CN114796005A - 抗皱纹多肽化合物和包含该化合物的化妆品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明专利申请涉及一种抗皱纹多肽化合物和包含该化合物的化妆品及其制备方法。本申请首次公开了银柴胡环肽用于制备减轻脸部皱纹的化妆品的用途。体外实验证实银柴胡环肽具有显著的MMP‑1抑制作用。并以银柴胡环肽为抗皱成分制备了抗皱纹化妆品。动物实验证实所得化妆品具有良好的抗皱纹效果，可以有效减轻实验动物皱纹产生，最终起到一定的抗衰老作用。

Description

抗皱纹多肽化合物和包含该化合物的化妆品及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种抗皱纹多肽化合物以及包含该化合物的外用抗皱纹化妆品及其制备工艺和用途。

背景技术

衰老又称老化，通常是指在正常状况下生物体发育成熟后，随年龄增长机体发生的功能性和器质性衰退的渐进过程〔符移才、金锡鹏，皮肤衰老和细胞衰老[J]·临床皮肤科杂志， 2000；29(4)：245-7〕。

皮肤老化的主要原因之一是真皮层的结构发生了改变。导致皮肤真皮结构改变的原因有很多种。其中，由于一些外界因素作用激活体内的基质金属蛋白酶(matrix metal-oproteinase，MMPs)可导致皮肤真皮中支撑皮肤结构的胶原蛋白和弹性蛋白被过度降解从而使皮肤出现皱缩、无弹性等衰老症状。

MMPs是一组Zn²⁺依赖性内肽酶，目前已发现26种，广泛分布于植物、脊椎动物、无脊椎动物中，在细胞外基质(ECM)降解过程中几乎能降解ECM的所有成分。MMPs根据作用底物及结构的不同分为五大类：基质金属蛋白酶-1、明胶酶、基质溶解素、膜型MMP、其他类型MMP。

MMPs的功能主要有：①降解真皮中的胶原蛋白及弹性蛋白。②调节促血管生新生因子以及产生内源型的血管新生抑制因子，通过溶解周边的基质来促进血管新生。MMPs也可以为上皮、肿瘤细胞与基质相互作用的通信系统。③调节细胞间的黏附，肿瘤细胞之间及宿主细胞之间的黏附在肿瘤侵袭与转移中起重要作用。④MMPs可以激活有潜在活性的蛋白质，即血浆纤维蛋白质和层黏连蛋白。

MMP-1又称基质金属蛋白酶-1，成纤维细胞基质金属蛋白酶-1或间质基质金属蛋白酶-1 (EC号为3.4.24.7)，是最早被纯化和cDNA克隆的脊椎动物基质金属蛋白酶，可降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ和X型胶原明胶及蛋白多糖。MMP-1在体外可由许多种正常细胞(如成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞和上皮细胞)产生。但在正常休眠组织中MMP-1水平极低，一般难以检测。在体内，MMP-1主要在生理和病理条件下，组织生长、重构期间表达，广泛发挥其生物学功能。血管内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞、泡沫细胞和T淋巴细胞等多种细胞可以合成MMP-1，并以酶原形式分泌到细胞外后被激活。

在正常成人组织中MMP-1表达量极少，但在病理情况下如创伤愈合、修复或重塑过程中， MMP-1表达量增加〔Constance E，et.al，Matrix metalloproteinases:a tail of afrog that became a prince，Nature Reviews Molecular Cell Biology volume 3，207–214(2002)〕

细胞外基质(ECM)是由大分子构成的错综复杂的网络。为细胞的生存及活动提供适宜的场所，并通过信号转导系统影响细胞的形状、代谢、功能、迁移、增殖和分化。在维持正常组织结构与功能及细胞生长、分化过程中起到非常重要的作用。ECM主要成分包括胶原蛋白、弹性蛋白、非胶原(基质)糖蛋白和蛋白多糖。ECM影响细胞的存活、死亡、增殖和分化。

ECM的降解主要依靠蛋白水解酶。而MMPs家族在4类蛋白水解酶中是最为重要的一组。目前发现的26种几乎能降解ECM的所有成分，但不同酶的降解效率不同。其中MMP-1主要参与Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解。

胶原蛋白是皮肤组织的主要蛋白质成分，是ECM中的主要分子化合物。胶原蛋白和免疫球蛋白一样，富有多样性和组织分布的特异性，是与各组织、器官功能有关的功能性蛋白。其组织特异性表现在：皮肤中主要含有Ⅰ型和Ⅲ型胶原；具有很强的抗张性〔尹贝立，胡杰, 胶原蛋白与近代化妆品[J]·北京日化，1999；(1)：10-1〕。

胶原蛋白是构成人体结缔组织的蛋白质，占人体总蛋白含量的三分之一以上，而皮肤中的胶原蛋白则高达85％以上。这些胶原蛋白质不仅为其周围的细胞提供了营养代谢的场所，同时也与其周围细胞的形态有关。当体内MMP-1过度表达时，会降解ECM的胶原蛋白。真皮层结构由于胶原蛋白的分解，而遭到破坏。

真皮层结构的改变是皮肤老化的主要原因，衰老皮肤的真皮厚度变薄，密度降低。衰老皮肤中Ⅲ型胶原合成会减少，当皮肤衰老时，胶原应力传导下降，抗剪切力减弱。MMP-1是降解Ⅰ型和Ⅲ型胶原最主要的酶。当MMP-1过度表达时，特异性降解细胞外基质成分，破坏胶原纤维和弹力纤维的正常结构〔A Hatamochi，et al。Analysis of collagen geneexpression by cultured fibroblasts in morphoea[J].Br J Dermatol，1992Mar；126(3):216-21〕，因此MMP-1是导致皮肤出现皱缩细纹等衰老症状最主要的酶。

目前尚未出现一种安全有效的抑制MMP-1的物质，从而达到减少皮肤皱纹产生的作用。

柴胡，中药名。为《中国药典》收录的草药，药用部位为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根。春、秋二季采挖，除去茎叶及泥沙，干燥。柴胡是常用解表药。别名地熏、山菜、菇草、柴草，性味苦、微寒，归肝、胆经。有和解表里，疏肝升阳之功效。用于感冒发热、寒热往来、疟疾、肝郁气滞、胸肋胀痛、脱肛、子宫脱垂、月经不调。

银柴胡，别名银胡，山菜根，山马踏菜根，牛肚根，沙参儿，土参等，其基原植物为石竹科繁缕属植物银柴胡Stellaria dichotoma，其干燥根作为正品药材银柴胡。分布于宁夏、内蒙古、陕西、甘肃等地[方文培，张泽荣.中国植物志：第26卷[M].北京：科学出版社，2004：120]，味甘性寒，是我国常用的清虚热、除疳热的传统良药。

银柴胡和柴胡是完全不同的两种植物。在现代医学研究中认为银柴胡味甘，微寒。归肝、胃经。清虚热，除疳热。用于阴虚发热，骨蒸劳热，小儿疳热。[国家药典委员会，中国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2020：330]。

肽类成分广泛分布于动植物中，并具有多种药理活性和潜在的药用价值。该类物质在银柴胡中主要以环状肽形式存在，目前被鉴定出的有环五肽、环六肽、环八肽和环九肽化合物。

刘明生，陈英杰等(刘明生等，银柴胡环肽类研究，药学学报，1992，27(9)：667-669) 从宁夏产银柴胡中分离出1个新的环六肽化合物，命名为银柴胡环肽，经鉴定MS m/z518。结构为

但是，迄今为止，并未公开此环肽的任何用途。

Gupta Rajul等，测试了在银柴胡中分离得到的环肽类化合物(Dichotomin A-K)的活性(Gupta Rajul，et al，Pharmacological active Cyclic Peptides from theRoots of Stellaria dichotoma，International Journal of PharmaceuticalErudition，May 2012， 2(1)，17-23)。

发现从银柴胡中分离得到的环肽A，B，C和E显示出细胞毒活性.A，B，C和E显示出对P-388淋巴细胞白血病细胞的生长抑制活性。IC₅₀值分别为2.5μg/ml，3.5μg/ml，5μg/ml 和2μg/ml。而D对环氧合酶有较强的抑制作用(72.6％抑制浓度为100μM)。

环肽H和环肽I显示细胞毒活性。环肽H和I显示出对P-388细胞的中等生长抑制活性。 IC₅₀值为3μg/ml和2.3μg/ml。

环肽J和K对大鼠主动脉有中度血管舒张作用。

但是尚未有任何文献和专利报道上述银柴胡环肽的任何活性。目前已知，银柴胡环肽为环状六肽，CAS编号：137476-73-4，分子量为518.6，氨基酸序列如下：

化学结构如下:

发明内容

鉴于前述情况，本发明专利申请对银柴胡环肽做了进一步的研究，发现其具有良好的皮肤外用安全性和MMP-1抑制活性，并进一步将其制备成化妆品，可以在一定程度上消除皱纹，显示出一定的抗衰老作用。

本发明首先提供银柴胡环肽用于制备抑制MMP-1化妆品的用途。所述抑制MMP-1化妆品的用途为减轻皱纹，甚至消除皱纹。

所述抑制MMP-1化妆品的用途进一步表现为抗衰老。

本申请所述的银柴胡环肽，可以根据现有技术(刘明生等，银柴胡环肽类研究，药学学报，1992，27(9)：667-669)提供的制备工艺制备，也可以直接购买获得。

上述刘明生等发表的文献公开的提取工艺如下：

取银柴胡根粉5.0kg(20目)用甲醇冷渗，回收MeOH，得提取物1750g(收率，35％)，将其悬浮于水中，经乙醚萃取后，再用水饱和的正丁醇萃取，得提取物60g(收率，l.2％)。正丁醇提取物经硅胶柱层析，用不同比例氯仿-甲醇梯度洗脱，从氯仿-甲醇(l00:16)洗脱部分得粗品，经吡啶反复重结晶得该化合物纯品。

更进一步的，本发明所述的银柴胡环肽，可以进一步制备成具有抗皱纹功效的眼霜，面霜，面膜，精华液等化妆品。

所述化妆品含有银柴胡环肽的质量百分数为0.01％-10％。

包含银柴胡环肽的化妆品还包括助剂，以及其他功效成分的一种或几种。

所述助剂选自油质物质、蜡、表面活性剂，成膜剂、富脂剂、脂平衡剂(refattingagent)、稳定剂、活性生物成因物质、防腐剂、防腐促进剂、芳香剂或香料、增香剂、载体、溶剂或稀释剂、粘度改进剂、增稠/胶凝剂、pH值调节剂、抗氧化剂、螯合剂、收敛剂、皮肤调理剂、消泡剂以及其他助剂。

所述油质物质可以是矿物油或动物来源的油或植物来源的油或合成油。矿物油选自石蜡油或凡士林油；动物来源的油选角鲨烷、羊毛蜡；植物来源的油选自液体三甘油酯、向日葵油、玉米油、大豆油、米糠油、霍霍巴油、巴巴苏油、南瓜油、葡萄籽油、芝麻油、核桃油、杏仁油、澳洲坚果油、鳄梨油、甜杏仁油、酢浆草油、蓖麻油、辛酸/癸酸的三甘油酯、橄榄油、花生油、菜籽油、摩洛哥坚果油、阿比西尼亚油和椰子油；合成油选自鸭子尾脂腺油、异链烷烃、线性和/或支化脂肪醇和脂肪酸酯，优选含6-18，优选8-10个碳原子的格尔伯特醇；线性(C₆-C₁₃)脂肪酸与线性(C₆-C₂₀)脂肪醇的酯；酯例如己二酸二辛酯、二聚物二亚油酸二异丙酯；丙二醇/二辛酸酯或蜡例如蜂蜡、石蜡或微晶蜡，单独地或与亲水性蜡例如鲸蜡硬脂醇组合；氟化和全氟化油；氟化硅油或上述化合物的混合物。

所述蜡选自巴西棕榈蜡、蜂蜡、小烛树蜡、合成蜡、石蜡、微晶蜡、氢化植物油、氢化蓖麻油、米糠蜡、鲸蜡基聚二甲基硅氧烷、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷或它们的混合物。

所述表面活性剂为阴离子表面活性剂，阳离子表面活性剂，非离子表面活性剂或两性表面活性剂。

阴离子表面活性剂选自月桂醇聚醚硫酸钠(sodium laureth sulfate)、十二烷基硫酸钠、十三烷醇聚醚硫酸钠(sodium trideceth sulfate)、肉豆蔻基硫酸钠、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、油烯基琥珀酸钠、月桂基磺基琥珀酸铵、月桂基醚磺基琥珀酸钠、月桂基硫酸铵、月桂基醚硫酸铵、十二烷基苯磺酸钠、三乙醇胺十二烷基苯磺酸盐、可可基羟乙基磺酸钠、月桂基羟乙基磺酸钠、C20-C22醇磷酸酯，月桂基醚羧酸和N-月桂基肌氨酸钠。

阳离子表面活性剂可以是聚季铵，PVP-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯共聚物、瓜尔胶-羟基丙基三铵氯化物、藻酸钙、藻酸铵、阳离子纤维素衍生物；阳离子淀粉；二烯丙基铵盐和丙烯酰胺的共聚物；季铵化乙烯基吡咯烷酮/乙烯基咪唑聚合物；聚二醇和胺的缩合产物；季铵化胶原多肽；季铵化小麦多肽；聚乙烯亚胺；阳离子硅酮聚合物，例如氨基甲基硅油；己二酸和二甲基氨基羟丙基二亚乙基三胺的共聚物；多氨基聚酰胺和阳离子壳多糖衍生物，例如壳聚糖。

非离子表面活性剂选自脂肪醇乙氧基化物(烷基聚乙二醇)，烷基酚聚乙二醇，烷基硫醇聚乙二醇，脂肪胺乙氧基化物(烷基氨基聚乙二醇)，脂肪酸乙氧基化物(酰基聚乙二醇)，聚丙二醇乙氧基化物脂肪酸羟烷基酰胺，N-烷氧基多羟基-脂肪酸酰胺，蔗糖酯，山梨糖醇酯，聚二醇醚，聚氧乙烯鲸蜡基硬脂基双醚或它们的混合物。

两性表面活性剂选自N-(C₈-C₁₈)-酰基氨基丙基-N，N-二甲基乙酰甜菜碱，(C₁₂-C₁₈)-烷基 -二甲基磺丙基甜菜碱，1-(β-羧基甲氧基乙基)-1-(羧甲基)-2-月桂基咪唑啉的钠盐； (C₁₂-C₁₈)-烷基-二甲基胺氧化物，脂肪酸酰氨基烷基二甲基胺氧化物或它们的混合物。

所述化妆品包含成膜剂。成膜剂是在皮肤、毛发或指甲上产生连续膜的材料例如合成或天然聚合物和它们的衍生物。

所述成膜剂根据预期的用途而选自苯基苯并咪唑磺酸的盐，水溶性聚氨酯，例如C₁₀-聚氨基甲酰基聚甘油酯，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)共聚物，例如乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物或PVP/二十碳烯共聚物，乙烯基吡咯烷酮/烯烃共聚物，例如，VP/二十碳烯共聚物或VP/十六碳烯共聚物，PVM/MA共聚物或其酯，马来化聚丙烯聚合物，水溶性丙烯酸聚合物/共聚物或其酯或盐，例如丙烯酸/甲基丙烯酸的偏酯共聚物，聚烷基倍半硅氧烷，聚丙烯酰胺，水溶性纤维素，例如羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素，水溶性季铵，聚季铵，羧基乙烯基聚合物，例如卡波姆及其盐，多糖，例如聚糊精和葡聚糖，乙酸乙烯酯/ 巴豆酸乙烯酯。

所述化妆品包含富脂剂和/或脂平衡剂。作为富脂剂，可以羊毛脂，聚乙氧基化羊毛脂衍生物，卵磷脂，卵磷脂衍生物，非乙氧基化和聚乙氧基化或酰基化羊毛脂和卵磷脂衍生物，多元醇脂肪酸酯例如油酸甘油酯，单、二和三甘油酯和/或脂肪酸烷醇酰胺。

所述化妆品包含稳定剂。稳定剂选自硬脂酸铝、异硬脂酸/豆蔻酸铝、硬脂酸镁、可可酸镁、棕榈酸锌、硬脂酸锌或它们的组合。

所述化妆品包含活性生物成因物质。选自芦荟胶原水解产物、芦荟提取物、红没药醇、尿囊素、水解小麦蛋白质、水解丝、水解角质、氨基酸和其衍生物、糖蛋白和它们的组合。

所述化妆品包含防腐剂、防腐促进剂。

防腐剂选自羟基苯甲酸苄酯、羟苯丁酯、羟苯乙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、羟苯甲酯、羟苯丙酯、丁基氨基甲酸碘代丙炔基酯、甲基二溴戊二腈、DMDM乙内酰脲、苄醇、吡罗克酮乙醇胺盐、苯氧基乙醇、戊二醇、苯甲酸/苯甲酸钠、山梨酸/山梨酸钾和它们的组合。其它有机酸也可以用来提供抗微生物保护。

防腐促进剂选自茴香酸、乳酸或其钠盐、脱水山梨醇辛酸酯、乙基己基甘油、辛甘醇、辛二醇或它们的混合物。

所述化妆品包含芳香剂或香料。所述芳香剂或香料可以为各香精化合物，例如酯、醚、醛、酮、醇和烃类型的合成产物可以用作芳香剂或香料。具体选自乙酸苄酯、异丁酸苯氧基乙酯、乙酸对叔丁基环己酯、乙酸里哪酯、乙酸二甲基苄基原酯、乙酸苯乙酯、苯甲酸芳樟酯、甲酸苄酯、甘氨酸乙基甲基苯酯、丙酸烯丙基环己酯、丙酸苏合香酯和水杨酸苄酯。

香料可以是含有可以从植物或动物源获得的天然气味物质的混合物，例如玫瑰香精，柠檬香精。大多用作香味组分的较低挥发度的精油也合适作为香料油。

所述化妆品包含增香剂。所述增香剂选自：1-乙酰萘、1-癸烯-3-醇、对-甲基苯甲醛、对-丙烯基苯基甲基醚、阿斯巴甜、苯甲醛、溴肉桂醛、环己基氨基磺酸钙、葛缕醇、肉桂醛、 3，7-二甲基-6-辛烯酸、果糖、葡萄糖、葡糖基甜菊苷、蜂蜜、3-甲基-1-丁醇、4-羟基-3-甲氧基-1-丙烯基苯、麦芽糖、薄荷醇、桉油精、麝香草酚、鼠李糖、糖精、甜菊苷、山梨糖醇、蔗糖、糖精钠、水杨酸甲酯、香草醛、木糖醇。

所述化妆品包含载体、溶剂或稀释剂。所述溶剂是化妆可接受的。所述溶剂或稀释剂为水、与水混溶的低级烷基醇。所述低级烷基醇为C₁-C₅烷基一元醇，优选地C₂-C₃烷基醇。优选乙醇和异丙醇，所述低级烷基醇可以为C₁-C₅烷基二元醇，例如乙二醇，丙二醇，丁二醇，可以为三元醇，例如甘油。

所述化妆品包含粘度改进剂或增稠和/或胶凝剂。

粘度改进剂优选是增稠聚合物。所述增稠聚合物选自丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的两种或更多种单体的共聚物；乙烯基吡咯烷酮和丙烯酰基二甲基牛磺酸铵的共聚物；丙烯酰基二甲基牛磺酸铵和选自甲基丙烯酸和乙氧基化脂肪醇的酯的单体的共聚物，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素，羟丙基瓜尔胶，聚丙烯酸甘油酯，聚甲基丙烯酸甘油酯，至少一种C2、C3或C4-烯烃和苯乙烯的共聚物，聚氨酯，羟丙基淀粉磷酸酯，聚丙烯酰胺，刺槐豆面粉，树胶例如瓜尔胶、刺梧桐树胶、黄原胶或脱氢黄原胶，角叉菜胶，海藻酸钠，水解玉米淀粉；聚氧化乙烯、脂肪醇和饱和亚甲基二苯基二异氰酸酯的共聚物(例如PEG-150/ 硬脂醇/SMDI共聚物)、卡波姆、月桂醇聚醚-2(laureth-2)，或它们的混合物。

所述化妆品包含pH值调节剂。所述pH值调节剂选自碳酸氢铵、氨、单乙醇胺、氢氧化铵、碳酸铵、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇、2-氨基-2-乙基-1，3-丙二醇、三(羟基甲基)-氨基甲烷、2-氨基-1-丁醇、三-(2-羟丙基)胺、2，2-亚氨基双乙醇、赖氨酸、胍(碳酸胍)、四氢-1，4-嗪、2-氨基-5-胍-戊酸、2-氨基乙烷磺酸、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基乙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、三异丙醇胺、葡糖胺、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂和氧化镁或它们的混合物，以及可用于化妆品中的有机酸和无机酸。

所述化妆品包含抗氧化剂。所述抗氧化剂选自氨基酸、肽、糖、咪唑、类胡萝卜素、胡萝卜素、咖啡单宁酸、硫辛酸、硫醇、硫醇糖基酯、硫醇N-乙酰酯、硫醇甲酯、硫醇乙酯、硫醇丙酯、硫醇戊酯、硫醇丁酯、丁羟甲苯、丁羟茴醚、硫醇月桂酯、硫醇棕榈酰酯、硫醇油烯基酯、硫醇亚油酸酯、硫醇胆甾醇基酯、硫醇甘油酯、硫代二丙酸二月桂酯、硫代二丙酸二硬脂基酯、硫代二丙酸、醇酸、脂肪酸、叶酸、维生素C、维生素E、维生素A、二苯乙烯、它们的衍生物和组合。

所述化妆品包含螯合剂。所述螯合剂选自：EDTA，辛酰氧肟酸，草酸酯衍生物，羟基乙基亚氨基二乙酸二钠，半乳糖醛酸和衍生物，葡糖醛酸和衍生物，月桂酰基乙二胺三乙酸，二羟基苯甲酸甲酯，亚乙基二胺二琥珀酸三钠，植酸，衣康酸，丙烷三元羧酸，柠檬酸和衍生物(例如柠檬酸二铵，柠檬酸铋和乙酰基三己基柠檬酸2,6-二羧基吡啶)，磷酸和膦酸衍生物(例如二亚乙基三胺五亚甲基膦酸，氮杂环庚烷二磷酸二钠，甘油聚醚-26磷酸酯，焦磷酸二钠，水杨酸磷酸二钠，氨基三亚甲基膦酸，膦酸基丁烷三羧酸，氧化三膦酰基甲基胺钾，β-丙氨酸二乙酸或环己烷二胺四乙酸、草酸酯衍生物、水杨酸磷酸二钠或它们的组合。

所述化妆品包含收敛剂。所述收敛剂选自氧化镁，氧化铝，高岭土，二氧化钛，二氧化锆，氧化锌，氧化物水合物，氧化铝水合物(勃姆石)和氢氧化物，钙、镁、铝、钛、锆或锌的氯代水合物。

所述化妆品包含皮肤调理剂。皮肤调理剂是指软化剂、润湿剂和闭塞剂，是帮助维持皮肤的柔软和光滑外观或帮助改善干燥或破损皮肤的状况的成分。

皮肤调理剂选自脂肪酸N-烷基多羟基烷基酰胺，棕榈酸乙基己酯，脂肪酸，三甘油酯，泛醇，尿囊素，红没药醇，透明质酸，甘油，山梨醇和其水溶液，脲和它们的衍生物，海藻糖，赤藓酮糖，牛油果树果脂，吡咯烷酮羧酸(PCA)和其盐，聚葡糖醛酸，葡糖酸内酯，矿脂，辅酶Q10和泛醇。

所述化妆品包含消泡剂。消泡剂选自醇(例如乙醇、异丙醇或丙醇)，烷氧基醇(例如月桂醇聚醚-5丁基醚)，硅油和树脂(例如聚二甲基硅氧烷和其衍生物例如鲸蜡基聚二甲基硅氧烷、苯基聚二甲基硅氧烷、PEG/PPG-12/18聚二甲基硅氧烷和氢三氟丙基聚二甲基硅氧烷、三甲基甲硅烷氧基硅酸酯/聚二甲基硅氧烷交联聚合物或聚硅酮-10)和疏水性二氧化硅衍生物(例如甲硅烷基化二氧化硅)。

本发明的有益效果：本申请所述银柴胡环肽以及包括银柴胡环肽的化妆品通过皮肤施用，对于mmp-1具有非常好的抑制作用，与对照组蒸馏水相比，其抑制效果随着浓度的增加而增加，当浓度达到10％时，其体外抑制效果可达约40％。进而可以有效延缓皮肤中胶原蛋白的减少，减少皱纹的发生，并且在模型动物中，显示出良好的皱纹改善效果。最终起到一定程度的抗衰老作用。

附图说明：

附图1：不同浓度银柴胡环肽水溶液对于MMP-1的抑制作用

附图2：不同浓度银柴胡环肽水溶液和实施例4-7的化妆品对于胶带剥离的裸鼠皱纹模型的改善作用

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1银柴胡环肽水溶液多次皮肤刺激试验(参照中国专利CN 102429846 B测试方法实施)

一、材料和方法

1、受试物为10％银柴胡环肽水溶液

2、受试动物：普通级白色新西兰种家兔4只

3、试验方法：试验前24h将动物背部脊柱两侧毛剃掉，剃毛范围左右各约3cm×3cm，试验时将受试物0.5mL均匀涂抹于左侧约2.5cm×2.5cm皮肤上，右侧用蒸馏水作对照。每天涂抹一次，连续7d。从第二天开始，每天涂抹前去毛，用温水清洗，1h后观察皮肤反应并进行皮肤刺激反应评分，试验结束后，分别计算14天总积分、14天每只动物积分均值，每天每只动物积分，并进行皮肤刺激强度分级。

二、试验结果

表1多次皮肤刺激性试验结果

如上表数据可以看出，与对照组蒸馏水相比，10％银柴胡环肽水溶液涂抹于试验动物后，并未出现任何红斑，水肿现象。外用安全性良好。

实施例2银柴胡环肽水溶液皮肤变态反应试验(参照中国专利CN 102429846 B测试方法及2015年版化妆品安全技术规范)

一、材料与方法

1.受试物配制方法：10％银柴胡环肽水溶液

2.受试动物：普通级英国种白化豚鼠，分成三组，受试物实验组和阳性物实验组，每组20只，受试物对照组20只。

3.试验方法：

诱导接触：将诱导用的受试物0.2ml涂在受试物实验组动物左侧剃毛2cm×2cm区域的皮肤上，以二层纱布，一层玻璃纸覆盖，以无刺激胶布固定，封闭6h。第7d和第14d以同样方法重复一次。阳性物实验组用4.0％2，4-二硝基氯代苯丙酮溶液，受试物对照组用溶剂丙酮做同样的处理。

激发接触：在末次诱导后14d，将激发用受试物0.2ml涂在受试物实验组和受试物对照组动物右侧已在24h前剃毛2cm×2cm区域的皮肤上，以二层纱布，一层玻璃纸覆盖，以无刺激胶布固定封闭6h，阳性物实验组1.2％2，4-二硝基氯代苯丙酮溶液做同样的激发接触，受试物对照组用溶剂做同样的处理。于激发接触后24h、48小时观察皮肤反应，进行皮肤反应评分和致敏强度分级。

4.试验结果：各组动物皮肤反应情况24、48小时观察见表

表2豚鼠局部皮肤变态反应试验结果

由上表数据可知，10％银柴胡环肽水溶液对于普通级英国种白化豚鼠皮肤致敏率为0，无皮肤刺激。

实施例3银柴胡环肽MMP-1抑制活性(参照中国专利CN 111182887 A测试方法实施)

在皮肤成纤维细胞中考察不同浓度(0.01％-10％)银柴胡环肽溶液的基质金属蛋白酶 -1(MMP-1)抑制作用。

将人皮肤成纤维细胞以3×10⁴CFU/孔的密度放入96孔板中，并在37℃下以FGM-2培养基孵育24小时。除去培养基，然后将180微升的新鲜培养基分配到每个孔中，并向其中添加20微升的包括不同浓度的银柴胡环肽或蒸馏水(对照)，随后在37℃孵育24小时。在24小时培养后，收集上清液，并使用人综述MMP-1试剂盒测量培养基中的基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的数量。

如下为96孔板分组示意图及实验结果，其中数字代表所加入样品中银柴胡环肽的浓度。

表3 96孔板分组示意图及实验结果

结果，在用银柴胡环肽溶液处理的组中，基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的产生在24小时培养后随银柴胡环肽的浓度增加而逐渐减少，当银柴胡环肽浓度达到10％时，基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的产生减少达约40％，而作为对照组的蒸馏水，MMP-1产生不减少。

实施例4银柴胡环肽抗皱纹面膜的制备

处方：

制备方法：

1)芦荟提取物制备：取新鲜芦荟叶适量，削去外皮，切块，放到榨汁机里榨取汁液，用四层纱布过滤，弃掉滤渣，滤液置冰箱(3-6℃)中保存10h，然后再用四层纱布过滤，弃去渣，所得汁液即为芦荟提取物，备用；

2)称取聚乙烯醇、海藻酸钠，加入蒸馏水适量，加热溶胀完全，作为成膜材料；

3)称取氧化锌、高岭土，与甘油、橄榄油研磨混合均匀，加到步骤2)所制的成膜材料中，作为基质；

4)在步骤3)所得基质中，加入蜂蜜、芦荟提取物、7％山梨醇溶液、银柴胡环肽，玫瑰香精，搅拌混合均匀，即可。

5)取羟苯乙酯，用适量95％乙醇溶解，加入到步骤4)所得物料中，以蒸馏水定容至100ml，搅拌均匀，即得。

实施例5银柴胡环肽眼霜(眼贴膜)的制备

处方：

原料	配方1	配方2	配方3	配方4
					聚二甲基硅氧烷	1％	1％	1％	1％
棕榈酸乙基己酯	2％	2％	2％	2％
					C20-C22醇磷酸酯	2％	2％	2％	2％
羟苯甲酯	1％	1％	1％	1％
					蜂蜜	0.8％	0.8％	0.8％	0.8％
牛油果树果脂	2％	2％	2％	2％
					甘油	4％	4％	4％	4％
丙二醇	2％	2％	2％	2％
					透明质酸	8％	8％	8％	8％
聚丙烯酰胺	1％	1％	1％	1％
					银柴胡环肽	1％	5％	10％	/
三乙醇胺	0.8％	0.8％	0.8％	0.8％
					柠檬香精	0.01％	0.01％	0.01％	0.01％
蒸馏水定容至	100ml	100ml	100ml	100ml

制备方法：

(1)将聚二甲基硅氧烷、棕榈酸乙基己酯、C20-C22醇磷酸酯、羟苯甲酯、蜂蜜、牛油果树果脂置于油相锅中，搅拌并加热至80-90℃，搅拌至物料完全溶解，得到物料A。

(2)主锅中放入处方量70％蒸馏水，将甘油、丙二醇、透明质酸、聚丙烯酰胺、银柴胡环肽，搅拌至均匀，加热至80～90℃，保温20-30min，为水相。

(3)将物料A抽入主锅中，再加入三乙醇胺，柠檬香精，蒸馏水定容至100ml，在80～90℃温度下，真空搅拌，得到物料B。

(4)待物料B降温至40～45℃，搅拌至均匀，出料即得。

实施例6银柴胡环肽抗皱纹精华液的制备

处方：

原料	配方1	配方2	配方3	配方4
					银柴胡环肽	1％	5％	10％	/
维生素C	5％	5％	5％	5％
					透明质酸	1％	1％	1％	1％
蒸馏水定容	100ml	100ml	100ml	100ml

制备方法：

1)取70％蒸馏水，依次加入维生素C，银柴胡环肽，搅拌，溶解，得澄清透明溶液；

2)在步骤1)所得溶液中加入透明质酸，搅拌，溶解，以蒸馏水定容至全量，即得。

实施例7银柴胡环肽抗皱纹面霜的制备

制备方法:

(1)将鲸蜡硬脂醇，聚氧乙烯鲸蜡基硬脂基双醚、丁羟甲苯、维生素E，依次投入乳化机中，加热至70-85℃，通过2000～2800r/min的高速旋转，使物料充分破碎，混合均匀后保温，制得油相相；

(2)将银柴胡环肽，红没药醇，乳酸，乳酸钠，海藻糖，黄原胶，70％处方量蒸馏水依次投入乳化锅中，加热至70～80℃，通过2000～2800r/min的高速旋转混合均匀，保温15～30min，使其充分溶解，制得水相；

(3)将步骤(1)制得的油相和步骤(2)制得的水相依次抽入到均质器中，均质5～15min，搅拌速率为2000-4000rpm，而后保温搅拌15～45min，搅拌速率为40～50r/min；

(4)将步骤(3)中的乳液冷却至40～45℃，加入羟苯乙酯乙醇溶液，搅拌均匀，得到抗皱纹面霜。

实施例8动物模型抗皱效果评价

参照中国专利CN 102686223 A测试方法，使用屏障破坏皱纹小鼠模型，测试不同浓度银柴胡环肽水溶液，以及实施例4-7所制备化妆品皱纹改善的效果。

模型的建立：

按照松永等的方法(Matsunaga,Y.等，Br.J.Dermatol.，156:884(2007))从开始投与D- 谷氨酸的5天后每周进行3次胶带剥离。简而言之，将按照无毛小鼠(HR-1系)背部长度剪切的 24mm宽的玻璃纸胶带，均匀贴附于整个背部，然后剥离。边使用水分丧失测定器测定屏障破坏的程度边调节该胶带的贴附/剥离循环的次数，以便角质层水分蒸散量达到约4～8mg/cm²/h。例如，对未处理的无毛小鼠实施所述贴附/剥离循环操作时，在初次处理中重复4次，在第2、 3次处理中重复5～6次，在第2周及以后的处理中重复6～8次，从而使角质层水分蒸散量上升至约4～8mg/cm²/h。若持续地每周3次进行所述贴附/剥离循环操作，则大约在第3周左右，无毛小鼠背部开始出现与正中线垂直的皱纹。

样品的给予和皱纹的评价方法：

在胶带剥离处理之后，每日在小鼠左侧背部分别涂布100μL样品溶液，所述溶液是不同浓度银柴胡环肽水溶液，以及实施例4-7所制备化妆品，另外，右侧背部作为阴性对照，同样地涂布蒸馏水，各组的n数设为5。

给予样品4周后，用Bissett等的方法(Bissett,D.L.等，Photochemistry andPhotobiology，46:367(1987))的改进法按照下述表4所示的评价标准评价皱纹的程度。

表4：皱纹的评分标准：

表5试验分组及评分结果(n＝5)

皱纹的评价结果：

如上表5数据所示，与对照组相比，银柴胡环肽水溶液可以显著减轻由胶带剥离所导致的皱纹形成，并且其效果随着浓度的增加而增加。对于实施例4-7的化妆品均具有不同程度的减轻皱纹形成的效果，尤其以加入银柴胡环肽的化妆品的效果最优，并且随着加入浓度的增加而效果增加。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.银柴胡环肽用于制备抑制皮肤皱纹生成的化妆品的用途，其特征在于，所述银柴胡环肽化学结构如下：

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述化妆品通过抑制基质金属蛋白酶-1发挥作用。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述化妆品通过抑制皮肤皱纹产生，起到抗皮肤衰老的作用。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述化妆品中含有银柴胡环肽的浓度为0.01％-10％。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述化妆品中含有银柴胡环肽的浓度为1％-10％。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述化妆品为面膜，眼霜，面霜，精华液中的一种。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述面膜的处方和制备方法如下：处方：

制备方法：

1)芦荟提取物制备：取新鲜芦荟叶适量，削去外皮，切块，放到榨汁机里榨取汁液，用四层纱布过滤，弃掉滤渣，滤液置冰箱(3-6℃)中保存10h，然后再用四层纱布过滤，弃去渣，所得汁液即为芦荟提取物，备用；

2)称取聚乙烯醇、海藻酸钠，加入蒸馏水适量，加热溶胀完全，作为成膜材料；

3)称取氧化锌、高岭土，与甘油、橄榄油研磨混合均匀，加到步骤2)所制的成膜材料中，作为基质；

4)在步骤3)所得基质中，加入蜂蜜、芦荟提取物、7％山梨醇溶液、银柴胡环肽，玫瑰香精，搅拌混合均匀，即可。

5)取羟苯乙酯，用适量95％乙醇溶解，加入到步骤4)所得物料中，以蒸馏水定容至100ml，搅拌均匀，即得。

8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述眼霜的处方和制备方法如下：

原料 配方 聚二甲基硅氧烷 1％ 棕榈酸乙基己酯 2％ C20-C22醇磷酸酯 2％ 羟苯甲酯 1％ 蜂蜜 0.8％ 牛油果树果脂 2％ 甘油 4％ 丙二醇 2％ 透明质酸 8％ 聚丙烯酰胺 1％ 银柴胡环肽 10％ 三乙醇胺 0.8％ 柠檬香精 0.01％ 蒸馏水定容至 100ml

制备方法：

(1)将聚二甲基硅氧烷、棕榈酸乙基己酯、C20-C22醇磷酸酯、羟苯甲酯、蜂蜜、牛油果树果脂置于油相锅中，搅拌并加热至80-90℃，搅拌至物料完全溶解，得到物料A。

(2)主锅中放入处方量70％蒸馏水，将甘油、丙二醇、透明质酸、聚丙烯酰胺、银柴胡环肽，搅拌至均匀，加热至80～90℃，保温20-30min，为水相。

(3)将物料A抽入主锅中，再加入三乙醇胺，柠檬香精，蒸馏水定容至100ml，在80～90℃温度下，真空搅拌，得到物料B。

(4)待物料B降温至40～45℃，搅拌至均匀，出料即得。

9.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述精华液的处方和制备方法如下：

原料 配方 银柴胡环肽 10％ 维生素C 5％ 透明质酸 1％ 蒸馏水定容 100ml

制备方法：

1)取70％蒸馏水，依次加入维生素C，银柴胡环肽，搅拌，溶解，得澄清透明溶液；

2)在步骤1)所得溶液中加入透明质酸，搅拌，溶解，以蒸馏水定容至全量，即得。

10.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述面霜的处方和制备方法如下：

原料 配方 丁羟甲苯 2％ 维生素E 3％ 银柴胡环肽 10％ 红没药醇 1％ 乳酸 3％ 乳酸钠 1％ 海藻糖 1％ 黄原胶 0.1％ 鲸蜡硬脂醇 0.8％ 聚氧乙烯鲸蜡基硬脂基双醚 0.1％ 羟苯乙酯 0.5％ 蒸馏水定容至 100ml

制备方法:

1)将鲸蜡硬脂醇，聚氧乙烯鲸蜡基硬脂基双醚、丁羟甲苯、维生素E，依次投入乳化机中，加热至70-85℃，通过2000～2800r/min的高速旋转，使物料充分破碎，混合均匀后保温，制得油相相；

2)将银柴胡环肽，红没药醇，乳酸，乳酸钠，海藻糖，黄原胶，70％处方量蒸馏水依次投入乳化锅中，加热至70～80℃，通过2000～2800r/min的高速旋转混合均匀，保温15～30min，使其充分溶解，制得水相；

3)将步骤1)制得的油相和步骤2)制得的水相依次抽入到均质器中，均质5～15min，搅拌速率为2000-4000rpm，而后保温搅拌15～45min，搅拌速率为40～50r/min；

4)将步骤3)中的乳液冷却至40～45℃，加入羟苯乙酯乙醇溶液，搅拌均匀，得到抗皱纹面霜。

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