CN117898978A - 松露油复配物促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含松露油和夏块菌的松露油复配物促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的应用，其中，所述松露油通过超临界流体萃取法提取得到，所述提取方法包括将松露药材粉碎为40目的步骤，并且萃取压力为40～45MPa，以及其中，松露油和夏块菌的重量比为1:1至5:1。在优选的实施方式中，所述松露油的使用浓度为78‑156μg/mL。本发明还涉及松露油复配物在制备具有促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成作用的皮肤外用剂中的应用。

Description

松露油复配物促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的应用

技术领域

本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及松露油复配物促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的应用，以及松露油复配物在制备具有促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成作用的化妆品中的应用。

背景技术

皮肤老化的决定因素在于内外环境对真皮层内胶原蛋白的破坏。皮肤中胶原蛋白占72％，真皮中占80％，它的三维螺旋结构如水库中的堤坝一样，锁住皮肤深层水分。在皮肤中如弹簧般支撑着皮肤，人体在年轻时能够制造许多胶原蛋白，但它们的产量会随着年龄增大而减少。弹性蛋白是弹性纤维的主要成分。能让肌肤有伸展和褶合的能力，负责维持与支撑肌肤的弹性，随着年龄增长，肌肤中的弹性蛋白含量降低，从而降低对维持紧致肌肤所需要的网络支持，皮肤开始松弛、有细纹等老化现象。

成纤维细胞(Fb)是构成皮肤真皮层的主要细胞，是真皮层产生胶原及其他细胞间质的主要细胞，其正常的分化、增殖维系着皮肤正常的结构和生理功能。Fb具有很强的蛋白质合成能力，可以合成并分泌大量弹性蛋白、胶原蛋白、糖胺多糖和糖蛋白等基质成分，进而生成弹性纤维、胶原纤维和网状纤维，并分泌多种细胞修复因子，使得皮肤具有强大的更新与自我修复能力，从而使皮肤真皮层的厚度和密度增加的物质具有潜在的舒展皱纹，恢复皮肤弹性和光泽的作用。

松露(Truffle)是一种蕈类的总称，分类为子囊菌门西洋松露科西洋松露属。大约有10种不同的品种，分白松露(Tuber magnatum Pico)、黑松露(Tuber melanosporumVitt.)、夏块菌(Tuber aestivum Vitt.)、印度块菌(Tuber indicum Cooke&Massee)等，通常是一年生的真菌，多数在阔叶树的根部着丝生长，一般生长在松树、栎树、橡树下。价格最贵的是意大利的白松露和法国的黑松露，我国主产四川、云南。

黑松露(Tuber melanosporum Vitt.)色泽介于深棕色与黑色之间，呈小凸起状，遍及灰色或浅黑色与白色纹理，其气味特殊，令人难以愉悦。现代研究表明，黑松露具有脂肪酸、α-雄烷醇、多糖、矿物质、维生素等，起到抗炎、抗氧化的作用。

夏块菌(Tuber aestivum Vitt.)其外形与印度块菌极为相似，内层由淡黄色至无色的交织菌丝组成，外层由近球形或近角形的拟薄壁组织构成。产孢组织中实，幼时白色，成熟时黄褐色，有白色大理石花纹状菌脉，迷路状分布。研究表明，夏块菌含有维生素、氨基酸、矿物质、蛋白质等成分，具有保湿作用。

目前，关于松露油的美容应用报道较少，常见松露水溶性成分尤其是多糖、蛋白的美容报道。例如，中国专利CN113754731A公开了黑松露抗氧化多糖及制备方法和应用，该专利申请表明黑松露多肽具有良好的抗氧化活性而非黑松露的油溶性成分。又如，中国专利CN108721155A公开含有白松露提取物的化妆品制备物和其化妆方法，该专利申请报道了利用水提方法提取白松露中蛋白质成分，具有促进胶原Ⅰ型表达和降低黑色素含量的作用，但其主要还是水溶性成分起作用并非油溶性成分。又如，中国专利CN109010161B公开了黑孢块菌提取物的制备方法及其在染发组合物中的应用，该专利申请同样报道了提取松露的水溶性成分。

同样，迄今为止，未见关于夏块菌促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成功效的报道。例如，中国专利CN111467269A公开了含夏块菌提取物的保养品及其制备方法，具体指出加入水解胶原、香橙提取物、夏块菌提取物三种活性物质，具有抗氧化、美白和保湿作用。

本发明意外地发现，松露油与夏块菌复配具有优异的促进胶原蛋白和/或弹性蛋白的作用，可作为功效成分加入到化妆品中使用，以帮助改善皮肤松弛、皱纹问题等。

发明内容

一方面，本发明提供了包含松露油和夏块菌的松露油复配物促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的应用，其中，所述松露油通过超临界流体萃取法提取得到，所述提取方法包括将松露药材粉碎为40目的步骤，并且萃取压力为40～45MPa，以及其中，松露油和夏块菌的重量比为1:1至5:1，更优选地，松露油和夏块菌的重量比为1.815:1至5:1。

在优选的实施方式中，所述胶原蛋白为I型胶原蛋白。

在优选的实施方式中，所述松露油的使用浓度至少为78μg/mL，更优选78-156μg/mL。

在优选的实施方式中，所述超临界流体萃取法的工艺参数如下：松露药材粉碎为40目，萃取压力为40～45MPa，萃取温度为45℃～50℃，分离I压力8～9MPa，分离I温度40℃～50℃，分离II温度30℃～45℃，分离III温度30℃～45℃。

另一方面，本发明提供了包含松露油和夏块菌的松露油复配物在制备具有促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成作用的皮肤外用剂中的应用，其中，所述松露油通过超临界流体萃取法提取得到，所述提取方法包括将松露药材粉碎为40目的步骤，并且萃取压力为40～45MPa，以及其中，松露油和夏块菌的重量比为1:1至5:1，更优选地，松露油和夏块菌的重量比为1.815:1至5:1。

在优选的实施方式中，所述松露油复配物在皮肤外用剂中的含量为0.01-90重量％。

在优选的实施方式中，所述皮肤外用剂选自：面霜、乳液、啫喱、化妆水、精华液、面膜、眼霜、气雾清洁泡、喷雾、沐浴露、洗面奶、或按摩油。

附图简要说明

图1显示了Elastin含量结果。

图2显示了Collagen I含量结果。

具体实施方式

本发明涉及松露油复配物促进成纤维细胞增殖、促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的作用，首次发现松露油复配物可以作为功效添加剂，应用于皮肤外用剂、药品及保健食品，以帮助实现维持肌肤紧致、改善皮肤松弛和/或皱纹、抵抗皮肤老化等功效。

为了提供更简明的描述，本文给出的一些数量表述没有用术语“约”修饰。应当理解，无论是否明确地使用了术语“约”，本文所给出的每个量都意在指代实际的给定值，并且还意在指代由本领域的普通技术人员可合理推测出的这些给定值的近似值，包括这些给定值的由实验和/或测量条件所引起的近似值。

为了提供更简洁的描述，本文中一些数量表述被叙述为约X量至约Y量的范围。应当理解，当叙述范围时，该范围并不限制于所叙述的上下界限，而应包括约X量至约Y量的整个范围或它们之间的任何量。

本文所描述的松露油复配物可任选为成品包装形式。在一个实施例中，所述包装为装有松露油复配物的诸如塑料、金属或玻璃管或广口瓶之类的容器。该产品可另外具有用于储存该容器的诸如塑料或纸板盒之类的包装。在一个实施例中，该产品包含松露油复配物并且具有引导使用者将松露油复配物施用至皮肤以治疗如下文论述的皮肤老化迹象的说明书。这种说明书可印刷在容器上、标签插页或任何其它包装上。

如本文所用，“局部施用”意指例如利用手或诸如擦拭物、辊或喷雾器之类的施用装置，直接涂抹或散布在外部皮肤、头皮或毛发上。

如本文所用，“美容上可接受的”意指该术语所描述的成分适用于与组织(例如皮肤或毛发)接触而无不当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性反应或类似症状。

本发明发现，松露油复配物适用于处理皮肤老化迹象。本文所用，“皮肤老化迹象”包括存在细纹和皱纹、损失弹性、肤色不均、斑疤。在一个特别优选的实施例中，老化迹象是存在细纹和皱纹和/或损失弹性。

如本文所用，“处理皮肤老化迹象”指减轻、减少、预防、改善或消除上述皮肤老化的存在或迹象。

本文所用，“皱纹”包括微细纹、微皱纹或粗皱纹。皱纹的例子包括但不限于眼睛周围的微细纹(例如“鱼尾纹”)、前额和颊皱纹、眉心纹和嘴巴周围的笑纹。

如本文所用，“损失弹性”包括皮肤或组织的弹性或结构完整性的损失，包括但不限于松垂、松弛和松散的组织。弹性或组织结构完整性的损失可由多种因素所致，包括但不限于疾病、衰老、激素变化、机械创伤、环境损害，或者是向组织施用诸如美容品或药物之类的产品的结果。

如本文所用，“肤色不均”是指与弥漫状或斑驳状色素沉着有关的皮肤状况，所述色素沉着可分类为色素沉着过度，例如发炎后色素沉着过度。

如本文所用，“斑疤”意指与发红或红斑相关的皮肤状况。

本文所用，“美容品”指能保持、恢复、赋予、刺激或增强体美外观或看起来能增进美貌或年轻的美容物质或制品，尤其是涉及组织或皮肤的外观时。

如本文所用，“美容有效量”意指足以处理一种或多种皮肤老化迹象，但低至足以避免严重副作用的生理活性化合物或组合物的量。化合物或组合物的美容有效量会随以下因素而变：所处理的具体状况、最终使用者的年龄和身体状况、所处理/预防的状况的严重程度、处理的持续时间、其他处理的性质、所采用的具体化合物或产品/组合物、所利用的美容上可接受的具体载体以及类似因素。

松露油复配物

本发明正是基于以下意外发现：包含松露油和夏块菌的松露油复配物具有促进成纤维细胞增殖、促进人成纤维细胞生成胶原蛋白和/或弹性蛋白的作用。因此，松露油复配物可作为功效成分加入到护肤品中使用，以帮助改善皮肤松弛、皱纹问题等。本发明目的在于提供松露油复配物的促进成纤维细胞增殖、促进人胶原蛋白和/或弹性蛋白生成功效及其在化妆品中应用。

在松露油的提取过程中，本发明通过优化超临界工艺参数，提高松露油得率，从而降低松露油2～3倍的原料成本。在本发明的实施方式中，采用购自云南努拿食品有限公司的黑松露来提取松露油。

本发明采用超临界流体萃取法提取松露油。在一些实施方式中，提取方法包括将松露药材粉碎为40目的步骤。在一些实施方式中，提取方法包括萃取压力为40～45MPa。在优选的实施方式中，超临界流体萃取的工艺参数如下：松露药材粉碎为40目，萃取压力为40～45MPa，萃取温度为45℃～50℃，分离I压力8～9MPa，分离I温度40℃～50℃，分离II温度30℃～45℃，分离III温度30℃～45℃。

在本发明的实施方式中，松露油的使用浓度至少为78μg/mL，更优选为78μg/mL至156μg/mL。

在一些实施方式中，松露油的使用浓度优选小于156μg/mL。

在具体的实施方式中，本发明采用购自Crodarom公司的夏块菌。

在本发明的实施方式中，采用溶剂溶解松露油复配物，例如使用“DMSO”(二甲亚砜)实现溶解。例如，DMSO的加入量以10％溶解为起始浓度，然后再用培养基(例如，DMEM培养液(Gibco))稀释至测试浓度。

在本发明的实施方式中，松露油复配物中松露油和夏块菌的重量比为1:1至5:1，优选地重量比为1.8:1至5:1，更优选地重量比为1.815:1至5:1。在一些实施方式中，松露油复配物中松露油和夏块菌的重量比为1:1至3:1。在一些实施方式中，松露油复配物中松露油和夏块菌的重量比为3:1至5:1。

皮肤外用剂

在一些实施方式中，松露油复配物可用于皮肤外用剂的制备。所述皮肤外用剂优选为化妆品组合物，包括但不限于面霜、乳液、啫喱、化妆水、精华液、面膜、眼霜、气雾(清洁泡)、喷雾、沐浴露和洗面奶等剂型的产品。

松露油复配物在皮肤外用剂中的重量百分比为0.01％-90％(w/w)。优选的重量百分比为0.1％-70％(w/w)。更优选的重量百分比为1％-50％(w/w)。最优选的重量百分比为5％-30％(w/w)。

所述皮肤外用剂是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆品组合物。所述化妆品组合物中可以是基础化妆品、面部妆容化妆品、身体用化妆品、头发护理用化妆品等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。所述化妆品组合物中根据剂型和目的的不同还含有不同的化妆品学层面允许的介质或基质赋形剂。

包含松露油复配物的皮肤外用剂可局部施用至人皮肤和/或毛发。该皮肤外用剂还可包含美容上可接受的局部用载体，该局部用载体可为皮肤外用剂的约50重量％至约99.99重量％(如皮肤外用剂的约80重量％至约99重量％)。在本发明的一个优选的实施例中，美容上可接受的局部用载体包括水。美容上可接受的局部用载体可包括一种或多种选自润湿剂、润肤剂、油脂、湿润剂以及相似物质。在一个实施例中，美容上可接受的局部用载体包括诸如无纺布或膜材料之类的基材。

可将皮肤外用剂制备成多种产品类型，包括但不限于洗剂、霜剂、凝胶剂、棒剂、喷雾剂、油膏剂、清洁液体洗剂和固体皂剂、洗发剂和毛发调理剂、毛发固定剂、糊剂、泡沫剂、粉末剂、摩丝、剃须膏、擦拭物、贴剂、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤膜剂、膜剂和化妆品如粉底以及睫毛膏。这些产品类型可含有几种类型的美容上可接受的局部用载体，包括但不限于溶液、悬浮液、乳液(例如微乳液和纳米乳液)、凝胶、固体和脂质体。

包含松露油复配物的皮肤外用剂可配制成溶液剂。溶液剂通常包含水性溶剂或有机溶剂(例如，约50％至约99.99％或约90％至约99％的美容上可接受的水性溶剂或有机溶剂)。合适的有机溶剂的例子包括丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、甘油、1,2,4-丁三醇、山梨醇酯、1,2,6-己三醇、乙醇以及它们的混合物。

皮肤外用剂可配制成包含润肤剂的溶液。此类皮肤外用剂优选包含约2％至约50％的一种或多种润肤剂。如本发明所用，“润肤剂”指用于预防或减轻干燥，例如通过防止皮肤水分经皮肤损失的物质。润肤剂的例子包括但不限于植物油、矿物油、脂族酯等。

洗剂可由这种溶液制备。洗剂通常含有约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的一种或多种润肤剂和约50％至约90％(例如，约60％至约80％)的水分。

可以由溶液配制的另一类型的产品是霜剂。霜剂通常含有约5％至约50％(例如，约10％至约20％)的一种或多种润肤剂和约45％至约85％(例如，约50％至约75％)的水分。

尽管优选的是包含松露油复配物的皮肤外用剂包含水，但作为另一种选择该皮肤外用剂可以是无水的或为不包含水而是有机和/或有机硅溶剂、油脂、类脂和蜡的油膏剂。油膏剂可含有动物或植物油或半固体烃的简单基料。油膏剂可含有约2％至约10％的一种或多种润肤剂和约0.1％至约2％的一种或多种增稠剂。

可将该皮肤外用剂配制为乳剂。如果局部用载体是乳液，则约1％至约10％(如约2％至约5％)的该局部用载体含有一种或多种乳化剂。乳化剂可以为非离子型、阴离子型或阳离子型。合适的乳化剂的例子包括个人护理和化妆品配方领域中通常鉴定为合适乳化剂的那些。

洗剂和霜剂可配制成乳剂。通常这类洗剂含有0.5％至约5％的一种或多种乳化剂。这种霜剂通常含有约1％至约20％(如约5％至约10％)的一种或多种润肤剂；约20％至约80％(如30％至约70％)的水；以及约1％至约10％(如约2％至约5％)的一种或多种乳化剂。

水包油和油包水型单乳液护肤制剂，例如洗剂和霜剂是化妆品领域所熟知的，并且可用于本发明。多相乳状液皮肤外用剂(例如水包油包水型和油包水包油型)也可用于本发明。通常，此类单相乳状液或多相乳状液含有水分、润肤剂和乳化剂作为其基本成分。

包含松露油复配物的皮肤外用剂还可配制成凝胶剂(例如，使用合适的胶凝剂的水性凝胶、醇类凝胶、醇/水型凝胶或油性凝胶)。用于水性凝胶和/或醇类凝胶的适当胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。用于油(例如矿物油)的适当胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。这种凝胶剂通常含有约0.1重量％和5重量％之间的这类胶凝剂。

包含松露油复配物的皮肤外用剂也可配制成固体制剂(例如蜡基棒剂、条皂、粉剂或含有粉剂的擦拭物)。

除了上述组分外，可用于本发明的皮肤外用剂还可含有多种在常规上以其技术领域确定的水平用于在皮肤和毛发上使用的皮肤外用剂中的其他油溶性物质和/或水溶性物质。

本发明的皮肤外用剂可以包含在皮肤护理组合物中通常能找到的附加组分，例如润肤剂、皮肤调节剂、乳化剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、螯合剂等，只要它们与皮肤外用剂中其他的组分在物理上和化学上相容、且不影响本发明的松露油复配物的效果即可。

在本发明的皮肤外用剂的一些实施方式中，可使用一种或多种防腐剂。适宜的防腐剂包括对羟基苯乙酮、C1-C4对羟基苯甲酸烷基酯和苯氧基乙醇。基于组合物总重量，防腐剂的用量为大约0.5至大约2重量％，优选大约0.5至1重量％。

在本发明的皮肤外用剂的一个实例中，可使用一种或多种抗氧化剂。适宜的抗氧化剂包括丁化羟基甲苯(BHT)、抗坏血酸棕榈酸酯(BHA)、丁羟茴醚、苯基-α-萘基胺、氢醌、没食子丙酯、去甲二氢愈创木酸、维生素E或维生素E的衍生物、维生素C及其衍生物、泛酸钙、绿茶提取物和混合的多酚，以及上面所述的物质的混合物。所使用的抗氧化剂是组合物总重量的大约0.02至0.5重量％，更最优选的是从大约0.002至0.1重量％的用量范围。

在本发明的皮肤外用剂的一个实例中，可使用一种或多种润肤剂，通过其保持在皮肤表面上或在角质层中的能力，起到润滑剂的作用，以减少剥落，改善皮肤的外观。典型的润肤剂包括脂肪酯、脂肪醇、矿物油、聚醚硅氧烷共聚物等等。适宜的润肤剂的例子非限定地包括，聚丙二醇(“PPG”)-15十八烷基醚，PPG-10十六烷基醚，Steareth-10，Oleth-8，PPG－4十二烷基醚，维生素E醋酸酯，羊毛脂，鲸蜡醇，鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯，十六十八醇，甘油硬脂酸酯，羟基硬脂酸辛脂，二甲基聚硅氧烷，以及它们的组合。鲸蜡醇，鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯，十六十八醇，甘油硬脂酸酯以及它们的组合是优选的。使用时，润肤剂是基于组合物总重量的大约0.1至大约30重量％，优选大约1至大约30重量％的用量范围。

在本发明的皮肤外用剂的一个实例中，可使用一种或多种保湿剂。保湿剂也称为湿润剂，其有助于提高润肤剂的效果，减少剥落，刺激组成的鳞皮的去除和提高皮肤触感。可使用多元醇作为保湿剂，包括但并不限于，甘油，聚亚烷基二醇，亚烷基多元醇及其衍生物，包含丁二醇、丙二醇、双丙二醇，聚丙三醇，聚乙二醇及其衍生物，山梨醇，羟丙基山梨醇，己二醇，1,3－二丁二醇，1,2,6-己三醇，乙氧基化甘油，丙氧基化甘油，以及它们的组合。使用时，基于组合物的总重量，保湿剂的用量为大约0.1至大约20重量％，优选是大约1至大约15重量％。

在本发明的皮肤外用剂的一个实例中，可使用一种或多种乳化剂。乳化剂可在有效稳定量的范围内使用。优选地，在组合物总重量的基础上，以大约1.0至大约10.0重量％，更优选的是大约3.0至大约6.0重量％的用量来使用乳化剂。可以使用任何与组合物中的组分相容的乳化剂。适宜的乳化剂包括硬脂酸，鲸蜡醇，甘油硬脂酸酯，卵磷脂，十八烷醇，Steareth-2，Steareth-20，丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，以及它们的组合。

在本发明的皮肤外用剂的一个实例中，可使用一种或多种pH调节剂。本发明的皮肤外用剂中有益的pH调节剂包括氨丁三醇。使用时，基于组合物的总重量pH调节剂的用量为大约0.1至大约2重量％，优选是大约0.1至大约1重量％。

在本发明的一个具体实施方式中，皮肤外用剂包含丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、甘油、对羟基苯乙酮、甘油硬脂酸酯和卵磷脂、十六/十八醇、鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、氨丁三醇或它们的组合。

另外的美容活性剂

在一些实施方式中，皮肤外用剂还可包含另外的美容活性剂。如本文所用，“美容活性剂”是对皮肤或毛发具有美容或治疗效果的化合物(如合成化合物或从天然来源或天然提取物分离的化合物)，包括但不限于抗痤疮剂、控油剂、抗微生物剂、抗炎剂、抗真菌剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光防护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、表面活性剂、保湿剂、营养剂、维生素、能量增强剂、防汗剂、收敛剂、除臭剂、固化剂、抗硬角质剂和用于毛发和/或皮肤调理的试剂。

在一个实施例中，这些美容活性剂选自(但不限于)：羟基酸、过氧化苯甲酰、D-泛醇、甲氧基肉桂酸辛酯、二氧化钛、水杨酸辛酯、胡莫柳酯、阿伏苯宗、类胡萝卜素、自由基清除剂、自旋捕获剂、胺、诸如视黄醇和视黄基棕榈酸酯之类的类视色素、神经酰胺、多不饱和脂肪酸、必需脂肪酸、酶、酶抑制剂、矿物质、诸如雌激素之类的激素、诸如氢化可的松之类的类固醇、2-二甲基氨乙醇、诸如氯化铜之类的铜盐、诸如Cu:Gly-His-Lys之类的含铜肽、辅酶Q10、肽、诸如脯氨酸之类的氨基酸、维生素、乳糖酸、乙酰基-辅酶A、烟酸、核黄素、硫胺素、核糖、诸如NADH和FADH2之类的电子传递物质和诸如芦荟、小白菊、麦片之类的其他植物提取物以及它们的衍生物和混合物。以本发明皮肤外用剂的重量计，美容活性剂通常以约0.001％至约20％，例如约0.005％至约10％如约0.01％至约5％的量存在。

维生素的例子包括但不限于维生素A、维生素B(例如维生素B3、维生素B5和维生素B12)、维生素C、维生素K和维生素E的不同形式(如α、β、γ或Δ生育酚)或它们的混合物以及它们的衍生物。

羟基酸的例子包括(但不限于)乙醇酸、乳酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸和酒石酸。

抗氧化剂的例子包括但不限于：水溶性抗氧化剂例如巯基化合物和它们的衍生物(如，焦亚硫酸钠和N-乙酰基-半胱氨酸)、硫辛酸和二氢硫辛酸、白藜芦醇、乳铁蛋白和抗坏血酸以及抗坏血酸衍生物(如抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽)。适用于本发明的皮肤外用剂中的油溶性抗氧化剂包括(但不限于)丁基化羟基甲苯、类视色素(如，视黄醇和视黄基棕榈酸酯)、生育酚类(如，生育酚乙酯)、生育三烯酚类和泛醌。含有适用于本发明皮肤外用剂的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：含有黄酮类和异黄酮类以及它们的衍生物(如，染料木素和二联玉米蛋白)的提取物、含有白藜芦醇的提取物等。这种天然提取物的例子包括葡萄籽、绿茶、松树皮和蜂胶。

使用方法

可将本发明的皮肤外用剂局部施用至需要处理如上所述的一种或多种皮肤老化迹象的哺乳动物皮肤。在一个实施例中，可将皮肤外用剂施用至需要处理细纹和皱纹和/或弹性损失的皮肤。可根据合适的处理方案，如每月、每周、每隔一天、每天、每天两次等，将皮肤外用剂施用至需要这种处理的皮肤。

在某些实施例中，本发明的皮肤外用剂还可用用于处理与皮肤相关的其他需要。例如，本发明的皮肤外用剂可用于处理发炎后色素沉着过度、用于减少毛孔大小、用于减少皮脂产生以及用于缓和疤痕。在某些其他实施例中，可将本发明的皮肤外用剂与机械或物理表皮剥脱处理(例如微晶磨皮处理)同时施用或在该处理的数小时内施用，或与化学剥脱剂或角质层分离剂例如水杨酸同时施用。在某些其他实施例中，可将本发明的皮肤外用剂施用至粘膜或其它组织例如阴道组织、口腔组织或眼组织。在某些其他实施例中，可将本发明的皮肤外用剂施用至轻度伤口或术后部位以促进愈合、施用至昆虫叮咬处、施用至毒藤皮肤病症或相似皮肤状况，或通常用于减轻发痒。

实施例

下面结合具体实施例，以进一步阐述本发明。有必要在此指出的是，实施例只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述本发明的内容做出一些非本质的改进和调整。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。

实施例1：松露油的制备

称取黑松露(云南努拿食品有限公司)1000g，打粉过40目(粉碎机：大德药机DFY-600C，筛网：上海宜昌仪器纱筛厂)，装入超临界二氧化碳萃取釜中(南通睿智超临界科技发展有限公司，RZSCF230-50-10L)，萃取压力40MPa，萃取温度50℃，分离I压力9MPa，分离I温度50℃，分离II温度45℃，分离III温度45℃，萃取至无油出时，收集分离I样品，加入10倍乙醇溶解，转置于圆底烧瓶中回收乙醇，得到原油，得率3.33％，备用。

实施例2：松露油复配物的制备

称取实施例1提取物1.815份和夏块菌提取物(Crodarom)1份，用DMSO(Sigma)混合，备用。

实施例3：松露油复配物的制备

称取实施例1提取物3份和夏块菌提取物(Crodarom)1份，用DMSO(Sigma)混合，备用。

实施例4：松露油复配物的制备

称取实施例1提取物5份和夏块菌提取物(Crodarom)1份，用DMSO(Sigma)混合，备用。

实施例5：松露油复配物对胶原蛋白与弹性蛋白性能评价

紧致抗皱功效测试实验方法

细胞接种：皮肤成纤维细胞(广东博溪生物科技有限公司，Fb19052002)按4×10⁴个/孔的接种密度接种细胞至6孔板，培养箱(Thermo,150I)(37℃、5％CO₂)中孵育过夜。

配液：按下表方式配制溶液。

表1

给药：待6孔板中细胞铺板率达到30％～50％时进行给药。每孔加样2mL，每组设3个复孔。给药完后将6孔板放置在培养箱中培养24小时。

UVA辐照：对需要UVA照射的组别进行30J/cm²的UVA辐照，置于培养箱中继续培养24小时。

收样：24小时后，吸弃旧液，1mL/孔PBS(索莱宝)清洗两次，每孔加入1mL RNAisoPlus(艾科瑞生物)，吹打裂解细胞后，收样。

基因表达检测：提取RNA，利用反转录试剂盒(艾科瑞生物)反转录至cDNA后，进行荧光定量PCR检测。

结果统计分析：结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。P<0.05认为具有显著差异，P<0.01认为具有极显著差异。

Elastin实验结果：

表2

备注：用t-test方法进行统计分析时，与空白对照组相比，显著性以#表示；与阴性对照组相比，显著性以*表示。

与空白对照组相比，阴性对照组的Elastin含量显著降低，说明本次测试刺激条件有效。

与阴性对照组相比，阳性对照组的Elastin含量显著提高，说明本次测试阳性对照有效。夏块菌提取物在体积浓度为0.0156％时，上调率24.24％；实施例1提取物在体积浓度为0.0039％时无效，在体积浓度为0.0078％时，上调率84.85％，在体积浓度为0.0156％时，上调率86.36％；实施例2提取物在体积浓度为0.0078％时无效，在体积浓度为0.0156％时，上调率33.33％；实施例3提取物在体积浓度为0.0078％时，上调率34.85％，在体积浓度为0.0156％时，上调率172.73％；实施例4提取物在体积浓度为0.0078％时无效，在体积浓度为0.0156％时，上调率169.70％。说明夏块菌提取物、松露油及松露油复配能够很好的促进Elastin基因表达，达到紧致功效。且针对上述结果，说明不同复配比例松露油对Elastin表达效果不同，在体积浓度0.0156％时，松露油：夏块菌提取物(3:1)＞松露油：夏块菌提取物(5:1)＞松露油＞松露油：夏块菌提取物(1.815:1)＞夏块菌提取物；在体积浓度0.0078％时，松露油＞松露油：夏块菌提取物(3:1)＞松露油：夏块菌提取物(5:1)≈松露油：夏块菌提取物(1.815:1)。

CollagenⅠ实验结果：

表3

与空白对照组相比，阴性对照组的CollagenⅠ含量显著降低，说明本次测试刺激条件有效。

与阴性对照组相比，阳性对照组的CollagenⅠ含量显著提高，说明本次测试阳性对照有效。夏块菌提取物在体积浓度为0.0156％时，上调率32.86％；实施例1提取物在体积浓度为0.0039％时无效，在体积浓度为0.0078％时，上调率61.43％，在体积浓度为0.0156％时，上调率62.86％；实施例2提取物在体积浓度为0.0078％时无效，在体积浓度为0.0156％时，上调率40.00％；实施例3提取物在体积浓度为0.0078％时，上调率54.29％，在体积浓度为0.0156％时，上调率110.00％；实施例4提取物在体积浓度为0.0078％时无效，在体积浓度为0.0156％时，上调率135.71％。说明夏块菌提取物、松露油及松露油复配能够很好的促进CollagenⅠ基因表达，达到抗皱功效。且针对上述结果，说明不同复配比例松露油对CollagenⅠ表达效果不同，在体积浓度0.0156％时，松露油：夏块菌提取物(5:1)＞松露油：夏块菌提取物(3:1)＞松露油＞松露油：夏块菌提取物(1.815:1)＞夏块菌提取物；在体积浓度0.0078％时，松露油＞松露油：夏块菌提取物(3:1)＞松露油：夏块菌提取物(5:1)≈松露油：夏块菌提取物(1.815:1)。

松露油复配可用于皮肤外用剂的制备。所述皮肤外用剂优选为化妆品组合物，例如化妆水、精华液、乳霜、按摩油等。在皮肤外用剂中的重量百分比为0.01％-90％(w/w)。优选的重量百分比为0.1％-70％(w/w)。更优选的重量百分比为1％-50％(w/w)。最优选的重量百分比为5％-30％(w/w)。

以下是松露油复配物在皮肤外用剂中的具体应用的实施例，及其这些剂型的配方和制备方法。以下各表中“-”表示无添加。

应用例1：面霜的制备

应用例2：乳液的制备

应用例3：啫喱的制备

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应用例4：化妆水的制备

应用例5：精华液的制备

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应用例6：面膜的制备

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应用例7：眼霜的制备

应用例8：气雾(清洁泡)的制备

应用例9：喷雾的制备

应用例10：沐浴露的制备

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应用例11：洗面奶的制备

应用例12：按摩油的制备

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Claims (10)

1.包含松露油和夏块菌的松露油复配物促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成的应用，

其中，所述松露油通过超临界流体萃取法提取得到，所述提取方法包括将松露药材粉碎为40目的步骤，并且萃取压力为40～45MPa，以及

其中，松露油和夏块菌的重量比为1:1至5:1。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，松露油和夏块菌的重量比为1.815:1至5:1。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胶原蛋白为I型胶原蛋白。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述松露油的使用浓度至少为78μg/mL。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述松露油的使用浓度为78-156μg/mL。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述超临界流体萃取法的工艺参数如下：松露药材粉碎为40目，萃取压力为40～45MPa，萃取温度为45℃～50℃，分离I压力8～9MPa，分离I温度40℃～50℃，分离II温度30℃～45℃，分离III温度30℃～45℃。

7.包含松露油和夏块菌的松露油复配物在制备具有促进胶原蛋白和/或弹性蛋白生成作用的皮肤外用剂中的应用，

其中，所述松露油通过超临界流体萃取法提取得到，所述提取方法包括将松露药材粉碎为40目的步骤，并且萃取压力为40～45MPa，以及

其中，松露油和夏块菌的重量比为1:1至5:1。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，松露油和夏块菌的重量比为1.815:1至5:1。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述松露油复配物在皮肤外用剂中的含量为0.01-90重量％。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述皮肤外用剂选自：面霜、乳液、啫喱、化妆水、精华液、面膜、眼霜、气雾清洁泡、喷雾、沐浴露、洗面奶、或按摩油。