CN114720691A - 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用 - Google Patents

一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114720691A
CN114720691A CN202210532120.0A CN202210532120A CN114720691A CN 114720691 A CN114720691 A CN 114720691A CN 202210532120 A CN202210532120 A CN 202210532120A CN 114720691 A CN114720691 A CN 114720691A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mbtps2
kit
monoclonal antibody
mutant protein
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210532120.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114720691B (zh
Inventor
赵正严
陈永洪
郑志东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Renying Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Nuocheng Biotechnology R & D Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Nuocheng Biotechnology R & D Co ltd filed Critical Guangzhou Nuocheng Biotechnology R & D Co ltd
Priority to CN202210532120.0A priority Critical patent/CN114720691B/zh
Publication of CN114720691A publication Critical patent/CN114720691A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114720691B publication Critical patent/CN114720691B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
    • G01N2800/108—Osteoporosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测生物标志物的试剂盒，所述的生物标志物为MBTPS2蛋白；所述的试剂盒包括有效量的MBTPS2突变蛋白和有效量的特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体，所述的MBTPS2突变蛋白为aa459位N突变为S、aa505位L突变为F；所述的MBTPS2突变蛋白的密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的有效量的特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体为单克隆抗体1，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。本发明制备的检测MBTPS2突变蛋白的试剂盒(如werstern blot、双抗体夹心ELISA)具有良好的特异性、敏感性和准确度，适合MBTPS2突变蛋白的大量准确的检测。

Description

一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用。
背景技术
骨质疏松症(osteoporosis)是由于多种原因导致的骨密度和骨质量下降，骨微结构破坏，造成骨脆性增加，从而容易发生骨折的全身性骨病。骨质疏松症分为原发性和继发性二大类。原发性骨质疏松症又分为绝经后骨质疏松症(I型)、老年性骨质疏松症(Ⅱ型)和特发性骨质疏松(包括青少年型)三种。绝经后骨质疏松症一般发生在妇女绝经后5～10年内；老年性骨质疏松症一般指老人70岁后发生的骨质疏松；而特发性骨质疏松主要发生在青少年，病因尚不明。
生物标志物(Biomarker)，是通过测定生物体液，细胞和组织的各种反应，用生物化学、免疫学、遗传学等方法，来指示污染物的存在与否及生物个体的反应。生物标志物能够直接以生物体内靶细胞或靶分子为反应终点，十分敏感。检测结果能够说明生物个体内的细胞和组织是否已经暴露于超量的污染物中，环境污染物是否已对生物靶标诱发了毒性效应，以及毒性效应是否对种群，群落或生态系统引起了连锁反应。
有报道，MBTPS2(membrane bound transcription factor peptidase,site 2)可能可以作为骨质疏松症一个诊断标志物(Lindert,U.,Cabral,W.,Ausavarat,S.etal.MBTPS2 mutations cause defective regulated intramembrane proteolysis in X-linked osteogenesis imperfecta.Nat Commun 7,11920(2016).)，但目前市场上面，并没有检测MBTPS2的试剂盒，因此，需要开发一种检测MBTPS2的试剂盒，以用于骨质疏松症的检测。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明的目的提供一种MBTPS2检测试剂盒及其制备方法和应用。
因此，本发明一方面提供了一种检测生物标志物的试剂盒，所述的生物标志物为MBTPS2蛋白；所述的试剂盒包括有效量的MBTPS2突变蛋白和有效量的特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体，所述的MBTPS2突变蛋白为aa459位N突变为S、aa505位L突变为F。
优选地，本发明所述的MBTPS2突变蛋白的密码子优化后的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
优选地，本发明所述的有效量的特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体为单克隆抗体1，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的序列如SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3所示。
优选地，本发明所述的单克隆抗体1的抗原识别位点的氨基酸序列为AIVSAVP。
优选地，本发明所述的试剂盒为werstern blot检测试剂，所述werstern blot检测试剂中特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体的稀释倍数为5000倍。
优选地，本发明所述的试剂盒为双抗体夹心ELISA检测试剂盒，所述双抗体夹心ELISA检测试剂盒中特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体为HRP标记的单克隆抗体，所述HRP标记的单克隆抗体的稀释倍数为5000倍。
优选地，本发明所述试剂盒的检测的样品为尿液样品。
再一方面，本发明还提供了一种所述的试剂盒在MBTPS2突变蛋白检测中的应用。
本发明制备的检测MBTPS2突变蛋白的试剂盒(如werstern blot、双抗体夹心ELISA)具有良好的特异性、敏感性和准确度，适合MBTPS2突变蛋白的大量准确的检测。另外，本发明提供的单克隆抗体1具有良好的特异性，适合MBTPS2突变蛋白的检测和验证；本发明提供的MBTPS2突变蛋白可用于骨质疏松症抗原蛋白标准品应用。
附图说明
图1MBTPS2跨膜区分析。Inside表示胞内区，inside数值越大，表示该氨基酸位于胞内区的可能性越大；Outside表示胞外区，outside数值越大，表示该氨基酸位于胞外区的可能性越大；Transmembrane表示跨膜区，Transmembrane数值越大，表示该氨基酸在跨膜区的可能性越大。
图2werstern blot检测。1是阴性样品，2是阳性样品。
具体实施方式
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1：MBTPS2突变蛋白抗原多肽的设计和MBTPS2重组蛋白制备
从NCBI中选择MBTPS2蛋白(NCBI Reference Sequence:NP_056968.1)，通过分析(图1和表1)，该蛋白多次跨膜，且胞外区较短，通过分析和现有的文献报道，在aa459位N突变为S、aa505位L突变为F时，检测与骨质疏松密切相关。综合考虑蛋白跨膜结构、突变位置以及二级结构，设计2条抗原多肽，具体为：抗原多肽(aa456～aa462)：AIVSAVP；抗原多肽2(aa502～aa508)：SVLFAAN。由于抗原多肽较短，是为半抗原，免疫原性低，因此，将两条抗原多肽分别与BSA偶联为完整抗原，备用。
表1 MBTPS2蛋白跨膜分析
类型 起始位置 终止位置
inside 1 1
TMhelix 2 24
outside 25 72
TMhelix 73 95
inside 96 186
TMhelix 187 209
outside 210 228
TMhelix 229 251
inside 252 449
TMhelix 450 472
outside 473 491
TMhelix 492 514
inside 515 519
通过常规重组蛋白制备方法，对MBTPS2蛋白(NCBI Reference Sequence:NP_056968.1)进行突变处理(aa459位N突变为S、aa505位L突变为F)后的核苷酸序列进行密码子优化(如SEQ ID NO.1所示)，通过常规的真核表达体系(参见中国发明专利201611208261.8)表达制备MBTPS2重组蛋白，分子量约为57KD，置于-20℃保存备用。
实施例2：识别抗原多肽单克隆抗体的制备和检验
将实施例1设计合成的2条抗原多肽分别免疫小鼠，按照常规的杂交瘤筛选制备单克隆抗体(参见中国发明专利CN 106226512 B)。经过多轮重复免疫和筛选，每条抗原多肽均筛选了一株杂交瘤细胞并制备了一批单克隆抗体，编号分别为杂交瘤细胞1和2、单克隆抗体1和2，对应抗原多肽1和2。使用常规ELISA方法检测两株单克隆抗体的效价，经过检测，单克隆抗体1的效价(106)较单克隆抗体的效价(105)要高，因2株单克隆抗体结合MBTPS2重组蛋白的位置较近，存在空间位阻，因此选择单克隆抗体作为重点研究对象。
常规ELISA方法简述为：使用实施例1制备的MBTPS2重组蛋白包被酶标板(1μg/ml)，每孔0.1ml，4度包被过夜；洗涤后，使用5％脱脂奶封闭，每孔0.3ml，37℃2h；洗涤后，加入10倍系列稀释的单克隆抗体(均调整浓度为1mg/ml后稀释)，每孔0.1ml，37℃1h；洗涤后每孔加入HRP标记羊抗鼠IgG二抗(10000倍稀释)；37℃0.5h；洗涤后，加入显色液(A/B液)，每孔0.1ml，37℃10min；加入终止液(2M硫酸)，每孔0.1ml，检测OD450nm值；当P/N值(样品OD值/空白对照OD值)＞2.1时判为阳性。
参见中国发明专利(CN 111393525 B)实施例5的方法对制备的单克隆抗体1进行重链可变区和轻链可变区的测定，经过测定，重链可变区和轻链可变区的序列如SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3所示。
实施例3 MBTPS2突变蛋白的检测
3.1werstern blot检测从尿液中提取蛋白作为样品进行SDS-PAGE凝胶电泳后转膜，转膜后进行封闭，4℃封闭过夜，封闭液为5％脱脂奶粉；将制备的单克隆抗体1(原始浓度1mg/ml)做5000倍稀释后做为一抗进行孵育，室温1h；洗涤后加入5000倍稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG二抗，室温孵育1h；洗涤后使用ECL进行显影，结果显示(如图2)，阳性样品在57KD有特异性条带，阴性样品在57KD处无条带，说明该单抗具有良好的特异性。
3.2双抗体夹心ELISA检测
3.2.1检测步骤和判定方法使用MBTPS2蛋白多抗(Invitrogen，PA5-39236)作为包被抗体，包被于酶标板上，每孔100ng/0.1ml，4℃包被过夜；洗涤后，使用含2％BSA的PBST缓冲液封闭，每孔0.25ml，37℃封闭2h；洗涤后，加入1:10倍稀释的尿液样品，每孔0.1ml，37℃孵育1h；洗涤后，加入5000倍稀释的HRP标记的单克隆抗体1(原始浓度1mg/ml)(HRP标记为常规的改良高碘酸钠法，按照市售试剂盒说明书进行操作)，每孔0.1ml，37℃孵育0.5h；洗涤后，加入显色液(如TMB单组分，也可以为A/B液)，37℃孵育10min；加入终止液(2M硫酸)，立即检测OD450nm值。检测样品的同时，加入阳性对照(本发明制备的MBTPS2重组蛋白，OD450nm值≥1.0)和阴性对照(PBST缓冲液，OD450nm值≤0.2)。当样品OD450nm值/阴性对照OD450nm值＞2.1时为阳性，反之则为阴性。
3.2.2灵敏度检测按照3.2.1的方法对不同浓度的本发明制备的MBTPS2重组蛋白进行检测，结果如表2所示，本检测方法或试剂盒的最低检测量约为2ng/ml。
表2 MBTPS2重组蛋白检测结果
MBTPS2重组蛋白浓度(ng/ml) 1000 500 250 125 62.5
OD450nm / / / 3.23 2.14
S/N值 - - - 64.6 42.8
MBTPS2重组蛋白浓度(ng/ml) 31.25 15.625 7.8125 3.90625 1.953125
OD450nm 1.25 0.71 0.46 0.28 0.15
S/N值 25 14.2 9.2 5.6 3.0
注：“/”表示超出仪器检测上限，仪器检测上限为3.5；“-”表示未计算；阴性对照OD450nm均值为0.050。
3.2.3实例检测按照3.2.1的方法对50份阴性尿液样品进行检测，结果显示，检测结果均为阴性，样品OD450nm值均小于0.1，S/N值均小于1.5。按照3.2.1的方法对5份阳性样品进行检测，结果显示，5份阳性样品均为阳性(S/N值分别为9.5、11.2、6.7、25.4、17.8)。因此，本检测方法或试剂盒具有良好的特异性和准确性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 广州诺诚生物技术研发有限公司
<120> 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1557
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgattcctg tgagtttggt tgtagtggta gtggggggtt ggaccgtggt ctacctgaca 60
gacctggtcc tcaaatcttc cgtttacttt aagcactcat acgaggactg gctggaaaat 120
aatggattga gtatctcccc ttttcacatc cgatggcaga ccgcagtctt caatagggct 180
ttctacagct gggggcggag gaaggcacga atgctctatc aatggttcaa cttcggcatg 240
gtgttcgggg tgattgcaat gttcagcagc tttttcctgt tgggcaagac tctgatgcag 300
acattggcgc aaatgatggc agacagcccc agctcataca gctctagctc atcttcctca 360
agttcctcat catcatcctc cagctcctcc tcaagcagca gcagttctct gcataacgag 420
caggttctcc aggttgtggt tcctgggata aatctgccgg tgaatcagct cacatacttt 480
ttcacagcag ttctgatcag tggcgtggtc catgagatag gtcacggaat cgcagcaatt 540
cgggagcagg tgaggttcaa tgggttcggc atctttctgt ttattattta cccaggagcc 600
ttcgtggacc tttttactac ccacctgcag cttatctctc ctgtgcagca actgagaatc 660
ttttgcgccg gaatctggca taactttgtc ttggccctcc ttggcatcct ggcactggtg 720
ctgctcccag tcatactcct cccgttttac tataccggcg tgggggtgtt gatcacagag 780
gttgccgaag attctcccgc cattggtcca cggggtctgt ttgtggggga cctggtcaca 840
catttgcagg actgtccggt gacaaatgtg caggattgga acgaatgctt ggatacaata 900
gcgtacgagc cccaaatcgg gtactgcatc agcgctagta ccctgcagca gctgagtttc 960
cccgtcagag cgtacaaacg gctcgatggg agcaccgaat gctgcaataa tcatagtctc 1020
acagacgtgt gtttttcata ccggaataac ttcaataaga gactgcatac ctgccttcca 1080
gccaggaagg cagtggaggc cacacaggtt tgtcgaacaa acaaggattg caagaaaagt 1140
tcctctagca gcttctgcat tatccctagt ctggagactc acacacggct cattaaggta 1200
aagcatcccc cccagattga catgctgtat gtgggccacc ctctgcattt gcactatacc 1260
gtgagtatta ctagctttat acctcgcttc aacttcctgt ccattgatct gcccgttgtg 1320
gtggagacat ttgtgaaata ccttatctca ctcagcgggg cactggcgat cgtttccgca 1380
gtcccatgtt ttgctcttga tgggcagtgg atcctgaact ccttcctcga tgctaccctc 1440
accagcgtga tcggagacaa cgatgttaag gatctcattg ggttttttat tctgttggga 1500
ggtagtgtgc tgttcgccgc gaacgtgact ctgggtctgt ggatggtgac cgctcga 1557
<210> 2
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ttgtgggtag aggctggcgt gcacaagaaa gtgcagctcc aacaatctgg tgctgagctg 60
gtgaagcctc ttgccagcgt gaagacgagt tgcgatgaat ggaaggccag cgggtacact 120
ttcaccgagt actttattgt gtggaagaag cagcgaagtg gacagggact ggaatggatt 180
gggtggtttt acccaggcag cggcagcctg aactacaacg gaaagtttat cgacaccgcg 240
accaagtgga gcgctgacaa gatgagcagt acagtttatg aagaactcag ccgcctgact 300
agtgaggaca gcgccgtgca cttttgcgct agctgggctt atgacaaaga gccctacaca 360
ggccagggaa ccctcgtcac cgtgagcgcc ttcatg 396
<210> 3
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gatgtcctca tgacccagac accactgtct ttgttcgttt tttggtcact gggggatcag 60
gccagctggg tgtgcgatgc agctccttcc caatctatcg tgcacagcaa tggaaacacc 120
tatctgtggt ggtacctgca gaagccgggc aatagtagca agctgctgat ctacaaggtg 180
agcaataggt tttctggagt gcctgatagg ttctcaggct ctgggtcagg cacaacgttt 240
gggaacaaaa tccagagagt gcaggccgaa gatctgggta tttactactg cctgcagggc 300
agccatatgc cccttacttt cggagccgga acgcaccagc tgcgc 345

Claims (8)

1.一种检测生物标志物的试剂盒，所述的生物标志物为MBTPS2蛋白；其特征在于，所述的试剂盒包括有效量的MBTPS2突变蛋白和有效量的特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体，所述的MBTPS2突变蛋白为aa459位N突变为S、aa505位L突变为F。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的MBTPS2突变蛋白的密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的有效量的特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体为单克隆抗体1，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的单克隆抗体1的抗原识别位点的氨基酸序列为AIVSAVP。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为werstern blot检测试剂，所述werstern blot检测试剂中特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体的稀释倍数为5000倍。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为双抗体夹心ELISA检测试剂盒，所述双抗体夹心ELISA检测试剂盒中特异性识别MBTPS2突变蛋白的单克隆抗体为HRP标记的单克隆抗体，所述HRP标记的单克隆抗体的稀释倍数为5000倍。
7.根据权利要求5或6任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测的样品为尿液样品。
8.一种如权利要求1～7任一权利要求所述的试剂盒在MBTPS2突变蛋白检测中的应用。
CN202210532120.0A 2022-05-10 2022-05-10 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用 Active CN114720691B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210532120.0A CN114720691B (zh) 2022-05-10 2022-05-10 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210532120.0A CN114720691B (zh) 2022-05-10 2022-05-10 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114720691A true CN114720691A (zh) 2022-07-08
CN114720691B CN114720691B (zh) 2022-12-09

Family

ID=82231185

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210532120.0A Active CN114720691B (zh) 2022-05-10 2022-05-10 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114720691B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116381251A (zh) * 2023-03-13 2023-07-04 广州鹏翔生物技术有限公司 一种肿瘤标志物诊断试剂盒及其诊断方法

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080063156A (ko) * 2006-12-27 2008-07-03 재단법인서울대학교산학협력재단 표준 발현 유전자를 발굴하기 위한 유전자 발현 데이터처리, 분석 방법
CN102858985A (zh) * 2009-07-24 2013-01-02 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 基因组编辑方法
US20130116300A1 (en) * 2009-12-16 2013-05-09 Curna, Inc. Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (mbtps1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to mbtps1
JP5852759B1 (ja) * 2015-04-01 2016-02-03 株式会社キュービクス 遺伝子発現解析による膵臓癌の検出
JP5970123B1 (ja) * 2015-12-04 2016-08-17 株式会社キュービクス 遺伝子発現解析による膵臓癌の検出
CO2017003772A2 (es) * 2014-12-23 2017-09-20 Immatics Biotechnologies Gmbh Péptidos y combinación de péptidos para el uso en la inmunoterapia contra el carcinoma hepatocelular (chc) y otros tipos de cáncer
WO2018186924A1 (en) * 2017-01-17 2018-10-11 The University Of Chicago Dysfunctional antigen-specific cd8+ t cells in the tumor microenvironment
US20200129486A1 (en) * 2017-06-26 2020-04-30 Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of olmsted syndrome
US20200339997A1 (en) * 2017-10-24 2020-10-29 Oklahoma Medical Research Foundation Treatment for Skeletal Diseases Caused by Intracellular Protein Trafficking Defects
CN114524872A (zh) * 2022-03-09 2022-05-24 广州诺诚生物技术研发有限公司 一种用于乳腺癌检测的单克隆抗体及其试剂盒
CN114560923A (zh) * 2022-03-13 2022-05-31 广州臻美生物科技研究有限公司 一种肿瘤标志物单克隆抗体及其应用

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080063156A (ko) * 2006-12-27 2008-07-03 재단법인서울대학교산학협력재단 표준 발현 유전자를 발굴하기 위한 유전자 발현 데이터처리, 분석 방법
CN102858985A (zh) * 2009-07-24 2013-01-02 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 基因组编辑方法
US20130116300A1 (en) * 2009-12-16 2013-05-09 Curna, Inc. Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (mbtps1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to mbtps1
CO2017003772A2 (es) * 2014-12-23 2017-09-20 Immatics Biotechnologies Gmbh Péptidos y combinación de péptidos para el uso en la inmunoterapia contra el carcinoma hepatocelular (chc) y otros tipos de cáncer
JP5852759B1 (ja) * 2015-04-01 2016-02-03 株式会社キュービクス 遺伝子発現解析による膵臓癌の検出
JP5970123B1 (ja) * 2015-12-04 2016-08-17 株式会社キュービクス 遺伝子発現解析による膵臓癌の検出
WO2018186924A1 (en) * 2017-01-17 2018-10-11 The University Of Chicago Dysfunctional antigen-specific cd8+ t cells in the tumor microenvironment
CA3049445A1 (en) * 2017-01-17 2018-10-11 The University Of Chicago Dysfunctional antigen-specific cd8+ t cells in the tumor microenvironment
US20200129486A1 (en) * 2017-06-26 2020-04-30 Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of olmsted syndrome
US20200339997A1 (en) * 2017-10-24 2020-10-29 Oklahoma Medical Research Foundation Treatment for Skeletal Diseases Caused by Intracellular Protein Trafficking Defects
CN114524872A (zh) * 2022-03-09 2022-05-24 广州诺诚生物技术研发有限公司 一种用于乳腺癌检测的单克隆抗体及其试剂盒
CN114560923A (zh) * 2022-03-13 2022-05-31 广州臻美生物科技研究有限公司 一种肿瘤标志物单克隆抗体及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
USCHI LINDERT等: "MBTPS2 mutations cause defective regulated intramembrane proteolysis in X-linked osteogenesis imperfecta", 《NATURE COMMUNICATIONS》 *
张文琴等: "X-染色体连锁智力障碍相关基因研究进展", 《中国产前诊断杂志(电子版)》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116381251A (zh) * 2023-03-13 2023-07-04 广州鹏翔生物技术有限公司 一种肿瘤标志物诊断试剂盒及其诊断方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114720691B (zh) 2022-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2013329285B2 (en) Monoclonal antibodies and detection methods for enzymes that confer resistance to phosphinothricin-N-acetyl-transferase
US20230220052A1 (en) Iga antibody specifically recognizing rbd protein and testing kit
CN112679605B (zh) 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用
JP5033127B2 (ja) 単純ヘルペスウイルス２型を検出するための方法および組成物
CN114720691B (zh) 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用
JP7209498B2 (ja) Ｂ型肝炎ウイルスコア抗体の免疫測定方法
CN113150133B (zh) 针对SARS-CoV-2的单克隆抗体或其抗原结合片段
JPS61286757A (ja) 梅毒の診断法
WO2011137389A2 (en) Compositions and methods for reliably detecting and/or measuring the amount of a modified target protein in a sample
CN113045646B (zh) 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体
WO2015037907A1 (ko) Ast 양의 측정을 통한 간 질환 진단, 예후 또는 모니터링 키트 및 방법
KR101794403B1 (ko) 쇼그렌증후군 특이적 항체반응 검사를 이용한 쇼그렌증후군 진단방법
KR20180124584A (ko) 재조합 n 단백질에 대한 단클론항체를 이용한 아까바네바이러스 블러킹 효소결합면역측정법
KR102029394B1 (ko) 치쿤구니아 바이러스 감염 진단용 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 및 이를 이용한 치쿤구니아 바이러스 감염 진단 방법
US4582699A (en) Assay of immunoglobulin A protease and the rapid diagnosis of gonorrhea
JP2021148804A (ja) ヘリコバクター・ピロリ検出用抗体
AU2011302508B2 (en) Monoclonal antibodies and detection methods for enzymes that confer resistance to 2,4-dichlorophenoxyacetic acid
KR101919403B1 (ko) 재조합 단백질 및 그의 용도
KR20140132410A (ko) 간섭 펩티드 및 미생물 검출 방법
KR20200015276A (ko) 쯔쯔가무시균 유래 엑소좀을 이용한 쯔쯔가무시병의 진단방법
CN117003870B (zh) 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用
CN117003882B (zh) 一种用于检测戈利木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用
CN116143931B (zh) 一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途
WO2023191046A1 (ja) Ｈｒｇに対するモノクローナル抗体を用いたｈｒｇの測定方法
EP3919503A1 (en) Method for identifying helicobacter pylori strain and kit for identification

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20221117

Address after: 518107 3B-1801, Building 3, Hengtaiyu Building, Tangwei Community, Fenghuang Street, Guangming District, Shenzhen, Guangdong

Applicant after: Shenzhen Renying Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 510420 B75, 4th floor, building 2, No. 3, Dongping fufu Road, Yongping street, Baiyun District, Guangzhou, Guangdong

Applicant before: Guangzhou nuocheng Biotechnology R & D Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant