CN114796347B - 一种熟地黄的炮制方法及检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及原料药炮制技术领域，具体涉及一种熟地黄的炮制方法及检测方法。本发明提供的熟地黄的炮制方法，包括以下步骤：(1)将生地黄进行蒸制，得到蒸制地黄；所述蒸制的压力为0.35MPa～0.5MPa；(2)将所述蒸制地黄进行干燥，得到干燥地黄；所述干燥地黄的含水量不超过30％；所述干燥的温度为50～70℃；按照步骤(1)和(2)的顺序重复蒸制和干燥7次，得到所述熟地黄。本发明通过限定炮制过程中的蒸制压力以及蒸制、干燥的次数，使得制得熟地黄五种苷类成分(梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷)相对较高，多糖含量高；而且，可有效增加铁、锌、铜微量元素含量，同时降低铬、砷有害元素含量。

Description

一种熟地黄的炮制方法及检测方法
技术领域
本发明涉及原料药炮制技术领域，具体涉及一种熟地黄的炮制方法及检测方法。
背景技术
熟地为玄参科植物地黄的块根，经加工炮制而成，又名熟地黄或伏地。通常以酒、砂仁、陈皮为辅料经反复蒸晒，至内外色黑油润，质地柔软粘腻。熟地是一种上好中药材，具有补血滋阴功效，可用于血虚萎黄，眩晕，心悸失眠，月经不调和崩漏等症，亦可用于肾阴不足的潮热骨蒸、盗汗、遗精、消渴等症，是非处方药药品六味地黄丸主要成分之一。
目前，因种种原因，熟地的炮制工艺失传没能得以流传，现在可参照的黄酒蒸制地黄工艺主要为将洗净的生地黄放入桶内，加入黄酒搅拌均匀后静置，待黄酒被充分吸尽，取出，晾晒至外皮粘液稍干时，切厚片，干燥即得熟地黄。该炮制工艺中黄酒质量不可控，且操作缺乏客观可控的技术参数指导，无法精确控制其工艺，致使人为因素偏多，所得熟地黄中五种苷类成分(梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷)含量相差巨大，有益微量元素含量偏低，有害微量元素超标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种熟地黄的炮制方法及检测方法，本发明提供的炮制方法可有效增加熟地黄中铁、锌、铜微量元素含量，同时降低铬、砷有害元素含量；此外，梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷及多糖含量较高。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种熟地黄的炮制方法，包括以下步骤：
(1)将生地黄进行蒸制，得到蒸制地黄；所述蒸制的压力为0.35MPa～0.5MPa；
(2)将所述蒸制地黄进行干燥，得到干燥地黄；所述干燥地黄的含水量不超过30％；所述干燥的温度为50～70℃；
按照步骤(1)和(2)的顺序重复蒸制和干燥7次，得到所述熟地黄。
优选地，所述蒸制的时间为3～4h。
优选地，所述干燥的过程中，每隔2h翻料1次。
本发明还提供了一种熟地黄的检测方法，包括以下步骤：
所述有效成分包括梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷或多糖微量元素；所述微量元素包括铁、砷、锌、铝、镁、铬或铜元素；其特征在于：
所述熟地黄中梓醇、地黄苷D或益母草苷的检测方法，包括以下步骤：
将熟地黄进行高效液相色谱检测，通过梓醇、地黄苷D或益母草苷的标准曲线计算，得到熟地黄中梓醇、地黄苷D或益母草苷的含量；
所述熟地黄中毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的测定方法，包括以下步骤：
将熟地黄进行高效液相色谱检测，通过毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的标准曲线计算，得到熟地黄中毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的含量；
所述熟地黄中多糖的测定方法，包括以下步骤：
用水提取熟地黄，得到提取液；
将所述提取液进行醇沉，得到熟地黄多糖提取物；
采用苯酚-硫酸法对所述熟地黄多糖提取物进行测定，得到所述熟地黄中多糖的含量；
所述熟地黄中微量元素的测定方法，包括以下步骤：
将熟地黄和硝酸溶液混合，进行消解，所得消解液经电感耦合等离子体质谱检测，得到所述熟地黄中微量元素的含量。
优选地，熟地黄中梓醇、地黄苷D或益母草苷的检测过程中，所述高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为C18色谱柱；流动相体系包括流动相A和流动相B，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为质量百分含量为0.3％的磷酸水溶液；流动相A和流动相B的体积比为3：97；检测波长为210nm，柱温为35℃。
优选地，熟地黄中毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的检测过程中，所述高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为C18色谱柱；流动相体系包括流动相A和流动相B，所述流动相A为乙腈，所述流动相B为质量百分含量为0.3％的磷酸水溶液；所述流动相A和流动相B的体积比为5：95；检测波长为334nm，柱温为35℃。
优选地，熟地黄中多糖的测定过程中，所述醇沉的试剂包括乙醇水溶液；所述乙醇水溶液的体积浓度为80％。
优选地，熟地黄中多糖的测定过程中，所述消解的温度为190～230℃。
优选地，熟地黄中多糖的测定过程中，所述硝酸溶液的质量浓度为1％～3％；所述熟地黄的质量和硝酸溶液的体积比为0.3～0.5g:3mL。
本发明提供了一种熟地黄的炮制方法，包括以下步骤：(1)将生地黄进行蒸制，得到蒸制地黄；所述蒸制的压力为0.35MPa～0.5MPa；(2)将所述蒸制地黄进行干燥，得到干燥地黄；所述干燥地黄的含水量不超过30％；所述干燥的温度为50～70℃；按照步骤(1)和(2)的顺序重复蒸制和干燥7次，得到所述熟地黄。本发明通过限定炮制过程中的蒸制压力以及蒸制、干燥的次数，使得制得熟地黄五种苷类成分(梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷)相对较高，多糖含量高，而且，可有效增加铁、锌、铜微量元素含量，同时降低铬、砷有害元素含量。
附图说明
图1为地黄苷D、梓醇、益母草苷对照品色谱图；
图2为毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品色谱图；
图3为梓醇对照品的标准曲线；
图4为地黄苷D对照品的标准曲线；
图5为益母草对照品的标准曲线；
图6为毛蕊花糖苷对照品的标准曲线；
图7为异毛蕊花糖苷对照品的标准曲线；
图8为梓醇、地黄苷D、益母草含量变化趋势；
图9为毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量变化趋势；
图10为葡萄糖标准曲线；
图11为随蒸晒次数的增加熟地黄多糖含量变化趋势；
图12为元素铁、砷、锌、铝、镁、铬、铜标准曲线；
图13为随蒸晒次数的增加铝、铁、镁微量元素含量变化趋势；
图14为随蒸晒次数的增加铜、锌、铬、砷微量元素含量变化趋势。
具体实施方式
本发明提供了一种熟地黄的炮制方法，包括以下步骤：
(1)将生地黄进行蒸制，得到蒸制地黄；所述蒸制的压力为0.35MPa～0.5MPa；
(2)将所述蒸制地黄进行干燥，得到干燥地黄；所述干燥地黄的含水量不超过30％；所述干燥的温度为50～70℃；
按照步骤(1)和(2)的顺序重复蒸制和干燥7次，得到所述熟地黄。
在本发明中，若没有特殊说明，所采用的试剂均为本领域技术人员所熟知的市售商品。
本发明将生地黄进行蒸制，得到蒸制地黄。
本发明中，所述蒸制前，优选还包括将生地黄洗净。
本发明中，所述洗净优选包括拣选和清洗；所述拣选优选包括将生地黄人工挑出杂质、泥土、砂石等杂物。在本发明中，所述清洗优选在滚筒式清洗机中进行；本发明对所述清洗的次数和时间不做具体限定，只要能够清洗至见本色，无尘土杂质为准。
本发明中，所述蒸制的压力为0.35MPa～0.5MPa，优选为0.35～0.45MPa，进一步优选为0.40MPa。本发明中，所述蒸制的时间优选为3～4h，进一步优选为4h。本发明中，所述蒸制优选在蒸煮锅进行；所述蒸煮锅优选为ZYG-700型蒸煮锅。
得到蒸制地黄后，本发明将所述蒸制地黄进行干燥，得到干燥地黄。
本发明中，所述干燥地黄的含水量不超过30％。
本发明中，所述干燥的温度优选为50～70℃，进一步优选为60～70℃。本发明中，所述干燥的时间优选为3.5～4.5天，进一步优选为4天。本发明中，所述干燥优选在太阳棚中进行；所述太阳棚优选设置具有换气设施；所述干燥的过程中，每2h翻料1次。本发明中，所述干燥优选将蒸制地黄单层铺开进行干燥。
本发明中，按照步骤(1)和(2)的顺序重复蒸制和干燥7次，得到所述熟地黄。本发明中，重复1次“蒸制”、“干燥”过程所得到的熟地黄记为“一蒸一晒”熟地黄，依次进行，所得熟地黄分别记为“一蒸一晒”熟地黄、“二蒸二晒”熟地黄、“三蒸三晒”熟地黄、“四蒸四晒”熟地黄、“五蒸五晒”熟地黄、“六蒸六晒”熟地黄、“七蒸七晒”熟地黄。
本发明还提供了一种熟地黄中有效成分的检测方法，包括以下步骤：
本发明中，所述有效成分包括梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷或多糖微量元素；所述微量元素包括铁、砷、锌、铝、镁、铬或铜元素；
所述熟地黄中梓醇、地黄苷D或益母草苷的检测方法，包括以下步骤：
将熟地黄进行高效液相色谱检测，通过梓醇、地黄苷D或益母草苷的标准曲线计算，得到熟地黄中梓醇、地黄苷D或益母草苷的含量。
测定熟地黄中梓醇、地黄苷D和益母草苷含量时，所述高效液相色谱的条件包括：色谱柱优选为C18色谱柱，本发明实施例中具体优选为Waters
Figure BDA0003625528890000051
C18色谱柱；；所述色谱柱的尺寸优选为4.6mm×250mm×5μm；流动相优选包括流动相A和流动相B；所述流动相A优选为乙腈；所述流动相B优选为质量百分含量为0.3％的磷酸水溶液；所述流动相A和流动相B的体积比优选为3：97；检测波长优选为334nm，柱温优选为35℃；进样量优选为20μL；流速优选为1mL/min；理论塔板数按梓醇、地黄苷D、益母草苷峰计算不低于5000；洗脱方式优选为为等度洗脱。
本发明中，所述熟地黄中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷含量的测定，包括以下步骤：
将熟地黄进行高效液相色谱检测，通过毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的标准曲线计算，得到熟地黄中毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的含量；
测定熟地黄中毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷含量时，所述高效液相色谱的条件如下：色谱柱优选为C18色谱柱，本发明实施例中色谱柱具体优选为Waters
Figure BDA0003625528890000052
C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相优选包括流动相A和流动相B；所述流动相A优选为乙腈；所述流动相B优选为质量百分含量为0.3％的磷酸水溶液；所述流动相A和流动相B的体积比优选为5：95；检测波长优选为334nm，柱温优选为35℃；进样量优选为20μL；流速优选为1mL/min；理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算优选为不低于5000；洗脱方式优选为等度洗脱。
在本发明中，所述多糖含量的测定，包括以下步骤：
用水提取熟地黄，得到提取液；
将所述提取液进行醇沉，得到熟地黄多糖提取物；
采用苯酚-硫酸法对所述熟地黄多糖提取物进行测定，得到所述熟地黄中多糖含量。
本发明中，所述熟地黄的质量和水的体积比优选为3～5g：100mL，进一步优选为5g：100mL。本发明中，所述提取优选为加热回流；所述加热回流的温度优选为100～120℃，进一步优选为100～110℃。本发明中，所述提取的时间优选为1.5～2.5h，进一步优选为2h。本发明中，所述提取的次数优选为2次。
本发明中，所述醇沉的试剂优选包括乙醇水溶液；所述乙醇水溶液的体积浓度优选为80％。
本发明中，所述醇沉后，本发明优选还包括将醇沉所得固体进行减压干燥。本发明对所述减压干燥的参数不做具体限定，采用本领域熟知的操作即可。
本发明对所述苯酚-硫酸法测定熟地黄中多糖的含量不做具体限定，采用本领域技术人员熟知的操作进行测定即可。
本发明中，所述熟地黄中微量元素含量的测定，优选包括以下步骤：：
将熟地黄和硝酸溶液混合，进行消解，所得消解样品经电感耦合等离子体质谱检测，得到所述熟地黄中微量元素含量。
本发明中，所述微量元素包括铁、砷、锌、铝、镁、铬或铜元素。
本发明中，所述硝酸溶液的质量浓度优选为1％～3％，进一步优选为2％～3％。本发明中，所述熟地黄的质量和硝酸溶液的体积比优选为0.3～0.5g:3mL，进一步优选为0.5g:3mL。
本发明中，所述消解的温度优选为190～230℃，进一步优选为200～220℃，所述消解的时间优选为50～70min，进一步优选为50～60min。
所述消解后，本发明优选还包括将消解所得体系进行静置，得到消解样品；所述静置的时间优选为30～40min。
本发明中，所述静置优选得到残渣和消解样品，弃去残渣，取消解样品。
本发明中，所述消解样品进行检测前，优选还包括将消解样品进行冲洗，以去除残留的硝酸。本发明中，所述冲洗的试剂优选为超纯水，冲洗次数优选为3次。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的实施例中，具体仪器、试剂以及待测样品的规格如下所示：
仪器：高效液相色谱仪Waters 2695(沃特世科技有限公司)、分析天平XPE205(梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司)、安捷伦电感耦合等离子体质谱仪(7800，安捷伦科技(中国)有限公司)、微波消解仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)；电子天平(ES-2002H，长沙湘平科技发展有限公司)；数显恒温水浴锅(HH-4，国华电器有限公司)；紫外分光仪(ZF-7，上海金达生化仪器有限公司)；旋转蒸发仪(RE52CS，上海亚荣生化仪器厂)；循环水式多用真空泵(SBH-ⅢA，郑州长城科工贸有限公司)；离心机(TGL-16，长城湘仪离心机仪器有限公司)；电热鼓风干燥箱(DHG-9240A，上海比朗仪器有限公司)；安捷伦电感耦合等离子体质谱仪(7800，安捷伦科技(中国)有限公司)、微波消解仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)。
试剂：梓醇对照品(纯度≥98％)购自北京索莱宝科技有限公司；毛蕊花糖苷对照品(纯度≥98％)购自北京索莱宝科技有限公司；益母草苷对照品(纯度≥98％)购自北京索莱宝科技有限公司；地黄苷D对照品(纯度≥98％)购自北京索莱宝科技有限公司；异毛蕊花糖苷对照品(纯度≥98％)购自北京索莱宝科技有限公司；乙腈(MERCK公司，色谱纯)；磷酸(山东西亚化学工业有限公司)；水为自制纯水；浓硫酸、苯酚、蒸馏水、无水乙醇、葡萄糖标准品。砷单元素标准溶液(GBW08611-18126，中国计量科学研究院)；锌单元素标准溶液(199018，国家有色金属及电子材料分析测试中心)、铝单元素标准溶液(19106，中国计量科学研究院)；镁单元素标准溶液(19C008，国家有色金属及电子材料分析测试中心)；铬单元素标准溶液(08614-17012，中国计量科学研究院)；铁单元素标准溶液(29018，国家有色金属及电子材料分析测试中心)；铜单元素标准溶液(GBW(E)080122-17071，中国计量科学研究院)；硝酸(分析纯)。
高效液相色谱的条件：
测定熟地黄中梓醇、地黄苷D和益母草苷的含量时，高效液相色谱的条件如下：色谱柱为Waters
Figure BDA0003625528890000081
C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为质量百分含量为0.3％的磷酸水溶液；流动相A和流动相B的体积比为3：97；检测波长为210nm，柱温为35℃；理论塔板数按梓醇、地黄苷D、益母草苷峰计算不低于5000。
测定熟地黄中毛蕊花糖苷或异毛蕊花糖苷的含量时，高效液相色谱的条件如下：色谱柱为Waters
Figure BDA0003625528890000082
C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为乙腈；流动相B为质量百分含量为0.3％的磷酸水溶液；流动相A和流动相B的体积比为5：95；检测波长为334nm，柱温为35℃；理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算不低于5000。
实施例1
(1)拣选：取原药材生地黄250kg上挑拣台，按《拣选岗位标准操作规程》，将杂物、泥土砂石等挑出置废弃物容器，将净地黄置洁净框内。
(2)清洗：将拣选后的地黄取置滚筒式清洗机内，用流动饮用水将药材洗净至无尘土杂质。
(3)按照《ZYG-700型蒸煮锅标准操作规程》，用塑料铲把已清洗合格的地黄装入锅内。盖好锅盖，打开全自动蒸汽发生装置，设置蒸汽压力约为0.35MP，蒸制4h，得到蒸制地黄。
(4)干燥：将蒸制地黄转至太阳棚(温度在50～70℃并有良好的换气设施)均匀平铺在洁净的篷布上面，控制厚度以物料单层铺开，执行《干燥岗位标准操作规程》，干燥过程中每2h翻料一次，并记录；经4天时间太阳棚曝晒干燥至快速水分测定仪检测水分不高于30％时进行第二遍蒸制。
以上述工艺步骤反复蒸晒9次即得“九蒸九晒”熟地黄。
对比例1
将洗净的生地黄放入桶内，加入黄酒搅拌均匀后静置，待黄酒被充分吸尽，取出，晾晒至外皮粘液稍干时，切厚片，干燥(干燥温度为50℃)，即得黄酒蒸制地黄。
实施例2
一、溶液的配制
(1)混合对照品溶液1：
取梓醇对照品5mg、地黄苷D与益母草苷对照品各7mg分别至50mL容量瓶中，然后用体积浓度25％的甲醇水溶液定容，得到梓醇、地黄苷D和益母草苷的储备液，然后吸取梓醇、地黄苷D和益母草苷的储备液适量，用体积浓度25％的甲醇水溶液进行逐级稀释，制成50μg/mL的混合对照品溶液1。
(2)混合对照品溶液2：
取异毛蕊花糖苷对照品、毛蕊花糖苷对照品各5mg分别至50mL容量瓶中，用用体积浓度25％的甲醇水溶液稀释定容后，然后用用体积浓度25％的甲醇水溶液再进行稀释至50μg/mL。
(3)供试品溶液：
取熟地黄500mg置于具塞锥形瓶中，精密加入25％体积浓度的甲醇水溶液20mL溶解，超声提取1h后过滤，再经0.45μm滤膜过滤取续滤液，作为供试品溶液，待上机检测。
(4)空白溶液：体积浓度为25％的甲醇水溶液。
图1为地黄苷D、梓醇、益母草苷对照品(混合对照品溶液1)色谱图，
图2为毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品(混合对照品溶液2)色谱图，从图1～图2可知：本发明提供的检测方法可以准确检测出地黄苷D、梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷。
二、线性回归方程
移取适量混合对照品溶液1和适量混合对照品溶液2，按进样量依次进样2μL、4μL、8μL、10μL、12μL、16μL、20μL，然后，按照高效液相色谱的条件进行检测、分析。以各成分色谱峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标分别绘制5对照品的标准曲线，见图3～7。从图3～7可知，梓醇的线性回归方法为Y＝17628X+12770(r＝0.996)；地黄苷D的线性回归方法为Y＝18156X-4812(r＝0.999)；益母草苷的线性回归方法为Y＝6186.6X-7553.8(r＝0.998)；毛蕊花糖苷的线性回归方法为Y＝85133X-32678(r＝1)；异毛蕊花糖苷的线性回归方法为Y＝81597X-35173(r＝1)。由图3～图7可知，线性良好。
三、精密度试验
(1)精密度试验1：
取适量混合对照品溶液1于进样小瓶中，按“测定熟地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷的含量时，所述高效液相色谱的条件”，连续进样6针，结果显示梓醇峰面积RSD 0.16％，地黄苷D峰面积RSD 0.17％，益母草苷峰面积RSD 0.24％，上述数据表明本试验仪器精密度良好。
(2)精密度试验2：
取适量混合对照品溶液2于进样小瓶中，按“测定熟地黄中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量时，所述高效液相色谱的条件”，连续进样6针，结果显示毛蕊花糖苷峰面积RSD0.24％，毛蕊花糖苷峰面积RSD 0.22％，上述数据表明本试验仪器精密度良好。
四、重复性试验
精密称取同一批熟地黄6份，按“一、(3)供试品溶液”的制备方法得到6份供试品溶液，进行高效液相色谱检测，测得各成分含量RSD值分别为梓醇RSD 6.89％、地黄苷DRSD5.36％、益母草苷RSD 3.21％、毛蕊花糖苷RSD 6.62％、异毛蕊花糖苷RSD 7.54％。
五、稳定性试验
取适量供试品品溶液分别于0，2，4，8，16，20h进样，进行高效液相色谱检测，结果梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷供试品溶液RSD分别为2.29％、0.69％、0.81％、1.97％、1.83％。结果表明供试品溶液在20h内稳定性良好。
六、加标回收率试验
取适量供试品品溶液，分别精密加入梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品溶液0.2、0.4、0.6mL，进行高效液相色谱检测，每份样品均做平行样，结果梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷平均回收率分别为980.08％(RSD0.36％)、99.36％(RSD1.07％)、100.08％(RSD 0.86％)、98.39％(RSD 0.19％)、101.09％(RSD0.52％)。
七、样品检测
将按照实施例1的炮制方法，每次干燥后的熟地黄(“一蒸一晒～九蒸九晒”)和“黄酒蒸制地黄”按“一、(3)供试品溶液”的制备方法制得供试品溶液，并按照“高效液相色谱的条件”进行检测，各成分含量变化趋势见图8～9，从图8可知：随蒸晒次数的增加益母草苷含量呈现先上升后下降的趋势，地黄苷D含量变化相对稳定，而梓醇含量相对较低，随着蒸晒次数的增加梓醇含量不断降低。从图9可知：随蒸晒次数的增加毛蕊花糖苷含量呈现先上升后下降的趋势，异毛蕊花糖苷含量变化相对稳定。
实施例3
一、多糖含量的测定
(1)多糖的提取
精密称量5g熟地黄置于锥形瓶中加100mL纯水溶解，沸水浴上回流提取，每次2h，提取2次，八层纱布趁热过滤，转移上层澄清溶液至圆底烧瓶内，减压浓缩至50mL左右，醇沉时含醇量为80％，减压干燥，得到熟地黄多糖，称量熟地黄多糖，计算多糖提取率。
Figure BDA0003625528890000111
m为熟地黄多糖提取物质量(g)
M为熟地黄样品质量(g)
(2)多糖含量的测定
①葡萄糖标准溶液的配制
将无水葡萄糖干燥至恒重，精密称取10mg置于100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀备用，浓度为0.1mg/mL。
②葡萄糖标准曲线
分别量取配制好的葡萄糖标准品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL置于试管中，补加蒸馏水至1mL，然后分别向试管中加入5％苯酚溶液1mL，浓硫酸5mL，充分摇匀，100℃水浴保温20min，取出试管，冷却至室温，同时做一组空白对照(以1mL蒸馏水、1mL 5％苯酚溶液、5mL浓硫酸按上述操作制备的混合液作为空白)。使用紫外分光光度法，空白组调零，于490nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标(X)、吸光度(Y)为纵坐标绘制葡萄糖标准曲线，计算线性回归方程，见图10，从图10可知，葡萄糖标准曲线方程为Y＝10.672X+0.0128(r＝0.999)。
精密称取熟地黄多糖5mg，加蒸馏水定容至50mL，精密移取1mL至试管中，分别加入5％苯酚溶液1mL，浓硫酸5mL，充分振摇后水浴锅中100℃保温20min，取出试管，冷却至室温，同时做一空白对照(以1mL蒸馏水、1mL5％苯酚溶液、5mL浓硫酸按上述操作制备的混合液作为空白)，于490nm处测定吸光度值，代入葡萄糖标准曲线方程，计算熟地黄多糖含量。
熟地黄多糖提取率按“(1)多糖的提取式I”计算，得到“一蒸一晒-九蒸九晒”分别为3.05％，6.41％，11.59％，5.51％，10.23％，10.35％，11.84％，9.02％，18.37％。随蒸晒次数的增加熟地黄多糖含量呈上升趋势，如图11。
实施例4
一、微量元素的测定
(1)微量元素含量的测定
①铁、砷、锌、铝、镁、铬、铜标准溶液的配制
精密移取1mL砷、锌、铜、镁、铝、铬单元素标准溶液于同一100mL聚四氟乙烯容量瓶中，加入质量浓度为2％硝酸溶液定容至刻度，摇匀备用，浓度均为10μg/mL。
②铁、砷、锌、铝、镁、铬、铜标准曲线
分别量取配制好砷、锌、铝、镁、铬、铜标准品溶液0.1，0.2，0.4，0.5，1.0，2.0mL置于100mL聚四氟乙烯容量瓶中，补加质量浓度为2％硝酸溶液至100mL，摇匀。然后分别上机测定，同时做一组空白对照(以蒸馏水作为空白)。
使用电感耦合等离子体质谱法，载气为氩气，以待测元素浓度为横坐标(X)、待测元素与所选内标元素响应信号值的比值(Y)为纵坐标绘制铁、砷、锌、铝、镁、铬、铜标准曲线，计算线性回归方程，见图12，从图12可知：铁单元素标准曲线方程为Y＝7.018E-2X+7.406E-1(r＝0.997)，铜单元素标准曲线方程为Y＝1.004E-1X+5.290E-2(r＝1.000)，铝单元素标准曲线方程为Y＝2.337E-3x+1.959E-2(r＝0.999)，锌单元素标准曲线方程为Y＝2.204E-2X+5.121E-2(r＝0.989)，砷单元素标准曲线方程为Y＝1.787E-2X+8.729E-4(r＝0.999)，镁单元素标准曲线方程为Y＝8.576E-3X+1.348E-1(r＝0.998)，铬单元素标准曲线方程为Y＝9.511E-2X+5.462E-1(r＝0.999)。
(3)试样溶液
精密称量0.3g熟地黄粉末于消解管中，准确加入3mL质量浓度为2％的硝酸溶液，置于微波消解仪上进行样品消解54min，温度为200℃，待消解完成后室温下放置30min。将消解后的样品使用超纯水冲洗3遍，移入50mL容量瓶，定容至刻度。摇匀备用。
(4)检测
将空白溶液和试样溶液分别注入电感耦合等离子体质谱仪中，测定待测元素和内标元素响应信号值，根据标准曲线得到消解液中待测元素的浓度。
试样中待测元素的含量计算公式。
Figure BDA0003625528890000131
式中：
X-试样中待测元素含量，单位为毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/L)；
ρ-试样溶液中被测元素质量浓度，单位为微克每升(μg/L)；
ρ0-试样空白溶液中被测元素质量浓度，单位为微克每升(μg/L)；
V-试样消化液定容体积，单位为毫升(mL)；
f-试样稀释倍数；
m-试样称取质量或移液体积，单位为克或毫升(g/mL)；
1000-换算系数。
图13～14为铁、砷、锌、铝、镁、铬、铜元素在“一蒸一晒～九蒸九晒”中的含量变化图，从图13～14可知：随蒸晒次数的增加锌、铜、铁、镁微量元素含量呈现先上升后下降的趋势，铬、砷含量随着蒸晒次数逐渐降低。其中铁、铝、锌是所测定七种元素中含量相对较高的元素，铁元素作为血红蛋白的核心部分，可以补充机体对Fe的大量需求；在七蒸七晒炮制工艺下，Fe与Zn含量较高，不仅可以满足机体对铁与锌的需求，同时还可以调整体内铜、锌比值，增强机体氨基酸的代谢能力。同时，随炮制工艺中蒸晒次数的增加，有害元素铬、砷含量不断降低，可减少有毒物质在人体软组织中的积累。
综上所述，通过测定，可知“七蒸七晒”得到的熟地黄中梓醇质量百分含量0.015％、地黄苷D质量百分含量为0.099％、益母草苷质量百分含量为0.071％、毛蕊花糖苷质量百分含量为0.009％、异毛蕊花糖苷质量百分含量为0.006％、多糖质量百分含量为30.10％及微量元素铁的质量百分含量为1.763％、锌元素质量百分含量为0.052％、铬元素质量百分含量为0.013％。
应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种熟地黄的炮制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将生地黄进行蒸制，得到蒸制地黄；所述蒸制的压力为0.35MPa～0.5MPa；
(2)将所述蒸制地黄进行干燥，得到干燥地黄；所述干燥地黄的含水量不超过30％；所述干燥的温度为50～70℃；每次蒸制的时间为3～4h；
按照步骤(1)和(2)的顺序重复蒸制和干燥7次，得到所述熟地黄。
2.根据权利要求1所述的炮制方法，其特征在于，每次干燥的过程中，每隔2h翻料1次。
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