CN114807058B - 一种金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha及其应用，该噬菌体经鉴定具有独特的基因组结构特征，属于一种新型噬菌体，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月5日，保藏编号为CCTCC NO：M2022023。本发明获得高效裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体，能够有效抑制各种基质中的金黄色葡萄球菌，可以应用于制备控制金黄色葡萄球菌污染的抑菌剂。本发明制备的抑菌剂能够在培养基、食物基质中有效控制金黄色葡萄球菌的生长，同时可以有效抑制设备、器皿、原料固体表面金黄色葡萄球菌菌膜形成，并且制备简单，使用方便，可降低金黄色葡萄球菌传播和引发食源性疾病的风险。

Description

一种金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha及其应用
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha及其应用。
背景技术
金黄色葡萄球菌(S.aureus，SA)属于革兰氏阳性菌，是临床和食品加工环境中常见的重要致病菌，可导致动物和人体的皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等疾病。近几十年来，抗生素的滥用导致多耐药金黄色葡萄球菌的出现和快速发展，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus，MRSA)，这使得金黄色葡萄球菌感染的临床治疗非常具有挑战性。据报道显示，MRSA经常在世界各地被污染的奶制品和肉制品中检测到，其检出率分别达到2.5％和3.9％。然而，在食品和相关产品中使用抗生素和人工防腐剂是不可取的，这意味着需要替代和安全的方法对食品中的金黄色葡萄球菌进行生物控制。筛选廉价且环境友好的新型生物抗菌剂，减除动物养殖环境、食品加工与贮藏环境以及食品原料中金黄色葡萄球菌的污染，对于控制该菌引起的疾病具有十分重要的意义。
目前，在食品加工环境以及食品生产中用于控制金黄色葡萄球菌的预防和治疗主要是化学杀菌剂和抗生素。然而，杀菌剂活性容易受到环境因素的影响，且杀菌剂的残留会对设备有腐蚀性，对牲畜和人有化学毒性；抗生素的使用会使细菌产生抗体，不仅危害人类健康，而且会使产生抗体的细菌更加难以去除。近年来，出于对食品绿色杀菌剂的需求，人们利用从动植物、微生物中提取的天然抗菌成分作为生物抑(减)菌剂，主要包括大蒜素、茶多酚、溶菌酶、乳酸链球菌素等，这些抑菌剂对人畜安全无害、虽能满足绿色环保需求，但是存在制造成本高、导致食品风味和品质改变、杀菌效果不佳等缺陷，因此亟需开发新型生物抑菌剂。
噬菌体是一种注入其遗传物质后能够感染细菌并在细菌内复制的病毒，并存在于宿主细菌发现的任何地方，是地球上最丰富的生物实体。噬菌体作为生物防治制剂，具有宿主专一性，资源丰富、制备成本低廉，安全环保等优点。近年来，新型噬菌体抑菌剂研发已受到广泛关注，世界各国在噬菌体资源、生物学特性以及在各种基质中的控菌方面开展了大量研究，在控制食品及生产环境中的病原菌感染传播中具有高效、廉价、安全等优势。
细菌耐药性问题日益严重，迄今为止，噬菌体应用于人体治疗的临床病例已有数千例之多，也有一些研究证明噬菌体能够有效控制鸡、小鼠、兔和奶牛等动物中细菌的感染。2006年，美国食品和药品管理局首次批准，噬菌体可用作食品添加剂。由于与抗生素相比，噬菌体作为一种新型的生物制剂，具有专一性强、安全性能高等特点，可用于食品加工以及食品生产中细菌的控制。然而，噬菌体作为抗菌剂时，对所需要的噬菌体要求较高，不仅要求噬菌体本身具有高速繁殖特性，并且对宿主细菌具有广泛的裂解性，因此，噬菌体并未得到广泛的应用。虽然，很多文献报道了噬菌体用于控制金黄色葡萄球菌的污染食物、食品器械等，但是这些噬菌体仍有许多不足，如金黄色葡萄球菌噬菌体VB_SauS_SH-St 15644具有较短的潜伏期(12min)，但爆发量却很低，仅13PFU/cell；金黄色葡萄球菌噬菌体PALS2具有广泛的宿主谱特性，但其潜伏期(30min)以及爆发量(12PFU/cell)却远不如其他噬菌体；另外，金黄色葡萄球菌噬菌体Stab21具有较高的爆发量(130PFU/cell)，但其效价却仅有约108PFU/cell，达不到高速繁殖抑菌的效果。因此，筛选并应用较优的噬菌体，是防治金黄色葡萄球菌感染的一条有效途径。
发明内容
发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种对金黄色葡萄球菌具有强烈裂解作用的噬菌体，该噬菌体可以用于控制食品及生产环境中金黄色葡萄球菌污染。
本发明还提供所述噬菌体在制备金黄色葡萄球菌及其生物膜抑制剂中的应用。
技术方案：为了实现上述目的，本发明所述的一种金黄色葡萄球菌(S.aureus，SA)噬菌体SapYZUalpha，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月5日，保藏编号为CCTCC NO：M 2022023。经鉴定所述噬菌体SapYZUalpha具有独特的基因组结构特征，本发明的噬菌体是从江苏省扬州市农贸市场污水样品中分离获得，具有高效裂解金黄色葡萄球菌功能的金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha(S.aureus phage SapYZUalpha)。
本发明中金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha具有以下生物学特征：
(1)形态学特征：通过透射电镜观察，SapYZUalpha头部对称，直径约为88.68nm，尾部长176.89nm，具有伸缩性尾鞘，形态学特征归属肌尾噬菌体科。
(2)核酸类型：SapYZUalpha为dsDNA噬菌体。
(3)基因组特征：SapYZUalpha基因组全长为135178bp，其中编码基因总长度为115881bp，平均长度为619bp，占总长的85.7％，GC含量为29.9％，拥有187个开放阅读框(ORFs)，其中1个ORFs在数据库中未发现同源性基因(ORF129)，186个ORFs编码蛋白同源性序列中包括129个假设蛋白编码序列、57个已知蛋白功能的序列，不含有任何已知的毒力基因。
(4)具有强烈裂解金黄色葡萄球菌功能。
(5)能够抑制金黄色葡萄球菌生物被膜形成。
本发明所述的噬菌体SapYZUalpha在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。
其中，所述的噬菌体SapYZUalpha在抑制食品、食品生产环境与食品生产设施中金黄色葡萄球菌中的应用。
作为优选，所述的噬菌体SapYZUalpha在抑制食品、食品生产环境、保藏运输器具中金黄色葡萄球菌污染中的应用。
本发明所述的噬菌体SapYZUalpha在制备抑制金黄色葡萄球菌及其生物膜的生物制剂或者抑菌剂中的应用。
作为优选，所述生物制剂或者抑菌剂以噬菌体SapYZUalpha分离物或培养物作为活性成分或者还包括一些制备制剂的辅料。
其中，所述生物制剂或者抑菌剂用于清除食品及生产设施、环境、保藏运输器具中的金黄色葡萄球菌及其生物膜污染。
其中，所述生物制剂或者抑菌剂制备为：将噬菌体SapYZUalpha与对数生长期的金黄色葡萄球菌混合，室温放置，然后加到LB液体培养基，恒温振荡过夜培养；将培养物转至灭菌离心管，离心收集上清液，过滤，收集噬菌体增殖液，加PEG 8000和NaCl，摇匀至溶解，过夜；离心去上清液；加SM缓冲液，室温反应；使用氯仿抽提；离心回收含SapYZUalpha颗粒的亲水相，将获得的SapYZUalpha颗粒与SM缓冲液混合，制成噬菌体生物制剂或者抑菌剂母液。
作为优选，所述噬菌体SapYZUalpha的生物制剂或者抑菌剂的母液用水稀释并制成喷洒液或淋洗液，单独或者配合其他杀菌剂使用，对生产环境、生产器具的喷洒或洗涤，减少食品加工环境中金黄色葡萄球菌载量以及菌膜形成.
作为优选，将纯化的噬菌体SapYZUalpha作为食品原料洗涤液添加剂，用于防止食品原料携带的金黄色葡萄球菌代谢和繁殖。
本发明所述一种抑制金黄色葡萄球菌的生物制剂或者抑菌剂，其包括所述的噬菌体SapYZUalpha或者其培养物作为活性成分，单独或复配形成制剂。
本发明分离筛选到的噬菌体宿主谱很宽，不仅对所测试的金黄色葡萄球菌具有较好的裂解作用(53/53)，而且可裂解部分葡萄球菌(表2)；该噬菌体对于来自不同地方的养猪场、屠宰场、超市以及人类临床的金黄色葡萄球均能产生抑菌作用且效果较好，对于单菌和混合菌均能在24h抑制99.9999％的细菌生长。
同时从基因上的特征上看，本发明分离筛选到的噬菌体含有新的terL基因(ORF117，表1)，该基因与已知的金葡菌噬菌体的terL基因仅有大约63％的基因相似性；含有很多与噬菌体合成相关的基因，例如DNA synthesis(ORF1,ORF3and ORF5),DNApolymerase I(ORF10 and ORF11),DNA repair recombinase(ORF20)，DNA-bindingprotein，NA polymerase(ORF148),DNA helicase(ORF168),Type III restrictionenzyme(ORF169),DNA methylase N-4 N-6 domain-containing protein(ORF174),DNArepair exonuclease(ORF177)and DNA primase(ORF183)等，这些DNA蛋白能够加速噬菌体复制，缩短噬菌体潜伏期并增加其爆发量；含有1个效果很好的holin穿孔素基因和5个lysin裂解酶基因，帮助噬菌体快速溶解宿主细胞膜和细胞壁。
本发明将噬菌体作为一种天然的抗菌剂(金黄色葡萄球菌)，在实验中，选择单株细菌以及混合菌株(5株等比例混合)来测试噬菌体的杀菌效果，结果表明该噬菌体的杀菌效果较为显著。本发明该噬菌体可裂解本研究所有的金黄色葡萄球菌(53株)，包括MRSA，并且具有较好的抑菌作用，控制时间长达24h，杀菌率约99.99％。另外，还选择了一种食物模型(牛奶)来评估噬菌体的杀菌效果，结果表明该噬菌体(MOI＝100)对牛奶中金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)的控制作用较好，在24h时细菌较少量达到了99.99％。在一些研究中，有选择MOI为10000或者更大的噬菌体来控制牛奶中的金黄色葡萄球菌，如金黄色葡萄球菌噬菌体LSA2308，其杀菌率(24h)达到97.79％。
有益效果：与现有技术相比较，本发明具有如下优点：
1、本发明分离获得能够高效裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体SapYZUalpha，具有独特的形态和基因组特征，是一种有效抑制金黄色葡萄球菌的噬菌体，该噬菌体SapYZUalpha可以应用于制备绿色、廉价的金黄色葡萄球菌抑制剂中。
2、本发明的噬菌体SapYZUalpha对金黄色葡萄球菌具有高效裂解活性，制备形成的抑菌剂能够有效控制各种基质中金黄色葡萄球菌的生长及生物被膜形成，有效减除金黄色葡萄球菌污染和传播风险。具体的：本发明噬菌体制备形成的生物抑菌剂能够在培养基、食物基质中有效控制金黄色葡萄球菌生长，同时能够抑制食品及生产设施表面金黄色葡萄球菌菌膜形成，并且制备简单，使用方便。通过传统方法很容易制备成喷洒液或淋洗液，对食品加工贮藏环境中的金黄色葡萄球菌进行清除，减少该菌对食品的污染；本发明涉及的噬菌体属于天然生物材料，基因组中不含任何毒力基因，没有毒副作用，可以作为食品及其储放设备、器皿、环境、原料固体表面等抑菌剂，用于食品及生产设施环境或保藏运输器具的除菌，降低金黄色葡萄球菌传播和引发食源性疾病的风险。
3、本发明的分离的一株金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha不仅可裂解来自不同地区的金黄色葡萄球菌(53/53)，并且能够裂解部分葡萄球菌(1/4)，显示该噬菌体具有较宽的宿主谱，但对葡萄球菌属外的细菌并无裂解能力(0/5)，表明该噬菌体具有高度专一性。另外，对单菌(ATCC29213)以及混合菌株(5株MRSA按1:1:1:1:1混合而成)的抑制时间长达24h，效果显著，杀菌率高达99.99％。此外，还选择了一种食物模型(牛奶)来评估噬菌体的杀菌效果，结果表明该噬菌体(MOI＝100)对牛奶中金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)的控制作用较好，在24h时抑菌效果高达99.9999％。该噬菌体可以单独使用或与其他物质配合使用，为消毒净化环境等提供一种安全、无毒的噬菌体消杀产品。
附图说明
图1噬菌体SapYZUalpha噬菌斑形态。
图2噬菌体SapYZUalpha透射电镜图片。
图3噬菌体SapYZUalpha全基因组序列特征。
图4噬菌体SapYZUalpha在培养基中对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用。图4A中阴性(对照组)表示未加噬菌体SapYZUalpha的金黄色葡萄球菌接种物37℃恒温培养过程中OD值变化；0.0001、0.01、1和100(试验组)为添加102PFU/mL、104PFU/mL、106PFU/mL、108PFU/mL噬菌体SapYZUalpha处理的金黄色葡萄球菌接种物在37℃恒温培养过程中OD值变化。图4B中阴性(对照组)表示未加噬菌体SapYZUalpha的金黄色葡萄球菌接种物37℃恒温培养过程中OD值变化；0.01、1和100(试验组)为添加104PFU/mL、106PFU/mL、108PFU/mL噬菌体SapYZUalpha处理的5株金黄色葡萄球菌混合悬液接种物在37℃恒温培养过程中OD值变化。
图5噬菌体SapYZUalpha体外抑制宿主菌生长效果图。图5A展示了噬菌体SapYZUalpha体外抑制金黄色葡萄球菌ATCC29213效果图。图5B为噬菌体SapYZUalpha对抗金黄色葡萄球菌的活/死菌染色荧光显微照片，孵育8h后的噬菌体/细菌悬液经SYTOtm9染色后为绿色，代表死菌和活菌；PI染色后为红色，仅代表死亡细菌；Merge组表示SYTOtm9和PI染色图的细菌重叠率，结果表明SapYZUalpha的抑菌率高达99.9999％。
图6噬菌体SapYZUalpha对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用。图中黑色柱状图(Control)表示未经噬菌体SapYZUalpha处理的对照组；白色柱状图(Blank)为未加菌液的空白对照组；柱0.0001、0.01、1和100分别为102、104、106、108PFU/mL浓度噬菌体处理的试验组。
图7噬菌体SapYZUalpha在脱脂乳模型中(25℃)对金黄色葡萄球菌的生长抑制作用。其中，图7A是乳中金黄色葡萄球菌的数量变化，图中阴性(对照组)表示未加噬菌体SapYZUalpha的金黄色葡萄球菌接种物37℃恒温培养过程中OD值变化；0.01、1和100(试验组)为添加104PFU/mL、106PFU/mL、108PFU/mL噬菌体SapYZUalpha处理的金黄色葡萄球菌接种物在37℃恒温培养过程中细菌数量的变化。图7B是乳中噬菌体的数量变化，0.01、1和100(试验组)为添加104PFU/mL、106PFU/mL、108PFU/mL噬菌体SapYZUalpha处理的金黄色葡萄球菌接种物在37℃恒温培养过程中噬菌体数量的变化。
图8噬菌体SapYZUalpha在脱脂乳模型中(4℃)对金黄色葡萄球菌的生长抑制作用。其中，8A是乳中金黄色葡萄球菌的数量变化，图中阴性(对照组)表示未加噬菌体SapYZUalpha的金黄色葡萄球菌接种物37℃恒温培养过程中OD值变化；0.01、1和100(试验组)为添加104PFU/mL、106PFU/mL、108PFU/mL噬菌体SapYZUalpha处理的金黄色葡萄球菌接种物在37℃恒温培养过程中细菌数量的变化。8B是乳中噬菌体的数量变化，0.01、1和100(试验组)为添加104PFU/mL、106PFU/mL、108PFU/mL噬菌体SapYZUalpha处理的金黄色葡萄球菌接种物在37℃恒温培养过程中噬菌体数量的变化。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
本发明中的原料和试剂如无特殊说明，均为商业化市售。
本发明试验用噬菌体宿主菌金黄色葡萄球菌(S.aureus，SA，菌株号：ATCC29213)，购自北京百欧博伟生物技术有限公司。
本发明表2中的验证性菌株，由扬州大学分离筛选提供或者商业购买。
SM缓冲液(1L：NaCl 5.8g，MgSO4·7H2O 2.0g，1M Tris-HCl(pH7.4)50mL)
实施例1
噬菌体分离及纯化制备
噬菌体分离
本发明中污水样品采自江苏扬州农贸市场。取500mL污水样品放置于高速离心机中10,000rpm离心10min，以除去污水中杂质，取3mL上清液加入到3mL2×LB液体培养基的试管中，同时加入100μL对数生长期的金黄色葡萄球菌ATCC29213，37℃振荡培养过夜，转速为130rpm。次日，将试管中的培养物全部转入10mL无菌离心管中，于8,000rpm离心机中离心10min，去除沉淀，取上清液过0.22μm无菌微孔滤膜，滤液即为噬菌体原液，放置4℃冰箱中保存，备用。
用SM缓冲液对噬菌体原液按体积比进行10倍连续稀释(10-1-10-7)，取100μL合适稀释度的噬菌体悬液与100μL对数生长期的金黄色葡萄球菌在室温下混合10min，再加入5mL LB半固体培养基，混匀，快速倾倒在事先制好的LB固体培养基上，制成双层平板，凝固后倒置放在37℃恒温培养箱中培养。
在上述出现噬菌斑的双层平板上挑取单个形态较大，边缘清晰的空斑至1mL SM缓冲液中，混匀。次日，用无菌的SM缓冲液对噬菌体液进行梯度稀释(10-1-10-7)，取合适稀释度的噬菌体液100μL与对数生长期的宿主菌(金黄色葡萄球菌ATCC29213)100μL在室温条件下混合10min后，加入5mL的TSA半固体培养基，颠倒混匀，快速倾倒在事先制备好的TSA固体培养基上，制成双层平板，将其放在无菌操作台上放置10min后，倒置于37℃恒温培养箱内培养。重复上述步骤3次，得到的噬菌斑大小基本一致时，即认为得到的是纯的噬菌体。提取单个噬菌体空斑于1mL SM缓冲液中，混匀，4℃放置24h；于次日取上清，用0.22μm微孔滤膜过滤，即得噬菌体分离液。
分离获得的噬菌体，用双层平板检测纯化噬菌体裂解效果。在5mL融化好的LB半固体培养基中加入100μL对数生长期的金黄色葡萄球菌ATCC 29213，立即倾倒在底层LB固体培养基上，在室温下放置10min，待培养基凝固后，在划分好的区域滴加10μL上述噬菌体分离液，在无菌操作台中放至培养基表面干燥，然后将平板倒置于37℃培养箱中培养，筛选在菌株平板上的裂解圈呈现明亮清澈的噬菌体，得到噬菌体SapYZUalpha。
噬菌体的纯化制备
取100μL金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha分离液(制备方法同上)与100μL对数期生长期的金黄色葡萄球菌液(ATCC 29213菌液)混合，室温放置10min，然后加入10mL LB液体培养基，37℃，150rpm恒温振荡培养过夜；将培养物转至灭菌离心管，5000×g离心10min后收集上清，通过0.22μm微孔滤膜过滤除菌；收集噬菌体增殖液，加0.93g PEG 8000，0.58g NaCl，摇匀至溶解，4℃放置过夜；4℃条件下10000×g离心20min，去上清，加0.5mLSM[1L：NaCl 5.8g，MgSO4.7H2O 2.0g，1M Tris-HCl(pH7.4)50mL]溶液，室温作用1h；加入等体积氯仿抽提30s；3000×g离心15min，回收含有噬菌体颗粒的亲水相，即为噬菌体纯化液；用双层平板检测噬菌体纯化液滴度，具体程序为：用SM缓冲液对噬菌体纯化液进行10倍梯度稀释(10-1-10-7)，取各稀释度的噬菌体稀释液100μL与100μL对数生长期的金黄色葡萄球菌在室温下混合10min，再加入5mL LB半固体培养基，混匀，倾倒在LB固体培养基上，凝固后倒置放在37℃恒温培养箱中培养12h，对形成的空斑进行人工计数，计算滴度。结果显示各个梯度的SapYZUalpha纯化液对菌株ATCC 29213滴度约达到109PFU/mL以上，且平板上形成的噬菌斑明亮清澈、大小均一(如图1所示)。
实施例2
噬菌体SapYZUalpha特征分析
噬菌体形态特征
用透射电镜观察实施例分离得到的噬菌体SapYZUalpha微观形态特征。将实施例1获得的噬菌体纯化液(109PFU/mL)浓缩到1010PFU/mL，取20uL的纯化后的噬菌体(1010pfu/mL)悬浮液滴加到200目碳涂层铜网上，吸附15min后取出铜网，自然干燥2～3min，用2％磷钨酸钠(pH 7.6)溶液染色，2min后吸干水分，自然干燥10min，在100kV电压下利用透射电镜(TEM,Hitachi H600A)观察，选取清晰的噬菌体图像进行拍照分析。SapYZUalpha微观形态如图2所示，噬菌体SapYZUalpha呈现头部对称，直径约为88.68nm，尾部长约176.89nm，具有伸缩性尾鞘，形态学特征归属肌尾噬菌体科(Myoviridae)。
噬菌体基因组特征
将上述实施例1制备的噬菌体SapYZUalpha纯化液(109PFU/mL)加DNase I至终浓度5μg/mL，RNase A至1μg/mL，37℃温育1h；加入EDTA(pH 8.0)至终浓度20mmol/L；加蛋白酶K至终浓度50μg/mL，加SDS至终浓度0.5％(mg/mL)，混匀，56℃孵育1h；加入等体积平衡酚(pH 8.0)振荡抽提，5000×g离心10min，收集上层水相；用等体积氯仿抽提，5000×g离心10min，收集上层水相；加入1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)，再加入两倍体积的无水乙醇沉淀核酸，-20℃过夜；4℃，12000×g离心10min；沉淀用70％乙醇和无水乙醇各洗涤一次，沉淀在空气中干燥10min；用适量TE(pH 8.0)混悬沉淀，应用GeneQuant核酸定量仪进行噬菌体DNA定量，-20℃保存；提取获得的噬菌体DNA进行Illumina Hiseq测序。
噬菌体DNA测序结果(如图3所示)显示SapYZUalpha基因组全长为135178bp，其中编码基因总长度为115881bp，平均长度为619bp，占总长的85.7％，GC含量为29.9％，拥有187个开放阅读框(ORFs)，其中1个ORFs在数据库中未发现同源性基因(ORF129)，186个ORFs编码蛋白同源性序列中包括129个假设蛋白编码序列、57个已知蛋白功能的序列。同时，基因组分析结果显示SapYZUalpha不存在任何已知的毒力基因。
对噬菌体SapYZUalpha的总基因序列分析显示，该噬菌体具有4大模块，包括DNA代谢和尾部形态发生模块、宿主细胞裂解和DNA包装模块、衣壳形态发生模块、DNA代谢和宿主细胞裂解模块。其中在DNA代谢和宿主细胞裂解模块中，DNA代谢基因由44个ORFs组成，与噬菌体qdsa001具有较高的核苷酸序列一致性(99.6％)，表明该模块交换发生在相同的形态家族中。另外，在噬菌体SapYZUalpha基因组中发现了2个宿主细胞裂解模块，其中包含1个holin基因、5个lysin基因和1个DNA包装基因，显示了该噬菌体具有较强的溶解活性。此外，噬菌体SapYZUalpha基因中包含了5个溶菌酶，进一步验证了较强的溶菌活性。值得注意的是，噬菌体SapYZUalpha基因中含有丰富且独特的DNA包装基因，该噬菌体具有较短的潜伏期和较大的爆发量离不开这些基因的循环合作。与Genbank数据库中噬菌体基因组数据比对显示SapYZUalpha含有新的terL(ORF117)基因，该基因与已知的金葡菌噬菌体的terL基因仅有大约63％的基因相似性，表明该噬菌体是一株新的噬菌体。结合噬菌体的生理生化特征，初步鉴定为金黄色葡萄球菌噬菌体，命名为金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SA)噬菌体SapYZUalpha。将该噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址：武汉武汉大学；保藏编号：CCTCC NO：M 2022023；保藏时间为2022年1月5日。
其中ORF117和ORF129的序列如表1所示。
表1
Figure BDA0003604187750000091
Figure BDA0003604187750000101
实施例3
噬菌体SapYZUalpha在培养基中的抑菌作用
将金黄色葡萄球菌ATCC 29213培养至对数生长期后，9000g下离心2min，利用PBS(pH 7.4)洗涤去除培养基，并调整细菌浓度为106CFU/mL，将该菌悬液(100uL)分别与噬菌体按照不同MOI(0.0001、0.01、1和100)等体积比例混合，取2uL混合液置于含有198uL TSB培养基的96孔板中，于37℃下培养24h，每隔3h置于OD590 nm下测定OD值，实验平行5次。
选择宿主谱中5株猪源金黄色葡萄球菌(M7、M10、M13、M18和S14，表2)培养至对数生长期后，9000g下离心2min，利用PBS(pH 7.4)洗涤去除培养基，并调整每株细菌浓度为106CFU/mL，按照1:1:1:1:1混合(混合菌悬液)，然后，将混菌悬液(100uL)分别与噬菌体的不同MOI比值(0.01、1和100)等体积混合(混合液)；取2uL混合液置于含有198uLTSB培养基的96孔板中，于37℃下培养24h，每隔3h置于OD590 nm下测定OD值，实验平行5次。
实施结果如图4A所示，在没有噬菌体处理的情况下，ATCC 29213在6h左右时达到对数期，并在6h后急剧上升。然而，在噬菌体SapYZUalpha不同MOI处理后，对比可明显发现，104、106和108PFU/mL的噬菌体(即MOI比值为0.01、1和100)处理时抑菌效果均可达到99.99％，并在24h内始终保持在较低的水平；此外，发现MOI为0.0001时，其OD600nm值略有上升，抑制能力逊色于另外3种MOI，但始终小于阳性对照。表明本发明中噬菌体SapYZUalpha在培养基中对金黄色葡萄球菌生长起到显著抑制作用(P<0.001)。噬菌体SapYZUalpha对混合菌株的抑制效果如图4B，未经添加噬菌体组随着时间的增加，细菌迅速生长并达到对数期。与之相比，添加噬菌体组对细菌的控制效果尤为显著，与单菌中添加噬菌体组的趋势相一致，对5种混合细菌的抑制率达到99.99％，且控制时间长达24h或者更甚。
同时本发明噬菌体SapYZUalpha在培养基中可对于53株金黄色葡萄球菌中，能够全部裂解，并且大部分效果普遍较好(+++)，然而除了葡萄球菌属以外的细菌，该噬菌体均不能裂解，说明该噬菌体具有高度特异性以及专一性。除此之外其还能够裂解3株表皮葡萄球菌中的1株，说明该噬菌体不仅能够裂解金黄色葡萄球菌属，还能裂解表皮葡萄球菌属，这表明其宿主谱广泛。此外，本发明中提供的52株金黄葡萄球菌是在广州、厦门养猪厂以及扬州的超市中分离出来的，而噬菌体是在扬州菜市场分离，两者地理位置跨度较大，也说明了噬菌体的裂解谱具有广泛性，详见表2。
表2
Figure BDA0003604187750000111
Figure BDA0003604187750000121
“+++”indicates that the plaque is clear and translucent.
“++”indicates that the plaque is slightly turbid.
“+”indicates plaque turbidity,and“-”indicates no plaque.
ATCC,American Type Culture Collection.
CICC,China Center of Industrial Culture Collection.
实施例4
噬菌体SapYZUalpha体外抑制宿主菌生长效果图。
将噬菌体SapYZUalpha与金黄色葡萄球菌ATCC 29213等体积(MOI＝1)加入液体LB中，在37℃中振荡(130rmp)培养24h。另外，仅加入等量的细菌(108CFU/mL)作为阳性对照，未加入细菌和噬菌体作为空白对照。
将金黄色葡萄球菌ATCC 29213以及混合菌(M7、M10、M13、M18和S14，5株细菌等比例混合)的浓度分别调整到106CFU/mL，噬菌体浓度调整为108PFU/mL，方便后续使用。在24孔板底部放入同等大小的爬片(无菌操作)，每孔加入1mL的LB液体，等待5min，以便爬片与孔板底部充分贴合。在每孔中加入20uL细菌悬液(106CFU/mL)和噬菌体悬液(108PFU/mL)，37℃下静置培养8h，备用。
通过使用活/死细菌染色试剂盒进行体系中活菌和死菌的计数测定。该试剂盒包含两种荧光染料，SYTO 9和PI，由Thermo Fisher Scientific公司(Waltham,Massachusetts,USA)订购。绿色SYTO 9染料可进入完整的细菌和细胞结构受损的细菌。然而，红色PI染料只能进入带有受损细胞膜或细胞壁的细菌。简而言之，将孵育好混合物以5000g离心5min并悬浮在0.85％NaCl中。接下来，进行细菌PI染色20min，然后用SYTOTM9复染10min。最后，使用共聚焦荧光显微镜(Leica,TCS SP8 STED，德国)观察细菌。
实施结果如图5A所示，图中仅加入细菌的液体呈现浑浊状，未加入任何物质的液体比较清澈，两种液体在视觉上对比较为明显。另外，观察到经过噬菌体SapYZUalpha处理后的细菌培养液比较清澈，与空白对照高度相似，这表明该噬菌体对培养基中细菌的抑制效果显著，且控制时间长达24h或者更甚。
实施结果如图5B所示，根据噬菌体SapYZUalpha对抗单菌(ATCC 29213)以及5株金黄色葡萄球菌混合菌株的活/死菌荧光染色图可观察到，PBS组(未加入噬菌体)中SYTOtm9和Merge染色结果均为绿色，而PI染色结果中未显示红色，SYTOtm9和PI染色图的细菌重叠率为0，表明所使用的菌液中不含死亡细胞。另外，与噬菌体SapYZUalpha共同孵育并染色后，单菌和混合菌的SYTOtm9和PI染色结果显示，两种荧光信号一致，并且两组细菌的Merge图中约有99.25％和99.00％的细菌区域显示为黄色，即在噬菌体SapYZUalpha的作用下大部分细菌被杀死，表明噬菌体SapYZUalpha对ATCC 29213和5株金黄色葡萄球菌混合菌株具有较强的抑菌活性，其抑菌率高达99.9999％。
实施例5
噬菌体SapYZUalpha对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用
将106CFU/mL的金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液分别与噬菌体的不同MOI比值(0.0001、0.01、1和100)等体积混合，取20uL的混合液接种到含有180uL TSB培养基的96孔板中，37℃下静置培养，24h培养后加入50uL新鲜TSB培养基，培养48h之后进行生物被膜测定。将96孔板中的培养基倒去之后，用PBS缓冲液清洗两次去除浮游细菌，将96孔板置于50℃下干燥1h。在96孔板中加入100uL 0.1％的结晶紫溶液。染色后，用PBS清洗两次，干燥后加入100uL 95％(v/v)的乙醇溶液。阴性对照为不含噬菌体的金黄色葡萄球菌培养组，空白对照为不含细菌和噬菌体的TSB培养组，实验每组3个重复，平行3次。然后将96孔板置于600nm下通过酶标仪测定数值。
实施结果如图6所示，加入102、104、106和108PFU/mL噬菌体(即MOI比值为0.0001、0.01、1和100)处理组的OD600nm在测定范围内均显著低于阴性对照组(p<0.001)，表明SapYZUalpha显著抑制了金黄色葡萄球菌生物膜形成。
实施例6
噬菌体SapYZUalpha牛奶中的抑菌作用
在超市中采购超高温杀菌的脱脂牛奶，在10mL牛奶中接种100uL的ATCC29213菌悬液(106CFU/mL)，分别加入104、106和108PFU/mL噬菌体悬浮液(MOI为0.01、1和100)，对照组仅加入106CFU/mL的ATCC 29213菌悬液：将实验组和对照组置于25℃下培养48h，在0、3、6、9、12、24、48h时取出1mL样品进行处理；将实验组和对照组置于4℃下培养7d，每隔1d取出1mL样品进行处理。将样品中的细菌和噬菌体进行分离：将样品置于离心机中6000g离心10min，将金葡菌ATCC 29213菌体和噬菌体分离，沉淀的菌体重悬至1mLPBS中，将离心和重悬操作重复三次。最后，收集菌体涂布至甘露醇盐琼脂培养基上，对金葡菌ATCC 29213进行活菌计数。收集三次分离操作的上清液，将上清液通过0.22um滤膜过滤后利用双层平板法对噬菌体进行计数。实验每组3个重复，平行3次。
实施结果如图7和图8所示，噬菌体SapYZUalpha在常温(25℃)和低温(4℃)贮藏条件下，对金黄色葡萄球菌均有杀菌作用。在25℃时，3种MOI(0.01、1、100)对乳中的金黄色葡萄球菌的抑制总数分别达到了98.85％、99.99％和99.99％，其中MOI为1和100处理时防治效果最好。在4℃下，3种MOI噬菌体处理时表现出不同的杀菌作用，但其细菌数量始终保持在对照之下。此外，发现在两种温度下噬菌体SapYZUalpha的数量在体系中保持稳定，表明了该噬菌体在对抗细菌之余能够保持其动态平衡。总的结果表明噬菌体SapYZUalpha在两种贮藏温度下均能够抑制金黄色葡萄球菌的生长且效果显著。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 一种金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 414
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gtgagcgctg aaagtttaag agatatgtta tctaagaaaa aaattgaaga cgaagataaa 60
cgtaaatata tagctgatgg atttatgtca ggtattacta aacttatgta tgactttaat 120
aaaaagattg acagagggga aatagaagta aaagacccta atgatttgta taaagtgttt 180
gttatcttcc aacaaatgca aaacttaatt acagatggtt ctgatggtgg cggtgctata 240
ccgcaattat caagaccaca acaagagctc tttgatgaaa taacaaatga gaatagtaaa 300
ggtgagaaag aagtagattt agagaagtta tctcaactat ctgctgatga tattactgct 360
atgattattg ataaagaaaa ggttatgaac gaagagaact caaatacatt ctaa 414
<210> 2
<211> 138
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atgaataagg aagaccctca acgactatct cctgacggga gagtaaaacc acaagtgatt 60
ggtggaagaa aaatccttat cctacgaaaa gtaggaatga caaatagtct ccactcgtat 120
cgaaagatag agctatag 138

Claims (11)

1.一种金黄色葡萄球菌（S. aureus，SA）噬菌体SapYZUalpha，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月5日，保藏编号为CCTCC NO：M 2022023。
2.一种权利要求1所述的噬菌体SapYZUalpha在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的噬菌体SapYZUalpha在抑制食品、食品生产环境或食品生产设施中金黄色葡萄球菌中的应用；所述食品包括乳制品、粮食、肉类、蔬菜、蛋类或由它们组合的加工制品。
4.一种权利要求1所述的噬菌体SapYZUalpha在制备抑制金黄色葡萄球菌及其生物膜的生物制剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生物制剂以噬菌体SapYZUalpha分离物或培养物作为活性成分。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生物制剂以噬菌体SapYZUalpha分离物或培养物作为活性成分，还包括制备制剂的辅料。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生物制剂用于清除食品及生产设施、环境、保藏器具、运输器具中的金黄色葡萄球菌及其生物膜污染。
8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生物制剂制备为：将噬菌体SapYZUalpha与对数生长期的金黄色葡萄球菌混合，室温放置，然后加到LB液体培养基，恒温振荡过夜培养；将培养物转至灭菌离心管，离心收集上清液，过滤，收集噬菌体增殖液，加PEG 8000和NaCl，摇匀至溶解，过夜；离心去上清液；加SM缓冲液，室温反应；使用氯仿抽提；离心回收含SapYZUalpha颗粒的亲水相，将获得的SapYZUalpha颗粒与SM缓冲液混合，制成噬菌体生物制剂母液。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述噬菌体SapYZUalpha的生物制剂母液用水稀释并制成喷洒液或淋洗液，单独或者配合其他杀菌剂使用，对生产环境、生产器具喷洒或洗涤，减少食品加工环境中金黄色葡萄球菌载量以及菌膜形成。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将纯化的噬菌体SapYZUalpha作为食品原料洗涤液添加剂，用于防止食品原料携带的金黄色葡萄球菌代谢和繁殖。
11.一种抑制金黄色葡萄球菌的生物制剂，其特征在于，其包括权利要求1所述的噬菌体SapYZUalpha或者其培养物作为活性成分，单独或复配形成制剂。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2503716C1 (ru) * 2012-09-27 2014-01-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ВИРУЛЕНТНЫЙ ШТАММ БАКТЕРИОФАГА, ОБЛАДАЮЩИЙ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ Staphylococcus aureus, ВКЛЮЧАЯ МУЛЬТИРЕЗИСТЕНТНЫЕ ШТАММЫ
CN105567647A (zh) * 2015-11-06 2016-05-11 中国海洋大学 一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体及其抑菌应用
CN109251898A (zh) * 2018-09-25 2019-01-22 吉林大学 一株金黄色葡萄球菌噬菌体及其用途
WO2022071718A1 (ko) * 2020-09-29 2022-04-07 주식회사 옵티팜 신규한 스타필로코커스균 특이 박테리오파지 opt-sc01 및 이를 포함하는 항균 조성물

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8043613B2 (en) * 2009-02-12 2011-10-25 Intron Biotechnology, Inc. Podoviriedae bacteriophage having killing activity specific to Staphylococcus aureus
CA2993336A1 (en) * 2015-07-23 2017-01-26 Enbiotix, Inc. Bacteriophage for treating staphylococcus infections

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2503716C1 (ru) * 2012-09-27 2014-01-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ВИРУЛЕНТНЫЙ ШТАММ БАКТЕРИОФАГА, ОБЛАДАЮЩИЙ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ Staphylococcus aureus, ВКЛЮЧАЯ МУЛЬТИРЕЗИСТЕНТНЫЕ ШТАММЫ
CN105567647A (zh) * 2015-11-06 2016-05-11 中国海洋大学 一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体及其抑菌应用
CN109251898A (zh) * 2018-09-25 2019-01-22 吉林大学 一株金黄色葡萄球菌噬菌体及其用途
WO2022071718A1 (ko) * 2020-09-29 2022-04-07 주식회사 옵티팜 신규한 스타필로코커스균 특이 박테리오파지 opt-sc01 및 이를 포함하는 항균 조성물

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