨基-2-(二氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005883
于环境温度在氮气氛下向含有2-[1-[2-(二氟甲基)-4-硝基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.1g，10.61mmol)在乙酸乙酯(40mL)中的充分搅拌溶液的250mL单颈圆底烧瓶中加入干的10％钯/碳(1.58g，14.86mmol)。所得悬浮液于环境温度在氢气氛(球囊)下搅拌6小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯(100mL)洗涤硅藻土床。减压浓缩滤液，得到2-[1-[4-氨基-2-(二氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.5g，9.40mmol，收率88.60％)。LCMS(ESI+):357.2[M+H]+。
步骤4：2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280005891
于室温向含有处于氮气氛下的2-[1-[4-氨基-2-(二氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.4g，9.54mmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(2.75g，14.31mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(35mL)中的充分搅拌溶液的100mL密封管中加入碳酸氢钠(1.60g，19.08mmol，742.03μL)。将所得悬浮液于60℃加热16小时。用水(30mL)处理反应混合物并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取产物。(无水硫酸钠)干燥有机层，过滤并减压浓缩滤液，得到粗残余物。粗产物通过快速硅胶(230-400目；100g SNAP)柱用60％的乙酸乙酯/石油醚纯化，得到2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.3g，6.78mmol，收率71.10％)。LCMS(ESI+)m/z:468.2[M+H]+。
步骤5：2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸的合成
Figure BDA0003698737280005892
于0℃在氮气氛下向含有2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.2g，6.84mmol)在无水二氯甲烷(30mL)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，8.6mL，34.22mmol)。所得混合物在氮气氛下于环境温度搅拌8小时。从反应混合物减压除去溶剂，得到粗物质。粗产物加Et2O(30mL)研磨，得到呈灰白色固体的2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(3.11g，6.61mmol，收率96.58％)。LCMS(ESI+)m/z:412.0[M+H]+。
步骤6：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005901
于0℃在氮气氛下向含有2-[1-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(79.26mg，176.98μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(62.38mg，482.69μmol，84.08μL)。随后，在相同的温度下加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(73.41mg，193.07μmol)。向反应混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(110mg，160.90μmol)。将反应混合物于室温搅拌2小时。将粗反应物质直接进样到反相柱C18 Gold柱子(100g)中进行纯化，同时洗脱(0％-50％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物104(51.14mg，52.34μmol，收率32.53％)，为灰白色固体化合物。LCMS(ESI+):963.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.55(s,1H),10.78(s,1H),7.72(t,J＝10.80Hz,2H),7.64(t,J＝11.60Hz,3H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.25(d,J＝11.60Hz,1H),7.13(t,J＝16.00Hz,2H),6.82(t,J＝8.80Hz,2H),6.55(d,J＝8.80Hz,2H),6.15(s,1H),5.98(d,J＝8.00Hz,1H),4.81(t,J＝-9.20Hz,2H),4.78-4.35(m,3H),4.22(d,J＝17.60Hz,1H),4.19(s,2H),4.09-3.98(m,6H),2.94(t,J＝9.60Hz,2H),2.76-2.68(m,2H),2.67(d,J＝1.60Hz,3H),2.24(s,2H),2.08(d,J＝2.80Hz,2H),1.81(t,J＝5.20Hz,1H),1.75-1.65(m,2H),1.62(d,J＝4.00Hz,2H)(由于水遮蔽，两个质子信号不能观察到)。
实施例105.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物105
步骤1：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005911
于0℃在氮气氛下向含有2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸2,2,2-三氟乙酸(127.20mg，301.86μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(177.33mg，1.37mmol，238.98μL)。在保持0℃的同时加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(174.53mg，548.83μmol)。10分钟后，加入2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(实施例28步骤4，150mg，274.41μmol)并将所得混合物在氮气氛下于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到反相C18色谱中(100g)，同时洗脱(0-45％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物105(47.3mg，48.81μmol，收率17.79％)。LCMS(ESI+)m/z:950.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.50(s,1H),10.58(s,1H),8.54(d,J＝11.60Hz,1H),8.11(d,J＝9.20Hz,1H),7.85(d,J＝7.60Hz,1H),7.75(t,J＝10.40Hz,1H),7.60(s,1H),7.58(s,1H),7.54(d,J＝7.20Hz,1H),7.42(s,1H),7.09(d,J＝4.80Hz,2H),6.08(s,1H),4.89(s,1H),4.46(d,J＝11.20Hz,2H),4.18(d,J＝17.60Hz,2H),3.99(d,J＝6.40Hz,3H),3.93(t,J＝6.40Hz,4H),3.49(d,J＝20.40Hz,2H),3.49-3.44(m,3H),3.02(s,1H),2.86-2.68(m,4H),2.46(m,4H),2.34-2.33(m,1H),2.29-2.10(m,2H),2.08-1.95(m,1H),1.88-1.82(m,3H)。
实施例106.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物106
Figure BDA0003698737280005921
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(实施例46步骤6，100mg，157.69μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(86.64mg，189.23μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(203.80mg，1.58mmol，274.66μL)。于0℃向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(100.35mg，315.38μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至45％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物106(56mg，54.95μmol，收率34.85％)。LCMS(ESI+):1001.4[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.49(s,1H),10.57(s,1H),7.77-7.73(m,3H),7.68-7.59(m,4H),7.56-7.49(m,1H),7.25(bs,1H),7.11-7.06(m,3H),6.15(s,1H),4.84-4.79(m,1H),4.25-4.20(m,1H),4.00-3.79(m,10H),3.66(bs,2H),3.34-3.23(m,9H),3.10-2.90(m,1H),2.76-2.56(m,6H),1.90-1.82(m,6H)。
实施例107.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物107
Figure BDA0003698737280005931
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(150mg，236.53μmol)和2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(118.03mg，283.84μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(305.70mg，2.37mmol，411.99μL)。于0℃向反应混合物中加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(116.92mg，307.49μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时(0％至45％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)洗脱。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物107(58mg，60.02μmol，收率25.38％)。LCMS(ESI+):958.3。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.35(s,1H),10.79(s,1H),7.76(s,1H),7.73(d,J＝10.40Hz,1H),7.66(d,J＝8.40Hz,2H),7.60(s,1H),7.46(bs,1H),7.20(bs,1H),7.06(d,J＝8.40Hz,2H),6.86(t,J＝9.20Hz,1H),6.50(d,J＝15.20Hz,1H),6.42(d,J＝8.80Hz,1H),6.12(s,1H),5.78(d,J＝7.20Hz,1H),4.86-4.78(m,2H),4.24-4.19(m,2H),4.00-3.94(m,5H),3.63(bs,2H),3.33-3.25(m,5H),2.93-2.85(m,4H),2.75-2.68(m,2H),2.24(bs,3H),2.15-2.08(m,1H),1.87-1.77(m,8H),1.65-1.62(m,2H)。
实施例108.
N-[1-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-甲酰胺，化合物108
Figure BDA0003698737280005941
步骤1：4-[[5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
向2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(360mg，665.05μmol)和4-[(5-乙炔基吡啶-2-羰基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(262.88mg，798.06μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(336.48mg，3.33mmol，463.47μL)，反应混合物用氮气吹扫10分钟。加入碘化铜(I)(1.76mg，9.24μmol)，然后加入叔丁基Xphos(56.48mg，133.01μmol)、Pd(dppf)Cl2(48.66mg，66.51μmol)，并将反应混合物在微波加热下于90℃搅拌2小时。通过硅藻土床过滤反应混合物并用二氯甲烷和甲醇洗涤。减压浓缩滤液。粗残余物通过isolera柱色谱法纯化，洗脱所需产物，得到4-[[5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(233mg，279.18μmol，收率42％)。LCMS(ESI+):743.2(M+H)。
步骤2：5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐
于0℃向4-[[5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(230mg，309.64μmol)在二氯甲烷(4mL)中的搅拌溶液中逐滴加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸(11.29mg，309.64μmol，0.8mL)，将其于室温搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，真空干燥，得到粗产物5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(204mg，291.37μmol，收率94.10％)。LCMS m/z 643.1(M+H)
步骤3：N-[1-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]吡啶-2-甲酰胺
于0℃向5-[2-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲酰胺盐酸盐(150mg，220.87μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(142.73mg，1.10mmol，192.36μL)，然后于0℃加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(140.55mg，441.74μmol)。15分钟后，加入2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(100.55mg，241.80μmol，021)并于室温搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的0.1％乙酸铵/水和乙腈，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分，冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物108(70.02mg，69.04μmol，收率31.26％)。LCMS(ESI+):1005.3(M+H+)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):10.79(s,1H),8.87(s,1H),8.81(d,J＝7.60Hz,1H),8.23(d,J＝1.60Hz,1H),8.10(d,J＝8.40Hz,1H),7.81(t,J＝9.20Hz,2H),7.66(d,J＝3.20Hz,1H),7.41(s,1H),7.13(s,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.52(d,J＝2.40Hz,1H),6.42(d,J＝6.80Hz,1H),6.08(s,1H),5.87-5.74(m,2H),4.98(s,2H),4.47(d,J＝8.80Hz,1H),4.27(d,J＝13.20Hz,4H),4.08(d,J＝10.80Hz,2H),3.17(t,J＝12.00Hz,2H),3.00-2.88(m,5H),2.77-2.64(m,2H),2.10-2.07(m,1H),1.89-1.72(m,12H)。
实施例109.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物109
步骤1：1-[6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280005961
在氮气氛下向含有1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮(1g，3.09mmol)和1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(443.09mg，3.09mmol，395.62μL)在DMSO(10mL)中的充分搅拌溶液的50mL密封管中加入叔丁醇钠(356.87mg，3.71mmol)并将所得混合物用氮气脱气10分钟。随后，加入双(三-叔-丁基膦)钯(0)(316.31mg，618.94μmol)并将反应混合物用氮气脱气5分钟。将反应小瓶于100℃加热16小时。向反应混合物中加入水(30mL)并使用乙酸乙酯(3×75mL)萃取混合物。用盐水溶液(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗品。粗残余物通过使用硅胶的快速柱色谱法纯化并用(0-100％)乙酸乙酯/石油醚洗脱所需产物，得到1-[6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(610mg，902.14μmol，收率29.15％)。LCMS(ESI+)m/z:386.1[M+H]+。
步骤2：1-[1-甲基-6-(4-氧代-1-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280005962
于0℃向含有1-[6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(600mg，1.56mmol)在四氢呋喃(6mL)中的充分搅拌溶液的50mL单颈圆底烧瓶中加入盐酸(36％w/w水溶液，2.40g，65.82mmol，3mL)。将反应混合物于室温搅拌16小时。用饱和碳酸氢钠水溶液碱化反应混合物并使用5％的甲醇/二氯甲烷萃取化合物。合并有机层，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。粗残余物通过使用二氧化硅的柱色谱法用0至100％的乙酸乙酯/石油醚纯化，得到1-[1-甲基-6-(4-氧代-1-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(305mg，589.69μmol，收率37.88％)。LCMS(ESI+)m/z:342.1[M+H]+。
步骤3：2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280005971
于-78℃向含有处于氮气氛下的乙酸叔丁酯(245.00mg，2.11mmol，283.89μL)在无水四氢呋喃(5mL)中的充分搅拌溶液的50mL双颈圆底烧瓶中加入二异丙基酰胺锂(2M)(225.94mg，2.11mmol)并将所得溶液于-78℃搅拌1小时。于-78℃将含在另一个50mL单颈圆底烧瓶中的处于氮气氛下的1-[1-甲基-6-(4-氧代-1-哌啶基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(180mg，527.30μmol)在无水四氢呋喃(5mL)中的充分搅拌溶液加到上述溶液中。将反应温度缓慢升至室温，搅拌16小时。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭并使用乙酸乙酯(3×50mL)萃取产物。合并有机相并用盐水溶液(50mL)洗涤。合并有机相，干燥(无水硫酸钠)，过滤并减压浓缩滤液，得到粗残余物，其通过快速硅胶(230-400目)柱用0-100％的乙酸乙酯/石油醚纯化，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(60mg，91.80μmol，收率17.41％)并用于下一步。LCMS(ESI+)m/z:458.2[M+H]+。
步骤4：2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280005972
于0℃在氮气氛下向含有2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(60mg，131.14μmol)在无水二氯甲烷(0.7mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入氯化氢(在1,4-二噁烷中的4M溶液，229μL，33.47mg，917.99μmol)。所得混合物在氮气氛下于环境温度搅拌3小时。从反应混合物减压除去溶剂。粗产物加Et2O(10mL)研磨，得到2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(60mg，104.14μmol，收率79.41％)。LCMS(ESI+)m/z:402.1[M+H]+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280005981
于0℃在氮气氛下向含有2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(60mg，137.02μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(88.55mg，685.12μmol，119.33μL)。随后，在相同的温度下加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(117.37mg，274.05μmol)。15分钟后，向反应混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(74.94mg，109.62μmol)并将所得溶液于环境温度搅拌1小时。反应混合物通过反相C-18色谱法(100g)直接纯化，用(0-55％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)洗脱。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物109(20mg，19.97μmol，收率14.58％)。LCMS(ESI+)m/z:953.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.52(s,1H),7.74(s,1H),7.72(d,J＝4.40Hz,1H),7.66(d,J＝8.80Hz,1H),7.61(s,2H),7.49(d,J＝3.20Hz,1H),7.43(d,J＝9.20Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),6.91(d,J＝1.60Hz,1H),6.83(s,1H),6.55(d,J＝8.40Hz,2H),6.15(s,1H),4.87(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.38(s,2H),4.22(d,J＝9.60Hz,1H),4.19(s,2H),4.08-4.02(m,6H),3.99-3.91(m,6H),3.52(d,J＝4.80Hz,2H),3.24(t,J＝10.40Hz,2H),2.77-2.72(m,3H),2.24(s,2H),1.77-1.75(m,2H),1.68-1.65(m,2H),1.38-1.20(m,2H)
实施例110.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物110
Figure BDA0003698737280005991
向处于0℃的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(53.45mg，128.53μmol，021)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(120.81mg，934.77μmol，162.82μL)，然后加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(66.64mg，175.27μmol)。5分钟后，在保持0℃的同时加入2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(80mg，116.85μmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌5小时。在较低温度下减压浓缩反应混合物，粗混合物通过C18柱子(100g)纯化(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时45分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的产物化合物110(39mg，40.57μmol，收率34.72％)。LCMS(m/z:932.3[M+1]),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):10.79(s,1H),8.54(d,J＝2.00Hz,1H),8.00(dd,J＝6.00,Hz,1H),7.79(s,1H),7.78(d,J＝10.80Hz,1H),7.61(s,1H),7.48(s,1H),7.26(bs,1H),6.87(t,J＝9.20Hz,1H),6.50(m,2H),6.41(dd,J＝6.80,Hz,1H),6.14(s,1H),5.79(d,J＝7.60Hz,1H),4.80(m,1H),4.77(s,1H),4.39(s,2H),4.25(m,2H),4.20(s,3H),4.09(s,2H),3.98(m,2H),2.86(m,4H),2.77(m,2H),2.59(m,2H),2.22(s,2H),2.10(m,1H),1.76(m,1H),1.73(m,2H),1.63(m,2H)。
实施例111.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物111
Figure BDA0003698737280006001
于0℃向2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(62.10mg，149.33μmol，021)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(57.90mg，447.99μmol，78.03μL)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(85.17mg，224.0μmol)并搅拌15分钟，然后加入2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(85.21mg，149.33μmol)。2小时后，蒸发溶剂，对溶剂和粗产物进行分析。通过反相柱色谱法纯化化合物(C18柱(50g)，5％至75％的乙腈/水(0.1％乙酸铵)作为洗脱剂)。向经纯化的级分中加入水(10mL)和乙腈(5mL)，将混合物彻底超声处理并涡旋。将悬浮液冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物111(48mg，51.19μmol，收率34.28)。LCMS m/z:932.3(M+H)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.79(d,J＝Hz,1H),8.54(d,J＝2270.40Hz,1H),8.00(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.79(s,1H),7.78(dd,J＝10.40,Hz,2H),7.61(s,1H),7.50-7.49(m,1H),7.27-7.26(m,1H),6.88-6.83(m,1H),6.52-6.48(m,2H),6.43-6.40(m,1H),6.15(s,1H),5.80-5.78(m,1H),4.83-4.77(m,2H),4.39(s,2H),4.25(s,2H),4.21(m,4H),4.16-4.02(m,2H),4.01-3.99(m,2H),2.78-2.82(m,4H),2.71-2.67(m,2H),2.60-2.51(m,3H),2.34-2.22(m,2H),2.22-1.91(m,1H),1.76-1.61(m,5H)。
实施例112.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物112
Figure BDA0003698737280006011
Figure BDA0003698737280006021
步骤1：4-[5-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
向2,6-二苄氧基-3-碘-吡啶(3.73g，8.94mmol)和4-(5-氨基-3-氟-2-吡啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS#2351275-60-8，2.4g，8.13mmol)在叔丁醇(25mL)中的搅拌溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(744.11mg，812.59μmol)。所得混合物用氩气脱气并在惰性气氛下加入碳酸铯(2.65g，8.13mmol)和RuPhos(379.18mg，812.59μmol)。所得混合物于100℃加热18小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土短垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。合并有机部分，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(25％的乙酸乙酯-己烷)，得到4-[5-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.6g，4.45mmol，收率54.72％)。LCMS(ESI+):585.2(M+H)
步骤2：3-[[6-[1-(1-叔-丁氧基乙基)-4-哌啶基]-5-氟-3-吡啶基]氨基]哌啶-2,6-二酮
向4-[5-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5g，4.23mmol)在乙酸乙酯(20mL)中的经脱气溶液中加入10％钯/碳(487型，干，450.38mg，4.23mmol)。所得混合物于室温在氢气球压力下搅拌16小时。反应混合物通过硅藻土短垫过滤，用乙酸乙酯洗涤并减压浓缩。粗物质通过combiflash色谱法纯化(60％的乙酸乙酯/己烷)，得到3-[[6-[1-(1-叔-丁氧基乙基)-4-哌啶基]-5-氟-3-吡啶基]氨基]哌啶-2,6-二酮(900mg，2.21mmol，收率52.32％)。LCMS(ESI+):407.0(M+H)。
步骤3：3-[[5-氟-6-(4-哌啶基)-3-吡啶基]氨基]哌啶-2,6-二酮
于0℃向3-[[6-[1-(1-叔-丁氧基乙基)-4-哌啶基]-5-氟-3-吡啶基]氨基]哌啶-2,6-二酮(900mg，2.21mmol)在二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(2.52g，22.14mmol，1.71mL)。将所得混合物温热至室温并搅拌5小时。减压浓缩反应混合物，固体残余物加醚研磨并经受高真空，得到呈蓝色固体的3-[[5-氟-6-(4-哌啶基)-3-吡啶基]氨基]哌啶-2,6-二酮(690mg，1.59mmol，收率71.72％)。LCMS(ESI+):307.0(M+H)。
步骤4：2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
向处于0℃的3-[[5-氟-6-(4-哌啶基)-3-吡啶基]氨基]哌啶-2,6-二酮三氟乙酸盐(150mg，356.84μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(310.77μL，230.59mg，1.78mmol)并向反应混合物中逐滴加入2-溴乙酸叔丁酯(54.95μL，73.08mg，374.68μmol)。将反应混合物于室温搅拌16小时。向混合物中加入冰冷水(10mL)并使用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩，得到粗混合物。粗混合物使用快速硅胶柱色谱法纯化，在5％的甲醇/二氯甲烷中洗脱，得到2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(80mg，171.50μmol，收率48.06％)。LCMS m/z:421.0[M+H]
步骤5：2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐
将2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(80mg，190.26μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中，于0℃逐滴加入氯化氢(4.0M，在1,4-二噁烷中，238μL，951.30μmol)并搅拌该反应混合物6小时。浓缩反应混合物并在减压下与10mL二氯甲烷共蒸馏。固体加乙醚研磨，得到呈灰白色固体的2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(70mg，155.43μmol，收率81.69％)。LCMS:m/z 365(M+H+)
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
于0℃向2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(80mg，117.01μmol)和2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸(51.17mg，140.44μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(75.61mg，585.07μmol，101.91μL)，然后加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(100.23mg，234.03μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗反应混合物直接进样并通过反相C18色谱法纯化(0.1％乙酸铵/水和乙腈)。将纯级分冻干，得到呈灰白色固体的所需产物化合物112(28mg，29.53μmol，收率25.24％)，对其进行分析。LCMS at m/z 916.4(M+H+)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.54(s,1H),10.85(s,1H),7.86(s,1H),7.74(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.80Hz,2H),7.60(s,1H),7.47(s,1H),7.24(s,1H),6.88(dd,J＝13.20,2.40Hz,1H),6.54(d,J＝8.40Hz,1H),6.34(d,J＝8.40Hz,1H),6.12(s,1H),4.83-4.77(m,1H),4.44(s,2H),4.39-4.35(m,1H),4.21(d,J＝17.20Hz,1H),4.09(s,2H),4.03(s,4H),4.00-3.98(m,2H),3.00(s,2H),2.90(d,J＝10.80Hz,2H),2.79-2.69(m,3H),2.56-2.53(m,3H),2.13-2.08(m,3H),1.98-1.76(m,5H),1.63(d,J＝11.20Hz,2H)。
实施例113.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物113
步骤1：2-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006041
在氮气氛下向含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(800mg，1.53mmol)和2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸叔丁酯(760.09mg，1.83mmol)在无水1,4-二噁烷(15mL)中的充分搅拌溶液的100mL双颈圆底烧瓶中加入在水(3.5mL)中的碳酸钠(486.08mg，4.59mmol，192.12μL)。所得混合物用氮气脱气15分钟。随后，加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(124.77mg，152.87μmol)并再脱气10分钟，将反应混合物于80℃加热16小时。反应混合物用二氯甲烷稀释并通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液，得到粗品。粗残余物通过使用硅胶(100-200目)的快速柱色谱法纯化，用3％的甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈淡棕色固体的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸叔丁酯(410mg，355.44μmol，收率23.25％)。LCMS(ESI+)m/z:684.3[M+H]+。
步骤2：2-(6-(4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280006051
于0℃向含有2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸叔丁酯(120mg，175.5μmol)在无水二氯甲烷(2.0mL)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入三氟乙酸(200.1mg，1.75mmol，135μL)。将反应混合物于环境温度在氮气氛下搅拌4小时。减压除去溶剂。残余物与二氯甲烷共蒸馏并加Et2O(50mL)研磨，得到呈灰白色固体的2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐。LCMS(ESI+)m/z:584.2[M+H]+。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰
Figure BDA0003698737280006052
于0℃在氮气氛下向含有2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(150mg，214.99μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(115.11mg，214.99μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(138.93mg，1.07mmol，187.24μL)。随后，于0℃向反应混合物中加入丙烷膦酸酐(136.81mg，429.98μmol)并于环境温度在氮气氛下搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物113(34.1mg，33.61μmol，两步收率19.1％)。LCMS(ESI+)m/z:988.4[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.52(s,1H),10.58(s,1H),7.75(s,1H),7.72(d,J＝10.80Hz,1H),7.67(d,J＝3.20Hz,1H),7.65(d,J＝3.60Hz,1H),7.61(s,1H),7.58(d,J＝4.80Hz,2H),7.55(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.26(d,J＝3.20Hz,1H),7.10-7.08(m,1H),6.56(t,J＝7.20Hz,2H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.22(d,J＝17.60Hz,1H),3.99(d,J＝7.60Hz,5H),3.92-3.87(m,2H),3.85-3.80(m,4H),3.77(s,1H),3.60-3.57(m,2H),3.43-3.39(m,2H),3.27-3.20(m,2H),3.03(br d,J＝10.00Hz,1H),2.85-2.70(s,5H),2.33-2.21(m,2H),2.09(t,J＝5.60Hz,1H),1.85(d,J＝11.60Hz,1H)(由于水遮蔽，若干质子信号不能观察到)。
实施例114.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物114
Figure BDA0003698737280006061
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(150mg，210.75μmol)和2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(103.99mg，210.75μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(136.19mg，1.05mmol，183.55μL)。于0℃向反应混合物中加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(160.27mg，421.51μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物114(20mg，20.54μmol，收率9.75％)。LCMS(ESI+):959.4[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.79(s,1H),7.74(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.64(d,J＝8.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.53(d,J＝8.40Hz,2H),6.48(d,J＝2.40Hz,1H),6.42(dd,J＝2.00,8.80Hz,1H),6.15(s,1H),5.79(d,J＝7.60Hz,1H),4.94(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.26-4.19(m,2H),4.02-3.99(m,2H),3.69-3.65(m,4H),3.52(s,4H),2.90-2.83(m,4H),2.75-2.71(m,2H),2.59(t,J＝4.00Hz,1H),2.11-2.08(m,1H),1.86-1.63(m,9H),[预期52H，观察到47H(水遮蔽)]。
实施例115.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物115
Figure BDA0003698737280006071
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(120mg，171.99μmol)和2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(78.67mg，159.45μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(136.19mg，1.05mmol，183.55μL)。于0℃向反应混合物中加入1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(95.29mg，223.59μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物115(62.5mg，65.58μmol，收率38.13％)。LCMS(ESI-):943.4[M-H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.75(s,1H),7.73(s,1H),7.71(s,1H),7.70(d,J＝Hz,1H),7.66(d,J＝2.40Hz,1H),7.64(d,J＝2.40Hz,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),6.89-6.83(m,1H),6.52(t,J＝2.40Hz,1H),6.48(d,J＝2.80Hz,1H),6.42(d,J＝8.40Hz,1H),6.15(s,1H),5.77(d,J＝7.60Hz,1H),4.95(d,J＝8.80Hz,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,2H),4.20(s,1H),4.01-3.98(m,3H),3.87-3.82(m,4H),3.78(s,1H),3.60-3.57(m,2H),3.42(t,J＝6.80Hz,1H),2.91-2.86(m,4H),2.74-2.67(m,2H),2.59(s,2H),2.45(s,3H),2.20(t,J＝Hz,1H),2.11-2.09(m,2H),1.76-1.65(m,4H)水遮蔽。
实施例116.
2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物116
步骤1：6-(4-(2-(2-乙氧基-1-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯
Figure BDA0003698737280006081
向2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(1.0g，2.05mmol)和6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(985.93mg，2.46mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中加入在水(1mL)中的碳酸钠(652.60mg，6.16mmol，257.94μL)。反应混合物用氮气脱气10分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(167.61mg，205.24μmol)并再脱气5分钟。将反应混合物在氮气下于80℃加热16小时。反应混合物通过硅藻土过滤，使用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，分离有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗品，其通过使用230-400硅胶以梯度(0-10％的甲醇/二氯甲烷)纯化，得到呈深棕色固体的6-(4-(2-(2-乙氧基-1-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(380mg，收率16.95％％)，LCMS(ESI+):634.3[M+H]。
步骤2：[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280006091
于0℃向6-[4-[2-[2-乙氧基-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(380mg，599.67μmol)在四氢呋喃(2mL)和乙醇(2mL)中的搅拌溶液中加入1M LiOH(14.36mg，599.67μmol)。将反应混合物于室温搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，得到粗品，其加乙醚进一步研磨，倾析出溶剂，得到[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酰基]氧基锂(350mg，收率55.35％)棕色固体。LCMS(ESI+):606.2[M+H]。
步骤3：6-(4-(7-氟-2-(1-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006092
于0℃向[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酰基]氧基锂(350mg，572.30μmol)和噻唑-2-胺(171.94mg，1.72mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(369.82mg，2.86mmol，498.41μL)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中，364.19mg，1.14mmol)。将反应混合物于室温搅拌4小时。用饱和碳酸氢钠水溶液稀释反应混合物并使用乙酸乙酯[3×25mL]萃取，合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗物质通过快速柱色谱法在硅胶(230-400)上用(0-10％的甲醇/二氯甲烷)纯化，得到呈棕色固体的6-(4-(7-氟-2-(1-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(160mg，收率25.61％)，LCMS(ESI+):688.3[M+H])。
步骤4：2-(6-(4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺的合成
Figure BDA0003698737280006101
于0℃向6-[4-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺-[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(82mg，119.23μmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(95.16mg，834.60μmol，64.30μL)并将反应混合物于室温搅拌6小时。减压浓缩反应混合物，再与二氯甲烷(2×5mL)共蒸馏，并加乙醚(5mL)研磨，得到呈棕色固体的2-(6-(4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(80mg，收率77.46％)。LCMS(ESI+):588.1[M+H]。
步骤5：2-(6-(4-(6-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280006111
于0℃向2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(70mg，99.76μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(53.41mg，99.76μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(64.47mg，498.81μmol，86.88μL)，然后在相同的温度下加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(85.45mg，199.53μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(60g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物116(12mg，11.74μmol，收率11.77％)。LCMS(ESI+):991.2[M+H]；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.57(s,1H),10.58(s,1H),7.75-7.73(m,2H),7.69(t,J＝4.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.80Hz,2H),7.60(d,J＝8.40Hz,1H),7.57(s,1H),7.48(d,J＝1.60Hz,1H),7.25(s,1H),7.10(d,J＝8.80Hz,1H),6.56(d,J＝8.80Hz,2H),6.15(s,1H),5.84(d,J＝54.80Hz,1H),4.91-4.75(m,1H),4.45(s,2H),4.36-4.16(m,3H),4.11(s,2H),4.04(d,J＝6.00Hz,4H),4.00(s,3H),3.93(t,J＝6.40Hz,2H),3.28-3.17(m,4H),3.03-2.98(m,2H),2.76(t,J＝6.80Hz,3H),2.69-2.59(m,1H),2.50-2.39(m,1H),2.31-2.19(m,1H)。
实施例117.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物117
Figure BDA0003698737280006121
步骤1：2-(1-(2-氯-4-硝基苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
向1,2-二氯-4-硝基-苯(5g，26.04mmol)和1,2-二氯-4-硝基-苯(5g，26.04mmol)在DMSO(50mL)中的溶液中加入K2CO3(10.8g，78.13mmol)。将混合物于110℃搅拌1小时。将混合物倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取该混合物。合并有机相，用盐水(100mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈黄色油的2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(9.6g，22.52mmol，收率86.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.20(d,J＝2.4Hz,1H),8.12(dd,J＝2.4,J＝8.8,9.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.8Hz,1H),4.65(s,1H),3.29(br d,J＝12.4Hz,2H),3.17-3.09(m,2H),2.39(s,2H),1.88-1.79(m,2H),1.75-1.68(m,2H),1.42-1.41(m,9H)
步骤2：2-(1-(4-氨基-2-氯苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
向2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(9.4g，25.35mmol)在乙醇(190mL)和水(38mL)中的混合物中加入氯化铵(4.07g，76.05mmol，2.66mL)。反应混合物于90℃搅拌16小时。过滤反应混合物除去铁粉，浓缩除去溶剂。将混合物倒入水(400mL)中。用乙酸乙酯(200mL×3)萃取该混合物。合并有机相，用盐水(200mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(8.6g，22.83mmol，收率85.53％)。
步骤3：2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
向2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(6.4g，18.78mmol)在乙腈(100mL)中的搅拌溶液中加入TBAI(13g，9.39mmol)、碳酸氢钠(4.41g，56.33mmol)，在搅拌5分钟后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(3.61g，18.78mmol)，10分钟后，将反应的温度升至90℃并继续反应约72小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。用水(400mL)稀释残余物并用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。合并有机层，用盐水(20mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)，得到呈蓝色固体的2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.4g，7.23mmol，收率49.25％)。LCMS(ESI+):452.1(M+H),1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ＝8.05(br s,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,1H),6.73(d,J＝2.8Hz,1H),6.57(dd,J＝2.8,8.8Hz,1H),4.60(d,J＝3.6Hz,1H),4.01(td,J＝4.2,12.4Hz,1H),3.76(s,1H),3.09-2.95(m,4H),2.94-2.83(m,1H),2.81-2.67(m,1H),2.61-2.50(m,1H),2.45(s,2H),1.90(dq,J＝4.8,13.2Hz,1H),1.83-1.77(m,4H),1.49(s,9H)。
步骤4：2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
于0℃向2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.4g，7.52mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入浓盐酸(12M，6.27mL)。混合物于20℃搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。向残余物中加入甲苯(50mL)，并减压除去挥发物。加入甲苯和四氢呋喃(50mL:50mL)，并减压除去挥发物。残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释，混合物于15℃搅拌12小时，过滤并收集滤饼，得到呈灰色固体的2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(2.9g，6.14mmol，收率81.59％)。LCMS(ESI+):396.0(M+H)+,1H NMR(400MHz,DEUTERIUM OXIDE)δ＝7.52-7.45(m,1H),6.91-6.87(m,1H),6.79-6.72(m,1H),4.40(dd,J＝5.2,12.4Hz,1H),3.89-3.76(m,2H),3.60(br d,J＝12.4Hz,2H),2.84-2.67(m,2H),2.63(s,2H),2.27-1.96(m,6H)。
步骤5：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
于0℃向2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(102.44mg，236.95μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(127.60mg，987.31μmol，171.97μL)，然后加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(169.11mg，394.92μmol)，搅拌15分钟。向反应混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(135mg，197.46μmol)并于室温搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分，冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物117(32.5mg，32.90μmol，收率16.66％)。LCMS(ESI+):947.3(M+H+)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.53(bs,1H),10.79(s,1H),7.74(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,2H),7.60(s,1H),7.46(bs,1H),7.21(bs,1H),6.97(d,J＝8.40Hz,1H),6.75(d,J＝2.40Hz,1H),6.60(dd,J＝2.40,8.80Hz,2H),6.55(d,J＝8.80Hz,1H),6.12(s,1H),5.84(d,J＝8.00Hz,1H),4.89-4.78(m,2H),4.39(s,2H),4.29-4.25(m,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.09(s,2H),4.03-3.96(m,6H),2.87(t,J＝10.00Hz,2H),2.81-2.69(m,4H),2.58(t,J＝10.40Hz,1H),2.24(s,2H),2.11-2.08(m,1H),1.89-1.70(m,4H),1.64(d,J＝12.40Hz,2H)。
实施例118.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-氧代乙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物118
Figure BDA0003698737280006141
Figure BDA0003698737280006151
步骤1：2-[2-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸
向2-[6-[6-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(140mg，204.48umol)和2-氧代乙酸(37.64mg，408.96umol，28.09uL)在甲醇(5mL)中的溶液中加入乙酸(613.95ug，10.22umol，0.58uL)并于室温搅拌。2小时后，向反应混合物中加入甲基吡啶硼烷(43.74mg，408.96umol)。浓缩反应混合物并通过反相色谱法纯化(100g C-18柱子，0-45％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的2-[2-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(80mg，120.07umol，收率58.72％)。LCMS m/z 629.2(M+H)+。
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[6-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
将2-[2-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]乙酸(65mg，103.39umol)和1-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(49.61mg，124.07umol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(80.18mg，620.35umol，108.05uL)，然后加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(49.35mg，155.09umol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物118(18mg，18.02umol，收率17.43％)。LCMS m/z 974.3(M+H)+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.49(s,1H),10.57(s,1H),8.52(s,1H),7.98(d,J＝8.80Hz,1H),7.79-7.75(m,2H),7.63-7.52(m,3H),7.48(d,J＝3.60Hz,1H),7.25(d,J＝3.20Hz,1H),7.09-7.07(m,1H),6.50(d,J＝8.80Hz,1H),6.15(s,1H),4.82(d,J＝17.20Hz,1H),4.50-4.79(m,1H),4.23(d,J＝17.60Hz,1H),4.10-4.08(m,4H),4.02-3.73(m,9H),3.45-3.43(m,7H),3.30-3.18(m,2H),2.78-2.75(m,5H)。
实施例119.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，异构体1，化合物119
Figure BDA0003698737280006161
Figure BDA0003698737280006171
步骤1：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(异构体1)和2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(异构体2)
通过制备SFC分离来分离外消旋2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(5g)。柱子：Regis(S,S)-Whelk-O1柱，250×50mmI.D.，10um粒度；梯度洗脱：40％的相B，60％的相A；流速：200g/min；检测器：PDA；柱温：35℃；背压：100巴。
分析SFC条件：柱子：(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,3.5um；梯度洗脱：40％的EtOH(0.05％二乙胺)/CO2；流速：3mL/min；检测器：PDA；柱温：35℃；背压：100巴。
蒸发第一洗脱级分，得到2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯，异构体1(2.5g，收率50％)。SFC分析Rt＝1.175min 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.80(s,1H),6.30(d,J＝12.0Hz,2H),6.20(d,J＝8.0Hz,1H),4.42(s,1H),4.34-4.26(m,1H),3.22(br t,J＝10.4Hz,2H),2.73-2.66(m,3H),2.58(t,J＝3.6Hz,1H),2.33(s,2H),2.11-2.02(m,1H),1.85(dd,J＝4.4,12.4Hz,1H),1.76-1.66(m,2H),1.63-1.55(m,2H),1.41(s,9H)。
蒸发第二洗脱级分，得到2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯，异构体2(2.45g，收率49％)。SFC分析Rt＝1.393min.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.80(s,1H),6.30(d,J＝12.4Hz,2H),6.20(d,J＝8.0Hz,1H),4.42(s,1H),4.34-4.26(m,1H),3.22(br t,J＝10.4Hz,2H),2.70(br dd,J＝6.8,11.2Hz,3H),2.58(br t,J＝3.6Hz,1H),2.33(s,2H),2.11-2.02(m,1H),1.85(br dd,J＝4.4,12.4Hz,1H),1.74-1.66(m,2H),1.62-1.56(m,2H),1.41(s,9H)
步骤2：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸，异构体1
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(500mg，1.10mmol)在二氯甲烷(7.5mL)中的溶液中加入盐酸(12M，1mL，12mmol)。混合物于25℃搅拌1小时。浓缩反应混合物。残余物用乙酸乙酯(15V)稀释，混合物于25℃搅拌12小时，过滤并收集滤饼，得到2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(400mg，0.830mmol，收率75％)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2,6-二氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，异构体1
向2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐酸盐(异构体1)(80mg，185.06μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(176.65mg，277.59μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(167.42mg，1.30mmol，225.64μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(89.61mg，131.06μmol)，混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(105.99mg，166.55μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。反应混合物用乙腈(2mL)溶解。通过制备-HPLC(柱子：WatersXbridge C18150*50mm*10um相：[水-乙腈]；B％:28％-58％，11min)纯化反应混合物，得到呈白色固体的化合物119(73.73mg，74.58μmol，收率21.57％)。LCMS(ESI):m/z 947.5[M+H]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.62-11.74(m,1H),11.15-10.40(m,1H),7.73(s,1H),7.72-7.67(m,1H),7.64(br d,J＝8.8Hz,2H),7.59(s,1H),7.45(br d,J＝3.6Hz,1H),7.20(brs,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(d,J＝2.4Hz,1H),6.67-6.48(m,3H),6.11(s,1H),5.83(d,J＝8.0Hz,1H),4.90-4.74(m,2H),4.38(s,2H),4.33-4.16(m,2H),4.08(s,1H),3.92(brs,6H),2.92-2.84(m,2H),2.82-2.70(m,4H),2.58(br d,J＝4.4Hz,1H),2.48-2.42(m,1H),2.23(s,2H),2.12-2.02(m,1H),1.92-1.82(m,1H),1.80-1.71(m,2H),1.63(br d,J＝12.4Hz,2H)
实施例120.
2-(6-(4-(6-(2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，异构体1，化合物120
Figure BDA0003698737280006191
步骤1：2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(异构体1)和2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(异构体2)
通过制备SFC分离来分离外消旋2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(4.5g，9.96mmol)(柱子：Regis-(S,S)Whelk-O1柱，250×50mm I.D.,10um粒度；流动相：相A超临界CO2，相B EtOH；梯度洗脱：40％的相B，60％的相A；流速：200g/min；检测器：PDA；柱温：35℃；背压：100巴以使CO2保持超临界流)，基于洗脱顺序，得到两组级分。
减压蒸发第一组洗脱级分，得到2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(异构体1)(2.1g，4.55mmol，收率45.7％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.76(s,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(d,J＝2.4Hz,1H),6.59(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),5.82(d,J＝7.6Hz,1H),4.45(s,1H),4.32-4.24(m,1H),2.92-2.83(m,2H),2.81-2.75(m,2H),2.74-2.68(m,1H),2.59(t,J＝4.0Hz,1H),2.35(s,2H),2.11-2.03(m,1H),1.85(br dd,J＝4.3,12.5Hz,1H),1.82-1.73(m,2H),1.69-1.60(m,2H),1.42(s,9H),SFC(柱子：(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,3.5um,流动相：40％EtOH(0.05％二乙胺)/CO2，流速：3mL/min；检测器：PDA，柱温：35℃；背压：100巴):Rt＝1.910min,100％ee。
减压蒸发第二组洗脱级分，得到2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(异构体2)(2.04g，4.42mmol，收率44.4％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.76(s,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(d,J＝2.7Hz,1H),6.59(dd,J＝2.7,8.8Hz,1H),5.82(d,J＝7.8Hz,1H),4.45(s,1H),4.32-4.24(m,1H),2.91-2.83(m,2H),2.81-2.76(m,2H),2.73-2.66(m,1H),2.59(br t,J＝3.9Hz,1H),2.35(s,2H),2.11-2.03(m,1H),1.85(br dd,J＝4.2,12.3Hz,1H),1.82-1.74(m,2H),1.68-1.61(m,2H),1.41(s,9H),SFC(Column:(S,S)Whelk-O1 100×4.6mm I.D.,3.5um,流动相：40％EtOH(0.05％二乙胺)/CO2，流速：3mL/min；检测器：PDA，柱温：35℃；背压：100巴):Rt＝2.616min,100％ee。
步骤2：2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸，异构体1
向2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(300mg，663.80μmol)在二氯甲烷(4.5mL)中的溶液中加入盐酸(12M，0.6mL，7.2mmol)。混合物于25℃搅拌1小时。浓缩反应混合物，残余物用乙酸乙酯(15V)稀释，混合物于25℃搅拌12小时。过滤收集固体，得到2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(280mg，550.5μmol，收率82.9％)。LCMS(ESI+):396.0(M+H),1H NMR(400MHz,氧化氘)δ＝7.55(br d,J＝9.2Hz,1H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),6.82(br dd,J＝2.4,9.0Hz,1H),4.48(br dd,J＝5.2,12.4Hz,1H),3.95-3.83(m,2H),3.72-3.65(m,2H),2.90-2.78(m,1H),2.81(br d,J＝5.2Hz,1H),2.69(s,2H),2.35-2.24(m,3H),2.22-2.14(m,2H),2.11-2.03(m,1H)。
步骤3：2-(6-(4-(6-(2-(1-(2-氯-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，异构体1
向2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(80mg，185.06μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(176.65mg，277.59μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(167.42mg，1.30mmol，225.64μL)。混合物于0℃搅拌20分钟，然后加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(89.61mg，131.06μmol)，混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(105.99mg，166.55μmol)并于0℃搅拌1小时。反应混合物用乙腈(2mL)溶解。通过制备-HPLC(柱子：Waters Xbridge C18150*50mm，10μm相，流动相：28％至58％的乙腈/水；11min)纯化反应混合物，得到呈白色固体的化合物120(39.27mg，39.79μmol，收率21.50％)。LCMS(ESI+):m/z 947.5[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.62-11.74(m,1H),11.15-10.40(m,1H),7.73(s,1H),7.72-7.67(m,1H),7.64(br d,J＝8.8Hz,2H),7.59(s,1H),7.45(br d,J＝3.6Hz,1H),7.20(br s,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(d,J＝2.4Hz,1H),6.67-6.48(m,3H),6.11(s,1H),5.83(d,J＝8.0Hz,1H),4.90-4.74(m,2H),4.38(s,2H),4.33-4.16(m,2H),4.08(s,1H),3.92(brs,6H),2.92-2.84(m,2H),2.82-2.70(m,4H),2.58(br d,J＝4.4Hz,1H),2.48-2.42(m,1H),2.23(s,2H),2.12-2.02(m,1H),1.92-1.82(m,1H),1.80-1.71(m,2H),1.63(br d,J＝12.4Hz,2H)。
实施例121.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物121
步骤1：2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280006211
向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(800mg，1.70mmol)和2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(730.31mg，1.70mmol)在二噁烷(30mL)中的溶液中加入在水(3mL)中的碳酸钠(451.74mg，4.26mmol，178.55μL)。反应混合物用氮气脱气15分钟，加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(139.22mg，170.49μmol)，再脱气10分钟，并于80℃加热16小时。用二氯甲烷稀释反应混合物，通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液，并使用快速硅胶(100-200目)柱色谱法纯化，用3％的甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈淡棕色固体的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(790mg，1.12mmol，收率65.86％)。LCMS(ESI+):644.3(M+H)。
步骤2：2-[6-[4-(7-叔-丁氧基羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂的合成
Figure BDA0003698737280006221
于0℃向2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(790mg，1.22mmol)在EtOH(3mL)和四氢呋喃(3mL)中的搅拌溶液中加入LiOH水溶液(1M，1.22mL)并将反应混合物于25℃再搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，得到呈锂盐的产物，其加乙醚研磨，倾析并干燥，得到呈灰白色固体的2-[6-[4-(7-叔-丁氧基羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(750mg，1.10mmol，收率88.78％)。LCMS(ESI+):616.3[M+H]。
步骤3：6-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0003698737280006222
于0℃向2-[6-[4-(7-叔-丁氧基羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(750mg，1.20mmol)和噻唑-2-胺(180.97mg，1.80mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(465.26mg，3.60mmol，627.03μL)。于0℃加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物溶液(763.63mg，2.4mmol)并于室温搅拌4小时。向反应混合物中加入冰冷水，过滤沉淀出的固体并减压干燥，得到呈灰白色固体的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(500mg，709.35μmol，收率55.12％)。LCMS(ESI+):698.3[M+H]。
步骤4：2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺的合成
Figure BDA0003698737280006231
于0℃向处于0℃的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(500mg，716.52μmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(1.23g，10.75mmol，828.04μL)并于室温搅拌4小时。减压除去溶剂，得到粗品，与二氯甲烷共蒸馏，加乙醚研磨，并倾析，得到呈灰白色固体的2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(520mg，699.35μmol，收率97.60％)。LCMS(ESI+):598.3(M+H)。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006241
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(250mg，351.26μmol)和2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(175.28mg，421.51μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(226.99mg，1.76mmol，305.91μL)。于0℃向反应混合物中加入1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(180.52mg，421.51μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物121(140mg，143.52μmol，收率40.86％)。LCMS(ESI+):959.3[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.79(s,1H),7.74(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.64(d,J＝8.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.53(d,J＝8.40Hz,2H),6.48(d,J＝2.40Hz,1H),6.42(d,J＝8.80Hz,2H),6.15(s,1H),5.79(d,J＝7.60Hz,1H),4.94(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.26-4.23(m,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.02-3.98(m,2H),3.69-3.65(m,4H),3.52-3.48(m,4H),2.90-2.83(m,4H),2.82-2.71(m,2H),2.59(d,J＝3.60Hz,1H),2.10-2.07(m,1H),1.89-1.61(m,10H),(质子信号被水和溶剂信号遮蔽)。
实施例122.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物122
Figure BDA0003698737280006251
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(150mg，210.75μmol)和2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸盐(96.50mg，210.75μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(136.19mg，1.05mmol，183.55μL)。于0℃向反应混合物中加入1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(107.89mg，252.91μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈+0.1％乙酸铵/水，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈白色固体的化合物122(99.5mg，99.12μmol，收率47.03％)。LCMS(ESI+):959.3[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.58(s,1H),7.75(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,2H),7.61(s,1H),7.59(s,1H),7.55(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.27(d,J＝3.20Hz,1H),7.10(d,J＝8.40Hz,1H),6.54(d,J＝8.80Hz,2H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.00(s,3H),3.93(t,J＝6.80Hz,4H),3.72-3.68(m,4H),3.52-3.44(m,5H),3.39(s,2H),3.22-3.18(m,2H),3.00(d,J＝9.60Hz,1H),2.78-2.70(m,5H),2.50(s,2H),2.33-2.23(m,1H),1.90-1.84(m,3H),1.75-1.73(m,2H)。
实施例123.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物123
Figure BDA0003698737280006261
步骤1：4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.5g，6.44mmol)在t-BuOH(50mL)中的溶液中加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.40g，12.8mmol)、t-BuONa(1.86g，19.3mmol)、tBuXphos(2.74g，6.44mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(2.56g，3.22mmol)，将反应混合物于100℃搅拌12小时。反应混合物用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物，其通过快速硅胶色谱法纯化(
Figure BDA0003698737280006271
5g
Figure BDA0003698737280006272
Silica Flash Column，洗脱剂：0％至20％的乙酸乙酯/石油醚梯度，TLC：乙酸乙酯/石油醚＝2/1，Rf＝0.2)，得到呈黄色固体的4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(944mg，收率30.3％)。LCMS(ESI+):447.2(M+H)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(s,1H),7.35(d,J＝12.3Hz,1H),6.69(d,J＝6.6Hz,1H),4.08(t,J＝6.7Hz,2H),3.99-3.87(m,3H),3.70-3.60(m,4H),3.14-3.01(m,4H),2.87(t,J＝6.7Hz,2H),1.49(s,9H)。
步骤2：1-(5-氟-1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮
将4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(490mg，1.10mmol)在氯化氢(4M，在乙酸乙酯中，4.90mL)中的混合物于25℃搅拌2小时。减压浓缩混合物，得到呈棕色固体的1-(5-氟-1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(400mg，971.74μmol，收率89％)。LCMS(ESI):m/z 347.3[M+H]+
步骤3：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯
向1-(5-氟-1-甲基-6-哌嗪-1-基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(200mg，522.44μmol)在乙腈(5mL)中的悬浮液中加入2-溴乙酸叔丁酯(123mg，630.59μmol，92.48μL)和碳酸钾(181mg，1.31mmol，79.04μL)。将混合物加热至90℃并于90℃搅拌3小时。减压浓缩混合物。粗产物通过反相柱(FA条件)纯化，得到呈黄色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(110mg，214.98μmol，收率41％)。LCMS(ESI):m/z 461.3[M+H]+
步骤4：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸
将2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(110mg，238.87μmol)在氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，5mL，20mmol)中的混合物于25℃搅拌2小时。减压浓缩混合物。粗产物通过反相柱纯化(使用盐酸作为相改性剂)，得到呈淡黄色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐(100mg，208.69μmol，收率87％)。LCMS(ESI):m/z 405.3[M+H]+
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
于0℃向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐(66mg，149.71μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)中的溶液中加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(56mg，147.28μmol)和N,N-二异丙基乙胺(133mg，1.03mmol，179.25μL)。将混合物于0℃搅拌0.5小时。然后向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(80mg，117.01μmol)。将所得混合物于25℃搅拌0.5小时。过滤混合物。通过制备-HPLC(流速：30mL/min；梯度：22％-52％的乙腈/水，用时8min；柱子：Phenomenex Gemini-NX C1875×30mm×3μm)纯化滤液并冻干，得到呈灰色固体的化合物123(36.43mg，37.72μmol，收率26％)。LCMS(ESI):m/z 956.8[M+H]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.50(s,1H),10.54(s,1H),7.73(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.59(s,1H),7.46(d,J＝3.2Hz,1H),7.36(d,J＝12.8Hz,1H),7.21(s,1H),7.12(d,J＝7.2Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.12(s,1H),4.82(d,J＝18.0Hz,1H),4.50-4.42(m,2H),4.20(d,J＝17.6Hz,1H),4.12-4.07(m,2H),4.06-3.92(m,7H),3.89(t,J＝6.8Hz,2H),3.20-2.96(m,6H),2.80-2.69(m,3H),2.68-2.60(m,4H),2.57-2.51(m,2H),2.47-2.42(m,1H)。
实施例124.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物124
Figure BDA0003698737280006281
Figure BDA0003698737280006291
步骤1：3-氟-4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
于0℃向3-氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(20.5g，94.37mmol)和DBU(43.10g，283.10mmol，42.67mL)在四氢呋喃(800mL)中的溶液中逐滴加入1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟(85.52g，283.10mmol，49.72mL)在四氢呋喃(800mL)中的溶液。将混合物温热至20℃并搅拌1小时。将混合物倒入水(1.5L)中。水相用乙酸乙酯(1L×2)萃取。合并有机相，用盐水(2.5L)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(
Figure BDA0003698737280006301
330g
Figure BDA0003698737280006302
Silica Flash Column，洗脱剂：0～20％的乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min)，得到呈白色固体的3-氟-4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(41.8g，83.71mmol，收率88.71％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δppm 6.20(br s,1H),5.02(br d,J＝10.40Hz,1H),4.30-4.74(m,2H),3.81(brs,1H),3.29-3.45(m,1H),1.49(s,9H)
步骤2：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
在N2下向3-氟-4-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(28.32g，56.72mmol)、1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(7g，18.91mmol)和K3PO4(8.03g，37.82mmol)在1,4-二噁烷(100mL)和水(10mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(1.38g，1.89mmol)。混合物于80℃搅拌1.5小时。将混合物倒入水(500mL)中。水相用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。合并有机相，用盐水(400mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1)，得到呈黄色固体的4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(7g，15.63mmol，收率82.65％)。
步骤3：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在N2下向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(3g，6.76mmol)在乙酸乙酯(45mL)中的溶液中加入干的10％钯/碳(3.00g，28.19mmol)。对悬浮液真空脱气并用H2吹扫三次。将混合物在H2(30psi)下于30℃搅拌16小时。过滤混合物并真空浓缩。残余物通过制备-HPLC纯化(柱子：PhenomenexSynergi Max-RP 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.225％甲酸)-乙腈]；B％：35％-65％，18min)，得到呈黄色固体的4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g，2.42mmol，收率35.84％)。
步骤4：1-[6-(3-氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，2.24mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中加入氯化氢溶液(4M，在1,4-二噁烷中，5mL，20mmol)。混合物于25℃搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，得到呈白色固体的1-[6-(3-氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(0.9g，2.05mmol，收率91.35％)。LCMS(ES+):346.4[M+H]+
步骤5：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
于0℃向1-[6-(3-氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(0.9g，2.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.17g，9.07mmol，1.58mL)在N,N-二甲基甲酰胺(9mL)中的溶液中逐滴加入2-溴乙酸叔丁酯(442.21mg，2.27mmol，332.49μL)。加入后让混合物在此温度下搅拌2小时。反应混合物用水(300mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.9g，1.94mmol，收率85.53％)。LCMS(ES+):460.3[M+H]+
步骤6：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)和2-[(3S,4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)
通过制备-SFC分离外消旋2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(900mg，1.96mmol)(样品分离：将样品溶解到乙醇:二氯甲烷(4:1)(90mL)中。仪器：Thar 80SFC；流动相：35％的甲醇(+0.1％氨)/超临界CO2；流速：60g/min；循环时间：5.4min；总时间：120min；单次进样量：4.0mL；背压：100巴以使CO2保持超临界流)，得到两组级分。
减压蒸发第一洗脱级分，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(260mg，503.58μmol，收率25.71％)。SFC(柱子：Chiral OJ-3 50x4.6mm，3μm粒度，流动相：5％至40％的EtOH(+0.05％二乙胺)/CO2，流速：3mL/min，温度：35℃，压力：100巴):Rt＝1.446min(>95％ee)
减压蒸发第二洗脱级分，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)(260mg，537.53μmol，收率27.44％)。SFC(柱子：Chiral OJ-3 50x4.6mm，3μm粒度，流动相：5％至40％的EtOH/CO2，流速：3mL/min，温度：35℃，压力：100巴):Rt＝1.687min.(99.6％ee)。
步骤7：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸，异构体1
将2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(170.0mg，369.96μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入在1,4-二噁烷(2mL)中的4M盐酸。将所得混合物于40℃搅拌4小时。减压浓缩反应混合物。残余物加乙醚研磨并过滤，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(180mg，368.29μmol，收率99.55％)。LCMS(ESI+):404.2[M+H]+
步骤8：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(180mg，409.21μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(182.4μL，195.31mg，613.82μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(498.93μL，370.21mg，2.86mmol)。混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(223.82mg，327.37μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(117.18mg，368.29μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。通过制备HPLC(柱子：Waters Xbridge C18 150*50mm，10μm粒度，流动相：22％-52％的乙腈/水，运行时间：10min)纯化反应混合物，得到呈白色固体的化合物124(149.55mg，156.59μmol，收率38.27％)。LCMS(ES+):955.6[M+H]+,1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.78-12.21(m,1H),10.55(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.61-7.56(m,2H),7.52-7.41(m,2H),7.23(br d,J＝2.4Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.13(s,1H),4.99-4.72(m,2H),4.47(br d,J＝4.0Hz,2H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.09(s,2H),4.06-3.95(m,9H),3.91(t,J＝6.8Hz,2H),3.21-3.08(m,3H),3.03-2.89(m,2H),2.75(br t,J＝6.8Hz,3H),2.58-2.54(m,2H),2.48-2.42(m,2H),2.38-2.27(m,2H),1.78-1.66(m,1H)。
实施例125.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体2，化合物125
Figure BDA0003698737280006321
步骤1：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸
将2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)(160.0mg，348.2μmol)溶解在二氯甲烷(2mL)中并加入氯化氢(在1,4-二噁烷中的4M溶液，2mL，8mmol)。将所得混合物于40℃搅拌4小时。减压浓缩反应混合物。残余物加乙醚研磨并过滤，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸(异构体2)盐酸盐(170mg，347.83μmol，收率99.90％)。
LCMS(ES+):m/z 404.2[M+H]+
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(3S,4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
向2-[(3S,4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(170mg，386.48μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(184.46mg，579.72μmol，172μL)在N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(349.64mg，2.71mmol，471.21μL)。将混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(211.38mg，309.18μmol)，将混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(110.67mg，347.83μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。通过制备HPLC(柱子：Waters Xbridge C18 150*50mm；10μm，流动相：22％-52％的乙腈/水，运行时间：10min)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物125(118.69mg，124.28μmol，收率32.16％)。LCMS(ES+):m/z 955.6[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.72-12.27(m,1H),10.55(s,1H),7.74(s,1H),7.73-7.68(m,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.62-7.56(m,2H),7.51-7.45(m,2H),7.23(br s,1H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),6.55(d,J＝8.4Hz,2H),6.13(s,1H),4.97-4.76(m,2H),4.54-4.43(m,2H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.10(s,2H),4.08-3.95(m,9H),3.92(t,J＝6.8Hz,2H),3.11(s,3H),3.00(br s,2H),2.76(br t,J＝6.8Hz,3H),2.61-2.54(m,2H),2.49-2.43(m,2H),2.39-2.26(m,2H),1.80-1.67(m,1H)
实施例126.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物126
Figure BDA0003698737280006341
步骤1：2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
向7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(300mg，429.91μmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.22g，19.47mmol，1.50mL)，将混合物于25℃搅拌1小时。减压浓缩反应混合物，残余物加乙醚研磨，并过滤，得到呈黄色固体的2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(300mg，421.51μmol，收率98.05％)。
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
于0℃向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(130mg，312.62μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(282.82mg，2.19mmol，381.16μL)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(298.41mg，468.93μmol，261μL)。15分钟后，加入2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(200.25mg，281.36μmol)，并将混合物于0℃搅拌1小时。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(99.47mg，156.31μmol)，混合物于0℃再搅拌1小时。将混合物倒入水(30mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中和。沉淀出白色固体，过滤收集。将固体溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um；流动相：[水-乙腈]；梯度时间：8分钟)纯化残余物，得到呈白色固体的化合物126(64.87mg，67.64μmol，收率21.64％)。LCMS(ESI):m/z959.6[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.63-12.43(m,1H),10.78(s,1H),7.78-7.71(m,2H),7.66(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(br,1H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),6.86(t,J＝9.2Hz,1H),6.54-6.46(m,1H),6.44-6.39(m,1H),6.15(s,1H),5.78(d,J＝8.0Hz,1H),4.86-4.75(m,2H),4.29-4.17(m,2H),4.06-3.90(m,4H),3.63(s,2H),3.26-3.18(m,4H),2.95-2.81(m,4H),2.59(s,2H),2.12-2.06(m,1H),1.92-1.71(m,7H),1.64(br,2H)。
实施例127.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物127
步骤1：1-(5-氟-1-甲基-6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
Figure BDA0003698737280006351
于25℃在N2气氛下向1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(10.0g，25.8mmol)和1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(10.0g，69.8mmol，8.93mL)在t-BuOH(150mL)中的混合物中加入t-BuONa(7.43g，77.3mmol)、tBuXPhos(10.94g，25.76mmol)和tBuXPhos Pd G3(10.2g，12.9mmol)。然后将混合物在氮气下于105℃搅拌12小时。反应混合物用饱和氯化铵水溶液(200mL)淬灭，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至1/5，TLC：石油醚/乙酸乙酯＝1/2，Rf＝0.19)，得到呈淡棕色固体的1-(5-氟-1-甲基-6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(6.00g，10.3mmol，收率40.2％，纯度70％)。LCMS:404.2(M+H),1HNMR:(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),7.37-7.32(m,1H),7.15(d,J＝7.2Hz,1H),3.94(s,4H),3.92-3.87(m,3H),3.35-3.33(m,2H),3.20-3.10(m,4H),2.74(t,J＝6.7Hz,2H),1.82(br t,J＝5.3Hz,4H)
步骤2：1-(5-氟-1-甲基-6-(4-氧代哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
Figure BDA0003698737280006361
向1-(5-氟-1-甲基-6-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(5.00g，8.55mmol)的溶液中加入盐酸(36％浓盐酸，70.4g，695mmol，69.0mL)。混合物于20℃搅拌5小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH＝7～8，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并有机层，用盐水(500mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至5/1，TLC：石油醚/乙酸乙酯＝1/2，Rf＝0.19)，得到呈黄色固体的1-(5-氟-1-甲基-6-(4-氧代哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3.60g，粗品)并通过LCMS(ESI+):360.2(M+H)确认。
步骤3：2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006362
于-70℃向乙酸叔丁酯(15.0g，129mmol，17.3mL)在四氢呋喃(75.0mL)中的溶液中加入LDA(2.00M，67.8mL)并将混合物在氮气下于-70℃搅拌1小时。于-65℃向化合物1-(5-氟-1-甲基-6-(4-氧代哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3.30g，7.87mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中逐滴加入乙酸叔丁酯-LDA混合物(0.8M，68.9mL，55mmol)。将混合物于-65℃在氮气下搅拌0.5小时。反应混合物于-65℃用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭，温热至室温，并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并有机层，用盐水(150mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物通过反相HPLC纯化(0.1％的盐酸/水；乙腈)，得到呈白色固体的化合物2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(2.00g，4.21mmol，收率53.4％)。LCMS(M+H):476.4(M+H),1H-NMR:(400MHz,CDCl3)δ7.61(br s,1H),7.51-7.33(m,1H),4.18-4.07(m,2H),3.98(s,3H),3.45-3.22(m,2H),2.89(t,J＝6.7Hz,2H),2.50(br s,2H),1.89(br d,J＝11.5Hz,2H),1.67-1.60(m,4H),1.50(s,9H)
步骤4：2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280006371
向2-(1-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(2.00g，4.21mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入氯化氢(4.00M，在1,4-二噁烷中，42.1mL，168mmol)并将混合物于25℃搅拌6小时。减压浓缩反应混合物。残余物用制备HPLC纯化(0.1％的盐酸)，得到呈黄色固体的2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(1.00g，2.15mmol，收率51.11％)。LCMS(ESI+):420.1,1HNMR:(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),7.40-7.30(m,1H),7.19(br d,J＝6.0Hz,1H),3.95(s,3H),3.89(t,J＝6.7Hz,2H),3.56(s,1H),3.23-3.05(m,4H),2.73(t,J＝6.6Hz,2H),2.43(s,2H),1.97-1.84(m,2H),1.75(br d,J＝12.8Hz,2H)
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006381
向2-[1-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(200mg，438.72μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(209.39mg，658.09μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(396.91mg，3.07mmol，534.93μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(239.96mg，350.98μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(125.63mg，394.85μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm；3μm；流动相：22％-52％的乙腈/水；运行时间：8min)纯化反应混合物，得到呈白色固体的化合物127(164.87mg，164.69μmol，收率37.54％)。LCMS(ES+):m/z 971.4[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.49(br s,1H),10.53(br s,1H),7.78-7.68(m,2H),7.68-7.56(m,3H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.33(d,J＝12.8Hz,1H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),7.12(d,J＝7.2Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.14(s,1H),4.87(s,1H),4.80(br d,J＝17.6Hz,1H),4.39(s,2H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.09(s,2H),4.05-3.92(m,9H),3.89(t,J＝6.8Hz,2H),3.16(brd,J＝11.2Hz,2H),3.10-2.99(m,2H),2.73(br t,J＝6.8Hz,2H),2.57-2.52(m,2H),2.49-2.41(m,2H),2.26(s,2H),1.90-1.79(m,2H),1.74-1.66(m,2H)
实施例128.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物128
Figure BDA0003698737280006391
向2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(300mg，693.97μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(331.21mg，1.04mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(627.83mg，4.86mmol，846.14μL)。混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(370.44mg，520.47μmol)。将混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(198.73mg，624.57μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm，3μm；流动相：28％-58％的乙腈/水，运行时间：8min)纯化混合物，得到呈白色固体的化合物128(91.57mg，93.87μmol，收率13.53％)。LCMS(ES+):m/z 975.4[M+H]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.51(br s,1H),10.76(s,1H),7.78-7.70(m,2H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.47(br d,J＝3.2Hz,1H),7.30-7.18(m,1H),7.05(br d,J＝8.8Hz,2H),6.96(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(d,J＝2.4Hz,1H),6.60(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),6.14(s,1H),5.82(d,J＝7.6Hz,1H),4.86-4.75(m,2H),4.24(s,2H),4.05-3.91(m,4H),3.63(s,2H),3.27-3.17(m,4H),2.92-2.69(m,6H),2.56-2.52(m,2H),2.47-2.44(m,1H),2.24(s,2H),2.12-2.03(m,1H),1.79(br s,8H),1.68-1.61(m,2H)。
实施例129.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物129
步骤1：3,3-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006401
将化合物3,3-二氟-4-(((三氟甲基)磺酰)氧基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(2.70g，7.35mmol)、B2Pin2(2.24g，8.82mmol)、dppf(122mg，220μmol)、Pd(dppf)Cl2(161mg，220μmol)和KOAc(2.53g，25.7mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的混合物用N2脱气和吹扫3次，并将混合物在N2气氛下于80℃搅拌12小时。过滤反应混合物，用乙酸乙酯(50mL)洗涤滤饼。用水(50mL)稀释滤液，用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，其通过柱色谱法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至10/1，TLC：石油醚/乙酸乙酯＝8/1，Rf＝0.34)，得到呈黄色固体的化合物3,3-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.10g，3.19mmol，收率43.35％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.92-6.70(m,1H),3.99(br s,2H),3.80-3.63(m,2H),1.40(s,9H),1.23(s,12H)。
步骤2：4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006402
将化合物3,3-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.07g，3.09mmol)、1-(5-氟-6-碘-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.00g，2.58mmol)、K2CO3(1.07g，7.73mmol)和Pd(dppf)Cl2(188mg，257μmol)在二噁烷(10.0mL)和水(1.00mL)中的混合物用N2脱气和吹扫3次并在N2气氛下于90℃搅拌8小时。反应混合物用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯100mL(50mL×2)萃取。合并有机层，用盐水50mL(25mL×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物通过制备HPLC纯化(使用三氟乙酸作为相改性剂)，得到呈黄色固体的4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(800mg，1.50mmol，收率58.2％)。LCMS(ESI+):480.2(M+H)。
步骤3：4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006411
向4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(800mg，1.67mmol)在二氯甲烷(5.00mL)和甲醇(10.0mL)中的混合物中加入10％钯/木炭(800mg)并将混合物在氢气氛(15psi)下于25℃搅拌12小时。过滤反应混合物，用甲醇(50mL)和二氯甲烷(50mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到残余物，其加四氢呋喃(5mL)于25℃研磨10分钟，得到呈黄色固体的4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(485mg，926μmol，收率55.5％)。LCMS(ESI+):504.2(M+Na),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),7.76-7.72(m,1H),7.42(d,J＝10.3Hz,1H),4.37-4.06(m,3H),4.01(s,3H),4.06-3.96(m,1H),3.90(t,J＝6.8Hz,2H),3.84-3.69(m,1H),2.74(t,J＝6.7Hz,2H),2.31(br d,J＝1.6Hz,1H),1.90-1.81(m,1H),1.43(s,9H)。
步骤4：4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)和4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)
Figure BDA0003698737280006412
通过制备SFC分离4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg)。仪器：Waters 80Q Preparative SFC系统；柱子：Chiralpak IG column,250×30mm I.D.,10μm粒度；流动相：相A超临界CO2，相B异丙醇:乙腈(3:1)；等度洗脱：30％的相B(70％的相A)；流速：60g/min；循环时间：5.35min；背压：100巴以使CO2保持超临界流。蒸发第一组级分，得到4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(210mg，99.9％ee)。蒸发第二组级分，得到4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(200mg，99.7％ee)。
Figure BDA0003698737280006421
步骤5：1-[6-[3,3-二氟-4-哌啶基]-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮，异构体1
向4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-5-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体1)(200.00mg，415.40μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入在二噁烷中的盐酸(4M，2mL)，将混合物于20℃搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。粗产物加石油醚(20mL)研磨15分钟，得到呈白色固体的1-[6-[3,3-二氟-4-哌啶基]-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(异构体1)(150mg，359.01μmol，收率86.43％)。LCMS(ESI):m/z 382.0[M+H]+
步骤6：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯，异构体1
向1-[6-[3,3-二氟-4-哌啶基]-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(异构体1)盐酸盐(150mg，393.34μmol)和N,N-二异丙基乙胺(305.01mg，2.36mmol，411.06μL)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(191.80mg，983.34μmol，144.21μL)。混合物于0℃搅拌2小时。将反应混合物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(10mL×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗产物加石油醚(6mL)研磨15分钟，得到呈灰白色固体的2-[(4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(160mg，322.91μmol，收率82.09％)。LCMS(ESI):m/z 496.2[M+H]+
步骤7：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸，异构体1
向2-[(4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(160.00mg，322.91μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入在1,4-二噁烷中的盐酸(4M，2mL)，将混合物于40℃搅拌14小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。粗产物加石油醚(50mL)研磨15分钟，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(150mg，315.23μmol，收率97.62％)。LCMS(ESI):m/z 440.4[M+H]+
步骤8：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(150mg，315.23μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(300.90mg，472.84μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(325.92mg，2.52mmol，439.24μL)。将混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(179.57mg，262.65μmol)，将混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(100.30mg，157.61μmol)，混合物于0℃搅拌60分钟。将反应混合物倒入水(50mL)中。沉淀出白色固体，过滤收集。固体用水(10mL)洗涤，减压干燥，得到残余物，其进一步通过制备HPLC纯化(柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm；3μm颗粒；流动相：[水-乙腈]；梯度时间(min)8)，得到呈白色固体的化合物129(120.13mg，120.37μmol，收率56.80％)。LCMS(ESI):m/z 496.5[M/2+H]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(br,1H),10.58(s,1H),7.77-7.69(m,3H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.50-7.40(m,2H),7.26(br,1H),6.56(d,J＝8.4Hz,2H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.45(s,2H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.11(s,2H),4.08-3.95(m,9H),3.92(t,J＝6.8Hz,2H),3.60-3.40(m,4H),3.22(br,4H),3.02(d,J＝10.4Hz,1H),2.82-2.71(m,4H),2.65-2.54(m,4H),2.41(br,2H),1.90-1.78(m,1H)。
实施例130.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体2，化合物130
Figure BDA0003698737280006441
Figure BDA0003698737280006451
步骤1：1-[6-[3,3-二氟-4-哌啶基]-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐，异构体2
向4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(异构体2)(200.00mg，415.40μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入在二噁烷中的盐酸(4M，2mL)，将混合物于20℃搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。粗产物加石油醚(20mL)研磨15分钟，得到呈白色固体的1-[6-[3,3-二氟-4-哌啶基]-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(异构体2)(150mg，359.01μmol，收率86.43％)。LCMS(ESI):m/z382.1[M+H]+
步骤2：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯，异构体2
向1-[6-[3,3-二氟-4-哌啶基]-5-氟-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(异构体2)(150mg，393.34μmol)和N,N-二异丙基乙胺(305.01mg，2.36mmol，411.06μL)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(191.80mg，983.34μmol，144.21μL)。混合物于0℃搅拌2小时。将反应混合物倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(10mL×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗产物加石油醚(6mL)研磨15分钟，得到呈灰白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)(160mg，322.91μmol，收率82.09％)。LCMS(ESI):m/z 496.3[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.57(s,1H),7.74(d,J＝5.2Hz,1H),7.43(d,J＝10.4Hz,1H),4.06-4.00(m,3H),3.92(t,J＝6.8Hz,2H),3.40(br,2H),3.27-3.22(m,1H),3.07-2.99(m,1H),2.91-2.79(m,1H),2.76(t,J＝6.8Hz,2H),2.66-2.59(m,1H),2.44-2.36(m,2H),1.88-1.76(m,1H),1.45(s,9H)。
步骤3：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐，异构体2
向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)(160.00mg，322.91μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入在二噁烷中的盐酸(4M，2mL)，将混合物于40℃搅拌14小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。粗产物加石油醚(50mL)研磨15分钟，得到呈白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体2)(150mg，341.38μmol，收率>98％)。LCMS(ESI):m/z 440.4[M+H]+
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体2
向2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体2)(150mg，341.38μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(325.86mg，512.08μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(352.96mg，2.73mmol，475.69μL)。将混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(210.06mg，307.25μmol)，并将混合物于0℃搅拌60分钟。其后，加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(108.62mg，170.69μmol)，混合物于0℃搅拌60分钟。将反应混合物倒入水(50mL)中，沉淀出大量白色固体，过滤并用水(10mL)洗涤固体，减压干燥，得到残余物，其进一步通过制备HPLC(中性条件)纯化(柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm，3μm；流动相：乙腈:水；运行时间：8分钟)，得到呈白色固体的化合物130(81.46mg，81.70μmol，收率40.49％)。LCMS(ESI):m/z496.6[M/2+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(br,1H),10.58(s,1H),7.77-7.69(m,3H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.50-7.40(m,2H),7.26(br,1H),6.56(d,J＝8.4Hz,2H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.45(s,2H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.11(s,2H),4.08-3.95(m,9H),3.92(t,J＝6.8Hz,2H),3.60-3.40(m,4H),3.22(br,4H),3.02(d,J＝10.4Hz,1H),2.82-2.71(m,4H),2.65-2.54(m,4H),2.41(br,2H),1.90-1.78(m,1H)。
实施例131.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物131
Figure BDA0003698737280006471
向处于0℃的2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(106.68mg，256.53μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(165.78mg，1.28mmol，223.42μL)，然后加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(121.93mg，320.67μmol)，反应混合物搅拌5分钟。在保持0℃的同时加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(150mg，213.78μmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌5小时。粗反应混合物通过C18柱子(120g)进行纯化(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时45分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈淡棕色固体的产物化合物131(63.46mg，65.43μmol，收率30.61％)。LCMS(m/z:948.7[M+1]).1H-NMR(400MHz,DMSO-d6:12.53(s,1H),10.78(s,1H),7.75(s,2H),7.72(s,1H),7.69(d,J＝5.20Hz,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,1H),7.49(s,1H),7.27(s,1H),6.86(t,J＝Hz,1H),6.55(d,J＝8.40Hz,1H),6.50(dd,J＝15.20,2.00Hz,1H),6.42(d,J＝8.80Hz,1H),6.17(d,J＝4.80Hz,1H),5.89(s,1H),5.79-5.77(m,1H),4.80(dd,J＝6.40,Hz,1H),4.76(s,1H),4.20-4.39(m,6H),4.09(s,2H),4.03(s,4H),2.90-2.87(m,5H),2.74-2.71(m,3H),2.60(m,1H),2.23(s,2H),2.08(m,1H),1.79-1.76(m,3H),1.63(d,J＝12.00Hz,2H)。
实施例132.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物132
Figure BDA0003698737280006481
向处于0℃的2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(54.07mg，130.02μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(110.52mg，855.11μmol，148.94μL)，然后加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(81.28mg，213.78μmol)。5分钟后，在保持0℃的同时加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(100mg，142.52μmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌5小时。粗反应混合物通过C18柱子(120g)进行纯化(0％至60％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时45分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈淡棕色固体的产物化合物132(37.2mg，37.51μmol，收率26.32％)。LCMS(m/z:948.8[M+1]).1H-NMR(400MHz,DMSO-d6:12.53(s,1H),10.77(s,1H),7.75(s,2H),7.72(s,1H),7.69(d,J＝4.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.80Hz,1H),7.49(s,1H),7.27(s,1H),6.86(t,J＝Hz,1H),δ6.55(d,J＝8.80Hz,2H),6.50(dd,J＝2.40,14.80Hz,1H),6.42(dd,J＝2.00,8.60Hz,2H),6.17(d,J＝4.00Hz,1H),5.88(d,J＝2.80Hz,1H),5.77(d,J＝8.00Hz,1H),4.80(dd,J＝6.40,Hz,1H),4.76(s,1H),4.39(s,2H),4.27-4.25(m,4H),4.09(s,2H),4.03(s,4H),3.08-2.88(m,5H),2.69-2.68(m,2H),2.23(s,2H),2.08(m,1H),1.91-1.76(m,3H),1.63(d,J＝12.40Hz,2H)。
实施例133.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物133
步骤1：1-[6-(3-氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280006491
于0℃向含有4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，224.47μmol)在无水二氯甲烷(3mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入在99％1,4-二噁烷中的4M氯化氢(8.18mg，224.47μmol，10.23μL)。将反应混合物于室温搅拌5小时。减压浓缩反应混合物，得到粗品。粗物质加乙醚(2×10mL)研磨并减压干燥，得到呈灰白色固体的1-[6-(3-氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(80mg，208.30μmol，收率92.80％)。LCMS(ESI+)m/z:346.2[M+H]+。
步骤2：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006492
于0℃在氮气氛下向含有1-[6-(3-氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(80mg，209.52μmol)在DMF(3mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(162.47mg，1.26mmol，218.96μL)。加入2-溴乙酸叔丁酯(40.87mg，209.52μmol，30.73μL)并将所得混合物于环境温度搅拌20小时。将反应混合物倒入冰水(5mL)中。用乙酸乙酯(3×15mL)萃取水性混合物。用盐水溶液(15mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。粗品通过使用二氧化硅的柱色谱法纯化(0-3％的甲醇和二氯甲烷)，得到呈灰白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(80mg，172.25μmol，收率82.21％)。LCMS(ESI+)m/z:460.2[M+H]+。
步骤3：2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280006501
于0℃向含有2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸叔丁酯(80mg，174.10μmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的充分搅拌溶液的25mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入三氟乙酸(1.48g，12.98mmol，1mL)，并将所得混合物于环境温度搅拌4小时。减压除去溶剂。向固体中加入二氯甲烷，减压蒸发。固体加Et2O(10mL)研磨，得到呈灰白色固体的2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(90mg，171.55μmol，收率98.54％)。LCMS(ESI+)m/z:404.2[M+H]+。
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006502
于0℃在氮气氛下向含有2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(100mg，146.27μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙酸(75.68mg，146.27μmol)2,2,2-三氟乙酸在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入N,N-二异丙基乙胺(18.90mg，146.27μmol，25.48μL)。随后，在相同的温度下加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(46.54mg，146.27μmol)。所得混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物133(65mg，67.51μmol，收率46.16％)。LCMS(ESI+)m/z:955.8[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.50(s,1H),10.56(s,1H),7.75(s,1H),7.71(d,J＝10.40Hz,1H),7.65(d,J＝8.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.58(d,J＝8.80Hz,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,2H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),7.12(d,J＝8.80Hz,1H),6.55(d,J＝8.80Hz,2H),6.15(s,1H),4.93(bs,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.51-4.45(m,2H),4.22(d,J＝17.60Hz,1H),4.10(s,2H),4.05-3.95(m,10H),3.92(t,J＝6.80Hz,2H),3.17-3.14(m,1H),3.11(s,2H),3.02-3.00(m,2H),2.97-2.91(m,1H),2.78-2.76(m,3H),2.64-2.60(m,2H),2.37-2.33(m,2H),1.76-1.71(m,1H)。
实施例134.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物134
Figure BDA0003698737280006511
Figure BDA0003698737280006521
步骤1：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸，异构体1
向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(实施例99步骤3，100mg，220.52μmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入盐酸(4M，在1,4-二噁烷中，1mL，4mmol)。混合物于25℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，得到呈白色固体的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(100mg，230.50μmol，收率>99％)。LCMS(ESI):m/z398.1[M+H]+
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(60.96mg，140.50μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(134.12mg，210.75μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(127.11mg，983.52μmol，171.31μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入2-(6-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基)乙酰胺三氟乙酸盐(100mg，140.50μmol)。混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(67.06mg，105.38μmol)，混合物于0℃搅拌60分钟。将混合物倒入水(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中和。沉淀出白色固体，过滤收集。将固体溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过制备HPLC(中性条件)纯化。柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um；流动相：[水-乙腈]；梯度时间(min)8，得到呈白色固体的化合物134(68.33mg，69.93μmol，收率49.77％)。LCMS(ESI):m/z 997.5[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.53(br,1H),10.81(s,1H),7.78-7.71(m,2H),7.66(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝2.8Hz,1H),7.26(s,1H),7.06(d,J＝9.2Hz,2H),6.32(d,J＝12.4Hz,2H),6.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.15(s,1H),4.88-4.71(m,2H),4.36-4.27(m,1H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.06-3.92(m,4H),3.63(s,2H),3.29-3.20(m,6H),2.76-2.67(m,4H),2.59(br,2H),2.45(s,1H),2.23(s,2H),2.13-2.02(m,1H),1.92-1.67(m,8H),1.59(br,2H)。
实施例135.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物135
步骤1：2-[1-(2,5-二氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006531
向1,2,4-三氟-5-硝基-苯(2g，11.29mmol，1.30mL)和2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(2.43g，11.29mmol)在乙腈(30mL)中的溶液中加入三乙胺(85.72mg，847.07μmol，118.06μL)。将混合物于20℃搅拌1小时。减压浓缩混合物，得到残余物。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)，得到呈黄色固体的2-[1-(2,5-二氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.5g，6.61mmol，收率58.55％)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.95(dd,J＝13.9,7.3Hz,1H),7.10(dd,J＝14.6,7.6Hz,1H),4.72(s,1H),3.56(br d,J＝12.8Hz,2H),3.32-3.23(s,2H),1.84-1.63(m,4H),1.39(s,9H)。
步骤2：2-[1-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006532
向2-[1-(2,5-二氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.5g，6.71mmol)在乙醇(25mL)和水(5mL)中的溶液中加入铁(1.50g，26.86mmol，190.81μL)和氯化铵(2.87g，53.71mmol，1.88mL)。混合物于20℃加热3小时。过滤混合物并减压浓缩，得到呈棕色固体的2-[1-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.0g，5.55mmol，收率82.59％)。LCMS(ESI+):343.0(M+H)
步骤3：2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006541
向2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(0.2g，540.19μmol)和2-[1-(4-氨基-2,5-二氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(203.45mg，594.21μmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中加入碳酸铯(528.01mg，1.62mmol)和tBuXPhos Pd G3(42.97mg，54.02μmol)，将混合物在氮气下于90℃搅拌16小时。通过水(5mL)淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并有机层，用盐水(3×3mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)，得到呈棕色油的2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(200mg，286.53μmol，收率53.04％)。LCMS(ESI+):632.8[M+H]+
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006542
向2-[1-[4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.3g，2.06mmol)在乙酸乙酯(15mL)中的溶液中加入10％Pd/木炭(219.00mg，205.79μmol)。将混合物在氢气(15psi)下于20℃搅拌16小时。过滤反应混合物并减压浓缩，得到呈棕色油的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.8g，1.76mmol，收率85.72％)。LCMS(ESI+):454.3[M+H]+
步骤5：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280006551
于0℃向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(0.8g，1.76mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入盐酸(12M，1.47mL)。混合物于25℃搅拌1小时。减压浓缩反应混合物，得到残余物。残余物用乙腈(5mL)稀释并于25℃搅拌15分钟。过滤固体并收集，得到呈紫色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(600mg，1.38mmol，收率78.40％)。LCMS(ESI+):398.1[M+H]+
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006561
向2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2,5-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(0.25g，576.26μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(275.03mg，864.39μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(521.34mg，4.03mmol，702.62μL)。混合物于0℃搅拌15分钟。然后向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(295.48mg，432.19μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(165.02mg，518.63μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18 250*50mm*10μm；流动相：水-乙腈；B％：35％-55％，20min)纯化反应混合物，得到呈白色固体的化合物135(127.84mg，127.97μmol，收率22.2％)。LCMS(ES+):m/z 949.2[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(br s,1H),10.79(s,1H),7.78-7.59(m,5H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.85(dd,J＝8.0,13.2Hz,1H),6.72(dd,J＝8.4,14.4Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.15(s,1H),5.46(br d,J＝8.0Hz,1H),4.79(d,J＝17.6Hz,1H),4.42-4.29(m,3H),4.22(br d,J＝17.6Hz,1H),4.12-3.93(m,8H),2.93-2.84(m,4H),2.80-2.68(m,2H),2.52(br d,J＝1.6Hz,3H),2.48-2.43(m,2H),2.22(s,2H),2.07-1.97(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.66-1.59(m,2H)
实施例136.
2-[4-氯-6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物136
步骤1：6-[4-[7-氯-2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006571
将2-(4-氯-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(500mg，1.03mmol)和6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(412.10mg，1.03mmol)溶解在二噁烷(6mL)中并加入tBuXPhos(64.98mg，102.94μmol)，然后加入溶解在水(2mL)中的碳酸钠(240.04mg，2.26mmol，94.88μL)。混合物用氩气脱气并加入Pd(dppf)Cl2(75.30mg，102.94μmol)。将反应密封并于80℃加热16小时。分离有机层，减压浓缩并通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-80％的甲醇/二氯甲烷)，得到6-[4-[7-氯-2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(400mg，569.49μmol，收率55.32％)。LCMS(ESI+):632.5(M+H)。
步骤2：[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氯-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280006581
将6-[4-[7-氯-2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(409.05mg，647.08μmol)溶解在乙醇(2mL)中，冷却至0℃并加入98％的氢氧化锂一水合物(1M，647.08μL)。将反应混合物搅拌3小时。用磷酸二氢钠(水溶液，饱和)酸化反应混合物，此时产物沉淀。向反应混合物中加入盐水，并将混合物搅拌5分钟。反应混合物用乙酸乙酯萃取(3X)。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。将粗残余物溶解在具有苯(0.5mL)的二氯甲烷(2mL)中并减压蒸发，经受高真空，得到[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氯-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并o[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(412mg，641.61μmol，收率99.16％)。LCMS(ESI+):604.4/606.4(M+H)
步骤3：6-[4-[7-氯-2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006582
将[2-[6-[4-(2-叔-丁氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基]-4-氯-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(412mg，675.38μmol)和噻唑-2-胺(81.16mg，810.45μmol)混合在DMAc(6mL)中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(174.57mg，1.35mmol，235.27μL)，并加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(295.32mg，776.69μmol)，将反应混合物搅拌20小时。让反应混合物在乙酸乙酯和碳酸氢钠(水溶液，饱和)之间分配。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗残余物通过硅胶色谱法纯化(24g柱子，0％至20％的甲醇/二氯甲烷)。减压蒸发纯级分。真空干燥固体，得到6-[4-[7-氯-2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(295mg，408.40μmol，收率60.47％)。LCMS(ESI+):686.4/688.4(M+H)
步骤4：2-[4-氯-6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280006591
向6-[4-[7-氯-2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(205mg，298.74μmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三氟乙酸(681.24mg，5.97mmol，460.30μL)。混合物于20℃搅拌1小时。于0-5℃在搅拌下将反应混合物加到甲基叔丁基醚(20mL)中。将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以3000rpm离心3分钟。倾析出上清溶剂并弃去。向固体中加入甲基叔丁基醚(20mL)并将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以3000rpm离心3分钟。倾析出上清溶剂并弃去。真空蒸发挥发物，得到呈黄色固体的2-[4-氯-6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(205mg，292.80μmol，收率98.01％)。LCMS(ES+):m/z 586.1[M+H]+
步骤5：2-[4-氯-6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006601
向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(121.76mg，292.80μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(139.75mg，439.20μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(264.90mg，2.05mmol，357.01μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入2-[4-氯-6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(205mg，292.80μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(83.85mg，263.52μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。反应混合物通过制备HPLC纯化(柱子：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：20％-50％的乙腈/水(0.1％三氟乙酸)，10min运行时间)，得到30mL溶液。将该溶液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中。过滤混合物，用水(5mL)洗涤滤饼，冻干滤饼，得到呈白色固体的化合物136(142.05mg，149.93μmol，收率51.20％)。LCMS(ES+):m/z 947.3[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(s,1H),10.78(s,1H),7.90(d,J＝1.2Hz,1H),7.86-7.82(m,1H),7.67-7.59(m,3H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.85(t,J＝9.2Hz,1H),6.57-6.47(m,3H),6.41(dd,J＝2.0,8.8Hz,1H),6.16(s,1H),5.77(d,J＝7.6Hz,1H),4.78-4.71(m,2H),4.38(s,2H),4.25(m,1H),4.15(d,J＝18.0Hz,1H),4.08(s,2H),4.04-3.93(m,6H),2.94-2.80(m,4H),2.79-2.68(m,2H),2.61-2.51(m,3H),2.49-2.44(m,1H),2.13-2.04(m,1H),1.76(br s,3H),1.62(br d,J＝12.8Hz,2H)
实施例137.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物137
Figure BDA0003698737280006611
步骤1：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2,6-二氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(异构体1)盐酸盐(150mg，345.75μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(165.02mg，518.63μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(312.80mg，2.42mmol，421.57μL)。混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(221.47mg，311.18μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。然后向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(99.01mg，311.18μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。混合物通过制备HPLC纯化(柱子：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：水(0.1％三氟乙酸)-乙腈；B％：20％-50％，10min)，得到30mL溶液。该溶液用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)中和至pH＝8。过滤混合物并用水(3mL×2)洗涤滤饼。将滤饼冻干，得到呈白色固体的化合物137(183.74mg，184.29μmol，收率53.30％)。LCMS(ES+):m/z977.4[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.83-12.22(m,1H),10.81(br s,1H),7.76-7.67(m,2H),7.66-7.60(m,3H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.53(d,J＝8.8Hz,2H),6.34(s,1H),6.32-6.28(m,1H),6.21(d,J＝7.6Hz,1H),6.15(s,1H),4.92(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.39-4.27(m,1H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.06-3.93(m,2H),3.67(s,4H),3.48(br s,4H),3.30-3.19(m,2H),2.82-2.69(m,4H),2.62-2.53(m,4H),2.50-2.43(m,2H),2.14-2.02(m,1H),1.89-1.56(m,9H)
实施例138.
2-[6-[4-[7-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物138
Figure BDA0003698737280006621
Figure BDA0003698737280006631
步骤1：2-(4-溴苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(1g，4.42mmol)、1-溴-4-碘-苯(1.25g，4.42mmol)、叔丁醇钠(849.29mg，8.84mmol)和Pd(dppf)2Cl2(323.31mg，441.86μmol)在甲苯(10mL)中的混合物。将该混合物在N2气氛下于65℃搅拌48小时。将反应混合物倒入水(200mL)中。用乙酸乙酯(100mL×2)萃取该混合物。用盐水(100mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到残余物。该残余物通过快速硅胶色谱法纯化(
Figure BDA0003698737280006632
10g
Figure BDA0003698737280006633
Silica Flash Column，洗脱剂：0～10％的乙酸乙酯/石油醚梯度@80mL/min)，得到2-(4-溴苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(800mg，收率47.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ＝7.32-7.28(m,2H),6.35(d,J＝8.8Hz,2H),3.62(s,2H),3.64-3.59(m,1H),3.42-3.39(m,1H),1.80-1.76(m,4H),1.47(s,12H)
步骤2：2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
2-(4-溴苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(18g，47.21mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(14.38g，56.65mmol)、乙酸钾(9.27g，94.41mmol，5.90mL)、Pd(dppf)Cl2(3.45g，4.72mmol)在二噁烷(180mL)中的混合物。将该混合物在N2气氛下于80℃搅拌16小时。混合物用水(400mL)稀释并用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并有机层，用盐水(200mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。该残余物通过硅胶色谱法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到呈白色固体的2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(11g，收率49％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ＝7.68(d,J＝8.4Hz,2H),6.43(d,J＝8.4Hz,2H),3.66(s,4H),3.43-3.38(m,4H),1.80-1.75(m,4H),1.64(br s,4H),1.47(s,9H),1.33(s,12H)
步骤3：2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(3g，7.00mmol)、2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(3.29g，7.00mmol)、Pd(dppf)Cl2(512.43mg，700.33μmol)、Na2CO3(1.48g，14.01mmol)在二噁烷(30mL)和水(7.5mL)中的混合物。将该混合物在N2气氛下于80℃搅拌16小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，得到2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(4.51g，粗产物)
步骤4：2-[6-[4-(7-叔-丁氧基羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
将2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(4.5g，6.99mmol)溶解在乙醇(40mL)中，冷却至0℃并加入氢氧化锂(1M，13.98mmol，13.98mL)。反应混合物于25℃搅拌16小时。减压浓缩反应混合物，得到残余物。残余物通过制备HPLC(碱性条件)纯化，得到呈黄色固体的2-[6-[4-(7-叔-丁氧基羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(3g，4.87mmol，收率69.70％)。LCMS(ES+):616.5[M+H]+
步骤5：2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
将2-[6-[4-(7-叔-丁氧基羰基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(3g，4.87mmol)和噻唑-2-胺(536.74mg，5.36mmol)混合在DMA(30mL)中，将反应混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(2.52g，19.49mmol，3.39mL)，并加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(2.41g，6.33mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30分钟。将反应混合物温热至20℃并搅拌2小时。用200mL水稀释反应混合物。过滤沉淀出的固体并用水洗涤，干燥固体。向固体中加入甲醇(30mL)并于20℃搅拌20分钟。沉淀出固体，然后将其过滤，用甲醇洗涤，干燥固体，得到呈棕色固体的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(2g，2.87mmol，收率58.82％)。LCMS(ES+):m/z698.4[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ＝7.87(s,1H),7.56-7.46(m,4H),7.39(d,J＝10.4Hz,1H),6.97(d,J＝3.6Hz,1H),6.53-6.50(m,2H),6.42(s,1H),4.81(d,J＝17.2Hz,1H),4.45(d,J＝17.2Hz,1H),4.05-3.94(m,2H),3.68(s,4H),3.45-3.38(m,4H),2.85-2.74(m,1H),2.69-2.53(m,3H),1.84-1.77(m,4H),1.47(s,9H)
步骤6：2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
向2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(246mg，352.53μmol)在二氯甲烷(3mL)中的混合物中加入三氟乙酸(803.92mg，7.05mmol，543.19μL)。混合物于25℃搅拌1小时。于0-5℃在搅拌下将反应混合物加到甲基叔丁基醚(20mL)中。将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以3000rpm离心3分钟。倾析出上清溶剂并弃去。向固体中加入甲基叔丁基醚(20mL)并将所得悬浮液搅拌2分钟。将悬浮液转移至小瓶进行离心，并将悬浮液以3000rpm离心3分钟。倾析出上清溶剂并弃去。真空蒸发挥发物，得到呈黄色固体的2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(246mg，345.64μmol，收率98.05％)。LCMS(ES+):m/z 598.2[M+H]+
步骤7：2-[6-[4-[7-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
向2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(150mg，346.98μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(165.61mg，520.47μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(313.92mg，2.43mmol，423.07μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。然后向混合物中加入2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(246.96mg，346.98μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(99.36mg，312.28μmol)。混合物于25℃搅拌1小时。混合物通过制备HPLC纯化(柱子：Phenomenex luna C18 150*40mm15μm，相：水(0.1％三氟乙酸)-乙腈；B％：18％-48％，运行时间：10min)，得到30mL溶液。将该溶液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中至pH＝8。过滤混合物并用水(2×5mL)洗涤滤饼，将滤饼冻干，得到呈白色固体的化合物138(117.90mg，118.44μmol，收率34.13％)。LCMS(ES+):m/z 975.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(brs,1H),10.77(s,1H),7.75-7.67(m,2H),7.66-7.58(m,3H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(d,J＝2.4Hz,1H),6.60(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),6.52(br d,J＝8.4Hz,2H),6.14(s,1H),5.83(d,J＝7.6Hz,1H),4.96(s,1H),4.79(brd,J＝17.6Hz,1H),4.33-4.16(m,2H),4.07-3.91(m,2H),3.70-3.63(m,4H),3.58-3.48(m,4H),2.94-2.84(m,2H),2.84-2.70(m,4H),2.60-2.54(m,4H),2.47-2.41(m,2H),2.11-2.03(m,1H),1.85-1.62(m,9H)
实施例139.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[5-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物139
步骤1：2-[1-[5-[[(2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)和2-[1-[5-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)
Figure BDA0003698737280006661
通过手性SFC(35％的异丙醇/超临界CO2，柱子：DAICEL CHIRALCEL OJ(250mm×30mm，10μm)；运行时间90min)分离外消旋2-[1-[5-[[(2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯，得到2组级分。
第一组洗脱级分：2-[1-[5-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(660mg，1.50mmol，收率46％)，为棕色固体。LCMS(ESI):m/z 437.2[M+H]+
第二组洗脱级分：2-[1-[5-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(580mg，1.32mmol，收率40％)，为棕色固体。LCMS(ESI):m/z 437.2[M+H]+
步骤2：2-[1-[5-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸，异构体1
Figure BDA0003698737280006671
向2-[1-[5-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(360mg，824.79μmol)在二氯甲烷(5.4mL)中的混合物中加入盐酸(12M，360.00μL)。混合物于25℃搅拌0.5小时。于35℃减压浓缩该混合物，得到呈棕色固体的2-[1-[5-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)(380mg，902.52μmol)。LCMS(ESI):m/z 381.1[M+H]+
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[5-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
Figure BDA0003698737280006672
于0℃向2-[1-[5-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(异构体1)盐酸盐(200mg，479.81μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(430.36mg，3.33mmol，580μL)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(183mg，481.29μmol)。将混合物于0℃搅拌0.5小时。向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(260mg，380.30μmol)。将所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤混合物。固体通过反相柱(水:乙腈)纯化。冷冻含化合物的级分并冻干。该物质通过制备HPLC纯化(流速：25mL/min；梯度：26至56％的乙腈/水，用时9min；柱子：Waters Xbridge 150×25mm,5μm)。冷冻纯级分并冻干，得到呈白色固体的化合物139(147.08mg，156.23μmol，33％)。LCMS(ESI):m/z932.3[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.51(s,1H),10.80(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(s,1H),7.56(d,J＝1.6Hz,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),6.98(dd,J＝2.4,14.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.14(s,1H),5.88(d,J＝7.6Hz,1H),4.84-4.71(m,2H),4.37(s,2H),4.32-4.24(m,1H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.07(s,2H),4.05-3.88(m,6H),3.28-3.19(m,2H),3.11-3.01(m,2H),2.82-2.68(m,2H),2.62-2.58(m,1H),2.57-2.52(m,2H),2.47-2.42(m,1H),2.21(s,2H),2.10(dt,J＝4.0,8.4Hz,1H),1.93-1.82(m,1H),1.73(t,J＝10.4Hz,2H),1.66-1.55(m,2H)。
实施例140.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物140
步骤1：2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006681
于0℃向2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(350mg，585.57μmol)和N,N-二异丙基乙胺(454.08mg，3.51mmol，611.96μL)在乙腈(15mL)中的溶液中加入在乙腈(30mL)中的2-溴乙酸叔丁酯(171.33mg，878.36μmol，128.82μL)。将混合物于20℃搅拌2小时。将反应混合物倒入水(60mL)中，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(20mL×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到呈灰白色固体的2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸叔丁酯(440mg，618.11μmol，收率105.56％)。LCMS(ESI):m/z 712.2[M+H]+
步骤2：2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸
Figure BDA0003698737280006691
向2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸叔丁酯(440mg，618.11μmol)在二氯甲烷(2.5mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.60g，22.84mmol，1.76mL)。混合物于25℃搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，粗产物加石油醚(30mL)研磨15分钟，得到呈黄色固体的2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸三氟乙酸盐(440mg，585.00μmol，收率94.55％)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006701
向2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸三氟乙酸盐(220mg，285.80μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(272.81mg，428.70μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(295.50mg，2.29mmol，398.24μL)。将混合物于0℃搅拌20分钟。加入1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(90mg，247.69μmol)并将混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(181.87mg，285.80μmol)，将混合物于0℃搅拌60分钟。将混合物倒入水(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中和。沉淀出白色固体，过滤收集。将固体溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(使用三氟乙酸作为相改性剂)。柱子：PhenomenexSynergi C18 150*25mm,10μm；流动相：水(+0.1％三氟乙酸)-乙腈；梯度时间：10min。将纯级分倒在饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中。沉淀出白色固体，过滤收集。固体用水(10mL×2)洗涤并冻干，得到呈灰白色固体的化合物140(55.9mg，55.84μmol，收率19.54％)。LCMS(ESI):m/z 501.5[M/2+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.67-10.48(m,1H),7.71(s,1H),7.67-7.59(m,4H),7.58-7.44(m,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),6.64-6.48(m,3H),5.80(br,1H),5.21-5.06(m,1H),4.80-4.66(m,1H),4.61-4.28(m,1H),4.15(d,J＝17.6Hz,1H),4.00(s,3H),3.93(t,J＝6.8Hz,4H),3.67-3.59(m,4H),3.58-3.49(m,1H),3.43-3.40(m,1H),3.27-3.22(m,1H),3.20-3.06(m,2H),2.77(t,J＝6.8Hz,3H),2.63-2.55(m,2H),2.45(s,4H),2.32-2.22(m,1H),2.17-1.90(m,2H),1.87-1.73(m,4H)。
实施例141.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物141
步骤1：1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮
Figure BDA0003698737280006711
向(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(143mg，308.54μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入在二噁烷中的盐酸(4M，1mL)，将混合物于25℃搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，残余物加乙醚研磨并过滤，得到呈白色固体的1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(116mg，290.13μmol，收率94.03％)。
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006712
向2-[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]乙酸三氟乙酸盐(220mg，285.80μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(272.81mg，428.70μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(295.50mg，2.29mmol，398.24μL)。将混合物于0℃搅拌20分钟。加入1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(103.85mg，285.80μmol)，将混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(181.87mg，285.80μmol)，将混合物于0℃搅拌60分钟。将混合物倒入水(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中和。沉淀出白色固体，过滤收集。将固体溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化。柱子：Phenomenex Synergi C18 150*25mm,10μm；流动相：水(0.1％三氟乙酸)-乙腈；梯度时间：10min，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中和。沉淀出白色固体，过滤收集。固体用水(10mL×2)洗涤并冻干，得到呈灰白色固体的化合物141(57.22mg，57.16μmol，收率20.00％)。LCMS(ESI):m/z 501.9[M/2+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.57(s,1H),7.76-7.67(m,2H),7.66-7.58(m,4H),7.57-7.47(m,2H),7.26(d,J＝3.2Hz,1H),7.08(d,J＝8.2Hz,1H),6.56-6.49(m,2H),6.15(s,1H),4.88-4.65(m,2H),4.59-4.27(m,1H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.05-3.96(m,5H),3.93(t,J＝6.8Hz,2H),3.62(d,J＝11.2Hz,4H),3.58-3.47(m,1H),3.46-3.40(m,1H),3.30-3.23(m,1H),3.22-3.04(m,2H),2.84-2.74(m,3H),2.64-2.54(m,2H),2.39-2.39(m,1H),2.47-2.37(m,4H),2.33-2.20(m,1H),2.18-1.89(m,2H),1.89-1.73(m,4H)。
实施例142.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物142
Figure BDA0003698737280006721
将2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-氧代-6-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(310mg，531.66umol)和2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(265.30mg，637.99umol)混合在DMF(4mL)中。于0℃向反应混合物中加入DIPEA(343.57mg，2.66mmol，463.03uL)。于0℃向反应混合物中加入丙基膦酸酐溶液(422.91mg，1.33mmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈/水(+0.1％NH4OAc)，用时50分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到化合物142(185.2mg，201.15umol，收率37.83％)，为游离碱灰白色固体。LCMS(ESI+):908.8[M+H]。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.79(s,1H),8.54(s,1H),8.10(s,1H),7.85(s,1H),7.76(d,J＝10.40Hz,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.20Hz,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),6.86(t,J＝9.60Hz,1H),6.50(d,J＝16.80Hz,1H),6.42(d,J＝8.80Hz,1H),6.15(s,1H),5.78(d,J＝7.20Hz,1H),4.91(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.55(d,J＝12.00Hz,1H),4.46(t,J＝11.20Hz,1H),4.27-4.17(m,3H),4.02-3.96(m,2H),3.25(s,1H),2.92-2.74(m,5H),2.70(d,J＝5.60Hz,2H),2.68(s,1H),2.69(s,3H),2.10(t,J＝4.80Hz,4H),1.91(d,J＝12.00Hz,1H),1.86(d,J＝3.20Hz,1H),1.82(t,J＝12.80Hz,2H),1.79-1.65(m,4H),[预期H-47，观察到H-46]。
实施例143.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物143
步骤1：2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006731
于0℃向2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(500mg，702.52μmol)和N,N-二异丙基乙胺(544.76mg，4.22mmol，734.18μL)在乙腈(20mL)中的溶液中加入在乙腈(10mL)中的2-氯乙酸叔丁酯(126.96mg，843.02μmol，120.92μL)。将混合物温热至20℃并于20℃搅拌2小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(20mL×2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。残余物通过反相快速色谱法纯化(80gFlash Column Welch Ultimate XB-C18 20-40μm，5％至32％的乙腈/水，流速：60mL/min，12分钟)，得到呈白色固体的2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸叔丁酯(300mg，421.44μmol，收率59.99％)。LCMS(ESI+):712.3(M+H)
步骤2：2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸三氟乙酸盐
Figure BDA0003698737280006741
向2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸叔丁酯(300mg，421.44μmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.22g，19.47mmol，1.50mL)。混合物于25℃搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，残余物加乙醚研磨，并过滤，得到呈黄色固体的2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸三氟乙酸盐(300mg，389.73μmol，收率92.48％)。LCMS(ESI+):656.2(M+H)。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006751
向2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸三氟乙酸(80mg，103.93μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(99.20mg，155.89μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(107.45mg，831.42μmol，144.82μL)。将混合物于0℃搅拌20分钟；加入1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(41.55mg，103.93μmol)并将混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(66.14mg，103.93μmol)，将混合物于0℃搅拌60分钟。将混合物倒入水(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中和。沉淀出白色固体，通过过滤收集。将固体溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化。(柱子：Phenomenex Luna C18 150*40mm 15μm；洗脱剂混合物：水(0.1％三氟乙酸)-乙腈；梯度时间：10分钟)。将纯级分加到饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中。过滤白色沉淀。固体用水(10mL×2)洗涤并经受高真空，得到呈黄色固体的化合物143(52.25mg，52.19μmol，收率50.22％)。LCMS(ESI+):501.8(M/2+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.53(br s,1H),10.57(s,1H),7.79-7.70(m,2H),7.69-7.60(m,4H),7.56-7.47(m,2H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.11-7.02(m,3H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.75-4.50(m,1H),4.22(d,J＝17.6Hz,2H),4.00(s,6H),3.93(t,J＝6.8Hz,3H),3.70-3.43(m,5H),3.24(br,7H),2.92-2.71(m,4H),2.59-2.56(m,1H),2.30(br,1H),1.96(d,J＝2.0Hz,1H),1.86(br,4H)。
实施例144. 2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物144
Figure BDA0003698737280006761
向2-[7-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酸三氟乙酸盐(220mg，285.80μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(272.81mg，428.70μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(295.50mg，2.29mmol，398.24μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入1-[6-[(4S)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(103.85mg，285.80μmol)并将混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(181.87mg，285.80μmol)，将混合物于0℃搅拌60分钟。将混合物倒入水(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中和。通过过滤收集白色固体沉淀。将固体溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化：柱子：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(0.1％三氟乙酸)-乙腈]；梯度时间：10min)。向纯级分中加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)。通过过滤收集固体沉淀。固体用水(10mL×2)洗涤并冻干，得到呈黄色固体的化合物144(77.01mg，72.31μmol，收率25.30％)。LCMS(ESI+):501.2(M/2+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.76-12.23(m,1H),10.57(br s,1H),7.78-7.70(m,2H),7.67-7.59(m,4H),7.52(s,1H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),7.09-7.01(m,3H),6.16(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.76-4.41(m,2H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.17-4.06(m,1H),4.00(s,5H),3.93(t,J＝6.8Hz,2H),3.66-3.42(m,4H),3.22(br d,J＝6.4Hz,5H),3.16-3.06(m,4H),2.77(s,3H),2.59-2.55(m,1H),2.29-2.06(m,1H),1.98-1.90(m,1H),1.85-1.77(m,4H),1.24(s,1H)
实施例145.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物145
步骤1：2-[1-(2-氯-6-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006771
向2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(8g，37.16mmol)和1-氯-2,3-二氟-5-硝基-苯(6.54g，33.78mmol)在DMSO(80mL)中的溶液中加入碳酸钾(14.01g，101.34mmol，6.12mL)。混合物于110℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至20℃并过滤。滤液用水(200mL)淬灭，观察到沉淀。真空过滤所得混合物，得到滤头(filter head)和滤液。真空浓缩滤头，得到黄色的2-[1-(2-氯-6-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(13g，33.43mmol，收率98.97％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):8.03-7.95(m,1H),7.90-7.81(m,1H),6.96-6.89(m,1H),3.88(s,1H),3.51-3.45(m,2H),3.40-3.29(m,2H),2.43(s,2H),1.88-1.65(m,4H),1.49(s,9H)。
步骤2：2-[1-(4-氨基-2-氯-6-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006772
向2-[1-(2-氯-6-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(13g，33.43mmol)在水(40mL)、乙醇(200mL)中的混合物中加入氯化铵(8.94g，167.17mmol，5.84mL)。铁粉(11.20g，200.61mmol，1.43mL)。混合物于90℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至25℃并硅藻土过滤。减压浓缩反应混合物以除去EtOH。用水(300mL)稀释残余物并用乙酸乙酯(300mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(200mL×2)洗涤，用NaSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈橙色油的2-[1-(4-氨基-2-氯-6-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(11g，30.65mmol，收率91.69％)。LCMS(ESI+):359.2(M+H)
步骤3：2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006781
2-[1-(4-氨基-2-氯-6-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(4.2g，11.70mmol)和2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(6.50g，17.56mmol)在1,4-二噁烷(45mL)中的搅拌溶液，该反应混合物用氮气脱气15分钟，于25℃加入碳酸铯(11.44g，35.11mmol)、XPhos(557.97mg，1.17mmol)和Pd2(dba)3(1.07g，1.17mmol)。再继续用氮气脱气5min。反应混合物在N2下加热至100℃，保持16小时。将混合物冷却至25℃并用水(300mL)稀释，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。合并有机层，用盐水(2×300mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1至5/1)，得到呈黄色油的2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(5.7g，8.79mmol，收率75.13％)。LCMS(ES+):648.2[M+H]+
步骤4：2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006782
在N2下向2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(5.6g，8.64mmol)在乙酸乙酯(57mL)中的混合物中加入10％钯/木炭(570mg)和氯化锂(732.55mg，17.28mmol，353.89μL)。将该混合物在H2气氛(35Psi)下于25℃搅拌16小时。过滤混合物，并用乙酸乙酯洗涤滤饼。浓缩滤液，得到残余物。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至2/1)，得到呈蓝色固体的2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.9g，4.04mmol，收率46.80％)。LCMS 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.80(s,1H),6.60-6.56(m,1H),6.44(dd,J＝2.4,14.8Hz,1H),6.21(d,J＝8.0Hz,1H),4.44(s,1H),4.39-4.28(m,1H),3.30-3.17(m,2H),2.78-2.64(m,3H),2.55-2.51(m,1H),2.33(s,2H),2.11-2.01(m,1H),1.92-1.83(m,1H),1.79-1.69(m,2H),1.62-1.55(m,2H),1.41(s,9H)
步骤5：2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)和2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)
Figure BDA0003698737280006791
通过制备SFC纯化2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.2g，4.68mmol)(样品制备：向样品中加入异丙醇和CH2Cl2100mL，仪器：Waters 80Q，流动相：50％的异丙醇/超临界CO2；流速：70g/min，循环时间：4.4min，总时间：550min，单次进样量：1.5mL，背压：100巴以使CO2保持超临界流)。得到呈蓝色固体的2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(900mg，1.84mmol，收率39.27％)和呈蓝色固体的2-[1-[2-氯-4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)(1g，2.13mmol，收率45.45％)。
步骤6：2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸酯，异构体1
Figure BDA0003698737280006792
向2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(0.25g，531.99μmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸(4M，3mL)。混合物于20℃搅拌16小时。减压浓缩反应混合物。残余物加乙醚研磨并过滤，得到呈蓝色固体的2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(240mg，522.33μmol，收率98.18％)。LCMS(ES+):m/z 414.1[M+H]+
步骤7：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
Figure BDA0003698737280006801
向2-[1-[2-氯-4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-6-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(240mg，532.99μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(254.38mg，799.49μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(482.19mg，3.73mmol，649.85μL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(364.39mg，532.99μmol)，混合物于0℃搅拌1小时。向混合物中加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(152.63mg，479.69μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。混合物通过制备HPLC纯化(柱子：Phenomenex luna C18150*40mm*15μm，相：水(+0.1％三氟乙酸)-乙腈；B％：23％-53％，10min)，得到溶液。将该溶液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中。过滤混合物并用水(5mL)洗涤滤饼，将滤饼冻干，得到呈灰白色固体的化合物145(221.53mg，224.87μmol，收率42.19％)。LCMS(ESI+):m/z 965.5[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.51(br s,1H),10.80(s,1H),7.75-7.68(m,2H),7.67-7.59(m,3H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),6.60-6.51(m,3H),6.44(dd,J＝2.4,14.8Hz,1H),6.22(d,J＝8.0Hz,1H),6.14(s,1H),4.83-4.73(m,2H),4.41-4.29(m,3H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.08(s,2H),4.05-3.95(m,6H),3.28-3.18(m,2H),2.79-2.65(m,4H),2.60-2.52(m,3H),2.48-2.44(m,1H),2.21(s,2H),2.09-2.01(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.75-1.65(m,2H),1.62-1.55(m,2H)。
实施例146.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-羰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物146
步骤1：1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲腈
Figure BDA0003698737280006811
于室温向1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(5.0g，20.99mmol)在DMSO(50mL)和水(5mL)中的搅拌溶液中加入三甲基氰硅烷(4.16g，41.98mmol)，并将反应混合物于环境温度搅拌16小时。将反应混合物倒入冰冷水中并用乙酸乙酯(300mL)萃取。有机层用水(150mL)洗涤，然后用盐水(50mL)洗涤。浓缩残余物并用二氧化硅纯化，使用10至50％的乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂。减压蒸馏收集的级分，得到呈黄色固体的1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲腈(4.6g，16.18mmol，收率77.09％)。LCMS m/z:266.2[M+1]
步骤2：1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸
Figure BDA0003698737280006812
在密封管中于85℃将1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲腈(2.5g，9.43mmol)在浓盐酸水溶液(6N)(30mL)中搅拌16小时。将反应冷却至室温并在碎冰中淬灭反应物质。过滤沉淀出的固体，用水洗涤，并干燥，得到呈黄色固体的1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸(2.15g，7.06mmol，收率74.87％)。LCMS m/z:285.2[M+1]
步骤3：1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯
Figure BDA0003698737280006821
于环境温度向1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸(2.1g，7.39mmol)在甲苯(20mL)中的搅拌悬浮液中加入对-甲苯磺酸一水合物(140.52mg，738.81μmol)，然后加入苯甲醇(3.99g，36.94mmol，3.82mL)。反应混合物于60℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温并用冰冷水淬灭。用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。用水、然后盐水(100mL)洗涤有机层，浓缩并用二氧化硅纯化，使用10至40％的乙酸乙酯/石油醚洗脱化合物。蒸馏收集的级分，得到呈黄色固体的1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(2.0g，5.01mmol，收率67.76％)。LCMS m/z:375.2[M+1]
步骤4：1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯
Figure BDA0003698737280006822
使用类似于2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成所用的方案从1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯合成1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯，收率为92.34％。LCMS m/z:345.2[M+H]
步骤5：1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯
使用类似于2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯的合成所用的方案从1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯合成1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯，收率为74％。LCMS m/z:456.0[M+H]
步骤6：1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(异构体1)和1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(异构体2)
Figure BDA0003698737280006831
使外消旋1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(1.9g，4.17mmol)经受手性SFC(柱子：YMC Cellulose-C[250*30mm，5微米]；流动相：CO2:0.5％异丙胺/异丙醇(60:40)；流速：100g/min；循环时间：6.3min；背压：100巴；UV：210nm)，得到两组级分。
蒸发第一组洗脱级分，得到呈棕色固体的1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(异构体1)(750mg，1.63mmol，收率39.16％)。分析SFC(柱子：YMC Cellulose-C[250*30mm，5微米]；流动相：CO2:0.5％异丙胺/异丙醇(60:40)；流速：100g/min；循环时间：6.3min；背压：100巴；UV：210nm):Rt＝3.73min.,92.77％ee。
蒸发第二组洗脱级分，得到呈棕色固体的1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(异构体2)(700mg，1.52mmol，收率36.54％)。分析SFC(柱子：YMC Cellulose-C[250*30mm，5微米]；流动相：CO2:0.5％异丙胺/异丙醇(60:40)；流速：100g/min；循环时间：6.3min；背压：100巴；UV：210nm):Rt＝4.53min.,50.62％ee。
步骤7：1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸，异构体1
Figure BDA0003698737280006832
向1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸苄酯(200mg，439.10μmol)在乙酸乙酯(10mL)和乙醇(10mL)中的搅拌溶液中加入10％钯/碳(100mg，439.10μmol)并将反应混合物在气球压力下于室温下氢化12小时。用硅藻土床过滤反应混合物并用10％的甲醇-二氯甲烷洗涤。减压浓缩滤液，得到呈蓝色固体的1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸(异构体1)(145mg，313.93μmol，收率71.49％)。LCMS(m/z:366.1[M+1])
步骤8：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-羰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
Figure BDA0003698737280006841
向处于0℃的1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-哌啶-4-甲酸(异构体1)(69.47mg，190.15μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(122.88mg，950.75μmol，165.60μL)，然后加入1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)-二甲基氨基-吗啉代)]脲鎓六氟磷酸盐(104.86mg，247.19μmol)。将反应混合物搅拌5分钟。在保持0℃的同时加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(130mg，190.15μmol)，并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌45分钟。粗反应混合物通过C18柱子(120g)进行纯化(0％至60％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时45分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的产物化合物146(19mg，18.47μmol，收率9.72％)。LCMS m/z:917.2[M+H],1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.54(s,1H),10.82(s,1H),7.89-7.74(m,6H),7.61(s,1H),7.37(s,1H),6.99(t,J＝9.20Hz,1H),6.66(t,J＝17.20Hz,4H),6.27(s,1H),5.94(d,J＝7.60Hz,2H),5.30(s,1H),4.96(d,J＝18.40Hz,1H),4.752(s,2H),4.40-4.33(m,2H),4.23-4.13(m,10H),3.03(t,J＝11.20Hz,5H),2.90-2.82(m,3H),2.19-2.14(m,3H),2.01-1.90(m,2H),1.77(d,J＝12.80Hz,2H)。
实施例147.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物147
步骤1：3-[3-氟-4-[4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-1-哌啶基]苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280006851
向2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(3.5g，12.40mmol)在水(24mL)和乙酸(6mL)中的溶液中加入丙烯酸(1.07g，14.88mmol，1.02mL)。将反应混合物于100℃加热14小时。减压浓缩反应混合物。残余物用乙酸乙酯(60mL)稀释。用硫酸钠干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，得到3-[3-氟-4-[4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-1-哌啶基]苯胺基]丙酸(4.0g，6.66mmol，收率53.72％)。LCMS:355.1[M+H]+。
步骤2：2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯
Figure BDA0003698737280006852
向3-[3-氟-4-[4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-1-哌啶基]苯胺基]丙酸(4.0g，11.29mmol)在乙酸(15mL)中的溶液中加入脲(1.36g，22.58mmol，1.01mL)。在密封管中将反应混合物加热至110℃，保持14小时。减压浓缩反应混合物。残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)、水(30mL)和盐水溶液(30mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，用60％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈淡棕色固体的2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(1.6g，3.65mmol，收率32.36％)。LCMS m/z:380.1[M+H]+。
步骤3：2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280006861
向2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(300mg，790.76μmol)在THF(2mL)中的溶液中加入6N HCl(6M，7.50mL)并于室温搅拌14小时。减压浓缩反应混合物，得到呈棕色树胶的2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(280mg，648.06μmol，收率81.95％)。LCMS m/z 366.2[M+H]+
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006862
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(140mg，209.37μmol)和2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(100.96mg，251.25μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(162.36mg，1.26mmol，218.81μL)，然后加入HATU(103.49mg，272.18μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物147(50mg，54.46μmol，收率26.01％)。LCMS m/z 901.8(M+H)+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.82(d,J＝3.20Hz,1H),10.37(s,1H),8.25(s,1H),7.69(s,1H),7.61-7.59(m,3H),7.51(d,J＝3.60Hz,1H),7.29-7.28(m,1H),7.18-7.10(m,2H),7.07-7.05(m,2H),6.69(s,1H),6.54(d,J＝8.80Hz,2H),4.84(s,1H),4.39(s,2H),4.09(s,2H),4.12-3.38(m,6H),3.74(t,J＝6.80Hz,2H),3.09-2.98(m,5H),2.89-2.83(m,1H),2.71-2.67(m,2H),2.59-2.58(m,2H),2.25(s,2H),1.83-1.78(m,2H),1.68-1.65(m,2H)。
实施例148.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物148
Figure BDA0003698737280006871
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(70mg，104.69μmol)和2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(55.76mg，125.62μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(81.18mg，628.12μmol，109.41μL)，然后加入HATU(51.75mg，136.09μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物148(28mg，28.50μmol，收率27.23％)。LCMS m/z 944.8(M+H)+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.83(s,1H),10.81(s,1H),8.26(s,1H),7.70(s,1H),7.60(d,J＝7.60Hz,3H),7.52(d,J＝3.60Hz,1H),7.29(d,J＝3.20Hz,1H),7.14-7.11(m,1H),6.88-6.83(m,1H),6.70(s,1H),6.55-6.53(m,2H),6.45-6.41(m,2H),5.91-5.90(m,1H),4.83-4.81(m,1H),4.39-4.34(m,2H),4.31-4.22(m,1H),4.11-4.07(m,2H),3.68-3.57(m,1H),3.28-3.18(m,1H),2.86-2.71(m,2H),2.68-2.55(m,5H),2.18-2.09(m,4H),1.90-1.87(m,3H),1.73-1.60(m,3H),1.40-1.37(m,1H),1.05-1.03(m,4H)。
实施例149.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-羟基-1-哌啶基]苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物149
步骤1：[2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂。
Figure BDA0003698737280006881
于0℃向2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(500mg，1.23mmol)在四氢呋喃(5mL)、乙醇(5mL)和水(5mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化锂一水合物(77.28mg，1.84mmol，51.18μL)。将反应混合物于室温搅拌2小时。减压浓缩该混合物，与甲苯(2×25mL)共蒸馏。残余物加乙醚(25mL)搅拌，倾析并干燥，得到呈棕色固体的[2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酰基]氧基锂(460mg，1.07mmol，收率86.95％)。LCMS(ESI+):379.0[M+H]+
步骤2：2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺。
Figure BDA0003698737280006882
向2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(450mg，1.19mmol)和噻唑-2-胺(178.27mg，1.78mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(920.28mg，7.12mmol，1.24mL)。将反应混合物冷却至0℃。于0℃加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(755.21mg，2.37mmol)并于室温搅拌16小时。将反应混合物倒入冰冷水(50mL)中。过滤固体，用冰水洗涤并干燥，得到呈浅黄色固体的2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(390mg，795.99μmol，收率67.07％)。LCMS(ESI+):461.0[M+H]+。
步骤3：2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯。
Figure BDA0003698737280006891
向2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(290mg，628.64μmol)和2-[4-羟基-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(262.36mg，628.64μmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入在水(3mL)中的碳酸钠(199.89mg，1.89mmol，79.01μL)。混合物用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)，用氮气再脱气5分钟并在氮气下于90℃加热4小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。向滤液中加入冰水(50mL)并使用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过使用二氧化硅的快速柱纯化(3％的甲醇/二氯甲烷)，得到呈浅棕色固体的2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(120mg，163.62μmol，收率26.03％)。LCMS(ESI+):672.2[M+H]+。
步骤4：2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐。
Figure BDA0003698737280006901
于0℃向2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(120mg，178.63μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4.0M溶液，在1,4-二噁烷中，45μL，178.63μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。减压浓缩反应混合物。残余固体加乙醚(2×25mL)研磨并减压干燥，得到呈棕色固体的2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(120mg，162.83μmol，收率91.15％)。LCMS(ESI+):616.1[M+H]+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-羟基-1-哌啶基]苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006911
将2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(100mg，153.34μmol)和(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(62.90mg，184.01μmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中并将混合物冷却至0℃。向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(118.91mg，920.05μmol，160.25μL)。加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(97.58mg，306.68μmol)并在温热至室温的同时将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物149(57mg，62.78μmol，收率40.94％)。LCMS(ESI+):902.9[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.82(s,1H),10.80(s,1H),8.30(d,J＝2.80Hz,1H),7.70(s,1H),7.56(d,J＝8.80Hz,1H),7.52(d,J＝3.60Hz,1H),7.47(d,J＝8.00Hz,2H),7.29(d,J＝2.80Hz,1H),7.13(t,J＝6.40Hz,1H),7.06(d,J＝8.80Hz,2H),6.98(t,J＝8.40Hz,1H),6.72(s,1H),6.47(s,1H),6.44(d,J＝4.00Hz,1H),6.04(d,J＝7.20Hz,1H),5.09(s,1H),4.60(br d,J＝12.80Hz,1H),4.32-4.31(m,1H),4.16-4.12(m,1H),4.04-4.00(m,2H),3.53-3.50(m,2H),3.34-3.20(m,2H),3.17-3.07(m,1H),2.90-2.85(m,2H),2.74-2.71(m,1H),2.70-2.56(m,6H),2.10-2.07(m,1H),1.87-1.85(m,1H),1.72-1.69(m,7H),1.59 1.56(m,1H),1.46-1.43(m,1H)。
实施例150.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-羟基-1-哌啶基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物150
步骤1：2-[4-羟基-1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006921
将2-[1-(5-溴-2-吡啶基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.0g，2.69mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(957.56mg，3.77mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入乙酸钾(793.03mg，8.08mmol，505.11μL)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(219.96mg，269.35μmol)并用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在惰性气氛下于90℃加热16小时。冷却反应混合物并抽滤。用冷水(50mL)稀释滤液，并使用乙酸乙酯(3×150mL)萃取混合物。用盐水(100mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(0-80％的乙酸乙酯和石油醚)，得到呈灰白色固体的2-[4-羟基-1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(350mg，786.81μmol，收率29.21％)。LCMS m/z 337.2(M(硼酸酯水解)+H)+。
步骤2：2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006922
向2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(400mg，867.10μmol)和2-[4-羟基-1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(399.01mg，953.81μmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入在水(1mL)中的碳酸钠(229.76mg，2.17mmol，90.81μL)，并将反应混合物用氮气吹扫15分钟。向反应混合物中加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在氮气下于90℃加热3小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰水(20mL)洗涤滤液，并使用乙酸乙酯(3×20mL)萃取滤液。用盐水溶液(30mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过使用230-400硅胶的柱色谱法纯化，用0至10％的甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得到呈棕色固体的2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(150mg，95.87μmol，收率11.06％)。LCMS(m/z:671.0[M-H])。
步骤3：2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280006931
于0℃向2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(145mg，215.53μmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4.0M溶液，在1,4-二噁烷中，110.01mg，3.02mmol，137.52μL)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。完成后，减压蒸发反应至干。固体残余物加乙醚(2×10mL)研磨并蒸发至干，得到呈棕色固体的2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(95mg，80.00μmol，收率37.12％)。LCMS(m/z:617.0[M+H])。
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-羟基-1-哌啶基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006941
于0℃向2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(80mg，122.49μmol)和(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(38.06mg，111.35μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(71.96mg，556.76μmol，96.98μL)，并在相同的温度下加入1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(57.23mg，133.62μmol)，将反应混合物于室温搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物150(8.35mg，9.09μmol，收率8.17％)。LCMS(ESI+):915.8[M+H]；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.83(s,1H),10.80(s,1H),8.53(d,J＝2.00Hz,1H),8.27(s,1H),7.92(dd,J＝9.20,1.60Hz,1H),7.68(d,J＝12.80Hz,2H),7.52(d,J＝3.60Hz,1H),7.29(d,J＝3.20Hz,1H),7.18(d,J＝12.00Hz,1H),7.00-6.71(m,2H),6.47(s,1H),6.44(d,J＝5.60Hz,1H),5.16(s,1H),4.59(d,J＝12.80Hz,1H),4.32-4.29(m,1H),4.20-3.89(m,5H),3.18-3.01(m,1H),2.91-2.60(m,4H),2.10-2.06(m,2H),1.88-1.84(m,2H),1.72-1.45(m,8H),1.29-1.24(m,4H),0.90-0.87(m,2H)。(水遮蔽)。
实施例151.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-羟基-1-哌啶基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物151
步骤1：2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006951
将2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(700mg，1.52mmol)和2-[4-羟基-1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(888.70mg，2.12mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(6mL)中的溶液用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入99％的无水碳酸钾(629.15mg，4.55mmol，274.74μL)和[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(87.02mg，106.55μmol)并用氮气吹扫5分钟，然后在氮气下于90℃加热4小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰水(50mL)洗涤滤液并用乙酸乙酯(3*100mL)萃取。用盐水溶液(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(3％的甲醇和二氯甲烷)，得到呈浅棕色固体的2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(300mg，353.29μmol，收率23.28％)。LCMS m/z 673.2(M+H)+。
步骤2：2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280006961
于0℃向2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(250mg，371.60μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4.0M溶液，在二噁烷中，10mmol，2.5mL)。减压浓缩反应混合物。固体加乙醚(2×25mL)研磨并减压干燥，得到呈棕色固体的2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(220mg，255.00μmol，收率68.62％)。LCMS m/z 617.2(M+H)+。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-羟基-1-哌啶基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280006971
将2-[1-[5-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(100mg，153.11μmol)和(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐(62.80mg，183.73μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(118.73mg，918.66μmol，160.01μL)，然后加入丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(97.43mg，306.22μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物151(36mg，39.67μmol，收率25.91％)。LCMS m/z 903.8(M+H)+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.83(s,1H),10.80(s,1H),8.37(s,1H),8.33(d,J＝10.40Hz,1H),7.77(d,J＝8.80Hz,1H),7.70(s,1H),7.59(d,J＝8.80Hz,1H),7.52(d,J＝3.20Hz,1H),7.29(d,J＝2.80Hz,1H),7.15(t,J＝7.60Hz,1H),7.00-6.96(m,2H),6.72(s,1H),6.47-6.44(m,2H),6.04(d,J＝7.60Hz,1H),5.17(s,1H),4.60(d,J＝13.20Hz,1H),4.34-4.31(m,1H),4.15-4.04(m,5H),3.12-3.06(m,1H),2.90-2.55(m,11H),2.15-2.08(m,2H),1.88-1.84(m,1H),1.72-1.58(m,7H),1.55-1.24(m,1H)。
实施例152.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-2-甲基-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物152
步骤1：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006981
向溶解在1,4-二噁烷(5mL)和水(0.5mL)中的2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(500mg，1.07mmol)中加入4-[3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(CAS#1187313-16-1，553.15mg，1.39mmol)。反应混合物用氮气吹扫10分钟。在氮气氛下加入t-BuXPhos(45.25mg，106.55μmol)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(43.47mg，53.28μmol)和碳酸钾(441.79mg，3.20mmol，192.92uL)，并将反应混合物于90℃搅拌16小时。反应混合物通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯(150mL)洗涤滤液。用水(50mL)和盐水(50mL)溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥并浓缩，得到4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯。LCMS m/z:615.3(M+H)。
步骤2：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280006991
向圆底烧瓶中装入4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(448mg，728.81μmol)和甲醇(10mL)。加入钯(10％/碳，77.56mg，728.81μmol)。反应混合物用氢气冲洗5分钟，并将反应混合物于环境温度用氢气球气体压力(3巴)冲洗搅拌18小时。通过硅藻土床过滤反应混合物并用20％的甲醇/二氯甲烷洗涤。浓缩滤液，得到4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(370mg，277.8μmol，两步收率26.0％)。LCMS m/z:617.3(M+H)+
步骤3：2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)-2-甲基-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸
Figure BDA0003698737280006992
将4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-氧代-乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(370mg，599.95μmol)在乙醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)及水(1mL)中的反应混合物搅拌10分钟。向反应中加入氢氧化锂(28.74mg，1.20mmol)并于环境温度搅拌3小时。减压浓缩反应混合物并用水(5ml)稀释残余物。水层用硫酸氢钾酸化并过滤固体物质，得到2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)-2-甲基-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(282mg，353.3μmol，收率33.2％)。LCMS(ESI+):589.3(M+H)+
步骤4：4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007001
向2-[6-[4-(1-叔-丁氧基羰基-4-哌啶基)-2-甲基-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(280mg，475.65μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(184.42mg，1.43mmol，248.55uL)和[[(Z)-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)氨基]氧基-吗啉代-亚甲基]-二甲基-铵六氟磷酸盐(305.56mg，713.48μmol)，加入噻唑-2-胺(95.27mg，951.30μmol)并将反应混合物于0℃搅拌1.5小时。向反应物质中加入冷水并沉淀出固体物质，过滤固体物质并抽吸干燥固体。将残余物溶解在二氯甲烷(50mL)中，用硫酸钠干燥并蒸发，得到呈棕色固体的4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(245mg，207.1mmol，收率43.5％)。LCMS(ESI+)671.3(M+H)+
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-[2-甲基-4-(4-哌啶基)苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐
Figure BDA0003698737280007002
于0℃向4-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]-3-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(240mg，357.78μmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入氯化氢(4.0M，在1,4-二噁烷中，0.5mL，2mmol)。将反应混合物于环境温度搅拌3小时。减压除去溶剂，用乙醚(2×10mL)洗涤固体，并真空干燥，得到2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-[2-甲基-4-(4-哌啶基)苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(138mg，129μmol，收率36％)。LCMS m/z:571.3(M+H)+
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-2-甲基-苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007011
于0℃向2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-[2-甲基-4-(4-哌啶基)苯基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(110mg，181.18μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(70.25mg，543.53μmol，94.67uL)和[[(Z)-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代-亚乙基)氨基]氧基-吗啉代-亚甲基]-二甲基-铵六氟磷酸盐(116.39mg，271.77μmol)。将反应混合物搅拌15分钟。加入2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐(69.18mg，181.18μmol)。将反应混合物搅拌1小时。向反应混合物中加入水(10mL)。过滤固体。将固体溶解在二氯甲烷中。减压除去挥发物。残余物通过反相柱色谱法使用C18柱子(50g)进行纯化(5％至75％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵))。加入水(10mL)和乙腈(5mL)，对该混合物彻底超声处理、涡旋并再次超声处理。将悬浮液冷冻并冻干，得到呈白色固体的化合物152(24.6mg，26.16μmol，收率14.44％)。LCMS m/Z:898.3(M+H)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)11.86-12.97(m,1H),10.79(d,J＝Hz,1H),7.56(dd,J＝,Hz,2H),7.46-7.48(m,1H),7.15-7.23(m,3H),6.94-7.03(m,3H),6.60(dd,J＝-8.40,Hz,2H),6.01(m,1H),5.66(dd,J＝-7.60,Hz,1H),4.94-4.98(m,1H),4.52-4.55(m,1H),4.20-4.28(m,3H),3.92-4.01(m,3H),3.09-3.37(m,3H),2.94(m,2H),2.71-2.83(m,3H),2.65-2.70(m,2H),2.25-2.34(m,3H),2.08-2.11(m,3H),1.83-1.89(m,3H),1.69-1.76(m,6H),1.59-1.61(m,4H)。
实施例153.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺，化合物153
步骤1：7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛-6-烯-4-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007021
向1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮(450mg，1.22mmol)和7-(三氟甲基磺酰氧基)-4-氮杂螺[2.5]辛-6-烯-4-甲酸叔丁酯(521.24mg，1.46mmol)在1,4-二噁烷(7mL)和水(1.7mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钠(322.08mg，3.04mmol，127.30uL)。反应混合物用氮气脱气20分钟。向反应混合物中加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(99.21mg，121.55μmol)并再脱气10分钟。将反应混合物在氮气下于80℃加热6小时。通过硅藻土过滤反应混合物，并用10％的甲醇/二氯甲烷(2×40mL)洗涤滤饼。合并有机层，并减压浓缩。残余物通过硅胶(100-200目)柱色谱法纯化，用5％的甲醇/二氯甲烷洗脱。收集级分并蒸发，得到呈淡棕色固体的7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛-6-烯-4-甲酸叔丁酯(560mg，1.08mmol，收率88.71％)。LCMS m/z:452.2[M+H]+
步骤2：7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007022
在25ml釜形烧瓶中，将7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛-6-烯-4-甲酸叔丁酯(550mg，1.22mmol)溶解在甲醇(15mL)中。加入钯(10％/碳(湿)，648.16mg，6.09mmol)并将反应混合物在氢气氛(5kg压力)下搅拌18小时。加入二氯甲烷(10ml)并将混合物搅拌1小时。通过硅藻土过滤反应混合物，用10％的甲醇:二氯甲烷(2×100ml)洗涤。减压蒸发滤液。残余物通过二氧化硅柱纯化，用6％的甲醇:二氯甲烷洗脱。将收集的级分旋转真空蒸发，得到呈灰白色固体的7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸叔丁酯(460mg，853.30μmol，收率70.05％)。LCMS m/z:398.1,[M-56+H]+
步骤3：1-[6-(4-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐
Figure BDA0003698737280007031
向处于0℃的7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸叔丁酯(460mg，1.01mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(在1,4-二噁烷中的4M溶液，1.27mL，5.07mmol)。将反应混合物于环境温度搅拌3小时。减压蒸发反应混合物。所得粗品加乙醚(2×20ml)研磨，得到呈灰白色固体的1-[6-(4-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(430mg，915.41μmol，收率90.25％)。LCMS m/z:354.1[M+H]+
步骤4：2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007032
向处于0℃的1-[6-(4-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(430mg，1.10mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中的搅拌溶液中加入三乙胺(558.02mg，5.51mmol，768.62uL)，然后加入2-溴乙酸叔丁酯(236.64mg，1.21mmol，177.92uL)。加入后让反应于环境温度搅拌8小时。将反应混合物倒入冰冷水(10ml)中。过滤固体沉淀，收集并旋转真空干燥，得到呈灰白色固体的2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸叔丁酯(250mg，479.08μmol，收率43.44％)。LCMS m/z:468.3[M+H]+
步骤5：2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸三氟乙酸
Figure BDA0003698737280007041
向处于0℃的2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸叔丁酯(250mg，534.69μmol)在二氯甲烷(2.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入三氟乙酸(304.84mg，2.67mmol，205.97uL)。将反应于环境温度搅拌4小时。减压蒸发混合物至干。固体加乙醚(2×15ml)研磨。旋转真空干燥化合物，得到呈灰白色固体的2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸三氟乙酸(270mg，469.12μmol，收率87.74％)。LCMS m/z:412.2,[M+H]+
步骤6：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280007042
向处于0℃的2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸三氟乙酸盐(127.95mg，243.49μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(200.26mg，1.55mmol，269.89uL)，然后加入HATU(126.25mg，332.03μmol)。反应混合物搅拌反应5分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙酰胺三氟乙酸盐(150mg，221.35μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。化合物通过反相色谱法纯化(C18柱子，乙腈/水(10mM乙酸铵))。将纯级分冻干，得到呈白色固体的化合物153(58mg，60.29μmol，收率27.24％)。LCMS m/z:957.3,[M+H]+.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.91(s,1H),10.55(s,1H),8.33(d,J＝0.80Hz,1H),8.08(d,J＝8.40Hz,1H),7.81(t,J＝7.20Hz,1H),7.78-7.64(m,5H),7.56(d,J＝8.40Hz,1H),7.49(s,1H),7.14-7.11(m,1H),7.10(d,J＝7.60Hz,1H),6.55(d,J＝8.80Hz,2H),6.20(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.39(q,J＝9.60Hz,2H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.03-3.95(m,11H),3.91(t,J＝6.40Hz,2H),3.38(s,1H),2.96(s,2H),2.79-2.74(m,3H),2.56-2.51(m,2H),2.33(t,J＝1.60Hz,1H),1.92(m,1H),1.50(m,1H),0.91(d,J＝11.60Hz,1H),0.72-0.43(m,4H)。由于水遮蔽，一些质子信号未观察到。
实施例154.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物154
Figure BDA0003698737280007051
向处于0℃的2-[7-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]乙酸三氟乙酸盐(115.29mg，219.40μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(198.49mg，1.54mmol，267.51uL)，然后加入HATU(125.14mg，329.10μmol)。反应混合物搅拌5分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(150mg，219.40μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。纯化反应混合物(C18柱子，乙腈/水(10mM乙酸铵))。将纯级分冻干，得到呈白色固体的化合物154(80mg，82.12μmol，37.43％)。LCMS m/z:963.3,[M+H]+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(s,1H),10.55(s,1H),7.75(s,1H),7.72(d,J＝10.80Hz,1H),7.66(s,1H),7.64(s,1H),7.62(s,1H),7.55(d,J＝8.80Hz,1H),7.50(s,1H),7.49(s,1H),7.27(d,J＝3.60Hz,1H),7.08(d,J＝8.40Hz,1H),6.54(d,J＝8.40Hz,2H),6.15(s,1H),4.80(d,J＝17.60Hz,1H),4.38(q,J＝9.60Hz,2H),4.22(d,J＝17.60Hz,1H),4.07-3.98(m,12H),3.91(t,J＝6.80Hz,2H),3.53(d,J＝14.80Hz,1H),2.96-2.89(m,3H),2.75(t,J＝6.40Hz,3H),2.25(t,J＝Hz,1H),1.92(m,1H),1.48-1.42(m,1H),0.90(d,J＝12.00Hz,1H),0.70(d,J＝5.60Hz,1H),0.50(d,J＝4.40Hz,3H)(由于溶剂遮蔽，一些信号未观察到)。
实施例155.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[6-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羰基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物155
步骤1：2-(4-溴苯基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯
Figure BDA0003698737280007061
向2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(1.12g，4.16mmol)和1-溴-4-碘-苯(1.41g，4.99mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(4.07g，12.48mmol)并用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入Xantphos(481.42mg，832.04μmol)和Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(339.47mg，416.02μmol)。反应混合物用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在惰性气氛下于90℃加热16小时。将反应混合物冷却至环境温度并用乙酸乙酯稀释。用硅藻土床过滤混合物并用乙酸乙酯洗涤滤饼。用水、盐水洗涤乙酸乙酯层，用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过使用50g柱、230-400硅胶的柱色谱法纯化，使用乙酸乙酯:石油醚洗脱剂混合物，得到2-(4-溴苯基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(510mg，1.40mmol，收率33.59％)。LCMS(ESI+):310.1/312.1(M+H,Br模式)。
步骤2：2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯
Figure BDA0003698737280007062
向2-(4-溴苯基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(420mg，1.35mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1,3,2-二氧杂硼戊环(515.76mg，2.03mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中加入乙酸钾(398.65mg，4.06mmol，253.92uL)并用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入Pd(dppf)Cl2.二氯甲烷(220.98mg，270.81μmol)并用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在惰性气氛下于90℃加热16小时。将反应混合物冷却至环境温度并用乙酸乙酯稀释。混合物在硅藻土上过滤并用乙酸乙酯洗涤。用水和盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过使用25g柱子、230-400硅胶的柱色谱法纯化，在13％的乙酸乙酯/石油醚中洗脱，得到产物2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(310mg，685.51μmol，收率50.63％)。LCMS m/z358.0(M+H+)。
步骤3：2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯
Figure BDA0003698737280007071
向2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(310mg，867.74μmol)和2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(302.74mg，578.49μmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中加入在水(1mL)中的碳酸钠(61.31mg，578.49μmol，24.23uL)。反应混合物用氮气脱气15分钟。向反应混合物中加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(47.20mg，57.85μmol)并用氮气吹扫5分钟。在惰性气氛下将反应混合物于90℃加热16小时。将反应混合物冷却至环境温度并用甲醇稀释，通过硅藻土床过滤并用甲醇洗涤，浓缩，粗品通过使用25g柱子、230-400硅胶的柱色谱法纯化，在10％的甲醇:二氯甲烷中洗脱，得到产物2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(162mg，137.0μmol，收率23.68％)。LCMS m/z 627.2(M+H+)。
步骤4：[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羰基]氧基锂
Figure BDA0003698737280007081
向2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸甲酯(150mg，239.35μmol)在甲醇(1mL)和四氢呋喃(1mL)中的搅拌溶液中加入溶解在水(1mL)中的98％的氢氧化锂一水合物(10.04mg，239.35μmol，6.65uL)。将反应混合物于环境温度搅拌2小时。高真空蒸发反应混合物，得到[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羰基]氧基锂(145mg，117.20μmol)。LCMS m/z:613.2(M+H)+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[6-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羰基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007091
于0℃向[2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羰基]氧基锂(145mg，234.40μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(126.23mg，976.66μmol，170.12uL)，然后加入丙烷膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(124.30mg，390.66μmol)。将反应混合物搅拌15分钟。加入1-[6-(3,3-二氟-4-哌啶基)-1-甲基-吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮盐酸盐(78.10mg，195.33μmol)并搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-50％的乙腈/水(0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分，冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物155(13mg，13.30μmol，两步收率6.81％)。LCMS(ESI+):958.2(M+H)+,1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.56(s,1H),10.57(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.40Hz,1H),7.64-7.59(m,4H),7.55(d,J＝3.60Hz,1H),7.48(s,1H),7.24(s,1H),7.09-7.06(m,1H),6.51(t,J＝7.20Hz,2H),6.13(s,1H),4.84-4.79(m,2H),4.57(d,J＝32.00Hz,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,2H),4.02-3.91(m,10H),3.79(d,J＝8.80Hz,2H),3.61-3.52(m,2H),3.43-3.39(m,2H),3.21-3.06(m,2H),3.41(t,J＝8.80Hz,3H),2.45-2.38(m,3H),2.21-2.12(m,1H),1.93-1.89(m,1H)。
实施例156.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物156
步骤1：3-[3-氟-4-[4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-1-哌啶基]苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280007101
向2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(3.5g，12.40mmol)在水(24mL)、乙酸(6mL)中的溶液中加入丙烯酸(1.07g，14.88mmol，1.02mL)并于100℃加热14小时。减压浓缩反应混合物。将固体溶解在乙酸乙酯(60mL)中。用硫酸钠干燥乙酸乙酯层并减压浓缩，得到粗品3-[3-氟-4-[4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-1-哌啶基]苯胺基]丙酸(4.0g，6.66mmol，收率53.72％)。LCMS:355.1[M+H]+。
步骤2：2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯
Figure BDA0003698737280007102
向3-[3-氟-4-[4-羟基-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-1-哌啶基]苯胺基]丙酸(4.0g，11.29mmol)在乙酸(15mL)中的溶液中加入脲(1.36g，22.58mmol，1.01mL)并在密封管中于110℃加热14小时。向反应混合物中加入盐酸(2M水溶液，10mL，20mmol)并于100℃加热1小时。减压浓缩反应混合物，得到粗品，其用乙酸乙酯(100mL)稀释，用碳酸氢钠溶液(30mL)、水(30ml)和盐水(30mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层并减压浓缩，得到粗品，其通过柱色谱法在硅胶上纯化，用60％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到呈淡棕色固体的2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(1.6g，3.65mmol，收率32.36％)。
步骤3：2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280007103
向2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸甲酯(300mg，790.76μmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液中加入盐酸(6M水溶液，7.50mL，45mmol)并将反应混合物于环境温度搅拌14小时。减压浓缩反应混合物，得到呈棕色树胶的2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(280mg，648.06μmol，收率81.95％)。LCMS m/z 366.2[M+H]+
步骤4：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007111
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(80mg，117.01μmol)和2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(61.12mg，152.12μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(90.74mg，702.09μmol，122.29uL)，然后加入HATU(62.29mg，163.82μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物156(55mg，58.79μmol，收率50.24％)。LCMS m/z 917.3(M+H)+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.51(s,1H),10.38(s,1H),7.74-7.70(m,2H),7.65(d,J＝8.40Hz,2H),7.60(s,1H),7.46(s,1H),7.31-7.15(m,2H),7.07-7.05(m,2H),6.55(d,J＝8.40Hz,2H),6.12(s,1H),4.84(s,1H),4.82-4.81(m,1H),4.39(s,2H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.09(s,2H),4.03-3.96(m,6H),3.74(t,J＝6.80Hz,2H),3.09-2.97(m,4H),2.75-2.68(m,4H),2.63-2.58(m,1H),2.50-2.45(m,1H),2.25(s,2H),1.88-1.76(m,2H),1.68-1.65(m,2H)。
实施例157.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，化合物157
步骤1：2-[1-(2-氟-4-碘-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007121
向2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.2g，9.86mmol)在乙腈(40mL)中的溶液中加入。将反应混合物于0℃冷却。向反应混合物中一次性加入对-甲苯磺酸一水合物(1.88g，9.86mmol)。逐滴加入亚硝酸钠(680.66mg，9.86mmol)在水(10mL)中的溶液，2分钟加完。让反应混合物在相同的温度下搅拌30分钟。向反应混合物中逐滴加入99％的碘化钾(1.64g，9.86mmol)在水(10mL)中的溶液，3分钟加完。加入后于0℃搅拌反应混合物10分钟。将反应混合物温热至环境温度，保持1.5小时。向反应混合物中加入碳酸钾溶液(10％，在水中)。用乙酸乙酯萃取反应混合物。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(100-200目)，用10％的乙酸乙酯:石油醚洗脱。蒸发纯级分，得到2-[1-(2-氟-4-碘-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.1g，4.34mmol，收率44.02％)。LCMS m/z 436.0(M+H+)
步骤2：2-[1-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007122
向2-[1-(2-氟-4-碘-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(500mg，1.15mmol)和2,6-二苄氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶(575.23mg，1.38mmol)在1,4-二噁烷(5mL)和水(0.5mL)中的溶液中加入碳酸钠(304.38mg，2.87mmol，120.31uL)并用氮气吹扫溶剂10分钟。加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(93.81mg，114.87μmol)，反应混合物用氮气吹扫5分钟并于90℃加热16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰水洗涤滤液并用乙酸乙酯萃取。用盐水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗品。该粗品通过柱色谱法通过使用230-400硅胶纯化；用3％的甲醇/二氯甲烷洗脱，得到2-[1-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，507.4μmol，收率44.17％)。LCMS m/z 599.4(M+H+)
步骤3：2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007131
将2-[1-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(525mg，876.90μmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫5分钟并加入氢氧化钯(10％/碳，184.71mg，1.32mmol)。将反应混合物置于氢气氛(1atm)下。将反应于环境温度搅拌16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并通过硅藻土过滤。减压浓缩所需的滤液，得到2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，685.66μmol，收率78.19％)。LCMS m/z 421.3(M+H+)。
步骤4：2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280007132
于0℃向2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，737.26μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(在1,4-二噁烷中的4.0M溶液，2.76mL，11.06mmol)。反应混合物于环境温度搅拌6小时。减压浓缩反应混合物。固体加乙醚(2×10ml)研磨并减压干燥，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(250mg，597.15μmol，收率81.00％)。LCMS m/z 365.2(M+H)+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280007141
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(80mg，117.01μmol)和2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(60.97mg，152.12μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(90.74mg，702.09μmol，122.29uL)，然后加入HATU(62.29mg，163.82μmol)。将反应混合物于室温搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(0.1％NH4OAc)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物157(45mg，48.59μmol，收率41.53％)。LCMS m/z 914.3(M-H)-。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.62(s,1H),10.83(s,1H),7.74-7.60(m,5H),7.47(s,1H),7.23-7.21(m,1H),7.03-6.93(m,3H),6.55(d,J＝8.80Hz,2H),6.12(s,1H),4.83-4.88(m,2H),4.39(s,2H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.09-4.03(m,2H),3.80(s,6H),3.79-3.78(m,1H),3.05-2.99(m,5H),2.81-2.74(m,5H),2.34-2.19(m,3H),2.01-1.99(m,1H),1.88-1.76(m,2H),1.67-1.64(m,2H)。
实施例158.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物158
步骤1：2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007151
于环境温度向含有2-氯-1-氟-4-硝基-苯(6g，34.18mmol)和2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(8.09g，37.60mmol)在无水DMSO(60mL)中的混合物的充分搅拌溶液的250mL密封管中加入N,N-二异丙基乙胺(13.25g，102.54mmol，17.86mL)。所得内容物于100℃搅拌16小时。反应混合物用冰冷水(250mL)处理并过滤沉淀的固体。真空干燥收集的固体，得到呈棕色固体的2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(11.1g，29.04mmol，收率84.95％)。LCMS(ESI):m/z 371.8[M+H]+
步骤2：2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007152
在氮气氛下于环境温度向含有2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(11g，29.66mmol)在乙醇(120mL)和水(20mL)中的充分搅拌溶液的500mL三颈圆底烧瓶中加入氯化铵(3.17g，59.33mmol，2.07mL)和铁粉(8.28g，148.32mmol，1.05mL)。内容物于90℃加热4小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(150mL)洗涤硅藻土床，减压浓缩滤液，得到残余物。加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(2×150mL)萃取水层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色胶状液体的2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(10g，27.87mmol，收率93.96％)。LCMS(ESI):m/z 341.8[M+H]+
步骤3：3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氯-苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280007153
向2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1.8g，5.28mmol)在甲苯(13mL)中的溶液中加入丙烯酸(457mg，6.34mmol，435.24uL)。反应混合物于100℃搅拌16小时。真空浓缩反应混合物，得到呈黑色固体的3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氯-苯胺基]丙酸(2.1g，4.02mmol，收率76.08％)。
步骤4：2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280007161
向3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氯-苯胺基]丙酸(1g，2.42mmol)在乙酸(10mL)中的溶液中加入脲(582mg，9.69mmol，434.33uL)。反应混合物于100℃搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。将残余物溶解在二氯甲烷(15mL)中并于0℃加入36％w/w的盐酸(10M水溶液，2.4mL)。反应混合物于20℃搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。残余物通过制备HPLC纯化(乙腈/(0.1％甲酸/水))。收集所需级分并冻干，得到呈黄色固体的2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(360mg，914.59μmol，收率37.76％)。LCMS(ESI+):382.2(M+H)+
步骤5：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007162
向2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(80mg，209.53μmol)和丙基膦酸酐(50％乙酸乙酯)(200.00mg，314.29μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中的溶液中加入N-乙基-N-丙烷-2-基丙烷-2-胺(189.56mg，1.47mmol，255.47uL)。混合物于0℃搅拌20分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(121.76mg，178.10μmol)，并将混合物于0℃搅拌1小时。向反应混合物中加入丙基膦酸酐(50％乙酸乙酯)(120.00mg，188.58μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。用乙腈(2mL)稀释反应混合物。通过制备HPLC(柱子：Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm，相：27％-57％的乙腈/水)纯化反应混合物，得到化合物158(15mg，195.58μmol，收率16.5％)。LCMS(ESI+):933.5(M+H)+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.60-12.45(m,1H),10.38(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(br d,J＝2.8Hz,1H),7.41(d,J＝2.4Hz,1H),7.24(dd,J＝2.4,8.8Hz,2H),7.20-7.16(m,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.14(s,1H),4.87-4.75(m,2H),4.39(s,2H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.09(s,2H),4.02(s,6H),3.74(t,J＝6.8Hz,2H),3.04-2.93(m,4H),2.81-2.65(m,4H),2.48-2.42(m,2H),2.25(s,2H),1.85-1.76(m,2H),1.67(br d,J＝12.4Hz,2H)
实施例159.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物159
步骤1：2-[1-(2-氟-4-碘-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007171
将2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.2g，9.86mmol)在乙腈(40mL)中的溶液冷却至0℃。向反应混合物中一次性加入对-甲苯磺酸一水合物(1.88g，9.86mmol，1.51mL)。逐滴加入亚硝酸钠(680.66mg，9.86mmol，313.67uL)在水(10mL)中的溶液，2分钟加完。将反应混合物于0℃搅拌30分钟。向反应混合物中逐滴加入碘化钾(1.64g，9.86mmol)在水(10mL)中的溶液，3分钟加完。将反应混合物于0℃搅拌10分钟，温热至环境温度并搅拌1.5小时。向反应混合物中加入碳酸钾溶液(10％，在水中)。用乙酸乙酯萃取反应混合物。有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(100-200目)，用10％的乙酸乙酯/石油醚洗脱。减压蒸发纯级分，得到2-[1-(2-氟-4-碘-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.1g，4.34mmol，收率44.02％)。LCMS m/z 436.0(M+H+)。
步骤2：2-[1-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007181
向2-[1-(2-氟-4-碘-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(500mg，1.15mmol)和2,6-二苄氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)吡啶(575.23mg，1.38mmol)在1,4-二噁烷(5mL)和水(0.5mL)中的溶液中加入碳酸钠(304.38mg，2.87mmol，120.31uL)并用氮气吹扫溶液10分钟。向反应混合物中加入PdCl2(dppf).二氯甲烷(93.81mg，114.87μmol)并用氮气吹扫5分钟。将反应混合物加热至90℃，保持16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用冰冷水洗涤滤液。用盐水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法通过使用230-400硅胶纯化，用3％的甲醇/二氯甲烷洗脱化合物，得到2-[1-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，687.74μmol，收率44.17％)。LCMS m/z 599.4(M+H+)
步骤3：2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007182
将2-[1-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(525mg，876.90μmol)在1,4-二噁烷(6mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫5分钟。加入10％氢氧化钯/碳(184.71mg，1.32mmol)。将反应混合物置于氢气(1atm)气氛下。反应于环境温度搅拌16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并通过硅藻土过滤。减压浓缩滤液，得到2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，685.66μmol，收率78.19％)。LCMS m/z 421.3(M+H+)。
步骤4：2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280007191
于0℃向2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，737.26μmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入氯化氢(4.0M，在1,4-二噁烷中，5mL，20mmol)。减压浓缩反应混合物。固体加乙醚(2×10ml)研磨并减压干燥，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(250mg，597.15μmol，收率81.00％)。LCMS m/z 365.2(M+H)+。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007192
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺盐酸盐(295mg，465.18μmol)和2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(141.25mg，352.39μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(250.50mg，1.94mmol，337.60uL)，然后加入COMU(215.82mg，503.94μmol)。反应混合物于室温搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物159(35mg，36.15μmol，收率9.33％)。LCMS m/z 943.8(M+H),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.52(s,1H),10.81(s,1H),7.77(s,1H),7.73(dd,J＝12.0Hz,1.20Hz,1H),7.65(d,J＝14.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.26(d,J＝3.60Hz,1H),7.07-6.93(m,6H),6.16(s,1H),4.84(s,1H),4.82(d,J＝17.60Hz,1H),4.23(d,J＝17.60Hz,1H),4.09-3.95(m,4H),3.81(dd,J＝28.40Hz,8.0Hz,1H),3.64(s,2H),3.35-3.22(m,5H),3.06-3.00(m,4H),2.82-2.74(m,1H),2.69-2.67(m,2H),2.26(s,2H),2.21-2.10(m,1H),2.05-1.99(m,1H),1.81-1.69(m,6H),1.68(d,J＝18.80Hz,3H)。
实施例160.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物160
Figure BDA0003698737280007201
将2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(120mg，168.60μmol)和2-[1-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(81.10mg，202.32μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(108.95mg，843.02μmol，146.84uL)，然后加入丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(80.47mg，252.91μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水+0.1％NH4OAc，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物160(32.2mg，33.74μmol，收率20.01％)。LCMS m/z:943.8[M+H]
实施例161.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物161
步骤1：(2s,6r)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2,6-二甲基-哌啶-4-酮
Figure BDA0003698737280007211
向3-氧代戊二酸(10g，68.45mmol)在水(50mL)中的搅拌溶液中加入乙醛溶液(40w/w％，在水中)(15.08g，136.89mmol)。向反应混合物中分数次加入4-甲氧基苯基甲胺(9.39g，68.45mmol，8.94mL)，10分钟加完。反应混合物于环境温度搅拌三天。用二氯甲烷(3×60ml)萃取反应混合物。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到棕色残余物。该残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-30％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈棕色胶状液体的(2s,6r)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2,6-二甲基-哌啶-4-酮(6.7g，21.13mmol，收率30.87％)。LCMS(ESI+)m/z:248.2[M+H]。
步骤2：2-[(2s,6r)-4-羟基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007212
向处于-78℃的乙酸叔丁酯(2.82g，24.26mmol，3.27mL)在四氢呋喃(30mL)中的搅拌溶液中逐滴加入二异丙基酰胺锂(2M，在四氢呋喃中，40.43mmol，20mL)，5分钟加完，并将反应混合物于-78℃搅拌1小时。向上述溶液中逐滴加入(2s,6r)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2,6-二甲基-哌啶-4-酮(5g，20.22mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液并于-78℃搅拌2小时。将反应混合物温热至0℃并用饱和氯化铵溶液淬灭。用乙酸乙酯(150mL×2)萃取该混合物。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-30％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈胶状液体的2-[(2s,6r)-4-羟基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(5.1g，12.38mmol，收率61.24％)。LCMS(ESI+)m/z:364.4[M+H]+。
步骤3：2-[(2s,6r)-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007221
向2-[(2s,6r)-4-羟基-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(5.1g，14.03mmol)在乙醇(60mL)中的溶液中加入10％钯/碳(1.49g，14.03mmol)。悬浮液在氢气球压力下于环境温度搅拌16小时。通过硅藻土床过滤反应混合物并用乙醇洗涤。减压浓缩滤液，得到2-[(2s,6r)-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.4g，13.90mmol，收率99.04％)。LCMS(ESI+)m/z:244.2[M+H]+。
步骤4：2-[(2s,6r)-1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯。
Figure BDA0003698737280007222
在100mL密封管中，将2-[(2s,6r)-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(3.4g，13.97mmol)和1,2-二氟-4-硝基-苯(2.22g，13.97mmol，1.54mL)混合在二甲基亚砜(40mL)中。加入N,N-二异丙基乙胺(3.61g，27.94mmol，4.87mL)并将反应混合物在加热块中于80℃加热16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并用冰冷水洗涤；并减压浓缩有机层。残余物通过使用硅胶的快速色谱法纯化(0-30％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈黄色胶状液体的2-[(2s,6r)-1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.4g，5.72mmol，收率40.92％)。LCMS(ESI+)m/z:383.2[M+H]+。
步骤5：2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007223
在氮气氛下向密封管中2-[(2s,6r)-1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.10g，5.96mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中的搅拌溶液中加入碳酸氢钠(1.50g，17.88mmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(2.29g，11.92mmol)。将反应管密封并于65℃加热16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物并用冰冷水洗涤，用硫酸钠干燥有机层并减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化(0-100％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈灰白色固体的2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸丁酯(1.7g，3.65mmol，收率61.26％)。LCMS(ESI+)m/z:464.2[M+H]+。
步骤6：2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280007231
于0℃向2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(150mg，323.60μmol)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M，在1,4-二噁烷中，6.44mmol，1.61mL)并将反应混合物于环境温度搅拌16小时。减压浓缩反应混合物并与二氯甲烷(2×5mL)共蒸馏。固体加乙醚研磨，得到呈灰白色固体的2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(140mg，305.35μmol，收率94.36％)。LCMS(ESI+)m/z:408.2[M+H]+
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007241
将2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(170mg，248.66μmol)和2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(121.42mg，273.52μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。于0℃向反应混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(192.82mg，1.49mmol，259.87uL)，然后加入丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中，118.68mg，372.98μmol)。将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物161(43.5mg，44.63μmol，收率17.95％)。LCMS m/z:959.2[M+H],1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.52(s,1H),10.79(s,1H),7.45-7.61(m,5H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.85(m,1H),6.55(d,J＝8.8Hz,1H),6.43(d,J＝8.4Hz,1H),6.15(s,1H),4.82-4.78(m,2H),4.58(s,2H),4.47-3.99(m,9H),3.72-3.60(m,1H),3.30-3.18(m,2H),2.78-2.52(m,3H),2.34-2.18(m,3H),1.97-1.85(m,2H),1.82-1.65(m,2H),1.50-1.31(m,1H),1.04(d,J＝6.4Hz,3H),0.82(d,J＝6.1Hz,3H)。
实施例162.
2-[6-[4-[2-[2-[4-氨基-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物162
步骤1：2-[1-苄基-4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007251
于25℃向2-(4-氨基-1-苄基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(CAS#:2138234-11-2；2.5g，8.21mmol)和三乙胺(2.49g，24.64mmol，3.43mL)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(2.69g，12.32mmol，2.83mL)，并将混合物于25℃搅拌1小时。通过于25℃加入水200mL淬灭反应混合物并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并有机层，用盐水(15mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1)，得到呈白色固体的2-[1-苄基-4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2.9g，7.17mmol，收率87.29％)。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3:1):Rf＝0.4,LCMS(ESI+):[M+H]+405.1。1H-NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.40-7.22(m,5H),3.53(s,2H),2.69-2.57(m,4H),2.39-2.28(m,2H),2.25-2.13(m,2H),1.75-1.61(m,2H),1.48-1.41(m,18H)
步骤2：2-[4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007252
在N2下向2-[1-苄基-4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸甲酯叔丁酯(500mg，1.24mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入10％氢氧化钯/木炭(50mg，494.39μmol)。对悬浮液真空脱气并用H2吹扫若干次。将混合物在H2(15PSI)下于20℃搅拌12小时。过滤反应并真空浓缩滤液，得到呈无色油的2-[4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(310mg，985.94μmol，收率79.77％)。LCMS(ESI+):315.1[M+H]+,1H-NMR(400MHz,chloroform-d)δ＝3.47(s,2H),2.96-2.85(m,2H),2.70-2.61(m,2H),2.26-2.09(m,2H),1.75-1.58(m,2H),1.49-1.33(m,18H)
步骤3：2-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1-(2-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007253
于25℃向2-[4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(250mg，795.12μmol)和N,N-二异丙基乙胺(402.29mg，3.98mmol，554.11μL)在乙腈(3mL)中的溶液中加入1,2-二氟-4-硝基苯(132.82mg，834.87μmol，92.24μL)，并将混合物于90℃搅拌2小时。减压浓缩反应。残余物通过制备TLC纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得到呈淡黄色固体的2-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1-(2-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(305mg，672.54μmol，收率84.58％)。LCMS(ES+)m/z＝454.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ＝8.03-7.95(m,1H),7.94-7.85(m,1H),7.01(t,J＝8.8Hz,1H),4.59(s,1H),3.52-3.38(m,2H),3.28-3.15(m,2H),2.72(s,2H),2.46-2.34(m,2H),1.92-1.80(m,2H),1.48-1.43(m,18H)。
步骤4：2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007261
在N2下向2-[4-(叔-丁氧基羰基氨基)-1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-哌啶基]乙酸甲酯叔丁酯(300mg，661.52μmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入10％钯/木炭(80mg)。对悬浮液真空脱气并用氢气吹扫若干次。将混合物在氢气(15psi)下于20℃搅拌12小时。过滤反应并真空浓缩滤液，得到呈黄色固体的2-[1-(4-氨基-2-氟-苯基)-4-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(220mg，467.51μmol，收率70.67％)。LCMS(ESI+)m/z 424.1[M+H]+。1H-NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝7.17-6.72(m,1H),6.50-6.31(m,2H),4.56(br s,1H),3.26-2.85(m,4H),2.71(s,2H),2.42-2.26(m,2H),2.05-1.78(m,2H),1.45(s,18H)
步骤5：2-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007262
于25℃向2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-((叔-丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(200mg，472.23μmol)和碳酸氢钠(198.35mg，2.36mmol，91.83μL)在CH3CN(2mL)中的溶液中加入3-溴哌啶-2,6-二酮(90.67mg，472.23μmol)，并将混合物于90℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物。残余物通过制备TLC纯化(石油醚:乙酸乙酯＝5:1，产物Rf＝0.4)，得到呈蓝色固体的2-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(180mg，306.39μmol，收率64.88％)。LCMS(ESI+):m/z 535.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(br s,1H),10.77(s,1H),6.82(t,J＝9.2Hz,1H),6.55-6.46(m,2H),6.44-6.38(m,1H),5.78(d,J＝7.6Hz,1H),4.93-4.87(m,1H),4.31-4.20(m,1H),2.90-2.43(m,10H),2.19-2.05(m,3H),1.91-1.77(m,1H),1.72-1.60(m,2H),1.45-1.36(m,18H)。
步骤6：2-[4-氨基-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280007271
将2-[4-(叔-丁氧基羰基氨基)-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(600mg，1.12mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中并加入在1,4-二噁烷(4mL)中的4M盐酸。反应混合物于40℃搅拌4小时。减压浓缩反应混合物。残余物加乙醚研磨并过滤，得到呈蓝色固体的2-[4-氨基-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(460mg，1.11mmol，收率98.80％)。LCMS(ES+):m/z 379.1[M+H]+
步骤7：2-[6-[4-[2-[2-[4-氨基-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007272
向2-[4-氨基-1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(200mg，482.09μmol)和丙基膦酸酐溶液(50重量％，在乙酸乙酯中)(230.09mg，723.14μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(436.15mg，3.37mmol，587.80μL)。向反应混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(263.68mg，385.67μmol)。混合物于0℃搅拌1小时。通过于0℃加入水(20mL)淬灭反应混合物。过滤混合物，并用水(2×5mL)洗涤滤饼。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18150mm*25mm,10μm粒度，流动相：13％-43％的乙腈/水(0.225％甲酸)，运行时间：11min)，得到呈白色固体的化合物162(42.3mg，41.17μmol，收率8.54％)。LCMS(ES+):m/z 930.7[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.91-10.63(m,1H),8.32(s,1H),7.77-7.69(m,2H),7.67-7.59(m,3H),7.49(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(d,J＝3.6Hz,1H),6.88(t,J＝9.2Hz,1H),6.58-6.47(m,3H),6.45-6.39(m,1H),6.15(s,1H),5.79(d,J＝8.0Hz,1H),4.78(s,1H),4.38(s,2H),4.22(d,J＝18Hz,2H),4.10-3.97(m,8H),2.99-2.93(m,2H),2.84-2.69(m,6H),2.62-2.57(m,4H),2.24(s,2H),2.12-2.06(m,1H),1.93-1.69(m,4H),1.67-1.56(m,2H)。
实施例163.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物163
Figure BDA0003698737280007281
于0℃向2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(200mg，281.01μmol)和2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(129.85mg，323.16μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的搅拌溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(181.59mg，1.41mmol，244.73uL)。在相同的温度下加入1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(138.40mg，323.16μmol)并将反应混合物于环境温度搅拌1小时。将反应混合物直接进样到C-18柱子(100g)上进行纯化(0-45％的乙腈/水(+0.1％乙酸铵)，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。合并纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物163(51.1mg，53.59μmol，收率19.07％)。LCMS(ESI+):944.9[M+H]；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):12.50(s,1H),10.38(s,1H),7.77(s,1H),7.74(d,J＝12.00Hz,1H),7.66(d,J＝8.80Hz,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝3.60Hz,1H),7.26(d,J＝2.40Hz,1H),7.16(d,J＝13.60Hz,1H),7.06(d,J＝5.20Hz,4H),6.14(s,1H),4.86(s,1H),4.81(d,J＝17.60Hz,1H),4.22(d,J＝18.00Hz,1H),4.01-3.94(m,4H),3.74(t,J＝6.40Hz,2H),3.64(s,2H),3.29-3.23(m,5H),3.09-2.97(m,4H),2.77-2.75(m,4H),2.26(s,2H),1.90-1.66(m,9H)(水遮蔽)。
实施例164.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体A1，化合物164
步骤1：2-(1-苄基-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007291
于-60℃向乙酸叔丁酯(10.80g，92.98mmol，12.51mL)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入LDA(2M，在四氢呋喃中，53.1mL，106.26mmol)。反应混合物于-60℃搅拌10分钟。向反应混合物中加入在四氢呋喃(100mL)中的1-苄基氮杂环庚烷-4-酮(18g，88.55mmol)并将所得溶液于-60℃搅拌20分钟。其后，将反应混合物于25℃再搅拌1小时。反应混合物用NH4Cl(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(500mL)和水(500mL)稀释。分离各层，并用乙酸乙酯(2×500mL)萃取水层。合并萃取物，用盐水(500mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，得到呈黄色油的2-(1-苄基-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(8.7g，23.69mmol，收率27％)。LCMS(ESI+):m/z 320.3[M+H]+
步骤2：2-(4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007292
向2-(1-苄基-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(8.7g，23.69mmol)在EtOH(150mL)中的溶液中加入甲酸(2.3g，47.88mmol)和20％氢氧化钯/木炭(1.7g，23.69mmol)。所得混合物于50℃搅拌12小时。在冷却至环境温度后，通过硅藻土的垫柱过滤反应混合物。减压浓缩滤液，得到呈黄色油的2-(4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(6.6g，21.59mmol，收率91％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝3.09-2.93(m,2H),2.83-2.72(m,2H),2.41(s,2H),1.93-1.79(m,3H),1.77-1.64(m,3H),1.60-1.54(m,1H),1.44-1.38(m,9H)。
步骤3：2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007301
向2-(4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(6.6g，28.78mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中的溶液中加入1,2-二氟-4-硝基苯(4.58g，28.76mmol，3.18mL)和N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(9.30g，71.95mmol，12.53mL)。混合物于90℃搅拌5小时。在冷却至环境温度后，真空浓缩混合物。用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释残余物。分离各层，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到呈黄色固体的2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(9g，23.21mmol，收率81％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝7.98-7.80(m,2H),6.70(t,J＝9.2Hz,1H),3.95(s,1H),3.64-3.50(m,3H),3.47-3.37(m,1H),2.42(d,J＝5.6Hz,2H),2.38-2.23(m,1H),1.99-1.85(m,4H),1.63-1.55(m,1H),1.47(s,9H)。
步骤4：2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A)和2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B)
Figure BDA0003698737280007302
通过手性SFC(20％0.1％NH3·H2O-甲醇条件；柱子：DAICEL CHIRALCEL OJ(250mm×30mm×10μm)分离2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A)和2-(1-(2-氟-4-硝基苄基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B)的外消旋混合物，得到两组级分。
蒸发第一组洗脱级分，得到呈黄色固体的2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A)(4.15g，10.70mmol，收率44％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝7.97-7.80(m,2H),6.70(t,J＝9.2Hz,1H),3.95(s,1H),3.70-3.52(m,3H),3.46-3.35(m,1H),2.48-2.36(m,2H),2.35-2.22(m,1H),1.99-1.77(m,4H),1.62-1.50(m,2H),1.47(s,9H)。
蒸发第二组洗脱级分，得到呈黄色固体的2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B)(4.27g，11.01mmol，收率45％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝7.96-7.79(m,2H),6.70(t,J＝9.2Hz,1H),3.96(s,1H),3.68-3.51(m,3H),3.41(d,J＝4.4Hz,1H),2.47-2.37(m,2H),2.30(s,1H),1.99-1.79(m,4H),1.61-1.50(m,2H),1.47(s,9H)。
步骤5：2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯，异构体A
Figure BDA0003698737280007311
向2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A)(4.15g，11.26mmol)在甲醇(8mL)和四氢呋喃(32mL)中的溶液中加入10％钯/碳(450mg，11.26mmol)和甲酸铵(3.55g，56.33mmol，2.77mL)。混合物于25℃搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤混合物并用甲醇(20mL)洗涤。减压浓缩滤液。用乙酸乙酯(250mL)和水(250mL)稀释残余物。分离各层。向水层加入饱和碳酸氢钠水溶液直至达到pH 7。用乙酸乙酯(2×250mL)萃取该混合物。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈深紫色固体的2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A)(3.6g，10.11mmol，收率90％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝6.77(dd,J＝8.8,9.6Hz,1H),6.49-6.30(m,2H),3.97(s,1H),3.58-3.36(m,2H),3.34-3.15(m,2H),3.13-2.99(m,2H),2.55-2.42(m,2H),2.16-2.05(m,1H),2.00-1.89(m,2H),1.88-1.76(m,2H),1.75-1.66(m,1H),1.47(s,9H)。
步骤6：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯，异构体A
Figure BDA0003698737280007312
向2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A)(3.6g，10.64mmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(4.09g，21.28mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(2.68g，31.91mmol)。混合物于80℃搅拌12小时。混合物通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释滤液。分离各层，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取水相。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过反相柱纯化(0.1％甲酸/(水/乙腈))，得到呈黑色固体的外消旋2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(11,3g，6.07mmol，收率57％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.15(s,1H),6.82(t,J＝9.2Hz,1H),6.48-6.34(m,2H),4.52(s,1H),4.03-3.89(m,2H),3.37-3.17(m,2H),3.15-3.00(m,2H),2.91-2.80(m,1H),2.79-2.66(m,1H),2.56-2.50(m,1H),2.48(d,J＝5.2Hz,2H),2.17-2.05(m,1H),1.98-1.90(m,2H),1.89-1.79(m,2H),1.76-1.59(m,3H),1.47(s,9H)。
步骤7：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯(异构体A1)和2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯(异构体A2)
Figure BDA0003698737280007321
通过手性SFC(Neu-EtOH条件，柱子：DAICEL CHIRALCEL OJ-H(250mm×30mm×5μm)；B％：40％-40％：4.3min，340min)分离外消旋2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯，得到两组级分。
蒸发第一组级分，得到呈黄色固体的2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体A1)(1.2g，2.54mmol，收率38％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.77(s,1H),6.76(t,J＝9.2Hz,1H),6.49(dd,J＝2.4,15.2Hz,1H),6.38(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),5.66(d,J＝7.6Hz,1H),4.42(s,1H),4.28-4.15(m,1H),3.25-3.07(m,2H),3.03-2.82(m,2H),2.79-2.67(m,1H),2.63-2.53(m,1H),2.36(s,2H),2.08(dt,J＝4.8,8.8Hz,1H),2.03-1.90(m,2H),1.88-1.77(m,2H),1.77-1.66(m,2H),1.63-1.51(m,1H),1.39(s,9H)。
蒸发第二组级分，得到呈黄色固体的2-((S)-1-(4-(((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(1.7g，3.40mmol，收率51％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.76(s,1H),6.76(t,J＝9.2Hz,1H),6.48(dd,J＝2.4,15.2Hz,1H),6.38(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),5.65(d,J＝7.6Hz,1H),4.42(s,1H),4.22(ddd,J＝4.8,7.2,11.6Hz,1H),4.03(q,J＝7.2Hz,1H),3.23-3.05(m,2H),3.01-2.83(m,2H),2.72(dt,J＝6.4,12.0Hz,1H),2.56(td,J＝4.0,17.6Hz,1H),2.35(s,2H),2.08(dt,J＝4.4,8.8Hz,1H),1.99(s,2H),1.97-1.89(m,1H),1.87-1.77(m,2H),1.74-1.64(m,2H),1.61(dd,J＝5.2,8.8Hz,1H),1.39(s,9H)。
步骤8：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸，异构体A1
Figure BDA0003698737280007331
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯(异构体A1)(300mg，667.39μmol)在二氯甲烷(4.5mL)中的溶液中加入氯化氢(12M，0.3mL，3.6mmol)。混合物于25℃搅拌0.5小时。于35℃减压浓缩该混合物，得到呈蓝色固体的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(异构体A1)(230mg，502.94μmol，收率75％，HCl盐)。LCMS(ESI):m/z 394.1[M+H]+
步骤9：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体A1
Figure BDA0003698737280007341
于0℃向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(异构体A1)(206mg，479.22μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(437.78mg，3.39mmol，590μL)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(103mg，537.30μmol)和HOBt(72mg，532.86μmol)。将混合物于0℃搅拌0.5小时。向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(262mg，383.22μmol)。所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤混合物。通过制备HPLC(流速：60mL/min；梯度：10％-40％的乙腈/水(0.225％甲酸)，用时10min；柱子：Phenomenex Luna C18 150×40mm×15μm)纯化滤液并冻干，得到呈紫色固体的化合物164(130.66mg，129.20μmol，收率27％)。LCMS(ESI):m/z 945.3[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(s,1H),10.76(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),6.78(t,J＝9.6Hz,1H),6.53(d,J＝8.4Hz,2H),6.47(s,1H),6.39(d,J＝8.4Hz,1H),6.14(s,1H),5.66(d,J＝7.6Hz,1H),4.83(s,1H),4.79(d,J＝17.6Hz,1H),4.40-4.30(m,2H),4.27-4.16(m,2H),4.07(s,2H),4.03-3.92(m,6H),3.26-3.09(m,3H),3.02-2.85(m,2H),2.81-2.65(m,2H),2.61-2.56(m,1H),2.54(s,1H),2.47-2.42(m,1H),2.29-2.17(m,2H),2.08(td,J＝4.4,8.4Hz,1H),1.98-1.86(m,2H),1.86-1.78(m,1H),1.77-1.55(m,4H)。
实施例165.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体A2，化合物165
步骤1：2-[(1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐，异构体A2
Figure BDA0003698737280007351
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯(异构体A2)(300mg，667.39μmol)在二氯甲烷(4.5mL)中的溶液中加入HCl(12M，0.3mL)。混合物于25℃搅拌0.5小时。于35℃减压浓缩该混合物，得到呈蓝色固体的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(异构体A2)(360mg，829.09μmol)。LCMS(ESI):m/z 394.2[M+H]+
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280007352
向2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯盐酸盐(异构体A2)(280mg，651.36μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(593.60mg，4.59mmol，800μL)和HATU(248mg，652.24μmol)。混合物于0℃搅拌30分钟。加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸(310mg，453.43μmol)。所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤混合物。通过制备HPLC(流速：25mL/min；梯度：11％-44％的乙腈/水(0.225％甲酸)，用时11min；柱子：Phenomenex luna C18 150×25mm×10μm)纯化滤液。冷冻所需级分并冻干。将残余物溶解在二氯甲烷(4mL)中，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2×3mL)洗涤该混合物。用无水硫酸钠干燥有机层，过滤并真空浓缩。用乙腈(5mL)和水(20mL)溶解残余物。将溶液冻干，得到呈棕色固体的化合物165(60.45mg，63.33μmol，收率10％)。LCMS(ESI):m/z 945.5[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.51(s,1H),10.77(s,1H),7.73(s,1H),7.69(d,J＝11.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.58(s,1H),7.42(s,1H),7.25-7.06(m,1H),6.78(t,J＝9.2Hz,1H),6.60-6.44(m,3H),6.39(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.09(s,1H),5.66(d,J＝7.6Hz,1H),4.91-4.76(m,2H),4.42-4.29(m,2H),4.27-4.14(m,2H),4.11-3.89(m,8H),3.24-3.08(m,2H),3.03-2.84(m,2H),2.79-2.66(m,2H),2.61-2.53(m,2H),2.45(d,J＝4.4Hz,2H),2.29-2.18(m,2H),2.12-2.05(m,1H),1.97-1.68(m,6H),1.63(td,J＝5.2,13.6Hz,1H)。
实施例166.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体B1，化合物166
步骤1：2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯，异构体B
Figure BDA0003698737280007361
向2-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(4.27g，11.59mmol)在甲醇(8mL)和四氢呋喃(32mL)中的溶液中加入10％钯/碳(450mg，11.26mmol)和甲酸铵(3.65g，57.96mmol，2.86mL)。混合物于25℃搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤混合物并用甲醇(20mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液。残余物用乙酸乙酯(250mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液将混合物调节至pH 7。用乙酸乙酯(2×250mL)萃取该混合物。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈紫黑色固体的2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(3.85g，10.81mmol，收率93％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝6.77(dd,J＝8.4,9.6Hz,1H),6.46–6.32(m,2H),4.02–3.92(m,1H),3.57–3.41(m,1H),3.19(s,2H),3.13–2.98(m,2H),2.53–2.42(m,2H),2.13–2.05(m,1H),1.97–1.91(m,2H),1.87–1.76(m,2H),1.76–1.68(m,1H),1.47(s,9H)。
步骤2：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯，异构体B
Figure BDA0003698737280007371
向3-溴哌啶-2,6-二酮(4.37g，22.75mmol)和(R)-2-(1-(4-氨基-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(3.85g，11.38mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(2.87g，34.13mmol，1.33mL)。混合物于80℃搅拌12小时。混合物通过硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释滤液。分离各层，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取水相。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相柱纯化(0.1％甲酸条件)，得到呈黑色固体的2-((1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B)(4g，8.54mmol，收率75％)。LCMS(ESI):m/z 450.3[M+H]+
步骤3：2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B1)和2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B2)
Figure BDA0003698737280007372
通过手性SFC(异丙醇条件，柱子：REGIS(S,S)-WHELK-O1(250mm×50mm,10μm)；B％：60％；8.1min运行时间)分离外消旋2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯，得到两组级分。
蒸发第一组洗脱级分，得到2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B1)(1.43g，3.12mmol，收率37％，LCMS(ESI):m/z 450.3[M+H]+
蒸发第二组洗脱级分，得到2-((R)-1-(4-(((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基氮杂环庚烷-4-基)乙酸叔丁酯(异构体B2)(1.24g，2.73mmol，收率32％，LCMS(ESI):m/z 450.3[M+H]+
步骤4：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐，异构体B1
Figure BDA0003698737280007381
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯(异构体B1)(300mg，667.39μmol)在二氯甲烷(4.5mL)中的溶液中加入HCl(12M，0.3mL)。混合物于25℃搅拌0.5小时。于35℃减压浓缩该混合物，得到呈蓝色固体的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(异构体B1)(360mg，829.09μmol)。LCMS(ESI):m/z 394.2[M+H]+
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体B1
Figure BDA0003698737280007391
于0℃向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(异构体B1)(200mg，465.26μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(422.94mg，3.27mmol，570μL)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(100mg，521.64μmol)和HOBt(70mg，518.05μmol)。将混合物于0℃搅拌0.5小时。向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(255mg，372.98μmol)。所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤反应混合物。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex Luna C18 150×40mm×15μm；流动相：水(0.225％甲酸)-乙腈；B％：9％-39％，10min)纯化滤液。使所需级分保持低于0℃并立即冻干，得到呈紫色固体的化合物166(85.45mg，84.50μmol，收率18％)。LCMS(ESI):m/z 945.3[M+H]+,1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.96-12.00(m,1H),10.77(s,1H),8.23(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.66-7.58(m,3H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.2Hz,1H),6.78(t,J＝9.6Hz,1H),6.58-6.45(m,3H),6.39(d,J＝8.4Hz,1H),6.14(s,1H),5.66(d,J＝7.6Hz,1H),4.79(d,J＝17.6Hz,2H),4.39-4.30(m,2H),4.27-4.16(m,2H),4.07(s,2H),4.04-3.91(m,6H),3.23-3.09(m,3H),3.03-2.94(m,1H),2.90(d d,J＝6.0,12.0Hz,1H),2.81-2.66(m,2H),2.61-2.52(m,2H),2.47-2.42(m,1H),2.23(s,2H),2.08(td,J＝4.4,8.8Hz,1H),1.97-1.86(m,2H),1.86-1.78(m,1H),1.78-1.55(m,4H)。
实施例167.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体B2，化合物167
步骤1：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐，异构体B2
Figure BDA0003698737280007401
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸叔丁酯(300mg，667.39μmol)在二氯甲烷(4.5mL)中的溶液中加入盐酸(12M，0.3mL)。混合物于25℃搅拌0.5小时。于35℃减压浓缩该混合物，得到呈蓝色固体的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(350mg，806.06μmol)。LCMS(ESI):m/z 394.2[M+H]+
步骤2：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体B2
Figure BDA0003698737280007402
于0℃向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-4-羟基-氮杂环庚烷-4-基]乙酸盐酸盐(200mg，465.26μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(422.94mg，3.27mmol，0.57mL)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(100mg，521.65μmol)和HOBt(70mg，518.06μmol)。将混合物于0℃搅拌0.5小时。向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(255mg，372.98μmol)。所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤反应混合物。通过制备HPLC(柱子：Phenomenex luna C18 150×40mm×15μm；流动相：水(0.225％甲酸)-乙腈；B％：10％-40％，10min)纯化滤液。使所需级分保持低于0℃并立即冻干，得到呈紫色固体的化合物167(78.81mg，77.93μmol，收率16％)。LCMS(ESI):m/z 945.3[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.74-12.24(m,1H),10.77(s,1H),8.27(s,1H),7.74(s,1H),7.72-7.67(m,1H),7.66-7.59(m,3H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),6.78(t,J＝9.2Hz,1H),6.56-6.45(m,3H),6.39(d,J＝8.8Hz,1H),6.14(s,1H),5.66(d,J＝7.6Hz,1H),4.89-4.72(m,2H),4.41-4.30(m,2H),4.28-4.14(m,2H),4.07(s,2H),4.04-3.91(m,6H),3.23-3.09(m,3H),3.02-2.94(m,1H),2.89(d d,J＝6.0,13.2Hz,1H),2.81-2.65(m,2H),2.62-2.52(m,2H),2.47-2.42(m,1H),2.23(s,2H),2.08(td,J＝4.4,8.4Hz,1H),1.96-1.86(m,2H),1.86-1.78(m,1H),1.77-1.55(m,4H)。
实施例168.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物168
步骤1：2-[4-羟基-1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007411
向2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(10g，46.45mmol)和1-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(10g，47.82mmol，6.58mL)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(10.21g，78.96mmol，13.75mL)。混合物于80℃搅拌1小时。用水(100mL)稀释反应混合物并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用盐水(1×100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(10:1的石油醚:乙酸乙酯)，得到呈黄色固体的2-[4-羟基-1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(16.5g，38.76mmol，收率83.45％)。LC-MS m/z 405.2[M+H]+1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.50(d,J＝2.8Hz,1H),8.31(dd,J＝2.8,8.8Hz,1H),7.32(d,J＝9.2Hz,1H),3.89(s,1H),3.37-3.25(m,2H),3.14(br d,J＝12.0Hz,2H),2.46(s,2H),1.85-1.72(m,4H),1.50(s,9H)。
步骤2：2-[1-[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007421
向2-[4-羟基-1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(15.5g，38.33mmol)在乙醇(160mL)中的混合物中加入10％钯/碳(1.6g)。将混合物在氢气氛(15psi)下于25℃搅拌12小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到呈灰白色固体的2-[1-[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(13.8g，33.17mmol，收率86.55％)。LCMS(ESI+)m/z 375.2(M+H)+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.20(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝2.4Hz,1H),6.75(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),5.29(s,2H),4.45(s,1H),2.92(t,J＝10.4Hz,2H),2.54(d,J＝11.2Hz,2H),2.34(s,2H),1.81-1.70(m,2H),1.58(br d,J＝12.4Hz,2H),1.41(s,9H)。
步骤3：3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-(三氟甲基)苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280007422
向2-[1-[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(13.8g，36.86mmol)在叔戊醇(140mL)中的混合物中加入丙烯酸(6.64g，92.15mmol，6.32mL)。混合物于120℃搅拌16小时。减压浓缩反应混合物。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(75:25的石油醚:乙酸乙酯)。得到呈灰白色固体的3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-(三氟甲基)苯胺基]丙酸(12.6g，27.94mmol，收率75.80％)。LC-MS(ESI+)m/z＝447.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.64-11.87(m,1H),7.40-7.18(m,1H),6.77(d,J＝2.4Hz,2H),5.91(s,1H),4.47(s,1H),3.23(t,J＝6.4Hz,2H),2.93(t,J＝10.2Hz,2H),2.59-2.52(m,2H),2.49-2.44(m,2H),2.34(s,2H),1.81-1.71(m,2H),1.59(d,J＝12.8Hz,2H),1.41(s,9H)。
步骤4：2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280007431
向3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-(三氟甲基)苯胺基]丙酸(1g，2.24mmol)在乙酸(10mL)中的溶液中加入脲(444mg，7.39mmol，331.34uL)。将混合物于120℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物。残余物通过反相色谱法纯化(0.1％的HCl/(水/乙腈))。收集所需级分并减压浓缩，得到呈白色固体的2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(510.79mg，1.12mmol，收率49.97％)。LCMS m/z 416.1(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.43(s,1H),7.66-7.52(m,3H),3.80(t,J＝6.8Hz,2H),3.03(t,J＝10.0Hz,2H),2.79-2.64(m,4H),2.41(s,2H),1.83-1.74(m,2H),1.73-1.65(m,2H)。
步骤5：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007432
于0℃向2-[1-[4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(300mg，663.98μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(601mg，4.65mmol，809.97uL)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(140mg，730.30μmol)和HOBt(100mg，740.07μmol)。混合物于0℃搅拌20分钟。向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(364mg，532.42μmol)并将混合物于25℃搅拌12小时。过滤反应混合物。通过制备HPLC纯化滤液(柱子：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；10％至50％的乙腈/水(+0.225％甲酸)，10min)。收集所需级分并冻干。通过制备HPLC纯化固体(柱子：Phenomenex Gemini-NXC1875*30mm*3μm；流动相：28％-58％的乙腈/水，8min)。收集所需级分并冻干，得到呈白色固体的化合物168(97.56mg，99.88μmol，收率15.04％)。LCMS(ESI+):967.6[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.78-12.19(m,1H),10.43(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.65(s,1H),7.62(d,J＝1.6Hz,2H),7.60(s,1H),7.57(s,2H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),6.54(d,J＝8.4Hz,2H),6.14(s,1H),4.88(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.39(s,2H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.08(s,2H),4.05-3.91(m,6H),3.81(t,J＝6.8Hz,2H),3.03(t,J＝9.8Hz,2H),2.81-2.67(m,5H),2.54(s,2H),2.48-2.43(m,1H),2.26(s,2H),1.79-1.70(m,2H),1.70-1.60(m,2H)。
实施例169.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2,6-二氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物169
步骤1：2-[1-(2-氯-6-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007441
向1,3-二氯-2-氟-5-硝基-苯(7.80g，37.16mmol)和1,3-二氯-2-氟-5-硝基-苯(7.80g，37.16mol)在DMSO(200mL)中的溶液中加入碳酸钾(15.41g，111.48mmol，6.73mL)。混合物于110℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至20℃并过滤。滤液用水(200mL)淬灭。抽滤沉淀的固体。将固体真空干燥，得到呈黄色固体的2-[1-(2-氯-6-氟-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(14g，36.01mmol，收率96.90％)。
步骤2：2-(1-(4-氨基-2,6-二氯苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007451
向C17H22Cl2N2O5(14g，34.54mmol)在水(40mL)中的溶液中加入氯化铵(9.24g，172.72mmol，6.04mL)和铁粉(11.58g，207.27mmol，1.47mL)。混合物于90℃搅拌2小时。过滤反应混合物，并减压浓缩母液以除去溶剂。用溶剂(100mL)稀释残余物并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0至30％的乙酸乙酯/石油醚)，得到呈橙色油的2-(1-(4-氨基-2,6-二氯苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸叔丁酯(8g，21.32mmol，收率61.71％)。LCMS(ESI+)m/z:375.0/377.0(M+H,Cl模式)
步骤3：3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3,5-二氯-苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280007452
向2-[1-(4-氨基-2,6-二氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(2g，5.33mmol)在叔戊醇(20mL)中的溶液中加入丙烯酸(576.06mg，7.99mmol，548.63uL)。混合物于100℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂。残余物通过柱色谱法纯化(硅胶，二氯甲烷/甲醇＝50/1至10/1梯度)，得到呈黑色油的3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3,5-二氯-苯胺基]丙酸(1.7g，3.80mmol，收率71.31％)。LCMS(ESI+):447.3(M+H),1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ＝6.48(d,J＝2.0Hz,1H),6.40(d,J＝2.0Hz,1H),3.49-3.40(m,2H),3.35-3.25(m,2H),2.77-2.68(m,2H),2.56(t,J＝5.6Hz,2H),2.39(s,2H),1.71-1.62(m,4H),1.41(s,9H)
步骤4：2-[1-[2,6-二氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸
Figure BDA0003698737280007461
向3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3,5-二氯-苯胺基]丙酸(1.8g，4.02mmol)在乙酸(22mL)中的溶液中加入脲(797.42mg，13.28mmol，595.09uL)。将混合物于120℃搅拌12小时。减压浓缩反应混合物以除去溶剂，固体加乙醇(80mL)研磨15分钟，得到呈黄色固体的2-[1-[2,6-二氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(850mg，1.96mmol，收率48.72％)。LCMS(ESI+):417.9(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.45(s,1H),7.39(s,1H),3.77(t,J＝6.8Hz,2H),3.51-3.41(m,3H),2.84-2.76(m,2H),2.69(t,J＝6.8Hz,2H),2.21(s,2H),1.72-1.55(m,4H)。
步骤5：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2,6-二氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007462
向2-[1-[2,6-二氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(124.04mg，298.00μmol)和丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(284.45mg，447.00μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(308.11mg，2.38mmol，415.24uL)。将混合物于0℃搅拌20分钟，加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(176.61mg，298μmol)，并将混合物于0℃搅拌60分钟。加入丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(189.64mg，298.00μmol)，混合物于0℃搅拌60分钟。将混合物倒入水(50mL)中并加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)。通过抽滤收集固体。收集固体并溶解在二氯甲烷中，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化(柱子：Phenomenexluna C18150*40mm*15μm；流动相：水(0.1％三氟乙酸)-乙腈；梯度时间(min)10)。加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)并用水(2×10mL)洗涤沉淀的固体。高真空干燥固体，得到呈灰白色固体的化合物169(60.54mg，61.92μmol，收率20.78％)。LCMS(ESI+):967.3(M+H),485.3(M/2+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(br,1H),10.48(s,1H),7.76-7.68(m,2H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.51-7.45(m,2H),7.40(s,1H),7.26(s,1H),6.55(d,J＝8.8Hz,2H),6.15(s,1H),4.88-4.76(m,2H),4.40(s,2H),4.22(d,J＝17.6Hz,1H),4.09(s,2H),4.06-3.93(m,6H),3.78(t,J＝6.8Hz,2H),3.49(t,J＝9.6Hz,2H),2.86-2.75(m,3H),2.69(t,J＝6.8Hz,2H),2.61-2.53(m,2H),2.49-2.43(m,1H),2.25(s,2H),1.83-1.72(m,2H),1.63(d,J＝12.4Hz,2H)。
实施例170.
2-[6-[4-[7-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物170
Figure BDA0003698737280007471
于0℃向2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(220mg，525.97μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(482.30mg，3.73mmol，650uL)、丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(338mg，531.14μmol)。混合物于0℃搅拌20分钟。然后向混合物中加入2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(300mg，421.51μmol)并将混合物于25℃搅拌12小时。过滤反应混合物。通过反相柱(水/乙腈)纯化滤液。将所需级分冻干。通过制备HPLC纯化化合物(柱子：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm；30％至60％的乙腈/水；8min)。收集所需级分，冷冻并冻干，得到呈灰白色固体的化合物170(78.92mg，80.44μmol，收率15.29％)。LCMS m/z 961.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69-12.35(m,1H),10.37(s,1H),7.73(s,1H),7.69(d,J＝10.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(s,1H),7.47(d,J＝3.6Hz,1H),7.41(d,J＝2.4Hz,1H),7.27-7.21(m,2H),7.20-7.15(m,1H),6.52(d,J＝8.4Hz,2H),6.13(s,1H),5.03(s,1H),4.80(d,J＝17.6Hz,1H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.06-3.90(m,2H),3.74(t,J＝6.8Hz,2H),3.66(s,4H),3.53(s,4H),3.40-3.37(m,1H),3.07-2.93(m,4H),2.80-2.72(m,1H),2.69(t,J＝6.8Hz,2H),2.57(s,3H),2.46(d,J＝6.0Hz,1H),1.78(d,J＝16.8Hz,4H),1.75-1.64(m,4H)。
实施例171.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氰基-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物171
步骤1：2-[1-(2-氰基-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007481
向2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(10g，46.45mmol)和2-氟-5-硝基-苯甲腈(7.72g，46.45mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(10.21g，78.96mmol，13.75mL)。混合物于80℃搅拌12小时。用水(100mL)稀释反应混合物并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用盐水(1×100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到呈黄色固体的2-[1-(2-氰基-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(15.5g，40.75mmol，收率87.72％)。LCMS m/z＝306.1(M+H),1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.43(d,J＝2.8Hz,1H),8.25(dd,J＝2.8,9.2Hz,1H),7.00(d,J＝9.2Hz,1H),4.01(s,1H),3.79-3.67(m,2H),3.50(dt,J＝2.8,12.4Hz,2H),2.46(s,2H),1.94-1.85(m,2H),1.84-1.74(m,2H),1.49(s,9H)。
步骤2：2-[1-(4-氨基-2-氰基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007491
向2-[1-(2-氰基-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(14.5g，40.12mmol)在乙醇(145mL)和水(29mL)中的溶液中加入Fe(6.73g，120.48mmol，855.98uL)和氯化铵(6.44g，120.36mmol，4.21mL)。混合物于90℃搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤混合物，用乙醇(30mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液。合并残余物，用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀释。分离各层，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。合并有机层，用盐水(2×50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。产物通过快速硅胶色谱法纯化(120g Flash Column，洗脱剂混合物：0至60％的乙酸乙酯/石油醚；100mL/min)，得到呈黄色固体的2-[1-(4-氨基-2-氰基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(10.28g，30.71mmol，收率76.54％)。LCMS(ESI):m/z332.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝6.98-6.91(m,1H),6.84-6.76(m,2H),5.14(s,2H),4.49(s,1H),3.02-2.84(m,4H),2.35(s,2H),1.86-1.75(m,2H),1.72-1.61(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤3：3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氰基-苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280007492
向2-[1-(4-氨基-2-氰基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(9.28g，28.00mmol)在叔戊醇(100mL)中的溶液中加入丙烯酸(6.05g，84.01mmol，5.77mL)。混合物于120℃搅拌16小时。向混合物中加入丙烯酸(2.02g，28.00mmol，1.92mL)。混合物于120℃再搅拌24小时。减压浓缩混合物。产物通过硅胶色谱法纯化(120g柱子；洗脱剂：0～60％的PE/乙酸乙酯梯度；100mL/min)，得到呈棕色固体的3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氰基-苯胺基]丙酸(8.8g，21.16mmol，收率75.55％)。LCMS(ESI):m/z404.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.22(s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,1H),6.87-6.76(m,2H),5.73(s,1H),4.50(s,1H),3.22(t,J＝6.4Hz,2H),3.02-2.85(m,4H),2.46(t,J＝6.8Hz,2H),2.36(s,2H),1.86-1.76(m,2H),1.67(d,J＝12.8Hz,2H),1.42(s,9H)。
步骤4：2-[1-[2-氰基-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280007493
将3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氰基-苯胺基]丙酸(7.8g，19.33mmol)和脲(3.83g，63.80mmol，2.86mL)在AcOH(70mL)中的混合物于120℃搅拌16小时。减压浓缩混合物。残余物通过反相柱纯化(HCl条件)，然后于25℃加乙醇(50mL)研磨16小时。过滤混合物并用乙醇(15mL)洗涤滤饼。真空干燥滤饼，得到呈棕色固体的2-[1-[2-氰基-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(4.88g，11.82mmol，收率61.13％)。LCMS(ESI+):m/z 373.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.07(s,1H),10.51-10.35(m,1H),7.66(d,J＝2.4Hz,1H),7.53(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),7.18(d,J＝8.8Hz,1H),3.75(t,J＝6.8Hz,2H),3.24(d,J＝11.6Hz,2H),3.18-3.07(m,2H),2.69(t,J＝6.8Hz,2H),2.42(s,2H),1.89-1.80(m,2H),1.78-1.69(m,2H)。
步骤5：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氰基-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007501
于0℃向2-[1-[2-氰基-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(300mg，733.79μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(667.80mg，5.17mmol，900uL)和丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(480.00mg，754.29μmol)。混合物于0℃搅拌0.5小时。然后向混合物中加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(400mg，585.07μmol)。所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤混合物。通过制备HPLC(流速：60mL/min；梯度：20-50％的乙腈/水(0.225％甲酸)，用时10min；柱子：Phenomenex luna C18 250×50mm×15μm)纯化滤液并冻干，得到呈白色固体的化合物171(41.66mg，42.52μmol，收率5.79％)。LCMS m/z:924.4(M+H),1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.54(s,1H),10.43(s,1H),8.43(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.67(d,J＝2.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.53(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),6.14(s,1H),4.90(s,1H),4.80(d,J＝18.0Hz,1H),4.39(s,2H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.09(s,2H),4.05-3.94(m,6H),3.75(t,J＝6.8Hz,2H),3.24(d,J＝12.0Hz,2H),3.16-3.09(m,2H),2.79-2.66(m,3H),2.56(d,J＝0.8Hz,1H),2.47-2.44(m,2H),2.26(s,2H),1.87-1.77(m,2H),1.70(d,J＝12.0Hz,2H)。
实施例172.
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺，化合物172
步骤1：2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007511
向1,2-二氯-4-硝基-苯(10g，52.08mmol)和1,2-二氯-4-硝基-苯(10g，52.08mmol)在二甲基亚砜(100mL)中的溶液中加入碳酸钾(21.6g，156.25mmol)。混合物于110℃搅拌1小时。将反应冷却至20℃并倒入水(500mL)中。用乙酸乙酯(3×200mL)萃取该混合物。合并有机相，用盐水(2×200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(18g，42.72mmol，收率82.01％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.20(d,J＝2.8Hz,1H),8.12(dd,J＝2.8,8.8Hz,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,1H),4.65(s,1H),3.29(br d,J＝8.8Hz,2H),3.17-3.09(m,2H),2.39(s,2H),1.87-1.78(m,2H),1.75-1.68(m,2H),1.41(s,9H)
步骤2：2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007512
向2-[1-(2-氯-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(18g，48.54mmol)和乙醇(400mL)、水(80mL)的混合物中加入氯化铵(7.79g，145.62mmol，5.09mL)。反应混合物于90℃搅拌16小时。浓缩反应混合物以除去溶剂，将混合物倒入水(400mL)中。用乙酸乙酯(200mL×3)萃取该混合物。合并有机相，用盐水(200mL×2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝6.88(d,J＝8.8Hz,1H),6.61(d,J＝2.4Hz,1H),6.46(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),4.97(s,2H),4.42(s,1H),2.89-2.80(m,2H),2.79-2.72(m,2H),2.34(s,2H),1.81-1.72(m,2H),1.68-1.60(m,2H),1.41(s,9H)
步骤3：3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氯-苯胺基]丙酸
Figure BDA0003698737280007521
向2-[1-(4-氨基-2-氯-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(13g，38.14mmol)在甲苯(91mL)中的溶液中加入丙烯酸(3.30g，45.77mmol，3.14mL)。混合物于100℃搅拌16小时。减压浓缩混合物。产物通过反相色谱法纯化(C18柱子，使用甲酸作为相改性剂)，得到呈棕色固体的3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氯-苯胺基]丙酸(9.9g，22.54mmol，收率59.09％)。LCMS(ESI+):413.2(M+H)+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.23(s,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.61(d,J＝2.4Hz,1H),6.49(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),4.44(s,1H),3.19(t,J＝6.8Hz,2H),2.90-2.81(m,2H),2.81-2.72(m,2H),2.45(t,J＝6.8Hz,2H),2.34(s,2H),1.99(s,1H),1.83-1.71(m,2H),1.69-1.58(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤4：2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐
Figure BDA0003698737280007522
向3-[4-[4-(2-叔-丁氧基-2-氧代-乙基)-4-羟基-1-哌啶基]-3-氯-苯胺基]丙酸(9.9g，23.98mmol)在乙酸(100mL)中的溶液中加入脲(4.75g，79.12mmol，3.55mL)。混合物于120℃搅拌16小时。减压浓缩反应混合物。固体加乙醇(40mL)于25℃研磨16小时。真空干燥固体，得到呈灰白色固体的2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(3.87g，9.07mmol，收率37.82％)。LCMS(ESI):m/z 382.1[M+H]+,1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.39(s,1H),7.41(d,J＝2.4Hz,1H),7.27-7.17(m,2H),3.74(t,J＝6.8Hz,2H),3.00(d,J＝6.0Hz,4H),2.68(t,J＝6.8Hz,2H),2.41(s,2H),1.91-1.79(m,2H),1.77-1.65(m,2H)。
步骤5：2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺
Figure BDA0003698737280007531
向2-[1-[2-氯-4-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(200mg，478.16μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(430.36mg，3.33mmol，580uL)和丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(302mg，474.57μmol)。混合物于0℃搅拌0.5小时。然后向混合物中加入2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(270mg，379.36μmol)。所得混合物于25℃搅拌16小时。过滤混合物。通过反相柱纯化滤液(流速：40mL/min；梯度：5-54％的乙腈/水，用时31min；柱子：I.D.31mm×H140mm，Welch Ultimate Xb C18 20-40μm；
Figure BDA0003698737280007532
)。将所需级分冻干，得到呈淡黄色固体的化合物172(76.22mg，78.48μmol，收率16.55％)。LCMS(ESI+):m/z 961.3[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.52(s,1H),10.38(s,1H),7.76(s,1H),7.73(d,J＝10.8Hz,1H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.41(d,J＝2.4Hz,1H),7.24(dd,J＝2.8,11.2Hz,2H),7.20-7.15(m,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,2H),6.14(s,1H),4.87(s,1H),4.80(d,J＝18.0Hz,1H),4.21(d,J＝17.6Hz,1H),4.05-3.91(m,4H),3.74(t,J＝6.4Hz,2H),3.63(s,2H),3.28-3.19(m,4H),2.98(d,J＝6.0Hz,4H),2.77-2.66(m,3H),2.54(s,1H),2.46-2.41(m,2H),2.27(s,2H),1.85-1.74(m,6H),1.71-1.65(m,2H)。
实施例173.
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1，化合物173
步骤1：1,2-二氟-4-甲氧基-5-硝基-苯
Figure BDA0003698737280007541
向4,5-二氟-2-硝基-苯酚(500mg，2.86mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.18g，8.57mmol，517.04μL)和碘甲烷(1.22g，8.57mmol，533.33μL)。混合物于25℃搅拌3小时。向反应混合物中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)并分离各层。用水(3×20mL)、然后用盐水(3×20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的1,2-二氟-4-甲氧基-5-硝基-苯(550mg，2.91mmol)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.23(dd,J＝8.4,10.0Hz,1H),7.62(dd,J＝6.8,12.4Hz,1H),3.93(s,3H)。
步骤2：2-[1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007542
向1,2-二氟-4-甲氧基-5-硝基-苯(550mg，2.91mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入2-(4-羟基-4-哌啶基)乙酸叔丁酯(626mg，2.91mmol)和N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(645.54mg，4.99mmol，0.87mL)。混合物于80℃搅拌12小时。在冷却至25℃后，向反应混合物中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)并分离各层。用水(3×20mL)、然后用盐水(3×20mL)洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的2-[1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1g，2.47mmol，收率85％)。LCMS(ESI):m/z 385.1[M+H]+
步骤3：2-[1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007543
在氮气下向2-[1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1g，2.60mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中加入10％钯/碳(100mg)。将混合物在氢气(15psi)下于25℃搅拌12小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物并用乙醇(50mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液，得到呈棕色固体的2-[1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(1g，2.60mmol，收率>98％)。LCMS(ESI):m/z 355.1[M+H]+
步骤4：2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007551
向2-[1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(200mg，564.31μmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(217mg，1.13mmol)在乙腈(2mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(142mg，1.69mmol，65.74μL)和四丁基碘化铵(21mg，56.85μmol)。混合物于80℃搅拌16小时。在冷却至25℃后，减压浓缩反应混合物。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/4)，得到呈棕色固体的2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(200mg，421.04μmol，收率75％)。LCMS(ESI):m/z 466.2[M+H]+
步骤5：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)和2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体2)
Figure BDA0003698737280007552
通过手性SFC(异丙醇条件，柱子：Phenomenex-Cellulose-2(250mm×30mm，10μm)；B％：50％-50％；4.0min，25min)分离外消旋2-[1-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯，得到两组级分。蒸发第一组洗脱级分，得到呈棕色固体的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(100mg，212.67μmol，收率50％)(LCMS(ESI):m/z466.1[M+H]+)。蒸发第二组级分，得到呈棕色固体的2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(70mg，148.87μmol，收率35％)(LCMS(ESI):m/z466.1[M+H]+)。
步骤6：2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸，异构体1
Figure BDA0003698737280007561
向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸叔丁酯(异构体1)(100mg，214.82μmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中加入盐酸(12M，0.1mL)。混合物于25℃搅拌0.5小时。于35℃减压浓缩该混合物，得到呈棕色油的2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸盐酸盐(92mg，196.02μmol，收率91％，HCl盐)。LCMS(ESI):m/z 410.1[M+H]+
步骤7：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺，异构体1
Figure BDA0003698737280007562
于0℃向2-[1-[4-[[2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羟基-4-哌啶基]乙酸(异构体1)盐酸盐(92mg，206.34μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(192.92mg，1.49mmol，260.00μL)和丙基膦酸酐(50％，在乙酸乙酯中)(132mg，207.43μmol)。将混合物于0℃搅拌20分钟。然后加入2-[6-[4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺三氟乙酸盐(113mg，165.28μmol)并将混合物于25℃搅拌12小时。过滤反应混合物。通过反相柱纯化滤液(流速：40mL/min；梯度：5-51％的乙腈/水，用时28min；柱子：I.D.31mm×H 140mm,Welch Ultimate Xb C18 20-40μm；
Figure BDA0003698737280007572
)并冻干，得到呈白色固体的化合物173(51.97mg，53.54μmol，收率26％)。LCMS(ESI):m/z 961.3[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.50(s,1H),10.84(s,1H),7.74(s,1H),7.70(d,J＝10.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.48(d,J＝3.6Hz,1H),7.25(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝8.0Hz,1H),6.58-6.50(m,3H),6.14(s,1H),5.07(d,J＝6.8Hz,1H),4.83-4.74(m,2H),4.38(s,2H),4.28-4.18(m,2H),4.08(s,2H),4.04-3.92(m,6H),3.79(s,3H),3.23(d,J＝6.4Hz,2H),3.00-2.91(m,2H),2.91-2.82(m,2H),2.82-2.82(m,1H),2.82-2.72(m,2H),2.56(s,1H),2.43(s,1H),2.23(s,2H),2.17-2.08(m,1H),1.98-1.84(m,1H),1.82-1.72(m,2H),1.63(d,J＝12.4Hz,2H)。
实施例174.2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(7-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺(化合物175)的合成
步骤1：2-(4-(2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003698737280007571
向含有2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-氧代-异吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺(800mg，1.53mmol)和2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(785.82mg，1.83mmol)在二噁烷(15mL)中的充分搅拌溶液的100mL双颈圆底烧瓶中加入在水(4mL)中的碳酸钠(486.08mg，4.59mmol，192.12μL)。反应混合物用氮气脱气15分钟，随后加入[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(124.77mg，152.87μmol)并再脱气10分钟。所得混合物于80℃加热16小时。反应混合物用二氯甲烷稀释并通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液，得到粗品。粗残余物通过使用硅胶(100-200目)的快速柱色谱法纯化，用3％的甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈淡棕色固体的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(400mg，549.14μmol，收率35.92％)。LCMS(ESI+)m/z:698.3[M+H]+。
步骤2：2-(6-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280007581
向含有处于0℃的2-[4-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]苯基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(400mg，573.21μmol)在无水二氯甲烷(2.0mL)中的充分搅拌溶液的100mL单颈圆底烧瓶中逐滴加入三氟乙酸(457.52mg，4.01mmol，309.13μL)并将反应混合物于环境温度搅拌4小时。减压除去溶剂。残余物与二氯甲烷共蒸馏并加Et2O(50mL)研磨，得到呈灰白色固体的2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(400mg，472.09μmol，收率82.36％)。LCMS(ESI+)m/z:598.2[M+H]+。
步骤3：2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(7-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
Figure BDA0003698737280007591
在氮气氛下于0℃向含有2-[6-[4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺2,2,2-三氟乙酸(180mg，252.91μmol)和2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸2,2,2-三氟乙酸(135.41mg，252.91μmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的充分搅拌溶液的10mL单颈圆底烧瓶中加入I-二异丙基乙胺(163.43mg，1.26mmol，220.26μL)。随后，于0℃向反应混合物中加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(162.47mg，379.36μmol)并将所得混合物于环境温度搅拌1小时。将粗混合物直接进样到C18柱子(100g)上进行纯化，同时洗脱(0％至50％的乙腈/水+0.1％乙酸铵，用时30分钟，然后陡峭梯度至100％乙腈)。冷冻纯级分并冻干，得到呈灰白色固体的化合物174(130mg，129.47μmol，收率51.19％)。LCMS(ESI+)m/z:1002.3[M+H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.50(s,1H),10.58(s,1H),7.75(s,1H),7.71(d,J＝10.80Hz,1H),7.65(d,J＝8.40Hz,2H),7.61(s,1H),7.59(s,1H),7.55(s,1H),7.48(d,J＝3.60Hz,1H),7.26(s,1H),7.10(d,J＝8.40Hz,1H),6.54(d,J＝8.80Hz,2H),6.14(s,1H),4.81(d,J＝17.60Hz,1H),4.21(d,J＝17.60Hz,1H),4.02-3.96(m,4H),3.93(t,J＝6.80Hz,3H),3.70(t,J＝6.40Hz,4H),3.51(d,J＝13.60Hz,5H),3.42(d,J＝16.00Hz,3H),3.29-3.21(m,2H),3.02(d,J＝Hz,1H),2.68(t,J＝2.00Hz,3H),2.34-2.33(m,1H),1.89-1.84(m,3H),1.73(bs,2H),(水遮蔽)。
本说明书中引用的所有出版物和专利申请通过引用并入本文，犹如每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指出通过引用并入。
尽管出于清楚理解的目的已通过示意和实例的方式详细地描述了前述发明，但对于本领域普通技术人员显而易见的是，根据本发明的教导，可在不脱离本发明的精神或范围的情况下对其作某些改变和修改，本发明的精神和范围如附随的权利要求所限定。另外，本领域技术人员应认识或者能够使用不超过常规的实验确定本文所述具体实施方案和方法的许多等同物。这样的等同物旨在涵盖在本申请的范围中。

Claims (266)

1.一种式(I)的化合物，
Figure FDA0003698737270000011
其中
A选自环系AF和AG；
Figure FDA0003698737270000012
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CR52-；
A3选自
i)-N-，和
ii)-CR53-；
A4选自
i)-N-，和
ii)-CR54-；
A5选自
i)-N-，和
ii)-CR55-；
R1选自
i)H，
ii)卤素
iii)C1-6-烷基；
R52选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R53、R54和R55独立地选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R2选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R3选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；；
R4和R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1或2；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R7选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R70选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R8为H；
R9选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
L1为
Figure FDA0003698737270000041
C不存在或选自环系F、G和H；
Figure FDA0003698737270000042
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)-H-，
ii)卤素，和
iii)羟基-C1-6-烷基；
R16选自
i)-H-，
ii)羟基，和
iii)氟；
L3不存在或选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，
iv)-NR10-C(O)-，
v)-C(O)-NR10-，
vi)-C(O)O-，
vii)-CH2-CF2-CH2-，
viii)-CH2-，
ix)
Figure FDA0003698737270000051
x)
Figure FDA0003698737270000052
和
xi)
Figure FDA0003698737270000053
m为0、1或2；
p为0、1、2或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X，所有环系任选被一至三个选自R80、R81和R82的取代基所取代；
Figure FDA0003698737270000061
R80、R81和R82独立地选自
i)卤素，
ii)氰基，
iii)羟基，
iv)羟基-C1-6-烷基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
L4不存在或选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure FDA0003698737270000071
L5不存在或为
Figure FDA0003698737270000072
B选自环系AD和AE；
Figure FDA0003698737270000073
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中
A选自环系AF和AG；
Figure FDA0003698737270000074
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
R1选自
i)H，和
ii)卤素；
R2为H；
R3选自
i)H，和
ii)卤素；
R4为H
R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)n-；
n为1；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，和
iv)卤代-C1-6-烷基；
R7为H；
R8为H；
R9为C1-6-烷基；
L1为
Figure FDA0003698737270000081
C不存在或为环系F；
Figure FDA0003698737270000082
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)H，和
ii)卤素；
R16选自
i)H，和
ii)羟基；
L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，和
iv)-NR10-C(O)-；
m为1；
p为1或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L和M；
Figure FDA0003698737270000101
L4选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z及AA、AB和AC；
Figure FDA0003698737270000102
L5为
Figure FDA0003698737270000103
B选自环系AD和AE；
Figure FDA0003698737270000104
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1或2所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中
A选自环系AF和AG；
Figure FDA0003698737270000111
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
R1选自
i)H，和
ii)氟；
R2为H；
R3选自
i)H，和
ii)氟；
R4为H
R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1；
R6选自
i)H，
ii)氟，
iii)氰基，
iv)二氟甲基，和
v)三氟甲基；
R7为H；
R8为H；
R9为甲基；
L1为
Figure FDA0003698737270000121
C为环系F；
Figure FDA0003698737270000122
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12和R13为氟；
R14和R15为H；
R16选自
i)H，和
ii)羟基；
L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，和
iv)-NR10-C(O)-；
m为1；
p为1或3；
R10为H；
D选自环系I、J、K、L和M；
Figure FDA0003698737270000131
L4选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure FDA0003698737270000132
L5为
Figure FDA0003698737270000133
B选自环系AD和AE；
Figure FDA0003698737270000141
或其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中A为环系AF。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-N-。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-CH-。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自
i)H，和
ii)卤素。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自
i)H，和
ii)氟。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为氟。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为H。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自
i)H，和
ii)卤素。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自
i)H，和
ii)氟。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为H。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为H。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，和
iv)卤代-C1-6-烷基。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为H。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为H。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为C1-6-烷基。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为甲基。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中C不存在或为环系F。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中C为环系F。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R12和R13为氟。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R14和R15为H。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R16选自
i)H，和
ii)羟基。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R16为H。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，和
iv)-NR10-C(O)-。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中m为1。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为1或3。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中D选自环系I、J、K、L和M。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中L4选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中L4为
Figure FDA0003698737270000161
34.根据权利要求1至33中任一项所述的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其选自
5-((2-(1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-7-氟-3-氧代异吲哚啉-5-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶甲酰胺；
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺；
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺；
5-[2-[2-[1-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基]-7-氟-3-氧代-异吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)-4-氧代丁基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)环己基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-氰基-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-(三氟甲基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(吡啶-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((R)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-((1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷-1-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙酰基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]吡咯烷-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-((R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)苯基)-4-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]甲基]苯基]-4-氟-1-氧代-异吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
或其药学上可接受的盐。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其用作治疗活性物质。
36.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至34中任一项所述的化合物和治疗惰性载体。
37.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物用于治疗或预防癌症的用途，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R。
38.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其用于治疗或预防癌症，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R。
39.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物用于制备用于治疗或预防癌症的药剂的用途，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R。
40.一种治疗或预防癌症的方法，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R，所述方法包括施用有效量的根据权利要求1至34中任一项所述的化合物。
41.一种式(II)的化合物，
Figure FDA0003698737270000241
其中
A’选自环系AF、AG和AH；
Figure FDA0003698737270000242
Figure FDA0003698737270000251
A1选自
i)-NH-，和
ii)-O-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CR52-；
A3选自
i)-N-，和
ii)-CR53-；
A4选自
i)-N-，和
ii)-CR54-；
A5选自
i)-N-，和
ii)-CR55-；
R1’选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基
iv)氰基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
R52选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R53、R54和R55独立地选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R2选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R3选自
i)H，
ii)卤素，
iii)C1-6-烷基，
iv)卤代-C1-6-烷基，
v)C3-8-环烷基，和
vi)卤代-C3-8-环烷基；
R4和R5为H；
或者R4和R5一起形成-(CH2)q-；
q为1或2；
R6选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷氧基，
v)卤代-C1-6-烷氧基，
vi)C1-6-烷基，
vii)卤代-C1-6-烷基，
viii)C3-8-环烷基，和
ix)卤代-C3-8-环烷基；
R7选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R70选自
i)H，
ii)卤素，
iii)氰基，
iv)C1-6-烷基，
v)卤代-C1-6-烷基，
vi)C3-8-环烷基，和
vii)卤代-C3-8-环烷基；
R8为H；
R9选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
L1为
Figure FDA0003698737270000281
C不存在或选自环系F、G和H；
Figure FDA0003698737270000282
Y1选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
Y2选自
i)-N-，和
ii)-CR16-；
R12、R13、R14和R15独立地选自
i)-H-，
ii)卤素，和
iii)羟基-C1-6-烷基；
R16选自
i)-H-，
ii)羟基，和
iii)氟；
L3不存在或选自
i)-(CH2)m-C(O)-，
ii)-C(O)-(CH2)p-，
iii)-C(O)-C(O)-，
iv)-NR10-C(O)-，
v)-C(O)-NR10-，
vi)-C(O)O-，
vii)-CH2-CF2-CH2-，
viii)-CH2-，
ix)
Figure FDA0003698737270000291
x)
Figure FDA0003698737270000292
和
xi)
Figure FDA0003698737270000293
m为0、1或2；
p为0、1、2或3；
R10选自
i)H，和
ii)C1-6-烷基；
D选自环系I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W和X，所有环系任选被一至三个选自R80、R81和R82的取代基所取代；
Figure FDA0003698737270000294
Figure FDA0003698737270000301
R80、R81和R82独立地选自
i)卤素，
ii)氰基，
iii)羟基，
iv)羟基-C1-6-烷基，
v)C1-6-烷氧基，
vi)卤代-C1-6-烷氧基，
vii)C1-6-烷基，
viii)卤代-C1-6-烷基，
ix)C3-8-环烷基，和
x)卤代-C3-8-环烷基；
L4不存在或选自
i)-NR11-C(O)-，
ii)-CH2-，和
iii)-O-；
E选自环系Y、Z、AA、AB和AC；
Figure FDA0003698737270000311
L5不存在或为
Figure FDA0003698737270000312
B选自环系AD和AE；
Figure FDA0003698737270000313
或其药学上可接受的盐。
42.根据权利要求41所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中
A’选自环系AF、AG和AH；
Figure FDA0003698737270000314
Figure FDA0003698737270000321
A1为-NH-；
A2选自
i)-N-，和
ii)-CH-；
R1’选自
i)H，和
ii)卤素；
R2选自
i)H，和
ii)卤素；
R3为H；
R4为H；
R5为H；
R6选自
i)H，和
ii)卤素；
R7为H；
R8为H；
R9为C1-6-烷基；
L1为
Figure FDA0003698737270000322
C为环系F；
Figure FDA0003698737270000331
Y1为-CH-；
Y2为-N-；
R12、R13、R14和R15为H；
L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，和
ii)-C(O)-(CH2)p-；
m为1；
p为3；
D选自环系I和J；
Figure FDA0003698737270000332
L4不存在；
E选自环系Y和Z；
Figure FDA0003698737270000333
L5不存在；
或其药学上可接受的盐。
43.根据权利要求41至42中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A’选自环系AG和AF。
44.根据权利要求41至43中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A’为环系AF。
45.根据权利要求41至44中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A1为-NH-。
46.根据权利要求41至45中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中A2为-CH-。
47.根据权利要求41至46中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1’选自
i)H，和
ii)卤素。
48.根据权利要求41至47中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1’选自
i)H，
ii)氯，和
iii)氟。
49.根据权利要求41至48中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自
i)H，和
ii)卤素。
50.根据权利要求41至49中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自
i)H，
ii)氯，和
iii)氟。
51.根据权利要求41至50中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为H。
52.根据权利要求41至51中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4为H。
53.根据权利要求41至52中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为H。
54.根据权利要求41至53中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6选自
i)H，和
ii)卤素。
55.根据权利要求41至54中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为H。
56.根据权利要求41至55中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为H。
57.根据权利要求41至56中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为C1-6-烷基。
58.根据权利要求41至57中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R9为甲基。
59.根据权利要求41至58中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中C为环系F。
60.根据权利要求41至59中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1为-CH-。
61.根据权利要求41至60中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y2为-N-。
62.根据权利要求41至61中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中R12、R13、R14和R15为H。
63.根据权利要求41至62中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中L3选自
i)-(CH2)m-C(O)-，和
ii)-C(O)-(CH2)p-。
64.根据权利要求41至63中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中m为1。
65.根据权利要求41至64中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为3。
66.根据权利要求41至65中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中D选自环系I和J。
67.根据权利要求41至66中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中D选自环系J。
68.根据权利要求41至67中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中L4不存在。
69.根据权利要求41至68中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中E选自环系Y和Z。
70.根据权利要求41至69中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其中L5不存在。
71.根据权利要求41至70中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐，其选自
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)哌啶-1-基)-4-氧代丁基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-[4,7-二氯-6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]苯基]吲唑-2-基]-2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙酰胺；
2-(6,7-二氢-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
或其药学上可接受的盐。
72.根据权利要求41至71中任一项所述的化合物，其用作治疗活性物质。
73.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求41至71中任一项所述的化合物和治疗惰性载体。
74.根据权利要求41至71中任一项所述的化合物用于治疗或预防癌症的用途，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R。
75.根据权利要求41至71中任一项所述的化合物，其用于治疗或预防癌症，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R。
76.根据权利要求41至71中任一项所述的化合物用于制备用于治疗或预防癌症的药剂的用途，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R。
77.一种治疗或预防癌症的方法，特别是非小细胞肺癌，更特别是EGFR-突变非小细胞肺癌，其中所述激活突变为L858R，所述方法包括施用有效量的根据权利要求41至71中任一项所述的化合物。
78.如前所述的本发明。
79.一种式III或式IV的化合物：
Figure FDA0003698737270000371
Figure FDA0003698737270000381
或其药学上可接受的盐、同位素、N-氧化物、立体异构体，其任选地作为药物组合物的一部分；
其中：
A*选自：
Figure FDA0003698737270000382
B*为杂芳基或芳基，其各自任选被1、2或3个R31取代基所取代；
y为0、1、2或3；
R31在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基并且当存在于双环上时可位于任一环上；
R32为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基或卤代-C3-8-环烷基；
R33为氢、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基或卤代-C3-8-环烷基并且可位于二氢吡咯或咪唑环上；
R34在每次出现时独立地选自H、F、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
R35在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基和C3-8-环烷基；
或者R34和R35结合形成–(CH2)q-；
q为1或2；
R36和R37独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
或者R36和R37一起结合形成任选被1、2或3个R31取代基所取代的5-或6-元环；
R90为H、C1-6-烷基或C3-6-环烷基；
环G为杂芳基，其任选被1或2个R42取代基所取代；
A21为-NH-、-O-、-CH2-或-NR100-；
R100为烷基、环烷基、芳基或杂芳基；或者在化合价允许的情况下，R100可与R37结合形成5-8元杂环或5元杂芳基；
A32、A33、A34和A35独立地选自-N-和-CR42-；
R42在每次出现时独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、氰基、C1-6-烷氧基、卤代-C1-6-烷氧基、C1-6-烷基、卤代-C1-6-烷基、C3-8-环烷基和卤代-C3-8-环烷基；
A36为-N-或-CR35-；
L2为连接A*与异吲哚啉酮或吲唑的二价连接基团。
80.根据权利要求79所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003698737270000401
或其药学上可接受的盐。
81.根据权利要求79所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003698737270000402
或其药学上可接受的盐。
82.根据权利要求79-81中任一项所述的化合物，其中R33为H。
83.根据权利要求79-81中任一项所述的化合物，其中R33为F。
84.根据权利要求79-83中任一项所述的化合物，其中y为1。
85.根据权利要求79-83中任一项所述的化合物，其中y为2。
86.根据权利要求79-85中任一项所述的化合物，其中至少一个R31为卤素。
87.根据权利要求79-85中任一项所述的化合物，其中至少一个R31为F。
88.根据权利要求79-83中任一项所述的化合物，其中y为0。
89.根据权利要求79-88中任一项所述的化合物，其中R32为H。
90.根据权利要求79-88中任一项所述的化合物，其中R32为F。
91.根据权利要求79所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003698737270000403
Figure FDA0003698737270000411
92.根据权利要求79所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003698737270000412
93.根据权利要求79-92中任一项所述的化合物，其中A*为：
Figure FDA0003698737270000413
94.根据权利要求79-92中任一项所述的化合物，其中A*为：
Figure FDA0003698737270000421
95.根据权利要求79-94中任一项所述的化合物，其中A34为CH。
96.根据权利要求79-94中任一项所述的化合物，其中A34为N。
97.根据权利要求79-94中任一项所述的化合物，其中A34为CR42。
98.根据权利要求79-94中任一项所述的化合物，其中A34为CF。
99.根据权利要求79-98中任一项所述的化合物，其中A35为CH。
100.根据权利要求79-98中任一项所述的化合物，其中A35为N。
101.根据权利要求79-98中任一项所述的化合物，其中A35为CR42。
102.根据权利要求79-98中任一项所述的化合物，其中A35为CF。
103.根据权利要求79-92中任一项所述的化合物，其中A*为：
Figure FDA0003698737270000422
104.根据权利要求79-92中任一项所述的化合物，其中A*为：
Figure FDA0003698737270000423
105.根据权利要求103或104所述的化合物，其中A21为NH。
106.根据权利要求103或104所述的化合物，其中A21为O。
107.根据权利要求79-92中任一项所述的化合物，其中A*为：
Figure FDA0003698737270000431
108.根据权利要求79-107中任一项所述的化合物，其中A32为CH。
109.根据权利要求79-107中任一项所述的化合物，其中A32为N。
110.根据权利要求79-107中任一项所述的化合物，其中A32为CR42。
111.根据权利要求79-107中任一项所述的化合物，其中A32为CF。
112.根据权利要求79-112中任一项所述的化合物，其中A33为CH。
113.根据权利要求79-112中任一项所述的化合物，其中A33为N。
114.根据权利要求79-112中任一项所述的化合物，其中A33为CR42。
115.根据权利要求79-112中任一项所述的化合物，其中A33为CF。
116.根据权利要求79-92中任一项所述的化合物，其中A*为：
Figure FDA0003698737270000432
117.根据权利要求116所述的化合物，其中A21为NH。
118.根据权利要求116所述的化合物，其中A21为O。
119.根据权利要求79-118中任一项所述的化合物，其中R34为H。
120.根据权利要求79-118中任一项所述的化合物，其中R34为F。
121.根据权利要求79-118中任一项所述的化合物，其中R34为CH3。
122.根据权利要求79-121中任一项所述的化合物，其中R35为H。
123.根据权利要求79-121中任一项所述的化合物，其中R35为F。
124.根据权利要求79-121中任一项所述的化合物，其中R35为CH3。
125.根据权利要求79-118中任一项所述的化合物，其中R34和R35结合形成-CH2-。
126.根据权利要求79-125中任一项所述的化合物，其中R31在每种情况下独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)和C1-6-烷基。
127.根据权利要求79-126中任一项所述的化合物，其中R42在每种情况下独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)和C1-6-烷基。
128.根据权利要求79-127中任一项所述的化合物，其中B*为
Figure FDA0003698737270000441
129.根据权利要求79-127中任一项所述的化合物，其中B*为
Figure FDA0003698737270000442
130.根据权利要求79-127中任一项所述的化合物，其中B*为
Figure FDA0003698737270000443
131.根据权利要求79-127中任一项所述的化合物，其中B*为
Figure FDA0003698737270000444
132.根据权利要求79-131中任一项所述的化合物，其中L2具有式：
Figure FDA0003698737270000445
其中，
X1和X2在每次出现时独立地选自键、杂环、芳基、杂芳基、双环、烷基、脂族、杂脂族、-NR27-、-CR40R41-、-O-、-C(O)-、-C(NR27)-、-C(S)-、-S(O)-、-S(O)2-和–S-；杂环、芳基、杂芳基和双环中的每一个任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基所取代；
R20、R21、R22、R23和R24在每次出现时独立地选自键、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR27-、-NR27C(O)-、-O-、-S-、-NR27-、氧基亚烷基、-C(R40R40)-、-P(O)(OR26)O-、-P(O)(OR26)-、双环、烯烃、炔烃、卤代烷基、烷氧基、芳基、杂环、脂族、杂脂族、杂芳基、乳酸、乙醇酸和碳环；其每一个任选被1、2、3或4个独立地选自R40的取代基所取代；
R26在每次出现时独立地选自氢、烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、烯烃、炔烃、芳基、杂芳基、杂环、脂族和杂脂族；
R27在每次出现时独立地选自氢、烷基、脂族、杂脂族、杂环、芳基、杂芳基、-C(O)(脂族、芳基、杂脂族或杂芳基)、-C(O)O(脂族、芳基、杂脂族或杂芳基)、烯烃和炔烃；
R40在每次出现时独立地选自氢、R27、烷基、烯烃、炔烃、氟、溴、氯、羟基、烷氧基、叠氮化物、氨基、氰基、-NH(脂族)、-N(脂族)2、-NHSO2(脂族)、-N(脂族)SO2烷基、-NHSO2(芳基、杂芳基或杂环)、-N(烷基)SO2(芳基、杂芳基或杂环)、-NHSO2烯基、-N(烷基)SO2烯基、-NHSO2炔基、-N(烷基)SO2炔基、卤代烷基、脂族、杂脂族、芳基、杂芳基、杂环、氧代和环烷基；另外，在化合价允许的情况下，与同一个碳结合的两个R40基团可接合在一起形成3-8元螺环；并且
R41为脂族、芳基、杂芳基或氢。
133.根据权利要求132所述的化合物，其中L2具有式：
Figure FDA0003698737270000451
134.根据权利要求132或133所述的化合物，其中X1为键。
135.根据权利要求132或133所述的化合物，其中X1为杂环。
136.根据权利要求132或133所述的化合物，其中X1为NR2。
137.根据权利要求132或133所述的化合物，其中X1为C(O)。
138.根据权利要求132-137中任一项所述的化合物，其中X2为键。
139.根据权利要求132-137中任一项所述的化合物，其中X2为杂环。
140.根据权利要求132-137中任一项所述的化合物，其中X2为NR2。
141.根据权利要求132-137中任一项所述的化合物，其中X2为C(O)。
142.根据权利要求132-141中任一项所述的化合物，其中R20为键。
143.根据权利要求132-141中任一项所述的化合物，其中R20为CH2。
144.根据权利要求132-141中任一项所述的化合物，其中R20为杂环。
145.根据权利要求132-141中任一项所述的化合物，其中R20为芳基。
146.根据权利要求132-141中任一项所述的化合物，其中R20为苯基。
147.根据权利要求132-141中任一项所述的化合物，其中R20为双环。
148.根据权利要求132-147中任一项所述的化合物，其中R21为键。
149.根据权利要求132-147中任一项所述的化合物，其中R21为CH2。
150.根据权利要求132-147中任一项所述的化合物，其中R21为杂环。
151.根据权利要求132-147中任一项所述的化合物，其中R21为芳基。
152.根据权利要求132-147中任一项所述的化合物，其中R21为苯基。
153.根据权利要求132-147中任一项所述的化合物，其中R21为双环。
154.根据权利要求132所述的化合物，其中L为具有下式的接头：
Figure FDA0003698737270000461
155.根据权利要求132-154中任一项所述的化合物，其中R22为键。
156.根据权利要求132-154中任一项所述的化合物，其中R22为CH2。
157.根据权利要求132-154中任一项所述的化合物，其中R22为杂环。
158.根据权利要求132-154中任一项所述的化合物，其中R22为芳基。
159.根据权利要求132-154中任一项所述的化合物，其中R22为苯基。
160.根据权利要求132-154中任一项所述的化合物，其中R22为双环。
161.根据权利要求132所述的化合物，其中L为具有下式的接头：
Figure FDA0003698737270000471
162.根据权利要求132-161中任一项所述的化合物，其中R23为键。
163.根据权利要求132-161中任一项所述的化合物，其中R23为CH2。
164.根据权利要求132-161中任一项所述的化合物，其中R23为杂环。
165.根据权利要求132-161中任一项所述的化合物，其中R23为芳基。
166.根据权利要求132-161中任一项所述的化合物，其中R23为苯基。
167.根据权利要求132-161中任一项所述的化合物，其中R23为双环。
168.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为键。
169.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为CH2。
170.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为杂环。
171.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为芳基。
172.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为苯基。
173.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为双环。
174.根据权利要求132-167中任一项所述的化合物，其中R24为C(O)。
175.一种化合物，所述化合物选自：
Figure FDA0003698737270000481
Figure FDA0003698737270000491
Figure FDA0003698737270000501
Figure FDA0003698737270000511
Figure FDA0003698737270000521
Figure FDA0003698737270000531
Figure FDA0003698737270000541
Figure FDA0003698737270000551
Figure FDA0003698737270000561
Figure FDA0003698737270000571
Figure FDA0003698737270000581
Figure FDA0003698737270000591
Figure FDA0003698737270000601
Figure FDA0003698737270000611
Figure FDA0003698737270000621
Figure FDA0003698737270000631
Figure FDA0003698737270000641
Figure FDA0003698737270000651
Figure FDA0003698737270000661
Figure FDA0003698737270000671
Figure FDA0003698737270000681
Figure FDA0003698737270000691
Figure FDA0003698737270000701
Figure FDA0003698737270000711
Figure FDA0003698737270000721
Figure FDA0003698737270000731
Figure FDA0003698737270000741
Figure FDA0003698737270000751
Figure FDA0003698737270000761
Figure FDA0003698737270000771
Figure FDA0003698737270000781
Figure FDA0003698737270000791
Figure FDA0003698737270000801
Figure FDA0003698737270000811
Figure FDA0003698737270000821
Figure FDA0003698737270000831
Figure FDA0003698737270000841
Figure FDA0003698737270000851
Figure FDA0003698737270000861
Figure FDA0003698737270000871
Figure FDA0003698737270000881
Figure FDA0003698737270000891
Figure FDA0003698737270000901
Figure FDA0003698737270000911
Figure FDA0003698737270000921
Figure FDA0003698737270000931
Figure FDA0003698737270000941
Figure FDA0003698737270000951
Figure FDA0003698737270000961
Figure FDA0003698737270000971
Figure FDA0003698737270000981
Figure FDA0003698737270000991
Figure FDA0003698737270001001
Figure FDA0003698737270001011
Figure FDA0003698737270001021
Figure FDA0003698737270001031
Figure FDA0003698737270001041
Figure FDA0003698737270001051
或其药学上可接受的盐。
176.根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药物组合物中，其用作治疗活性物质。
177.根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药物组合物中，其用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。
178.一种治疗患有EGFR介导病症的患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药物组合物中。
179.根据权利要求179所述的方法，其中所述患者为人。
180.根据权利要求179或180所述的方法，其中所述EGFR介导病症为癌症、肿瘤或异常细胞增殖。
181.根据权利要求181所述的方法，其中所述EGFR介导病症为癌症或肿瘤。
182.根据权利要求181所述的方法，其中所述EGFR介导病症为异常细胞增殖。
183.根据权利要求182所述的方法，其中所述癌症为肺癌。
184.根据权利要求184所述的方法，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
185.根据权利要求181-185中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着至少一个突变的EGFR蛋白。
186.根据权利要求181-186中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R突变的EGFR蛋白。
187.根据权利要求181-187中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M突变的EGFR蛋白。
188.根据权利要求181-188中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着C797S突变的EGFR蛋白。
189.根据权利要求181-189中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L792H突变的EGFR蛋白。
190.根据权利要求181-189中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L718Q突变的EGFR蛋白。
191.根据权利要求181-186中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R突变的EGFR蛋白。
192.根据权利要求181-186中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
193.根据权利要求181-186中任一项所述的方法，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
194.根据权利要求179-194中任一项所述的方法，其中施用另外的EGFR抑制剂。
195.根据权利要求195所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
196.根据权利要求196所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为奥希替尼。
197.根据权利要求196所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为罗西替尼。
198.根据权利要求196所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为艾维替尼。
199.根据权利要求196所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为拉泽替尼。
200.根据权利要求196所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为纳扎替尼。
201.根据权利要求195所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为针对EGFR的突变形式的抗体。
202.根据权利要求202所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。
203.根据权利要求202所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为帕尼单抗。
204.根据权利要求202所述的方法，其中所述另外的EGFR抑制剂为耐昔妥珠单抗。
205.根据权利要求179-205中任一项所述的方法，其中还施用MET抑制剂。
206.根据权利要求179-206中任一项所述的方法，其中所述患者接受另外的化疗剂。
207.根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制造用于治疗患者中的EGFR介导病症的药剂的用途。
208.根据权利要求208所述的用途，其中所述患者为人。
209.根据权利要求208或209所述的用途，其中所述EGFR介导病症为癌症、肿瘤或异常细胞增殖。
210.根据权利要求210所述的用途，其中所述EGFR介导病症为癌症或肿瘤。
211.根据权利要求210所述的用途，其中所述EGFR介导病症为异常细胞增殖。
212.根据权利要求211所述的用途，其中所述癌症为肺癌。
213.根据权利要求213所述的用途，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
214.根据权利要求210-214中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着至少一个突变的EGFR蛋白。
215.根据权利要求210-215中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R突变的EGFR蛋白。
216.根据权利要求210-216中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M突变的EGFR蛋白。
217.根据权利要求210-217中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着C797S突变的EGFR蛋白。
218.根据权利要求210-218中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L792H突变的EGFR蛋白。
219.根据权利要求210-219中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L718Q突变的EGFR蛋白。
220.根据权利要求210-215中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R突变的EGFR蛋白。
221.根据权利要求210-215中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
222.根据权利要求210-215中任一项所述的用途，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
223.根据权利要求208-223中任一项所述的用途，其中施用另外的EGFR抑制剂。
224.根据权利要求224所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
225.根据权利要求225所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为奥希替尼。
226.根据权利要求225所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为罗西替尼。
227.根据权利要求225所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为艾维替尼。
228.根据权利要求225所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为拉泽替尼。
229.根据权利要求225所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为纳扎替尼。
230.根据权利要求224所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为针对EGFR的突变形式的抗体。
231.根据权利要求231所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。
232.根据权利要求231所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为帕尼单抗。
233.根据权利要求231所述的用途，其中所述另外的EGFR抑制剂为耐昔妥珠单抗。
234.根据权利要求208-234中任一项所述的用途，其中还施用MET抑制剂。
235.根据权利要求208-235中任一项所述的用途，其中所述患者接受另外的化疗剂。
236.根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药物组合物中，其用于患者中的EGFR介导病症的治疗。
237.根据权利要求237所述的化合物，其中所述患者为人。
238.根据权利要求237或238所述的化合物，其中所述EGFR介导病症为癌症、肿瘤或异常细胞增殖。
239.根据权利要求239所述的化合物，其中所述EGFR介导病症为癌症或肿瘤。
240.根据权利要求239所述的化合物，其中所述EGFR介导病症为异常细胞增殖。
241.根据权利要求240所述的化合物，其中所述癌症为肺癌。
242.根据权利要求242所述的化合物，其中所述肺癌为非小细胞肺癌。
243.根据权利要求239-243中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着至少一个突变的EGFR蛋白。
244.根据权利要求239-244中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R突变的EGFR蛋白。
245.根据权利要求239-245中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M突变的EGFR蛋白。
246.根据权利要求239-246中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着C797S突变的EGFR蛋白。
247.根据权利要求239-247中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L792H突变的EGFR蛋白。
248.根据权利要求239-248中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L718Q突变的EGFR蛋白。
249.根据权利要求239-244中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R突变的EGFR蛋白。
250.根据权利要求239-244中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着T790M/L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
251.根据权利要求239-244中任一项所述的化合物，其中所述癌症、肿瘤或异常细胞增殖具有有着L858R/C797S突变的EGFR蛋白。
252.根据权利要求237-252中任一项所述的化合物，其中施用另外的EGFR抑制剂。
253.根据权利要求253所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为酪氨酸激酶抑制剂。
254.根据权利要求254所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为奥希替尼。
255.根据权利要求254所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为罗西替尼。
256.根据权利要求254所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为艾维替尼。
257.根据权利要求254所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为拉泽替尼。
258.根据权利要求254所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为纳扎替尼。
259.根据权利要求253所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为针对EGFR的突变形式的抗体。
260.根据权利要求260所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。
261.根据权利要求260所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为帕尼单抗。
262.根据权利要求260所述的化合物，其中所述另外的EGFR抑制剂为耐昔妥珠单抗。
263.根据权利要求237-263中任一项所述的化合物，其中还施用MET抑制剂。
264.根据权利要求237-264中任一项所述的化合物，其中所述患者接受另外的化疗剂。
265.根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药物组合物中，其用作治疗性和/或预防性治疗如用
Figure FDA0003698737270001111
EGFR突变测试v2确定具有EGFR激活突变的患癌患者的药剂，特别是非小细胞肺癌，其包括确定所述患者中的EGFR激活突变状态和然后向所述患者施用根据权利要求79-176中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其任选地在药物组合物中。
266.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求79-176中任一项所述的化合物以及药学上可接受的赋形剂。
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