CN114716506A - 用于偶联和治疗的哈米特林（hemiasterlin）衍生物 - Google Patents

用于偶联和治疗的哈米特林（hemiasterlin）衍生物 Download PDF

Info

Publication number
CN114716506A
CN114716506A CN202210281131.6A CN202210281131A CN114716506A CN 114716506 A CN114716506 A CN 114716506A CN 202210281131 A CN202210281131 A CN 202210281131A CN 114716506 A CN114716506 A CN 114716506A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
group
conjugate
pharmaceutically acceptable
solvate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210281131.6A
Other languages
English (en)
Inventor
T.克里内
殷群
K.巴朱里
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sutro Biopharma Inc
Original Assignee
Sutro Biopharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sutro Biopharma Inc filed Critical Sutro Biopharma Inc
Publication of CN114716506A publication Critical patent/CN114716506A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • C07K9/003—Peptides being substituted by heterocyclic radicals, e.g. bleomycin, phleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic

Abstract

本发明提供了哈米特林(hemiasterlin)衍生物，其偶联物，包含所述衍生物或其偶联物的组合物，生产所述衍生物和其偶联物的方法，和使用所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗细胞增殖的方法。所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗和预防细胞增殖和癌症的方法，用于检测细胞增殖和癌症的方法，和用于诊断细胞增殖和癌症的方法。在其中一个实施方案，所述哈米特林(hemiasterlin)衍生物具有式1000所示结构：
Figure DDA0003557853010000011
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中Ar、L、W1、W4、W5、SG、和R具有本发明所述定义。

Description

用于偶联和治疗的哈米特林（hemiasterlin）衍生物
发明领域
本发明提供了哈米特林(hemiasterlin)衍生物，其偶联物，包含所述衍生物或其偶联物的组合物，生产所述衍生物和其偶联物的方法，和使用所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗细胞增殖的方法。所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗和预防细胞增殖和癌症的方法，用于检测细胞增殖和癌症的方法，和用于诊断细胞增殖和癌症的方法。
发明背景
哈米特林类(hemiasterlins)是由所述原始天然产品哈米特林(hemiasterlin)修饰而来的一类三肽。哈米特林(Hemiasterlin)是从海绵Cymbastela sp.,Hemiasterellaminor,管指海绵种属(Siphonochalina sp.),和Auletta sp.中分离得到的(Talpir etal.,Tetrahedron Letters,vol.35,no.25,pp.4453-4456,1994)。
Figure BDA0003557852990000011
哈米特林为伪肽类，其是微管蛋白聚合的抑制剂，与海兔毒素类(dolastatins)和隐藻素类 (cryptophycins)共享抗有丝分裂作用机理。已证实可非竞争地结合在微管蛋白的所述长春花碱位点。哈米特林类通常具有渗透性差的糖蛋白(pGP)基质，使他们对pGP过表达作为耐药机制的肿瘤有效(Loganzo et al.,Cancer Research,vol 63,pp.1838-1845,15April 2003)。
天然哈米特林的广泛修饰论证了促进此类化合物纳摩尔活性与多种肿瘤细胞株之间关系的关键特征。两个衍生物，E7974，卫材(Eisai)开发的N-末端哌啶衍生物，和HTI-286，惠氏(Wyeth)开发的N-末端苯基衍生物，均已进入临床I期试验。E7974于2007年公布了令人鼓舞的结果(Madajewicz et al., "A phase I trial of E7974 administered ondays 1and 15of a 28-day cycle in patients with solid malignancies," 公布在American Society of Clinical Oncology Annual Meeting；June 1-5,2007；Chicago,Ill.；和Zojwalla et al., "A phase I trial of E7974 administered on days 1,8,and 15of a 28-day cycle in patients with solid malignancies," 公布在AmericanSociety of Clinical Oncology Annual Meeting；June 1-5,2007；Chicago,Ill；两者同时总结在文献Rocha-Lima et al.,Cancer,September 1,2012pp.4262-4270中)。然而，迄今仍未见HTI-286的相关报道。
Figure BDA0003557852990000021
此外，将HTI-286在C-端与胃泌激素十肽VLALAEEEAYGWNleDF-NH2进行偶联用于肿瘤靶向，其记载在Tarsova等、美国专利申请公开号US 2005/0171014 A1中。然而，报道的活性却非常微弱。
发明摘要
本发明提供了哈米特林(hemiasterlin)衍生物，其偶联物，包含所述衍生物或其偶联物的组合物，生产所述衍生物和其偶联物的方法，和使用所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗细胞增殖的方法。所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗和预防细胞增殖和癌症的方法，用于检测细胞增殖和癌症的方法，和用于诊断细胞增殖和癌症的方法。
一方面，本发明提供了式1000所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000022
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是–CH2–；
X是
Figure BDA0003557852990000023
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
各RT是在式1000主干上的或与EG连接的释放引发基团，其中每个RT均是可选的；
RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体，或RT1不存在；
HP是单键、或不存在，或HP是二价亲水基团；
HP1是单键、或不存在，或是二价亲水基团，或HP1是
Figure BDA0003557852990000031
其中RHP是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或是二价间隔基团；和
R是氢、末端偶联基团、或末端偶联基团的二价残基；
或者，可选择地，W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成–H。
一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与第二化合物连接的本发明所述化合物(例如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或式1-8b任一所示的化合物)。
一方面，本发明提供了药物组合物，其包含：
本发明所述化合物(如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或式1-8b任一所示的化合物)或偶联物(如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物)；和
药学上可接受的辅料、载体、或稀释剂。
一方面，本发明提供了在有需要的受试者中抑制微管蛋白聚合的方法，所述方法包含对所述受试者施用有效量的本发明所述化合物(如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或式1-8b任一所示的化合物)、偶联物(如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物)、或含有本发明所述化合物或偶联物的组合物。
一方面，本发明提供了在有需要的受试者中治疗细胞增殖或癌症的方法，所述方法包含对所述受试者施用有效量的本发明所述化合物(如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或式1-8b任一所示的化合物)、偶联物(如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物)、或含有本发明所述化合物或偶联物的组合物。
一方面，本发明提供了生产偶联物的方法，所述方法包括在适宜使本发明所述化合物(如，式 1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、或式101-111b任一所示的化合物)与所述第二化合物进行偶联的条件下，使本发明化合物(如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、或式101-111b任一所示的化合物)与第二化合物接触；其中所述第二化合物包含修饰的氨基酸，所述修饰的氨基酸包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、马来酰亚胺、羰基、羟基胺、或叠氮化物。
附图简要说明
图1提供了本发明详述的细胞杀伤试验的结果。对化合物1的外消旋体[R/S,S,S]与曲妥珠单抗重链F404位置和轻链S7位置进行偶联的偶联物进行评价。图1所示所有其他偶联物均是在曲妥珠单抗重链F404位置进行偶联的。对SKBR3细胞的相对细胞活力与曲妥珠单抗(X)、曲妥珠单抗F404与化合物1的[S,S,S]异构体的偶联物(填充正方形)、曲妥珠单抗F404与化合物1的外消旋体[R/S,S,S]的偶联物(劈开正方形)、曲妥珠单抗S7与化合物1的外消旋体[R/S,S,S]的偶联物(劈开圆形)、和曲妥珠单抗阿里他汀(auristatin)(MMAF)偶联物(空心三角形)的浓度之间关系进行绘图。
图2a提供了本发明详述的细胞杀伤试验的结果。图2a中，对相对细胞活力与分别用于SKBR3 细胞、MDA-MB-453细胞、和MDA-MB-468细胞的化合物1的[S,S,S]异构体(填充正方形)、和化合物 1的[R,S,S]异构体(空心正方形)的浓度关系进行绘图，分别如图(a)、(b)和(c)所示。
图2b提供了本发明详述的细胞杀伤试验的结果。图2b中，对相对细胞活力与用于分别HTC116 细胞、HT29细胞、和SKCO1细胞的化合物1的[S,S,S]异构体(填充正方形)和化合物1的[R,S,S]异构体 (空心正方形)的浓度关系进行绘图，分别如图(a)、(b)和(c)所示。
图2c提供了本发明详述的细胞杀伤试验的结果。图2c中，对相对细胞活力与分别用于 MDA-MB-435细胞、SUDHL6细胞、和OMP2细胞的化合物1的[S,S,S]异构体(填充正方形)和化合物1 的[R,S,S]异构体(空心正方形)的浓度关系进行绘图，分别如图(a)、(b)和(c)所示。
本发明示例性实施方案的描述
本发明提供了化合物(如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或式1-8b任一所示的化合物)，其偶联物(如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物)，含有所述化合物或其偶联物的组合物，生产所述化合物和其偶联物的方法，和使用所述化合物、偶联物和组合物的方法。所述衍生物、偶联物和组合物用于治疗或预防细胞增殖和癌症的方法，用于检测细胞增殖和癌症的方法，和用于诊断细胞增殖和癌症的方法。
定义
当提及本发明所述化合物，下述术语具有下述含义，除非另有说明。除非另有定义，本发明使用的所有技术和科学术语均具有与任何本领域普通技术人员通常理解的含义相同的意义，除非另有说明，否则本节内容将普遍适用。除非另有说明，其中术语定义为未取代或取代的，在所罗列的取代基中，所述基团均是未取代的。譬如，烷基基团可被环烷基基团取代，但所述环烷基基团并未被进一步取代。
本发明使用的术语“烷基”，除非另有说明，是指饱和的直链或支链烃，所述烃可被卤素基团取代。在一些实施方案，所述烷基基团是一级、二级、或三级烃。在一些实施方案，所述烷基基团包括1至 10个碳原子，即C1至C10烷基。在一些实施方案，所述烷基基团是，譬如，甲基、CF3、CCl3、CFCl2、 CF2Cl、乙基、CH2CF3、CF2CF3、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、t-丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、和2,3-二甲基丁基。所述术语包括取代和未取代的烷基基团，包括卤代烷基基团。在一些实施方案，所述烷基基团是氟化烷基基团。在一些实施方案，所述烷基基团可以被至少一个(在另一实施例，被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的以下取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、环烷基、芳烷基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或瞵酸根，本领域技术人员已知的，例如，在Greene,et al.,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley and Sons,Second Edition,1991中教导的那些取代基，在此通过引用并入。
本发明使用的术语“低级烷基”，除非另有说明，是指饱和的直链或支链、具有1至6个碳原子的烃，即，C1至C6烷基。在一些实施方案，所述低级烷基基团是一级、二级、或三级烃。所述术语包括取代和未取代的基团部分。
本发明使用的术语“高级烷基”，除非另有说明，是指饱和的直链或支链、具有7至30个碳原子的烃，即，C7至C30烷基。在一些实施方案，所述高级烷基基团是一级、二级、或三级烃。所述术语包括取代和未取代的基团部分。
术语“烷基羰基”是指基团–C(O)(烷基)，其中烷基具有本发明所述定义。
术语“烷硫基”是指基团–S(烷基)，其中烷基具有本发明所述定义。
术语“亚羧基”是指–C(O)O-或–OC(O)-基团。
术语“环烷基硫基”是指基团–S(环烷基)，其中环烷基具有本发明所述定义。
术语“芳基硫基”是指基团–S(芳基)，其中芳基具有本发明所述定义。
术语“烷基磺酰基”是指基团–S(O)2(烷基)，其中烷基具有本发明所述定义。
术语“环烷基磺酰基”是指基团–S(O)2(环烷基)，其中环烷基具有本发明所述定义。
术语“芳基磺酰基”是指基团–S(O)2(芳基)，其中芳基具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“环烷基”，除非另有说明，是指饱和的单环或多环烃。在一些实施方案，环烷基包括并环、桥环和螺环体系。在一些实施方案，所述环烷基基团包括3至10个碳原子，即，C3至C10环烷基。在一些实施方案，所述环烷基具有3至15(C3-15)，3至10(C3-10)，或3至7(C3-7)个碳原子。在一些实施方案，所述环烷基基团是，譬如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己基甲基、环庚基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、十氢萘基、或金刚烷基。所述术语包括取代和未取代的环烷基基团，包括卤代环烷基基团。在一些实施方案，所述环烷基基团是氟化环烷基基团。在一些实施方案，所述环烷基基团可以被至少一个(在另一实施例，被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的以下取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
术语“环烷基烷基”是指本发明定义的烷基基团被至少一个(在一些实施方案，一个或两个)本发明定义的环烷基基团取代。
术语“环烷基羰基”是指基团–C(O)(环烷基)，其中环烷基具有本发明所述定义。
“亚烷基”是指二价的饱和脂肪族烃基团，包括具有1至11个碳原子的那些，其可以是直链或支链的。在一些实施方案，所述亚烷基基团含有1至10个碳原子。所述术语包括取代和未取代的基团部分。在一些实施方案，亚烷基是，譬如，亚甲基(–CH2–)、亚乙基(–CH2CH2–)、亚丙基的同分异构体 (如–CH2CH2CH2–和–CH(CH3)CH2–)等。所述术语包括卤代的亚烷基基团。在一些实施方案，所述亚烷基基团是氟化亚烷基基团。在一些实施方案，所述亚烷基基团可以被至少一个(在另一实施例，被1、2、 3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷基芳基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、和膦酸根。
“烯基”是指一价的烯属不饱和烃基团，在一些实施方案，具有多达约11个碳原子，包括2至8 个碳原子，或2至6个碳原子，其可以是直链或支链的并具有至少1个、包括1至2个烯属的不饱和位点。所述术语包括取代和未取代的基团部分。在一些实施方案，烯基是，譬如，乙烯基(即，乙烯基或–CH＝CH2)、 n-丙烯基(–CH2CH＝CH2)、异丙烯基(–C(CH3)＝CH2)等。所述术语包括卤代烯基基团。在一些实施方案，所述烯基基团是氟化烯基基团。在一些实施方案，所述烯基基团可以被至少一个(在另一实施例，被 1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
本发明使用的术语“环烯基”，除非另有说明，是指不饱和(但并非芳香族)环烃。在一些实施方案，环烯基是指包括至少一个双键的单环或多环体系。在一些实施方案，环烯基包括并环、桥环和螺环体系。在一些实施方案，所述环烯基基团包括至少3个碳原子，包括3至10个碳原子，即，C3至C10环烯基。在一些实施方案，所述环烯基具有3至10(C3-10)，或4至7(C4-7)个碳原子。所述术语包括取代和未取代的环烯基基团，包括卤代环烯基基团。在一些实施方案，所述环烯基基团是氟化环烯基基团。在一些实施方案，所述环烯基基团可以被至少一个(在另一实施例，被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
术语“亚烯基”是指二价的烯属不饱和烃基团，在一些实施方案，具有多达约11个碳原子或2 至6个碳原子，其可以是直链或支链的并具有至少1个、或1至2个烯属的不饱和位点。在一些实施方案，亚烯基是，譬如，亚乙烯基(–CH＝CH–)、亚丙烯基的同分异构体(如–CH＝CHCH2–和–C(CH3)＝CH–和–CH＝C(CH3)–)等。所述术语包括取代和未取代的亚烯基基团，包括卤代亚烯基基团。在一些实施方案，所述亚烯基基团是氟化亚烯基基团。具有所述亚烯基基团的基团部分的非限制性实例，可以被至少一个(在另一实施例，被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
“炔基”是指炔属不饱和烃基团，在一些实施方案，具有多达约11个碳原子或2至6个碳原子，其可以是直链或支链的并具有至少1个、或1至2个炔基不饱和位点。在一些实施方案，炔基是，譬如，炔属的乙炔基(–C≡CH)、炔丙基(-CH2C≡CH)等。所述术语包括取代和未取代的炔基基团，包括卤代炔基基团。在一些实施方案，所述炔基基团是氟化炔基基团。在一些实施方案，所述炔基基团可以被至少一个(在另一实施例，被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述取代基取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
本发明使用的术语“芳基”，除非另有说明，是指一价的6至14个原子组成的单、双、或三碳环，其中所述单环是芳香族的，和在所述双环和三环中至少一个所述环是芳香族的。所述芳基基团可通过所述环体系中的任何碳原子连接至所述分子的其余部分。在其中一个实施方案，芳基基团是C6-C12芳基基团。在其中一个实施方案，芳基基团是苯基、茚满基、或萘基。所述术语包括取代和未取代的基团部分。在一些实施方案，芳基基团可以被一个或多个(例如，1、2、3、4、或5个)独立选自下组的未保护的、或者必要时保护的基团部分取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、烷基、卤代烷基、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、和膦酸根，本领域技术人员已知的，例如，在Greene,et al.,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wileyand Sons,Second Edition, 1991中教导的那些取代基。
术语“芳基羰基”是指基团–C(O)(芳基)，其中芳基具有本发明所述定义。
术语“芳氧基”是指基团–OR'，其中R'是芳基，并具有本发明所述定义。
术语“芳氧基烷基”是指被至少一个(在一些实施方案，1或2个)本发明定义的芳氧基基团取代的烷基基团，所述烷基基团具有本发明所述定义。
术语“烷氧基”和“烷基氧基”是指基团–OR'，其中R'是烷基或环烷基，所述烷基或环烷基具有本发明所述定义。在一些实施方案，烷氧基和烷基氧基基团包括，例如，甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、n-丁氧基、叔-丁氧基、仲-丁氧基、n-戊氧基、n-己氧基、1,2-二甲基丁氧基等。
术语“烷氧基烷基”是指被至少一个(在另一实施方案，1或2个)本发明定义的烷氧基基团取代的烷基基团，其中烷基具有本发明所述定义。
“烷氧基羰基”是指原子团–C(O)-烷氧基，其中烷氧基具有本发明所述定义。
“烷氧基羰基烷基”是指被至少一个，在另一实施例，1或2个烷氧基羰基基团取代的烷基基团，所述烷基基团和烷氧基羰基基团具有本发明所述定义。
“氨基”是指基团–NR1'R2'或–NR1'–，其中R1'和R2'各自独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、或杂芳基，其中每个基团具有本发明所述定义。在其中一个实施方案，“氨基”是–NH2或-NH–。
“羧基”是指原子团–C(O)OH。
术语“烷氨基”或“芳基氨基”是指分别具有一个烷基或芳基取代基的氨基基团，例如-NHCH3、和-NH(苯基)。在一些实施方案，所述烷基取代基是低级烷基。在另一实施方案，所述烷基或低级烷基是未取代的。
术语“二烷基氨基”是指具有两个烷基取代基的氨基基团，例如–N(CH3)2。在一些实施方案，所述烷基取代基是低级烷基。在另一实施方案，所述烷基或低级烷基是未取代的。
术语“二芳基氨基”是指具有两个芳基取代基的氨基基团。
术语“卤素”或“卤原子”是指氯、溴、氟、或碘。
术语“硫代烷氧基”或“烷硫基”是指基团–SR'，其中R'是烷基或环烷基。
术语“杂环基”或“杂环的”是指一价的单环非芳香族环体系和/或含有至少一个非芳香族环的多环体系，其中一个或多个所述非芳香族环原子是独立地选自O、S、或N的杂原子，和所述其余环原子是碳原子，和其中所述多环体系进一步包含碳环或杂环、芳香族或非芳香族环。在一些实施方案，所述杂环基或杂环基基团具有3至20、3至15、3至10、3至8、4至7、或5至6个环原子。杂环基基团通过非芳香族环与所述分子的其余部分连接。在一些实施方案，所述杂环基是单环、双环、三环、或四环环体系，其可以包括稠环、螺环、或桥环体系，和在其中所述氮原子或硫原子可任选地被氧化，所述氮原子可任选地季铵化，和一些环可以是部分或全部饱和的、或芳香族的。所述杂环可以所述非芳香族环上的任何杂原子或碳原子与所述主体结构连接，结果产生稳定的化合物。在一些实施方案，杂环基是吖庚因基(azepinyl)、苯并二氧六环基、苯并二氧戊环基、苯并呋喃酮基、苯并吡喃酮基、苯并吡喃基、苯并四氢呋喃基、苯并四氢噻吩基、苯并硫代吡喃基、苯并噁嗪基、β-咔啉基、苯并二氢吡喃基、苯并吡喃酮基、噌啉基、香豆素基、十氢异喹啉基、二氢苯并异噻嗪基、二氢苯并异噁嗪基、二氢呋喃基、二氢异吲哚基、二氢吡喃基、二氢吡唑基、二氢吡嗪基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氧戊环基、1,4-二噻烷基、呋喃酮基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氢吲哚基、异苯并四氢呋喃基、异苯并四氢噻吩基、异苯并二氢吡喃基、异香豆素基、异二氢吲哚基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、噁唑烷酮基、噁唑烷基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、硫代吗啉基、噻唑烷基、四氢喹啉基、和1,3,5-三硫化环戊基。在一些实施方案，杂环基还可任选地被取代，如本发明所定义的。在一些实施方案，所述杂环基基团可被至少一个(在另一实施例，可被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述基团取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、氧、环氧、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
术语“杂芳基”是指一价的单环芳香族基团和/或含有至少一个芳香族环的多环基团，其中所述单环在所述环上含有一个或多个独立选自O、S和N的杂原子，和其中所述多环体系包含至少一个芳香族环和进一步包含碳环或杂环、芳香族或非芳香族环，和其中在所述多环体系中一个或多个所述环原子是独立地选自O、S和N的杂原子。杂芳基通过芳香族环与所述分子的其余部分连接。杂芳基基团的每个环可含有1或2个O原子、1或2个S原子、和/或1至4个N原子，条件是每个环上杂原子的总数是4或更少，和每个环含有至少一个碳原子。在一些实施方案，所述杂芳基具有5至20、5至15、或5至10个环原子。在一些实施方案，单环杂芳基基团包括，但不限于，呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基、和三唑基。在一些实施方案，双环杂芳基基团包括，但不限于，苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并吡喃基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并噁唑基、呋喃并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲嗪基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并噻吩基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、萘啶基、噁唑并吡啶基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噻二唑并嘧啶基、和噻吩并吡啶基。在一些实施方案，三环杂芳基基团包括、但不限于，吖啶基、苯并吲哚基、咔唑基、二苯并呋喃基、呸啶基、菲咯啉基、菲啶基、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、和氧杂蒽基。在一些实施方案，所述杂芳基基团可被至少一个(在另一实施例，可被1、2、3、4、或5个)未保护的、或者必要时保护的下述基团取代：卤素(氟、氯、溴、或碘)、烷基、卤代烷基、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根。
术语“烷基芳基”是指具有烷基取代基的芳基基团，其中芳基和烷基具有本发明所述定义。术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指具有芳基取代基的烷基基团，其中芳基和烷基具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“亚苯基”，除非另有说明，是指二价的苯基基团，和包括取代和未取代的基团部分。在一些实施方案，亚苯基基团可被一个或多个(例如，1、2、3、4、或5个)独立选自下组的未保护的、或者必要时保护的基团部分取代：卤素(氟、氯、溴或碘)、烷基、卤代烷基、羟基、烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、巯基、烷硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷基磺酰基、环烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基羰基、氨基甲酰基、亚磺酰氨基、氨基(如本发明所述定义，譬如，烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基等)、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、磺酸根、磷酸、磷酸根、或膦酸根，本领域技术人员已知的，如在Greene,et al.,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley and Sons,Second Edition,1991中所教导的那些取代基团。当亚苯基在EG基团的背景下使用时，则所述亚苯基被1、2、3、或4个REG基团取代，REG基团具有本发明所述定义，和/或被1或2个-O-[RT]基团，和/或1或2 个-CH2OC(O)[RT]基团取代，其中RT具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“保护基团”，除非另有定义，是指被添加至氧、氮、或磷原子的基团，以防止其进一步反应或用于其他目的。多种氧和氮的保护基团对于有机合成领域技术人员而言是已知的。
“药学上可接受的盐”是指本发明所述化合物的任何盐，其保持所述化合物的生物学特性，并且是无毒的，否则用于医药用途是不可取的。此类盐可衍生自本领域周知的各种有机和无机反离子。此类盐包括，但不限于：(1)由有机或无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、戊二酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、山梨酸、抗坏血酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、苦味酸、肉桂酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、月桂酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯丙酸、特戊酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、安息香酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、奎尼酸、粘康酸、和诸如此类的酸，形成的酸加成盐；或(2)碱加成盐，由当所述母体化合物中的酸性质子，要么(a)被金属离子，譬如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子、或碱金属或碱土金属氢氧化物如钠、钾、钙、镁、铝、锂、锌、和钡氢氧化物、氨替代，形成的碱加成盐；要么(b)与有机碱如脂肪族的、脂环族的、或芳香族的有机胺，例如氨、甲胺、二甲胺、二乙胺、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、N-甲基葡糖胺、哌嗪、三(羟甲基)-甲胺、氢氧化四甲铵等配合，形成的碱加成盐。
药学上可接受的盐进一步包括，例如但不限于，钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、四烷基铵盐等，和当所述化合物含有碱官能性，无毒的有机或无机酸盐，例如氢卤化物如盐酸盐和氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊丙酸盐、乙醇酸盐、戊二酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、山梨酸盐、抗坏血酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、苦味酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、月桂酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、1,2-乙二磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐、 4-氯苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲苯磺酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸盐、葡庚糖酸盐、3-苯基丙酸盐、三甲基乙酸盐、叔丁基乙酸盐、十二烷基硫酸盐、葡糖酸盐、安息香酸盐、谷氨酸盐、羟基萘甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、环己基氨基磺酸盐、奎尼酸盐、粘康酸盐等。
术语“酰基”是指式-C(O)R'所示基团，其中R'是烷基(包括低级烷基)；环烷基；环烷基烷基；环烯基；芳基；芳烷基(包括苄基)；取代基的烷基(包括低级烷基，和例如烷氧基烷基和芳氧基烷基)；杂环基；杂环基烷基；杂芳基；和杂芳基烷基；其中所述环烷基、环烯基、芳基、杂环基、和杂芳基可以被取代。在一些实施方案，在所述酰基或酯类中的芳基基团包含苯基基团。在一些实施方案，酰基基团包括，譬如，乙酰基、三氟乙酰基、甲基乙酰基、环丙基乙酰基、丙酰基、丁酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、新-庚酰基、本乙酰基、2-乙酰氧基-2-本乙酰基、二苯乙酰基、α-甲氧基-α-三氟甲基-本乙酰基、溴乙酰基、2-硝基-氯化苯乙酰、4-氯-氯化苯乙酰基、2-氯-2,2-二苯乙酰基、2-氯-2-苯乙酰基、三甲基乙酰基、氯二氟乙酰基、全氟乙酰基、氟乙酰基、溴二氟乙酰基、甲氧基乙酰基、2-噻吩乙酰基、氯磺酰乙酰基、 3-甲氧基苯乙酰基、苯氧基乙酰基、叔丁基乙酰基、三氯乙酰基、一氯-乙酰基、二氯乙酰基、7H-十二氟 -庚酰基、全氟-庚酰基、7H-十二-氟庚酰基、7-氯十二氟-庚酰基、7-氯-十二氟-庚酰基、7H-十二氟庚酰基、 7H-十二-氟庚酰基、壬-氟-3,6-二氧庚酰基、壬氟-3,6-二氧庚酰基、全氟庚酰基、甲氧基苯甲酰基、甲基3- 氨基-5-苯基噻吩-2-羧基、3,6-二氯-2-甲氧基-苯甲酰基、4-(1,1,2,2-四氟-乙氧基)-苯甲酰基、2-溴-丙酰基、ω-氨基癸酰基、癸酰基、n-十五酰基、硬脂酰基、3-环戊基-丙酰基、1-苯-羧基、O-乙酰扁桃酰基、新戊酰基、乙酰基、1-金刚烷-羧基、环己烷-羧基、2,6-吡啶二羧基、环丙烷-羧基、环丁烷-羧基、全氟环己基羧基、4-甲基苯甲酰基、氯甲基异噁唑基羰基、全氟环己基羧基、巴豆酰基、1-甲基-1H-吲唑-3-羰基、2- 丙烯基羰基、异戊酰基、1-吡咯烷羰基、和4-苯基苯甲酰基。
术语“氨基酸”是指天然存在和合成的α、β、γ、或δ氨基酸，包括但不限于，蛋白中发现的氨基酸，即，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸根、谷氨酸根、赖氨酸、精氨酸、和组氨酸。在一些实施方案，所述氨基酸是L-构型。在一些实施方案，所述氨基酸是D-构型。在一些实施方案，所述氨基酸提供作为本发明所述化合物的取代基，其中所述氨基酸是选自丙氨酰、缬氨酰、亮氨酰、异亮氨酰、脯氨酰、苯丙氨酰、色氨酰、蛋氨酰、甘氨酰、丝氨酰、苏氨酰、半胱氨酰、酪氨酰、天冬酰胺酰、谷氨酰胺酰、天冬氨酰、谷氨酰、赖氨酰、精氨酰、组氨酰、β-丙氨酰、β-缬氨酰、β-亮氨酰、β-异亮氨酰、β-脯氨酰、β-苯丙氨酰、β-色氨酰、β-蛋氨酰、β-甘氨酰、β-丝氨酰、β-苏氨酰、β-半胱氨酰、β-酪氨酰、β-天冬酰胺酰、β-谷氨酰胺酰、β-天冬氨酰、β-谷氨酰、β-赖氨酰、β-精氨酰、或β-组氨酰的残基。
术语“氨基酸衍生物”是指衍生自本发明所述和例示的天然或非天然存在氨基酸的基团。对于本领域技术人员显而易见的氨基酸衍生物包括，但不限于，天然和非天然存在氨基酸的酯、氨基醇、氨基醛、氨基内酯、和N-甲基衍生物。在其中一个实施方案，本发明所述化合物包含氨基酸衍生物，其中所述氨基酸衍生物是–NRX–G(SC)–C(O)–Q1–，其中Q1是–S–、–NRY–、或-O-，RY是氢或烷基，SC是天然存在或非天然存在氨基酸的侧链，G是C1-C2亚烷基，和RX是氢，或RX和SC、连同与他们连接的原子一起合并形成5个原子组成的杂环。在其中一个实施方案，氨基酸衍生物提供作为本发明所述化合物的取代基，其中所述取代基是–O–C(O)–G(SC)–NH–Q2–，其中Q2是单键或-O-，SC是天然存在或非天然存在氨基酸的侧链，和G是C1-C2亚烷基。在一些实施方案，Q2和SC、连同与他们连接的原子一起合并形成5个原子组成的杂环。在一些实施方案，G是C1亚烷基和SC是氢、烷基、芳烷基、杂环基烷基、羧基烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、羟基烷基、氨基亚氨基氨基烷基、氨基羰基烷基、巯基烷基、氨基甲酰基烷基、烷硫基烷基、或羟基芳基烷基。在其中一个实施方案，氨基酸衍生物提供作为本发明所述化合物的取代基，其中所述氨基酸衍生物是D-构型。在其中一个实施方案，氨基酸衍生物提供作为本发明所述化合物的取代基，其中所述氨基酸衍生物是L-构型。
术语“烷基杂环基”是指具有烷基取代基的杂环基基团。术语“杂环基烷基”是指具有杂环基取代基的烷基基团。
本发明使用的术语“羧基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个羧基取代的烷基，其中烷基具有本发明所述定义。
术语“烷基杂芳基”是指具有烷基取代基的杂芳基基团。术语“杂芳基烷基”是指具有杂芳基取代基的烷基基团。
本发明使用的术语“氨基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个氨基取代基取代的烷基基团，其中烷基和氨基均具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“羟基烷基”和“羟烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个羟基取代的烷基基团，其中烷基具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“氨基亚氨基氨基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个–氨基–C(NH)–氨基取代的烷基，其中烷基和氨基均具有本发明所述定义。
术语“氨基羰基”是指基团–C(O)(氨基)，其中氨基具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“氨基羰基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个–C(O)–氨基取代的烷基，其中烷基和氨基均具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“巯基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个–SH取代的烷基，其中烷基具有本发明所述定义。
术语“氨基甲酰基”是指–NRC(O)R’，其中R是氢或烷基，和R’是烷基、环烷基、杂环基、杂芳基、或芳基，所述各基团具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“氨基甲酰基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个氨基甲酰基基团取代的烷基，其中烷基和氨基甲酰基具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“烷硫基烷基”是指被至少1个，在另一实施例，被1或2个–S–烷基取代的烷基，其中烷基具有本发明所述定义。
本发明使用的术语“羟基芳基烷基”是指基团–烷基–芳基–OH，其中烷基和芳基具有本发明所述定义。
术语“磺酸”是指基团–S(O)2OH。
术语“硫酸根”是指基团–OS(O)2OR，其中R是烷基或芳烷基。
术语“磺酸根”是指基团–S(O)2OR，其中R烷基或芳烷基。
术语“亚磺酰氨基”是指基团–S(O)2NRR’，其中R是氢或烷基，和R’是烷基、环烷基、杂环基、杂芳基、或芳基，所述各基团具有本发明所述定义。
术语“磷酸根”是指基团–OP(O)(OR)2，其中各R分别独立地为烷基或芳烷基。
术语“磷酸”是指–P(O)(OH)2。
术语“膦酸根”是指基团–P(O)(OR)2，其中各R分别独立地为烷基或芳烷基。
术语“多肽”、“肽”、和“蛋白”在本发明中可交换使用，是指氨基酸残基的聚合物。即，本发明所述多肽同样适用于所述肽和所述蛋白，反之亦然。所述术语适用于天然存在氨基酸聚合物以及氨基酸聚合物，在所述氨基酸聚合物中，一个或多个氨基酸残基是修饰的氨基酸。此外，所述“多肽类”、“肽类”和“蛋白类”包括任何长度的氨基酸链，包括全长蛋白类，其中所述氨基酸残基通过共价肽键进行连接。
许多本发明所述化合物和偶联物具有手性中心。本发明包含在每个手性中心具有每个可能立体化学的每个化合物或偶联物的各立体异构体。一些化合物通过本领域技术人员已知的立体化学符号进行标识。尤其在一些实施方案，立体化学是采用用于每个手性中心的R和S符号进行标识，从左至右，如式 1000、1001、1002和(I)等，或式(C1)、F1和G1等中所描述的那样。譬如，符号[R,S,S]表示在式(I) 中从左至右的所述手性中心的R、S和S立体化学，从所述甲基氨基取代基位置开始，并在所述异丙基取代基位置结束。同样，符号[S,S,S]表示在式(I)中从左至右的所述手性中心的S、S和S立体化学。此外，符号外消旋体[R/S,S,S]表示化合物[R,S,S]和[S,S,S]的混合物。对于本发明其他化合物或偶联物，所述符号可应用于相应结构。
术语“基本上不含”或“基本上不存在”，当与主题词连用时(包括但不限于，化合物、其盐、其溶剂化物、其固体形式等)，是指所述主题词包括至少85％或90％重量，在一些实施方案，包括95％、98％、 99％、或100％重量的所述指定主题词。譬如，与组合物相关联的术语“基本上不含”或“基本上不存在”可以是指组合物包含至少85％或90％重量的化合物的指定立体异构体，在一些实施方案，包含95％、98％、99％、或100％重量的化合物的指定立体异构体。在一些实施方案，在本发明提供的所述方法和化合物中，所述化合物基本上不含未指定立体异构体或其他化合物。对于另一实施例，与固体形式相关联的术语“基本上不含”或“基本上不存在”可以是指固体形式包括至少85％或90％重量的所述指定固体形式，在一些实施方案，包括95％、98％、99％、或100％重量的所述指定固体形式。在一些实施方案，在本发明提供的所述方法和化合物中，所述固体形式基本上不含其他固体形式。
同理，与组合物关联的术语“分离的”是指组合物包括至少85％、90％、95％、98％、或99％至 100％重量的指定化合物，所述剩余物包含其他化学物种或立体异构体。同理，与化合物固体形式关联的术语“分离的”是指固体包括至少85％、90％、95％、98％、或99％至100％重量的所述化合物的此种固体形式，所述剩余物包含所述化合物的其他固体形式、其他化合物、溶剂化物、和/或其他杂质。
“溶剂化物”是指本发明提供化合物或其盐进一步包括通过非共价分子间作用力进行结合的化学计量或非化学计量的量的溶剂。其中所述溶剂是水，所述溶剂化物是水合物。
“同位素组成”是指给定原子存在的每种同位素的量，和“天然同位素组成”是指给定原子的天然存在的同位素组成或丰度。含有其天然同位素组成的原子，在本发明中还可被称为“非富集”原子。除非另有指定，本发明引用的所述化合物的所述原子意在表示所述原子的任何稳定同位素。譬如，除非另有说明，当具体指定为“H”或“氢”的位置，所述位置被认为有氢在其天然同位素组成。
“同位素富集”是指在分子中引入给定原子的特定同位素的百分比量，替代所述原子的天然同位素丰度。譬如，在给定位置1％的氘富集是指1％的所述分子在给定样本中在所述指定位置含有氘。由于氘的天然存在分布是约0.0156％，因此在采用非富集的起始物料合成的化合物中，在任何位置的氘富集是约 0.0156％。本发明所述化合物的所述同位素富集可以使用本领域技术人员已知的常规分析方法，包括质谱分析法和核磁共振光谱法来确定。
“同位素富集的”是指具有同位素组成、但除了所述原子的天然同位素组成的原子。“同位素富集的”还可以是指含有至少一个原子的化合物，所述原子具有同位素组成、但除了所述原子的天然同位素组成。
本发明使用的，“烷基”、“环烷基”、“烯基”、“环烯基”、“炔基”、“芳基”、“烷氧基”、“烷氧基羰基”、“氨基”、“羧基”、“烷氨基”、“芳基氨基”、“硫代烷氧基”、“杂环基”、“杂芳基”、“烷基杂环基”、“烷基杂芳基”、“酰基”、“芳烷基”、“烷基芳基”、“嘌呤”、“嘧啶”、“羧基”、和“氨基酸”基团任选地在一个或多个存在氢原子的位置包含氘，和其中所述原子的所述氘组成是不同于所述天然同位素组成。
本发明使用的，“烷基”、“环烷基”、“烯基”、“环烯基”、“炔基”、“芳基”、“烷氧基”、“烷氧基羰基”、“羧基”、“烷氨基”、“芳基氨基”、“硫代烷氧基”、“杂环基”、“杂芳基”、“烷基杂环基”、“烷基杂芳基”、“酰基”、“芳烷基”、“烷基芳基”、“嘌呤”、“嘧啶”、“羧基”、和“氨基酸”基团还任选地包含一定量的C-13，除了所述天然同位素组成。
本发明使用的EC50是指特定测试化合物的剂量、浓度或量，其引出由所述特定测试化合物诱导、激发或增强的特定响应的最大表达量的50％的剂量依赖性响应。
本发明使用的IC50是指特定测试化合物的量、浓度或剂量，其实现在测定此响应的试验中最大响应的50％抑制率。
“癌症”是指细胞增殖性疾病，包括但不限于：心脏的：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)，黏液瘤，横纹肌瘤，纤维瘤，脂肪瘤和畸胎瘤；肺部的：支气管癌(鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌)，肺泡癌(细支气管)，支气管腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，软骨瘤性错构瘤，眼眶孤立性纤维源性瘤(inesothelioma)；胃肠道的：结肠(结肠癌、结肠腺癌、结直肠腺癌)，食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)，胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤)，小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)，大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤，错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道的：肾(腺癌、胚胎性癌肉瘤[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)，膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)，前列腺(腺癌、肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤，纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂肪瘤)；肝脏的：肝癌(肝细胞癌)，短管癌，肝母细胞癌，血管肉瘤，肝细胞腺癌、血管瘤；骨：骨原性肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，软骨肉瘤，尤因氏肉瘤，恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)，多发性骨髓瘤，恶性巨细胞瘤脊索瘤，骨软骨瘤(osteochronfroma)(骨软骨性外生骨疣)，良性软骨瘤，成软骨细胞瘤，软骨肌瘤样纤维瘤，骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄色瘤、畸形性骨炎)，脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)，脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果腺瘤]、多形性胶质母细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)，脊髓神经纤维瘤，脑膜瘤，神经胶质瘤，肉瘤)；妇产科的：子宫(子宫内膜瘤)，子宫颈(子宫颈瘤、前瘤性(pre-tumor)子宫颈非典型性增生)，卵巢(卵巢癌[浆液囊性癌、粘液囊性癌、未分类癌]、铂类耐药卵巢癌、粒层细胞鞘的细胞肿瘤、支持-间质(Sertoli-Leydig)细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤、卵巢腺癌)，外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)，阴道(透明细胞瘤、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤[胚胎横纹肌肉瘤])，输卵管(癌)；血液学的：血液(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤：黑素瘤，恶性黑素瘤，基底细胞癌，鳞状细胞癌，卡波济氏肉瘤，摩尔结构发育不良痣(moles dysplastic nevi)，脂肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕瘤，银屑病；肾上腺：成神经细胞瘤；淋巴瘤；大细胞淋巴瘤；弥慢性混合组织细胞和淋巴细胞性淋巴瘤；滤泡B 细胞淋巴瘤；和乳腺(Her2过表达的乳腺癌，三阴性乳腺癌)。因此，本发明提供的术语“癌细胞”，包括受上述任何一种确定的状况/病症影响的细胞。本发明使用的术语“受试者”和“患者”在本发明中可交换使用。术语“受试者”和“患者”是指动物，例如包括非灵长类动物(譬如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠和小鼠) 和灵长类动物(譬如，猴、黑猩猩、和人类)的哺乳动物，和例如，人类。在一些实施方案，所述受试者是对目前细胞增殖和/或癌症的治疗无效或不敏感。在另一实施方案，所述受试者是农场动物(譬如，马、牛、猪等)或宠物(譬如，狗或猫)。在一些实施方案，所述受试者是人。
本发明使用的术语“治疗剂”和“治疗药物”是指可用于治疗或预防疾病或病症、或其一个或多个症状的任何药物。在一些实施方案，术语“治疗剂”包括本发明提供化合物。在一些实施方案，治疗剂是已知将用于或已经用于或现正用于治疗或预防疾病或病症、或其一个或多个症状的药物。
“治疗有效量”是指化合物或组合物当施用受试者用于治疗疾病或病症的量，所述量对所述疾病或病症的治疗足够有效。“治疗有效量”可以根据，尤其是，接受治疗的所述患者的所述化合物、所述疾病或病症和其严重程度、和所述年龄、体重等进行改变。
任何疾病或病症的“治疗”或“处理”，在一些实施方案，是指改善存在于患者的疾病或病症。在另一实施方案，“治疗”或“处理”包括改善至少一个物理参数，其可以是所述患者觉察不出的。在另一实施方案，“治疗”或“处理”包括调节所述疾病或病症，或者身体上的(譬如，稳定明显症状)，或者生理学方面的(譬如，稳定物理参数)，或者两者兼具。在另一实施方案，“治疗”或“处理”包括延缓所述疾病或病症的发作。
本发明使用的术语“预防剂”和“预防药物”是指可用于预防疾病或病症、或其一个或多个症状的任何药物。在一些实施方案，术语“预防药物”包括本发明提供的化合物。在一些实施方案，术语“预防药物”并非指本发明提供的化合物。譬如，预防药物是已知将用于或已经用于或现正用于预防或阻止疾病或病症的发作、发展、进程和/或严重程度的药物。
本发明使用的短语“预防有效量”是指治疗的量，其足够产生预防或减少与疾病或病症关联的一个或多个症状的发展、复发或发作的结果，或提高或改善另一治疗(譬如，另一预防药物)的预防效果。
术语“抗体”是指可被本领域技术人员认为是抗体的任何大分子。抗体共同属性，包括结合、和至少一个多肽链，所述多肽链基本上与可通过本领域技术人员认可的任何免疫球蛋白基因进行编码的多肽链相同。所述免疫球蛋白基因包括，但不限于，κ、λ、α、γ(IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4)、δ、ε和μ恒定区基因，以及所述免疫球蛋白可变区基因。所述术语包括本领域技术人员认可的全长抗体和抗体片段，和其变体。
术语“抗体片段”是指抗体的任何形式，除了所述全长形式。本发明所述抗体片段包括那些存在于全长抗体内的更小组分的抗体，和已经工程化的抗体。抗体片段包括但不限于，Fv、Fc、Fab、和(Fab')2、单链Fv(scFv)、双体、三体、四体、双功能杂合抗体、CDR1、CDR2、CDR3、CDR's的组合、可变区、框架区、恒定区等(Maynard&Georgiou,2000,Annu.Rev.Biomed.Eng.2:339-76；Hudson,1998,Curr.Opin. Biotechnol.9:395-402)。
术语“免疫球蛋白(Ig)”是指包含一个或多个多肽的蛋白，所述多肽基本上由一个所述免疫球蛋白基因进行编码，或者与氨基酸序列基本上相同的蛋白。免疫球蛋白包括但不限于抗体。免疫球蛋白可具有若干结构形式，包括但不限于，全长抗体、抗体片段、和个体免疫球蛋白结构域，所述个体免疫球蛋白结构域包括但不限于VH、Cγ1、Cγ2、Cγ3、VL、和CL。
术语“免疫球蛋白(Ig)结构域”是指包含基本上由免疫球蛋白基因进行编码的多肽的蛋白结构域。Ig结构域包括但不限于VH、Cγ1、Cγ2、Cγ3、VL、和CL。
术语抗体的“可变区”是指由VH免疫球蛋白结构域、VL免疫球蛋白结构域、或VH和VL免疫球蛋白结构域组成的多肽。可变区可以是指孤立的所述这个或这些多肽，如Fv片段，如scFv片段，如在较大抗体片段背景下的所述这个区，如在全长抗体或非抗体骨架分子背景下的所述这个区。
术语“可变的”是指所述可变结构域的某些部分普遍不同于抗体中序列，并负责每个特定抗体对其特定抗原特异性结合的事实。然而，所述可变性并非通过抗体的所述可变结构域进行均匀分布。其集中在同时在轻链和重链可变结构域的称为互补决定区(CDRs)的三个片段。所述可变结构域的更高度保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，其主要采用β-折叠构型，通过3或4个CDRs进行连接，形成回路连接，和在某些情况下形成部分所述β-折叠结构。在各链中的所述CDRs通过所述FR区紧密靠近保持在一起，并与另一链的所述CDRs，促进形成抗体的所述抗原结合位点(see Kabat etal.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。
所述恒定结构域通常不参与使抗体与抗原直接结合，但表现出各种效应因子功能。根据其重链的所述恒定区的所述氨基酸序列，抗体或免疫球蛋白可分配至不同类别。免疫球蛋白有五个主要类别：IgA、 IgD、IgE、IgG和IgM，和这些类别的其中几个可进一步分成子类(同种型)，譬如IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4；IgA1和IgA2。对应于免疫球蛋白的不同类别的所述重链恒定区，分别被称为α、δ、ε、γ、和μ。各种人免疫球蛋白类型，仅人IgG1、IgG2、IgG3和IgM已知可激活补体。
术语“偶联物”是指可通过使本发明化合物与第二化合物进行偶联形成的任何化合物。所述第二化合物可以是小分子或大分子。在一些实施方案，所述第二化合物是生物活性分子，其包括但不限于，蛋白、肽、核酸活性分子或其杂交体。在一些实施方案，所述第二化合物是聚合物，如聚乙二醇。在一些实施方案，所述第二化合物是治疗剂，其包括商业途径提供的药物。在一些实施方案，所述第二化合物是可识别并结合至特定靶点的标记物，如对靶细胞有害的分子有效负载，或用于检测或诊断的标记物。在一些实施方案，本发明所述化合物通过连接体与所述第二化合物连接。在一些实施方案，本发明所述化合物在没有连接体情况下与第二化合物直接连接。在另一实施方案，所述第二化合物是小分子；大分子；生物活性分子，所述生物活性分子包括但不限于蛋白、肽、核酸活性分子或其杂交体；聚合物，如聚乙二醇；治疗剂，包括商业途径提供的药物；或识别并结合至特定靶点的标记物，如对靶细胞有害的分子有效负载，或用于检测或诊断的标记物。在另一实施方案，所述第二化合物包含修饰的氨基酸，所述修饰的氨基酸包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、马来酰亚胺、羰基、羟基胺、或叠氮化物。
术语“变体蛋白序列”是指具有一个或多个残基的蛋白序列，所述一个或多个残基的氨基酸同一性不同于另一相似蛋白序列。所述相似蛋白序列可以是天然野生型蛋白序列，或所述野生型序列的另一变体。变体包括具有一个或多个氨基酸插入、缺失、或替换的蛋白。变体还包括具有一个或多个翻译后修饰的氨基酸的蛋白。
术语“母源抗体”是指根据本发明说明书进行修饰的本领域技术人员已知的抗体。所述修饰可以是物理的，即化学或生物化学地替换或修饰所述母源抗体的一个或多个氨基酸，从而产生本发明说明书范围内的抗体。所述修饰还可以是概念上的，即使用所述母源抗体的一个或多个肽链的所述序列，从而根据本发明说明书设计包含一个或多个位点特异性修饰的氨基酸的抗体。母源抗体可以是天然存在的抗体或实验室开发设计的抗体。母源抗体还可以是人造或工程化的抗体，譬如嵌合或人源化抗体。
术语“保守修饰的变体”是指在氨基酸序列中通过保守替换从而区别于相关蛋白的蛋白。本领域技术人员将认识到个体替换、删除或添加至肽、多肽、或蛋白序列，其将改变、添加、或删除所述编码序列中的单个氨基酸或一小部分氨基酸，为“保守修饰的变体”，其中所述改变导致化学相似氨基酸来替换氨基酸。提供功能相似氨基酸的保守替换表是本领域周知的。此类保守修饰变体是除了且不排除多态变体、种间同系物、和等位基因。
下述8个基团各自含有用于彼此保守替换的氨基酸：
1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；
2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，蛋氨酸(M)，缬氨酸(V)；
6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；
7)丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；和
8)半胱氨酸(C)，蛋氨酸(M)。
参见，如Creighton,Proteins:Structures and Molecular Properties,W HFreeman&Co.；2nd edition(December 1993)。
术语“同一/相同的”或“同一性”，在两个或多个多肽序列的背景下，是指两个或多个序列或子序列是相同的。序列是“基本上相同的”，如果他们具有氨基酸残基或核苷酸的百分比是相同的(即，在特定区域有约60％的同一性，任选地约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、或约95％的同一性)，当在比较窗口或被测定的指定区域，使用下述序列比较算法之一或手动比对和目视检查，对最大匹配进行比较和比对。所述同一性可以存在于至少约50个氨基酸或核苷酸长度的区域，或存在于75-100个氨基酸或核苷酸长度的区域，其中在整个序列或多肽中没有特别指定。至于抗体，同一性可以在所述可变的CDRs外部进行测定。可以对用于比较的序列进行最优比对，包括但不限于，通过Smith andWaterman (1970)Adv.Appl.Math.2:482c中的局部同源性算法，通过Needleman andWunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443 中的同源性比对算法，通过Pearson and Lipman(1988)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 85:2444中的相似性方法搜索，通过所述这些算法的计算机处理实现(GAP,BESTFIT,FASTA,and TFASTA in the Wisconsin Genetics SoftwarePackage,Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,Wis.)；或通过手动比对和目视检测(参见，例如，Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology(1995supplement))。
适于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的实例包括BLAST(基本局部比对搜索工具) 和BLAST 2.0算法，其分别记载在Altschul et al.(1977)Nuc.AcidsRes.25:3389-3402，和Altschul et al.(1990) J.Mol.Biol.215:403-410中。用于执行完成BLAST分析的软件由国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)公开提供。所述BLAST算法参数W、T、和X确定比对的灵敏度和速度。BLASTN 程序(用于核苷酸序列)使用11的字长(W)作为默认值，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4和两条线的比较。对于氨基酸序列，所述BLASTP程序使用3的字长作为默认值，和期望值(E)为10，和BLOSUM62 积分矩阵(参见Henikoff and Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915)比对(B)为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，和两条线的比较。所述BLAST算法通常是采用关闭“低复杂度”过滤器来执行完成。在一些实施方案，所述BLAST算法通常是采用开启“低复杂度”过滤器来执行完成。
所述BLAST算法对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见，例如，Karlin andAltschul(1993) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5787)。由所述BLAST算法提供的一个相似性度量是最小和概率(P(N))，其通过两个核苷酸或氨基酸序列之间匹配的偶然发生，提供了概率的指示。譬如，核酸被认为与参照序列相似，如果所述测试核酸与所述参照核酸的最小和概率之比小于约0.2，在另一实施方案，小于约0.01，和在另一实施方案，小于约0.001。
术语“氨基酸”是指天然存在和非天然存在的氨基酸，以及氨基酸如脯氨酸，功能类似于天然存在氨基酸的氨基酸类似物和氨基酸拟态。
自然编码的氨基酸是本领域技术人员已知的蛋白原氨基酸。他们包括所述20种常见氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、和缬氨酸)和不常见的吡咯赖氨酸和硒代半胱氨酸。自然编码的氨基酸包括所述22个天然存在氨基酸的翻译后的变体，如异戊烯基化氨基酸、异戊二烯基化氨基酸、肉豆蔻酰化氨基酸、棕榈酰化氨基酸、N-连接的糖基化氨基酸、O- 连接的糖基化氨基酸、磷酸化氨基酸、和酰化氨基酸。
术语“修饰的氨基酸”是指并非蛋白原氨基酸、或其翻译后修饰的变体的氨基酸。尤其，所述术语是指并非所述20个常见氨基酸或吡咯赖氨酸或硒代半胱氨酸、或其翻译后修饰的变体中的其中一个的氨基酸。
术语“张紧的烯烃”是指含有能够以四嗪连接法与四嗪进行反应的烯烃基团部分的分子。四嗪连接法的实例记载在Blackman et al.,2008,J.Am.Chem.Soc.130:13518-13519中。实例包括反式-环辛烯和降冰片烯。有用的化合物包括，但不限于，反式-环辛烯、(E)-环辛-4-烯醇、(E)-环辛-4-烯基2,5-二氧-1-吡咯烷基碳酸酯、5-降冰片烯-2-乙酸琥珀酰亚胺酯、和5-降冰片烯-2-内-乙酸。
术语“四嗪”是指包含下述结构式的化合物或基团：
Figure BDA0003557852990000211
其中R201是低级烷基。譬如，R201可以是甲基、乙基、或丙基。在一些方面，R201是甲基。
化合物
在一些实施方案，所述化合物并非式(101)、(101a)、或(101b)所示化合物，和所述偶联物并不包含式(101)、(101a)、或(101b)所示化合物。在一些实施方案，所述化合物并非式(101a)所示化合物，和所述偶联物并不包含式(101a)所示化合物。在一些实施方案，其中X是
Figure BDA0003557852990000212
所述化合物并非式(101)、(101a)、或(101b) 所示化合物，和所述偶联物并不包含式(101)、(101a)、或(101b)所示化合物。在一些实施方案，其中 X是
Figure BDA0003557852990000213
所述化合物并非式(101a)所示化合物，和所述偶联物并不包含式(101a)所示化合物。在一些实施方案，所述化合物并非式(101)、(101a)、或 (101b)所示化合物。在一些实施方案，所述化合物并非式(101a)所示化合物。在一些实施方案，其中 X是
Figure BDA0003557852990000214
所述化合物并非式(101)、(101a)、或(101b)所示化合物。在一些实施方案，其中X是
Figure BDA0003557852990000215
Figure BDA0003557852990000221
所述化合物并非式(101a)所示化合物。在一些实施方案，所述偶联物并不包含式(101)、(101a)、或(101b)所示化合物。在一些实施方案，所述偶联物并不包含式(101a)所示化合物。在一些实施方案，其中X是
Figure BDA0003557852990000222
所述偶联物并不包含式(101)、(101a)、或(101b)所示化合物。在一些实施方案，其中X是
Figure BDA0003557852990000223
所述偶联物并不包含式(101a)所示化合物。
当使用一系列通式，譬如I-XIXb-2，则所述系列的每个通式均包含在所述系列范围内，就像，如果其被明确列出，包括以罗马数字顺序列出，譬如“a”、“-1”等。例如I-XIXb-2包括Va、XIV、和XIXa-1 等。
在其中一个实施方案，本发明提供了式I所示化合物：
Figure BDA0003557852990000224
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是-CH2-；
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG是消除基团；
各RT是在式(I)主干上的或与EG连接的释放引发基团，其中一个RT是可选的；
HP是单键、或不存在，或是二价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或是二价间隔基团；和
R是氢、末端偶联基团、或末端偶联基团的二价残基；
或者，可选择地，W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成-H。
在其中一个实施方案，本发明提供了根据式1001的式1000所示化合物：
Figure BDA0003557852990000231
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是-CH2-；
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体；
RT是与EG连接的释放引发基团；和其中RT是可选的；
HP1是单键、或不存在，或是二价亲水基团，或HP1是
Figure BDA0003557852990000232
其中RSG是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或SG是二价间隔基团；和
R是氢、末端偶联基团、或末端偶联基团的二价残基。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1002所示的式1000的化合物：
Figure BDA0003557852990000233
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是-CH2-；
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体；
RT是与EG连接的释放引发基团；和其中RT是可选的；
HP1是单键、或不存在，或是二价亲水基团，或HP1是
Figure BDA0003557852990000241
其中RSG是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或SG是二价间隔基团；和
R是氢、末端偶联基团、或末端偶联基团的二价残基。
在一些实施方案，所述偶联基团可用于使本发明所述的修饰的哈米特林(Hemiasterlin)(譬如，根据式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示结构)与能够与所述偶联基团反应以形成所述偶联物的任一分子实体结合。在一些实施方案，所述偶联基团是指本发明R 基团。所述偶联基团可通过一个或多个连接基团、消除基团、释放引发基团、疏水基团、和/或间隔基团，直接或间接与本发明所述的修饰的哈米特林(Hemiasterlin)(譬如，根据式1000-1000b、1001-1001b、 1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示结构)连接。
连接基团(AttachingGroups)
连接基团促进引入消除基团、释放引发基团、疏水基团、间隔基团、和/或偶联基团至化合物，如本发明所述的修饰的哈米特林(Hemiasterlin)(譬如，根据式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示结构)中。已知有用的连接基团对于本领域技术人员而言是显而易见的。有用的连接基团的实例如本发明所述。在一些实施方案，连接基团是指W1、W2、W3、W4、或 W5。在一些实施方案，连接基团可以包含二价酯、二价醚、二价酰胺、二价胺、亚芳基、硫化物、二硫化物、-C(O)-、或其组合。在一些实施方案，连接基团可以包含-C(O)-、-O-、-C(O)O-、-OC(O)-、–C(O)NH–、 -C(O)NH-烷基–、–OC(O)NH–、–SC(O)NH–、–NH–、–N(烷基)–、–N(R)-亚烷基-N(R)–(其中各R独立地为 H或烷基)、–N(CH3)CH2CH2N(CH3)–、-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH2CH2CH2-、亚苯基、 -NHCH2CH2C(O)-、-C(O)CH2CH2NH-、–S–、–S-S–、-OCH2CH2O–、或其连接顺序颠倒的基团(如–NHC(O)-)、或其组合。
消除基团(Eliminator Groups)
消除基团促进使本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分从所述化合物或偶联物的其余部分在体内和/或体外分离。消除基团还可连同释放引发基团促进本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分的分离。譬如，所述消除基团和所述释放引发基团可以在释放反应中进行反应，从而使本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分从所述化合物或偶联物进行体内和/或体外释放。通过释放引发基团开启所述释放反应，所述消除基团分裂所述生物活性部分，或所述生物活性部分的前药形式，并形成稳定的、无毒分子实体，所述分子实体对所述生物活性部分的所述活性没有进一步影响。
在一些实施方案，所述消除基团是指本发明EG基团。有用的消除基团包括本发明所述的那些。在一些实施方案，所述消除基团包含亚苯基、-C(O)-、氨基、或其组合。在一些实施方案，所述消除基团是：
Figure BDA0003557852990000251
其中各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、-NO2、-CN、氟、溴、氯、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-和二烷基氨基-C(O)-组成的组。在所述第二个和第三个结构中，本领域技术人员将认识到EG与RT连接，所述RT不在所述如式1000、或式(I)的主干内，如上述式1000、或式(I)所示。在一些实施方案，各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-和二烷基氨基-C(O)-组成的组。在进一步实施方案，各REG独立地选自由氢、-NO2、-CN、氟、溴、和氯组成的组。
释放引发基团和可分裂的连接体(Release Trigger Groups和CleavableLinkers)
在一些实施方案，释放引发基团促进本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分从所述化合物或偶联物的其余部分在体内和/或体外分离。在一些实施方案，释放引发基团还可连同消除基团促进本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分的分离。在一些实施方案，所述消除基团和所述释放引发基团可以在释放反应中进行反应，从而使本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分从所述化合物或偶联物进行体内和/或体外释放。在一些实施方案，所述释放引发可通过生物驱动反应与高肿瘤：非肿瘤特异性，例如在肿瘤环境中过表达酶的蛋白水解作用，从而起作用。
在一些实施方案，所述释放引发基团是指本发明RT基团。在一些实施方案，RT是二价的并连接在式(I)或1000的主干内。在其他实施方案，RT是一价的并与EG连接，如上所述。有用的释放引发基团包括本发明描述的那些。在一些实施方案，所述释放引发基团包含天然或非天然氨基酸残基或糖环残基。在一些实施方案，所述释放引发基团包含天然或非天然氨基酸残基或糖环残基。
在一些实施方案，所述释放引发基团是衍生自连接体前体，所述连接体前体是选自由二肽、三肽、四肽、和五肽组成的组，其中每个均包含一个瓜氨酸。二肽的实例包括，但不限于，缬氨酸-瓜氨酸(vc 或val-cit)、和N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。三肽的实例包括，但不限于，甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)。在一些实施方案，所述释放引发基团是衍生自连接体前体，所述连接体前体是选自由缬氨酸-瓜氨酸、N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸、和甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸组成的组。在一些实施方案，所述释放引发基团是：
Figure BDA0003557852990000261
本领域技术人员将认识到所述第一个结构是二价的并可连接在式(I)或1000的主干内，和所述第二个结构是一价的并可与上述式(I)或1000中的EG连接。
可分裂的连接体促进本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分从所述化合物或偶联物的其余部分在体内和/或体外分离。在一些实施方案，所述释放引发可通过生物驱动反应与高肿瘤：非肿瘤特异性，例如在肿瘤环境中过表达酶的蛋白水解作用，从而起作用。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是指本发明RT1基团。有用的可分裂的连接体包括本发明所述的那些。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自连接体前体，所述连接体前体是选自由二肽、三肽、四肽、和五肽组成的组。在此类实施方案中，所述连接体通过蛋白酶可进行分裂。二肽的实例包括，但不限于，缬氨酸-丙氨酸(VA或Val-Ala)；缬氨酸-谷氨酸(Val-Glu)；丙氨酸-苯丙氨酸(AF或Ala-Phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(FK或Phe-Lys)；和苯丙氨酸-高赖氨酸(Phe-高Lys)。三肽的实例包括，但不限于，甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(Gly-Gly-Gly)。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自选自由二肽和三肽组成的组的连接体前体。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自二肽。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自三肽。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自连接体前体，所述连接体前体是衍生自缬氨酸-丙氨酸、缬氨酸-谷氨酸、苯丙氨酸-高赖氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸、苯丙氨酸-高赖氨酸、或甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸。
在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自选自由二肽、三肽、四肽、和五肽组成的组的连接体前体；或是
Figure BDA0003557852990000262
或是
Figure BDA0003557852990000263
其中aa是天然或非天然氨基酸残基；或是
Figure BDA0003557852990000264
其中所述
Figure BDA0003557852990000265
环是4-7个原子组成的、含有3-6个碳原子的杂环。在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自选自二肽和三肽组成的组的连接体前体；或是
Figure BDA0003557852990000271
或是
Figure BDA0003557852990000272
其中aa是天然或非天然氨基酸残基；或是
Figure BDA0003557852990000273
其中所述
Figure BDA0003557852990000274
环是4-7个原子组成的、含有3-6个碳原子的杂环。
在一些实施方案，所述可分裂的连接体是衍生自连接体前体，所述连接体前体是选自由缬氨酸 -丙氨酸、缬氨酸-谷氨酸、丙氨酸-苯丙氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸、苯丙氨酸-高赖氨酸、和甘氨酸-甘氨酸- 甘氨酸(Gly-Gly-Gly)组成的组；或是
Figure BDA0003557852990000275
或是
Figure BDA0003557852990000276
其中 aa是天然或非天然氨基酸残基；或是
Figure BDA0003557852990000277
其中所述
Figure BDA0003557852990000278
环是4-7个原子组成的、含有 3-6个碳原子的杂环。
在一些实施方案，所述可分裂的连接体是：
Figure BDA0003557852990000279
亲水基团
亲水基团促进增加本发明所述化合物的亲水性。据认为，增加亲水性可以在水溶液，如在生物体系发现的水溶液中，具有更大的溶解度。亲水基团还可以起到间隔基团或取代基的作用，其将进一步在本发明中进行详细描述。
在一些实施方案，所述亲水基团是指本发明HP和HP1基团。有用的亲水基团包括本发明所述的那些。在一些实施方案，所述HP亲水基团是二价的聚乙二醇。在一些实施方案，所述HP亲水基团是下式所示的二价聚乙二醇：
Figure BDA00035578529900002710
其中m是从1至12，任选地1至4，任选地2至4的整数。在一些实施方案，所述HP1亲水基团是二价的亲水基团，或是
Figure BDA0003557852990000281
其中RSG是一价的亲水基团。在一些实施方案，RSG是一价的聚乙二醇。在一些实施方案，RSG是下式所示的一价聚乙二醇：
Figure BDA0003557852990000282
其中R是–H或-CH3，和m是从1至12，任选地1至4，任选地2至4的整数。在一些实施方案，RSG是下式所示的一价聚乙二醇：
Figure BDA0003557852990000283
其中R是–H或-CH3，和m是从1至12，任选地1至4，任选地2至4的整数；或RSG是-C1-C6-亚烷基-S(O)3 -。在一些实施方案，RSG是下式所示的一价聚乙二醇：
Figure BDA0003557852990000284
其中R是–H或-CH3，和m是2至4的整数；或RSG是–CH2CH2-S(O)3 -。在一些实施方案，RSG是下式所示的一价聚乙二醇：
Figure BDA0003557852990000285
或RSG是–CH2CH2-S(O)3 -。在一些实施方案，RSG是-C1-C6-亚烷基-S(O)3 -。在一些实施方案，RSG是–CH2CH2-S(O)3 -。
间隔基团
间隔基团促进所述偶联基团从本发明所述化合物的其他基团分隔。此间隔可导致本发明所述化合物与第二化合物更加有效地偶联。所述间隔基团还可稳定所述偶联基团。
在一些实施方案，所述间隔基团是指本发明SG基团。有用的间隔基团包括本发明所述的那些。在一些实施方案，所述间隔基团是：
Figure BDA0003557852990000286
在一些实施方案，SG、W4、和HP或HP1基团合并形成下式所示的二价聚乙二醇：
Figure BDA0003557852990000287
其中m是从1至12，任选地1至4，任选地2至4的整数。
偶联基团(Conjugating Groups)和其残基
偶联基团促进本发明所述化合物与第二化合物如靶向部分进行偶联。在一些实施方案，所述偶联基团是指本发明R基团。偶联基团可通过本领域技术人员已知的任何合适的反应机理进行反应。在一些实施方案，偶联基团可通过本发明详述的[3+2]炔烃-叠氮化物环加成反应、逆电子需要狄尔斯-阿尔德(Diels-Alder)连接反应、硫醇-亲电试剂反应、或羰基-羟基胺反应进行反应。在一些实施方案，所述偶联基团包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、对-乙酰基-苯丙氨酸残基、羟基胺、马来酰亚胺、或叠氮化物。在一些实施方案，所述偶联基团是：
Figure BDA0003557852990000291
Figure BDA0003557852990000292
–N3，或–SH；其中R201是低级烷基。在其中一个实施方案，R201是甲基、乙基、或丙基。在其中一个实施方案，R201是甲基。
偶联之后，形成所述偶联基团的二价残基并连接至第二化合物的所述残基。所述二价残基的所述结构是由采用形成所述偶联物的所述偶联反应的类型来确定的。
在一些实施方案，当偶联物是通过[3+2]炔烃-叠氮化物环加成反应形成，则所述偶联基团的所述二价残基包含三唑环或含有三唑环的稠环基团。在一些实施方案，当偶联物是通过[3+2]炔烃-叠氮化物环加成反应形成，则所述偶联基团的二价残基是：
Figure BDA0003557852990000293
在一些实施方案，当偶联物是通过四嗪逆电子需要狄尔斯-阿尔德(Diels-Alder)连接反应形成，则所述偶联基团的所述二价残基包含稠合双环，所述稠合双环在所述环上具有至少两个相邻的氮原子。在一些实施方案，当偶联物是通过四嗪逆电子需要狄尔斯-阿尔德(Diels-Alder)连接反应形成，则所述偶联基团的二价残基是：
Figure BDA0003557852990000301
在一些实施方案，当偶联物是通过硫醇-马来酰亚胺反应形成，则所述偶联基团的所述二价残基包含亚琥珀酰亚胺基和硫连接键。在一些实施方案，当偶联物是通过硫醇-马来酰亚胺反应形成，则所述偶联基团的二价残基是：
Figure BDA0003557852990000302
在一些实施方案，当偶联物是通过羰基-羟基胺反应形成，则所述偶联基团的所述二价残基包含非天然氨基酸的二价残基。在一些实施方案，当偶联物是通过羰基-羟基胺反应形成，则所述偶联基团的二价残基是：
Figure BDA0003557852990000303
在一些实施方案，当偶联物是通过羰基-羟基胺反应形成，则所述偶联基团的所述二价残基包含肟连接键。在一些实施方案，当偶联物是通过羰基-羟基胺反应形成，则所述偶联基团的二价残基是：
Figure BDA0003557852990000304
在其中一个实施方案，本发明涉及式1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明涉及式XVIb1000-1002b、I-Ib、或 X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar 是二价的6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明涉及式 XVIb1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明涉及式XVIb1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是二价的9个原子组成的、取代或未取代的稠合双环杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明涉及式XVIb1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是亚苯基或亚吲哚基，其中每个基团是未取代或取代的。在其中一个实施方案，本发明涉及式XVIb1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 Ar是下述任一结构式：
Figure BDA0003557852990000311
在其中一个实施方案，本发明涉及式XVIb1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中L不存在。在其中一个实施方案，本发明涉及式XVIb1000-1002b、I-Ib、或X-XIXb-2任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中L是–CH2–。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“EG”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 EG包含亚苯基、亚羧基、氨基、或其组合。在其中一个实施方案，本发明涉及式I1000-1002b和I-XIXb-2 任一所示的化合物，在其中所述基团“EG”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG是：
Figure BDA0003557852990000321
其中各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、-NO2、-CN、氟、溴、氯、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-和二烷基氨基-C(O)-组成的组。在所述第二和第三个结构中，本领域技术人员将认识到EG与RT连接，所述RT不在式1000或(I)的主干内，如上述式1000和式(I)所示。在一些实施方案，各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-和二烷基氨基-C(O)-组成的组。在进一步实施方案，各REG独立地选自由氢、-NO2、-CN、氟、溴、和氯组成的组。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“RT”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 RT包含天然或非天然氨基酸残基或糖的残基。在其中一个实施方案，本发明涉及式I1000-1002b和 I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“RT”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中RT是：
Figure BDA0003557852990000322
本领域技术人员将认识到所述第一个结构是二价的并可连接在式1000或式(I)的主干内，和所述第二个结构是一价的并可与EG连接，如上述式1000和式(I)所示。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“HP”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 HP包含聚乙二醇。在其中一个实施方案，本发明涉及式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“HP”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中HP是：
Figure BDA0003557852990000331
其中m是从1至12的整数。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“SG”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 SG包含C1-C10亚烷基、C4-C6亚烷基、-C(O)-、或其组合。在其中一个实施方案，本发明涉及式1000-1002b 和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“SG”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中SG是：
Figure BDA0003557852990000332
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“W1”、“W2”、“W3”、“W4”、和/或“W5”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中W1、W2、W3、W4、和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地包含二价酮、二价酯、二价醚、二价酰胺、二价胺、亚烷基、亚芳基、硫化物、二硫化物、-C(O)-、或其组合。在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“W1”、“W2”、“W3”、“W4”、和/或“W5”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中W1、W2、W3、W4、和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地包含–C(O)–、–O–、–C(O)NH–、–C(O)NH-烷基–、–OC(O)NH–、–SC(O)NH–、–NH–、–NH-烷基–、–N(CH3)CH2CH2N(CH3)–、–S–、–S-S–、–OCH2CH2O–、或其组合。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“R”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R 是偶联基团或偶联基团的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“R”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、对-乙酰基-苯丙氨酸残基、羟基胺、马来酰亚胺、羰酰卤代烷、芳基硫化物、或叠氮化物。在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2 任一所示的化合物，在其中所述基团“R”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000341
Figure BDA0003557852990000342
–N3，或–SH；其中R201是低级烷基。在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b 和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“R”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000343
R201是甲基、乙基、或丙基。在其中一个实施方案，本发明提供了式1000-1002b和I-XIXb-2任一所示的化合物，在其中所述基团“R”存在于所述通式中，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000344
R201是甲基。
在其中一个实施方案，本发明提供了式I-IXb任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成–H。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000a或式1000b所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000345
Figure BDA0003557852990000351
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中X、EG、RT、HP、SG、W1、W2、 W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式1000和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式Ia或式Ib所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000352
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、SG、W1、W2、 W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式I和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1001a或式1001b所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000353
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT1、HP1、SG、W1、W2、 W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式1001和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1002a或式1002b所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000361
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT1、HP1、SG、W1、W2、 W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式1002和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式II-IX-1任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000362
Figure BDA0003557852990000371
Figure BDA0003557852990000381
Figure BDA0003557852990000391
Figure BDA0003557852990000401
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、RT1、HP1、SG、 W1、W2、W3、W4、W5、和R具有本发明式1000、I、1001、和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式IIa-IXa-1任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000402
Figure BDA0003557852990000411
Figure BDA0003557852990000421
Figure BDA0003557852990000431
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、RT1、HP1、SG、 W1、W2、W3、W4、W5、和R具有本发明式1000、I、1001、和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式IIb-IXb-1任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000441
Figure BDA0003557852990000451
Figure BDA0003557852990000461
Figure BDA0003557852990000471
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、RT1、HP1、SG、 W1、W2、W3、W4、W5、和R具有本发明式1000、I、1001、和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式X所示化合物：
Figure BDA0003557852990000472
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中L和Ar具有式I中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式Xa或Xb所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000481
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中L和Ar具有式I中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式XI-XVI-1任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000482
Figure BDA0003557852990000491
Figure BDA0003557852990000501
Figure BDA0003557852990000511
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、RT1、HP1、SG、 W1、W2、W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式1000、I、1001、和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式XIa-XVIa-1任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000512
Figure BDA0003557852990000521
Figure BDA0003557852990000531
Figure BDA0003557852990000541
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、RT1、HP1、SG、 W1、W2、W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式1000、I、1001、和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式XIb-XIVb-1任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000542
Figure BDA0003557852990000551
Figure BDA0003557852990000561
Figure BDA0003557852990000571
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG、RT、HP、RT1、HP1、SG、 W1、W2、W3、W4、W5、R、L、和Ar具有本发明式1000、I、1001、和/或任一所述实施方案中所述的定义。
在其中一个实施方案，式1000或1001所示化合物是那些化合物，其中X是
Figure BDA0003557852990000572
HP1是
Figure BDA0003557852990000573
和RT1是释放引发基团、或可分裂的连接体；或HP1不存在和RT1是可分裂的连接体；和所有其他基团具有本发明式1000、1001、和/或任一实施方案中所述的定义。在其中一个实施方案，式1000或1001所示化合物是那些化合物，其中 X是
Figure BDA0003557852990000574
HP1是
Figure BDA0003557852990000575
和RT1是释放引发基团、或可分裂的连接体；或HP1不存在和RT1是可分裂的连接体；EG是
Figure BDA0003557852990000581
和所有其他基团具有本发明式1000、1001、和/或任一实施方案中所述的定义。在其中一个实施方案，式 1000或1001所示化合物是那些化合物，其中X是
Figure BDA0003557852990000582
Figure BDA0003557852990000583
HP1是
Figure BDA0003557852990000584
和RT1是释放引发基团、或可分裂的连接体；或HP1不存在和RT1是可分裂的连接体；EG是
Figure BDA0003557852990000585
W1-W5均不存在；和所有其他基团具有本发明式1000、1001、和/或任一实施方案中所述的定义。在一些实施方案，L不存在。
在其中一个实施方案，本发明提供了式1000所示化合物：
Figure BDA0003557852990000591
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是取代或未取代的亚吲哚基环、或取代或未取代的亚苯基环；
L不存在或L是-CH2-；
X是
Figure BDA0003557852990000592
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为–C(O)–、–O–、-C(O)O-、 -OC(O)-、–C(O)NH–、–C(O)NH-烷基–、–OC(O)NH–、–SC(O)NH–、–NH–、–N(烷基)–、–N(R)-亚烷基-N(R)– (其中各R独立地为H或烷基)、–N(CH3)CH2CH2N(CH3)–、-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、 -CH2CH2CH2-、亚苯基、-NHCH2CH2C(O)-、-C(O)CH2CH2NH-、–S–、–S-S–、–OCH2CH2O–、或其连接顺序颠倒的基团；
EG不存在，或EG选自
Figure BDA0003557852990000593
其中各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、-NO2、-CN、氟、溴、氯、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-和二烷基氨基-C(O)-组成的组；
RT，当在所述通式主干上时，是
Figure BDA0003557852990000601
和RT，当与EG基团连接时，是
Figure BDA0003557852990000602
其中各RT均是可选的；
RT1不存在，或RT1是
Figure BDA0003557852990000603
缬氨酸-丙氨酸，缬氨酸-谷氨酸，丙氨酸-苯丙氨酸，苯丙氨酸-赖氨酸，苯丙氨酸-高赖氨酸，和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)，
Figure BDA0003557852990000604
其中aa是天然或非天然氨基酸残基，或
Figure BDA0003557852990000605
其中所述
Figure BDA0003557852990000606
环是4-7个原子组成的、含有3-6个碳原子的杂环；
HP不存在或HP是
Figure BDA0003557852990000607
其中m是从1至12的整数；
HP1不存在或HP1是
Figure BDA0003557852990000608
其中RHP是
Figure BDA0003557852990000609
其中R是–H或-CH3和m是从1至12的整数，或RHP是-亚烷基-S(O)3 -。
SG不存在，或SG是
Figure BDA00035578529900006010
和
R是末端偶联基团；
或者，可选择地，W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成-H。
在一些实施方案，所述化合物是那些化合物，其中X是–HP1-RT1-EG-，-HP1-RT1-，其中RT1是释放引发基团，-HP1-RT1-其中RT1是可分裂的连接体，-HP1-RT1-其中RT1是释放引发基团，-RT1-，-RT-，-RT-EG-，RT1-EG-，或-EG(RT)-；和所有其他基团具有任一本发明所述通式和/或实施方案中的定义。在一些实施方案，所述化合物是那些化合物，其中X是–HP1-RT1-EG-，-HP1-RT1-其中RT1是释放引发基团， -HP1-RT1-其中RT1是可分裂的连接体，-HP1-RT1-其中RT1是释放引发基团，-RT1-，-RT-，-RT-EG-， RT1-EG-，或-EG(RT)-；所述释放引发基团连同消除基团促进化合物或偶联物的生物活性部分的分离；和所有其他基团具有任一本发明所述通式和/或实施方案中的定义。在一些实施方案，所述化合物是那些化合物，其中X是–HP1-RT1-EG-，-HP1-RT1-其中RT1释放引发基团，-HP1-RT1-其中RT1是可分裂的连接体，-HP1-RT1-其中RT1是释放引发基团，-RT1-，-RT-，-RT-EG-，RT1-EG-，或-EG(RT)-；W1、W4、 W5、和L各自独立地为单键或不存在；所述释放引发基团连同消除基团促进化合物或偶联物的生物活性部分的分离；和所有其他基团具有任一本发明所述通式和/或实施方案中的定义。在一些实施方案，所述化合物是那些化合物，其中X是–HP1-RT1-EG-，-HP1-RT1-其中RT1是释放引发基团，-HP1-RT1-其中RT1是可分裂的连接体，-HP1-RT1-其中RT1是释放引发基团，-RT1-，-RT-，-RT-EG-，RT1-EG-，或-EG(RT)-； W1、W4、W5、和L各自独立地为单键或不存在；SG是
Figure BDA0003557852990000611
或
Figure BDA0003557852990000612
所述释放引发基团连同消除基团促进化合物或偶联物的生物活性部分的分离；和所有其他基团具有任一本发明所述通式和/或实施方案中的定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式101-108或1-8任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000613
Figure BDA0003557852990000621
Figure BDA0003557852990000631
Figure BDA0003557852990000641
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体。
在其中一个实施方案，本发明提供了式101a-108a或1a-8a任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000642
Figure BDA0003557852990000651
Figure BDA0003557852990000661
Figure BDA0003557852990000671
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体。
在其中一个实施方案，本发明提供了式101b-108b或1b-8b任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000672
Figure BDA0003557852990000681
Figure BDA0003557852990000691
Figure BDA0003557852990000701
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体。
偶联物
本发明所述化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)可与第二化合物(譬如，多肽或抗体)反应形成偶联物。所述第二化合物可以是已知对本发明所述化合物(譬如，式 1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)的偶联有用的任何化合物。有用的第二化合物包括多肽类和抗体类。
因此，一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与第二化合物连接的本发明所述化合物 (譬如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)。
在其中一个实施方案，所述偶联物具有式E1所示结构：
Figure BDA0003557852990000711
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是–CH2–；
X是
Figure BDA0003557852990000712
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
各RT是在式1000主干上的或与EG连接的释放引发基团，其中每个RT均是可选的；
RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体，或RT1不存在；
HP是单键、或不存在，或是二价亲水基团；
HP1是单键、或不存在，或是二价亲水基团，或HP1是
Figure BDA0003557852990000713
其中RHP是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或是二价间隔基团；和
R是末端偶联基团的二价残基；
或者，可选择地，W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成-H。
在其中一个实施方案，所述偶联物具有式C1所示结构：
Figure BDA0003557852990000714
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
COMP第二化合物的残基；
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是-CH2-；
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG是消除基团；
各RT分别是释放引发基团，和一个RT是可选的；
HP是单键、或不存在，或是二价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或SG是二价间隔基团；和
R是末端偶联基团的二价残基。
在其中一个实施方案，本发明提供了式(F1)或(G1)所示的偶联物：
Figure BDA0003557852990000721
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
COMP是第二化合物的残基；
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是-CH2-；
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体；RT是与EG连接的释放引发基团；和其中RT和RT1是可选的；
HP1是单键、或不存在，或是二价亲水基团，或HP1是
Figure BDA0003557852990000722
其中RSG是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或SG是二价间隔基团；和
R是末端偶联基团的二价残基。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 Ar是二价的6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是二价的8、或9个原子组成的、取代或未取代的稠合双环杂芳基环。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中 Ar是亚苯基或亚吲哚基，其中每个基团是未取代的或取代的。在其中一个实施方案，本发明提供了式 C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中Ar是下述任一结构式：
Figure BDA0003557852990000731
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中L不存在。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中L是-CH2-。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG包含亚苯基、亚羧基、胺、或其组合。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中EG是：
Figure BDA0003557852990000741
其中各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、-NO2、-CN、氟、溴、氯、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-和二烷基氨基-C(O)-组成的组。在所述第二和第三个结构中，本领域技术人员将认识到EG是与RT连接，所述RT不在式(I)的主干内，如上述式(I)所示。在一些实施方案，各REG独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)- 和二烷基氨基-C(O)-组成的组。在进一步实施方案，各REG独立地选自由氢、-NO2、-CN、氟、溴、和氯组成的组。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中RT包含天然或非天然氨基酸残基或糖的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中RT是：
Figure BDA0003557852990000742
本领域技术人员将认识到所述第一个结构是二价的并连接在式1000或式(I)的主干内，和所述第二个结构是一价的并可与EG连接，如上述式(I)和1000所示。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中HP包含聚乙二醇。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中HP是：
Figure BDA0003557852990000751
其中m是从1至12的整数。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中SG包含C1-C10亚烷基、C4-C6亚烷基、-C(O)-、或其组合。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b 任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中SG是：
Figure BDA0003557852990000752
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地包含二价酮、二价酯、二价醚、二价酰胺、二价胺、亚烷基、亚芳基、硫化物、二硫化物、-C(O)-、或其组合。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、 F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地包含–C(O)–、–O–、–C(O)NH–、–C(O)NH-烷基–、–OC(O)NH–、–SC(O)NH–、–NH–、–NH-烷基–、–N(CH3)CH2CH2N(CH3)–、–S–、–S-S–、–OCH2CH2O–、或其组合。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R包含三唑环。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是三唑环或包含三唑环的稠环基团。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000753
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R包含稠合双环，所述稠合双环在所述环上具有至少两个相邻氮原子。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R 是：
Figure BDA0003557852990000761
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R包含硫连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000762
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R包含二价的非天然氨基酸残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000763
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R包含肟连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000771
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中R是：
Figure BDA0003557852990000772
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中COMP是已知可用于与本发明所述修饰的哈米特林(Hemiasterlin)化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、 101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)进行偶联的任何化合物的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b 任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中COMP是多肽、抗体、或抗体链的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b 任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中COMP是多肽的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中COMP是抗体的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示的偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中COMP抗体链的残基。
一方面，本发明提供了包含与多肽连接的本发明所述化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、 1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)的多肽偶联物，其中所述多肽偶联物具有式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b 任一所示结构，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP是所述多肽的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C15b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R包含三唑环或含有三唑环的稠环基团。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000781
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R包含稠合双环，其中所述稠合双环在所述环上具有至少两个相邻的氮原子。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000782
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R包含硫连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000783
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R是二价的非天然氨基酸残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000791
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述多肽的残基；和R包含肟连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的多肽偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体；其中：COMP是所述多肽的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000792
一方面，本发明提供了包含与抗体连接的本发明所述化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、 1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物具有式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b 任一所示结构，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP是所述抗体的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R包含三唑环或含有三唑环的稠环基团。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、 F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000793
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R包含稠合双环，其中所述稠合双环在所述环上具有至少两个相邻的氮原子。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000801
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R包含硫连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000802
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R包含二价的非天然氨基酸残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000803
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R包含肟连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000811
一方面，本发明提供了包含与抗体链连接的本发明所述化合物(譬如，式1000-1000b、 1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体)的抗体链偶联物，其中所述抗体链偶联物具有式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示结构，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP 是所述抗体链的残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R包含三唑环或含有三唑环的稠环基团。在其中一个实施方案，本发明提供了式 C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000812
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R包含稠合双环，其中所述稠合双环在所述环上具有至少两个相邻的氮原子。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000813
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R包含硫连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b 任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP 是所述抗体链的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000821
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R包含二价的非天然氨基酸残基。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000822
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP是所述抗体链的残基；和R包含肟连接键。在其中一个实施方案，本发明提供了式C1-C13b、E1、F1-F13b、和G1-G13b 任一所示的抗体链偶联物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：COMP 是所述抗体链的残基；和R是：
Figure BDA0003557852990000823
在其中一个实施方案，本发明提供了式C1a或式C1b所示的偶联物：
Figure BDA0003557852990000824
Figure BDA0003557852990000831
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的偶联物：
Figure BDA0003557852990000832
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有本发明所述通式和/或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C2-C9任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000833
Figure BDA0003557852990000841
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述通式任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000851
Figure BDA0003557852990000861
Figure BDA0003557852990000871
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C2a-C9a任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000872
Figure BDA0003557852990000881
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000882
Figure BDA0003557852990000891
Figure BDA0003557852990000901
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C2b-C9b任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000911
Figure BDA0003557852990000921
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000922
Figure BDA0003557852990000931
Figure BDA0003557852990000941
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团均具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C10-C13任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000942
Figure BDA0003557852990000951
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000952
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团均具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C10a-C13a任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000961
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000962
Figure BDA0003557852990000971
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C10b-C13b任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000972
Figure BDA0003557852990000981
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、R、SG、HP、RT、EG、 W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000982
Figure BDA0003557852990000991
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C14-C17任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000992
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、SG、HP、RT、EG、W1、 W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990000993
Figure BDA0003557852990001001
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C14a-C17a任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990001011
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、SG、HP、RT、EG、W1、 W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990001012
Figure BDA0003557852990001021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了式C14b-C17b任一所示的化合物：
Figure BDA0003557852990001031
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中COMP、SG、HP、RT、EG、W1、 W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和I-XVIb中所述定义。
在其中一个实施方案，本发明提供了下述任一通式所示的化合物：
Figure BDA0003557852990001032
Figure BDA0003557852990001041
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中所有其他基团均具有任一本发明所述通式或实施方案中所述定义。
一方面，本发明提供了生产所述偶联物的方法(譬如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b 任一所示化合物)，所述方法包含在适宜使本发明所述化合物与所述第二化合物进行偶联的条件下，使本发明所述化合物(譬如，式I-XVIIIb、101-111b、或1-8b任一所示化合物)与第二化合物接触；其中所述第二化合物包含修饰的氨基酸，所述修饰的氨基酸包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、马来酰亚胺、羰基、羟基胺、或叠氮化物。在其中一个实施方案，所述第二化合物是多肽。在其中一个实施方案，所述第二化合物是抗体。
偶联反应
[3+2]炔烃-叠氮化物环加成反应
Figure BDA0003557852990001051
有利的是，含有末端偶联炔烃基团或叠氮基团的本发明所述化合物(譬如，式I-IXb、XI-XVIIb、和101-111b任一所示化合物)促进与含有互补的叠氮基团或炔烃基团的第二化合物进行选择性和有效反应。据认为，所述叠氮和炔烃基团发生1,3-偶极环加成反应，从而形成1,2,3-亚三唑基部分，其使含有炔烃基团或叠氮基团的本发明所述化合物与所述第二化合物连接。发生在叠氮化物和炔烃之间以形成三唑的此反应是本领域技术人员普遍知晓的1,3-偶极环加成反应(Huisgen cycloaddition reaction)或[3+2]炔烃- 叠氮化物环加成反应。
叠氮化物与炔烃官能团的独特反应性使得他们对选择性修饰多肽和其他生物分子有用。有机叠氮化物，尤其是脂肪族叠氮化物、和炔烃通常对常见的反应性化学条件稳定。特别地，所述叠氮化物和所述炔烃官能团两者均对天然存在多肽中发现的20种常见氨基酸的侧链是惰性的。据认为，当接近时，显示了所述叠氮化物和炔烃基团的所述“弹簧-负载”特性，且他们通过[3+2]炔烃-叠氮化物环加成反应进行选择性地和有效地反应，从而生成相应的三唑。参见，譬如Chin J.,et al.,Science 301:964-7(2003)；Wang,Q., et al.,J.Am.Chem.Soc.125,3192-3193(2003)；Chin,J.W.,et al.,J.Am.Chem.Soc.124:9026-9027(2002)。
由于所述[3+2]炔烃-叠氮化物环加成反应涉及选择性环加成反应[参见，譬如Padwa,A.,in COMPREHENSIVE ORGANIC SYNTHESIS,Vol.4,(ed.Trost,B.M.,1991),pp.1069-1109；Huisgen,R.in 1,3-DIPOLAR CYCLOADDITION CHEMISTRY,(ed.Padwa,A.,1984),pp.1-176]而非亲核取代反应，支承含有叠氮化物和炔烃侧链的非天然编码氨基酸的引入，允许在所述非天然编码氨基酸的位置对所得多肽进行选择性修饰。涉及含有叠氮化物和炔烃的化合物的环加成反应可以通过添加Cu(II)(包括但不限于，以催化量CuSO4的形式)，在以催化量原位还原Cu(II)至Cu(I)的还原剂存在下，在室温、并在水溶液条件下进行。参见，譬如Wang,Q.,et al.,J.Am.Chem.Soc.125,3192-3193(2003)；Tornoe,C.W.,etal.,J.Org.Chem. 67:3057-3064(2002)；Rostovtsev,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.41:2596-2599(2002)。还原剂的实例包括，但不限于，抗坏血酸根、金属铜、奎宁、对苯二酚、维生素K、谷胱甘肽、半胱氨酸、Fe2+、Co2+、和施加电位。
逆电子需要连接反应
Figure BDA0003557852990001061
有利的是，含有末端四嗪或张紧的烯烃基团的本发明化合物促进与含有张紧的烯烃或四嗪基团的第二化合物进行选择性和有效地反应。据认为，所述四嗪和张紧的烯烃产生逆电子需要狄尔斯-阿尔德 (DA)反应，随后通过逆DA反应使含有末端四嗪或张紧的烯烃基团的本发明化合物与所述第二化合物连接。所述反应被认为是特定的，与生物分子上的官能团几乎没有交叉反应。所述反应可在温和条件下，譬如，在室温和无催化剂条件下进行。发生在四嗪和张紧的烯烃之间的此反应是本领域技术人员普遍知晓的四嗪连接反应。
硫醇反应
Figure BDA0003557852990001062
有利的是，含有末端硫醇基团或合适的亲电基团或形成二硫化物的基团的本发明化合物促进与含有互补的亲电基团或形成二硫化物的基团或硫醇基团的第二化合物进行选择性和有效地反应。所述这些反应被认为是选择性的，与生物分子上的官能团几乎没有交叉反应。在另一实施方案，所述硫醇反应不包括马来酰亚胺基团的反应。
羰基-羟基胺反应
Figure BDA0003557852990001071
有利的是，含有末端羰基或羟基胺基团的本发明化合物促进与含有羟基胺或羰基基团的第二化合物进行选择性和有效反应。据认为，所述羰基与羟基胺进行反应形成肟连接键。所述反应被认为是特定的，与生物分子上的官能团几乎没有交叉反应。
其他反应
其他合适的偶联反应如文献中所述，参见，譬如Lang,K.and Chin,J.2014,Bioorthogonal Reactions for Labeling Proteins,ACS Chem Biol9,16-20；Paterson,D.M.et al.2014,Finding the Right (Bioorthogonal)Chemistry,ACS Chem Biol9,592-605；King,M.and Wagner,A.2014,Developments in the Field of Bioorthogonal BondForming Reactions–Past and Present Trends,Bioconjugate Chem.,2014,25(5),pp825-839；和Ramil,C.P.and Lin,Q.,2013,Bioorthogonal chemistry:strategies andrecent developments,Chem Commun 49,11007-11022。
释放反应
释放反应是进行作用以在体内和/或体外从所述化合物或偶联物，释放本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分的反应。在一些实施方案，所述释放的生物活性部分是式1-8b任一所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体。释放反应的其中一个实例是在本发明所述化合物或偶联物的消除基团和释放引发基团之间的分子内反应，从而释放本发明所述化合物或偶联物的生物活性部分。所述消除基团本身可以转化成两种活性成分，如在所述这些反应中例示的那些，其中X-是具有杂原子N或O作为连接键的药物。示例性释放反应如下述合成方案所示：
Figure BDA0003557852990001072
Figure BDA0003557852990001081
组合物
本发明所述化合物和偶联物可以使用现有技术方法和本发明公开的那些方法配制成组合物。任何本发明所述化合物和偶联物可以适当的药物组合物提供，并通过适宜的给药途径进行给药。
一方面，本发明提供了药物组合物，其包含：
本发明所述化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b任一所示化合物)或偶联物(譬如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示偶联物)；和
药学上可接受的辅料、载体、或稀释剂。
在一些实施方案，本发明所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。所述载体可以是进行给药的所述药物组合物的稀释剂、辅料、或媒介物。此类药用载体可以是无菌液体如水或油，包括石油、动物、蔬菜或合成原料的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。盐溶液、水葡萄糖和甘油溶液还可被当作液体载体，尤其是用于注射溶液。适宜的药用辅料包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。所述药物组合物，若需要，还可包含少量润湿剂或乳化剂、或pH值缓冲剂。所述药物组合物可采用溶液、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、粉剂、缓释制剂等形式。口服制剂可包括标准载体如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适宜的药用载体记载在E.W.Martin,1990,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co中。
在一些实施方案，所述药物组合物采用适于对人受试者进行给药的形式提供。在一些实施方案，所述药物组合物含有预防或治疗有效量的所述多肽连同合适量的载体，从而提供适合对所述患者进行给药的形式。所述制剂应符合给药方式。
在一些实施方案，所述药物组合物采用适于静脉给药的形式提供。通常，适于静脉给药的组合物是无菌等渗缓冲水溶液。必要时，所述组合物还可包括增溶剂和局部麻醉剂，如利多卡因镇痛注射部位。此类组合物，不管怎样，可以通过除了静脉给药的其他途径进行给药。
尤其在一些实施方案，所述药物组合物适于皮下给药。尤其在一些实施方案，所述药物组合物适于肌内给药。
所述药物组合物的组分可以单独或以混合在一起的单位剂量形式提供，譬如，作为干冻干粉或无水浓缩物。若所述组合物通过输注给药，其可用含有无菌药用级水或生理盐水的输液瓶进行配制。若所述组合物通过注射给药，则可提供大量的无菌注射用水或生理盐水，使所述配料可在给药前进行混合。
在一些实施方案，所述药物组合物是以干无菌冻干粉提供，所述干无菌冻干粉能够被重组至适当的浓度，并用于对受试者进行给药。在一些实施方案，多肽是以无水浓缩物提供。在一些实施方案，所述多肽是作为干无菌冻干粉，以单位剂量为至少0.5mg、至少1mg、至少2mg、至少3mg、至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少60mg、或至少75mg进行提供。
在另一实施方案，所述药物组合物以液体形式提供。在一些实施方案，所述药物组合物是以液体形式提供并基本上不含表面活性剂和/或无机盐。在一些实施方案，所述多肽是以液体形式，并以单位剂量为至少0.1mg/ml、至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少3mg/ml、至少5mg/ml、至少 8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少30mg/ml、或至少60mg/ml进行提供。
在一些实施方案，所述药物组合物是以盐的形式配制。药学上可接受的盐包括与阴离子形成的那些，如盐酸盐、磷酸盐、乙酸盐、草酸盐、酒石酸盐等，和与阳离子形成的那些，如衍生自钠、钾、铵、钙、铁的氢氧化物、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的那些。
在治疗用途中，医生将根据预防或治疗处理，并根据受试者年龄、体重、疾病所处阶段和针对接受治疗的受试者的其他因素，来确定最适当的剂量学。在一些实施方案，成人剂量是从约1至约1000mg/ 天，或从约5至约250mg/天，或从约10至50mg/天。在一些实施方案，剂量是从约5至约400mg/天或 25至200mg/天/成人。在一些实施方案，还可考虑剂量率从约50至约500mg/天。
治疗或预防的使用方法
本发明提供的某些化合物、偶联物、多肽、和抗体可用于治疗或预防被认为适合本领域医生的任何疾病或病症。通常，治疗或预防的方法包含对有需要治疗的患者施用治疗或预防有效量的化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物，从而治疗或预防所述疾病或病症。
一方面，本发明提供了在有需要的受试者中抑制微管蛋白聚合的方法，包含对所述受试者施用有效量的本发明化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b 任一所示化合物)、偶联物(譬如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示偶联物)、或含有所述化合物或偶联物的组合物。
一方面，本发明提供了对有需要的受试者治疗细胞增殖或癌症的方法，包含对所述受试者施用有效量的本发明化合物(譬如，式1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2、101-111b、或1-8b 任一所示化合物)、偶联物(譬如，式C1-C17b、E1、F1-F17b、和G1-G17b任一所示偶联物)、或含有所述化合物或偶联物的组合物。
化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物的治疗有效量是可有效降低特定疾病或病症的严重程度、持续时间和/或症状的量。所述化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物的量，其在预防、处理、治疗和/或改善特定疾病方面的治疗有效性，可由标准临床技术确定。所述化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物进行给药的精确量，部分依靠给药途径、疾病或病症的严重性，并应根据医生判断和各受试者的情况决定。
在一些实施方案，本发明所述化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物的有效量是在人受试者的约0.025mg/kg和约1000mg/kg体重之间。在一些实施方案，本发明所述化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物对人受试者进行给药的量是约1000mg/kg体重或以下，约950mg/kg体重或以下，约900mg/kg体重或以下，约850mg/kg体重或以下，约800mg/kg体重或以下，约750mg/kg体重或以下，约700mg/kg体重或以下，约650mg/kg体重或以下，约600mg/kg体重或以下，约550mg/kg体重或以下，约500mg/kg体重或以下，约450mg/kg体重或以下，约400mg/kg体重或以下，约350mg/kg体重或以下，约300mg/kg 体重或以下，约250mg/kg体重或以下，约200mg/kg体重或以下，约150mg/kg体重或以下，约100mg/kg 体重或以下，约95mg/kg体重或以下，约90mg/kg体重或以下，约85mg/kg体重或以下，约80mg/kg体重或以下，约75mg/kg体重或以下，约70mg/kg体重或以下，或约65mg/kg体重或以下。
在一些实施方案，本发明所述化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物的有效量是在人受试者的约0.025mg/kg和约60mg/kg体重之间。在一些实施方案，本发明所述化合物、偶联物、多肽、抗体、或含有所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物的有效量是约0.025mg/kg或以下，约0.05mg/kg或以下，约0.10mg/kg或以下，约0.20mg/kg或以下，约0.40mg/kg或以下，约0.80mg/kg或以下，约1.0mg/kg或以下，约1.5mg/kg或以下，约3mg/kg或以下，约5mg/kg或以下，约10mg/kg或以下，约15mg/kg或以下，约20mg/kg或以下，约25mg/kg或以下，约30mg/kg或以下，约35mg/kg或以下，约40mg/kg或以下，约45mg/kg或以下，约50mg/kg或约60mg/kg或以下。
所述方法的药物组合物可使用任何本领域技术人员已知的方法进行给药。譬如，所述药物组合物可进行肌内、皮内、腹腔内、静脉、皮下给药、或其任一组合给药。在一些实施方案，所述组合物是皮下给药。在一些实施方案，所述组合物是静脉给药。在一些实施方案，所述组合物是肌内给药。
可使用本发明化合物、偶联物、多肽、抗体、或药物组合物进行治疗的癌症包括Her2过表达， CD7过表达，Her2未过表达，和CD7未过表达的癌症，在一些实施方案，所述癌症是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、铂类耐药的卵巢癌、卵巢腺癌、子宫内膜癌、乳腺癌、Her2过表达的乳腺癌、三阴性乳腺癌、淋巴瘤，大细胞淋巴瘤、弥漫性混合组织细胞和淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性B细胞淋巴瘤、结肠癌、结肠肿瘤、结肠腺癌、结直肠腺癌、黑素瘤、前列腺癌、或多发性骨髓瘤。在一些实施方案，所述癌症是乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、结肠癌、结直肠癌、黑素瘤、前列腺癌、或多发性骨髓瘤。
测定方法
本发明所述化合物、偶联物、多肽、抗体、和包含所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物可根据本领域技术人员显而易见的任何检测试验方法对其预期活性、或新的活性进行评估。本发明所述化合物、偶联物、多肽、抗体、和包含所述化合物、偶联物、多肽、或抗体的药物组合物可通过定量蛋白在非功能性检测试验中的量，例如免疫染色、ELISA、定量考马斯(Coomasie)或银染色凝胶等，并测定生物活性蛋白与总蛋白的比例，对功能性检测试验中的活性进行评估。
翻译反应中产生的蛋白的量可以各种方式进行测定。一个方法依赖于测定被翻译的所述特定蛋白活性的检测试验的实用性。用于测定蛋白活性的检测试验的实例有荧光素酶检测系统、或氯霉素乙酰转移酶检测系统。所述这些检测试验测定从翻译反应产生的功能活性蛋白的量。活性检测试验将不测定由于蛋白折叠不当或缺乏蛋白活性所必需的其他翻译后修饰，因此处于非活性状态的全长蛋白。
另一测定由耦合的体外转录和翻译反应产生的蛋白的量的方法，是采用已知数量的放射性标记氨基酸如35S-蛋氨酸、3H-亮氨酸或14C-亮氨酸，并随后测定引入至新翻译的蛋白中放射性标记氨基酸的量来完成所述反应。引入检测试验将测定放射性标记氨基酸在由体外翻译反应产生的所有蛋白包括截短蛋白产品中的量。所述放射性标记蛋白可在蛋白凝胶上进一步分离，并通过放射自显影法证实所述产品具有适当尺寸，并且二次蛋白产品还未产生。
修饰的哈米特林(Hemiasterlin)类化合物的制备
本发明提供化合物可通过任何本领域技术人员显而易见的方法进行制备、分离或得到。本发明提供化合物可根据本发明所述一般制备方案制备得到。根据本发明提供的实施例，未提供在一般制备方案中的反应条件、步骤和反应物对于本领域技术人员而言是已知的或显而易见的。
一般制备方案
Figure BDA0003557852990001121
在所述一般制备方案中，R、SG、HP、RT、EG、W1、W2、W3、W4、W5、L、和Ar具有式C1和1000-1000b、1001-1001b、1002-1002b、和I-XIXb-2中所述定义。
实施例
本发明使用的，用于所述这些工艺、方案和实施例的所述符号和惯例，无论特定缩写是否进行具体定义，均与当代科学文献，譬如，生物化学杂志和/或美国化学学会杂志中使用的那些一致。
对于所有下述实施例，可利用本领域技术人员已知的标准检测和纯化方法。除非另有说明，所有温度均以℃(摄氏度)表示。所有方法均在室温("rt"或"r.t.")下进行，除非另有说明。
实施例1a
化合物1(两个非对映异构体)的合成
Figure BDA0003557852990001122
方案1
Figure BDA0003557852990001131
化合物B2的制备
-5℃下，向二氯甲烷(100mL)和2N HCl(78mL，156mmol)的混合溶剂中分批加入冷的漂白剂(含6％NaOCl，108mL，87mmol)。所述混合物在0℃(内部温度)下搅拌反应5分钟。然后向所述混合物中分多批加入2-巯基苯并硫唑(B，5g，26mmol)。所述混合物在-5至-10℃下搅拌反应20 分钟。收集有机层(B1，主要是BtsCl)，并与L-缬氨醇(3.2g,31.2mmol)和三乙胺(8.7mL,121mmol) 的二氯甲烷溶液在室温下进行混合。所述混合物在室温下搅拌1小时。除去溶剂，所得产品经硅胶柱层析 (正己烷：乙酸乙酯＝1：1)纯化得到产品B2为白色固体(3.1g，40％，两步)。
LC-MS(ESI):301(M+1)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.08(dd,J＝2.1和7.2Hz,1H),7.96(dd,J＝1.8和6.9Hz,1H),7.58 (m,2H),5.46(brs,1H),3.67(d,J＝4.5Hz,2H),3.54(brs,1H),3.23(brs,1H),1.93(m,1H),0.97(d,J＝6.9Hz, 6H)。
化合物B3的制备
室温下，向B2(3g，10mmol，1.0当量)的二甲基甲酰胺(50mL)溶液中加入碳酸钾(2.77 g，20mmol，2.0当量)和碘甲烷(1.25mL，20mmol，2.0当量)。将所得混合物加热至35℃，搅拌反应4h。除去溶剂，所得残留物用乙酸乙酯和水洗(3x)，Na2SO4干燥，减压浓缩得到产品B3为白色固体 (3.14g，100％)。
LC-MS(ESI):315(M+1)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.09(dd,J＝1.6和7.5Hz,1H),7.95(dd,J＝1.8和6.9Hz,1H),7.58 (m,2H),4.25(brs,1H),2.90(s,3H),1.93(m,1H),1.02(dd,J＝2.1和6.6Hz,6H)。
化合物B4的制备
在-78℃、氮气氛下，向二氯甲烷(50mL)和(1.56mL，22mmol，2.2当量)的混合溶剂中缓慢加入草酰氯(1.05mL，12mmol，1.2当量)，并在此温度下搅拌反应30分钟。然后在-78℃、氮气氛下，向所述反应混合物中加入B3(3.14g，10mmol，1.0当量)的20mL二氯甲烷溶液。反应混合物在-78 ℃下搅拌反应2h。然后在-78℃下，向所述反应体系中加入三乙胺(7mL，50mmol，5当量)并搅拌反应30分钟，升温至0℃继续搅拌反应30min。将反应混合物倒入冰水中，并用DCM萃取(3x)。有机层用饱和氯化铵(2x)溶液洗、盐水洗，并用硫酸钠干燥。低温(30℃以下)浓缩，得到产品B4为白色固体(3.0g，96％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.69(s,1H),8.17(dd,J＝1.5和8.1Hz,1H),7.95(dd,J＝2.1和6.9 Hz,1H),7.58(m,2H),4.30(d,J＝10.2Hz,1H),3.01(s,3H),2.21(m,1H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H),0.98(d,J＝ 6.6Hz,3H)。
化合物B5的制备
将产品B4(3g，9.58mmol，1.0当量)和[(1-乙氧羰基)亚乙基]Ph3P(6.95g，19.2mmol，2 当量)溶于无水四氢呋喃(60mL)中，并加热回流3h。将反应体系冷却至室温，并倒入冰水中。所得产品用乙酸乙酯(3x)萃取。有机层用盐水洗，硫酸钠干燥，然后浓缩得到粗产品。所述粗产品经硅胶柱层析(正己烷：乙酸乙酯＝8：2)进一步纯化得到产品B5(2.9g，82％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.09(dd,J＝1.2和7.2Hz,1H),7.93(dd,J＝1.8和8.1Hz,1H),7.53 (m,2H),6.39(dd,J＝1.6和10.5Hz,1H),4.41(t,J＝10.5Hz,1H),3.87(q,J＝7.2Hz,2H),3.08(s,3H),1.85(s, 3H),1.02-1.08(m,6H),0.83(d,J＝6.9Hz,3H)。
化合物B6的制备
向产品B5(2.9g，7.31mmol，1.0当量)的二甲基甲酰胺(30mL)溶液中加入碳酸钾(4.04g， 29.2mmol，4.0当量)和苯硫酚(2.25mL，21.9mmol，3.0当量)。所得反应混合物在室温下搅拌反应1h。然后用乙酸乙酯萃取和水萃取(3x)。乙醚层用1％HCl萃取，水溶液用乙醚洗。所得水层用碳酸氢钠中和至pH值为8，并用二氯甲烷(3x)萃取。有机层用硫酸钠干燥，浓缩得到纯的产品B6为黄色油状物(1.2 g，84％)。
LC-MS(ESI):200(M+1)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.48(dd,J＝1.2和10.2Hz,1H),4.18(q,J＝7.2Hz,1H),3.06(q,J＝ 6.3Hz,2H),2.30(s,3H),1.86(d,J＝1.8Hz,2H),1.72(m,1H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H),0.93(d,J＝6.9Hz,3H), 0.87(d,J＝6.9Hz,3H)。
化合物Bts-Leu-Cl和B7的制备
所述合成完整记载在Vedejs and Kongkittingam,"A Total Synthesis of(-)-Hemiasterlin Using N-Bts Methodology,"J.Org.Chem.2001,66(22),7355-7364中。简要如下所述。
在0℃、氮气氛下，向Bts-Leu(2.4g，7.3mmol，1.0当量)的无水二氯甲烷(30mL)溶液中加入亚硫酰氯(1.6mL，21.9mmol，3.0当量)。反应混合物在42℃下回流2h，浓缩并与甲苯共蒸发得到Bt-Leu-Cl为固体粗品，无需进一步纯化，直接用于下一步反应。
在0℃、氮气氛下，向产品B6(1.2g，6.02mmol)的二氯甲烷和水(1:1，40mL)混合溶剂的溶液中加入碳酸钠(1.28g，12.04mmol，2.0当量)和碳酸氢钠(1.32g，15.7mmol，3.2当量)。将新鲜制备的Bts-Leu-Cl(由上一步反应得到)的二氯甲烷(10mL)溶液注射加至所述反应体系中。所得混合物在0-5℃下搅拌反应1h。产品B7用二氯甲烷和水萃取(3x)，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗产品 B7，所得粗产品经硅胶柱层析(正己烷：乙酸乙酯＝1：1)纯化得到产品B7为白色固体(1.8g，59％)。 LC-MS(ESI):510(M+1)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.11(dd,J＝1.5Hz,8.7Hz,1H),7.93(dd,J＝1.2Hz,8.7Hz,1H), 7.58(m,2H),6.52(dd,J＝1.2Hz,9.9Hz,1H),6.10(d,J＝8.7Hz,1H),4.85(t,J＝10.2Hz,1H),4.47(d,J＝ 8.7Hz,1H),4.16(m,2H),2.94(s,3H),1.82(d,J＝1.2Hz,2H),1.27(m,3H),0.98(s,6H),0.63(d,J＝6.6Hz, 3H),-0.12(d,J＝6.6Hz,3H)。
化合物B8的制备
在室温、氮气氛下，向B7(200mg，0.392mmol，1.0当量)的DMF(2mL)溶液中加入碳酸钾(217mg，1.57mmol，4.0当量)和苯硫酚(121μL，1.18mmol，3.0当量)。反应混合物在室温下搅拌反应4h。LC-MS显示所述反应完毕后，反应混合物用水洗、乙醚洗、和10％盐酸(如文献中所述)洗，得到纯的B8(100mg，82％)。LC-MS(ESI):313(M+1)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.99(s,1H),6.63(dd, J＝1.2Hz,9.9Hz,1H),5.15(t,J＝9.9Hz,1H),4.19(m,2H),3.45(s,1H),2.86-2.94(m,6H),1.89(m,3H), 1.70(s,宽峰,2H),1.28(t,J＝5.7Hz,3H),0.86-1.01(m,12H)。
方案2
Figure BDA0003557852990001161
化合物A1的制备
将3-溴苯甲醛(25.0g，135mmol，1.0当量)、N-乙酰甘氨酸(15.8g，135mmol，1.0当量) 和乙酸钠(10.6g，135mmol，1.0当量)悬浮在乙酸酐(40mL)中，在N2氛下搅拌加热回流5hr。所得溶液冷却至室温时固化，然后用冰-冷却的水淬灭反应，过滤。固体用水洗两次，空气干燥4h，然后进一步真空干燥得到化合物A1(31g，86％)。
化合物A2的制备
噁唑酮A1(31g，117mmol，1.0当量)的1.0N NaOH(175mL，175mmol，1.5当量)溶液在85℃下搅拌反应，直至得到半透明微红溶液。将反应体系冷却至室温，用5N HCl酸化至pH值为1.0，得到棕色固体沉淀。然后将浓缩的HCl(30mL)加入烧瓶，并对反应溶液稀释至约500mL。再保持回流 5hr。过滤，收集固体，所得固体用水洗两次，高真空干燥，得到粗品A2(23g，81％)，其无需进一步纯化，可直接使用。
化合物A3的制备
将丙酮酸A2(23g，94.7mmol，1.0当量)溶于THF(100mL)，并冷却至0℃。向其中缓慢加入碘甲烷(36g，256mmol，2.7当量)，随后缓慢加入5NNaOH(80mL)，反应混合物加热回流过夜。除去挥发物，所得残留水溶液用乙酸乙酯萃取，然后在0℃下用10％HCl进行酸化至pH值为1。所得水层用乙酸乙酯萃取(2x)。合并的有机层用盐水洗，无水硫酸钠干燥，并经硅胶柱色谱纯化(EtOAc/ 正己烷＝1：1)得到纯的化合物A3(11g，43％)。
化合物A4的制备
室温下，将2N的甲胺溶液(14.4mL，28.8mmol，2.0当量)加至酮酸A3(11g，40.6mmol， 1.0当量)的THF(100mL)溶液中，搅拌反应4hr。然后加入8N的吡啶-硼烷复合物的溶液(5mL，40.6 mmol，1.0当量)，将反应混合物加热至55℃搅拌反应3hr。用甲醇淬灭反应，浓缩，并用THF(50mL) 稀释，形成白色沉淀。过滤所述白色固体沉淀，真空干燥，得到化合物A4(5g，61％)。
化合物A5的制备
向化合物A4(1.0g，3.5mmol，1.0当量)和(Boc)2O(1.15g，5.24mmol，1.5当量)的THF 和水(1:1，20mL)溶液中加入氢氧化钠(280mg，6.99mmol，2.0当量)。将反应混合物加热至60℃搅拌反应5h。然后将反应混合物冷却，浓缩。0℃下，用10％HCl酸化所得残留水溶液至pH值为1，然后用乙酸乙酯萃取(3x)。合并的有机层用硫酸钠干燥，经快速柱色谱纯化得到化合物A5(420mg，31％)。
化合物A6的制备
向密封管内的化合物A5(1.58g，4.07mmol，1当量)的甲苯(15mL)溶液加入氢氧化铵(2.7 mL，40.7mmol，10当量)和铜粉(39mg，0.61mmol，0.15当量)。将所述管加热至100℃过夜，浓缩得到残留物，所得残留物用NaHCO3水溶液和n-丁醇稀释。水层用n-丁醇萃取。将有机层浓缩，所得残留物经硅胶柱层析(DCM：MeOH：Et3N＝9：1：1)纯化得到化合物A6(680mg，52％)。
化合物A7的制备
向化合物A6(1.42g，3.36mmol，1当量)的THF(10mL)溶液中加入烯丙基琥珀酰亚胺基碳酸酯(Alloc-OSu，1.34g，6.72mmol，2当量)和三乙胺(1.4mL，10.1mmol，3当量)。混合物在室温下搅拌反应过夜。除去溶剂，所得残留物经快速柱色谱(DCM：MeOH＝9：1)纯化得到化合物A7(1.01 g，74％)。
方案3
Figure BDA0003557852990001181
化合物A8的制备
向化合物A7(41mg，0.1mmol，1当量)的干燥DCM(1.5mL)溶液中加入B8(31mg，0.1mmol，1当量)和PyBOP(57.2mg，0.11mmol，1.1当量)。将混合物冷却至0℃，然后加入DIEA(49μL，0.3mmol，3当量)。反应混合物在室温下搅拌反应过夜，然后用DCM稀释，并水洗。水溶液进一步用DCM萃取(2x)。合并有机层，硫酸钠干燥，浓缩至一定干度得到粗产品。所得粗产品经制备-HPLC 纯化得到A8为两个非对映异构体(60：40)的混合物(10mg，14％)。
方案4
Figure BDA0003557852990001182
化合物A9的制备
向化合物A8(150mg，0.21mmol，1.0当量)和Pd(PPh3)4(12.4mg，0.011mmol，0.05当量)的 THF(10mL)溶液中加入三-n-丁基-锡氢化物(113μL，0.43mmol，2.0当量)。反应混合物用氮气脱气并回填(3x)。反应体系在室温下搅拌反应6h。除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(DCM：MeOH＝9：1) 纯化得到A9为两个异构体的混合物(78mg，60％)。
方案5
Figure BDA0003557852990001183
Figure BDA0003557852990001191
向化合物A9(28mg，0.046mmol，1当量)的MeOH(1mL)溶液中加入LiOH(10mg，0.23mmol，5当量)的水(0.5mL)溶液。混合物在室温下搅拌反应过夜。所得粗产品经制备-HPLC纯化得到 A12(23mg，85％)。
向A12(11mg，0.0187mmol，1当量)的DCM(1mL)溶液中加入10％TFA的DCM(1mL) 溶液。所得混合物在室温下搅拌反应4h。除去溶剂，所得粗产品1经制备RP-HPLC纯化两次得到两个异构体1a(0.8mg)、和1b(1mg)。
实施例1b
化合物101(两个非对映异构体)的合成
Figure BDA0003557852990001192
从芳基胺化合物1合成的连接体进而产生可分裂的化合物101，其释放新的苯胺母体化合物为一对非对映异构体。
方案6
Figure BDA0003557852990001193
Figure BDA0003557852990001201
化合物A10的制备
向通氩气的A9(27mg，0.04mmol)的1mLCH2Cl2溶液中加入15％w/v碳酰氯的甲苯溶液 (0.6mL，0.06mmol)。将反应混合物置于密封管中并加热至50℃反应4h，然后冷却至环境温度，减压浓缩除去挥发物。向所得残留物中加入真空干燥的Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸-p-氨基苄基乙醇(26mg，0.04 mmol)的1mLDMF溶液。反应混合物在45℃、氩气氛下搅拌反应6h，然后在环境温度下搅拌反应24hr。减压浓缩除去所有挥发物后，所得残留物经硅胶柱层析(90：10/CH2Cl2：MeOH洗脱剂)纯化得到10mg (0.008mmol))A10为白色固体。
化合物A11的制备
向A10的CH2Cl2(1mL)溶液中加入哌啶(0.1mL)，反应混合物在环境温度下搅拌反应1hr。减压浓缩除去所有挥发物后，向所得残留物中加入DBCO-琥珀酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯(3.6mg，0.009 mmol)、DMF(1mL)、和二异丙基乙胺(0.004mL，0.02mmol)。反应混合物在环境温度下搅拌反应 24hr。减压浓缩除去所有挥发物后，所得残留物经硅胶柱层析(90：10/CH2Cl2：MeOH洗脱剂)纯化得到7mg(0.005mmol)A11。
化合物101的制备
将化合物A11(7mg，0.005mmol)溶于3:1:1THF:MeOH:H2O(1mL)，然后将所得溶液冷却至0℃。加入固体LiOH·H2O(1.7mg，0.4mmol)，反应混合物在环境温度下搅拌反应过夜。然后加入几毫升冰醋酸，减压浓缩除去挥发物，所得游离酸101采用Ultro 120(7μm)、150x20mmID柱(水-乙腈 (10mm NH4OAc)溶剂体系，从10％CAN至100％CAN梯度洗脱50min，15ml/min)，经逆相-高效液相色谱(RP-HPLC)纯化。LC-MS(ESI):1282.6(M+1),1182.4(M-Boc+1)。
将A11的N-保护的酸(5mg,0.004)溶于CH2Cl2(1mL)，然后将溶液冷却至0℃。向其中中加入0.2M的HCO2H的CH2Cl2(0.039mL)溶液后，反应混合物在环境温度下搅拌反应过夜。减压浓缩除去所有挥发物，所得游离氨基酸采用Ultro 120(7μm)、150x20mmID柱(水-乙腈(10mm NH4OAc) 溶剂体系，从10％ACN至100％ACN梯度洗脱50min，15ml/min)，经逆相-高效液相色谱(RP-HPLC) 纯化得到3mg(0.0025mmol，65％)化合物101为白色固体。
实施例1c
化合物A9a的手性合成
Figure BDA0003557852990001211
从芳胺化合物1合成得到的连接体进而产生可分裂的化合物101，其释放新的苯胺母体化合物为一对非对映异构体。
方案7
Figure BDA0003557852990001212
Figure BDA0003557852990001221
化合物D12的制备
氩气氛下，将3,3-二甲基丙烯酸(97％，15.8g，157.9mmol)、AlCl3(22g，164.9mmol)和 DCM(100mL)置于单颈圆底烧瓶中。然后加入溴苯(31g，197.4mmol)产生剧烈冒泡。冒泡完毕后，所述反应混合物在65℃油浴中搅拌反应1小时30分钟，然后在室温、氮气氛下搅拌反应过夜。将反应混合物缓慢倒入HCl:H2O(1:1)200mL中，加入EtOAc(300mL)，分离有机相，所得有机相用盐水洗、Na2SO4干燥，浓缩。所得粗产品混合物的1H NMR数据显示为m,p-位置异构体的混合物。粗产品用正己烷重结晶得到纯的3-(3-溴苯基)-3-甲基丁酸(间位同分异构体)为棕色结晶(14g，54.7mmol，42％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52-7.50(m,1H),7.37-7.35(m,1H),7.35-7.30(m,1H),7.23-7.20 (m,1H),2.66(s,2H),1.47(s,6H)。
化合物D13的制备
将3-(3-溴苯基)-3-甲基丁酸(化合物D12，7.7g，29.94mmol)溶于170ml的THF中，然后冷却至-20℃。将三乙胺(8.3ml，59.89mmol)和三甲基乙酰氯(3.7ml，29.94mmol)加至反应烧瓶中，产生白色沉淀。所得混合物在-20℃、N2氛下搅拌反应1h，顺序加入LiCl(1.27g，29.94mmol)和(4S)-(-)-4- 异丙基-2-噁唑烷酮(3.87g，29.94mmol)后，所得反应混合物在-20℃下搅拌反应2h，后在-20℃、N2氛下反应过夜。向反应混合物中加入水，并用EtOAc(2x100mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，减压浓缩。所得产品经快速柱色谱(硅胶，正己烷：EtOAc/4：1)纯化得到化合物D13为无色透明油状物(9.5g，25.79mmol)，产率为87％。
1H NMR(400MHz,CDC13)δ7.52-7.50(m,1H),7.36-7.31(m,2H),7.21-7.18(m,1H),4.25-4.21 (m,1H,H-4),4.17-4.09(m,2H),3.42-3.31(m,2H,H-10),2.22-2.10(m,1H),1.50(s,3H),1.49(s,3H),0.86(d, 3H,J＝6.80Hz),0.77(d,3H,J＝6.80Hz)。
化合物D14的制备
在氩气氛下，将噁唑烷酮化合物D13(8.4g，22.8mmol)溶于THF(100ml)，然后冷却至-78℃。加入二(三甲基硅烷基)酰胺钾(25.1ml，1M的THF溶液，25.1mmol)，所得溶液在-78℃下搅拌反应1 小时20分钟。然后在-78℃下，通过插管加入2,4,6-三异丙基苯磺酰基叠氮化物(9.2g，29.64mmol)的 THF(40ml)溶液，5分钟后，反应混合物用冰乙酸(6.3ml，104.9mmol)处理，升温至40℃，室温下继续搅拌反应10h。向淡黄色混合物中加入盐水(270ml)和水(35ml)，水相用乙醚萃取(2x500ml)。合并的有机萃取物用饱和碳酸氢钠溶液(2x110ml)洗，硫酸镁干燥，减压浓缩。所得粗产品经柱色谱(3： 7/EtOAc-正己烷)纯化得到叠氮化物D14为无色油状物(8.1g，19.84mmol)，产率为87％。
1H NMR(400MHz,CDC13)δ7.55-7.52(m,1H),7.41-7.39(m,1H),7.23-7.20(m,2H),5.67(s,1H), 4.21-4.07(m,3H),3.61(t,1H,J＝8.3Hz),2.37-2.25(m,1H,H-6),1.56(s,3H),1.54(s,3H),0.89(d,3H,J＝6.8 Hz),0.85(d,3H,J＝7.2Hz)。
化合物D15的制备
将SnCl2(5.5g，29.32mmol)溶于75mL的1,4-二氧六环：H2O(2：1)中，将所得无色透明溶液冷却至0℃，然后将化合物D14(4g，9.77mmol)溶于20mL的二氧六环并加至所述溶液中，所得反应混合物在室温下搅拌反应过夜。将反应体系冷却至0℃后，顺序加入NaHCO3(4.1g，48.86mmol)和 Boc2O(6.4g，29.31mmol)，反应混合物在室温、N2氛下搅拌反应1天。减压浓缩除去溶剂，然后用EtOAc (2x300mL)萃取，所得有机层用盐水洗，Na2SO4干燥，浓缩，所得残留物经柱层析(3:7/EtOAc-正己烷)纯化得到化合物D15为无色油状物(4.1g，8.48mmol)，收率为87.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.45(bs,1H),7.35-7.31(m,1H),7.32-729(m,1H),6.17(d,1H,J＝9.6Hz),5.15(bs,1H,NH),3.89-3.80(m,2H), 3.52(t,1H,J＝8.3Hz),2.33-2.21(m,1H),1.41(s,3H),1.39(s,9H),1.38(s,3H),0.80(d,3H,J＝7.2Hz),0.78 (d,3H,J＝6.8Hz)。
化合物D16的制备
将噁唑烷酮化合物D15(4.1g，8.48mmol)溶于4:1/THF:H2O(50mL)的混合溶剂中，将所述溶液冷却至0℃。然后向噁唑烷酮溶液中加入过氧化氢(2.7ml，30％水溶液，25.44mmol)和氢氧化锂 (610mg，25.44mmol)，室温下搅拌反应过夜。过量的过氧化氢通过缓慢加入亚硫酸氢钠淬灭，然后继续搅拌反应1hr。反应毕，混合物用EtOAc(50mL)和H2O(100mL)稀释，分离水相，并用1.0M HCl 在0℃下酸化，然后用乙酸乙酯萃取(2x200ml)。所得有机层用盐水洗，硫酸镁干燥，减压浓缩得到无色透明油状物(2.9g，7.83mmol，95％)，其足够纯，无需纯化，直接用于下一步反应。1H NMR(400MHz, CDC13)δ7.32-7.31(m,1H),7.17-7.10(m,2H),7.00-6.97(m,1H),4.83(d,1H,J＝8.8Hz),4.41(d,1H,J＝8.8 Hz),1.45(s,6H),1.38(s,9H)。
化合物A5a的制备
在氩气氛下，将氢化钠(60％，830mg，22.64mmol)、催化量的四丁基碘化铵加至剧烈搅拌的酸化合物D16(1.2g，3.23mmol)的50ml干燥THF溶液中，随后加入碘甲烷(2.0ml，32mmol)。所得悬浮液在室温下搅拌反应1天。过量的氢化钠通过小心加入冰水淬灭，混合物在0℃下通过滴加1.0M HCl酸化至pH值为3。所得酸性混合物用乙酸乙酯萃取(3x100mL)，合并的有机层用盐水洗，硫酸镁干燥，减压浓缩。酸化合物A5a经硅胶柱层析(1:2/EtOAc-正己烷与1％乙酸)纯化得到无色透明油状物为旋转异构体混合物(0.74g,1.93mmol,60％)，收率为77％。1H NMR(400MHz,CDC13)δ7.50-7.49(m,1H), 7.37-7.27(m,2H),7.13-7.07(m,1H),5.15(s,0.65H,H-2),4.95(s,0.35H,H-2),2.51(s,1H,H-6),2.27(s,2H, H-6),1.57(s,3H),1.53-1.38(m,12H)。
化合物A6a的制备
向密封管内的化合物A5a(600mg，1.56mmol，1当量)的甲苯(10mL)溶液中加入氢氧化铵(3mL，15.6mmol，10当量)和铜粉(20mg，0.23mmol，0.15当量)。将所述管加热至100℃反应过夜，然后冷却至室温，小心打开密封管帽，浓缩得到残留物，所述残留物用NaHCO3溶液和n-丁醇稀释。水层用n-丁醇萃取。将有机层减压浓缩，残留物经硅胶柱层析(DCM:MeOH:Et3N＝9:1:1)纯化得到化合物A6a(300mg，0.930mmol，60％)。LC-MS(ESI):323.4(M+1),223.5(M-Boc+1)。
化合物A7A的制备
向化合物A6a(300mg，0.930mmol，1当量)的THF(7mL)溶液中加入烯丙基琥珀酰亚胺基碳酸酯(Alloc-OSu，199.1mg，1.86mmol，2当量)和三乙胺(0.51mL，3.72mmol，4当量)。所得混合物在室温、N2氛下搅拌反应过夜。除去溶剂，所得残留物经快速柱层析(DCM:MeOH＝9:1)纯化得到化合物A7A。LC-MS(ESI):407.4(M+1),307.6(M-Boc+1)。
化合物A8A的制备
向化合物A7A(220mg，0.54mmol，1当量)的干燥DCM(5mL)溶液中加入B8(202mg，0.65mmol，1.2当量)。所得混合物冷却至0℃，然后顺序加入DIEA(49μL，0.3mmol，3当量)和PyBop (338mg，0.65mmol，1.2当量)。反应体系在室温、N2氛下搅拌反应过夜，然后用DCM稀释和水洗。所得水溶液进一步用DCM(2x50mL)萃取。合并有机层，硫酸钠干燥，浓缩至一定干度得到粗产品。所得粗产品经快速柱层析(EtOAc:正己烷＝1:1)纯化得到化合物A8A(200mg，0.28mmol，53％)。LC-MS (ESI):701.4(M+1),601.6(M-Boc+1)。
化合物A9a的制备
向化合物A8A(170mg，0.24mmol，1.0当量)和Pd(PPh3)4(28mg，0.024mmol，0.1当量)的DCM (10mL)溶液中加入三-n-丁基-氢化锡(78μL，0.29mmol，1.2当量)。所得反应混合物用氮气脱气并回填。反应体系在室温、N2氛下搅拌反应3-4h。除去溶剂，所得粗产品经硅胶柱层析(EtOAc:正己烷＝1:1) 纯化得到A9a为透明油状物(130mg，87％)。1HNMR(400MHz,CDC13)δ7.11-7.07(m,1H),6.97-6.70(m, 2H),6.61-6.48(m,2H),6.03-5.97(m,1H),5.12-4.89(m,1H),4.63-4.49(m,1H),4.21-4.01(m,2H),2.93(s,3H), 2.83(m,3H),1.83-1.81(bs,4H),1.42(s,12H),1.27-1.17(m,6H),0.87-0.0.81(m,6H),0.78-0.63(m,6H),0.63(s,6H)。LC-MS(ESI):617.6(M+1)。
实施例1d
化合物101a(单一非对映异构体)的手性合成
Figure BDA0003557852990001251
化合物101a是根据方案8由化合物A9a制备得到。
方案8
Figure BDA0003557852990001252
Figure BDA0003557852990001261
化合物A10a的制备
向通氩气排气的A9a(27mg，0.04mmol)的1mLCH2Cl2的溶液中加入15％w/v碳酰氯的甲苯(0.6mL，0.06mmol)溶液。将反应混合物在密封管中加热至50℃反应4h，然后冷却至环境温度，减压浓缩除去挥发物。向所得残留物中加入真空干燥的Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸-p-氨基苄基乙醇(26mg，0.04 mmol)的1mL DMF溶液。反应混合物在45℃、氩气氛下搅拌反应6h，然后在环境温度下继续搅拌反应 24hr。减压浓缩除去所有挥发物后，所得残留物经硅胶柱层析(90:10/CH2Cl2:MeOH洗脱剂)纯化得到 A10a。
化合物A11a的制备
向A10a的CH2Cl2(1mL)溶液中加入哌啶(0.1mL)，反应混合物在环境温度下搅拌反应1 hr。减压浓缩除去所有挥发物后，向所得残留物中加入DBCO-琥珀酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯(3.6mg，0.009mmol)、DMF(1mL)、和二异丙基乙胺(0.004mL，0.02mmol)。反应混合物在环境温度下搅拌反应24hr。减压浓缩除去所有挥发物后，所得残留物经硅胶柱层析(90:10/CH2Cl2:MeOH洗脱剂)纯化得到A11a。
化合物101a的制备
将化合物A11a(7mg，0.005mmol)溶于3:1:1THF:MeOH:H2O(1mL)中，然后将溶液冷却至 0℃。加入固体LiOH·H2O(1.7mg，0.4mmol)，所得反应混合物在环境温度下搅拌反应过夜。然后加入几毫升冰醋酸，减压浓缩除去挥发物，所得游离酸101a采用Ultro 120(7μm)、150x20mmID柱(水-乙腈 (10mm NH4OAc)溶剂体系，从10％ACN至100％ACN梯度洗脱50min，15ml/min)，经逆相-高效液相色谱(RP-HPLC)纯化。
将A11a的N-保护的酸(5mg,0.004)溶于CH2Cl2(1mL)，然后将溶液冷却至0℃。向所述溶液中加入0.2M HCO2H的CH2Cl2(0.039mL)溶液后，反应混合物在环境温度下搅拌反应过夜。减压浓缩除去所有挥发物，所得游离氨基酸采用Ultro 120(7μm)、150x20mm ID柱(水-乙腈(10mm NH4OAc) 溶剂体系，从10％ACN至100％ACN梯度洗脱50min，15ml/min)，经逆相-高效液相色谱(RP-HPLC) 纯化得到化合物101a。
实施例1e
化合物(110a)的合成
Figure BDA0003557852990001271
化合物(110a)是根据方案9制备得到。
方案9
Figure BDA0003557852990001281
化合物A14的制备：化合物A14是由化合物A13(采用类似于化合物A8a所示的那些制备过程)通过化合物A9a所示的制备方法制备得到。产量：379mg(45％)的白色泡沫。MS(ESI)m/z 603(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.96-7.12(m,1H),6.91(brd,J＝7.5Hz,1H),6.83(brs,1H),6.66-6.80(m,1H), 6.51-6.65(m,1H),6.41-6.50(m,1H),5.95(brd,J＝8.8Hz,1H),5.33(s,1H),4.94-5.11(m,1H),4.92(brs,1H), 4.58(brd,J＝9.5Hz,1H),4.48(brd,J＝8.5Hz,1H),3.72(brs,1H),3.67(brs,3H),2.73-2.96(m,7H),1.75-1.98 (m,5H),1.72(brs,1H),1.49(brs,2H),1.18-1.45(m,15H),0.60-0.86(m,17H)；13C NMR(400MHz,CDCl3)δ: 171.2,169.9,168.2,168.1,157.1,148.8,146.9,139.2,139.0,132.5,132.2,129.7,116.6,113.4,79.8,65.4,55.9, 55.2,52.0,42.5,42.5,34.7,34.3,33.9,31.0,31.0,30.2,30.1,28.3,28.3,26.5,26.3,26.2,19.5,19.4,18.8,18.5, 13.9,13.8。
化合物A15的制备：向通氩气排气的冰冷却的A14(63mg，0.1mmol)的CH2Cl2(0.8mL)溶液中加入三氟乙酸(0.2mL，2.6mmol)。移去所述冰浴，反应体系在环境温度下搅拌反应1h。减压浓缩除去挥发物得到A15为淡黄色玻璃状物，其将直接用于随后反应。MS(ESI)m/z503(M+H)+；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ10.36(br,3H),7.19-8.14(m,4H),6.57(brd,J＝7.5Hz,1H),5.02–4.45(m,3H),3.68(s,3H), 2.97(s,3H),2.38-2.48(m,3H),1.74-1.80s(m,3H),1.18-1.38(m,6H),0.80-0.95(m,17H)；13C NMR(400MHz, CDCl3)δ:170.9,168.2,161.5,145.3,139.2,138.0,131.5,126.8,122.3,117.2,86.9,52.1,40.9,40.5,35.3,34.4, 33.6,31.4,29.7,28.2,28.3,27.5,26.5,26.4,26.3,26.2,19.1,187,18.4,13.8。
化合物A16的制备：化合物A16是由化合物A15根据化合物A10所示的一般合成方法制备得到。产量：52mg(50％)的白色泡沫。MS(ESI)m/z 1044(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.10(br,1H), 7.84(brd,J＝7.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,2H),7.42-7.31(m,7H),7.11-7.23(m,7H),6.94-6.98(m,1H), 6.56(d,J＝8.0Hz,1H),5.94-5.96(m,1H),4.85-5.1(m,3H),4.61-4.80(m,2H),4.15(t,J＝7.3Hz,1H),4.25(t, J＝7.0Hz,1H),4.15(t,J＝7.1Hz,1H),4.05(t,J＝7.0Hz,1H),3.67(s,3H),3.60(d,J＝3,6Hz, 1H),2.89-3.05(m,5H),1.80＝2.09(m,10H),1.28-1.36(m,10H),0.66-0.99(m,17H)；13C NMR(400MHz, CDCl3)δ:172.4,172.0,171.5,170.9,168.2,156.7,153.9,147.9,143.7,143.6,141.3,138.9,132.3,129.2,127.7, 127.0,125.0,120.67.1,66.0,54.7,52.0,49.6,47.1,41.2,35.6,35.1,31.1,31.0,29.8,29.2,26.7,21.7,19.5,19.3, 19.2,19.0,18.9,18.1,18.0,13.8。
化合物A17的制备：向通氩气排气的A16(52mg，0.05mmol)的DMF(0.4mL)溶液中加入N,N-二乙胺(0.2mL，5mmol)，反应混合物在环境温度下搅拌反应2h。减压浓缩除去挥发物，所得残留物经硅胶柱层析(BiotageIsolera)，采用2-100％甲醇的氯仿溶剂梯度洗脱纯化得到23mg游离胺为白色固体。所得游离胺经RP-HPLC(xmmC185采用10至90％B的A溶剂进行线性梯度洗脱20分钟 (A＝10mMNH4OAc的水溶液；B＝10mMNH4OAc的CH3CN溶液))进一步纯化得到A17，产量为 9.5mg，24％，并在254和280nM处检测到。MS(ESI)m/z 822(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.11 (s,1H),7.73(br,1H),7.81(d,J＝9.5Hz,1H),7.48(d,J＝9.0Hz,2H),7.01-7.3(m,4H),6.57(dd,J＝1.4,9.5Hz, 1H),5.07(s,2H),5.04(d,J＝1.1Hz,1H),4.72(d,J＝9.8Hz,1H),4.6(t,J＝7.0Hz,1H),3.6(s,3H),3.63(s, 1H),3.24(br,1H),3.05(s,1H),3.01,(dJ＝6.3Hz,1H),2.95(s,3H),2.08(br,2H),2.01(s,3H),1.98(s,3H),1.80-1.84(m,1H),1.40(d,J＝6.2Hz,4H),1.31(s,6H),0.92-0.93(m,13H),0.79(d,J＝6.6Hz,8H),0.71(d,J ＝6.6Hz,4H)。
(110a)的制备：在氩气氛下，将化合物A17(9.8mg，0.012mmol)与二苯并环辛炔基己二酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯(Broadpharm22447，7.7mg，0.018mmol)的DMF(0.150mL)溶液一同搅拌。然后向其中加入N,N-二异丙基乙胺(.006mL，0.036mmol)，反应混合物在环境温度下搅拌反应3h。减压浓缩除去挥发物，所得残留物部分经硅胶柱层析，采用2至10％的甲醇的氯仿溶剂梯度洗脱纯化。将含有产品的组分减压浓缩得到残留物，质谱为MSm/z1137.4。在氩气氛下，将所得残留物(10.6mg，0.009 mmol)溶于3:1:1的THF:甲醇:水(0.5mL)中，冰浴冷却，并用LiOH.H2O(2.6mg，0.063mmol)进行处理。将反应混合物平衡至环境温度过夜。减压浓缩除去挥发物，所得残留物经上述RP-HPLC方法纯化，冻干后得到(110a)为絮状白色固体，2.1mg，0.002mmol。MS(ESI)m/z 1123(M+H)+；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:10.02(brd,J＝3.8Hz,1H),9.67(brs,1H),8.25(brd,J＝6.8Hz,1H),7.88(brd,J＝8.8Hz, 1H),7.79(brd,J＝8.3Hz,1H),7.54-7.70(m,4H),7.29-7.54(m,9H),7.06-7.27(m,3H),6.40-6.50(m,1H),5.10 (s,2H),5.05(brd,J＝14.1Hz,1H),4.91(brt,J＝10.2Hz,1H),4.77(brd,J＝9.5Hz,1H),4.25-4.49(m,2H), 4.06-4.24(m,2H),3.60-2.99(m,宽水包层),2.99(m,3H),2.69-2.82(m,3H),2.56-2.49(m,DMSO包层),2.42 (brs,1H),2.12-2.29(m,3H),1.90-2.11(m,6H),1.73-1.90(m,6H),1.15-0.76(m,18H),0.72(brd,J＝6.3Hz,6H)。
实施例1f
化合物(111a)的合成
Figure BDA0003557852990001301
化合物(111a)是根据方案10制备得到。
Figure BDA0003557852990001302
化合物A19的制备：(S,E)-4-((R)-2-((S)-3-(3-氨基苯基)-3-甲基-2-(甲氨基)丁酰氨基)-N,3,3-三甲基丁酰氨基)-2,5-二甲基己-2-烯酸乙酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的50mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A18(200 mg，0.32mmol，1.0当量)的干燥CH2Cl2(3mL)溶液，将所述透明溶液在冰浴中冷却至0℃，然后向其中加入1mL的三氟乙酸。反应混合物在室温下搅拌反应4h。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，将所得粗产物冻干16h得到化合物A19为类白色固体(167mg，100％)。LC-MS(ESI):517.5(M+1)。
化合物A20的制备：(S,E)-4-((S)-2-((R)-3-(3-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3- 甲基丁酰胺基)丙酰胺基)苯基)-3-甲基-2-(甲氨基)丁酰胺基)-N,3,3-三甲基丁酰胺基)-2,5-二甲基己-2-烯酸乙酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的50mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A19(70 mg，0.135mmol，1当量)、Fmoc-缬氨酸-丙氨酸-OH(67mg，0.162mmol，1.2当量)和1mL无水N,N- 二甲基甲酰胺。所得透明溶液在冰浴下冷却至0℃，然后向反应体系中顺序加入N,N-二异丙基乙胺(72μL， 0.405mmol，3当量)，1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化六氟磷酸酯(HATU) (62mg，0.162mmol，1.2当量)。反应混合物在室温、N2氛下搅拌反应过夜。LC-MS显示反应完毕后，加入饱和NH4Cl(10mL)淬灭反应，然后用CH2Cl2(2x100mL)萃取。有机层用饱和盐水(50mL)洗，无水Na2SO4干燥，过滤，然后减压浓缩至一定干度。所得粗产品采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID 柱、溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经制备的逆相-高效液相色谱纯化。收集纯的组分，并进行冻干得到化合物A20为白色固体(86mg，0.095mmol，70％)。LC-MS(ESI):909.5(M+1)。
化合物A21的制备：
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的25mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A20(80 mg，0.088mmol)、和干燥的CH2Cl2(2mL)，然后向所得透明溶液中加入哌啶(0.5mL)，反应混合物在环境温度、N2氛下搅拌反应1h。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物。所得游离胺粗品采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱、溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经制备的逆相-高效液相色谱纯化。收集纯的组分，并进行冻干得到所述游离胺A20a为白色固体(51mg， 0.074mmol，85％)。LC-MS(ESI):688(M+1)。
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的25mL单颈圆底烧瓶中装入游离胺A20a(51 mg，0.074mmol)。然后顺序加入DBCO己二酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯(41mg，0.096mmol)，无水 N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，和N,N-二异丙基乙胺(40μL，0.22mmol)。将反应混合物通氩气排气，然后在环境温度、N2氛下搅拌反应3小时。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物。所得残留物采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱、溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂 B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经制备的逆相-高效液相色谱纯化。收集纯的组分，并进行冻干得到所述化合物A21a为白色粉末(52mg， 0.052mmol，70％)。LC-MS(ESI):1003.8(M+1)。
化合物(111a)的制备：
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的25mL单颈圆底烧瓶中装入A21(50mg， 0.05毫摩尔，1当量)，和THF:MeOH:H2O(3:1:1)(1mL)。将所得透明溶液在冰浴下冷却至0℃，然后加入固体LiOH·H2O(16mg，0.349mmol，7当量)，反应混合物在室温、N2氛下搅拌反应7h，LC-MS 显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物。所得粗产物采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱、溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经制备的逆相-高效液相色谱纯化。收集纯的组分，并进行冻干得到化合物(111a)为白色粉末(34mg，0.034mmol，70％)。LC-MS(ESI):974.5(M+1)。1HNMR (400MHz,DMSO-d6)δ9.78-9.63(bd,1H),8.34-8.10(m,1H),7.82-7.68(2H),7.58-7.35(m,8H),7.34-7.18(m, 4H),7.16-7.08(m,4H),6.53-6.52(m,1H)4.98-4.93(m,1H),4.85(m,1H),4.71(brd,1H),4.36-4.26(m,1.5H), 4.09-4.04(m,1H),3.67-3.47(m,2H),3.12(brd,1H),2.91-2.87(m,3H),2.13-2.02(m,2H),1.96-1.78(m,9H), 1.74-1.61(m,5H),1.31-1.03(m,16H),0.90-0.67(m,15H)。
实施例1g
化合物(109a)的合成
Figure BDA0003557852990001321
化合物(109a)是根据方案11a和11b制备得到。
方案11a
Figure BDA0003557852990001331
A22的制备：A22是通过文献方法的简单改变制备得到(参见，譬如，Florent et al1998,J Med Chem 41,3572；和Jeffrey et al 2006,Biocong Chem 17,831)。LC-MS:TR9.21min.m/z 763(M+H)+。
方案11b
Figure BDA0003557852990001332
化合物A23的制备：(2S,3R,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((((3-((R)-4-(((S)-1-(((S,E)-6-乙氧基-2,5-二甲基-6-氧-己-4-烯-3-基)(甲基)氨基)-3,3-二甲基-1-氧-丁烷 -2-基)氨基)-2-甲基-3-(甲氨基)-4-氧-丁烷-2-基)苯基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-6-甲基苯氧基)-6-(甲氧羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三醋酸酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的25mL压力容器中装入化合物A19(25mg， 0.048mmol，1当量)和1mL的无水CH2Cl2，然后室温下向其中加入15％w/v碳酰氯的甲苯(0.7mL) 溶液。将反应混合物通氩气，并在室温下、密封容器中搅拌反应17h，减压浓缩除去挥发物，高真空干燥至少2小时。然后向所得残留物中加入化合物A22(44mg，0.058mmol，1.2当量)，并将混合物溶于1mL 的无水N,N-二甲基甲酰胺中。反应混合物在45℃下搅拌反应2h，然后在环境温度下继续反应12h。减压浓缩除去所有挥发物后，残留物采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱、溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经逆相-高效液相色谱纯化，收集纯的组分，并进行冻干得到化合物A23 为白色粉末(25mg，0.019mmol，70％)。LC-MS(ESI):1305.8(M+1)。
化合物(109a)的制备：
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的25mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A23(23 mg，0.018mmol)、和干燥的CH2Cl2(0.5mL)，向所得透明溶液中加入哌啶(0.2mL)，反应混合物在环境温度、N2氛下搅拌反应1h，减压浓缩除去所有挥发物。将所得粗品溶于THF:MeOH:H2O(3:1:1)(1mL)。并将所得透明溶液在冰浴下冷却至0℃，然后加入固体LiOH·H2O(8mg，0.176mmol，10当量)，反应混合物在室温、N2氛下搅拌反应7h，LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物。所得粗产物采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱、溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含 10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经逆相 -高效液相色谱纯化，收集纯的组分，并进行冻干得到化合物A23a为白色粉末(8mg，0.009mmol，50％)。 LC-MS(ESI):915.7(M+H),897.7(M-H2O+H)。
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的10mL单颈圆底烧瓶中装入游离胺A23a(8 mg，0.009mmol)。然后顺序加入DBCO己二酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯(5mg，0.011mmol)、无水N,N- 二甲基甲酰胺(0.3mL)、和N,N-二异丙基乙胺(10μL，0.033mmol)。向反应混合物中通氩气排气，然后在环境温度、N2氛下搅拌反应3小时。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物。所得残留物采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱，溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经逆相-高效液相色谱纯化，收集纯的组分，并进行冻干得到化合物(109a)为白色粉末(5mg，0.004mmol， 50％)。LC-MS(ESI):1230.8(M+H),1212.8(M-H2O+H)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61-9.55(m,2H), 7.85(bs,2H),7.80(bd,1H),7.61-6.97(m,15H),6.64-6.50(m,2H),6.02(bs,1H),5.48(bs,1H),5.17-4.89(m,6H),4.85-4.76(bt,1H),4.71-4.62(m,1H),4.01(bs,1H),3.69-3.66(m,3H),3.10(bs,2H),2.89(bs,3H), 2.29-2.26(m,19H),2.13-2.00(m,H),1.96-1.56(m,18H),1.80-1.02(m,14H),0.89(bs,10H),0.70(d,3H),0.66 (d,3H)。
实施例1h
化合物(111a)的合成
化合物(111a)是根据方案12和13制备得到。
方案12
Figure BDA0003557852990001351
化合物A8a的制备：(6S,9S,12S,E)-6-(2-(3-(((烯丙氧基)羰基)氨基)苯基)丙烷-2-基)-9-(叔丁基)-12-异丙基-2,2,5,11,14-五甲基-4,7,10-三氧-3-氧杂-5,8,11-三氮杂戊烷-癸-13-烯-15-酸乙酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的100mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A7a(1.1 g，2.70毫摩尔，1当量，内部制备)、干燥CH2Cl2(10mL)和化合物B8(1.00g，3.24毫摩尔，1.2当量，内部制备)的干燥CH2Cl2(10mL)溶液。将所得透明溶液在冰浴下冷却至0℃，然后向冷却的溶液中顺序加入N,N-二异丙基乙胺(1.5mL，8.1毫摩尔，3当量)和(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP，1.7g，3.24mmol，1.2当量)。反应混合物在室温、N2氛下搅拌反应过夜。LC-MS显示反应完毕后，向反应体系中滴加饱和NH4Cl(10mL)溶液淬灭反应，然后用CH2Cl2(2x200mL)萃取。有机层有饱和盐水(50mL)洗，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至一定干度。所得粗产品经快速硅胶柱色谱在特利丹ISCO(Teledyne ISCO)系统(40g硅胶快速柱，洗脱梯度：正己烷至30％EtOAc/正己烷) 纯化得到化合物A8a无色粘性油状物(1.2g，1.71mmol，63％)，其缓慢凝固得到竖立的类白色固体。 LC-MS(ESI):701.5(M+1)。
化合物A9a的制备：(6R,9S,12S,E)-6-(2-(3-氨基苯基)丙烷-2-基)-9-(叔丁基)-12-异丙基 -2,2,5,11,14-五甲基-4,7,10-三氧-3-氧杂-5,8,11-三氮杂戊烷-癸-13-烯-15-酸乙酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的100mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A8a(1.2 g，1.71毫摩尔，1.0当量，内部制备)、和干燥CH2Cl2(10mL)。室温、N2氛下，向所得透明溶液中顺序加入四(三苯基膦)钯(0)(0.98g，0.856毫摩尔，0.5当量)和三-n-丁基-氢化锡(0.55mL，2.05毫摩尔， 1.2当量)。添加完毕后，向反应混合物通氩气排气，然后在室温、N2氛下搅拌反应。4小时内，LC-MS& TLC(1:1EtOAc/正己烷)显示反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，所得粗产物经快速柱色谱在特利丹ISCO (Teledyne ISCO)系统(40g硅胶快速柱，洗脱梯度：正己烷至50％EtOAc/正己烷)纯化得到化合物A9a 为泡沫状类白色固体(0.95g，1.54摩尔，收率：90％)。LC-MS(ESI):617.3(M+1)。
方案12
Figure BDA0003557852990001361
化合物A19的制备：(S,E)-4-((R)-2-((S)-3-(3-氨基苯基)-3-甲基-2-(甲氨基)丁酰胺基)-N,3,3-三甲基丁酰胺基)-2,5-二甲基己-2-烯酸乙酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的50mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A9a(200 mg，0.32mmol，1.0当量)、和干燥CH2Cl2(3mL)，将所得透明溶液在冰浴下冷却至0℃，然后向其中加入1mL三氟乙酸。反应混合物在室温下搅拌反应4h。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，将所得粗产物冻干16h得到化合物A19为类白色固体(167mg，100％)。LC-MS(ESI):517.5(M+1)。
化合物A18的制备：(S,E)-4-((S)-2-((R)-3-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基)氧基)羰基)氨基)苯基)-3-甲基-2-(甲氨基)丁酰胺基)-N,3,3-三甲基丁酰胺基)-2,5-二甲基己-2-烯酸乙酯
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的50mL压力容器中装入化合物A19(167mg， 0.323mmol，1当量)(**注意：使用前，将化合物A19在冻干机泵下干燥15h)和4mL的无水CH2Cl2，然后室温下向其中加入15％w/v碳酰氯的甲苯(5mL)溶液。反应混合物通氩气，然后在室温下、密封容器中反应17h，减压浓缩除去挥发物，高真空干燥至少2小时。向所得残留物中加入Fmoc缬氨酸-瓜氨酸-p-氨基苄基乙醇(253mg，0.42mmol，1.3eq)，将混合物溶于3mL的无水N,N-二甲基甲酰胺中。反应混合物在45℃下搅拌反应2h，然后在环境温度下继续反应12h。减压浓缩去除所有挥发物，残留物经快速柱色谱在特利丹ISCO(TeledyneISCO)系统(24g硅胶快速柱，洗脱梯度：CH2Cl2至12％MeOH/CH2Cl2) 纯化得到化合物A18为类白色固体(247mg，0.215mmol，67％)。LC-MS(ESI):1144.7(M+1)。
化合物A25的制备：
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的50mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A18(240 mg，0.209mmol)、和干燥CH2Cl2(5mL)，然后向其中加入哌啶(1.5mL)，反应混合物在环境温度、 N2氛下搅拌反应1h。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物。所得粗品游离胺采用Ultro 120 (7μm)C18Q，150x20mmID柱，溶剂体系使用溶剂A：含10mmNH4OAc的水；溶剂B：含10mm NH4OAc 的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经制备逆相-高效液相色谱纯化，收集纯的组分，并进行冻干得到游离胺A24为白色固体(164mg，0.177mmol，85％)。
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的50mL单颈圆底烧瓶中装入游离胺A24(164 mg，0.177mmol)，然后顺序加入DBCO己二酰基N-羟基琥珀酰亚胺酯(126mg，0.313mmol)、无水 N,N-二甲基甲酰胺(3mL)、和N,N-二异丙基乙胺(110μL，0.627mmol)。向反应混合物中通氩气排气，然后在环境温度、N2氛下搅拌反应3小时。LC-MS显示反应完毕后，减压浓缩除去所有挥发物，所得残留物采用Ultro 120(7μm)C18Q，150x20mmID柱，溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂 B：含10mm NH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经逆相-高效液相色谱纯化，收集纯的组分，并进行冻干得到化合物A25为白色粉末(177mg，0.146mmol， 70％)。LC-MS(ESI):1209.6(M+1)。
向烘干的、配备有聚四氟乙烯包覆的磁力搅拌棒的25mL单颈圆底烧瓶中装入化合物A25(177 mg，0.146毫摩尔，1当量)、和THF:MeOH:H2O(3:1:1)(5mL)。将所得透明溶液在冰浴下冷却至0℃，然后加入固体LiOH·H2O(46mg，1.022mmol，7当量)，反应混合物在室温、N2氛下搅拌反应7h，LC-MS 显示反应完毕后，减压浓缩除去挥发物，所得粗产物采用Ultro120(7μm)C18Q，150x20mmID柱，溶剂体系使用溶剂A：含10mm NH4OAc的水；溶剂B：含10mmNH4OAc的乙腈(洗脱模式从10％溶剂B 至90％溶剂B，梯度洗脱20分钟，10mL/min)，经逆相-高效液相色谱纯化，收集纯的组分，并进行冻干得到化合物(101a)为白色粉末(138mg，0.117mmol，80％)。LC-MS(ESI):1181.5(M+1)。
实施例1i
抗体在XpressCFTM反应中采用本领域技术人员已知的程序进行表达(参见，譬如，Cai et al. Biotechnol.2015,31(3),823；和Zimmerman et al.BioconjugateChem.2014,25,351.)。用于此项工作的无细胞提取物由OmpT灵敏的、使大肠杆菌菌株衰减的RF1创建，所述大肠杆菌菌株工程化，以过表达大肠杆菌DsbC和FkpA以及含有用于编码琥珀终止密码子(Amber Stop Codon)的CUA反密码子的正交tRNA。提取物用75μM碘乙酰胺在RT(20℃)下处理45分钟，然后加至含有所有其他组分除了IgG重链和轻链 DNA的预混物中。蛋白合成反应中的最终浓度是30％(v/v)细胞提取物，2mM对-叠氮基甲基苯丙氨酸 (pAMF)(RSP氨基酸)，5uM工程化的pAMF-特异性氨基-酰基tRNA合成酶(FRS变体)，2mM GSSG， 8mM谷氨酸镁，10mM谷氨酸铵，130mM谷氨酸钾，35mM丙酮酸钠，1.2mM AMP，0.86mM的各 GMP、UMP、和CMP，2mM氨基酸(除了0.5mM的酪氨酸和苯丙氨酸)，4mM草酸钠，1mM腐胺， 1.5mM亚精胺，15mM磷酸钾，100nM T7 RNAP，1μg/mL抗-CD74轻链DNA，和4μg/mL抗-CD74重链DNA。定点突变用于引入琥珀终止密码子(TAG)至核苷酸序列中，从而在位置S7和F404(分别为轻链和重链，kabat编号)编码为pAMF非天然氨基酸。无细胞反应通过添加质粒DNA启动，并在30℃下含有10mL的100x10mm培养皿中孵育16h。
所述无细胞反应通过离心法以10,000转速离心分离30分钟，进行澄清。澄清的上层清液采用标准清洗和低pH值洗脱应用于蛋白A MabSelect SuRe(GE医疗)。杂质如聚集体通过平衡在50mM磷酸钠、200mM精氨酸、pH值为6.5的制备SEC(Sepax SRT-10C)除去。样品的最终配制由杜尔贝科 (Dulbecco’s)磷酸盐缓冲生理盐水(1x DPBS)完成。
含有pAMF、纯化的IgGs采用无铜点击化学与张紧的环辛炔试剂(SpAAC，提升张力的炔烃叠氮化物环加成)与细胞毒性测试化合物偶联。简言之，将测试化合物溶于DMSO，以使最终浓度为5mM。将每个化合物以药物-连接体与抗体的摩尔比为12比1加至1mg/mL纯化蛋白的PBS中。反应混合物在 RT(20℃)下孵育17小时。过量游离的药物通过平衡在PBS中的Zeba孔板(赛默科技，Thermo Scientific) 除去。DAR分析是由MALDI-TOF(BrukerAutoFlex Speed)完成。所述偶联的蛋白在37℃下采用10mM TCEP的水溶液中进行还原10分钟，然后稀释至终浓度为50μg/mL的30％乙腈、0.1％三氟乙酸的溶液。样品采用S-DHBMALDI基质(50mg/mL的50％乙腈、0.1％三氟乙酸溶液)组合为1:1，且1μL应用于所述MALDI目标，并真空干燥。每个MALDI光谱以线性模式的全激光功率累计5000次，和最终DAR 分析是通过比较用于偶联和非偶联物质的相对峰强度进行计算。
实施例1j
化合物1与曲妥珠单抗的偶联物的制备如下所述。
将化合物101或101a溶于DMSO，使其浓度为5mM。将所得溶液加至纯化的C225HCC-端 (C-term)抗体的PBS缓冲液中，得到最终化合物浓度为200μM和最终抗体浓度为3mg/mL(20μM)，即化合物：抗体的摩尔比为10:1。混合物在环境温度(25℃)下孵育16h。过量化合物采用平衡在1X PBS 中的zeba孔板(赛默科技，Thermo Scientific)除去。
此程序步骤用于使化合物101和101a与曲妥珠单抗HC在F404和曲妥珠单抗LC在S7进行偶联。
为了使含有反应性叠氮基团的曲妥珠单抗进行偶联，编码所述分子的重链和轻链的DNA被克隆至pUG表达载体中。TAG密码子通过重叠PCR插入指定位置。终止密码子TAA用于终止翻译。
为了表达蛋白，将无细胞提取物解冻至室温，并采用50μM碘乙酰胺孵育30分钟。无细胞反应含有30％(v/v)碘乙酰胺处理的提取物与8mM谷氨酸镁，10mM谷氨酸铵，130mM谷氨酸钾，35mM 丙酮酸钠，1.2mM AMP，0.86mM的各GMP、UMP、和CMP，2mM所有18个氨基酸的氨基酸除了0.5 mM酪氨酸和苯丙氨酸，4mM草酸钠，1mM腐胺，1.5mM亚精胺，15mM磷酸钾，100nMT7 RNAP， 2mM氧化的(GSSG)谷胱甘肽，2mM p-叠氮基甲基苯丙氨酸(pAMF)，2.5μM琥珀抑制基因tRNA 合成酶，在30℃进行长达16h。重链TAG变体质粒和野生型轻链质粒的浓度分别为7.5ug/mL和2.5ug/mL。
含有非天然氨基酸的抗体是通过MabSelect进行纯化的，和通过Capto粘附(Captoadhere)进行抛光，并在使用前储存在PBS缓冲液中。
所述抗-CD74无细胞反应通过离心法以10,000转速离心分离30分钟，进行澄清。澄清的上层清液采用标准清洗和低pH值洗脱应用于蛋白A MabSelect SuRe(GE医疗)。杂质如聚集体通过平衡在 50mM磷酸钠、200mM精氨酸、pH值为6.5的制备SEC(Sepax SRT-10C)除去。样品的最终配制由杜尔贝科(Dulbecco’s)磷酸盐缓冲生理盐水(1x DPBS)完成。
实施例1k
具有非天然氨基酸的抗-CD74抗体的生产制备
抗体采用下述修饰在前述Xpress CFTM反应中进行表达。用于此项工作的所述无细胞提取物由 OmpT灵敏的、使大肠杆菌菌株衰减的RF1创建，所述大肠杆菌菌株工程化，以过表达大肠杆菌DsbC和 FkpA以及含有用于编码琥珀终止密码子的CUA反密码子的正交tRNA。提取物用75μM碘乙酰胺在RT (20℃)下处理45分钟，然后加至含有所有其他组分除了IgG重链和轻链DNA的预混物中。在蛋白合成反应中的最终浓度是30％(v/v)细胞提取物，2mM对-叠氮基甲基苯丙氨酸(pAMF)(RSP氨基酸)，5uM 工程化的pAMF-特异性氨基-酰基tRNA合成酶(FRS变体)，2mM GSSG，8mM谷氨酸镁，10mM谷氨酸铵，130mM谷氨酸钾，35mM丙酮酸钠，1.2mM AMP，0.86mM的各GMP、UMP、和CMP，2mM 氨基酸(除了0.5mM的酪氨酸和苯丙氨酸)，4mM草酸钠，1mM腐胺，1.5mM亚精胺，15mM磷酸钾，100nM T7 RNAP，1μg/mL抗-CD74轻链DNA，和4μg/mL抗-CD74重链DNA。定点突变用于引入琥珀终止密码子(TAG)至核苷酸序列中，以在位置S7和F404(分别为轻链和重链，kabat编号)编码为 pAMF非天然氨基酸。无细胞反应通过添加质粒DNA启动，并在30℃下在含有10mL的100x10mm培养皿中孵育16h。
所述抗-CD74无细胞反应通过离心法以10,000转速离心分离30分钟，进行澄清。澄清的上层清液采用标准清洗和低pH值洗脱应用于蛋白A MabSelect SuRe(GE医疗)。杂质如聚集体通过平衡在 50mM磷酸钠、200mM精氨酸、pH值为6.5的制备SEC(Sepax SRT-10C)除去。样品的最终配制由杜尔贝科磷酸盐缓冲生理盐水(Dulbecco’s Phosphate BufferedSaline，1x DPBS)完成。
根据EU编码方案在重链残基404、241、和222位置，和根据Kabat或Chothia编码方案在轻链残基7位置，制备具有非天然氨基酸的抗体。一个抗体包含残基(56)，如上，在位置404，和四个抗体包含残基(30)，如上，在各404、241、222(重链)位置和7(轻链)位置。每个抗体以总产量为至少400mg/L进行表达，如图.2A所示，和完整的IgG通过SDS-PAGE进行检测，如图.2B所示。
抗体-PEG4-美登素偶联物的生产制备
在其重链的EU位置404含有修饰的氨基酸残基30(即，对-叠氮基-甲基-L-苯丙氨酸，或pAMF) 的纯化的抗-CD74 IgG是根据实施例2制备得到。所述抗-CD74IgG采用张紧的环辛炔试剂与哈米特林 (hemiasterlin)进行偶联产生偶联物A。
简言之，DBCO-缬氨酸-瓜氨酸-pAB-哈米特林(DBCO-val-cit-pAB-hemiasterlin)具有如下结构式：
Figure BDA0003557852990001401
将其溶于DMSO，使得终浓度为5mM。以药物与抗体的摩尔比为12比1，将化合物加至1mg/mL纯化的蛋白的PBS中。反应混合物在RT(20℃)下孵育17小时。过量的游离药物通过平衡在PBS中的Zeba孔板(赛默科技Thermo Scientific)除去。
DAR分析是由MALDI-TOF(Bruker AutoFlex Speed)完成。所述偶联蛋白在37℃下采用10mM TCEP的水溶液进行还原10分钟，然后稀释至终浓度为50μg/mL的30％乙腈、0.1％三氟乙酸溶液。样品采用S-DHB MALDI基质(50mg/mL的50％乙腈、0.1％三氟乙酸溶液)组合为1:1，且1μL应用于所述 MALDI目标，并真空干燥。各MALDI光谱在线性模式、全激光功率下累计5000次，和最终DAR分析是通过比较用于重链和轻链两者的偶联和非偶联物质的相对峰强度进行计算。
通过峰强度，MALDI-TOF示出了药物与抗体的比率(DAR)为1.88。偶联物A，如两个位置异构体所示：
Figure BDA0003557852990001411
实施例2a
肿瘤细胞株检测试验
概要
化合物1的两个非对映异构体[S,S,S]和[R,S,S]对表达Her2、CD74表达和非表达细胞株、和CD30 表达和非表达细胞株的乳癌细胞株进行检测试验。Her2表达细胞株包括SKBR3、MDA-MB-453、和 MDA-MB-468，其分别为高、中、低-Her2表达。CD74表达和非表达细胞株包括SU-DHL6和OPM2，其分别为CD74表达和非表达。CD30表达和非表达细胞株包括L540和Raji细胞，其分别为CD30表达和非表达。
结果表明化合物1的[S,S,S]异构体对一组所述这些肿瘤细胞株20倍更有效(平均IC50约1nM) 于化合物1的[R,S,S]异构体。
方法
测试化合物的细胞毒性作用是采用细胞增殖试验进行评估。贴壁癌细胞株(SKBR3、 MDA-MB435、MDA-MB-468、HCT116,HT29、Skco1、和MDA-MB-453)是从ATCC和附加有10％热灭活胎牛血清(胎牛血清；赛默科技Thermo Scientific；沃尔瑟姆Waltham,MA)、2mM谷氨酰胺(英杰公司Invitrogen；卡尔斯巴德Carlsbad,CA)和1x青霉素/链霉素(Cellgro-Mediatech；马纳萨斯Manassas,VA) 的保持在高浓度葡萄糖的DMEM/F12(50/50)培养基(Cellgro-Mediatech；马纳萨斯Manassas,VA)得到。悬浮细胞株(SU-DHL-6和OPM-2)是从ATCC和附加有20％热灭活胎牛血清(胎牛血清；赛默科技Thermo Scientific；沃尔瑟姆Waltham,MA)、2mM谷氨酰胺(英杰公司Invitrogen；卡尔斯巴德Carlsbad,CA)和 1x青霉素/链霉素(Cellgro-Mediatech；马纳萨斯Manassas,VA)的保持在高浓度葡萄糖的RPMI培养基得到。
对于贴壁细胞，在测定前一天，将体积为40μL总数为1000的细胞接种在96-孔半区域平底的白色聚苯乙烯孔板中。对于悬浮细胞，在测定当天，将体积为40μL总数为20000的细胞接种在96-孔半区域平底的白色聚苯乙烯孔板中。
测试化合物在培养基中以2x浓度进行配制，并通过MultiScreen HTS 96-孔滤板(密理博 Millipore；比勒利卡Billerica,MA)过滤。过滤消毒的化合物在培养基中进行连续稀释，将40μL的所述化合物加至处理孔中。对于贴壁细胞，孔板在37℃、在CO2孵育器中培养96小时。对于悬浮细胞，所述孵育时间为72小时。对于细胞活力的测定，将80μL的细胞
Figure BDA0003557852990001421
试剂(Promega公司；麦迪逊Madison, WI)加至各个孔中，孔板均按照每个产品说明书进行处理。
相对发光强度是通过
Figure BDA0003557852990001422
酶标仪(Perkin-Elmer；Waltham,MA)进行测定。采用未经处理的细胞作为对照，相对发光强度读数转化为百分比活力。数据使用log(抑制剂)对比响应、变斜率、采用GraphPad Prism(绘制医学图表)(GraphPad v 5.00，软件；圣地亚哥,CA)的4参数拟合方程，采用非线性回归分析进行拟合。数据表示为相对细胞活力相对于nM剂量的化合物的百分比。通过Prism计算的细胞杀伤的IC50用于评价每个化合物对每个细胞株的效力。
结果
对于进行测试的所有癌细胞株，结果显示，化合物1的[S,S,S]异构体(细胞杀伤IC50的范围是从0.74nM至9.18nM)是10至20倍更有效于化合物1的[R,S,S]异构体(细胞杀伤IC50的范围是从 12.21nM至91.53nM)。
曲妥珠单抗偶联物的结果如图1和表1所示。哈米特林衍生物化合物1的[S,S,S]和[R,S,S]异构体的结果如图2a-c和表2所示。
表1.采用曲妥珠单抗偶联物的肿瘤细胞株检测试验
Figure BDA0003557852990001423
Figure BDA0003557852990001431
表2.采用哈米特林(Hemiasterlin)衍生物的肿瘤细胞株检测试验
Figure BDA0003557852990001432
实施例2b
肿瘤细胞株检测试验
测试化合物对目标阳性和目标阴性细胞的细胞毒性作用是采用细胞增殖试验进行测定。肿瘤细胞株是从美国菌种保藏中心(ATCC)和保持在Ham的F-12：附加有10％热灭活胎牛血清、1％青霉素/ 链霉素和2mmol/L L-谷氨酰胺的高浓度葡萄糖DMEM(50:50)的葡萄糖培养基得到。将目标阳性和阴性细胞(每孔总数为625的细胞)接种在体积为25μL的384-孔平底白色聚苯乙烯板中。所述细胞在CO2孵育器中，在37℃下进行粘附过夜。将ADC变体在DMEM/F12培养基中配制成2x浓度，然后经MultiScreen HTS 96-孔滤板过滤。对过滤消毒的ADCs进行连续稀释(1:3)，将25μL的所述稀释样品加至各处理孔中。然后将孔板在37℃下、在CO2孵育器中培养120小时。对于细胞活力的测定，将30μL的细胞
Figure BDA0003557852990001441
试剂(Promega公司)加至各个孔中，孔板均按照每个产品说明书进行处理。相对发光强度是通过
Figure BDA0003557852990001442
酶标仪(Perkin-Elmer；沃尔瑟姆Waltham,MA)进行测定。采用未经处理的细胞作为对照，相对发光强度读数转化为％活力。数据使用log(抑制剂)对比响应、变斜率、使用GraphPad Prism(绘制医学图表)(GraphPad v 5.00，软件；圣地亚哥,CA)的4参数拟合方程，采用非线性回归分析进行拟合。数据表示为相对细胞活力相对于nM剂量的ADC的百分比％。
结果
表3.采用哈米特林(Hemiasterlin)衍生物的肿瘤细胞株检测试验
Figure BDA0003557852990001443
表4.采用抗体偶联物的肿瘤细胞株检测试验
Figure BDA0003557852990001444
IA表示测试显示不活泼。
实施例2c
细胞结合与细胞杀伤试验
通过下述方法进行评价偶联物A结合和杀伤表达CD74的细胞的能力。测试细胞株包括B-淋巴瘤、多发性骨髓瘤、和白血病细胞。对照包括非偶联的抗-CD74抗体。
细胞结合试验
将细胞株保持在RPMI、附加有20％热灭活胎牛血清(胎牛血清；赛默科技ThermoScientific；沃尔瑟姆Waltham,MA)、2mML-谷氨酰胺(英杰公司Invitrogen；卡尔斯巴德Carlsbad,CA)和1x青霉素/链霉素(Cellgro-Mediatech；马纳萨斯Manassas,VA)的高浓度葡萄糖(Cellgro-Mediatech；马纳萨斯 Manassas,VA)中。收获细胞并再次悬浮在FACS缓冲液(附加有1％牛血清白蛋白的DPBS缓冲液)中。总数为200,000的每孔细胞在冰浴中与顺序稀释抗-CD74先导物SP7919而没有偶联，进行孵育60分钟。细胞用冰冷却的FACS缓冲液洗两次，然后与5ug/ml Alexa 647标记的顽固的抗人IgG抗体(杰克逊免疫研究，JacksonImmune-Research)在冰浴中继续孵育60分钟。未染色的细胞和二级抗体单独染色的细胞作为对照。然后将样品用FACS缓冲液洗两次，采用BD FACS Canto系统进行分析。采用在GraphPad Prism (绘制医学图表)上的一个位点特异性结合方程式，利用非线性回归分析对平均荧光强度进行拟合。数据表示为几何平均荧光强度与nM浓度的抗体之间关系。
细胞杀伤试验
所述游离药物连接体和偶联物的细胞毒性作用是采用细胞增殖试验进行测定。在试验当天，将总数为12500、体积为25μl的细胞接种在384-孔平底白色聚苯乙烯板中。游离药物-连接体和偶联物在RPMI 培养基中配制成2x起始浓度(1000nM的游离药物连接体和100nM的ADCs)，并经MultiScreen HTS 96- 孔滤板(密理博，Millipore)过滤。对过滤消毒的偶联先导化合物进行连续稀释(1:3)，然后加至处理孔中。孔板在37℃下、在CO2孵育器中培养72小时。对于细胞活力的测定，将30μL的细胞
Figure BDA0003557852990001452
试剂(Promega公司)加至各个孔中，孔板均按照每个产品说明书进行处理。相对发光强度是通过
Figure BDA0003557852990001453
酶标仪(Perkin-Elmer；Waltham,MA)进行测定。使用未经处理的细胞作为对照，相对发光强度读数转化为％活力。数据使用log(抑制剂)对比响应、变斜率、使用GraphPad Prism(绘制医学图表) (GraphPad v 5.00，软件；圣地亚哥，CA)的4参数拟合方程，采用非线性回归分析进行拟合。数据表示为相对细胞活力相对于nM剂量的游离药物-连接体或偶联物的百分比％。
评价偶联物A结合和杀伤表达CD74的细胞的能力。测试的细胞株包括B-淋巴瘤、多发性骨髓瘤、和白血病细胞。对照包括非偶联的抗-CD74抗体。试验结果总结如下表：
Figure BDA0003557852990001451
Figure BDA0003557852990001461
尽管已根据各种实施例/实施方案对本发明要求保护的主题进行描述，本领域技术人员将领会在不脱离本发明精神的情况下，可对本发明进行各种修饰、替换、删减和改变。因此，本发明旨在将本发明所要求的主题范围仅限于下述权利要求，包括其等同的内容形式。

Claims (90)

1.式1000所示化合物：
Figure FDA0003557852980000011
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是-CH2-；
X是
Figure FDA0003557852980000012
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
各RT是在式1000主干上的或与EG连接的释放引发基团，其中每个RT均是可选的；
RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体，或RT1不存在；
HP是单键、或不存在，或HP是二价亲水基团；
HP1是单键、或不存在，或是二价亲水基团，或HP1是
Figure FDA0003557852980000013
其中RHP是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或是二价间隔基团；和
R是氢、末端偶联基团、或末端偶联基团的二价残基；
或者，可选择地，W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成-H。
2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I所示结构：
Figure FDA0003557852980000014
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中EG是消除基团；或者，可选择地，W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成-H。
3.根据权利要求1所述的化合物，其具有式1001或1002所示结构：
Figure FDA0003557852980000021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中：
RT1是释放引发基团或可分裂的连接体；
RT是与EG连接的释放引发基团；和RT是可选的；
R是氢或末端偶联基团。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式II-IX任一所示结构：
Figure FDA0003557852980000022
Figure FDA0003557852980000031
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中，一个RT是可选的。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其具有式XI-XVI任一所示结构：
Figure FDA0003557852980000032
Figure FDA0003557852980000041
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体；其中m是从1至12的整数，和一个RT是可选的。
6.根据权利要求1或3所述的化合物，其具有以下任一通式所示结构：
Figure FDA0003557852980000042
Figure FDA0003557852980000051
Figure FDA0003557852980000061
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体。
7.根据权利要求1或3所述的化合物，其具有以下任一通式所示结构：
Figure FDA0003557852980000062
Figure FDA0003557852980000071
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体；其中m是从1至12的整数，和RT是可选的。
8.根据权利要求1-7任一项所述的化合物，其中R包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、对乙酰基-苯丙氨酸残基、羟基胺、马来酰亚胺、羰酰卤代烷、芳基硫化物、或叠氮化物。
9.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中R是：
Figure FDA0003557852980000081
Figure FDA0003557852980000082
-N3，或-SH；
其中R201是低级烷基。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中R201是甲基、乙基、或丙基。
11.根据权利要求9或10所述的化合物，其中R201是甲基。
12.根据权利要求1-11任一项所述的化合物，其中EG包含亚苯基、亚羧基、氨基、或其组合。
13.根据权利要求1-12任一项所述的化合物，其中EG是：
Figure FDA0003557852980000083
其中各REG分别独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、-NO2、-CN、氟、溴、氯、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-、和二烷基氨基-C(O)-组成的组。
14.根据权利要求1-13任一项所述的化合物，其中RT包含天然或非天然氨基酸残基，或糖的残基。
15.根据权利要求1-14任一项所述的化合物，其中RT是：
Figure FDA0003557852980000091
16.根据权利要求1、3、和6-15任一项所述的化合物，其中RT1是释放引发基团，或可分裂的连接体。
17.根据权利要求1、3、和6-16任一项所述的化合物，其中RT1不存在；或RT1是
Figure FDA0003557852980000092
缬氨酸-丙氨酸；缬氨酸-谷氨酸；丙氨酸-苯丙氨酸；苯丙氨酸-赖氨酸；苯丙氨酸-高赖氨酸；甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸；
Figure FDA0003557852980000093
其中aa是天然或非天然氨基酸残基；或
Figure FDA0003557852980000094
其中所述
Figure FDA0003557852980000095
环是4-7个原子组成的、含有3-6个碳原子的杂环。
18.根据权利要求1-17任一项所述的化合物，其中SG包含C1-C10亚烷基、C4-C6亚烷基、-C(O)-、或其组合。
19.根据权利要求1-18任一项所述的化合物，其中SG是：
Figure FDA0003557852980000096
20.根据权利要求1、2、4、5、和8-19任一项所述的化合物，其中HP包含聚乙二醇。
21.根据权利要求1、2、4、5、和8-20任一项所述的化合物，其中HP是：
Figure FDA0003557852980000097
其中m从1至12的整数。
22.根据权利要求1、3、和6-19任一项所述的化合物，其中HP1不存在，或HP1是
Figure FDA0003557852980000101
其中RHP是
Figure FDA0003557852980000102
其中R是-H或-CH3，和m是从1至12的整数，或RHP是–C1-C6-亚烷基-S(O)3 -。
23.根据权利要求1-22任一项所述的化合物，其中W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在、或各自独立地包含–C(O)–、–O–、–C(O)NH–、-C(O)NH-烷基–、–OC(O)NH–、–SC(O)NH–、–NH–、–NH-烷基–、-N(CH3)CH2CH2N(CH3)–、–S–、–S-S–、–OCH2CH2O–、或其组合。
24.根据权利要求1-23任一项所述的化合物，其中W1、W2、W3、W4和W5各自独立地不存在、或各自独立地为键；或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体。
25.根据权利要求1-3、5、和7-24任一项所述的化合物，其中Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。
26.根据权利要求1-3、5、和7-25任一项所述的化合物，其中Ar是二价的6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。
27.根据权利要求1-3、5、和7-24任一项所述的化合物，其中Ar是二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环。
28.根据权利要求1-3、5、7-24和27任一项所述的化合物，其中Ar是二价的9个原子组成的、取代或未取代的稠合双环杂芳基环。
29.根据权利要求1-3、5、和7-24任一项所述的化合物，其中Ar是以下任一结构：
Figure FDA0003557852980000103
30.根据权利要求1-3、5、和7-29任一项所述的化合物，其中L不存在。
31.根据权利要求1-3、5、和7-29任一项所述的化合物，其中L是–CH2–。
32.根据权利要求1、2、和4任一项所述的化合物，其中W1、W2、W3、W4、W5、EG、RT、HP、SG、和R合并形成–H。
33.根据权利要求1所述的化合物，其具有以下任一结构式：
Figure FDA0003557852980000111
Figure FDA0003557852980000121
Figure FDA0003557852980000131
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体。
34.偶联物，所述偶联物包含与第二化合物连接的权利要求1-33任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体。
35.根据权利要求34所述的偶联物，其具有式(E1)所示结构：
Figure FDA0003557852980000132
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
COMP是第二化合物的残基；
Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环，或二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环；
L不存在或L是–CH2–；
X是
Figure FDA0003557852980000133
W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地为二价连接基团；
EG不存在，或EG是消除基团；
各RT是在式E1主干上的或与EG连接的释放引发基团，其中RT是可选的；
RT1是释放引发基团、或可分裂的连接体，或RT1不存在；
HP是单键、或不存在，或HP是二价亲水基团；
HP1是单键、或不存在，或HP1是二价亲水基团、或
Figure FDA0003557852980000141
其中RHP是一价亲水基团；
SG是单键、或不存在，或SG是二价间隔基团；和
R是末端偶联基团的二价残基。
36.根据权利要求35所述的偶联物，其具有式C1所示结构：
Figure FDA0003557852980000142
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中EG是消除基团；和各RT分别是释放引发基团，和一个RT是可选的。
37.根据权利要求35或36所述的偶联物，其具有式C2-C9任一所示结构：
Figure FDA0003557852980000143
Figure FDA0003557852980000151
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中，一个RT是可选的。
38.根据权利要求35或36所述的偶联物，其具有式C10-C13任一所示结构：
Figure FDA0003557852980000152
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中m是从1至12的整数，和一个RT是可选的。
39.根据权利要求35或36所述的偶联物，其具有式C14-C17任一所示结构：
Figure FDA0003557852980000161
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中，一个RT是可选的。
40.根据权利要求35所述的偶联物，其具有式(F1)或(G1)所示结构：
Figure FDA0003557852980000162
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或互变异构体，其中：
RT1是释放引发基团、或可分裂的连接体基团；和
RT是与EG连接的释放引发基团；其中RT是可选的。
41.根据权利要求35或40所述的偶联物，其具有以下任一通式所示结构：
Figure FDA0003557852980000171
Figure FDA0003557852980000181
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中RT是可选的。
42.根据权利要求35或40所述的偶联物，其具有以下任一通式所示结构：
Figure FDA0003557852980000191
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中m是从1至12的整数，和RT是可选的。
43.根据权利要求35或40所述的偶联物，其具有以下任一通式所示结构：
Figure FDA0003557852980000192
Figure FDA0003557852980000201
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或互变异构体，其中RT是可选的。
44.根据权利要求35-43任一项所述的偶联物，其中EG包含亚苯基、亚羧基、氨基、或其组合。
45.根据权利要求35-44任一项所述的偶联物，其中EG是：
Figure FDA0003557852980000211
其中各REG分别独立地选自由氢、烷基、联苯基、-CF3、-NO2、-CN、氟、溴、氯、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、烷基-C(O)O-、烷氨基-C(O)-、和二烷基氨基-C(O)-组成的组。
46.根据权利要求35-45任一项所述的偶联物，其中RT包含天然或非天然氨基酸残基、或糖的残基。
47.根据权利要求35-46任一项所述的偶联物，其中RT是：
Figure FDA0003557852980000212
48.根据权利要求35和40-47任一项所述的偶联物，其中RT1不存在；或RT1是
Figure FDA0003557852980000213
缬氨酸-丙氨酸；缬氨酸-谷氨酸；丙氨酸-苯丙氨酸；苯丙氨酸-赖氨酸；苯丙氨酸-高赖氨酸；甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸；
Figure FDA0003557852980000221
其中aa是天然或非天然氨基酸残基；或
Figure FDA0003557852980000222
其中所述
Figure FDA0003557852980000223
环是4-7个原子组成的、含有3-6个碳原子的杂环。
49.根据权利要求35-48任一项所述的偶联物，其中SG包含C1-C10亚烷基、C4-C6亚烷基、-C(O)-、或其组合。
50.根据权利要求35-49任一项所述的偶联物，其中SG是：
Figure FDA0003557852980000224
51.根据权利要求35-39和44-50任一项所述的偶联物，其中HP包含聚乙二醇。
52.根据权利要求35-39和44-51任一项所述的偶联物，其中HP是：
Figure FDA0003557852980000225
其中m是从1至12的整数。
53.根据权利要求35、40-43、和44-50任一项所述的偶联物，其中HP1不存在，或HP1是
Figure FDA0003557852980000226
其中RHP是
Figure FDA0003557852980000227
其中R是-H或-CH3，和m是从1至12的整数，或RHP是–C1-C6-亚烷基-S(O)3 -。
54.根据权利要求35-53任一项所述的偶联物，其中W1、W2、W3、W4和W5各自独立地为单键、或不存在，或各自独立地包含-C(O)-、-O-、-C(O)NH-、-C(O)NH-烷基-、-OC(O)NH-、-SC(O)NH-、-NH-、-NH-烷基-、-N(CH3)CH2CH2N(CH3)-、-S-、-S-S-、-OCH2CH2O-、或其组合。
55.根据权利要求35、36、38-40、和42-54任一项所述的偶联物，其中Ar是二价的5或6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。
56.根据权利要求35、36、38-40、和42-55任一项所述的偶联物，其中Ar是二价的6个原子组成的、取代或未取代的单环芳基或杂芳基环。
57.根据权利要求35、36、38-40、和42-54任一项所述的偶联物，其中Ar是二价的8、9或10个原子组成的、取代或未取代的稠合双环芳基或杂芳基环。
58.根据权利要求35、36、38-40、42-54、和57任一项所述的偶联物，其中Ar是二价的9个原子组成的、取代或未取代的稠合双环杂芳基环。
59.根据权利要求35、36、38-40、和42-54任一项所述的偶联物，其中Ar是以下任一结构：
Figure FDA0003557852980000231
60.根据权利要求35、36、38-40、和42-59任一项所述的偶联物，其中L不存在。
61.根据权利要求36、38-40、和42-59任一项所述的偶联物，其中L是-CH2-。
62.根据权利要求35-61任一项所述的偶联物，其中R是：
Figure FDA0003557852980000232
63.根据权利要求35-62任一项所述的偶联物，其中COMP是多肽残基。
64.根据权利要求35-62任一项所述的偶联物，其中COMP是抗体残基。
65.根据权利要求35-62任一项所述的偶联物，其中COMP是抗体链残基。
66.药物组合物，其包含权利要求1-65任一项所述的化合物或抗体；和药学上可接受的辅料、载体、或稀释剂。
67.用于治疗的权利要求1-66任一项所述的化合物、偶联物、或药物组合物。
68.在有需要的受试者中抑制微管蛋白聚合的方法，所述方法包含对所述受试者施用有效量的权利要求1-66任一项所述的化合物、偶联物、或药物组合物。
69.在有需要的受试者中治疗细胞增殖或癌症的方法，所述方法包含对所述受试者施用有效量的权利要求1-66任一项所述的化合物、偶联物、或药物组合物。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述癌症是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、铂类耐药的卵巢癌、卵巢腺癌、子宫内膜癌、乳腺癌、Her2过表达的乳腺癌、三阴性乳腺癌、淋巴瘤，大细胞淋巴瘤；弥漫性混合组织细胞和淋巴细胞性淋巴瘤；滤泡性B细胞淋巴瘤、结肠癌、结肠肿瘤、结肠腺癌、结直肠腺癌、黑素瘤、前列腺癌、或多发性骨髓瘤。
71.生产偶联物的方法，包括在适宜使权利要求1-34任一项所述的化合物与所述第二化合物进行偶联的条件下，使权利要求1-34任一项所述的化合物与第二化合物接触；其中所述第二化合物包含炔烃、张紧的烯烃、四嗪、硫醇、马来酰亚胺、羰基、羟基胺、或叠氮化物。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含四嗪；和R包含张紧的烯烃。
73.根据权利要求71或72所述的方法，其中R是：
Figure FDA0003557852980000241
74.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含叠氮化物；和R包含炔烃。
75.根据权利要求71或74所述的方法，其中R是：
Figure FDA0003557852980000242
76.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含炔烃；和R包含叠氮化物。
77.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含张紧的烯烃；和R包含四嗪。
78.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含硫醇；和R包含马来酰亚胺。
79.根据权利要求71或78所述的方法，其中R是：
Figure FDA0003557852980000251
80.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含马来酰亚胺；和R包含硫醇。
81.根据权利要求71或80所述的方法，其中所述第二化合物包含：
Figure FDA0003557852980000252
82.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含羰基；和R包含羟基胺。
83.根据权利要求71或82所述的方法，其中R是：
Figure FDA0003557852980000253
84.根据权利要求71、82或83所述的方法，其中所述第二化合物包含：
Figure FDA0003557852980000254
85.根据权利要求71所述的方法，其中所述第二化合物包含羟基胺；和R包含羰基。
86.根据权利要求71或85所述的方法，其中R是：
Figure FDA0003557852980000261
87.根据权利要求71、85、或86所述的方法，其中所述第二化合物包含：
Figure FDA0003557852980000262
88.根据权利要求71-87任一项所述的方法，其中所述第二化合物是多肽。
89.根据权利要求71-87任一项所述的方法，其中所述第二化合物是抗体。
90.根据权利要求71-87任一项所述的方法，其中所述第二化合物是抗体链。
CN202210281131.6A 2015-01-30 2016-01-29 用于偶联和治疗的哈米特林（hemiasterlin）衍生物 Pending CN114716506A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562110390P 2015-01-30 2015-01-30
US62/110390 2015-01-30
PCT/US2016/015844 WO2016123582A1 (en) 2015-01-30 2016-01-29 Hemiasterlin derivatives for conjugation and therapy
CN201680007822.XA CN107428801B (zh) 2015-01-30 2016-01-29 用于偶联和治疗的哈米特林(hemiasterlin)衍生物

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680007822.XA Division CN107428801B (zh) 2015-01-30 2016-01-29 用于偶联和治疗的哈米特林(hemiasterlin)衍生物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114716506A true CN114716506A (zh) 2022-07-08

Family

ID=55398448

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680007822.XA Active CN107428801B (zh) 2015-01-30 2016-01-29 用于偶联和治疗的哈米特林(hemiasterlin)衍生物
CN202210281131.6A Pending CN114716506A (zh) 2015-01-30 2016-01-29 用于偶联和治疗的哈米特林（hemiasterlin）衍生物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680007822.XA Active CN107428801B (zh) 2015-01-30 2016-01-29 用于偶联和治疗的哈米特林(hemiasterlin)衍生物

Country Status (18)

Country Link
US (3) US10844090B2 (zh)
EP (2) EP3892305A1 (zh)
JP (2) JP6883518B2 (zh)
KR (1) KR102587808B1 (zh)
CN (2) CN107428801B (zh)
AU (1) AU2016211165B2 (zh)
CA (1) CA2971766A1 (zh)
DK (1) DK3250237T3 (zh)
ES (1) ES2878023T3 (zh)
HR (1) HRP20211164T1 (zh)
HU (1) HUE055644T2 (zh)
IL (1) IL253712B (zh)
LT (1) LT3250237T (zh)
PL (1) PL3250237T3 (zh)
PT (1) PT3250237T (zh)
SG (1) SG11201704976VA (zh)
SI (1) SI3250237T1 (zh)
WO (1) WO2016123582A1 (zh)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
ES2865473T3 (es) 2013-07-10 2021-10-15 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
KR101628872B1 (ko) 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
WO2017051254A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-egfr antibody drug conjugates
WO2017051249A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
EP3380126A4 (en) 2015-11-25 2019-07-24 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATES COMPRISING BRANCHED LINKS AND RELATED METHODS
US11413353B2 (en) 2015-11-25 2022-08-16 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
CA3006247A1 (en) 2015-11-25 2017-06-01 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising peptide groups and methods related thereto
EP3407917A1 (en) * 2016-01-27 2018-12-05 Sutro Biopharma, Inc. Anti-cd74 antibody conjugates, compositions comprising anti-cd74 antibody conjugates and methods of using anti-cd74 antibody conjugates
JP2020507584A (ja) * 2017-02-10 2020-03-12 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ イリノイＴｈｅ Ｂｏａｒｄ Ｏｆ Ｔｒｕｓｔｅｅｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｉｌｌｉｎｏｉｓ 癌選択的標識および標的化のためのトリガー活性化可能な糖コンジュゲート
CA3058360A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same
DK3666787T3 (da) * 2017-08-10 2024-03-11 Sumitomo Pharma Co Ltd Antistoflægemiddelkonjugater som inkluderer hemiasterlinderivat
EP4321523A3 (en) 2017-08-10 2024-04-24 Sumitomo Pharma Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and antibody-drug conjugates including same
US10596270B2 (en) 2017-09-18 2020-03-24 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor antibody conjugates, compositions comprising anti-folate receptor antibody conjugates, and methods of making and using anti-folate receptor antibody conjugates
MX2020011554A (es) 2018-05-09 2020-11-24 Legochem Biosciences Inc Composiciones y metodos relacionados con conjugados de farmacos de anticuerpo anti grupo de diferenciacion 19 (cd19).
JP2022500454A (ja) 2018-09-17 2022-01-04 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド 抗葉酸受容体抗体コンジュゲートによる併用療法
CN113412271A (zh) * 2019-02-13 2021-09-17 大日本住友制药株式会社 具有半胱氨酸残基的哈米特林衍生物
ES2930295T3 (es) 2019-03-29 2022-12-09 Medimmune Ltd Compuestos y conjugados de los mismos
US20220362394A1 (en) 2019-05-03 2022-11-17 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
EP3980080A1 (en) * 2019-06-10 2022-04-13 Sutro Biopharma, Inc. Immunomodulator antibody drug conjugates and uses thereof
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
CN111117966A (zh) * 2020-03-02 2020-05-08 南通大学 一种利用乳酸的体外细胞培养方法
KR20230004682A (ko) 2020-04-22 2023-01-06 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 인터류킨-2 수용체 베타 감마c 이량체에 대해 편향되고 비펩티드성 수용성 중합체에 접합된 인간 인터류킨-2 접합체
AR125490A1 (es) 2021-04-30 2023-07-19 Celgene Corp Terapias de combinación que utilizan un anticuerpo anti-bcma conjugado a fármaco (adc) en combinación con un inhibidor de gamma secretasa (gsi)
EP4340876A1 (en) 2021-05-19 2024-03-27 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor conjugate combination therapy with bevacizumab
WO2023102077A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Sutro Biopharma, Inc. Anti-folate receptor conjugate cancer therapy
US20240091365A1 (en) * 2022-06-27 2024-03-21 Sutro Biopharma, Inc. Beta-glucuronide linker-payloads, protein conjugates thereof, and methods thereof
US20240058465A1 (en) 2022-06-30 2024-02-22 Sutro Biopharma, Inc. Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5661175A (en) 1995-06-20 1997-08-26 Kashman; Yoel Hemiasterlin and geodiamolide TA
CA2225325A1 (en) * 1997-12-19 1999-06-19 The University Of British Columbia Hemiasterlin analogs
EP1531846A4 (en) 2002-02-27 2006-04-19 Us Gov Health & Human Serv CONJUGATES OF LIGAND, LINK AND CYTOTOXIC AGENS, AND RELATED COMPOSITIONS AND USE PROCESSES
NZ535139A (en) * 2002-03-22 2007-07-27 Eisai Co Ltd Hemiasterlin derivatives and uses thereof in the treatment of cancer
US7064211B2 (en) * 2002-03-22 2006-06-20 Eisai Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and uses thereof
US20040121965A1 (en) 2002-09-20 2004-06-24 Wyeth Holdings Corporation Method of treating resistant tumors
US7390910B2 (en) 2003-08-08 2008-06-24 Wyeth Compounds for treating tumors
PT2968440T (pt) 2013-03-15 2019-07-31 Zymeworks Inc Compostos citotóxicos e antimitóticos e métodos de utilização dos mesmos
MX2016008448A (es) 2013-12-27 2017-01-09 Zymeworks Inc Conjugados de var2csa-farmaco.

Also Published As

Publication number Publication date
EP3892305A1 (en) 2021-10-13
AU2016211165B2 (en) 2021-06-24
US20210261611A1 (en) 2021-08-26
AU2016211165A1 (en) 2017-06-29
JP2018508490A (ja) 2018-03-29
KR102587808B1 (ko) 2023-10-10
JP6883518B2 (ja) 2021-06-09
AU2016211165A2 (en) 2019-12-12
EP3250237A1 (en) 2017-12-06
PT3250237T (pt) 2021-06-30
CN107428801B (zh) 2022-12-20
PL3250237T3 (pl) 2021-12-13
IL253712B (en) 2021-12-01
IL253712A0 (en) 2017-09-28
BR112017016122A2 (pt) 2018-04-17
US10844090B2 (en) 2020-11-24
LT3250237T (lt) 2021-09-27
SG11201704976VA (en) 2017-07-28
JP2021138706A (ja) 2021-09-16
US11866515B2 (en) 2024-01-09
SI3250237T1 (sl) 2021-11-30
KR20170106472A (ko) 2017-09-20
DK3250237T3 (da) 2021-07-26
US20160257709A1 (en) 2016-09-08
HRP20211164T1 (hr) 2021-10-29
HUE055644T2 (hu) 2022-03-28
US20210198314A1 (en) 2021-07-01
EP3250237B1 (en) 2021-05-26
CA2971766A1 (en) 2016-08-04
CN107428801A (zh) 2017-12-01
WO2016123582A1 (en) 2016-08-04
ES2878023T3 (es) 2021-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107428801B (zh) 用于偶联和治疗的哈米特林(hemiasterlin)衍生物
JP2018508490A5 (zh)
CN105121421B (zh) 司普力西欧他汀类似物
CN104619351B (zh) 抗cd70抗体药物结合物
KR20230022211A (ko) 고안정성 친수성 연결 단위를 갖는 캄프토테신 약물 및 이의 접합체
CN107231804A (zh) 亚杂芳基桥连苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法
CN107428780A (zh) 苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法
KR20170129828A (ko) Cti 약물작용발생단을 함유하는 이관능성 세포독성제
CA3168882A1 (en) Camptothecin derivatives and conjugates thereof
CN115209922A (zh) 缀合物及其用途
AU2018211561B2 (en) Calicheamicin derivatives and antibody drug conjugates thereof
AU2016226083A1 (en) Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
CN107660208B (zh) 包含cti药效团的双功能细胞毒性剂
CN114728075A (zh) 与分子缀合相关的组合物和方法
BR112017016122B1 (pt) Composto, conjugado, composição farmacêutica, uso de um composto, conjugado ou composição farmacêutica, e, método para produção de um conjugado
CN117715913A (zh) 免疫缀合物和方法
CN114409562A (zh) 一种ca4衍生物及其配体-药物偶联物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination