CN114717164B - 一种贝莱斯芽孢杆菌zlp-101及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌ZLP‑101，保藏号为CGMCC No.20130。该菌株对蚜虫、粉虱、飞虱、蚧壳虫等半翅目害虫，小菜蛾、甜菜夜蛾、菜青虫、斜纹夜蛾等鳞翅目害虫，蛴螬、金针虫、拟地甲等鞘翅目害虫及斑衣蜡蝉和蟑螂具有较强的防治效果；对立枯病、枯萎病、黑腐病、环腐病、红腐病、青枯病、叶斑病、纹枯病、黑穗病、根腐病、白腐病、早疫病、灰霉病、白粉病、炭疽病等多种植物病原菌有明显的抑制作用；施用该菌株发酵液能显著促进植物生长；而且环境安全性好，在开发成生物杀虫剂、生物农药方面具有良好的应用前景。

Description

一种贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101及其应用
技术领域
本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101及其应用。
背景技术
蚜虫、飞虱、粉虱、蚧壳虫等半翅目害虫及拟地甲、金针虫、蛴螬等鞘翅目害虫给农业生产带来严重的损失，严重影响作物的产量和质量。农作物随着农业保护地栽培面积的不断扩大以及复种指数的增加，气传、土传真菌病害严重，往往多种病害混合发生，成为农业生产的严重障碍。
目前，对于病害主要采用化学防治，常规化学农药防治不仅杀伤了大量天敌和有益微生物、破坏了生态平衡，还使害虫耐药性急剧上升；农药残留对环境和人类健康造成了极大的危害。为此，研究开发安全、高效、环境友好的产品及化肥农药替代技术已成为保障粮食安全、食品安全和环境安全的战略需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有高效杀虫活性的同时，还具有广谱的抗真菌活性，并具备促进农作物生长的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101及其应用。
本发明采用如下技术方案：
一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)ZLP-101，保藏号为CGMCCNo.20130，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2020年7月3日。
进一步的，所述贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101，具有杀虫、防治植物真菌病害和促进农作物生长的作用。
一种上述贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在防治半翅目害虫、鳞翅目害虫、鞘翅目害虫、斑衣蜡蝉或蟑螂中的应用。
进一步的，所述半翅目害虫包括蚜虫、粉虱、飞虱或蚧壳虫；所述鳞翅目害虫包括小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾和菜青虫；所述鞘翅目害虫包括蛴螬、金针虫或拟地甲。
一种上述贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在防治立枯病菌、枯萎病菌、黑腐病菌、环腐病菌、红腐病菌、青枯病菌、叶斑病菌、纹枯病菌、黑穗病菌、根腐病菌、白腐病菌、早疫病菌、灰霉病菌、白粉病菌或炭疽病菌中的应用。
一种上述贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在制备生防制剂、生物农药、土壤修复剂或生物肥料中的应用。
进一步的，所述生防制剂、生物农药、土壤修复剂或生物肥料中包含贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌体和/或发酵液。
进一步的，所述生防制剂、土壤修复剂或生物肥料中包含从贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101发酵液中分离出的表面活性素、伊枯草菌素、芬荠素或精子素。
一种杀虫剂，其包括如下重量份的组分：贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉20～78份、粘结剂15～20份、分散剂1～1.5份、崩解剂2.5～3份、润湿剂0.5～1份以及增效剂0.05～1.8份。
进一步的，其还包括辅料1-54份。
进一步的，其还包括0.4～1.1重量份的化学杀虫剂、生物杀虫剂或植物杀虫剂。
其中，所述粘结剂选自可溶性淀粉、羧甲基纤维素、糊精。
其中，所述分散剂选自木质素磺酸钠、三聚磷酸钠、焦磷酸钠。
其中，所述崩解剂选自硫酸钠、十二烷基硫酸钠、聚山梨酯80。
其中，所述润湿剂选自大豆卵磷脂、磺化油、炔二醇。
其中，所用增效剂为：硅氧烷共聚物及多元醇混合物、聚醚改性三硅氧烷、乙氧基改性聚三硅氧烷等有机硅类，增效醚、顺丁烯二酸二乙酯、磷酸三苯酯等解毒酶抑制剂类、松节油、茶皂素、天然陈皮精油、玉米胚芽油、油菜籽油、大豆油、青皮桔油、松油、苦楝油、蓖麻油、薄荷油、百里香油、桉叶油、芝麻油、橄榄油等植物油类、大豆软磷脂非离子表面活性混合剂、聚天冬氨酸、烷基多糖苷、d－柠檬烯、蜂蜜、丙酮、肉桂醛、松油烯-4-醇、川楝素、弹指间、倍创、渗展宝、一可佳中的任意的1种以上。
其中，所述贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉通过如下方法制备：向贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵液中添加发酵液质量8～14％的β-环糊精、6～12％的CaCO3以及1～5％的MgSO4后进行喷雾干燥。
化学杀虫剂包括：丙氨酸甲酯、苯醚甲环性、速克灵、进口甲托、苯并咪唑44号、密霉胺、福美霜、进口蓝粉、氯虫苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯、乙基多杀菌素、灭幼脲氯氰菊酯、吡虫啉、溴氰菊酯、赤霉酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸、烯腺嘌呤、羟烯腺嘌呤、苄氨基嘌呤、24-表芸苔素内酯、22,23,24-表芸苔素内酯、28-表高芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、14-羟基芸苔素甾醇、三十烷醇、S-诱抗素、抗坏血酸、糠氨基嘌呤、二氢卟吩铁、尿囊素、超敏蛋白、极细链格孢激活蛋白、氨基寡糖素、香菇多糖、几丁聚糖、葡聚烯糖、低聚糖素、β-羽扇豆球蛋白多肽、胆钙化醇、米尔贝霉素、括二化螟性诱剂、斜纹夜蛾诱集性信息素、绿盲蝽性信息素、梨小性迷向素、苹果蠹蛾性信息素中的任意1种以上。
生物杀虫剂包括：枯草芽孢杆菌、短稳杆菌、多粘类芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、海洋芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、荧光假单胞杆菌、侧孢短芽孢杆菌、短稳杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫小红卵菌、白僵菌、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌、哈茨木霉菌、木霉菌、淡紫拟青霉、厚孢轮枝菌、耳霉菌、盾壳霉、小盾壳霉、寡雄腐霉菌、蟑螂病毒、多角体病毒、颗粒体病毒、多杀霉素、阿维菌素、蝗虫微孢子虫中的任意1种以上。
植物杀虫剂包括：印楝素、苦参碱、藜芦碱、烟碱、鱼藤酮、除虫菊素、苦皮藤素、桉油精、八角茴香油、狼毒素、雷公藤甲素、莪术醇、蛇床子素、丁子香酚、大黄素甲醚、香芹酚、小檗碱、甾烯醇、茶皂素、螺威、大蒜素、d-柠檬烯、萜烯醇、异硫氰酸烯丙酯、十五烯苯酚酸、十三烷苯酚酸、苯丙烯菌酮中的任意1种以上。
一种杀菌剂，其包括贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵液。
进一步的，所述杀菌剂包括体积比为500∶1的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵液和多菌灵溶液；所述多菌灵溶液为1g多菌灵与600～1000mL的水混合而成。
本发明的有益效果在于：
本发明的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101是一类好氧、产芽孢的杆状微生物，具有环境友好、抗逆性强、繁殖速度快等特点，并能分泌多种活性物质促进植物生长。
本发明的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101具有较强的杀虫活性，可以有效杀灭蚜虫、飞虱、粉虱、蚧壳虫等半翅目害虫及蛴螬、金针虫、拟地甲等鞘翅目害虫。同时具有广谱抗菌性，对立枯病、枯萎病、黑腐病、环腐病、红腐病、青枯病、叶斑病、纹枯病、黑穗病、根腐病、白腐病、早疫病、灰霉病、白粉病、炭疽病等多种植物病害均具有明显的抑制效果；在开发为杀虫或防病等功能微生物制剂等方面具有良好的应用前景。
附图说明
图1为贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在PB固体培养基上生长的菌落形态图。
图2为贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的菌体形态图。
图3为贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的芽孢形态图。
图4为贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株的16S rDNA同源序列比对分析构建的系统发育树。
具体实施方式
以下结合优选实施例对本发明的技术方案进行详细地阐述。以下实施例仅仅用于说明和解释本发明，而不构成对本发明技术方案的限制。
实施例1贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的分离与筛选
(1)取土样：从河北邢台采集土壤样品，每份50～100g；装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
(2)芽孢杆菌分离和纯化：在PB培养基上用平板稀释法对土壤样品进行分离。具体操作如下：准确称取10g土壤样品，加入到装有玻璃珠的90mL 0.9％生理盐水锥形瓶中，180r/min摇床振荡30min，使土样分布均匀制成土壤悬液，浓度为10-1；依次稀释到浓度为10-5、10-6、10-7。分别在80℃恒温水浴30min，各取100μL稀释液涂布PB平板，平板于30℃恒温培养箱倒置培养48h。挑取不同形态的单菌落，用芽孢染色进行鉴定，芽孢杆菌用划线法纯化后转接至PB培养基试管斜面，30℃培养48h后，4℃冰箱保存备用。
(3)杀虫防病作用菌株的筛选
杀虫作用菌株的筛选：以蚜虫为靶标生物，将纯化后的微生物进行液体摇瓶发酵培养后，发酵液以转速12000r/min离心10min去菌体，上清液用0.22μm无菌滤膜过滤制备无菌发酵滤液，发酵滤液进行适当稀释。取适量长度的蚕豆茎叶放入锥形瓶中。对活蚜虫及所在茎叶喷施适量稀释液后放入锥形瓶内，瓶口用薄纱布覆盖并用橡皮筋固定。2d后，对蚜虫进行数量统计，筛选出杀虫效果较好的菌株。
具有防病作用菌株的筛选：以黄瓜灰霉病为指示菌，采用平板对峙法进行初筛。在无菌操作室将PDA培养基上长好的灰霉病原菌用打孔器制成d＝5mm菌饼，然后将菌饼转接至PDA培养基平板中央，再将初筛得到的各拮抗菌的无菌滤液分别接至距病原菌2.5cm处，设3个重复，同时以只放病原菌菌饼的平板为对照，26℃恒温培养，待培养至CK长满培养基时，开始测量菌落直径并计算平均抑制率。筛选出对病原菌拮抗作用强的菌株。将杀虫防病效果较强的菌株进行了-80℃冷冻保藏。
实施例2贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的鉴定
依据《常见细菌系统鉴定手册》中的实验方法，对筛选得到的杀虫防病效果较强的菌株进行形态学及生理生化鉴定。将菌株在PB培养基平板上于30±1℃培养14～16h，观察到编号为BLS2的菌落呈圆形，颜色呈白色，无光泽，表面粗糙且边缘不规则，该菌体呈杆状，芽孢中生呈卵圆形(如图1～图3所示)。其生理生化鉴定指标如表1所示。
表1菌株ZLP-101的生理生化特性
Figure BDA0003652280800000051
注：“+”为阳性；“－”为阴性。
通过形态学观察及生理生化实验，确定编号为BLS2的菌株为芽孢杆菌属。接着进行分子生物学分类鉴定，采用16S rDNA序列分析，提取菌株的总基因组DNA为模板扩增其16S rDNA序列。采用通用引物27F/1492R扩增目的片段，扩增产物经1％的琼脂糖凝胶电泳检测，采用双向测序方法进行基因测序。测序结果通过GenBank数据库进行BLAST序列同源性比对后构建系统发育树(图4)，结果将编号为BLS2的菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，命名为贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101。
将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101送往中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2020年7月3日，保藏号为CGMCC No.20130。
实施例3贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对蚜虫等半翅目害虫的杀虫效果
将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101进行发酵培养。使用NB液体培养基，配方为：牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5g/L、葡萄糖10g/L，pH7.0。接种后置于180r/min、32℃的震荡培养箱中培养48h。将发酵液稀释成10倍、20倍、50倍液，以清水处理作对照。豆蚜(Aphiscraccivora Koch)杀虫实验使用的食物为蚕豆幼茎、棉蚜(Aphis gossypii)杀虫实验使用的食物为棉花幼茎、甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)杀虫实验使用的食物为甘蓝嫩叶、烟粉虱(Bemisia tabaci)杀虫实验使用的食物为番茄叶片，这四种食物均浸泡在上述药液10min后用滤纸吸干水分，取出放在垫有滤纸的广口瓶后，加入2mL去离子水保湿，再将广口瓶用保鲜膜覆盖，扎孔，每12h加1mL水。每个浓度下供试害虫50头，3次重复，用毛笔头挑50头年龄大小相近的害虫虫放在准备好的培养皿上饥饿4h，再分别加入上述药液处理过的蚕豆幼茎、棉花幼茎、甘蓝嫩叶、和番茄嫩叶，每12h更换一次，于25℃培养箱培养过夜，记录害虫的死亡头数，计算不同稀释倍数下蚜虫的死亡率。
死亡率＝(死亡虫数÷供试虫数)×100％
死亡率测定：害虫处理过夜后，用毛笔头触碰蚜虫，若虫不动则视为死亡，统计并记录死亡的害虫虫头数。由表2实施数据结果可以看出，贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对半翅目昆虫有良好的的防治作用。
表2贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对蚜虫等半翅目昆虫的防治效果
Figure BDA0003652280800000061
实施例4贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对鞘翅目幼虫的杀虫效果
将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵产物调配成1.0×1010cfu/L、1×109cfu/L、5×108cfu/L浓度，配置药土，以清水配制药土作为对照。用碎花生作为食料，将容量4L的塑料桶作容器，每桶放置混合均匀药土2L，并加入适量等量的食料拌匀。采用药土法，选取虫体大小一致的白星花金龟、金针虫、拟地甲、桑天牛的三龄幼虫，在相对湿度为50％～70％、温度为25℃～28℃的环境中保持24h后。每处理试虫数量为15头，每个处理3个平行，重复3次。接虫后置于室内常温培养，56h后统计死亡率，如表3所示。
表3贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对蛴螬等鞘翅目幼虫的灭杀作用
Figure BDA0003652280800000071
实施例5贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对鳞翅目、同翅目及蜚蠊目害虫的杀虫效果
将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵产物调配成1.0×1010cfu/L、1×109cfu/L、5×108cfu/L浓度，配置药土，以清水配制药土作为对照。用碎花生作为食料，将容量4L的塑料桶作容器，每桶放置混合均匀药土2L，并加入适量等量的食料拌匀。采用药土法，选取虫体大小一致的鳞翅目的小菜蛾、斜纹夜蛾、甜菜夜及菜青虫和同翅目的斑衣蜡蝉及蜚蠊目的蟑螂，在相对湿度为50％～70％、温度为25℃～28℃的环境中保持24h后。每处理试虫数量为45头，每个处理3个平行。接虫后置于室内常温培养，56h后统计死亡率，如表4所示。
表4贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对鳞翅目、同翅目及蜚蠊目害虫的灭杀作用
Figure BDA0003652280800000072
Figure BDA0003652280800000081
实施例6贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的抑菌谱测定
选取常见植物真菌病害病原菌如：棉花红腐病菌、棉花枯萎病菌、棉花立枯病菌、棉花黑腐病菌、玉米纹枯病菌、马铃薯干腐病菌、马铃薯早疫病菌、马铃薯枯萎病菌、马铃薯环腐病菌、梨黑斑病菌、番茄灰霉病菌、辣椒炭疽病菌、辣椒青枯病菌、番茄根腐病菌、黄瓜灰霉病菌、黄瓜白粉病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜炭疽病菌、小麦黑穗病菌、葡萄白腐病菌、葡萄灰霉病菌、苹果轮纹病菌、烟草赤星病菌等多种植物病原菌为靶标，采用平板对峙法测定菌株ZLP-101的抑菌谱，确定ZLP-101菌株对病原菌生长的抑制能力。
根据表5的实施结果可见，菌株ZLP-101对所试23种植物真菌病害均有较强的拮抗作用，其中对马铃薯枯萎病菌的抑制作用最强，抑菌圈直径可达30.28mm，其次为早疫病菌，抑菌圈达29.18mm。说明以贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵液为活性成分的杀菌剂在农业生产上有良好的应用价值。
表5贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101对不同植物病原菌的抑制效果
Figure BDA0003652280800000082
Figure BDA0003652280800000091
实施例7贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂(水分散粒剂)的制备
(1)制备贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉
培养贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101使用NB液体培养基，配方为：牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5g/L、葡萄糖10g/L，pH7.0。接种后置于180r/min、32℃的震荡培养箱中培养48h。将培养好的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵菌液，进行喷雾干燥，填料选11％的β-环糊精，9％的CaCO3，3％的MgSO4，进口温度180℃，设置料液温度为常温22℃，风速为30m3/h，入料流量是15mL/min，喷雾干燥后获得贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉。
(2)杀虫剂的制作流程
配方1的制备方法：将24.7％的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌粉与54％的辅料、15％的粘结剂可溶性淀粉、1％的分散剂木质素磺酸钠、3％的崩解剂硫酸钠、0.5％的润湿剂大豆卵磷脂及1.8％的增效剂大豆油充分混合，通过气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进行挤压造粒，得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛得到贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂。
配方2的制备方法：将21.95％的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉与与53％的辅料、17％的粘结剂羧甲基纤维素、1.5％的分散剂三聚磷酸钠、2.5％的崩解剂十二烷基硫酸钠、1％的润湿剂磺化油及3.05％的增效剂聚醚改性三硅氧烷充分混合，通过气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进行挤压造粒，得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛得到贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂。
配方3的制备方法：将23.35％的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉与52％的辅料、18％的粘结剂糊精、1％的分散剂焦磷酸钠、2.8％的崩解剂聚山梨酯80、0.8％的润湿剂炔二醇及0.05％的增效剂乙氧基改性聚三硅氧烷充分混合，通过气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进行挤压造粒，得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛得到贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂。
实施例8贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂的杀虫效果
将实施例6中的3个杀虫剂配方应用于棉花试验田及黄瓜、番茄蔬菜地，检测本发明杀虫剂对棉花棉蚜、黄瓜白粉虱和番茄烟粉虱的杀灭效果。试验区将杀虫剂稀释合适浓度后，喷洒于作物及蔬菜叶面和背面，喷洒药液至液滴刚滴下为适量。喷洒药液后棉蚜、白粉虱和烟粉虱停止取食不动为致死，每3d、5d、7d及10d各调查害虫幼虫的死亡情况。对照区不施用任何杀虫剂。统计记录被致死数、总虫数、试验区死亡率、对照区死亡率，计算致死率和防效。
致死率(％)＝致死虫数÷调查总虫数×100
防效(％)＝(防治区虫口死亡率－对照区虫口死亡率)÷(1－对照区虫口死亡率)×100
实施结果(见表6)可知，本发明贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂的3个配方对棉花棉蚜、黄瓜白粉虱和番茄烟粉虱的防效在93.95％～97.10％。表明，本发明贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂对半翅目害虫有很好的消灭作用。
表6贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂对半翅目害虫的杀灭效果
Figure BDA0003652280800000101
Figure BDA0003652280800000111
实施例9贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂(粉剂)的制备方法
将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵菌液和多菌灵溶液(1g多菌灵溶于800mL水)按照500∶1的体积比均匀混合，然后进行喷雾干燥，喷雾干燥后获得贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂的粉剂。
实施例10贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂的防病效果
采用室内盆栽试验，室内盆栽(直径24cm，装无菌土)番茄种苗10株/盆，黄瓜种苗15株/盆，当番茄苗和黄瓜苗长出2～3复叶时将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂(实施例7)用水稀释到50倍后，施于番茄和黄瓜秧苗根际，用无菌土覆盖2cm，1d后番茄接入根腐病菌，黄瓜接入灰霉病菌，接种前用小刀破坏根系，用清水作对照。每处理3次重复，记录秧苗发病情况。根据表7的数据可以看出，贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂对番茄根腐病的平均防治效果达到了90.0％，对黄瓜灰霉病的平均防治效果达到了88.89％。表明，贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂对蔬菜真菌病害有很好的防治效果。
表7贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂对番茄根腐病和黄瓜灰霉病的防治效果
Figure BDA0003652280800000112
Figure BDA0003652280800000121
实施例11贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂的促生效果
选用黄瓜为试验作物，室内盆栽黄瓜种苗15株/盆，设3个平行，处理组施用贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂(实施例7)，对照组不施用任何促生产品。而后随机选10株28日龄黄瓜幼苗，用直尺测量幼苗的株高，游标卡尺测量茎粗。105℃杀青15min，75℃烘干至恒重，测定地上部和地下部干质量，采用乙醇丙酮浸提法测定叶绿素含量，用便携式光合测定系统进行光合参数的测定。从表8可知，贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂在对黄瓜幼苗的株高、茎粗、单株地上部鲜质量、单株地上部干质量、叶面积、单株根鲜质量、单株根干质量、单株总根体积、叶绿素总量和净光合速率方面较CK提高了5.13％、7.03％、20.0％、15.53％、1.09％、56.99％、11.37％、114.3％、67.48％、和87.17％，且除株高、叶面积和单株根干质量外，都达到了差异显著的水平。表明，本发明贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂对黄瓜幼苗有显著的促生效果。
表8贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀菌剂对黄瓜幼苗的促生效果
Figure BDA0003652280800000122
注：同行相同字母代表P＞0.05，差异不显著，不同字母代表P＜0.05，差异显著。
实施例12贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂(包含杀虫剂)的制备
按照质量比(见表9)，制作包含化学杀虫剂、生物杀虫剂、植物杀虫剂的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂配方。其中菌粉为实施例6的步骤(1)所得到的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉。
制备方法：将贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉与辅料混合后，再与粘结剂、分散剂、崩解剂、润湿剂、杀虫剂及增效剂充分混合，通过气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进行挤压造粒，得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛得到贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂。
所用辅料为碳酸钙。
所用粘结剂为：(1)可溶性淀粉、(2)羧甲基纤维素钠、(3)糊精。
所用分散剂为：(A)木质素磺酸钠、(B)三聚磷酸钠、(C)焦磷酸钠。
所用崩解剂为：(a)硫酸钠、(b)十二烷基硫酸钠、(e)聚山梨酯80。
所用润湿剂为：(α)大豆卵磷脂、(β)磺化油、(γ)炔二醇。
所用增效剂为：(1)硅氧烷共聚物、(2)聚醚改性三硅氧烷、(3)乙氧基改性聚三硅氧烷等有机硅类，(4)增效醚、(5)顺丁烯二酸二乙酯、(6)磷酸三苯酯等解毒酶抑制剂类，(7)松节油、(8)茶皂素、(9)天然陈皮精油、(10)玉米胚芽油、(11)油菜籽油、(12)大豆油、(13)青皮桔油、(14)松油、(15)苦楝油、(16)蓖麻油、(17)薄荷油、(18)百里香油、(19)桉叶油、(20)芝麻油、(21)橄榄油等植物油类，(22)大豆软磷脂非离子表面活性混合剂、(23)聚天冬氨酸、(24)烷基多糖苷、(25)d－柠檬烯、(26)蜂蜜、(27)丙酮、(28)肉桂醛、(29)松油烯-4-醇、(30)川楝素、(31)弹指间、(32)倍创、(33)渗展宝、(34)一可佳中任意的1种或2种以上。
化学杀虫剂包括：(1)丙氨酸甲酯、(2)苯醚甲环性、(3)速克灵、(4)进口甲托、(5)苯并咪唑44号、(6)密霉胺、(7)福美霜、(8)进口蓝粉、(9)氯虫苯甲酰胺、(10)高效氯氟氰菊酯、(11)乙基多杀菌素、(12)灭幼脲氯氰菊酯、(13)吡虫啉、(14)溴氰菊酯、(15)赤霉酸、(16)吲哚乙酸、(17)吲哚丁酸、(18)烯腺嘌呤、(19)羟烯腺嘌呤、(20)苄氨基嘌呤、(21)24-表芸苔素内酯、(22)22,23,24-表芸苔素内酯、(23)28-表高芸苔素内酯、(24)28-高芸苔素内酯、(25)14-羟基芸苔素甾醇、(26)三十烷醇、(27)S-诱抗素、(28)抗坏血酸、(29)糠氨基嘌呤、(30)二氢卟吩铁、(31)尿囊素、(32)超敏蛋白、(33)极细链格孢激活蛋白、(34)氨基寡糖素、(35)香菇多糖、(36)几丁聚糖、(37)葡聚烯糖、(38)低聚糖素、(39)β-羽扇豆球蛋白多肽、(40)胆钙化醇、(41)米尔贝霉素、(42)括二化螟性诱剂、(43)斜纹夜蛾诱集性信息素、(44)绿盲蝽性信息素、(45)梨小性迷向素、(46)苹果蠹蛾性信息素中的任意1种或2种以上。
生物杀虫剂包括：(1)枯草芽孢杆菌、(2)短稳杆菌、(3)多粘类芽孢杆菌、(4)苏云金芽孢杆菌、(5)甲基营养型芽孢杆菌、(6)海洋芽孢杆菌、(7)坚强芽孢杆菌、(8)球形芽孢杆菌、(9)蜡质芽孢杆菌、(10)荧光假单胞杆菌、(11)侧孢短芽孢杆菌、(12)短稳杆菌、(13)地衣芽孢杆菌、(14)解淀粉芽孢杆菌、(15)沼泽红假单胞菌、(16)嗜硫小红卵菌、(17)白僵菌、(18)球孢白僵菌、(19)金龟子绿僵菌、(20)哈茨木霉菌、(21)木霉菌、(22)淡紫拟青霉、(23)厚孢轮枝菌、(24)耳霉菌、(25)盾壳霉、(26)小盾壳霉、(27)寡雄腐霉菌、(28)蟑螂病毒、(29)多角体病毒、(30)颗粒体病毒、(31)多杀霉素、(32)阿维菌素、(33)蝗虫微孢子虫中的任意1种或2种以上。
植物杀虫剂包括：(1)印楝素、(2)苦参碱、(3)藜芦碱、(4)烟碱、(5)鱼藤酮、(6)除虫菊素、(7)苦皮藤素、(8)桉油精、(9)八角茴香油、(10)狼毒素、(11)雷公藤甲素、(12)莪术醇、(13)蛇床子素、(14)丁子香酚、(15)大黄素甲醚、(16)香芹酚、(17)小檗碱、(18)甾烯醇、(19)茶皂素、(20)螺威、(21)大蒜素、(22)d-柠檬烯、(23)萜烯醇、(24)异硫氰酸烯丙酯、(25)十五烯苯酚酸、(26)十三烷苯酚酸、(27)苯丙烯菌酮中的任意1种或2种以上。
表9贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101杀虫剂配方
Figure BDA0003652280800000141
Figure BDA0003652280800000151
Figure BDA0003652280800000161
Figure BDA0003652280800000171
Figure BDA0003652280800000181
Figure BDA0003652280800000191
Figure BDA0003652280800000201
以上所述的实施例和方法是本发明的最佳实施方案，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出部分改变、修饰、替代、组合，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZLP-101，其特征在于，其保藏号为CGMCC No. 20130。
2.一种如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在防治半翅目害虫、鳞翅目害虫、鞘翅目害虫、斑衣蜡蝉或蟑螂中的应用，其特征在于，所述半翅目害虫包括蚜虫、粉虱和飞虱；所述鳞翅目害虫包括小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾和菜青虫；所述鞘翅目害虫包括蛴螬、金针虫和拟地甲。
3.一种如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在防治立枯病菌、枯萎病菌、黑腐病菌、环腐病菌、红腐病菌、青枯病菌、纹枯病菌、黑穗病菌、根腐病菌、白腐病菌、早疫病菌、灰霉病菌、白粉病菌或炭疽病菌中的应用。
4.一种如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101在制备生防制剂、生物农药或生物肥料中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生防制剂、生物农药或生物肥料中包含贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌体和/或发酵液。
6.一种杀虫剂，其特征在于，其包括如下重量份的组分：贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉20~78份、粘结剂15~20份、分散剂1~1.5份、崩解剂2.5~3份、润湿剂0.5~1份以及增效剂0.05~1.8份；
所述贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌株原粉通过如下方法制备：向贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101的发酵液中添加发酵液质量8~14%的β-环糊精、6~12%的CaCO3以及1~5%的MgSO4后进行喷雾干燥；
所述粘结剂为：可溶性淀粉、羧甲基纤维素钠或糊精；
所述分散剂为：木质素磺酸钠、三聚磷酸钠或焦磷酸钠；
所述崩解剂为：硫酸钠、十二烷基硫酸钠或聚山梨酯80；所用润湿剂为：大豆卵磷脂、磺化油或炔二醇；
所述增效剂为：硅氧烷共聚物、聚醚改性三硅氧烷、乙氧基改性聚三硅氧烷，增效醚、顺丁烯二酸二乙酯、磷酸三苯酯，松节油、茶皂素、天然陈皮精油、玉米胚芽油、油菜籽油、大豆油、青皮桔油、松油、苦楝油、蓖麻油、薄荷油、百里香油、桉叶油、芝麻油、橄榄油、聚天冬氨酸、烷基多糖苷、d-柠檬烯、蜂蜜、丙酮、肉桂醛、松油烯-4-醇或川楝素。
7.根据权利要求6所述的杀虫剂，其特征在于，其还包括0.4~1.1重量份的化学杀虫剂、生物杀虫剂或植物杀虫剂。
8.一种杀菌剂，其特征在于，包含贝莱斯芽孢杆菌ZLP-101菌体和/或发酵液。
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