BR112017016122B1 - Composto, conjugado, composição farmacêutica, uso de um composto, conjugado ou composição farmacêutica, e, método para produção de um conjugado - Google Patents

Abstract

COMPOSTO, CONJUGADO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DE UM COMPOSTO, CONJUGADO OU COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, MÉTODO PARA PRODUÇÃO DE UM CONJUGADO. São aqui fornecidos derivados de hemiasterlina, conjugados dos mesmos, composições compreendendo os derivados ou conjugados dos mesmos, métodos para produção dos derivados e conjugados dos mesmos, e métodos para uso dos derivados, conjugados, e composições para o tratamento de proliferação celular. Os derivados, conjugados, e composições são usados em métodos para tratamento e prevenção de proliferação celular e câncer, métodos para detecção de proliferação celular e câncer, e métodos para diagnóstico de proliferação celular e câncer. Em uma modalidade, os derivados de hemiasterlina são de acordo com a Fórmula 1000: (1000) ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou tautômero do mesmo, em que Ar, L, W1, W4, W5, SG, e R são da maneira aqui descrita.

Description

CAMPO

[0001] São aqui fornecidos derivados de hemiasterlina, conjugados dos mesmos, composições compreendendo os derivados ou conjugados dos mesmos, métodos para produção dos derivados e conjugados dos mesmos, e métodos para uso dos derivados, conjugados, e composições para o tratamento de proliferação celular. Os derivados, conjugados, e composições são usados em métodos para tratamento e prevenção de proliferação celular e câncer, métodos para detecção de proliferação celular e câncer, e métodos para diagnóstico de proliferação celular e câncer.

FUNDAMENTOS

[0002] Hemiasterlinas são uma classe de tripeptídeos modificados a partir do produto de hemiasterlina original natural. Hemiasterlina é isolada de esponjas marinhas Cymbastela sp., Hemiasterella minor, Siphonochalina sp., e Auletta sp. (Talpir et al., Tetrahedron Letters, vol. 35, no. 25, pp. 44534456, 1994).

[0003] Hemiasterlinas são pseudopeptídeos que são inibidores de polimerização de tubulina, compartilhando um mecanismo de ação antimitótico com dolastatinas e criptoficinas. A ligação não competitiva ao sítio de vinblastina na tubulina foi demonstrada. Hemiasterlinas são em geral substratos de glicoproteína com pouca permeabilidade (pGP), o que torna a mesma eficiente contra tumores que superexpressam pGP como um mecanismo de resistência. (Loganzo et al., Cancer Research, vol 63, pp. 1838-1845, 15 de abril de 2003).

[004] A modificação extensiva de hemiasterlina natural demonstrou características chaves que contribuem para a atividade nanomolar desta classe contra um ampla variedade de linhagens celulares de tumor. Dois derivados, E7974, um derivado de piperidina N-terminal desenvolvido em Eisai, e HTI- 286, uma fenila N-terminal desenvolvida em Wyeth, foram inseridos em testes de Fase I. Os resultados promissores foram apresentados em 2007 para E7974. (Madajewicz et al., "A phase I trial of E7974 administered in days 1 and 15 of a 28-day cycle in patients with solid malignancies," apresentado em American Society of Clinical Oncology Annual Meeting; 1-5 de junho de 2007; Chicago, Ill.; e Zojwalla et al., "A phase I trial of E7974 administered in days 1, 8, e 15 of a 28-day cycle in patients with solid malignancies," apresentado em American Society of Clinical Oncology Annual Meeting; 1-5 de junho de 2007; Chicago, Ill; ambos resumidos em Rocha-Lima et al., Cancer, 1 de setembro de 2012 pp. 4262-4270). Entretanto, nenhum resultado foi relatado para HTI-286 até o momento.

[005] Além disso, conjugação de HTI-286 na terminação C em um decapeptídeo gastrina VLALAEEEAYGWNleDF-NH2 para alvejar tumor é descrita em Tarsova et al., Publicação do pedido de patente dos Estados Unidos US 2005/0171014 A1. A atividade relatada, entretanto, foi muito fraca.

SUMÁRIO

[006] São aqui fornecidos derivados de hemiasterlina, conjugados dos mesmos, composições compreendendo os derivados ou conjugados dos mesmos, métodos para produção dos derivados e conjugados dos mesmos, e métodos para uso dos derivados, conjugados, e composições para o tratamento de proliferação celular. Os derivados, conjugados, e composições são usados em métodos para tratamento e prevenção de proliferação celular e câncer, métodos para detecção de proliferação celular e câncer, e métodos para diagnóstico de proliferação celular e câncer.

[007] Em um aspecto, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula 1000:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é ausente ou é um grupo eliminador; cada RT é um grupo de gatilho de liberação, na cadeia principal da Fórmula 1000 ou ligado a EG, em que cada RT é opcional; RT1 é um grupo de gatilho de liberação, ou um ligador clivável, ou RT1 é ausente; HP é uma ligação simples, ausente, ou um grupo hidrofílico divalente; HP1 é uma ligação simples, ausente, um grupo hidrofílico divalente, ou onde RHP é um grupo hidrofílico monovalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é hidrogênio, um grupo de conjugação terminal, ou um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal; ou, alternativamente, W1, W2, W3, W4, W5, EG, RT, HP, SG, e R combinam para formar -H.

[008] Em um aspecto, é aqui fornecido um conjugado compreendendo um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b) ligado a um segundo composto.

[009] Em um aspecto, é aqui fornecido uma composição farmacêutica compreendendo: um composto (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb- 2, 101-111b, ou 1-8b) ou conjugado (por exemplo, um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b) da maneira aqui descrita; e um excipiente, carreador, ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[0010] Em um aspecto, é aqui fornecido um método para inibição de polimerização de tubulina em um sujeito que precisa do mesmo, compreendendo administrar uma quantidade eficiente de um composto (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b), conjugado (por exemplo, um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b), ou composição compreendendo um composto ou conjugado, da maneira aqui descrita, a um sujeito.

[0011] Em um aspecto, é aqui fornecido um método para tratamento de proliferação celular ou câncer em um sujeito que precisa do mesmo, compreendendo administrar uma quantidade eficiente de um composto (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b), conjugado (por exemplo, um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b), ou composição compreendendo um composto ou conjugado, da maneira aqui descrita, a um sujeito.

[0012] Em um aspecto, é aqui fornecido um método para produção de um conjugado, compreendendo colocar um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 10001000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2 ou 101-111b) em contato com um segundo composto em condições adequadas para conjugar o segundo composto com o composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 10021002b, e I-XIXb-2 ou 101-111b); em que o segundo composto compreende um aminoácido modificado compreendendo um alcino, alceno tensionado, tetrazina, tiol, maleimida, carbonila, oxiamina ou azida.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0013] A figura 1 fornece resultados de um ensaio de morte celular descrito aqui com mais detalhes. Composto 1 Racêmico [R/S,S,S] é avaliado como um conjugado na cadeia pesada de trastuzumab em F404 e também na cadeia leve em S7. Todos os outros conjugados na figura 1 estão na cadeia pesada de trastuzumab em F404. A viabilidade celular relativa de células SKBR3 é representada graficamente contra concentração para trastuzumab (exes), trastuzumab F404 [S,S,S] Composto 1 conjugado (quadrados preenchidos), trastuzumab F404 racêmico [R/S,S,S] Composto 1 conjugado (quadrados divididos), trastuzumab S7 racêmico [R/S,S,S] Composto 1 conjugado (círculos divididos), e um trastuzumab auristatina (MMAF) conjugado (triângulos abertos).

[0014] A figura 2a fornece resultados de um ensaio de morte celular descrito aqui com mais detalhes. Na figura 2a a viabilidade celular relativa é representada graficamente contra concentração de [S,S,S] Composto 1 (quadrados preenchidos) e [R,S,S] Composto 1 (quadrados abertos) para células SKBR3 em painel (a), células MDA-MB-453 em painel (b), e células MDA-MB-468 em painel (c).

[0015] A figura 2b fornece resultados de um ensaio de morte celular descrito aqui com mais detalhes. Na figura 2b a viabilidade celular relativa é representada graficamente contra concentração de [S,S,S] Composto 1 (quadrados preenchidos) e [R,S,S] Composto 1(quadrados abertos) para células HTC116 em painel (a), células HT29 em painel (b), e células SKCO1 em painel (c).

[0016] A figura 2c fornece resultados de um ensaio de morte celular descrito aqui com mais detalhes. Na figura 2c a viabilidade celular relativa é representada graficamente contra concentração de [S,S,S] Composto 1 (quadrados preenchidos) e [R,S,S] Composto 1 (quadrados abertos) para células de MDA-MB-435 em painel (a), células SUDHL6 em painel (b), e células OMP2 em painel (c).

DESCRIÇÃO DE MODALIDADES EXEMPLARES

[0017] São aqui fornecidos compostos (por exemplo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb- 2, 101-111b, ou 1-8b), conjugados dos mesmos (por exemplo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b), composições compreendendo os compostos ou conjugados dos mesmos, métodos para produção dos compostos e conjugados dos mesmos, e métodos para uso dos compostos, conjugados, e composições. Os compostos, conjugados, e composições são usados em métodos para tratamento e prevenção de proliferação celular e câncer, métodos para detecção de proliferação celular e câncer, e métodos para diagnóstico de proliferação celular e câncer.

Definições

[0018] Quando se refere aos compostos aqui fornecidos, os termos a seguir apresentam os seguintes significados, a menos que de outra forma indicada. A menos que de outra forma definida, todos os termos técnicos e científicos aqui usados apresentam o mesmo significado, como é comumente entendido pelos versados na técnica. No evento que existe uma pluralidade de definições para um termo aqui, aqueles nesta seção prevalecem, a menos que de outra forma declarada. A menos que de outra forma especificada, onde um termo é definido como sendo não substituído ou substituído, os grupos na lista de substituintes são não substituídos. Por exemplo, um grupo alquila pode ser substituído por um grupo cicloalquila e o grupo cicloalquila não é adicionalmente substituído.

[0019] O termo “alquila”, da maneira aqui usada, a menos que de outra forma especificada, se refere a um hidrocarboneto ramificado ou reto saturado que pode ser substituído por grupos halo. Em certas modalidades, o grupo alquila é um hidrocarboneto primário, secundário ou terciário. Em certas modalidades, o grupo alquila inclui um a dez átomos de carbono, isto é, alquila C1 a C10. Em certas modalidades, o grupo alquila é, por exemplo, metila, CF3, CCl3, CFCl2, CF2Cl, etila, CH2CF3, CF2CF3, propila, isopropila, butila, isobutila, secbutila, t-butila, pentila, isopentila, neopentila, hexila, isoexila, 3-metilpentila, 2,2-dimetilbutila, ou 2,3-dimetilbutila. O termo inclui tanto grupos alquila substituídas quanto não substituídos, incluindo grupos alquila halogenados. Em certas modalidades, o grupo alquila é um grupo alquila fluorado. Em certas modalidades, o grupo alquila pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, cicloalquila, aralquila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário, da maneira conhecida pelos versados na técnica, por exemplo, da maneira preceituada em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Segunda Edição, 1991, aqui incorporado pela referência.

[0020] O termo “alquila inferior”, da maneira aqui usada, e a menos que de outra forma especificada, se refere a um hidrocarboneto ramificado ou reto saturado com um a seis átomos de carbono, isto é, alquila C1 a C6. Em certas modalidades, o grupo alquila inferior é um hidrocarboneto primário, secundário ou terciário. O termo inclui tanto frações substituídas quanto não substituídas.

[0021] O termo “alquila superior”, da maneira aqui usada, e a menos que de outra forma especificada, se refere a um hidrocarboneto ramificado ou reto saturado com sete a trinta átomos de carbono, isto é, alquila C7 a C30. Em certas modalidades, o grupo alquila superior é um hidrocarboneto primário, secundário ou terciário. O termo inclui tanto frações substituídas quanto não substituídas.

[0022] O termo “alquilcarbonila” se refere ao grupo -C(O)(alquila), onde alquila é da maneira aqui definida.

[0023] O termo “alquilsulfanila” se refere ao grupo -S(alquila), onde alquila é da maneira aqui definida.

[0024] O termo “carboxileno” se refere a um -C(O)O- ou -OC(O)-grupo.

[0025] O termo “cicloalquilsulfanila” se refere ao grupo - S(cicloalquila), onde cicloalquila é da maneira aqui definida.

[0026] O termo “arilsulfanila” se refere ao grupo -S(arila), onde arila é da maneira aqui definida.

[0027] O termo “alquilsulfonila” se refere ao grupo -S(O)2(alquila), onde alquila é da maneira aqui definida.

[0028] O termo “cicloalquilsulfonila” se refere ao grupo - S(O)2(cicloalquila), onde cicloalquila é da maneira aqui definida.

[0029] O termo “arilsulfonila” se refere ao grupo -S(O)2(arila), onde arila é da maneira aqui definida.

[0030] O termo “cicloalquila”, da maneira aqui usada, a menos que de outra forma especificada, se refere a um hidrocarboneto monocíclico ou policíclico saturado. Em certas modalidades, cicloalquila inclui sistemas de anel fundido, ligado e em espiral. Em certas modalidades, o grupo cicloalquila inclui três a dez átomos de carbono, isto é, cicloalquila C3 a C10. Em algumas modalidades, A cicloalquila apresenta de 3 a 15 (C3-15), de 3 a 10 (C3-10), ou de 3 a 7 (C3-7) átomos de carbono. Em certas modalidades, o grupo cicloalquila é, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloexilmetila, cicloeptila, biciclo[2.1.1]hexila, biciclo[2.2.1]heptila, decalinila ou adamantila. O termo inclui tanto grupos cicloalquila substituídas quanto não substituídos, incluindo grupos cicloalquila halogenados. Em certas modalidades, o grupo cicloalquila é um grupo cicloalquila fluorado. Em certas modalidades, o grupo cicloalquila pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0031] O termo “cicloalquilalquila” se refere a um grupo alquila da maneira aqui definida substituído por pelo menos um (em algumas modalidades, um ou dois) grupos cicloalquila da maneira aqui definida.

[0032] O termo “cicloalquilcarbonila” se refere ao grupo - C(O)(cicloalquila), onde cicloalquila é da maneira aqui definida.

[0033] “Alquileno” se refere aos grupos de hidrocarboneto alifáticos divalentes saturados, incluindo aqueles que apresentam de um a onze átomos de carbono, que podem ser de cadeia reta ou ramificada. Em certas modalidades, o grupo alquileno contém 1 a 10 átomos de carbono. O termo inclui tanto frações substituídas quanto não substituídas. Em certas modalidades, alquileno é, por exemplo, metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2- ), os isômeros de propileno (por exemplo, -CH2CH2CH2- e -CH(CH3)CH2-) e similares. O termo inclui grupos alquileno halogenados. Em certas modalidades, o grupo alquileno é um grupo alquileno fluorado. Em certas modalidades, o grupo alquileno pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alquilaril, alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, e fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0034] “Alquenila” se refere aos grupos de hidrocarboneto monovalentes olefinicamente insaturados, em certas modalidades, com até cerca de 11 átomos de carbono, incluindo de 2 a 8 átomos de carbono, ou de 2 a 6 átomos de carbono, que podem ser de cadeia reta ou ramificados, e com pelo menos 1, incluindo de 1 a 2, sítios de insaturação olefínica. O termo inclui tanto frações substituídas quanto não substituídas. Em certas modalidades, alquenila é, por exemplo, etenila (isto é, vinila, ou -CH=CH2), n-propenila (-CH2CH=CH2), isopropenila (-C(CH3)=CH2), e similares. O termo inclui grupos alquenila halogenados. Em certas modalidades, o grupo alquenila é um grupo alquenila fluorado. Em certas modalidades, o grupo alquenila pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0035] O termo “cicloalquenila”, da maneira aqui usada, a menos que de outra forma especificada, se refere a um hidrocarboneto cíclico insaturado (mas não aromático). Em certas modalidades, cicloalquenila se refere a sistemas de anel mono ou multicíclicos, que incluem pelo menos uma ligação dupla. Em certas modalidades, cicloalquila inclui sistemas de anel fundido, ligado e em espiral. Em certas modalidades, o grupo cicloalquila inclui pelo menos três átomos de carbono, incluindo três a dez átomos de carbono, isto é, cicloalquila C3 a C10. Em algumas modalidades, o cicloalquenila apresenta de 3 a 10 (C3-10), ou de 4 a 7 (C4-7) átomos de carbono. O termo inclui tanto grupos cicloalquenila substituídos quanto não substituídos, incluindo grupos cicloalquenila halogenados. Em certas modalidades, o grupo cicloalquenila é um grupo cicloalquenila fluorado. Em certas modalidades, o grupo cicloalquenila pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0036] “Alquenileno” se refere aos grupos de hidrocarboneto olefinicamente insaturados divalentes, em certas modalidades, com até cerca de 11 átomos de carbono ou de 2 a 6 átomos de carbono, que podem ser de cadeia reta ou ramificados, e com pelo menos 1 ou de 1 a 2 sítios de insaturação olefínica. Em certas modalidades, alquenileno é, por exemplo, etenileno (-CH=CH-), os isômeros de propenileno (por exemplo, - CH=CHCH2- e -C(CH3)=CH- e -CH=C(CH3)-) e similares. O termo inclui tanto grupos alquenileno substituídos quanto não substituídos, incluindo grupos alquenileno halogenados. Em certas modalidades, o grupo alquenileno é um grupo alquenileno fluorado. Exemplos não limitantes de frações com as quais o grupo alquenileno pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0037] “Alquinila” se refere a grupos de hidrocarboneto acetilenicamente insaturados, em certas modalidades, com até cerca de 11 átomos de carbono ou de 2 a 6 átomos de carbono, que podem ser de cadeia reta ou ramificados, e com pelo menos 1 ou de 1 a 2 sítios de insaturação de alquinila. Em certas modalidades, alquinila é, por exemplo, acetilênico, etinila (-C=CH), propargila (-CH2C=CH), e similares. O termo inclui tanto grupos alquinila substituídos quanto não substituídos, incluindo grupos alquinila halogenados. Em certas modalidades, o grupo alquinila é um grupo alquenila fluorado. Em certas modalidades, o grupo alquinila pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0038] O termo “arila”, da maneira aqui usada, e a menos que de outra forma especificada, se refere a um anel mono, bi ou tri-carbocíclico de seis a quatorze membros monovalentes, em que o anel monocíclico é aromático e pelo menos um dos anéis no anel bicíclico e tricíclico é aromático. O grupo arila pode ser ligado ao restante da molécula por meio de qualquer carbono no sistema de anel. Em uma modalidade, um grupo arila é um grupo arila C6-C12. Em uma modalidade, um grupo arila é fenila, indanila, ou naftila. O termo inclui tanto frações substituídas quanto não substituídas. Em certas modalidades, um grupo arila pode ser substituído por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, 4, ou 5) frações independentemente selecionadas do grupo halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), alquila, haloalquila, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, e fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário, da maneira conhecida pelos versados na técnica, por exemplo, da maneira preceituada em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley e Sons, Segunda Edição, 1991.

[0039] O termo “arilcarbonila” se refere ao grupo -C(O)(arila), onde arila é da maneira aqui definida.

[0040] O termo “arilóxi” se refere ao grupo -OU’ onde R‘ é arila, da maneira aqui definida.

[0041] O termo “ariloxialquila” se refere a um grupo alquila, da maneira aqui definida, substituído por pelo menos um (em algumas modalidades um ou dois) grupos arilóxi da maneira aqui definida.

[0042] “Alcóxi” e “alcoxila” se refere ao grupo -OR’ onde R’ é alquila ou cicloalquila da maneira aqui definida. Em certas modalidades, grupos alcóxi e alcoxil incluem, a título de exemplo, metóxi, etóxi, n-propóxi, isopropóxi, ciclopropóxi, n-butóxi, terc-butóxi, sec-butóxi, n-pentóxi, n- hexóxi, 1,2-dimetilbutóxi, e similares.

[0043] O termo “alcoxialquila” se refere a um grupo alquila substituído por pelo menos um (em um outro modalidade, um ou dois) grupos alcóxi da maneira aqui definida.

[0044] “Alcoxicarbonila” se refere a um radical -C(O)-alcóxi onde alcóxi é da maneira aqui definida.

[0045] “Alcoxicarbonilalquila” se refere a um grupo alquila substituído por pelo menos um, em um outro exemplo 1 ou 2, grupos alcoxicarbonila, da maneira aqui definida.

[0046] “Amino” se refere ao grupo -NR1'R2' ou -NR1'-, em que R1' e R2' são independentemente hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, heterocíclico, arila, ou heteroarila, cada um dos quais é da maneira aqui definida. Em uma modalidade, "Amino" é -NH2 ou -NH-.

[0047] “Carboxila” ou “carbóxi” se refere ao radical -C(O)OH.

[0048] O termo “alquilamino” ou “arilamino” se refere a um grupo amino que apresenta um substituinte de alquila ou arila, respectivamente, por exemplo, -NHCH3, e -NH(fenila). Em certas modalidades, o substituinte de alquila é alquila inferior. Em um outro modalidade, a alquila ou alquila inferior é não substituída.

[0049] O termo “dialquilamino” se refere a um grupo amino que apresenta dois substituintes de alquila, por exemplo, -N(CH3)2. Em certas modalidades, o substituinte de alquila é alquila inferior. Em uma outra modalidade, a alquila ou alquila inferior é não substituída.

[0050] O termo “diarilamino” se refere a um grupo amino que apresenta dois substituintes de arila.

[0051] “Halogênio” ou “halo” se refere a cloro, bromo, flúor, ou iodo.

[0052] “Tioalcóxi” se refere ao grupo -SR’, onde R‘ é alquila ou cicloalquila.

[0053] O termo “heterociclo” ou “heterocíclico” se refere a um sistema de anel monovalente monocíclico não aromático e/ou sistema de anel multicíclico que contém pelo menos um anel não aromático, em que um ou mais dos átomos de anel não aromático são heteroátomos independentemente selecionados de O, S, ou N e os átomos restantes do anel são átomos de carbono, e onde o sistema de anel multicíclico compreende adicionalmente um anel carbocíclico ou heterocíclico, aromático ou não aromático. Em certas modalidades, o grupo heterociclo ou heterocíclico apresenta de 3 a 20, de 3 a 15, de 3 a 10, de 3 a 8, de 4 a 7, ou de 5 a 6 átomos do anel. Grupos de heterociclo são ligados ao restante da molécula por meio de um anel não aromático. Em certas modalidades, o heterociclo é um sistema de anel monocíclico, bicíclico, tricíclico ou tetracíclico, que pode incluir um sistema de anel fundido, espirocíclico ou ligado, e em que os átomos de nitrogênio ou enxofre podem ser opcionalmente oxidados, os átomos de nitrogênio podem ser opcionalmente quaternizados, e alguns anéis podem ser parcialmente ou completamente saturados, ou aromáticos. O heterociclo pode ser anexado à estrutura principal em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono do anel não aromático, que resulta na criação de um composto estável. Em certas modalidades, heterocíclico é azepinila, benzodioxanila, benzodioxolila, benzofuranonila, benzopiranonila, benzopiranila, benzotetraidrofuranila, benzotetraidrotienila, benzotiopiranila, benzoxazinila, β-carbolinila, cromanila, cromonila, cinnolinila, coumarinila, decaidroisoquinolinila, diidrobenzisotiazinila, diidrobenzisoxazinila, diidrofurila, diidroisoindolila, diidropiranila, diidropirazolila, diidropirazinila, diidropiridinila, diidropirimidinila, diidropirrolila, dioxolanila, 1,4-ditianila, furanonila, imidazolidinila, imidazolinila, indolinila, isobenzotetraidrofuranila, isobenzotetraidrotienila, isocromanila, isocoumarinila, isoindolinila, isotiazolidinila, isoxazolidinila, morfolinila, octaidroindolila, octaidroisoindolila, oxazolidinonila, oxazolidinila, oxiranila, piperazinila, piperidinila, 4-piperidonila, pirazolidinila, pirazolinila, pirrolidinila, pirrolinila, quinuclidinila, tetraidrofurila, tetraidroisoquinolinila, tetraidropiranila, tetraidrotienila, tiamorfolinila, tiazolidinila, tetraidroquinolinila, e 1,3,5-tritianila. Em certas modalidades, heterocíclico também pode ser opcionalmente substituído da maneira aqui descrita. Em certas modalidades, o grupo heterocíclico pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), oxo, epóxi, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, alcoxicarbonila, alcoxicarbonilalquila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, ou fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0054] O termo “heteroarila” se refere a um grupo monovalente monocíclico aromático e/ou grupo multicíclico que contém pelo menos um anel aromático, em que o anel monocíclico contém um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de O, S e N no anel, e onde o sistema de anel multicíclico compreende pelo menos um anel aromático e compreende adicionalmente um anel carbocíclico ou heterocíclico, aromático ou não aromático, e onde um ou mais dos átomos do anel no sistema de anel multicíclico é um heteroátomo independentemente selecionado de O, S e N. Os grupos heteroarila são ligados ao restante da molécula por meio de um anel aromático. Cada anel de um grupo heteroarila pode conter um ou dois átomos O, um ou dois átomos S, e/ou um a quatro átomos N, contanto que o número total de heteroátomos em cada anel seja quatro ou menos, e cada anel contenha pelo menos um átomo de carbono. Em certas modalidades, a heteroarila apresenta de 5 a 20, de 5 a 15, ou de 5 a 10 átomos do anel. Em certas modalidades, grupos heteroarila monocíclicos incluem, mas sem limitação, furanila, imidazolila, isotiazolila, isoxazolila, oxadiazolila, oxadiazolila, oxazolila, pirazinila, pirazolila, piridazinila, piridila, pirimidinila, pirrolila, tiadiazolila, tiazolila, tienila, tetrazolila, triazinila e triazolila. Em certas modalidades, grupos heteroarila bicíclicos incluem, mas sem limitação, benzofuranila, benzimidazolila, benzoisoxazolila, benzopiranila, benzotiadiazolila, benzotiazolila, benzotienila, benzotriazolila, benzoxazolila, furopiridila, imidazopiridinila, imidazotiazolila, indolizinila, indolila, indazolila, isobenzofuranila, isobenzotienila, isoindolila, isoquinolinila, isotiazolila, naftiridinila, oxazolopiridinila, ftalazinila, pteridinila, purinila, piridopiridila, pirrolopiridila, quinolinila, quinoxalinila, quinazolinila, tiadiazolopirimidila, e tienopiridila. Em certas modalidades, grupos heteroarila tricíclico incluem, mas sem limitação, acridinila, benzindolila, carbazolila, dibenzofuranila, perimidinila, fenantrolinila, fenantridinila, fenarsazinila, fenazinila, fenotiazinila, fenoxazinil e xantenila. Em certas modalidades, o grupo heteroarila pode ser substituído por pelo menos um (em um outro exemplo por 1, 2, 3, 4, ou 5) grupo halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), alquila, haloalquila, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, e fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário.

[0055] O termo “alquilarila” se refere a um grupo arila com um substituinte de alquila, em que arila e alquila são da maneira aqui definida. O termo “aralquila” ou “arilalquila” se refere a um grupo alquila com um substituinte de arila, em que arila e alquila são da maneira aqui definida.

[0056] O termo “fenileno”, da maneira aqui usada, e a menos que de outra forma especificada, se refere a um grupo fenila divalente e inclui tanto frações substituídas quanto não substituídas. Em certas modalidades, fenileno grupo pode ser substituído por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, 4, ou 5) frações independentemente selecionadas do grupo halogênio (flúor, cloro, bromo ou iodo), alquila, haloalquila, hidroxila, alquilcarbonila, cicloalquilcarbonila, arilcarbonila, sulfanila, alquilsulfanila, cicloalquilsulfanila, arilsulfanila, alquilsulfonila, cicloalquilsulfonila, arilsulfonila, aminocarbonila, carbamoila, sulfonamido, amino (da maneira aqui definida, por exemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, etc.), alcóxi, arilóxi, nitro, ciano, ácido sulfônico, sulfato, sulfonato, ácido fosfônico, fosfato, e fosfonato, tanto não protegido quanto protegido, conforme necessário, da maneira conhecida pelos versados na técnica, por exemplo, da maneira preceituada em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley e Sons, Segunda edição, 1991. Quando fenileno é usado no contexto de um grupo EG, o fenileno é substituído por 1, 2, 3, ou 4 grupos REG, da maneira aqui definida, e/ou com 1 ou 2 grupos -O- [RT], e/ou com 1 ou 2 grupos -CH2OC(O)[RT], onde RT é da maneira aqui definida.

[0057] O termo “grupo protetor” da maneira aqui usada e a menos que de outra forma definida se refere a um grupo que é adicionado a um átomo de oxigênio, nitrogênio ou fósforo para prevenir sua reação adicional ou para outros propósitos. Uma ampla variedade de grupos protetores de oxigênio e nitrogênio é conhecida pelos versados na técnica de síntese orgânica.

[0058] “Sal farmaceuticamente aceitável” se refere a qualquer sal de um composto aqui fornecido que mantém suas propriedades biológicas e que não é tóxico nem de outra forma indesejável para uso farmacêutico. Tais sais podem ser derivados de uma variedade de contra-íons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica. Tais sais incluem, mas sem limitação: (1) sais de adição ácida formados com ácidos orgânicos ou inorgânicos tais como hidroclórico, hidrobrômico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, sulfâmico, acético, trifluoracético, tricloroacético, propiônico, hexanóico, ciclopentilpropiônico, glicólico, glutárico, pirúvico, láctico, malônico, succínico, sórbico, ascórbico, málico, maléico, fumárico, tartárico, cítrico, benzóico, 3-(4- hidroxibenzoil)benzóico, pícrico, cinnâmico, mandélico, ftálico, láurico, metanossulfônico, etanossulfônico, 1,2-etano-dissulfônico, 2- hidroxietanossulfônico, benzenossulfônico, 4-clorobenzenossulfônico, 2- naftalenossulfônico, 4-toluenossulfônico, canfórico, canforsulfônico, 4- metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1-carboxílico, glucoeptônico, 3-fenilpropiônico, trimetilacético, terc-butilacético, lauril sulfúrico, glucônico, benzóico, glutâmico, hidroxinaftóico, salicílico, esteárico, cicloexilsulfâmico, quínico, mucônico e ácidos similares; ou (2) sais de adição básica formados quando um próton acídico presente no composto parental é tanto (a) substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon alcalino terroso ou um íon alumínio, ou hidróxidos de metal alcalino ou de metal alcalino terroso, tal como hidróxido de sódio, potássio, cálcio, magnésio, alumínio, lítio, zinco e bário, amônia, quanto (b) coordenado com uma base orgânica, tal como aminas orgânicas alifáticas, alicíclicas, ou aromáticas, tal como amônia, metilamina, dimetilamina, dietilamina, picolina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, etilenodiamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N‘-dibenziletileno-diamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-benzilfenetilamina, N-metilglucamina piperazina, tris(hidroximetil)- aminometano, hidróxido de tetrametilamônio e similares.

[0059] Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adicionalmente, apenas a título de exemplo e sem limitação, sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio, tetra-alquilamônio e similares, e quando o composto contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos não tóxicos, tais como hidro-haletos, por exemplo, cloridrato e hidrobrometo, sulfato, fosfato, sulfamato, nitrato, acetato, trifluoracetato, tricloroacetato, propionato, hexanoato, ciclopentilpropionato, glicolato, glutarato, piruvato, lactato, malonato, succinato, sorbato, ascorbato, malato, maleato, fumarato, tartarato, citrato, benzoato, 3-(4-hidroxibenzoil)benzoato, picrato, cinnamato, mandelato, ftalato, laurato, metanosulfonato (mesilato), etanossulfonato, 1,2- etano-dissulfonato, 2-hidroxietanossulfonato, benzenossulfonato (besilato), 4- clorobenzenossulfonato, 2-naftalenossulfonato, 4-toluenossulfonato, canforato, canforsulfonato, 4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1-carboxilato, glucoeptonato, 3-fenilpropionato, trimetilacetato, terc-butilacetato, lauril sulfato, gluconato, benzoato, glutamato, hidroxinaftoato, salicilato, estearato, cicloexilsulfamato, quinato, muconato e similares.

[0060] O termo “acila” se refere a um grupo da fórmula -C(O)R‘, em que R‘ é alquila (incluindo alquila inferior); cicloalquila; cicloalquilalquila; cicloalquenila; arila; arilalquila (incluindo benzila); alquila substituída (incluindo alquila inferior e, por exemplo, alcoxialquila e ariloxialquila); heterociclo; heterocicloalquila; heteroarila e heteroarilalquila; onde a cicloalquila, cicloalquenila, arila, heterociclo e heteroarila podem ser substituídos. Em certas modalidades, grupos arila em acila ou ésteres compreendem um grupo fenila. Em certas modalidades, grupos acila incluem, por exemplo, acetila, trifluoracetila, metilacetila, ciclopropilacetila, propionila, butirila, hexanoila, heptanoila, octanoila, neo-heptanoila, fenilacetila, 2-acetoxi-2-fenilacetila, difenilacetila, a-metóxi-a-trifluormetil- fenilacetila, bromoacetila, 2-nitro-benzenoacetila, 4-cloro-benzenoacetila, 2- cloro-2,2-difenilacetila, 2-cloro-2-fenilacetila, trimetilacetila,clorodifluoracetila, perfluoracetila, fluoracetila, bromodifluoracetila, metoxiacetila, 2-tiofeneacetila, clorosulfonilacetila, 3-metoxifenilacetila, fenoxiacetila, terc-butilacetila, tricloroacetila, monocloro-acetila, dicloroacetila, 7H-dodecafluor-heptanoila, perfluor-heptanoila, 7H-dodeca- fluoreptanoila, 7-clorododecafluor-heptanoila, 7-cloro-dodecafluor- heptanoila, 7H-dodecafluoreptanoila, 7H-dodeca-fluoreptanoila, nona-flúor- 3,6-dioxa-heptanoila, nonafluor-3,6-dioxaheptanoila, perfluoreptanoila, metoxibenzoila, metila 3-amino-5-feniltiofene-2-carboxila, 3,6-dicloro-2- metóxi-benzoila, 4-(1,1,2,2-tetrafluor-etóxi)-benzoila, 2-bromo-propionila, omega-aminocaprila, decanoila, n-pentadecanoila, stearila, 3-ciclopentil- propionila, 1-benzeno-carboxila, O-acetilmandelila, pivaloil acetila, 1- adamantano-carboxila, cicloexano-carboxila, 2,6-piridinadicarboxila, ciclopropano-carboxila, ciclobutano-carboxila, perfluorcicloexil carboxila, 4- metilbenzoila, clorometil isoxazolil carbonila, perfluorcicloexil carboxila, crotonila, 1-metil-1H-indazole-3-carbonila, 2-propenilcarbonila, isovalerila, 1-pirrolidinacarbonila e 4-fenilbenzoila.

[0061] O termo “aminoácido” se refere a aminoácidos α, β, y, ou δ de ocorrência natural e sintéticos e inclui, mas sem limitação, aminoácidos encontrados em proteínas, isto é, glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina, triptofano, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, aspartato, glutamato, lisina, arginina e histidina. Em certas modalidades, o aminoácido está na configuração L. Em certas modalidades, o aminoácido está na configuração D. Em certas modalidades, o aminoácido é fornecido como um substituinte de um composto aqui descrito, em que o aminoácido é um resíduo selecionado de alanila, valinila, leucinila, isoleuccinila, prolinila, fenilalaninila, triptofanila, metioninila, glicinila, serinila, treoninila, cisteinila, tirosinila, asparaginila, glutaminila, aspartoila, glutaroila, lisinila, argininila, histidinila, β-alanila, β-valinila, β-leucinila, β- isoleuccinila, β-prolinila, β-fenilalaninila, β-triptofanila, β-metioninila, β- glicinila, β-serinila, β-treoninila, β-cisteinila, β-tirosinila, β-asparaginila, β- glutaminila, β-aspartoila, β-glutaroila, β-lisinila, β-argininila, ou β-histidinila.

[0062] O termo “derivado de aminoácido” se refere a um grupo derivado de um aminoácido de ocorrência natural ou de ocorrência não natural, da maneira aqui descrita e exemplificada. Derivados de aminoácido são evidentes aos versados na técnica e incluem, mas sem limitação, derivados de éster, amino álcool, amino aldeído, amino lactona e N-metila de aminoácidos de ocorrência natural ou de ocorrência não natural. Em uma modalidade, um composto aqui descrito compreende um derivado de aminoácido, em que o derivado de aminoácido é -NRX-G(Sc)-C(O)-Q1-, em que Q1 é -S-, -NRY-, ou -O-, RY é hidrogênio ou alquila, SC é uma cadeia lateral de um aminoácido de ocorrência natural ou de ocorrência não natural, G é alquileno C1-C2, e RX é hidrogênio ou RX e SC, juntos com os átomos aos quais são anexados, combinam para formar um anel heterocíclico de cinco membros. Em uma modalidade, um derivado de aminoácido é fornecido como um substituinte de um composto aqui descrito, em que o substituinte é -O-C(0)-G(Sc)-NH-Q2-, em que Q2 é uma ligação simples ou -O-, SC é uma cadeia lateral de um aminoácido de ocorrência natural ou de ocorrência não natural, e G é alquileno C1-C2. Em certas modalidades, Q2 e SC, juntos com os átomos aos quais são anexados, combinam para formar um anel heterocíclico de cinco membros. Em certas modalidades, G é alquileno C1 e SC é hidrogênio, alquila, arilalquila, heterocicloalquila, carboxilalquila, heteroarilalquila, aminoalquila, hidroxilalquila, aminoiminoaminoalquila, aminocarbonilalquila, sulfanilalquila, carbamoilalquila, alquilsulfanilalquila, ou hidroxilarilalquila. Em uma modalidade, um derivado de aminoácido é fornecido como um substituinte de um composto aqui descrito, em que o derivado de aminoácido está na configuração D. Em uma modalidade, um derivado de aminoácido é fornecido como um substituinte de um composto aqui descrito, em que o derivado de aminoácido está na configuração L.

[0063] O termo “alquila-heterociclo” se refere a um grupo heterociclo com um substituinte de alquila. O termo “heterocicloalquila” se refere a um grupo alquila com um substituinte de heterociclo.

[0064] Da maneira aqui usada, o termo “carboxilalquila” se refere a uma alquila substituída por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, carbóxi, onde alquila é da maneira aqui descrita.

[0065] O termo “alquila-heteroarila” se refere a um grupo heteroarila com um substituinte de alquila. O termo “heteroarilalquila” se refere a um grupo alquila com um substituinte de heteroarila.

[0066] Da maneira aqui usada, o termo “aminoalquila” se refere a um grupo alquila substituído por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, substituinte(s) de amino, onde alquila e amino são da maneira aqui descrita.

[0067] Da maneira aqui usada, os termos “hidroxilalquila” e “hidroxialquila” se referem a um grupo alquila substituído por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, hidroxila, onde alquila é da maneira aqui descrita.

[0068] Da maneira aqui usada, o termo “aminoiminoaminoalquila” se refere a uma alquila substituída por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, -amino-C(NH)-amino, onde alquila e amino são da maneira aqui descrita.

[0069] O termo aminocarbonila se refere ao grupo -C(O)(amino), onde amino é da maneira aqui definida.

[0070] Da maneira aqui usada, o termo “aminocarbonilalquila” se refere a uma alquila substituída por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, -C(O)-amino, onde alquila e amino são da maneira aqui descrita.

[0071] Da maneira aqui usada, o termo “sulfanilalquila” se refere a uma alquila substituída por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, -SH, onde alquila é da maneira aqui descrita.

[0072] O termo “carbamoila” se refere a um -NRC(OU’, onde R é hidrogênio ou alquila e R’ é alquila, cicloalquila, heterociclo, heteroarila, ou arila, da maneira aqui definida.

[0073] Da maneira aqui usada, o termo “carbamoilalquila” se refere a uma alquila substituída por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, carbamoil grupos, da maneira aqui definida.

[0074] Da maneira aqui usada, o termo “alquilsulfanilalquila” se refere a uma alquila substituída por pelo menos 1, em um outro exemplo 1 ou 2, -S-alquila, onde alquila é da maneira aqui descrita.

[0075] Da maneira aqui usada, o termo “hidroxilarilalquila” se refere ao grupo -alquila-arila-OH, onde alquila e arila são da maneira aqui descrita.

[0076] O termo “ácido sulfônico” se refere ao grupo -S(O)2OH.

[0077] O termo “sulfato” se refere ao grupo -OS(O)2OR onde R é alquila ou arilalquila.

[0078] O termo “sulfonato” se refere ao grupo -S(O)2OR onde R é alquila ou arilalquila.

[0079] O termo “sulfonamido” se refere ao grupo -S(O)2NRR’ onde R é hidrogênio ou alquila e R’ é alquila, cicloalquila, heterociclo, heteroarila,ou arila, da maneira aqui definida.

[0080] O termo “fosfato” se refere ao grupo -OP(O)(OU)2 onde cada R é independentemente alquila ou arilalquila.

[0081] O termo “ácido fosfônico” se refere a -P(O)(OH)2.

[0082] O termo “fosfonato” se refere ao grupo -P(O)(OU)2 onde cada R é independentemente alquila ou arilalquila.

[0083] Os termos “polipeptídeo”, “peptídeo” e “proteína” são aqui usados indiferentemente para se referir a um polímero de resíduos de aminoácido. Isto é, uma descrição direcionada a um polipeptídeo se aplica igualmente a uma descrição de um peptídeo e uma descrição de uma proteína, e vice-versa. Os termos se aplicam aos polímeros de aminoácido de ocorrência natural, bem como aos polímeros de aminoácido em que um ou mais resíduos de aminoácido é um aminoácido modificado. Adicionalmente, tais “polipeptídeos”, “peptídeos” e “proteínas” incluem cadeias de aminoácido de qualquer tamanho, incluindo proteínas de tamanho completo, em que os resíduos de aminoácido são ligados por ligações de peptídeo covalente.

[0084] Muitos dos compostos e conjugados aqui descritos apresentam centros quirais. A presente descrição inclui cada estereoisômero de cada composto ou conjugado com cada possível estereoquímica em cada centro quiral. Certos compostos são identificados por registro estereoquímico que é conhecido pelos versados na técnica. Em modalidades particulares, estereoquímica é identificada com registro R e S para cada centro quiral, da esquerda para a direita, da maneira representada na Fórmula 1000, 1001, 1002, e (I), etc. ou Fórmula (C1), F1, e G1, etc. Por exemplo, o registro [R,S,S] indica estereoquímica R, S e S nos centros quirais da Fórmula (I) da esquerda para a direita, começando com a posição de substituinte de metilamino e terminando com a posição de substituinte de isopropila. Similarmente, o registro [S,S,S] indica estereoquímica S, S e S em os centros quirais da Fórmula (I) da esquerda para a direita. Adicionalmente, o registro racêmico [R/S,S,S] indica uma mistura de compostos [R,S,S] e [S,S,S]. Para outros compostos e conjugados aqui, o registro pode ser aplicado em estruturas correspondentes.

[0085] O termo “substancialmente livre de” ou “substancialmente na ausência de”, quando usado junto com um artigo (incluindo, mas sem limitação, um composto, um sal do mesmo, um solvato do mesmo, uma forma sólida do mesmo e similares), se refere ao artigo que inclui pelo menos 85 % ou 90 % em peso, em certas modalidades, 95 %, 98 %, 99 %, ou 100 % em peso, do artigo determinado. Por exemplo, o termo “substancialmente livre de” ou “substancialmente na ausência de” com relação a uma composição pode se referir a uma composição que inclui pelo menos 85 % ou 90 % em peso, em certas modalidades, 95 %, 98 %, 99 %, ou 100 % em peso, de um estereoisômero determinado de um composto. Em certas modalidades, nos métodos e compostos aqui fornecidos, os compostos são substancialmente livres de estereoisômeros indeterminados ou outros compostos. Para um outro exemplo, o termo “substancialmente livre de” ou “substancialmente na ausência de” com relação a uma forma sólida pode se referir a uma forma sólida que inclui pelo menos 85 % ou 90 % em peso, em certas modalidades, 95 %, 98 %, 99 %, ou 100 % em peso da forma sólida determinada. Em certas modalidades, nos métodos e compostos aqui fornecidos, a forma sólida é substancialmente livre de outras formas sólidas.

[0086] Similarmente, o termo “isolado” com relação a uma composição se refere a uma composição que inclui pelo menos 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, ou 99 % a 100 % em peso de um composto determinado, o restante compreendendo outra espécie química ou estereoisômeros. Similarmente, o termo “isolado” com relação a uma forma sólida de um composto se refere a um sólido que inclui pelo menos 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, ou 99 % a 100 % em peso de tal forma sólida do composto, o restante compreendendo outras formas sólidas do composto, outros compostos, solventes e/ou outras impurezas.

[0087] “Solvato” se refere a um composto aqui fornecido ou um sal do mesmo, que inclui adicionalmente uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de solvente ligado por forças intermoleculares não covalentes. Onde o solvente é água, o solvato é um hidrato.

[0088] “Composição isotópica” se refere à quantidade de cada isótopo presente para um dado átomo, e “composição isotópica natural” se refere à composição isotópica de ocorrência natural ou abundância para um dado átomo. Átomos contendo sua composição isotópica natural também podem ser referidos aqui como átomos “não enriquecidos”. A menos que de outra forma determinada, os átomos dos compostos aqui citados significam que representam qualquer isótopo estável do mesmo átomo. Por exemplo, a menos que de outra forma declarada, quando uma posição é determinada especificamente como "H" ou "hidrogênio”, entende-se que a posição apresenta hidrogênio em sua composição isotópica natural.

[0089] “Enriquecimento com isotópico” se refere ao percentual de incorporação de uma quantidade de um isótopo específico em um dado átomo em uma molécula, no local desta abundância isotópica natural do átomo. Por exemplo, enriquecimento com deutério de 1 % em uma dada posição significa que 1 % das moléculas em uma dada amostra contém deutério na posição especificada. Em decorrência da distribuição de ocorrência natural de deutério ser cerca de 0,0156 %, o enriquecimento com deutério em qualquer posição em um composto sintetizado usando materiais de partida não enriquecidos é cerca de 0,0156 %. O enriquecimento com isotópico dos compostos aqui fornecidos pode ser determinado usando métodos analíticos convencionais conhecidos pelos versados na técnica, incluindo espectrometria de massa e espectroscopia por ressonância magnética nuclear.

[0090] “Enriquecido isotopicamente” se refere a um átomo com uma composição isotópica sem ser a composição isotópica natural do mesmo átomo. “Enriquecido isotopicamente” também pode se referir a um composto contendo pelo menos um átomo com uma composição isotópica, sem ser a composição isotópica natural do mesmo átomo.

[0091] Da maneira aqui usada, grupos “alquila”, “cicloalquila”, “alquenila”, “cicloalquenila”, “alquinila”, “arila”, “alcóxi”, “alcoxicarbonila”, “amino”, “carboxila”, “alquilamino”, “arilamino”, “tioalquioxi”, “heterociclila”, “heteroarila”, “alquila-heterociclila”, “alquila-heteroarila”, “acila”, “aralquila”, “alcarila”, “purina”, “pirimidina”, “carboxila” e “aminoácido” compreendem opcionalmente deutério em uma ou mais posições onde átomos de hidrogênio estão presentes, e em que a composição do átomo ou átomos de deutério é sem ser a composição isotópica natural.

[0092] Igualmente da maneira aqui usada, grupos “alquila”, “cicloalquila”, “alquenila”, “cicloalquenila”, “alquinila”, “arila”, “alcóxi”, “alcoxicarbonila”, “carboxila”, “alquilamino”, “arilamino”, “tioalquioxi”, “heterociclila”, “heteroarila”, “alquila-heterociclila”, “alquila-heteroarila”, “acila”, “aralquila”, “alcarila”, “purina”, “pirimidina”, “carboxila” e “aminoácido” compreendem opcionalmente carbono-13 em uma quantidade sem ser a composição isotópica natural.

[0093] Da maneira aqui usada, EC50 se refere a uma dosagem, concentração ou quantidade de um composto teste particular que elicita uma resposta dose-dependente em 50 % da expressão máxima de uma resposta particular que é induzida, provocada ou potencializada pelo composto teste particular.

[0094] Da maneira aqui usada, a IC50 se refere a uma dosagem, concentração ou quantidade de um composto teste particular que atinge uma inibição de 50 % de uma resposta máxima em um ensaio que avalia tal resposta.

[0095] “Câncer” se refere a estágios de doença de proliferação cellular incluindo, mas sem limitação: Cardíaco: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiossarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma e teratoma; Pulmão: carcinoma broncogênico (célula escamosa, célula pequena não diferenciada, célula grande não diferenciada, adenocarcinoma), alveolar (bronquiolar) carcinoma, adenoma brônquico, sarcoma, linfoma, hanlartoma condromatoso, inesotelioma; Gastrointestinal: cólon (carcinoma de cólon, adenocarcinoma de cólon, adenocarcinoma colorretal), esôfago (carcinoma de célula escamosa, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma), estômago (carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma), pâncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grosso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma); trato geniturinário: rim (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), bexiga e uretra (carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula transicional, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículos (seminoma, teratoma, carcinoma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de célula intersticial, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatóides, lipoma); Fígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; Ossos: sarcoma osteogênico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma maligno fibroso, condrossarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de célula reticular), mieloma múltiplo, cordoma de tumor de célula gigante maligna, osteocronfroma (exostoses osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteóide e tumores de célula gigante; Sistema nervoso: crânio (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatose), cérebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [oma pineal], glioblastoma multiforma, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congênitos), neurofibroma de medula espinhal, meningioma, glioma, sarcoma); Ginecológico: útero (carcinoma endometrial), cérvix (carcinoma cervical, displasia cervical pré-tumor), ovários (carcinoma ovariano [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma não classificado], ovariano resistente à platina, tumores de célula granulosa-tecal, tumores de célula de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno, adenocarcinoma ovariano), vulva (carcinoma de célula escamosa, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de célula clara, carcinoma de célula escamosa, sarcoma botrióide (rabdomiossarcoma embrionário], trompas de falópio (carcinoma); Hematológico: sangue (leucemia mielóide [aguda e crônica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica crônica, doenças mieloproliferativas, mieloma múltiplo, síndrome mielodisplásica), doença de Hodgkin, linfoma não Hodgkin [linfoma maligno]; Pele: melanoma, melanoma maligno, carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, sarcoma de Karposi, nervos displásicos moles, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoríase; Glândulas Adrenais: neuroblastoma; um linfoma; linfoma de célula grande; linfoma histiocítico e linfocítico difuso misto; linfoma folicular de célula B; e mama (câncer de mama que superexpressa Her2, câncer de mama triplo-negativo). Assim, o termo "célula cancerosa", da maneira aqui fornecida, inclui uma célula afetada por qualquer uma das condições anteriormente identificadas. Da maneira aqui usada, os termos “sujeito” e “paciente” são aqui usados indiferentemente. Os termos “sujeito” e “sujeitos” se referem a um animal, tal como um mamífero, incluindo um não primata (por exemplo, uma vaca, porco, cavalo, gato, cachorro, rato e camundongo) e um primata (por exemplo, um macaco, um chimpanzé e um humano) e, por exemplo, um humano. Em certas modalidades, o sujeito é refratário ou não responsivo aos tratamentos atuais para proliferação celular e/ou câncer. Em uma outra modalidade, o sujeito é um animal de fazenda (por exemplo, um cavalo, uma vaca, um porco, etc.) ou um animal de estimação (por exemplo, um cachorro ou um gato). Em certas modalidades, o sujeito é um humano.

[0096] Da maneira aqui usada, os termos “agente terapêutico” e “agentes terapêuticos” se referem a qualquer agente(s) que pode(m) ser usado(s) no tratamento ou prevenção de uma doença ou condição, ou um ou mais sintomas desta. Em certas modalidades, o termo “agente terapêutico” inclui um composto aqui fornecido. Em certas modalidades, um agente terapêutico é um agente que é conhecido para ser usado, ou foi ou está sendo atualmente usado, para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição, ou um ou mais sintomas desta.

[0097] “Quantidade terapeuticamente efetiva” se refere a uma quantidade de um composto ou composição que, quando administrado a um sujeito para tratar uma doença ou condição, é suficiente para realizar tal tratamento para a doença ou condição. Uma “quantidade terapeuticamente efetiva” pode variar dependendo, inter alia, do composto, da doença ou condição e sua gravidade, e da idade, peso, etc., do sujeito a ser tratado.

[0098] “Tratar” ou “tratamento” de qualquer doença ou condição se refere, em certas modalidades, à melhora de uma doença ou condição que existe em um sujeito. Em uma outra modalidade, “tratar” ou “tratamento” inclui melhorar pelo menos um parâmetro físico, que pode ser imperceptível pelo sujeito. Ainda em uma outra modalidade, “tratar” ou “tratamento” inclui modular a doença ou condição, tanto fisicamente (por exemplo, estabilização de um sintoma perceptível) quanto fisiologicamente (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Ainda em uma outra modalidade, “tratar” ou “tratamento” inclui retardar o início da doença ou condição.

[0099] Da maneira aqui usada, os termos “agente profilático” e “agentes profiláticos” da maneira usada se referem a qualquer agente(s) que pode(m) ser usado(s) na prevenção de uma doença ou condição, ou um ou mais sintomas desta. Em certas modalidades, o termo “agente profilático” inclui um composto aqui fornecido. Em certas outras modalidades, o termo “agente profilático” não se refere a um composto aqui fornecido. Por exemplo, um agente profilático é um agente que é conhecido para ser usado, ou foi ou está sendo usado atualmente, para prevenir ou impedir o início, desenvolvimento, progressão e/ou severidade de uma doença ou condição.

[00100] Da maneira aqui usada, a frase “quantidade profilaticamente efetiva” se refere à quantidade de uma terapia (por exemplo, agente profilático) que é suficiente para resultar na prevenção ou redução do desenvolvimento, recorrência ou início de um ou mais sintomas associados a uma doença ou condição, ou para aumentar ou melhorar o(s) efeito(s) profilático(s) de uma outra terapia (por exemplo, um outro agente profilático).

[00101] O termo “anticorpo” se refere a qualquer macromolécula que pode ser reconhecida como um anticorpo pelos versados na técnica. Anticorpos compartilham propriedades comuns, incluindo ligação e pelo menos uma cadeia de polipeptídeo, que é substancialmente idêntica a uma cadeia de polipeptídeo que pode ser codificada por qualquer dos genes de imunoglobulina reconhecidos pelos versados na técnica. Os genes de imunoglobulina incluem, mas sem limitação, os genes de região constante K, X, α, Y (IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4), δ, ε e μ, bem como os genes de região variável de imunoglobulina. O termo inclui anticorpos de tamanho completo e fragmentos de anticorpo reconhecidos pelos versados na técnica, e variações dos mesmos.

[00102] O termo “fragmento de anticorpo” se refere a qualquer forma de um anticorpo sem ser a forma de tamanho completo. Fragmentos de anticorpo incluem aqui anticorpos que são os menores componentes que existem em anticorpos de tamanho completo, e anticorpos que foram geneticamente modificados. Fragmentos de anticorpo incluem, mas sem limitação, Fv, Fc, Fab, e (Fab')2, Fv de cadeia simples (scFv), diacorpos, triacorpos, tetracorpos, anticorpos híbridos bifuncionais, CDR1, CDR2, CDR3, combinações de CDR's, regiões variáveis, regiões de estrutura, regiões constantes, e similares (Maynard & Georgiou, 2000, Annu. Rev. Biomed. Eng. 2:339-76; Hudson, 1998, Curr. Opin. Biotechnol. 9:395-402).

[00103] O termo “imunoglobulina (Ig)” se refere a uma proteína que consiste em um ou mais polipeptídeos substancialmente codificados por um dos genes de imunoglobulina, ou uma proteína substancialmente idêntica a esta na sequência de aminoácido. Imunoglobulinas incluem, mas sem limitação, anticorpos. Imunoglobulinas podem apresentar inúmeras formas estruturais incluindo, mas sem limitação, anticorpos de tamanho completo, fragmentos de anticorpo, e domínios individuais de imunoglobulina incluindo, mas sem limitação, VH, CY1, CY2, CY3, VL, e CL.

[00104] O termo “domínio de imunoglobulina (Ig)” se refere a uma domínio de proteína que consiste em um polipeptídeo substancialmente codificado por um gene de imunoglobulina. Domínios de Ig incluem, mas sem limitação, VH, CY1, CY2, CY3, VL, e CL.

[00105] O termo “região variável” de um anticorpo se refere a um polipeptídeo ou polipeptídeos compostos do domínio de imunoglobulina VH, os domínios de imunoglobulina VL, ou os domínios de imunoglobulina VH e VL. Região variável pode se referir a este ou estes polipeptídeos no isolamento, como um fragmento Fv, como um fragmento scFv, como esta região no contexto de um fragmento maior de anticorpo, ou como esta região no contexto de um anticorpo de tamanho completo ou uma molécula estruturada alternativa, não relacionada a anticorpo.

[00106] O termo “variável” se refere ao fato de que certas porções dos domínios variáveis diferem extensivamente em sequência entre anticorpos, e são responsáveis pela especificidade de ligação de cada anticorpo particular ao seu antígeno particular. Entretanto, a variabilidade não é uniformemente distribuída entre domínios variáveis de anticorpos. É concentrada em três segmentos denominados Regiões Determinantes de Complementaridade (CDRs) tanto nos domínios variáveis de cadeia leve quanto nos de cadeia pesada. As porções mais amplamente conservadas dos domínios variáveis são denominadas as regiões de estrutura (FR). Os domínios variáveis de cadeias pesadas e leves naturais compreendem cada qual quatro regiões FR, adotando em grande parte uma configuração em folha β, conectadas por três ou quatro CDRs, que forma alças que se conectam e, em alguns casos, que formam parte da estrutura de folha β. As CDRs em cada cadeia são mantidas juntas em muita proximidade pelas regiões FR e, com as CDRs da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de ligação de antígeno anticorpos (vide Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).

[00107] Os domínios constantes não estão tipicamente envolvidos de maneira direta na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem várias funções efetoras. Dependendo da sequência de aminoácidos da região constante de suas cadeias pesadas, anticorpos ou imunoglobulinas podem ser atribuídos a diferentes classes. Existem cinco principais classes de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e várias destas podem ser adicionalmente divididas em subclasses (isotipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4; IgA1 e IgA2. As regiões constantes de cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são denominadas α, δ, ε, Y, e μ, respectivamente. Das várias classes de imunoglobulina humana, apenas IgG1, IgG2, IgG3 e IgM humana são conhecidas para ativar o complemento.

[00108] O termo “conjugado” se refere a qualquer composto que pode ser formado conjugando um composto aqui descrito a um segundo composto.O segundo composto pode ser uma molécula pequena ou uma macromolécula. Em algumas modalidades, o segundo composto é uma molécula bioativa incluindo, mas sem limitação, uma proteína, um peptídeo, um ativo nucléico ou um híbrido do mesmo. Em algumas modalidades, o segundo composto é um polímero tal como polietileno glicol. Em algumas modalidades, o segundo composto é um agente terapêutico, incluindo uma droga comercialmente disponível. Em algumas modalidades, o segundo composto é uma marcação que pode reconhecer e se ligar aos alvos específicos, tal como uma carga molecular que é prejudicial para células alvo ou uma marcação usada para a detecção ou diagnóstico. Em algumas modalidades, o composto aqui descrito é conectado ao segundo composto por meio de um ligador. Em algumas modalidades, o composto aqui descrito é conectado diretamente ao segundo composto sem um ligador. Em uma outra modalidade o segundo composto é uma molécula pequena; uma macromolécula; molécula bioativa incluindo, mas sem limitação, uma proteína, um peptídeo, um ativo nucléico ou um híbrido do mesmo; um polímero tal como polietileno glicol; um agente terapêutico, incluindo uma droga comercialmente disponível; ou uma marcação que pode reconhecer e se ligar aos alvos específicos, tal como uma carga molecular que é prejudicial para as células alvo ou uma marcação usada para a detecção ou diagnóstico. Em uma outra modalidade, o segundo composto compreende um aminoácido modificado compreendendo um alcino, alceno tensionado, tetrazina, tiol, maleimida, carbonila, oxiamina, ou azida.

[00109] O termo “sequência de proteínas variante” se refere a uma sequência de proteínas que apresenta um ou mais resíduos que diferem em identidade de aminoácido de uma outra sequência de proteínas similar. A referida sequência de proteínas similar pode ser a sequência de proteínas tipo selvagem natural, ou um outro variante da sequência tipo selvagem. As variações incluem proteínas que apresentam um ou mais inserções, eliminações ou substituições de aminoácido. As variações também incluem proteínas que apresentam um ou mais aminoácidos pós-transducionalmente modificados.

[00110] O termo “anticorpo parental” se refere a um anticorpo conhecido pelos versados na técnica que é modificado de acordo com a descrição aqui fornecida. A modificação pode ser física, isto é, substituindo ou modificando quimicamente ou bioquimicamente um ou mais aminoácidos do anticorpo parental para render um anticorpo no escopo da presente descrição. A modificação também pode ser conceitual, isto é, usando a sequência de uma ou mais cadeias de polipeptídeo do anticorpo parental para determinar um anticorpo compreendendo um ou mais aminoácidos sítio- específicos modificados, de acordo com a presente descrição. Anticorpos parentais podem ser de anticorpos de ocorrência natural ou anticorpos desenhados ou desenvolvidos em um laboratório. Anticorpos parentais também podem ser anticorpos artificiais ou geneticamente modificados, por exemplo, anticorpos quiméricos ou humanizados.

[00111] O termo “variante conservativamente modificado” se refere a uma proteína que difere de uma proteína relacionada por substituições conservativas em sequência de aminoácido. Os versados na técnica reconhecem que substituições, eliminações ou adições individuais em um peptídeo, polipeptídeo, ou sequência de proteínas que altera, adiciona ou elimina um único aminoácido ou um pequeno percentual de aminoácidos na sequência codificada é um “variante conservativamente modificado”, onde a alteração resulta na substituição de um aminoácido com um aminoácido quimicamente similar. Tabelas de substituição conservativa que fornecem aminoácidos funcionalmente similares são bem conhecidos na técnica. Tais variações conservativamente modificadas são, além disso e sem exclusão, variações polimórficas, homólogos interespécies homólogos e alelos.

[00112] Os oito grupos a seguir contêm cada qual aminoácidos que são substituições conservativas uns para os outros: 1) Alanina (a), Glicina (G); 2) Ácido aspártico (D), Ácido glutâmico (E); 3) Asparagina (N), Glutamina (Q); 4) Arginina (R), Lisina (K); 5) Isoleucina (I), Leucina (L), Metionina (M), Valina (V); 6) Fenilalanina (F), Tirosina (Y), Triptofano (W); 7) Serina (S), Treonina (T); e 8) Cisteína (C), Metionina (M).

[00113] Vide, por exemplo, Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties, W H Freeman & Co.; 2a edição (Dezembro de 1993).

[00114] Os termos “idêntico” ou “identidade”, no contexto de duas ou mais sequências de polipeptídeo, se refere a duas ou mais sequências ou subsequências que são as mesmas. Sequências são “substancialmente idênticas” se elas apresentarem um percentual de resíduos de aminoácido ou nucleotídeos que são os mesmos (isto é, cerca de 60 % de identidade, opcionalmente cerca de 65 %, cerca de 70 %, cerca de 75 %, cerca de 80 %, cerca de 85 %, cerca de 90 %, ou cerca de 95 % de identidade em uma região especificada), quando comparadas e alinhadas para correspondência máxima em relação a uma janela de comparação, ou região determinada medida, usando um dos seguintes algoritmos de comparação de sequência, ou por alinhamento manual e inspeção visual. A identidade pode existir em relação a uma região que apresenta pelo menos cerca de 50 aminoácidos ou nucleotídeos em tamanho, ou em relação a uma região que é 75-100 aminoácidos ou nucleotídeos em tamanho ou, onde não especificado, através da sequência total ou um polipeptídeo. No caso de anticorpos, identidade pode ser medida fora das CDRs variáveis. O alinhamento ideal de sequências para comparação pode ser conduzido incluindo, mas sem limitação, pelo algoritmo de homologia local de Smith e Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c, pelo algoritmo de alinhamento por homologia de Needleman e Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443, pela pesquisa por método de similaridade de Pearson e Lipman (1988) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444, por implementações computadorizadas dos mesmos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA, e TFASTA no pacote de Software Wisconsin Genetics, grupo Genetics Computer, 575 Science Dr., Madison, Wis.); ou por alinhamento manual e inspeção visual (vide, por exemplo, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995 suplemento)).

[00115] Exemplos de algoritmos que são adequados para determinar identidade de sequência percentual e similaridade de sequência incluem os algoritmos BLAST e BLAST 2.0, que são descritos em Altschul et al. (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402, e Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410, respectivamente. Software para realizar análises BLAST é publicamente disponível por meio do National Center for Biotechnology Information. Os parâmetros de algoritmo BLAST W, T, e X determinam a sensibilidade e velocidade do alinhamento. O programa BLASTN (para sequências de nucleotídeo) usa como parâmetros um tamanho de letra (W) de 11, uma expectativa (E) ou 10, M=5, N=-4 e uma comparação de ambas as fitas. Para sequências de aminoácidos, o programa BLASTP usa como parâmetros um tamanho de letra de 3, e expectativa (E) de 10, e a matriz de classificação BLOSUM62 (vide Henikoff e Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915), alinhamentos (B) de 50, expectativa (E) de 10, M=5, N=-4, e uma comparação de ambas as fitas. O algoritmo BLAST é tipicamente realizado com o filtro de “baixa complexidade” desligado. Em algumas modalidades, o algoritmo BLAST é tipicamente realizado com o filtro “baixa complexidade” ligado.

[00116] O algoritmo BLAST também realiza uma análise estatística da similaridade entre duas sequências (vide, por exemplo, Karlin e Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787). Uma medida de similaridade fornecida pelo algoritmo BLAST é a probabilidade de mnor soma (P(N)), que fornece uma indicação da probabilidade pela qual uma combinação entre duas sequências de nucleotídeo ou aminoácido podem ocorrer por acaso. Por exemplo, um ácido nucléico é considerado similar a uma sequência de referência se a menor probabilidade de soma em uma comparação do ácido nucléico teste com o ácido nucléico de referência for menor que cerca de 0,2, em uma outra modalidade menor que cerca de 0,01, e em uma outra modalidade menor que cerca de 0,001.

[00117] O termo “aminoácido” se refere a aminoácidos de ocorrência natural e de ocorrência não natural, bem como aminoácidos tal como prolina, análogos de aminoácido e miméticos de aminoácido que funcionam de uma maneira similar aos aminoácidos de ocorrência natural.

[00118] Os aminoácidos naturalmente codificados são os aminoácidos proteinogênicos conhecidos pelos versados na técnica. Estes incluem os 20 aminoácidos comuns (alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutâmico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, e valina) e os menos comuns pirrolisina e selenocisteina. Os aminoácidos naturalmente codificados incluem variações pós-translacionais dos 22 aminoácidos de ocorrência natural tais como aminoácidos prenilados, aminoácidos isoprenilados, aminoácidos mirisoilado, aminoácidos palmitoilados, aminoácidos glicosilados ligados ao N, aminoácidos glicosilados ligados ao O, aminoácidos fosforilados e aminoácidos acilados.

[00119] O termo “aminoácido modificado” se refere a um aminoácido que não é um aminoácido proteinogênico, ou um variante do mesmo pós- transducionalmente modificado. Em particular, o termo se refere a um aminoácido que não é um dos 20 aminoácidos comuns ou pirrolisina ou selenocisteina, ou variações pós-transducionalmente modificadas do mesmo.

[00120] O termo “alceno tensionado” se refere a uma molécula compreendendo uma fração de alceno que é capaz de reagir com tetrazina em uma ligação de tetrazina. As ligações de tetrazina exemplares são descritas em Blackman et al., 2008, J. Am. Chem. Soc. 130:13518-13519. Exemplos incluem trans-ciclo-octenos e norbornenos. Compostos usados incluem, mas sem limitação, trans-cicloocteno, (E)-ciclooct-4-enol, (E)-ciclooct-4-enil 2,5- dioxo-1-pirrolidinil carbonato, succinimidil éster do ácido 5-norborneno-2- acético, e ácido 5-norborneno-2-endo-acético.

[00121] O termo “tetrazina” se refere a um composto ou grupo compreendendo a estrutura a seguir:em que R201 é alquila inferior. Por exemplo, R201 pode ser metila, etila, ou propila. Em certos aspectos, R201 é metila.

Compostos

[00122] Em certas modalidades, o composto não é da Fórmula (101), (101a), ou (101b) e o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101), (101a), ou (101b). Em certas modalidades, o composto não é da Fórmula (101a), e o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101a). Em certas modalidades onde X éo composto não é o composto da Fórmula (101), (101a), ou (101b) e o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101), (101a), ou (101b). Em certas modalidades onde X é o composto não é o composto da Fórmula (101a), e o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101a). Em certas modalidades, o composto não é da Fórmula (101), (101a), ou (101b). Em certas modalidades, o composto não é da Fórmula (101a). Em certas modalidades onde X é o composto não é o composto da Fórmula (101), (101a), ou (101b). Em certas modalidades onde X é o composto não é o composto da Fórmula (101a). Em certas modalidades, o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101), (101a), ou (101b). Em certas modalidades, o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101a). Em certas modalidades onde X é o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101), (101a), ou (101b). Em certas modalidades onde X é o conjugado não compreende o composto da Fórmula (101a).

[00123] Quando uma variação da Fórmula é usada, por exemplo, I- XIXb-2, cada Fórmula nesta variação é incluída e é da maneira como foi explicitamente listada, incluindo onde o numeral romano é seguido, por exemplo, por “um”, “-1”, etc. Por exemplo, I-XIXb-2 inclui Va, XIV, e XIXa-1, etc.

[00124] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula I:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é um grupo eliminador; cada RT é um grupo de gatilho de liberação, na cadeia principal da Fórmula (I) ou ligado a EG, em que um RT é opcional; HP é uma ligação simples, ausente, ou um grupo hidrofílico divalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é hidrogênio, um grupo de conjugação terminal, ou um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal; ou, alternativamente, W1, W2, W3, W4, W5, EG, RT, HP, SG, e R combinam para formar -H.

[00125] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto da Fórmula 1000 de acordo com 1001:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é ausente ou é um grupo eliminador; RT1 é um grupo de gatilho de liberação ou um ligador clivável; RT é um grupo de gatilho de liberação ligado ao EG; e em que RT é opcional; HP1 é ligação simples, ausente, um grupo hidrofílico divalente, ou onde RSG é um grupo hidrofílico monovalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é hidrogênio, um grupo de conjugação terminal, ou um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal.

[00126] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto da Fórmula 1000 de acordo com 1002:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é ausente ou é um grupo eliminador; RT1 é um grupo de gatilho de liberação ou um ligador clivável; RT é um grupo de gatilho de liberação ligado ao EG; e em que RT é opcional; HP1 é ligação simples, ausente, um grupo hidrofílico RSG divalente, ou onde RSG é um grupo hidrofílico monovalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é hidrogênio, um grupo de conjugação terminal, ou um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal.

[00127] Em certas modalidades, um grupo de conjugação pode ser usado para conjugar uma Hemiasterlina modificada, da maneira aqui descrita (por exemplo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b) em qualquer entidade molecular capaz de reagir com o grupo de conjugação para formar o conjugado. Em certas modalidades, o grupo de conjugação é determinado R aqui. O grupo de conjugação pode ser ligado diretamente ou indiretamente à Hemiasterlina modificada, da maneira aqui descrita (por exemplo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I- XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b), por meio de um ou mais grupos de anexação, grupos eliminadores, grupos de gatilhos de liberação, grupos hidrofóbicos e/ou grupos espaçadores.

Grupos de anexação

[00128] Grupos de anexação facilitam a incorporação de grupos eliminadores, grupos de gatilhos de liberação, grupos hidrofóbicos, grupos espaçadores, e/ou grupos de conjugação em um composto, tal como uma Hemiasterlina modificada da maneira aqui descrita (por exemplo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I- XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b). Grupos de anexação usados são conhecidos pelos, e são evidentes aos, versados na técnica. Exemplos de grupos de anexação usados são aqui fornecidos. Em certas modalidades, grupos de anexação são determinados W1, W2, W3, W4, ou W5. Em certas modalidades, um grupo de ligação pode compreender um éster divalente, éter divalente, amida divalente, amina divalente, alquileno, arileno, sulfeto, dissulfeto, - C(O)-, ou uma combinação dos mesmos. Em certas modalidades um grupo de ligação pode compreender -C(O)-, -O-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)NH-, - C(O)NH-alquila-, -OC(O)NH-, -SC(O)NH-, -NH-, -N(alquila)-, -N(R)- alquileno-N(R)- (onde cada R é independentemente H ou alquila), - N(CH3)CH2CH2N(CH3)-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH(CH3)-, -C(CH3)2-, - CH2CH2CH2-, fenileno, -NHCH2CH2C(O)-, -C(O)CH2CH2NH-, -S-, -S-S-, - OCH2CH2O-, ou o reverso (por exemplo -NHC(O)-) do mesmo, ou uma combinação dos mesmos.

Grupos eliminadores

[00129] Grupos eliminadores facilitam a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito do restante do composto ou conjugado in vivo e/ou in vitro. Grupos eliminadores também podem facilitar a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito junto com um grupo de gatilho de liberação. Por exemplo, o grupo eliminador e o grupo de gatilho de liberação podem reagir em uma reação de liberação para liberar uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito do composto ou conjugado in vivo e/ou in vitro. Mediante início da reação de liberação pelo gatilho de liberação, o grupo eliminador cliva a fração biologicamente ativa, ou uma forma de pró-fármaco da fração biologicamente ativa, e forma uma entidade estável, não tóxico que não apresenta nenhum efeito na atividade da fração biologicamente ativa.

[00130] Em certas modalidades, o grupo eliminador é determinado EG aqui. Grupos eliminadores usados incluem aqueles aqui descritos. Em certas modalidades, o grupo eliminador compreende um fenileno, um -C(O)-, um amino, ou uma combinação dos mesmos Em certas modalidades, o grupo eliminador é:em que cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, -NO2, -CN, flúor, bromo, cloro, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino- C(O)- e dialquilamino-C(O)-. Nas segundas e terceiras estruturas, os versados na técnica reconhecerão que EG está ligado a um RT que não está na cadeia principal, por exemplo, da Fórmula 1000, ou (I), da maneira indicada na descrição anterior da Fórmula 1000 e (I). Em algumas modalidades, cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino-C(O)- e dialquilamino-C(O)-. Em modalidades adicionais, cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, - NO2, -CN, flúor, bromo, e cloro.

Grupos de gatilhos de liberação e Ligadores cliváveis

[00131] Em certas modalidades, grupos de gatilhos de liberação facilitam a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito do restante do composto ou conjugado in vivo e/ou in vitro. Em certas modalidades, grupos de gatilhos de liberação também podem facilitar a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito junto com um grupo eliminador. Em algumas modalidades, o grupo eliminador e o grupo de gatilho de liberação podem reagir em uma reação de liberação para liberar uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito do composto ou conjugado in vivo e/ou in vitro. Em certas modalidades, o gatilho de liberação pode agir através de uma reação biologicamente direcionada com alta especificidade tumor:não tumor, tal como a ação proteolítica de uma enzima superexpressa em um ambiente de tumor.

[00132] Em certas modalidades, o grupo de gatilho de liberação é determinado RT aqui. Em certas modalidades, RT é divalente e ligado na cadeia principal da Fórmula (I) ou 1000. Em outras modalidades, RT é monovalente e ligado ao EG da maneira descrita anteriormente. Os grupos de gatilhos de liberação usados incluem aqueles aqui descritos. Em certas modalidades, o grupo de gatilho de liberação compreende um resíduo de um aminoácido natural ou não natural ou resíduo de um anel de açúcar. Em certas modalidades, o grupo de gatilho de liberação compreende um resíduo de um aminoácido natural ou não natural ou resíduo de um anel de açúcar.

[00133] Em algumas modalidades, o grupo de gatilho de liberação é derivado de um precursor ligador selecionado do grupo que consiste em dipeptídeos, tripeptídeos, tetrapeptídeos, e pentapeptídeos, cada um dos quais compreende uma citrulina. Dipeptídeos exemplares incluem, mas sem limitação, valina-citrulina (vc ou val-cit), e N-metil-valina-citrulina (Me-val- cit). Tripeptídeos exemplares incluem, mas sem limitação, glicina-valina- citrulina (gli-val-cit). Em algumas modalidades, o grupo de gatilho de liberação é derivado de um precursor ligador selecionado do grupo que consiste em valina-citrulina, N-metil-valina-citrulina, e glicina-valina-citrulina, Em certas modalidades, o grupo de gatilho de liberação é:

[00134] Os versados na técnica reconhecerão que a primeira estrutura é divalente e pode estar ligada na cadeia principal da Fórmula (I) ou 1000, e que a segunda estrutura é monovalente e pode estar ligada ao EG da maneira representada na Fórmula (I) e 1000 anterior.

[00135] Ligadores cliváveis facilitam a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito do restante do composto ou conjugado in vivo e/ou in vitro. Em certas modalidades, o gatilho de liberação pode agir por meio de uma reação biologicamente direcionada com alta especificidade tumor:não tumor, tal como a ação proteolítica de uma enzima superexpressa em um ambiente de tumor. Em certas modalidades, o ligador clivável é determinado RT1 aqui. Ligadores cliváveis usados incluem aqueles aqui descritos. Em algumas modalidades, o ligador clivável é derivado de um precursor ligador selecionado do grupo que consiste em dipeptídeos, tripeptídeos, tetrapeptídeos, e pentapeptídeos. Em tais modalidades, o ligador pode ser clivado por uma protease. Dipeptídeos exemplares incluem, mas sem limitação, valina-alanina (VA ou Val-Ala); valina-ácido glutâmico (Val-Glu); alanina-fenilalanina (AF ou Ala-Fe); fenilalanina-lisina (FK ou Fe-Lis); e fenilalanina-homolisina (Fe-homoLis). Tripeptídeos exemplares incluem, mas sem limitação glicina-glicina-glicina (Gli-Gli-Gli). Em certas modalidades, o ligador clivável é derivado de um precursor ligador selecionado do grupo que consiste em dipeptídeos e tripeptídeos. Em certas modalidades, o ligador clivável é derivado de um dipeptídeo. Em certas modalidades, o ligador clivável é derivado de um tripeptídeo. Em certas modalidades o ligador clivável é derivado de um precursor ligador derivado de valina-alanina, valina-ácido glutâmico, fenilalanina-homolisina, fenilalanina-lisina, fenilalanina-homolisina, ou glicina-glicina-glicina.

[00136] Em certas modalidades o ligador clivável é derivado de um precursor ligador selecionado do grupo que consiste em dipeptídeos,tripeptídeos, tetrapeptídeos, e pentapeptídeos; ou é onde aa é um resíduo de aminoácido natural ou não natural; ou é onde o anel é um anel de 4-7 membros heterocíclico compreendendo 3-6 átomos de carbono. Em certas modalidades o ligador clivável é derivado de um precursor ligador selecionado do grupo que consiste em dipeptídeos e tripeptídeos; ou éonde aa é um resíduo de aminoácido natural ou não natural; ou é onde o anel é um anel de 4-7 membros heterocíclico compreendendo 3-6 átomos de carbono.

[00137] Em certas modalidades o ligador clivável é derivado de um precursor ligador selecionado de valina-alanina, valina-ácido glutâmico, alanina-fenilalanina; fenilalanina-lisina; fenilalanina-homolisina; e glicina- glicina-glicina (Gli-Gli-Gli); ou éonde aa é um resíduo de aminoácido natural ou não natural; ou é onde o anel é um anel de 4-7 membros heterocíclico compreendendo 3-6 átomos de carbono.

[00138] Em certas modalidades o ligador clivável é

Grupos hidrofílicos

[00139] Grupos hidrofílicos facilitam aumentar a hidrofilicidade dos compostos aqui descritos. Acredita-se que maior hidrofilicidade permite melhor solubilidade em soluções aquosas, tais como soluções aquosas encontradas em sistemas biológicos. Grupos hidrofílicos também podem funcionar como grupos espaçadores ou substituintes, que são descritos em mais detalhes aqui.

[00140] Em certas modalidades, o grupo hidrofílico é determinado HP e HP1 aqui. Grupos hidrofílicos usados incluem aqueles aqui descritos. Em certas modalidades, o grupo hidrofílico HP é um divalente poli(etileno glicol). Em certas modalidades, o grupo hidrofílico HP é um poli(etileno glicol) divalente de acordo com o fórmula: em que m é um número inteiro de 1 a 12, opcionalmente 1 a 4, opcionalmente 2 a 4. Em certas modalidades, o grupo hidrofílico HP1 é um grupo hidrofílico divalente ou um onde RSG é um grupo hidrofílico monovalente. Em certas modalidades, RSG é um poli(etileno glicol) monovalente. Em certas modalidades, RSG é um poli(etileno glicol) monovalente de acordo com o fórmula: em que R é -H ou -CH3 e m é um número inteiro de 1 a 12, opcionalmente 1 a 4, opcionalmente 2 a 4. Em certas modalidades, RSG é um monovalente poli(etileno glicol) de acordo com o fórmula: em que R é -H ou -CH3 e m é um número inteiro de 1 a 12, opcionalmente 1 a 4, opcionalmente 2 a 4; RSG ou é -C1-C6- alquileno-S(O)3-. Em certas modalidades, RSG é um poli(etileno glicol) monovalente de acordo com o fórmula: em que R é -H ou -CH3 e m é 2 a 4; ou é - CH2CH2-S(O)3-. Em certas modalidades, RSG é um poli(etileno glicol) monovalente de acordo com o fórmula: ou RSG é -CH2CH2-S(O)3-. Em certas modalidades, RSG é -C1-C6-alquileno-S(O)3-. Em certas modalidades, RSG é - CH2CH2-S(O)3-.

Grupos espaçadores

[00141] Grupos espaçadores facilitam o espaçamento do grupo de conjugação dos outros grupos dos compostos aqui descritos. Este espaçamento pode levar à conjugação mais eficientes dos compostos aqui descritos a um segundo composto. O grupo espaçador também pode estabilizar o grupo de conjugação.Em certas modalidades, o grupo espaçador é determinado SG aqui. Grupos espaçadores usados incluem aqueles aqui descritos. Em certas modalidades, o grupo espaçador é:

[00142] Em certas modalidades, SG, W4, e o grupo HP ou HP1 combinam para formar um poli(etileno glicol) divalente de acordo com o fórmula:em que m é um número inteiro de 1 a 12, opcionalmente 1 a 4, opcionalmente 2 a 4.

Grupos de conjugação e resíduos dos mesmos

[00143] Grupos de conjugação facilitam a conjugação dos compostos aqui descritos a um segundo composto, tal como uma fração de alvejamento. Em certas modalidades, o grupo de conjugação é determinado R aqui. Grupos de conjugação podem reagir por meio de qualquer mecanismo de reação adequado conhecido pelos versados na técnica. Em certas modalidades, um grupo de conjugação reage por meio de uma reação de cicloadição [3+2] alcino-azida, reação de ligação Diels-Alder com demanda inversa de elétrons, reação tiol-eletrófilo, ou reação carbonila-oxiamina, da maneira aqui descrita com mais detalhes. Em certas modalidades, o grupo de conjugação compreende um alcino, alceno tensionado, tetrazina, tiol, resíduo de para- acetil-fenilalanina, oxiamina, maleimida, ou azida. Em certas modalidades, o grupo de conjugação é: ou -SH; em que R201 é alquila inferior. Em uma modalidade, R201 é metila, etila, ou propila. Em uma modalidade, R201 é metila.

[00144] Após a conjugação, um resíduo divalente do grupo de conjugação é formado e está ligado ao resíduo de um segundo composto. A estrutura do resíduo divalente é determinada pelo tipo de reação de conjugação empregada para formar o conjugado.

[00145] Em certas modalidades quando um conjugado é formado pode meio de uma reação de cicloadição [3+2] alcino-azida, o resíduo divalente do grupo de conjugação compreende um anel triazol ou grupos cíclicos fundidos compreendendo um anel triazol. Em certa modalidade, quando um conjugado é formado por meio de uma reação de cicloadição [3+2] alcino-azida, o resíduo divalente do grupo de conjugação é:

[00146] Em certas modalidades quando um conjugado é formado por meio de uma reação de ligação Diels-Alder com demanda inversa de elétrons com tetrazina, o resíduo divalente do grupo de conjugação compreende um anel bicíclico fundido com pelo menos dois átomos de nitrogênio adjacentes no anel. Em certas modalidades quando um conjugado é formado por meio de uma reação de ligação Diels-Alder com demanda inversa de elétrons com tetrazina, o resíduo divalente do grupo de conjugação é:

[00147] Em certas modalidades quando um conjugado é formado por meio de uma reação tiol-maleimida, o resíduo divalente do grupo de conjugação compreende succinimidileno e uma ligação de enxofre. Em certas modalidades, quando um conjugado é formado por meio de uma reação de tiol-maleimida, o resíduo divalente do grupo de conjugação é:

[00148] Em certas modalidades quando um conjugado é formado por meio de uma reação carbonila-oxiamina, o resíduo divalente do grupo de conjugação compreende um resíduo divalente de um aminoácido não natural. Em certas modalidades quando um conjugado é formado por meio de uma reação de carbonila-oxiamina, o resíduo divalente do grupo de conjugação é:

[00149] Em certas modalidades quando um conjugado é formado por meio de uma reação de carbonila-oxiamina, o resíduo divalente do grupo de conjugação compreende uma ligação oxime. Em certas modalidades, quando um conjugado é formado por meio de uma reação carbonila-oxiamina, o resíduo divalente do grupo de conjugação é:

[00150] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um é um anel arila ou heteroarila divalente de seis membros monocíclico substituído ou não substituído. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um anel heteroarila divalente de nove membros, substituído ou não substituído, fundido bicíclico. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é fenileno ou indolileno, cada um dos quais sendo não substituído ou substituído. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é qualquer dos seguintes:

[00151] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que L é ausente. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XVIb1000-1002b, I-Ib, ou X-XIXb-2, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que L é -CH2-.

[00152] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “EG” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG compreende fenileno, carboxileno, amino, ou uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas I 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “EG” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG é:em que cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, -NO2, -CN, flúor, bromo, cloro, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino- C(O)- e dialquilaminoC(O)-. Nas segundas e terceiras estruturas, os versados na técnica reconhecerão que EG está ligado a um RT que não está na cadeia principal da Fórmula 1000 ou (I), da maneira indicada na descrição anterior da Fórmula 1000 e (I). Em algumas modalidades, cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino-C(O)- e dialquilaminoC(O)-. Em modalidades adicionais, cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, - NO2, -CN, flúor, bromo, e cloro.

[00153] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “RT” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que RT compreende um resíduo de um aminoácido natural ou não natural ou um resíduo de um açúcar. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas I1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “RT” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que RT é:

[00154] Versados na técnica reconhecerão que a primeira estrutura é divalente e pode estar ligada na cadeia principal da Fórmula 1000 ou (I), e que a segunda estrutura é monovalente e pode estar ligada ao EG, da maneira representada na Fórmula 1000 e (I) anterior.

[00155] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “HP” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que HP compreende poli(etileno glicol). Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “HP” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que HP é:em que m é um número inteiro de 1 a 12.

[00156] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “SG” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que SG com compreende alquileno C1-C10, alquileno C4-C6, -C(O)-, ou combinação dos mesmos. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “SG” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que SG é:

[00157] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “W1”, “W2”, “W3”, “W4”, e/ou “W5” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, ausente, ou compreendem uma cetona divalente, éster divalente, éter divalente, amida divalente, amina divalente, alquileno, arileno, sulfeto, dissulfeto, -C(O)-, ou uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “W1”, “W2”, “W3”, “W4”, e/ou “W5” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, ausente, ou compreendem -C(O)-, -O-, -C(O)NH-, -C(O)NH-alquila-, -OC(O)NH-, - SC(O)NH-, -NH-, -NH-alquila-, -N(CH3)CH2CH2N(CH3)-, -S-, -S-S-, - OCH2CH2O-, ou uma combinação dos mesmos.

[00158] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “R” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é um grupo de conjugação ou um resíduo de um grupo de conjugação. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 10001002b e I-XIXb-2 em que o grupo “R” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R compreende um alcino, alceno tensionado, tetrazina, tiol, resíduo de para-acetil-fenilalanina, oxiamina, maleimida, haleto de carbonil alquila, sulfeto de arila, ou azida. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “R” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é: -N3, ou -SH; em que R201 é alquila inferior. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “R” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:R201 é metila, etila, ou propila. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1002b e I-XIXb-2 em que o grupo “R” está presente na fórmula, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:R201 é metila.

[00159] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas I-IXb, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que W1, W2, W3, W4, W5, EG, RT, HP, SG, e R combinam para formar -H.

[00160] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula 1000a ou Fórmula 1000b:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que X, EG, RT, HP, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000 e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00161] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula Ia ou Fórmula Ib:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula I e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00162] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula 1001a ou Fórmula 1001b:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1001 e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00163] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula 1002a ou Fórmula 1002b:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1002 e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00164] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas II-IX-1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, e R são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000, I, 1001, e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00165] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas IIa-IXa-1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, e R são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000, I, 1001, e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00166] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas IIb-IXb-1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, e R são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000, I, 1001, e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00167] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula X:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que L e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula I.

[00168] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula Xa ou Xb:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que L e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula I.

[00169] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XI-XVI-1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000, I, 1001, e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00170] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XIa-XVIa-1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000, I, 1001, e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00171] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas XIb-XIVb-1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG, RT, HP, RT1, HP1, SG, W1, W2, W3, W4, W5, R, L, e Ar são da maneira descrita no contexto da Fórmula 1000, I, 1001, e/ou quaisquer das modalidades aqui descritas.

[00172] Em uma modalidade, o composto da Fórmula 1000 ou 1001 é aquele onde X é e RT1 é um grupo de gatilho de liberação, ou um ligador clivável; ou HP1 é ausente e RT1 é um ligador clivável; e todos os outros grupos são da maneira definida pela Fórmula 1000, 1001, e/ou qualquer das modalidades aqui descritas. Em uma modalidade, o composto da Fórmula 1000 ou 1001 é aquele onde X é e RT1 é um grupo de gatilho de liberação, ou um ligador clivável; ou HP1 é ausente e RT1 é um ligador clivável; EG é e todos os outros grupos são da maneira definida pela Fórmula 1000, 1001, e/ou qualquer das modalidades aqui descritas. Em uma modalidade, o composto da Fórmula 1000 ou 1001 é aquele onde X é um grupo de gatilho de liberação, ou um ligador clivável; ou HP1 é ausente e RT1 é um ligador clivável; EG é W1-W5 estão ausentes; e todos os outros grupos são da maneira definida pela Fórmula 1000, 1001, e/ou qualquer das modalidades aqui descritas. Em certas modalidades, L é ausente.

[00173] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com a Fórmula 1000: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é um indolileno substituído ou não substituído ou anel fenileno substituído ou não substituído; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, ausente, -C(O)-, -O-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)NH-, - C(O)NH-alquila-, -OC(O)NH-, -SC(O)NH-, -NH-, -N(alquila)-, -N(R)- alquileno-N(R)- (onde cada R é independentemente H ou alquila), - N(CH3)CH2CH2N(CH3)-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH(CH3)-, -C(CH3)2-, - CH2CH2CH2-, fenileno, -NHCH2CH2C(O)-, -C(O)CH2CH2NH-, -S-, -S-S-, -OCH2CH2O-, ou o reverse do mesmo; EG é ausente, ou EG é selecionado de em que cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, -NO2, -CN, flúor, bromo, cloro, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino- C(O)- e dialquilamino-C(O)-; RT quando na cadeia principal équando ligado a um grupo EG éem RT1 é ausente, valina-alanina, valina- ácido glutâmico, alanina-fenilalanina; fenilalanina-lisina; fenilalaninahomolisina; e glicina-glicina-glicina (gli-gli-gli), onde aa é um resíduo de aminoácido natural ou não natural, ouonde o anel um anel de 4-7 membros heterocíclico compreendendo 3-6 átomos de carbono; HP é ausente ouem que m é um número inteiro de 1 a 12; HP1 é ausente ouem que R é –H ou -CH3 e m é um número inteiro de 1 a 12 ou RHP é -alquilenoS(O)3-. SG R é um grupo de conjugação terminal; ou, alternativamente, W1, W2, W3, W4, W5, EG, RT, HP, SG, e R combinam para formar -H.

[00174] Em algumas modalidades, o composto é aquele onde X é - HP1-RT1-EG-, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, - HP1-RT1- onde RT1 é um ligador clivável, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, -RT1-, -RT-, -RT-EG-, RT1-EG-, ou -EG(RT)-; e todos os outros grupos são da maneira definida em qualquer uma da fórmula e/ou modalidades aqui descritas. Em algumas modalidades, o composto é aquele onde X é -HP1-RT1-EG-, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, -HP1-RT1- onde RT1 é um ligador clivável, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, -RT1-, -RT-, -RT-EG-, RT1-EG-, ou -EG(RT)-; o grupo de gatilho de liberação facilita a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado junto com um grupo eliminador; e todos os outros grupos são da maneira definida em qualquer uma da fórmula e/ou modalidades aqui descritas. Em algumas modalidades, o composto é aquele onde X é -HP1-RT1-EG-, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, -HP1-RT1- onde RT1 é um ligador clivável, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, - RT1-, -RT-, -RT-EG-, RT1-EG-, ou -EG(RT)-; W1, W4, W5, e L são independentemente uma ligação simples ou ausente; o grupo de gatilho de liberação facilita a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado junto com um grupo eliminador; e todos os outros grupos são da maneira definida em qualquer uma da fórmula e/ou modalidades aqui descritas. Em algumas modalidades, o composto é aquele onde X é -HP1-RT1-EG-, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, -HP1-RT1- onde RT1 é um ligador clivável, -HP1-RT1- onde RT1 é um grupo de gatilho de liberação, -RT1-, -RT-, -RT-EG-, RT1-EG-, ou - EG(RT)-; W1, W4, W5, e L são independentemente uma ligação simples ou ° o ausente; SG é o grupo de gatilho de liberação facilita a separação de uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado junto com um grupo eliminador; e todos os outros grupos são da maneira definida em qualquer uma da fórmula e/ou modalidades aqui descritas.

[00175] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 101-108 ou 1-8: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00176] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 101a-108a ou 1a-8a: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00177] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 101b-108b ou 1-8b: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Conjugados

[00178] Os compostos aqui descritos (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo) podem ser reagidos com um segundo composto (por exemplo, um polipeptídeo ou anticorpo) para formar um conjugado. O segundo composto pode ser qualquer composto conhecido para ser usado para conjugação com os compostos aqui descritos (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 10001000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo). Os segundos compostos usados incluem polipeptídeos e anticorpos.

[00179] Portanto, em um aspecto, é aqui fornecido um conjugado compreendendo um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 10021002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo) ligado a um segundo composto.

[00180] Em uma modalidade, o conjugado é de acordo com a seguinte Fórmula E1:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é ausente ou é um grupo eliminador; cada RT é um grupo de gatilho de liberação, na cadeia principal da Fórmula 1000 ou ligado a EG, em que cada RT é opcional; RT1 é um grupo de gatilho de liberação, ou um ligador clivável, ou RT1 é ausente; HP é uma ligação simples, ausente, ou um grupo hidrofílico divalente; HP1 é uma ligação simples, ausente, um grupo hidrofílico divalente, ou onde RHP é um grupo hidrofílico monovalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal; ou, alternativamente, W1, W2, W3, W4, W5, EG, RT, HP, SG, e R combinam para formar -H.

[00181] Em uma modalidade, o conjugado é de acordo com a seguinte Fórmula C1: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo de um segundo composto; Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é um grupo eliminador; cada RT é um grupo de gatilho de liberação, e um RT é opcional; HP é uma ligação simples, ausente, ou um grupo hidrofílico divalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal.

[00182] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com a Fórmula (F1) ou (G1): ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo de um segundo composto; Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros, ou um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é ausente ou é um grupo eliminador; RT1 é um grupo de gatilho de liberação ou um ligador clivável; RT é um grupo de gatilho de liberação ligado ao EG; e em que RT e RT1 são opcionais; HP1 é ligação simples, ausente, um grupo hidrofílico RSG divalente, ou onde RSG é um grupo hidrofílico monovalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e R é um resíduo divalente de um grupo de conjugação terminal.

[00183] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um anel arila ou heteroarila monocíclico substituído ou não substituído divalente com cinco ou seis membros. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um é um anel arila ou heteroarila divalente de seis membros monocíclico substituído ou não substituído. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um anel arila ou heteroarila bicíclico fundido substituído ou não substituído divalente com oito, nove ou dez membros. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é um anel de heteroarila divalente de oito-nove membros, substituído ou não substituído, fundido bicíclico. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é fenileno ou indolileno, cada um dos quais é não substituído ou substituído. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que Ar é qualquer dos seguintes:

[00184] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que L é ausente. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que L é -CH2-.

[00185] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG compreende fenileno, carboxileno, amina, ou uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que EG é:em que cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, -NO2, -CN, flúor, bromo, cloro, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino- C(O)- e dialquilaminoC(O)-. Nas segundas e terceiras estruturas, versados na técnica reconhecerão que EG está ligado a um RT que não está na cadeia principal da Fórmula (I), da maneira indicada na descrição anterior da Fórmula (I). Em algumas modalidades, cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino-C(O)- e dialquilaminoC(O)-. Em modalidades adicionais, cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, -NO2, - CN, flúor, bromo, e cloro.

[00186] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que RT compreende um resíduo de um aminoácido natural ou não natural ou um resíduo de um açúcar. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que RT é:

[00187] Versados na técnica reconhecerão que a primeira estrutura é divalente e pode estar ligada na cadeia principal da Fórmula 1000 ou (I), e que a segunda estrutura é monovalente e pode estar ligada ao EG da maneira representada na Fórmula (I) e 1000 anterior.

[00188] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que HP compreende poli(etileno glicol). Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que HP é:em que m é um número inteiro de 1 a 12.

[00189] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que SG compreende alquileno C1-C10, alquileno C4-C6, -C(O)- , ou combinação dos mesmos. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que SG é:

[00190] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, ausente, ou compreendem uma cetona divalente, éster divalente, éter divalente, amida divalente, amina divalente, alquileno, arileno, sulfeto, dissulfeto, -C(O)-, ou uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, ausente, ou compreendem -C(O)-, -O-, -C(O)NH-, -C(O)NH- alquila-, -OC(O)NH-, -SC(O)NH-, -NH-, -NH-alquila-, - N(CH3)CH2CH2N(CH3)-, -S-, -S-S-, -OCH2CH2O-, ou uma combinação dos mesmos.

[00191] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R compreende um anel triazol. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é um anel triazol ou grupos cíclicos fundidos compreendendo um anel triazol. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:

[00192] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R compreende um anel bicíclico fundido com pelo menos dois átomos de nitrogênio adjacentes no anel. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:

[00193] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R compreende uma ligação de enxofre. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R compreende um resíduo divalente de um aminoácido não natural. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:

[00194] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que compreende uma ligação oxime. Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:

[00195] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b,ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que R é:

[00196] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que COMP é um resíduo de qualquer composto conhecido para ser usado para conjugação com os compostos de Hemiasterlina modificada aqui descritos (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo). Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que COMP é um resíduo de um polipeptídeo, anticorpo, ou cadeia de anticorpo. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que COMP é um resíduo de um polipeptídeo. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que COMP é um resíduo de um anticorpo. Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1- F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo; em que COMP é um resíduo de uma cadeia de anticorpo.

[00197] Em um aspecto, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado compreendendo um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 10021002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo) ligado a um polipeptídeo, em que o polipeptídeo conjugado está de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP é um resíduo do polipeptídeo. Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C15b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R compreende um anel triazol ou grupos cíclicos fundidos compreendendo um anel triazol. Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R é:

[00198] Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R compreende um anel bicíclico fundido, em que o anel bicíclico fundido apresenta pelo menos dois átomos de nitrogênio adjacentes no anel. Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R é:

[00199] Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R compreende uma ligação de enxofre. Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R é:

[00200] Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R compreende um resíduo divalente de um aminoácido não natural. Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R é:

[00201] Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R compreende uma ligação oxime. Em uma modalidade, é aqui fornecido um polipeptídeo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do polipeptídeo; e R é:

[00202] Em um aspecto, é aqui fornecido um anticorpo conjugado compreendendo um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 10021002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo) ligado a um anticorpo de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP é um resíduo do anticorpo. Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R compreende um anel triazol ou grupos cíclicos fundidos compreendendo um anel triazol. Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R é:

[00203] Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1- G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R compreende um anel bicíclico fundido, em que o anel bicíclico fundido apresenta pelo menos dois átomos de nitrogênio adjacentes no anel. Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R é:

[00204] Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1- G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R compreende uma ligação de enxofre. Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R é:

[00205] Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1- G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R compreende um resíduo divalente de um aminoácido não natural. Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R é:

[00206] Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1- G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R compreende uma ligação oxime. Em uma modalidade, é aqui fornecido um anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do anticorpo; e R é:

[00207] Em um aspecto, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado compreendendo um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo) ligado a uma cadeia de anticorpo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo. Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R compreende um anel triazol ou grupos cíclicos fundidos compreendendo um anel triazol. Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R é:

[00208] Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R compreende um anel bicíclico fundido, em que o anel bicíclico fundido apresenta pelo menos dois átomos de nitrogênio adjacentes no anel. Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R é:

[00209] Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R compreende uma ligação de enxofre. Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R é:

[00210] Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R compreende um resíduo divalente de um aminoácido não natural. Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R é:

[00211] Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R compreende uma ligação oxime. Em uma modalidade, é aqui fornecida uma cadeia de anticorpo conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C13b, E1, F1-F13b, e G1-G13b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: COMP é um resíduo do cadeia de anticorpo; e R é:

[00212] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com a Fórmula C1a ou Fórmula C1b:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00213] Em uma modalidade, é aqui fornecido um conjugado de acordo com a seguinte fórmula: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das fórmulas e/ou modalidades aqui descritas.

[00214] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C2-C9: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00215] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são descritos no contexto de quaisquer das fórmulas ou modalidades aqui descritas.

[00216] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C2a-C9a: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00217] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são descritos no contexto de quaisquer das fórmulas ou modalidades aqui descritas.

[00218] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C2b-C9b: ou um sal, solvato, estereoisômero,farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00219] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são descritos no contexto de quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui descritas.

[00220] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C10-C13:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00221] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui.

[00222] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C10a-C13a:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[0223] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui.

[00224] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas C10b-C13b: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero mesmo, em que COMP, R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00225] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui.

[00226] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das Fórmulas C14-C17:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00227] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui.

[00228] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das Fórmulas C14a-C17a:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I-XVIb.

[00229] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas: ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui.

[00230] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das Fórmulas C14b-C17b:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que COMP, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e I- XVIb.

[00231] Em uma modalidade, é aqui fornecido um composto de acordo com quaisquer das seguintes fórmulas:ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que todos os outros grupos são da maneira definida em quaisquer das Fórmulas ou modalidades aqui.

[00232] Em um aspecto, é aqui fornecido um método para produção de um conjugado (por exemplo, de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b), compreendendo colocar um composto aqui descrito (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas I-XVIIIb, 101-111b, ou 1-8b) em contato com um segundo composto em condições adequadas para conjugar o composto aqui descrito com o segundo composto; em que o segundo composto compreende um aminoácido modificado compreendendo um alcino, alceno tensionado, tetrazina, tiol, maleimida, carbonila, oxiamina, ou azida. Em uma modalidade, o segundo composto é um polipeptídeo. Em uma modalidade, o segundo composto é um anticorpo.Reações de conjugação Reação de cicloadição [3+2] Alcino-Azida

[00233] Vantajosamente, os compostos aqui descritos compreendendo um grupo alcino de conjugação terminal ou um grupo azida (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas I-IXb, XI-XVIIb, e 101111b) facilitam reações seletivas e eficientes com um segundo composto compreendendo um grupo azida ou grupo alcino complementar. Acredita-se que os grupos azida e alcino reagem em uma reação de cicloadição 1,3- dipolar para formar uma fração de 1,2,3-triazolileno que liga o composto aqui descrito, compreendendo um grupo alcino ou um grupo azida, ao segundo composto. Esta reação entre uma azida e alcino para formar um triazol é em geral conhecida pelos versados na técnica como uma reação de cicloadição Huisgen ou uma reação de cicloadição [3+2] alcino-azida.

[00234] A reatividade exclusiva dos grupos funcionais azida e alcino torna-os utilizáveis para a modificação seletiva de polipeptídeos e outras moléculas biológicas. Azidas orgânicas, particularmente azidas alifáticas, e alcinos são em geral estáveis em relação às condições químicas reativas comuns. Em particular, tanto os grupos funcionais de azida quanto de alcino são inertes nas cadeias laterais dos 20 aminoácidos comuns encontrados em polipeptídeos de ocorrência natural. Acredita-se que, quando colocados em proximidade, a natureza "acionada por mola" dos grupos azida e alcino é revelada e reagem seletivamente e de maneira eficiente por meio de uma reação de cicloadição [3+2] alcino-azida para gerar o triazol correspondente. Vide, por exemplo, Chin J., et al., Science 301:964-7 (2003); Wang, Q., et al., J. Am. Chem. Soc. 125, 3192-3193 (2003); Chin, J. W., et al., J. Am. Chem. Soc. 124:9026-9027 (2002).

[00235] Em decorrência da reação de cicloadição [3+2] alcino-azida envolve uma reação de cicloadição seletiva [vide, por exemplo, Padwa, A., em COMPREHENSIVE ORGANIC SYNTHESIS, Vol. 4, (ed. Trost, B. M., 1991), pp. 1069-1109; Huisgen, R. em 1,3-DIPOLAR CYCLOADDITION CHEMISTRY, (ed. Padwa, A., 1984), pp. 1-176], sem ser uma substituição nucleofílica, a incorporação de aminoácidos codificados de maneira não natural que carregam cadeias laterais contendo azida e alcino permite que os polipeptídeos resultantes sejam modificados seletivamente na posição do aminoácido codificado de maneira não natural. As reações de cicloadição que envolvem compostos contendo azida ou alcino podem ser realizadas em temperatura ambiente em condições aquosas, pela adição de Cu(II) (incluindo, mas sem limitação, na forma de uma quantidade catalítica de CuSO4) na presença de um agente redutor para reduzir Cu(II) a Cu(I), in situ, em quantidade catalítica. Vide, por exemplo, Wang, Q., et al., J. Am. Chem. Soc. 125, 3192-3193 (2003); Tornoe, C. W., et al., J. Org. Chem. 67:30573064 (2002); Rostovtsev, et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41:2596-2599 (2002).Os agentes redutores exemplares incluem, mas sem limitação, ascorbato, cobre metálico, quinina, hidroquinona, vitamina K, glutationa, cisteína, Fe2+, Co2+, e um potencial elétrico aplicado.Reação de ligação com demanda inversa de elétrons

[00236] Vantajosamente, os compostos compreendendo um grupo tetrazina ou alceno tensionado terminal aqui fornecido facilita reações seletivas e eficientes com um segundo composto compreendendo um grupo alceno tensionado ou tetrazina. Acredita-se que a tetrazina e alceno tensionado reagem em uma reação Diels-Alder com demanda inversa, seguido por uma reação retro-Diels-Alder que liga os compostos compreendendo um grupo tetrazina ou alceno tensionado terminal aqui fornecido ao segundo composto. Acredita-se que a reação seja específica, com pouca a nenhuma reatividade cruzada com grupos funcionais que ocorrem em biomoléculas. A reação pode ser realizada em condições brandas, por exemplo, em temperatura ambiente e sem um catalisador. Esta reação entre uma tetrazina e um alceno tensionado é em geral conhecida pelos versados na técnica como uma reação de ligação de tetrazina.Reações Tiol

[00237] Vantajosamente, os compostos compreendendo um grupo tiol terminal ou grupo formador de dissulfeto ou eletrofílico adequado aqui fornecidos facilitam reações seletivas e eficientes com um segundo composto compreendendo um grupo complementar eletrofílico, ou formador de dissulfeto, ou grupo tiol. Acredita-se que estas reações sejam seletivas com pouca a nenhuma reatividade cruzada com grupos funcionais que ocorrem em biomoléculas. Em uma outra modalidade, a reação tiol não inclui reação de um grupo maleimida.Reação Carbonila-Oxiamina

[00238] Vantajosamente, os compostos compreendendo um grupo carbonila ou oxiamina terminal aqui fornecidos facilitam reações seletivas e eficientes com um segundo composto compreendendo um grupo oxiamina ou carbonila. Acredita-se que a carbonila e oxiamina reagem para formar uma ligação oxime. Acredita-se que a reação seja específica, com pouca ou nenhuma reatividade cruzada com grupos funcionais que ocorrem em biomoléculas.

Outras reações

[00239] Outras reações adequadas de conjugação são descritas na literatura. Vide, por exemplo, Lang, K. e Chin, J. 2014, Bioorthogonal Reactions for Labeling Proteins, ACS Chem Biol 9, 16-20; Paterson, D. M. et al. 2014, Finding the Right (Bioorthogonal) Chemistry, ACS Chem Biol 9, 592-605; King, M. e Wagner, A. 2014, Developments in the Field of Bioorthogonal Bond Forming Reactions - Past and Present Trends, Bioconjugate Chem., 2014, 25 (5), pp 825-839; e Ramil, C.P. e Lin, Q., 2013, Bioorthogonal chemistry: strategies and recent developments, Chem Commun 49, 11007-11022.

Reações de liberação

[00240] Reações de liberação são reações que agem para liberar uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito do composto ou conjugado in vivo e/ou in vitro. Em certas modalidades, a porção biologicamente ativa liberada é um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1-8b, ou um sal, solvato, estereoisômero, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um exemplo de uma reação de liberação é uma reação intramolecular entre um grupo eliminador e um grupo de gatilho de liberação de um composto ou conjugado aqui descrito para liberar uma porção biologicamente ativa de um composto ou conjugado aqui descrito. O grupo eliminador pode ele mesmo se transformar em dois componentes reativos, da maneira exemplificada nestas reações, onde X- é uma droga com um heteroátomo N ou O para ligação. Reações de liberação exemplares são representadas nos esquemas a seguir:

Composições

[00241] Os compostos e conjugados aqui descritos podem ser formulados nas composições usando métodos disponíveis na técnica, aqueles aqui descritos. Qualquer dos compostos e conjugados aqui descritos pode ser fornecido em uma composição farmacêutica apropriada e ser administrado por uma via de administração adequada.

[00242] Em um aspecto, é aqui fornecida uma composição farmacêutica compreendendo: um composto (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb- 2, 101-111b, ou 1-8b) ou conjugado (por exemplo, um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1-C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b) da maneira aqui descrita; e um excipiente, carreador, ou diluente farmaceuticamente aceitável.

[00243] Em certas modalidades, as composições farmacêuticas aqui fornecidas compreendem adicionalmente um carreador farmaceuticamente aceitável. O carreador pode ser um diluente, excipiente, ou veículo com o qual a composição farmacêutica é administrada. Tais carreadores farmacêuticos podem ser líquidos estéreis, tais como água e óleos, incluindo aqueles de petróleo, origem animal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim e similares. Soluções salina e dextrose aquosa, e soluções de glicerol também podem ser empregadas como carreadores líquidos, particularmente para soluções injetáveis. Excipientes farmacêuticos adequados incluem amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, sílica gel, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite em pó, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e similares. A composição farmacêutica, se desejado, também podem conter quantidades menores de agentes umectantes ou emulsificantes, ou agentes de tamponamento de pH. As composições farmacêuticas podem estar na forma de soluções, suspensões, emulsões, comprimidos, pílulas, cápsulas, pós, formulações de liberação contínua e similares. As formulações orais podem incluir carreadores padrões, tais como graus farmacêuticos de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, sacarina sódica, celulose, carbonato de magnésio, etc. Exemplos de carreadores farmacêuticos adequados são descritos em E.W. Martin, 1990,Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.

[00244] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é fornecida em uma forma adequada para administração a um sujeito humano. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica conterá uma quantidade profilaticamente ou terapeuticamente efetiva do polipeptídeo junto com uma quantidade adequada de carreador, de maneira a fornecer a forma para a administração adequada ao paciente. A formulação deve ser adequada ao modo de administração.

[00245] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é fornecida em uma forma adequada para administração intravenosa. Tipicamente, composições adequadas para administração intravenosa são soluções em tampão aquoso isotônico estéril. Onde necessário, a composição também pode incluir um agente solubilizante e um anestésico local, tal como lignocaína, para aliviar a dor no sítio da injeção. Tais composições, entretanto, podem ser administradas por uma via sem ser a administração intravenosa.

[00246] Em modalidades particulares, a composição farmacêutica é adequada para administração subcutânea. Em modalidades particulares, a composição farmacêutica é adequada para administração intramuscular.

[00247] Os componentes da composição farmacêutica podem ser fornecidos tanto separadamente quanto misturados juntos na forma de dosagem única, por exemplo, como um pó seco liofilizado ou concentrado sem água. Onde a composição deve ser administrada por infusão, ela pode ser dispensada com uma garrafa de infusão contendo água ou salina de grau farmacêutico estéril. Onde a composição deve ser administrada por injeção, uma quantidade abundante de água estéril para injeção ou salina pode ser fornecida, de maneira tal que os ingredientes possam ser misturados antes da administração.

[00248] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é fornecida como um pó liofilizado estéril que é capaz de ser reconstituído na concentração apropriada para administração a um sujeito. Em algumas modalidades, polipeptídeos são fornecidos como um concentrado livre de água. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é fornecido como um pó liofilizado estéril em uma dosagem única de pelo menos 0,5 mg, pelo menos 1 mg, pelo menos 2 mg, pelo menos 3 mg, pelo menos 5 mg, pelo menos 10 mg, pelo menos 15 mg, pelo menos 25 mg, pelo menos 30 mg, pelo menos 35 mg, pelo menos 45 mg, pelo menos 50 mg, pelo menos 60 mg, ou pelo menos 75 mg.

[00249] Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica é fornecida na forma líquida. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é fornecida na forma líquida e é substancialmente livre de agentes tensoativos e/ou sais inorgânicos. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é fornecido como na forma líquida em uma dosagem única de pelo menos 0,1 mg/mL, pelo menos 0,5 mg/mL, pelo menos 1 mg/mL, pelo menos 2,5 mg/mL, pelo menos 3 mg/mL, pelo menos 5 mg/mL, pelo menos 8 mg/mL, pelo menos 10 mg/mL, pelo menos 15 mg/mL, pelo menos 25 mg/mL, pelo menos 30 mg/mL, ou pelo menos 60 mg/mL.

[00250] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada como uma forma de sal. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles formados com ânions, tais como aqueles derivados de ácidos hidroclórico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., e aqueles formados com cátions tais como aqueles derivados de sódio, potássio, amônio, cálcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína, etc.

[00251] Em uso terapêutico, o profissional determinará a posologia mais adequada de acordo com um tratamento preventivo ou curativo, e de acordo com a idade, peso, estágio da doença e outros fatores específicos a um sujeito a ser tratado. Em certas modalidades, doses são de cerca de 1 a cerca de 1000 mg por dia para um adulto, ou de cerca de 5 a cerca de 250 mg por dia, ou de cerca de 10 a 50 mg por dia para um adulto. Em certas modalidades, doses são de cerca de 5 a cerca de 400 mg por dia ou 25 a 200 mg por dia por adulto. Em certas modalidades, taxas de dose de cerca de 50 a cerca de 500 mg por dia são também contempladas.

Métodos de uso para terapia ou profilaxia

[00252] Certos compostos, conjugados, polipeptídeos, e anticorpos aqui fornecidos podem ser usados para o tratamento ou prevenção de qualquer doença ou condição considerada adequada para o profissional versado na técnica. Em geral, um método de tratamento ou prevenção inclui a administração de uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente efetiva de um composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo, a um sujeito que precisa do mesmo, para tratar ou prevenir a doença ou condição.

[00253] Em um aspecto, é aqui fornecido um método para inibição de polimerização de tubulina em um sujeito que precisa do mesmo, compreendendo administrar uma quantidade eficiente de um composto (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 10001000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b), conjugado (por exemplo, um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b), ou composição compreendendo o composto ou conjugado, da maneira aqui descrita, a um sujeito.

[00254] Em um aspecto, é aqui fornecido um método para tratamento de proliferação celular ou câncer em um sujeito que precisa do mesmo, compreendendo administrar uma quantidade eficiente de um composto (por exemplo, um composto de acordo com qualquer uma das Fórmulas 10001000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2, 101-111b, ou 1-8b), conjugado (por exemplo, um conjugado de acordo com qualquer uma das Fórmulas C1- C17b, E1, F1-F17b, e G1-G17b), ou composição compreendendo o composto ou conjugado, da maneira aqui descrita, a um sujeito.

[00255] Uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo, é uma quantidade que é eficiente para reduzir a gravidade, a duração e/ou os sintomas de uma doença ou condição particular. A quantidade do composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo, que será terapeuticamente eficiente na prevenção, administração, tratamento e/ou melhora de uma doença particular pode ser determinada por técnicas clínicas padrões. A quantidade exata do composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo, a ser administrada depende em parte da via de administração, da gravidade doa doença ou condição particular, e pode ser decidida de acordo com o julgamento do profissional e cada circunstância do sujeito.

[00256] Em algumas modalidades, a quantidade eficiente do composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo é aqui fornecida entre cerca de 0,025 mg/kg e cerca de 1.000 mg/kg de peso corporal de um sujeito humano. Em certas modalidades, o composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo é administrado a um sujeito humano em uma quantidade de cerca de 1000 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 950 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 900 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 850 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 800 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 750 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 700 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 650 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 600 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 550 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 500 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 450 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 400 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 350 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 300 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 250 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 200 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 150 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 100 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 95 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 90 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 85 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 80 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 75 mg/kg de peso corporal ou menos, cerca de 70 mg/kg de peso corporal ou menos, ou cerca de 65 mg/kg de peso corporal ou menos.

[00257] Em algumas modalidades, a quantidade eficiente de composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo é aqui fornecido entre cerca de 0,025 mg/kg e cerca de 60 mg/kg de peso corporal de um sujeito humano. Em algumas modalidades, a quantidade eficiente de um composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo da composição farmacêutica é aqui fornecida cerca de 0,025 mg/kg ou menos, cerca de 0,05 mg/kg ou menos, cerca de 0,10 mg/kg ou menos, cerca de 0,20 mg/kg ou menos, cerca de 0,40 mg/kg ou menos, cerca de 0,80 mg/kg ou menos, cerca de 1,0 mg/kg ou menos, cerca de 1,5 mg/kg ou menos, cerca de 3 mg/kg ou menos, cerca de 5 mg/kg ou menos, cerca de 10 mg/kg ou menos, cerca de 15 mg/kg ou menos, cerca de 20 mg/kg ou menos, cerca de 25 mg/kg ou menos, cerca de 30 mg/kg ou menos, cerca de 35 mg/kg ou menos, cerca de 40 mg/kg ou menos, cerca de 45 mg/kg ou menos, cerca de 50 mg/kg ou cerca de 60 mg/kg ou menos.

[00258] A composição farmacêutica do método pode ser administrada usando qualquer método conhecido pelos versados na técnica. Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser administrada por administração intramuscularmente, intradermicamente, intraperitonealmente, intravenosamente, subcutaneamente, ou qualquer combinação destas. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é administrada subcutaneamente. Em algumas modalidades, a composição é administrada intravenosamente. Em algumas modalidades, a composição é administrada intramuscularmente.

[00259] Cânceres que pode ser tratados usando um composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica aqui descritos incluem cânceres onde Her2 é superexpresso, CD7 é superexpresso, Her2 não é superexpresso, e CD7 não é superexpresso, Em algumas modalidades, o câncer é câncer de célula pequena de pulmão, câncer de célula não pequena de pulmão, câncer ovariano, câncer ovariano resistente à platina, adenocarcinoma ovariano, câncer endometrial, câncer de mama, câncer de mama que superexpressa Her2, câncer de mama triplo-negativo, um linfoma, linfoma de célula grande, linfoma histiocítico e linfocítico misto difuso, linfoma de célula B folicular, câncer de cólon, carcinoma de cólon, adenocarcinoma de cólon, adenocarcinoma colorretal, melanoma, próstata, ou mieloma múltiplo. Em certas modalidades, o câncer é câncer de mama, câncer de pulmão, câncer ovariano, câncer endometrial, câncer de próstata, câncer de cólon, câncer colorretal, melanoma, câncer de próstata, ou mieloma múltiplo.

Métodos de ensaio

[00260] Compostos, conjugados, polipeptídeos, anticorpos, e composição farmacêutica compreendendo o mesmo aqui descritos podem ser avaliados quanto a sua atividade esperada, ou em relação a uma nova atividade, de acordo com qualquer ensaio evidente aos versados na técnica. O composto, conjugado, polipeptídeo, anticorpo, ou composição farmacêutica compreendendo o mesmo pode ser avaliado em relação à atividade em um ensaio funcional, ou quantificando a quantidade de proteína presente em um ensaio não funcional, por exemplo, imunocoloração, ELISA, quantificação em gel corado com Coomasie ou pela prata, etc., e determinado a razão de proteína biologicamente ativa para proteína total.

[00261] A quantidade de proteína produzida em uma reação de tradução pode ser avaliada de várias maneiras. Um método leva em consideração a disponibilidade de um ensaio que avalia a atividade da proteína particular que é traduzida. Um exemplo de um ensaio para avaliar a atividade de proteína é um sistema de ensaio com luciferase, ou sistema de ensaio com cloranfenicol acetil transferase. Estes ensaios avaliam a quantidade de proteína funcionalmente ativa produzida da reação de tradução. Os ensaios de atividade não avaliarão o tamanho completo da proteína que é inativa, em virtude do dobramento impróprio da proteína ou ausência de outras modificações pós transducionais necessárias para a atividade de proteína.

[00262] Um outro método de avaliar a quantidade de proteína produzida em reações duplas in vitro de transcrição e tradução é avaliar as reações usando uma quantidade conhecida de aminoácido radiomarcados, tais como 35S-metionina, 3H-leucina ou 14C-leucina, e avaliar subsequentemente a quantidade de aminoácido radiomarcado incorporado na proteína recentemente traduzida. Os ensaios de incorporação avaliarão a quantidade de aminoácidos radiomarcados em todas as proteínas produzidas em uma reação de tradução in vitro, incluindo produtos de proteína truncada. A proteína radiomarcada pode ser separada adicionalmente em um gel de proteína, e por autorradiografia ser confirmado que o produto apresenta o tamanho ideal, e que os produtos secundários de proteína não foram produzidos.

Preparação de compostos de Hemiasterlina modificada

[00263] Os compostos aqui fornecidos podem ser preparados, isolados ou obtidos por qualquer método evidente aos versados na técnica. Compostos aqui fornecidos podem ser preparados de acordo com o esquema de preparação geral aqui fornecido. As condições de reação, etapas e reagentes não fornecidos no esquema de preparação geral podem ser evidentes e conhecidos pelos versados na técnica, à luz dos exemplos aqui fornecidos. Esquema de preparação geral

[00264] No esquema de preparação geral R, SG, HP, RT, EG, W1, W2, W3, W4, W5, L, e Ar são descritos no contexto das Fórmulas C1 e 1000-1000b, 1001-1001b, 1002-1002b, e I-XIXb-2.

EXEMPLOS

[00265] Da maneira aqui usada, os símbolos e convenções usadas nestes processos, esquemas e exemplos, independente de uma abreviação particular ser especificamente definida, são consistentes com aqueles usados na literatura científica contemporânea, por exemplo, o Journal of Biological Chemistry e/ou o Journal of American Chemical Society.

[00266] Para todos os exemplos a seguir, métodos padrões de purificação e desenvolvimento conhecidos pelos versados na técnica podem ser utilizados. A menos que de outra forma indicada, todas as temperaturas são expressas em °C (graus Celsius). Todos os métodos são realizados em temperatura ambiente ("rt" ou "r.t."), a menos que de outra forma observada. Exemplo 1a

[00267] Preparação do composto B2

[00268] A um solvente misto de diclorometano (100mL) e HCl 2N (78 mL, 156 mmol) em -5 oC foi adicionado alvejante frio (contém 6 % de NaOCl, 108 mL, 87 mmol) em porções. A mistura foi agitada a 0 oC (temperatura interna) por 5 min. Sódio 2-mercaptobezotioazol (B, 5 g, 26 mmol) foi então adicionado na mistura em multi-porções. A mistura foi agitada em -5 a -10 oC por 20 min. O camada orgânica (B1, principal é BtsCl) foi coletada e misturada com L-valinol (3,2 g, 31.2 mmol) e trietil amina (8,7 mL, 121 mmol) em diclorometano em r.t. A mistura permitiu agitar em r.t. por 1h. O solvente foi removido e produto foi purificado em coluna em sílica gel (Hexanos: Acetato de etila = 1:1) para fornecer o produto B2 (3,1 g, 40 %, duas etapas) como sólido branco. LC-MS (ESI): 301 (M+1). RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,08 (dd, J = 2,1 e 7,2Hz, 1H), 7,96 (dd, J = 1,8 e 6,9 Hz, 1H), 7,58 (m, 2H), 5,46 (br s, 1H), 3,67 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,54 (br s, 1H), 3,23 (brs, 1H), 1,93 (m, 1H), 0,97 (d, J = 6,9 Hz, 6H).Preparação do composto B3

[00269] A uma solução de B2 (3 g, 10 mmol, 1,0 eq) em dimetilformamida (50 mL) foi adicionado carbonato de potássio (2,77 g, 20 mmol, 2,0 eq) e iodometano (1,25 mL, 20 mmol, 2,0 eq) em rt. A mistura foi aquecida a 35 oC, 4h. O solvente foi removido e o resíduo foi finalizado com acetato de etila e água (3x), seco com Na2SO4 e concentrado para fornecer o produto B3 (3,14 g, 100 %) como sólido branco.LC-MS (ESI): 315 (M+1). RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,09 (dd, J = 1,6 e 7,5Hz, 1H), 7,95 (dd, J = 1,8 e 6,9 Hz, 1H), 7,58 (m, 2H), 4,25 (br s, 1H), 2,90 (s, 3H), 1,93 (m, 1H), 1,02 (dd, J = 2,1 e 6,6 Hz, 6H).

[00270] Preparação do composto B4

[00271] A um solvente misto de diclorometano (50 mL) e DMSO (1,56 mL, 22 mmol, 2.2 eq) em -78 oC foi adicionado cloreto de oxalila (1,05 mL, 12 mmol, 1,2 eq) lentamente sob nitrogênio e agitado nesta temperatura por 30 min. B3 (3,14 g, 10 mmol, 1,0 eq) em 20 mL de diclorometano foram então adicionados nesta mistura de reação em -78 oC sob nitrogênio. A mistura de reação permitiu agitar em -78 oC por 2h. Trietilamina (7 mL, 50 mmol, 5 eq) foi então adicionada na reação e agitada em -78 oC por 30 min., e continuou a aquecer até 0 oC por um outro 30 min. A mistura de reação foi vertida em uma água gelada e extraída com DCM (3 x). A camada orgânica foi lavada com metade da solução saturada de cloreto de amônio (2x), salmoura e seca com sulfato de sódio. Foi concentrada em temperatura baixa (abaixo de 30 oC) para fornecer o produto B4 (3,0 g, 96 %) como sólido branco.RMN 1H (300 MHZ, CDCL3) Δ 9,69 (S, 1H), 8,17 (DD, J = 1,5 E 8,1HZ, 1H), 7,95 (DD, J = 2,1AND 6,9 HZ, 1H), 7,58 (M, 2H), 4,30 (D, J = 10,2 HZ, 1H), 3,01 (S, 3H), 2,21 (M, 1H), 1,15 (D, J = 6,6 HZ, 3H), 0,98(D, J = 6,6 HZ, 3H).

[00272] Preparação do composto B5

[00273] Produto B4 (3 g, 9,58 mmol, 1,0 eq) e [(1- etoxicaarbonil)etilideno]Ph3P (6,95 g, 19,2 mmol, 2 eq) foi dissolvido em tetraidrofurano anidro (60 mL) e foi aquecida em refluxo por 3h. A reação foi resfriada em r.t. e vertida em água gelada. O produto foi extraído com acetato de etila (3x). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca com sulfato de sódio e a seguir concentrada para fornecer o produto bruto. Foi adicionalmente purificada em coluna em sílica gel (Hexanos: Acetato de etila = 8:2) para fornecer o produto B5 (2,9 g, 82 %).RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,09 (dd, J = 1,2 e 7,2Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 1,8 e 8,1 Hz, 1H), 7,53 (m, 2H), 6,39 (dd, J = 1,6 e 10,5 Hz, 1H), 4,41 (t, J = 10,5 Hz, 1H ), 3,87 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,08 (s, 3H), 1,85 (s, 3H), 1,02-1,08 (m, 6H), 0,83 (d, J = 6,9 Hz, 3H),

[00274] Preparação do composto B6

[00275] A uma solução de produto B5 (2,9 g, 7,31 mmol, 1,0 eq) em dimetilformamida (30 mL) foi adicionado carbonato de potássio (4,04 g, 29,2 mmol, 4, 0 eq) e tiofenol (2,25 mL, 21,9 mmol, 3,0 eq). A reação foi agitada em r.t. por 1h. Foi então finalizada com dietil éter e água (3x). A camada de éter foi extraída com HCl 1 %, a camada aquosa foi lavada com éter. A camada aquosa foi neutralizada com bicarbonato de sódio em pH 8 e extraída com diclorometano (3x). A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio e concentrada para fornecer produto bruto B6 (1,2 g, 84 %) como óleo amarelo. LC-MS (ESI): 200 (M+1).RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 6,48 (dd, J = 1,2 e 10,2 Hz, 1H), 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 3,06 (q, J = 6,3 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,86 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 1,72 (m, 1H), 1,28 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,87 (d, J = 6,9 Hz, 3H).

[00276] Preparação dos compostos Bts-Leu-Cl e B7

[00277] Esta síntese é descrita de maneira completa em Vedejs e Kongkittingam, "A Total Synthesis of (-)-Hemiasterlin Using N-Bts Methodology," J. Org. Chem. 2001, 66(22), 7355-7364. Um resumo é aqui fornecido.

[00278] A uma solução de Bts-Leu (2,4 g, 7,3 mmol, 1,0 eq) em diclorometano anidro (30 mL) em 0 oC foi adicionado cloreto de tionila (1,6 mL, 21,9 mmol, 3,0 eq) sob nitrogênio. A mistura de reação foi refluxada em 42 oC por 2h. Foi concentrada e evaporada com tolueno para fornecer Bt- Leu-Cl como um sólido bruto, e foi usado na reação da etapa a seguir sem purificação adicional.

[00279] A uma solução de produto B6 (1,2 g, 6,02 mmol) em um solvente misto de diclorometano e água (1:1, 40 mL) a 0 oC foi adicionada uma solução de carbonato de sódio (1,28 g, 12,04 mmol, 2,0 eq) e bicarbonato de sódio (1,32 g, 15,7 mmol. 3,2 eq) sob nitrogênio. O recente Bts-Leu-Cl (do anterior) em diclorometano (10 mL) foi adicionado nesta reação com seringa. A mistura foi agitada em 0-5 oC por 1h. O produto B7 foi extraído com diclorometano e água (3x), seco com sulfato de sódio e concentrado para fornecer o produto bruto B7, que foi purificado em coluna em sílica gel (Hexanos: acetato de etila = 1:1) para fornecer o produto B7 (1,8 g, 59 %) como sólido branco. LC-MS (ESI): 510 (M+1).RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 8,11 (dd, J = 1,5 Hz, 8,7 Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 1,2 Hz, 8,7 Hz, 1H), 7,58 (m, 2H), 6,52 (dd, J = 1,2 Hz, 9,9 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 8,7 Hz, 1H ), 4,85 (t, J = 10,2 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 8,7 Hz, 1H ), 4,16 (m, 2H), 2,94 (s, 3H), 1,82 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 1,27 (m, 3H), 0,98 (s, 6H), 0,63(d, J = 6,6 Hz, 3H), -0,12 (d, J = 6,6 Hz, 3H).

[00280] Preparação do composto B8

[00281] A uma solução de B7 (200 mg, 0,392 mmol, 1,0 eq) em DMF (2mL) foi adicionado carbonato de potássio (217 mg, 1,57 mmol, 4,0 eq) e tiofenol (121 μL, 1,18 mmol, 3,0 eq) sob nitrogênio em r.t. A mistura de reação foi agitada em rt. por 4h e LC-MS exibiu a reação completa. A reação foi finalizada com água e éter e 10 % de ácido hidroclórico (da maneira descrita na literatura) e o produto puro B8 (100 mg, 82 %) foi obtido. LC-MS (ESI): 313 (M+1). RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 7,99 (s, 1H), 6,63 (dd, J = 1,2 Hz, 9,9 Hz, 1H), 5,15 (t, J = 9,9 Hz, 1H ), 4,19 (m, 2H), 3,45 (s, 1H), 2,86-2,94 (m, 6H), 1,89 (m, 3H), 1,70 (s, bro, 2H), 1,28 (t, J = 5,7 Hz, 3H), - 0,86-1,01 (m, 12H).Esquema 2

[00282] Preparação do composto A1

[00283] Uma mistura de 3-bromobenzaldeído (25,0 g, 135 mmol, 1,0 eq), N-acetil glicina (15,8 g, 135 mmol, 1,0 eq) e acetato de sódio (10,6 g, 135 mmol, 1,0 eq) foi suspensa em anidrido acético (40 mL) e aquecida com agitação em refluxo em N2 por 5 hora. A solução resultante foi solidificada mediante resfriamento em temperatura ambiente e foi finalizada com água gelada e filtrada. Os sólidos foram lavados mais duas vezes com água, secos no ar por 4 h, a seguir secos adicionalmente a vácuo para fornecer o composto A1 (31 g, 86 %).

[00284] Preparação do composto A2

[00285] Oxazolona A1 (31 g, 117 mmol, 1,0 eq) em 1,0 N NaOH (175 mL, 175 mmol, 1,5 eq) foi agitada a 85 °C até uma solução avermelhada translúcida ser obtida. A reação foi resfriada em temperatura ambiente e acidificada em pH 1,0 com HCl 5 N para precipitar um sólido marrom. HCl concentrado (30 mL) foi adicionado ao frasco, e a solução de reação foi diluída a cerca de 500 mL. Um refluxo foi mantido por mais 5 hora. Os sólidos foram coletados por filtração e lavados com água duas vezes, e secos a vácuo elevado para distribuir o material bruto A2 (23 g, 81 %), que foi usado sem purificação adicional.

[00286] Preparação do composto A3

[00287] Ácido pirúvico A2 (23 g, 94,7 mmol, 1,0 eq) foi dissolvido em THF (100 mL) e resfriado a 0 °C. Iodeto de metila (36 g, 256 mmol, 2,7 eq) seguido por NaOH 5 N (80 mL) foram lentamente adicionados, e a reação foi deixada em refluxo por toda a noite. Os voláteis foram eliminados e a solução aquosa residual foi extraída com acetato de etila, e acidificada com 10 % de HCl a 0 °C em pH 1. A camada aquosa resultante foi extraída com acetato de etila (2x). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos com sulfato de sódio, e purificados por cromatografia em coluna (EtOAc/hexanos 1:1) para render composto puro A3 (11 g, 43 %).

[00288] Preparação do composto A4

[00289] Uma solução de metilamina 2 N (14,4 mL, 28,8 mmol, 2,0 eq) foi adicionada a uma solução do ceto-ácido A3 (11 g, 40,6 mmol, 1,0 eq) em THF (100 mL) em temperatura ambiente e agitada por 4 hora. Uma solução 8 N de complexo piridina-borano (5 mL, 40,6 mmol, 1,0 eq) foi adicionada, e a mistura foi aquecida a 55 °C por 3 hora. A reação foi finalizada com metanol, concentrada, e diluída com THF (50 mL) para formar um precipitado branco. O precipitado sólido branco foi filtrado e seco a vácuo para fornecer o composto A4 (5 g, 61 %).

[00290] Preparação do composto A5

[00291] A uma solução do composto A4 (1,0 g, 3,5 mmol, 1,0 eq) e (Boc)2O (1,15 g, 5,24 mmol, 1,5 eq) em THF e água (1:1, 20 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (280 mg, 6,99 mmol, 2.0 eq). A mistura foi aquecida a 60 oC por 5h. A mistura de reação foi resfriada e concentrada. A solução aquosa residual foi acidificada com HCl 10 % a 0 °C rim pH 1, e extraída com acetato de etila (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas com sulfato de sódio, e purificadas com cromatografia em coluna rápida para fornecer o composto A5 (420 mg, 31 %).

[00292] Preparação do composto A6

[00293] Ao composto A5 (1,58 g, 4,07 mmol, 1 eq) em tolueno (15 mL) em um tubo selado, foi adicionado hidróxido de amônio (2,7 mL, 40,7 mmol, 10 eq) e pó de cobre (39 mg, 0,61 mmol, 0,15 eq). O tubo foi aquecido a 100 oC por toda a noite e concentrado para fornecer um resíduo, que foi diluído com NaHCO3 aquoso e n-butanol. A camada aquosa foi extraída com n-butanol. As camadas orgânicas foram concentradas e purificadas em coluna em sílica gel (DCM : Mio : Et3N = 9:1:1) para fornecer o composto A6 (680 mg, 52 %).

[00294] Preparação do composto A7

[00295] A uma solução do composto A6 (1,42 g, 3,36 mmol, 1 eq) em THF (10 mL) foi adicionado Alocou-se (1,34 g, 6,72 mmol, 2 eq) e trietilamina (1,4 mL, 10,1 mmol, 3 eq). A mistura foi agitada em rt por toda a noite. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em coluna (DCM: MeOH = 9:1) para fornecer o composto A7 (1,01 g, 74 %).Esquema 3

[00296] Preparação do composto A8

[00297] A uma solução do composto A7 (41 mg, 0,1 mmol, 1eq) em DCM seco (1,5 mL) foi adicionado B8 (31 mg, 0,1 mmol, 1 eq) e PyBOP (57,2 mg, 0,11 mmol, 1,1 eq). A mistura foi resfriada a 0 oC, e DIEA (49 mL, 0,3 mmol, 3 eq) foi adicionado. A reação foi agitada em rt por toda a noite, e diluída com DCM e lavada com água. A fase aquosa foi extraída adicionalmente com DCM (2x). As camadas orgânicas foram combinadas e secas com sulfato de sódio, concentradas até a secura para fornecer um produto bruto. Foi purificado por preá-HPLC para fornecer A8 (10 mg, 14 %) como uma mistura de dois diaestereoisômeros (60:40). Esquema 4

[00298] Preparação do composto A9

[00299] A uma solução do composto A8 (150 mg, 0,21 mmol, 1,0 eq) e Pd(PPh3)4 (12,4 mg, 0,011 mmol, 0,05 eq) em THF (10 mL) foi adicionado hidreto de tri-n-butila-estanho (113 μL, 0,43 mmol, 2,0 eq). A mistura foi desgaseificada e preenchida novamente com nitrogênio (3x). A reação foi agitada em rt por 6h. O solvente foi removido, e o produto bruto foi purificado em coluna em sílica gel (DCM: MeOH = 9:1) para fornecer A9 (78 mg, 60 %) como uma mistura de dois isômeros.Esquema 5

[00300] A uma solução do composto A9 (28 mg, 0,046 mmol, 1 eq) em MeOH (1mL) foi adicionado LiOH (10 mg, 0,23 mmol, 5 eq) em água (0,5 mL). A mistura foi agitada em rt por toda a noite. O produto foi purificado por prep-HPLC para fornecer A12 (23 mg, 85 %).

[00301] A uma solução de A12 (11 mg, 0,0187 mmol, 1 eq) em DCM (1 mL) foi adicionado 10 % TFA em DCM (1 mL). A mistura foi agitada em rt por 4h. O solvente foi removido e o produto bruto 1 foi purificado por RP- HPLC preparatória duas vezes para fornecer dois isômeros 1a (0,8 mg), e 1b (1 mg).Exemplo 1 Síntese do composto 101 (Dois Diastereômeros)

[00302] Ligadores sintetizados do composto arila amina 1 deram origem ao composto clivável 101 que libera os compostos parentais de anilina inéditos como um par diastereomérico.Esquema 6

[00303] Preparação do composto A10

[00304] A uma solução com fluxo de argônio de A9 (27 mg, 0,04 mmol) em 1 mL de CH2Cl2 foi adicionado 15 % p/v de fosgênio em tolueno (0,6 mL, 0,06 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 50 oC em um tubo selado por 4h, resfriada em temperatura ambiente, e os voláteis foram removidos a vácuo. Ao resíduo foi adicionado uma solução seca a vácuo de álcool Fmoc-valina-citrulina-p-aminobenzílico (26 mg, 0,04 mmol) em 1 mL DMF. A mistura de reação foi agitada a 45 oC em argônio por 6 h, a seguir em temperatura ambiente por 24 hora. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, o resíduo foi purificado em sílica gel (90:10 CH2Cl2:MeOH eluente) para fornecer 10 mg (0,008 mmol) A10 como um sólido branco.

[00305] Preparação do composto A11

[00306] A uma solução de A10 em CH2Cl2 (1 mL) foi adicionada piperidina (0,1 mL) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, ao resíduo foi adicionado DBCO-succinil N-hidroxisuccinimidil éster (3,6 mg, 0,009 mmol), DMF (1 mL), e diisopropiletilamina (0,004 mL, 0,02 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 24 hora. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, o resíduo foi purificado em sílica gel (90:10 CH2Cl2:MeOH eluente) para fornecer 7 mg (0,005mmol) A11.

[00307] Preparação do composto 101

[00308] Composto A11 (7 mg, 0,005 mmol) foi dissolvido em 3:1:1 THF:MeOH:H2O (1mL) e a solução foi resfriada a 0 oC. LiOH^O sólido (1,7 mg, 0,4 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por toda a noite. Poucos microlitros de ácido acético glacial foram adicionados, os voláteis foram removidos a vácuo, e o ácido livre 101 foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa (RP-HPLC) usando uma coluna Ultro 120 (7 μm), 150x20 mm ID de sistema de solvente (água-acetonitrila (10 mm Nl4OAc), modo gradiente de 10 % de ACN a 100 % de ACN em 50 min, 15 mL/min). LC-MS (ESI): 1282,6 (M+1), 1182,4 (M-Boc+1).

[00309] O ácido N-protegido de A11 (5 mg, 0,004) foi dissolvido em Cl2Cl2 (1 mL) e a solução foi resfriada a 0 oC. A esta foi adicionada uma solução 0,2 M de lCO2l em Cl2Cl2 (0,039 mL) e a mistura de reação foi agitada naturalmente em temperatura ambiente por toda a noite. Após os voláteis serem removidos a vácuo, o aminoácido livre foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa (RP-lPLC) usando coluna Ultro 120 (7 μm), 150x20 mm ID (sistema de solvente água- acetonitrila (10 mm Nl4OAc), modo gradiente de 10 % de ACN a 100 % de ACN em 50 min, 15 mL/min) para fornecer 3 mg (0,0025 mmol, 65 %) de composto 101 como sólido branco.Exemplo 1c Síntese quiral do composto A9a

[00310] Ligadores sintetizados do composto arila amina 1 dão origem ao composto clivável 101 que libera os compostos parentais de anilina inéditos como um par diastereomérico.Esquema 7

[00311] Preparação do composto D12

[00312] Ácido 3,3-dimetilacrílico, (97 %, 15,8 g, 157,9 mmol), AlCl3 (22 g, 164,9 mmol) e DCM (100 mL) foram colocados em um frasco de fundo redondo de um gargalo em uma atmosfera de argônio. Bromobenzeno (31 g, 197,4 mmol) foi adicionado produzindo borbulhamento forte. Mediante finalização do borbulhamento, a mistura de reação foi agitada em um banho de óleo a 65 °C por 1 h e 30 min, e por toda a noite em rt, em atm de N2. A reação foi vertida em HCl:H2O (1:1) 200 mL lentamente, EtOAc (300 mL) foi adicionado e a fase orgânica foi separada, os orgânicos foram lavados com salmoura, secos com Na2SO4, e concentrados. Os dados RMN 1H de mistura bruta mostraram mistura de m,p-regioisômeros. O material bruto foi cristalizado de hexano para fornecer ácido 3-(3-bromofenil)-3-metilbutanóico puro (meta isômero) (14 g, 54,7 mmol, 42 %) como cristais marrons.RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,52-7,50 (m, 1H), 7,37-7,35 (m, 1H), 7,35-7,30 (m, 1H), 7,23-7,20 (m, 1H), 2,66 (s, 2H), 1,47 (s, 6H).

[00313] Preparação do composto D13

[00314] Ácido 3-(3-bromofenil)-3-metilbutanóico (Composto D12, 7,7 g, 29,94 mmol) foi dissolvido em 170 mL de THF e resfriado a -20 °C. Trietilamina (8,3 mL, 59,89 mmol) e cloreto de trimetilacetila (3,7 mL, 29,94 mmol) foram adicionados ao frasco de reação que produz um precipitado branco. A mistura resultante foi agitada a -20 °C por 1 h em atm de N2, após o que LiCl (1,27 g, 29,94 mmol) e (4S)-(-)-4-isopropila-2oxazolidinona (3,87 g, 29,94 mmol) foram adicionados sequencialmente e a mistura de reação resultante foi agitada a -20 oC por 2 h, e por toda a noite em rt, em atm de N2. Água foi adicionada e a mistura de reação foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos com sulfato de magnésio e concentrados a vácuo. O produto foi purificado por cromatografia rápida em coluna (sílica gel, hexano:EtOAc, 4:1), rendendo o composto D13 como um óleo claro, sem cor em 87 % de rendimento (9,5 g, 25,79 mmol).RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 7,52-7,50 (m, 1H), 7,36-7,31 (m, 2H), 7,21-7,18 (m, 1H), 4,25-4,21 (m, 1H, H-4), 4,17-4,09 (m, 2H), 3,42-3,31 (m, 2H, H-10), 2,22-2,10 (m, 1H), 1,50 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 0,86 (d, 3H, J = 6,80 Hz), 0,77 (d, 3H, J=6,80 Hz)

[00315] Preparação do composto D14

[00316] Composto de oxazolidinona D13 (8,4 g, 22,8 mmol) foi dissolvido em THF (100 mL) em uma atmosfera de argônio, e resfriado a -78 °C. Potássio bis(trimetilsilil)amida (25,1 mL, 1 M em THF, 25,1 mmol) foi adicionado e a solução resultante foi agitada a -78 °C por 1 h e 20 min. Uma solução de 2,4,6-triisopropilbenzenossulfonil azida (9,2 g, 29,64 mmol) em THF (40 mL) em -78 °C foi adicionado por meio de cânula e após 5 min, a mistura de reação foi tratada com ácido acético glacial (6,3 mL, 104,9 mmol), aquecida a 40 °C, e agitada por mais 10 h em rt. Salmoura (270 mL) e água (35 mL) foram adicionados à mistura amarelo claro e a fase aquosa foi extraída com dietil éter (2 x 500 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de carbonato de sódio e hidrogênio (2 x 110 mL), secos com sulfato de magnésio, e concentrados a vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna (3:7 EtOAc-hexanos), rendendo composto azida D14 como um óleo sem cor (8,1 g, 19,84 mmol) em 87 % de rendimento.RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 7,55-7,52 (m, 1H), 7,41-7,39 (m, 1H), 7,23-7,20 (m, 2H), 5,67 (s, 1H), 4,21-4,07 (m, 3H), 3,61 (t, 1H, J = 8,3 Hz), 2,372,25 (m, 1H, H-6), 1,56 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 0,89 (d, 3H, J=6,8 Hz), 0,85 (d, 3H, J=7,2 Hz).

[00317] Preparação do composto D15

[00318] SnCl2 (5,5 g, 29,32 mmol) foi dissolvido em 1,4-Dioxano:H2O (2:1) 75 mL e a solução clara sem cor resultante foi resfriada a 0 oC, na qual o composto D14 (4 g, 9,77 mmol) dissolvido em 20 mL de dioxano foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada em rt por toda a noite. A reação foi resfriada novamente a 0 oC, NaHCO3 (4,1 g, 48,86 mmol) e Boc2O (6,4 g, 29,31 mmol) foram adicionados sequencialmente, e a reação foi agitada 1 dia em rt em atm de N2. O solvente foi removido em pressão reduzida, extraído com EtOAc (2 x 300 mL) e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca com Na2SO4, concentrada e purificada por cromatografia em coluna (3:7 EtOAc-hexanos), rendendo o composto D15 como um óleo sem cor (4,1 g, 8,48 mmol) em 87,2 % de rendimento. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 (bs, 1H), 7,35-7,31 (m, 1H),7,32-729 (m, 1H), 6,17 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 5,15 (bs, 1H, NH), 3,89-3,80 (m, 2H), 3,52 (t, 1H, J = 8,3 Hz), 2,33-2,21 (m, 1H), 1,41 (s, 3H), 1,39 (s, 9H),1,38 (s, 3H), 0,80 (d, 3H, J = 7,2 Hz), 0,78 (d, 3H, J = 6,8 Hz)

[00319] Preparação do composto D16

[00320] Composto de oxazolidinona D15 (4,1 g, 8,48 mmol) foi dissolvido em uma mistura de 4:1 THF:H2O (50 mL). A solução foi resfriada a 0 °C. Peróxido de hidrogênio (2,7 mL, 30 % aquoso, 25,44 mmol) e hidróxido de lítio (610 mg, 25,44 mmol) foram adicionados à solução de oxazolidinona e agitados em temperatura ambiente por toda a noite. O peróxido em excesso foi finalizado pela adição lenta de sulfito de sódio e hidrogênio e a agitação continuou por 1 hora. A mistura foi diluída com EtOAc (50 mL) e H2O (100 mL), a fase aquosa foi separada e acidificada com HCl 1,0 M em 0 oC, e extraída com acetato de etila (2 x 200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca com sulfato de magnésio, e concentrada a vácuo para fornecer óleo claro incolor (2,9 g, 7,83 mmol, 95 %) puro o suficiente pra usar na etapa a seguir sem purificação adicional. RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 7,32-7,31 (m, 1H), 7,17-7,10 (m, 2H), 7,006,97 (m, 1H), 4,83 (d, 1H, J=8,8 Hz), 4,41 (d, 1H, J=8,8 Hz), 1,45 (s, 6H), 1,38 (s, 9H).

[00321] Preparação do composto A5a

[00322] Em uma atmosfera de argônio, hidreto de sódio (60 %, 830 mg, 22,64 mmol), uma quantidade catalítica de iodeto de tetrabutilamônio seguido por iodeto de metila (2,0 mL, 32 mmol) foram adicionados em uma solução agitada vigorosamente de composto ácido D16 (1,2 g, 3,23 mmol) em 50 mL de THF seco. A suspensão resultante foi agitada 1 dia em temperatura ambiente. O hidreto de sódio em excesso foi finalizado por adição de cátions de água gelada e a mistura foi acidificada pela adição em gotas de HCl 1,0 M em pH 3 a 0 oC. A mistura acídica foi extraída com acetato de etila (3 x 100 mL), a camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca com sulfato de magnésio, e concentrada a vácuo. A purificação de composto ácido A5a foi realizada em cromatografia por coluna em sílica gel (1:2 EtOAc- hexanos com 1 % de ácido acético), resultando em um rendimento de 77 % (0,74 g, 1,93 mmol, 60 %) de um óleo claro incolor como misturas de rotâmero. RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 7,50-7,49 (m, 1H), 7,37-7,27 (m, 2H), 7,13-7,07 (m, 1H), 5,15 (s, 0,65 H, H-2), 4,95 (s, 0,35H, H-2), 2,51 (s, 1H, H-6), 2,27 (s, 2H, H-6), 1,57 (s, 3H), 1,53-1,38 (m, 12H).

[00323] Preparação do composto A6a

[00324] Composto A5a (600 mg, 1,56 mmol, 1 eq) em tolueno (10 mL) em um tubo selado foi adicionado hidróxido de amônio (3 mL, 15,6 mmol, 10 eq) e pó de cobre (20 mg, 0,23 mmol, 0,15 eq). O tubo foi aquecido a 100 oC por toda a noite e foi resfriado em rt, a tampa do tubo selado foi liberada cuidadosamente, concentrado para fornecer um resíduo que foi diluído com NaHCO3 aquoso e n-butanol. A camada aquosa foi extraída com n-butanol. As camadas orgânicas foram concentradas e purificadas em coluna em sílica gel (DCM : MeOH : Et3N = 9:1:1) para fornecer o composto A6a (300 mg, 0,930 mmol, 60 %). LC-MS (ESI): 323,4 (M+1), 223,5 (M-Boc+1).

[00325] Preparação do composto A7A

[00326] A uma solução do composto A6a (300 mg, 0,930 mmol, 1 eq) em THF (7 mL) foi adicionado Alloc-OSu (199,1 mg, 1,86 mmol, 2 eq) e trietilamina (0,51 mL, 3,72 mmol, 4 eq). A mistura foi agitada por toda a noite em temperatura ambiente em atm de N2. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em coluna (DCM:MeOH = 9:1) para fornecer o composto A7A (284 mg, 0,70 mmol, 75 %). LC-MS (ESI): 407,4 (M+1), 307,6 (M-Boc+1).

[00327] Preparação do composto A8A

[00328] A uma solução do composto A7A (220 mg, 0,54 mmol, 1eq) em DCM seco (5 mL) foi adicionado B8 (202 mg, 0,65 mmol, 1,2 eq). A mistura foi resfriada a 0 oC, e DIEA (49 μL, 0,3 mmol, 3 eq) e PyBop (338 mg, 0,65 mmol, 1,2 eq) foram adicionados sequencialmente. A reação foi agitada em rt por toda a noite em atm de N2, e diluída com DCM e lavada com água. A fase aquosa foi extraída adicionalmente com DCM (2 x 50 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secas com sulfato de sódio, e concentradas até a secura para fornecer um produto bruto. Este produto bruto foi purificado por cromatografia rápida em coluna (EtOAc:Hexano = 1:1) para fornecer o composto A8A (200 mg, 0,28 mmol, 53 %). LC-MS (ESI): 701,4 (M+1), 601,6 (M-Boc+1).

[00329] Preparação do composto A9a A uma solução do composto A8A (170 mg, 0,24 mmol, 1,0 eq) e Pd(PPh3)4 (28 mg, 0,024 mmol, 0,1 eq) em DCM (10 mL) foi adicionado hidreto de tri- n-butila-estanho (78 μL, 0,29 mmol, 1,2 eq). A mistura de reação foi desgaseificada e preenchida novamente com nitrogênio. A reação foi agitada por 3-4 h em rt, em atm de N2. O solvente foi removido, e o produto bruto foi purificado em coluna em sílica gel (EtOAc:Hexano = 1:1) para fornecer A9a (130 mg, 87 %) como um óleo claro. 1HRMN (400 MHz, CDC13) δ 7,11-7,07 (m, 1H), 6,97-6,70 (m, 2H), 6,61-6,48 (m, 2H), 6,03-5,97 (m,1H), 5,12-4,89 (m,1H), 4,63-4,49 (m,1H), 4,21-4,01 (m, 2H), 2,93 (s, 3H), 2,83 (m, 3H), 1,83-1,81 (bs, 4H), 1,42 (s, 12H), 1,27-1,17 (m, 6H), 0,87-0,0,81 (m, 6H), 0,78-0,63 (m, 6H), 0,63 (s, 6H), LC-MS (ESI): 617,6 (M+1). Exemplo 1d Síntese quiral do composto 101a (Diastereômero simples)

[00330] Composto 101a é produzido a partir do composto A9a, de acordo com o esquema 8. Esquema 8

[00331] Preparação do composto A10a

[00332] A uma solução com fluxo de argônio de A9a (27 mg, 0,04 mmol) em 1 mL CH2Cl2 é adicionado p/v de fosgênio em tolueno 15 % (0,6 mL, 0,06 mmol). A mistura de reação é aquecida a 50 oC em um tubo selado por 4h, resfriada em temperatura ambiente, e os voláteis foram removidos a vácuo. Ao resíduo é adicionado uma solução seca a vácuo de álcool Fmoc- valina-citrulina-p-aminobenzilílico (26 mg, 0,04 mmol) em 1 mL DMF. A mistura de reação é agitada em 45 oC em argônio por 6 h, a seguir em temperatura ambiente por 24 hora. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo o resíduo é purificado em sílica gel (90:10 CH2Cl2:MeOH eluente) para fornecer A10a.

[00333] Preparação do composto A11a

[00334] A uma solução de A10a em CH2Cl2 (1 mL) é adicionada piperidina (0.1 mL) e a mistura de reação é agitada em temperatura ambiente por 1 hora. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, ao resíduo é adicionado DBCO-succinil N-hidroxisuccinimidil éster (3,6 mg, 0,009 mmol), DMF (1 mL), e diisopropiletilamina (0,004 mL, 0,02 mmol). A mistura de reação é agitada em temperatura ambiente por 24 hora. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo o resíduo é purificado em sílica gel (90:10 CH2Cl2:MeOH eluente) para fornecer A11a.

[00335] Preparação do composto 101a

[00336] O composto A11a (7 mg, 0,005 mmol) é dissolvido em 3:1:1 THF:MeOH:H2O (1mL) e a solução é resfriada a 0 oC. LiOH^O sólido (1,7 mg, 0,4 mmol) é adicionado e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por toda a noite. Poucos microlitros de ácido acético glacial são adicionados, os voláteis foram removidos a vácuo, e o ácido livre 101a é purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa (RP- HPLC) usando uma coluna Ultro 120 (7 μm), 150x20 mm ID (água- acetonitrila (10 mm NH4OAc) sistema de solvente, modo gradiente de 10 % de ACN a 100 % de ACN em 50 min, 15 mL/min).

[00337] O ácido N-protegido de A11a (5 mg, 0,004) é dissolvido em CH2Cl2 (1 mL) e a solução é resfriada a 0 oC. A esta é adicionada uma solução 0,2 M de HCO2H em CH2Cl2 (0,039 mL) e a mistura de reação é agitada naturalmente em temperatura ambiente por toda a noite. Após os voláteis serem removidos a vácuo, o aminoácido livre é purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa (RP-HPLC) usando coluna Ultro 120 (7 μm), 150x20 mm ID (água-acetonitrila (10 mm NH4OAc) sistema de solvente, modo gradiente de 10 % de ACN a 100 % de ACN em 50 min, 15 mL/min) para fornecer o composto 101a.Exemplo 1e Síntese do composto (110a)

[00338] Composto (110a) é preparado de acordo com o esquema 9. Esquema 9

[00339] Preparação do composto A14: Composto A14 foi preparado a partir do composto A13 (usando procedimentos similares àqueles descritos para o composto A8a) pelo método descrito para o composto A9a. Rendimento: 379 mg (45 %) como uma espuma branca. MS (ESI) m/z 603 (M+H)+; RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ: 6,96-7,12 (m, 1H), 6,91 (br d, J=7,5 Hz, 1H), 6,83 (br s, 1H), 6,66-6,80 (m, 1H), 6,51-6,65 (m, 1H), 6,41-6,50 (m, 1H), 5,95 (br d, J=8,8 Hz, 1H), 5,33 (s, 1H), 4,94-5,11 (m, 1H), 4,92 (br s, 1H), 4,58 (br d, J=9,5 Hz, 1H), 4,48 (br d, J=8,5 Hz, 1H), 3,72 (br s, 1H), 3,67 (br s, 3H), 2,73-2,96 (m, 7H), 1,75-1,98 (m, 5H), 1,72 (br s, 1H), 1,49 (br s, 2H), 1,18-1,45 (m, 15H), 0,60-0,86 (m, 17H); 13C RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 171,2, 169,9, 168,2, 168,1, 157,1, 148,8, 146,9, 139,2, 139,0, 132,5, 132,2, 129,7, 116,6, 113,4, 79,8, 65,4, 55,9, 55,2, 52,0, 42,5, 42,5, 34,7, 34,3, 33,9, 31,0, 31,0, 30,2, 30,1, 28,3, 28,3, 26,5, 26,3, 26,2, 19,5, 19,4, 18,8, 18,5, 13,9, 13,8.

[00340] Preparação do composto A15: A uma solução gelada com fluxo de argônio de A14 (63 mg, 0,1 mmol) em CH2Cl2 (0,8 mL) foi adicionado ácido trifluoracético (0,2 mL, 2,6 mmol). O banho de gelo foi removido, e a reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h. Os voláteis foram removidos a vácuo para fornecer A15 como um vidro amarelo claro que foi usado diretamente na reação subsequente. MS (ESI) m/z 503 (M+H)+; RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ10,36 (br, 3H), 7,19-8,14 (m, 4H), 6,57 (br d, J=7,5 Hz, 1H), 5,02 - 4,45 (m, 3H), 3,68 (s, 3H), 2,97 (s, 3H), 2,38-2,48 (m, 3H), 1,74-1,80 s (m, 3H), 1,18-1,38 (m, 6H), 0,80-0,95(m, 17H); 13C RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 170,9, 168,2, 161,5, 145,3, 139,2, 138,0, 131,5, 126,8, 122,3, 117,2, 86,9, 52,1, 40,9, 40,5, 35,3, 34,4, 33,6, 31,4, 29,7, 28,2, 28,3, 27,5, 26,5, 26,4, 26,3, 26,2,19,1, 187, 18,4, 13,8.

[00341] Preparação do composto A16: Composto A16 foi preparado a partir do composto A15 pelo método geral descrito para o composto A10. Rendimento: 52 mg (50 %) como uma espuma branca. MS (ESI) m/z 1044 (M+H)+; RMN 1H (400 MHz, CDCl3) d 9.10 (br, 1H), 7,84 (brd, J =7,8 Hz , 1H ), 7,62 (d, J =7,6Hz , 2H), 7,42-7,31 (m, 7H), 7,11-7,23 (m, 7H), 6,946,98 (m, 1H), 6,56 (d, J =8,0 Hz , 1H), 5,94-5,96 (m, 1H), 4,85-5,1 (m, 3H), 4,61-4,80 (m, 2H), 4,15 (t, J =7,3 Hz , 1H), 4,25 (t, J =7,0 Hz , 1H), 4,15 (t, J =7,1 Hz , 1H), 4,05 (t, J =7,0 Hz , 1H), 3,67 (s, 3H), 3,60 (d J =3,6 Hz , 1H), 2,89-3,05 (m, 5H),1,80=2,09 (m, 10 H),1,28-1,36 (m, 10 H), 0,66-0,99 (m, 17 H); 13C RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 172,4, 172,0, 171,5, 170,9, 168,2, 156,7, 153,9,147,9,143,7, 143,6, 141,3,138,9, 132,3, 129,2, 127,7, 127,0, 125,0, 120,67,1, 66,0, 54,7, 52,0, 49,6, 47,1, 41,2, 35,6, 35,1, 31,1, 31,0, 29,8, 29,2, 26,7, 21,7, 19,5, 19,3, 19,2, 19,0, 18,9, 18,1, 18,0, 13,8.

[00342] Preparação do composto A17: A uma solução com fluxo de argônio de A16 (52 mg, 0,05 mmol) em DMF (0.4 mL) foi adicionado N,N- dietilamina (0.2 mL, 5 mmol), e a reação foi agitada em temperatura ambiente 2h. Os voláteis foram removidos a vácuo, e o resíduo foi purificado em sílica gel (Biotage Isolera) usando um gradiente de 2-100 % de metanol em clorofórmio para render 23mg de amina livre como um sólido branco. Este foi adicionalmente purificado em RP-HPLC ( x mm C18 5DDDusando um gradiente linear de 10 a 90 % de B em A por 20 minutos (A = NH4OAc 10 mM em água; B = NH4OAc 10 mM em CH3CN) e detectado em 254 e 280 nM para fornecer A17. Rendimento 9,5 mg, 24 %). MS (ESI) m/z 822 (M+H)+; RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,11 (s, 1H), 7,73 (br, 1H), 7,81(d, J =9,5 Hz , 1H), 7,48 (d, J =9,0 Hz, 2H), 7,01-7,3 (m, 4H) , 6,57 (dd, J =1,4, 9,5 Hz , 1H), 5,07 (s, 2H), 5,04 (d, J =1,1 Hz , 1H),4,72 (d, J = 9,8 Hz , 1H), 4,6 (t, J =7,0 Hz ,1H), 3,6 (s, 3H), 3,63 (s, 1H), 3,24 (br, 1H), 3,05 (s, 1H), 3,01, (d J =6,3Hz ,1H), 2,95 (s, 3H), 2,08 (br, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,80-1,84 (m, 1 H), 1,40 (d, J =6,2 Hz,4H),1,31 (s, 6H), 0,92-0,93 (m, 13H), 0,79 (d, J =6,6 Hz ,8H), 0,71 (d, J =6,6 Hz ,4H)

[00343] Preparação de (110a): Em uma atmosfera de argônio, o composto A17 (9,8 mg, 0,012 mmol) foi agitado com dibenzociclooctiniladipoil N-hidroxisuccinimidil éster (Broadpharm 22447, 7,7mg, 0,018 mmol) em DMF (0,150 mL). A este foi adicionado N, N- diisopropiletilamina (,006 mL, 0,036 mmol) e a reação foi agitada em temperatura ambiente por 3 h. Os voláteis foram removidos a vácuo, e o resíduo foi parcialmente purificado em sílica gel usando um gradiente de 2 a 10 % de metanol em clorofórmio. As frações contendo produto foram concentradas a vácuo em um resíduo MS m/z 1137,4 . Este resíduo (10,6 mg, 0,009 mmol), em uma atmosfera de argônio, foi dissolvido em 3:1:1 THF: metanol: água (0.5 mL), resfriado em um banho de gelo, e tratado com LiOH.H2O (2,6 mg, 0,063 mmol). A mistura de reação foi equilibrada naturalmente em temperatura ambiente por toda a noite. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por RP-HPLC da maneira anterior para render, após liofilização, (110a), 2,1 mg, 0,002 mmol, como um sólido branco em flocos. MS (ESI) m/z 1123 (M+H)+; RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10,02 (br d, J=3,8 Hz, 1H), 9,67 (br s, 1H), 8,25 (br d, J=6,8 Hz, 1H), 7,88 (br d, J=8,8 Hz, 1H), 7,79 (br d, J=8,3 Hz, 1H), 7,54-7,70 (m, 4H), 7,29-7,54 (m, 9H), 7,06-7,27 (m, 3H), 6,40-6,50 (m, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,05 (br d, J=14,1 Hz, 1H), 4,91 (br t, J=10,2 Hz, 1H), 4,77 (br d, J=9,5 Hz, 1H), 4,25-4,49 (m, 2H), 4,06-4,24 (m, 2H), 3,60-2,99 (m, envelope com muita água), 2,99 (m, 3H), 2,69-2,82 (m, 3H), 2,56-2,49 (m, envelope de DMSO), 2,42 (br s, 1H), 2,12-2,29 (m, 3H), 1,90-2,11 (m, 6H), 1,73-1,90 (m, 6H), 1,15-0,76 (m, 18H), 0,72 (br d, J=6,3 Hz, 6H).Exemplo 1f

[00344] Composto (111a) foi preparado de acordo com o esquema 10.

[00345] Preparação do composto A19: etil (S,E)-4-((R)-2-((S)-3-(3- aminofenil)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)-N,3,3-trimetilbutanamido)- 2,5-dimetilex-2-enoato

[00346] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 50 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon foi preenchido com composto A18 (200 mg, 0,32 mmol, 1,0 eq) CH2Cl2 seco (3 mL) e a solução clara foi resfriada a 0 oC com um banho de gelo, a este 1 mL de ácido trifluoracético foi adicionado. A mistura de reação foi agitada naturalmente 4h em temperatura ambiente. Após o que LC-MS mostrou finalizar a reação. O solvente foi removido em pressão reduzida, e o material bruto foi liofilizado por 16h para fornecer o composto A19 (167 mg, 100 %) como um sólido esbranquiçado. LC-MS (ESI): 517,5 (M+1).

[00347] Preparação do composto A20: etil(S,E)-4-((S)-2-((R)-3-(3- ((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)fenil)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)- N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilex-2-enoato

[00348] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 50 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, é preenchido com composto A19 (70 mg, 0,135 mmol, 1 eq), Fmoc- Valina-Alanina-OH (67 mg, 0,162 mmol, 1.2 eq) e 1 mL de N,N- Dimetilformamida anidro. A solução clara resultante foi resfriada a 0oC com um banho de gelo, N,N-Diisopropiletilamina (72 μL, 0,405 mmol, 3 eq), 1- [Bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio 3-óxido hexafluorfosfato (HATU) (62 mg, 0,162 mmol, 1,2 eq) foram sequencialmente adicionados à reação. A mistura de reação foi agitada naturalmente em temperatura ambiente por toda a noite em atmosfera de N2. LC-MS mostrou finalizar a reação. A reação foi finalizada pela adição de NH4Cl saturado (10 mL) e então extraída com CH2Cl2 (2 x 100 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), seco com Na2SO4 anidro, filtrado e a seguir concentrado até a secura em pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa preparatória usando uma coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID. O sistema de solvente usou solvente A: água contend NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo gradiente de 10 % de Solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto A20 (86 mg, 0,095 mmol, 70 %) como um sólido branco. LC-MS (ESI): 909,5 (M+1).

[00349] Preparação do composto A21:

[00350] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com composto A20 (80 mg, 0,088 mmol), CH2Cl2 seco(2 mL), a esta solução clara foi adicionada piperidina (0.5 mL) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h em atm de N2. LC-MS mostrou finalizar a reação, todos os voláteis foram removidos em pressão reduzida. A amina livre bruta foi purificada por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa preparatória usando uma coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID. O sistema de solvente usou solvente A: água contendo 10 mm NH4OAc; Solvente B: acetonitrila contendo 10 mm NH4OAc., Modo gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer a amina livre A20a (51 mg, 0,074 mmol, 85 %) como um sólido branco. LC-MS (ESI): 688 (M+1).

[00351] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com a amina livre A20a (51 mg, 0,074 mmol). DBCO adipinil N-hidroxisuccinimidil éster (41 mg, 0,096 mmol), anidro N,N- Dimetilformamida (0.5 mL), e N,N-Diisopropiletilamina (40 μL, 0.22 mmol) foram adicionados sequencialmente. A mistura de reação foi lavada com argônio e agitada em temperatura ambiente por 3 horas em atm de N2. LC-MS mostrou finalizar a reação. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa usando uma coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mm ID. Sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto A21a (52mg, 0,052 mmol, 70 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 1003,8 (M+1).

[00352] Preparação do composto (111a):

[00353] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, é preenchido com composto A21 (50 mg, 0,05 mmols, 1 equiv.), THF:MeOH:H2O (3:1:1) (1 mL). A solução clara foi resfriada a 0 oC com um banho de gelo. LiOH.H2O sólido (16 mg, 0,349 mmol, 7 eq) foi adicionado e a reação foi agitada naturalmente em temperatura ambiente em atm de N2 por 7h, após o que LC-MS mostrou finalizar a reação, os voláteis foram removidos a vácuo, e o material bruto foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa usando Coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID, o sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo de eluição de gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto (111a) (34 mg, 0,034 mmol, 70 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 974,5 (M+1). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,78-9,63 (bd, 1H), 8,34-8,10 (m, 1H), 7,82-7,68 (2H), 7,58-7,35 (m, 8H), 7,34-7,18 (m, 4H), 7,16-7,08 (m, 4H), 6,53-6,52 (m, 1H)4,98-4,93 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,71 (brd, 1H), 4,36-4,26 (m, 1,5H), 4,09-4,04 (m, 1H), 3,67-3,47 (m, 2H), 3,12 (brd, 1H), 2,91-2,87 (m, 3H), 2,13-2,02 (m, 2H), 1,96-1,78 (m, 9H), 1,74-1,61 (m, 5H), 1,31-1,03 (m, 16H), 0,90-0,67 (m, 15H). xemplo 1g Síntese do composto (109a)

[00354] Composto (109a) foi preparado de acordo com o esquema 11ae 11b.Esquema 11a

[00355] Preparação de A22: A22 foi preparado por uma adaptação direta dos métodos da literatura. (Vide, por exemplo, Florent et al 1998, J Med Chem 41, 3572; e Jeffrey et al 2006, Biocong Chem 17, 831). LC-MS: TR 9.21 min. m/z 763 (M+H)+.Esquema 11b

[00356] Preparação do composto A23: (2S,3R,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H- fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)propanamido)-4-((((3-((R)-4-(((S)-1- (((S,E)-6-etóxi-2,5-dimetil-6-oxoex-4-en-3-il)(metila)amino)-3,3-dimetil-1- oxobutan-2-il)amino)-2-metil-3-(metilamino)-4-oxobutan-2-il)fenil)carbamoil)oxi)metila)-6-metilfenoxi)-6-(metoxicarbonil)tetraidro-2H- piran-3,4,5-triil triacetato

[00357] Um vaso de pressão de 25 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, é preenchido com composto A19 (25 mg, 0,048 mmol, 1 eq) e 1 mL de CH2Cl2 anidro, a este foi adicionado 15 % p/v de fosgênio em tolueno (0,7 mL) em rt. A mistura de reação foi lavada com argônio e foi agitada em um vaso selado por 17h em rt, a seguir concentrada em pressão reduzida para remover voláteis, e seca a vácuo elevado por pelo menos 2 horas. A este resíduo foi adicionado composto A22 (44 mg, 0,058 mmol, 1,2 eq,). Esta mistura foi dissolvida em 1 mL de N,N-Dimetilformamida anidro. A mistura de reação foi agitada a 45 oC por 2 h, a seguir em temperatura ambiente por 12 h. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa usando coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID, sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo de eluição de gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto A23 (25 mg, 0,019 mmol, 70 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 1305,8 (M+1).

[00358] Preparação do composto (109a):

[00359] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com composto A23 (23 mg, 0,018 mmol), CH2Cl2 seco (0,5 mL), a esta solução clara foi adicionada piperidina (0,2 mL) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h em atm de N2, todos os voláteis foram removidos em pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em THF:MeOH:H2O (3:1:1) (1 mL). A solução clara foi resfriada a 0 oC com um banho de gelo. LiOH.H2O sólido (8 mg, 0,176 mmol, 10 eq) foi adicionado e a reação foi agitada naturalmente em temperatura ambiente em atm de N2 por 7h, após o que LC-MS mostrou finalizar a reação, os voláteis foram removidos a vácuo, e o material bruto foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa usando coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID, sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo de eluição de gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto A23a (8 mg, 0,009 mmol, 50 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 915,7 (M+H), 897,7 (M-H2O+H)

[00360] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 10 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com a amina livre A23a (8 mg, 0,009 mmol). DBCO adipinil N-hidroxisuccinimidil éster (5 mg, 0,011 mmol), anidro N,N- Dimetilformamida (0.3 mL), e N,N-Diisopropiletilamina (10 μL, 0,033 mmol) foram adicionados sequencialmente. A mistura de reação foi lavada com argônio e agitada em temperatura ambiente por 3 horas em N2 atm. LC-MS mostrou finalizar a reação. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa usando uma coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID, sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto (109a) (5 mg, 0,004 mmol, 50 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 1230,8 (M+H), 1212,8 (M- H2O+H). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,61-9,55 (m, 2H), 7,85 (bs, 2H), 7,80 (bd, 1H), 7,61-6,97 (m, 15H), 6,64-6,50 (m, 2H), 6,02 (bs, 1H), 5,48 (bs, 1H), 5,17-4,89 (m, 6H), 4,85-4,76 (bt, 1H), 4,71-4,62 (m, 1H), 4,01 (bs, 1H), 3,69-3,66 (m, 3H), 3,10 (bs, 2H), 2,89 (bs, 3H), 2,29-2,26 (m, 19H), 2,13-2,00 (m, H), 1,96-1,56 (m, 18H), 1,80-1,02 (m, 14H), 0,89 (bs, 10H), 0,70 (d, 3H), 0,66 (d, 3H). Exemplo 1h Síntese do composto (111a)

[00361] Composto (111a) foi preparado de acordo com os esquemas 12 e 13. Esquema 12

[00362] Preparação do composto A8a: etila (6S,9S,12S,E)-6-(2-(3- (((alliloxi)carbonil)amino)fenil)propan-2-il)-9-(terc-butila)-12-isopropila- 2,2,5,11,14-pentametil-4,7,10-trioxo-3-oxa-5,8,11-triazapentadec-13-en- 15-oato

[00363] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 100 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, é preenchido com composto A7a (1,1 g, 2,70 mmols, 1 equiv, preparado internamente), CH2Cl2 seco (10 mL) e composto B8 (1,00 g, 3,24 mmols, 1,2 equiv., preparado internamente) em CH2Cl2 seco (10 mL). A solução clara resultante foi resfriada a 0 oC com um banho de gelo, N,N- Diisopropiletilamina (1,5 mL, 8,1 mmols, 3 equiv.,) e (benzotriazol-1- iloxi)tripirrolidinofosfônio hexafluorfosfato (PyBOP, 1,7 g, 3,24 mmol, 1,2 equiv.,) foram adicionados sequencialmente à solução resfriada. A mistura de reação foi agitada naturalmente em temperatura ambiente por toda a noite em atmosfera de N2. LC-MS mostrou finalizar a reação. A reação foi finalizada pela adição gota a gota de NH4Cl saturada (10 mL) e então extraída com CH2Cl2 (2 x 200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e a seguir concentrada até a secura em pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida em coluna de sílica em um sistema Teledyne ISCO (coluna rápida de sílica de 40g, gradiente: Hexano a 30 % de EtOAc/Hexano) para fornecer o composto A8a (1,2 g, 1,71 mmol, 63 %) como um óleo viscoso incolor que se solidifica lentamente para fornecer um sólido esbranquiçado mediante repouso. LC-MS (ESI): 701,5 (M+1).

[00364] Preparação do composto A9a: Etil (6R,9S,12S,E)-6-(2-(3- aminofenil)propan-2-il)-9-(terc-butila)-12-isopropila-2,2,5,11,14-pentametil- 4,7,10-trioxo-3-oxa-5,8,11-triazapentadec-13-en-15-oato

[00365] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 100 mL seco no forno equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon é preenchido com composto A8a (1,2 g, 1,71 mmols, 1,0 equiv, preparado internamente), CH2Cl2 seco (10 mL). A esta solução clara, tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (0,98 g, 0,856 mmols, 0,5 equiv.,) e hidreto de tri-n-butila-estanho (0,55 mL, 2,05 mmols, 1,2 equiv.,) foram adicionados sequencialmente em temperatura ambiente, em atmosfera de N2. Mediante finalização da adição, a mistura de reação foi lavada com argônio e a seguir agitada em temperatura ambiente em uma atmosfera de N2. LC-MS & TLC (1:1 EtOAc/Hexano) mostrou que a reação estava completa em 4 horas. O solvente foi removido em pressão reduzida e o material bruto resultante foi purificado por cromatografia rápida em coluna em um sistema Teledyne ISCO (coluna rápida de sílica de 40g, gradiente: Hexano a 50 % de EtOAc/Hexano) para fornecer o composto A9a (0,95 g, 1,54 mmol, rendimento: 90 %) como um sólido espumoso esbranquiçado. LC-MS (ESI): 617,3 (M+1). Esquema 12

[00366] Preparação do composto A19: etil (S,E)-4-((R)-2-((S)-3-(3- aminofenil)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)-N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilex-2-enoato

[00367] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 50 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com composto A9a (200 mg, 0,32 mmol, 1,0 eq) CH2Cl2 seco (3 mL) e a solução clara foi resfriada a 0 oC com um banho de gelo, a esta 1 mL de ácido trifluoracético foi adicionado. A mistura de reação foi agitada naturalmente 4h em temperatura ambiente. Após o que LC-MS mostrou finalizar a reação. O solvente foi removido em pressão reduzida, e o material bruto foi liofilizado por 16h para fornecer o composto A19 (167 mg, 100 %) como um sólido esbranquiçado. LC-MS (ESI): 517,5 (M+1).

[00368] Preparação do composto A18: etil (S,E)-4-((S)-2-((R)-3-(3- ((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)-3- metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)benzila)oxi)carbonil)amino)fenil)-3- metil-2-(metilamino)butanamido)-N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilex-2- enoato

[00369] Um vaso de pressão de 50 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, é preenchido com composto A19 (167 mg, 0,323 mmol, 1 eq) (**Observação: composto A19 foi seco em bomba liofilizadora por 15 h antes do uso) e 4 mL de CH2Cl2 anidro, a este foi adicionado 15 % p/v de fosgênio em tolueno (5 mL) em rt. A mistura de reação foi lavada com argônio e foi agitada em um vaso selado por 17h em rt, a seguir concentrada em pressão reduzida para remover voláteis, e seca a vácuo elevado por pelo menos 2 horas. A este resíduo foi adicionado álcool Fmoc valina-citrulina-p-aminobenzílico (253 mg, 0,42 mmol, 1,3 eq). Esta mistura foi dissolvida em 3 mL de anidro N,N-Dimetilformamida. A mistura de reação foi agitada a 45 oC por 2 h, a seguir em temperatura ambiente por 12 h. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em coluna em um Teledyne ISCO (24g de coluna rápida de sílica, gradiente: CH2Cl2 a 12 % de MeOH/CH2Cl2) para fornecer o composto A18 (247 mg, 0,215 mmol, 67 %) como um sólido esbranquiçado. LC-MS (ESI): 1144.7 (M+1).

[00370] Preparação do composto A25:

[00371] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 50 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com composto A18 (240 mg, 0,209 mmol), CH2Cl2 seco (5 mL), a esta solução clara foi adicionada piperidina (1,5 mL) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 1 h em atm de N2. LC-MS mostrou finalizar a reação, todos os voláteis foram removidos em pressão reduzida. A amina livre bruta foi purificada por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa preparatória usando uma coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID. O sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer a amina livre A24 (164 mg, 0,177 mmol, 85 %) como um sólido branco.

[00372] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 50 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, foi preenchido com a amina livre A24 (164 mg, 0,177 mmol). DBCO succinil N-hidroxisuccinimidil éster (126 mg, 0,313 mmol), N,N- Dimetilformamida anidro (3 mL), e N,N-Diisopropiletilamina (110 μL, 0,627 mmol) foram adicionados sequencialmente. A mistura de reação foi lavada com argônio e agitada em temperatura ambiente por 3 horas em atm de N2. LC-MS mostrou finalizar a reação. Após a remoção de todos os voláteis a vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho- fase reversa usando uma coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID, sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto A25 (177 mg, 0,146 mmol, 70 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 1209,6 (M+1).

[00373] Um frasco de fundo redondo de gargalo único de 25 mL seco no forno, equipado com uma barra de agitação magnética revestida com teflon, é preenchido com composto A25 (177 mg, 0,146 mmols, 1 equiv.), THF:MeOH:H2O (3:1:1) (5mL). A solução clara foi resfriada a 0 oC com um banho de gelo. LiOH.H2O sólido (46 mg, 1,022 mmol, 7 eq) foi adicionado e a reação foi agitada naturalmente em temperatura ambiente em atm de N2 por 7h, após o que LC-MS mostrou finalizar a reação, os voláteis foram removidos a vácuo, e o material bruto foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho-fase reversa usando coluna Ultro 120 (7 μm) C18Q, 150x20 mmID, Sistema de solvente usou solvente A: água contendo NH4OAc 10 mm; Solvente B: acetonitrila contendo NH4OAc. 10 mm, Modo de eluição de gradiente de 10 % de solvente B a 90 % de solvente B, por 20 minutos, 10 mL/min), frações puras foram coletadas e liofilizadas para fornecer o composto (101a) (138 mg, 0,117 mmol, 80 %) como um pó branco. LC-MS (ESI): 1181,5 (M+1).Exemplo 1i

[00374] Anticorpos foram expressos em uma reação Xpress CF™ usando procedimentos conhecidos pelos versados na técnica. (Vide, por exemplo, Cai et al. Biotechnol. 2015, 31(3), 823; e Zimmerman et al. Bioconjugate Chem. 2014, 25, 351.) O extrato livre de células para este trabalho foi originado de uma cepa de E. coli OmpT sensível a RF1, atenuada e geneticamente modificada para superexpressar DsbC e FkpA de E. coli, bem como um RNAt ortogonal contendo o anti-códon CUA para decodificar o códon de parada Amber. Os extratos foram tratados com iodoacetamida 75 μM por 45 min em RT (20°C) e adicionados à uma pré-mistura contendo todos os outros componentes, exceto para DNA de cadeia pesada e leve IgG. A concentração final na reação de síntese de proteína foi 30 %(v/v) de extrato celular, para-azidometilfenilalanina 2 mM (pAMF) (RSP aminoácidos), RNAt sintetase amino-acila específico de pAMF geneticamente modificado 5uM (variante FRS), GSSG 2 mM, glutamato de magnésio 8 mM, glutamato de amônio 10 mM, glutamato de potássio 130 mM, piruvato de sódio 35 mM, AMP 1,2 mM, cada um de GMP, UMP, e CMP 0,86 mM, aminoácidos 2 mM (exceto 0,5 mM para Tirosina e Fenilalanina), oxalato de sódio 4 mM, putrescina 1 mM, espermidina 1,5 mM, fosfato de potássio 15 mM, T7 RNAP 100 nM, DNA de cadeia leve antiCD74 1 μg/mL, e DNA de cadeia pesada antiCD74 4 μg/mL. Mutagênese sítio direcionada foi usada para introduzir um códon de parada amber (TAG) na sequência de nucleotídeos para codificar o aminoácido não natural pAMF em posições S7 e F404 (cadeias leves e pesadas respectivamente, numeração kabat). As reações sem célula foram iniciadas pela adição de DNA plasmidial e incubadas a 30°C por 16h, em placas de Petri de 100x10 mm contendo 10 mL.

[00375] As reações sem célula foram clarificadas por centrifugação em 10.000 rpms por 30 minutos. O sobrenadante clarificado foi aplicado na proteína A MabSelect SuRe (GE Healthcare) com lavagem padrão e eluição em pH baixo. Impurezas tais como agregados foram removidas por meio de SEC preparatória (Sepax SRT-10C) equilibrada em fosfato de sódio 50nM, arginina 200 mM, pH 6,5. A formulação final da amostra foi realizada em salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS 1x).

[00376] IgGs purificada contendo pAMF foram conjugadas em um composto teste citotóxico usando química click sem cobre com reagente ciclooctina tensionado (SpAAC, cicloadição de alcino azida promovida por tensão). Em resumo, compostos teste foram dissolvidos em DMSO em uma concentração final de 5 mM. Cada composto foi adicionado à 1 mg/mL de proteína purificada em PBS, em uma razão molar de ligador de droga para anticorpo de 12 a 1. A mistura de reação foi incubada em RT (20 °C) por 17 horas. O excesso sem droga foi removido por placa Zeba (Thermo Scientific) equilibrado em PBS. Análise DAR foi realizada por MALDI-TOF (velocidade Bruker AutoFlex). A proteína conjugada foi reduzida por 10 min em 37 °C com TCEP 10 mM em água, e diluída em uma concentração final de 50 μg/mL em acetonitrila 30 %, ácido trifluoracético 0,1 %. As amostras foram combinadas 1:1 com matriz S-DHB MALDI (50 mg/mL em acetonitrila 50 %, ácido trifluoracético 0,1 %) e 1 μL foi aplicado no alvo MALDI e seco a vácuo. Cada espetro MALDI foi acumulado por 5000 disparos na potência de laser completa, em modo linear, e a análise DAR final foi calculada comparando a intensidade relativa de pico para espécies conjugadas e não conjugadas.Exemplo 1j

[00377] Conjugados do composto 1 com trastuzumab foram preparados da maneira descrita a seguir.

[00378] Composto 101 ou 101a foi dissolvido em DMSO em uma concentração de 5 mM. A solução foi adicionada ao anticorpo C-termo C225 HC purificado em tampão PBS, em uma concentração de composto final de 200 μM e uma concentração final de anticorpo de 3 mg/mL (20 μM) para uma razão molar 10:1 do composto:anticorpo. A mistura foi incubada em temperatura ambiente (25 °C) por 16 h. O composto em excesso foi removido usando placas zeba (Thermo Scientific) equilibradas em PBS 1X.

[00379] Este procedimento foi usado para conjugar os compostos 101 e 101a em trastuzumab HC em F404 e em trastuzumab LC em S7.

[00380] Para preparar trastuzumab contendo um grupo azida reativo para conjugação, o DNA que codifica as cadeias pesadas e leves da molécula foi clonado no vetor de expressão pUG. U códon TAG foi inserido nas posições indicadas por PCR de sobreposição. Códon de parada TAA foi usado para finalizar tradução.

[00381] Para expressar a proteína, extratos sem célula foram descongelados em temperatura ambiente e incubados com iodoacetamida 50 μM por 30 min. As reações sem célula foram corridas a 30 C por até 16 h contendo 30 % (v/v) de extrato tratado com iodoacetamida, com glutamato de magnésio 8 mM, glutamato de amônio 10 mM, glutamato de potássio 130 mM, piruvato de sódio 35 mM, AMP 1,2 mM, cada um de GMP, UMP, e CMP 0,86 mM, aminoácidos 2 mM para todos os 18 aminoácidos, exceto tirosina e fenilalanina que foram adicionados em 0,5 mM, oxalato de sódio 4 mM, putrescin 1 mM, espermidina 1,5 mM, fosfato de potássio 15 mM, T7 RNAP 100 nM, glutationa oxidada (GSSG) 2 mM, pAzidoMetilFenilanina 2 mM (pAMF), RNAt sintetase supressora de amber 2,5 μM. As concentrações de plasmídeo variante TAG de cadeia pesada e plasmídeo tipo selvagem de cadeia leve foram 7,5 ug/mL e 2,5 ug/mL, respectivamente.

[00382] Os anticorpos contendo aminoácidos não naturais foram purificados por MabSelect e aprimorados por Capto, aderidos e armazenados em tampão PBS antes do uso.

[00383] As as reações sem célula anti-CD74 foram clarificadas por centrifugação em 10.000 rpms por 30 minutos. O sobrenadante clarificado foi aplicado na proteína A MabSelect SuRe (GE Healthcare) com lavagem padrão e eluição em pH baixo. Impurezas tais como agregados foram removidas por meio de SEC preparatória (Sepax SRT-10C), equilibrada em fosfato de sódio 50nM, arginina 200 mM, pH 6,5. A formulação final da amostra foi realizada em salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS 1x).Exemplo 1k Produção de anticorpos anti-CD74 com aminoácidos não naturais

[00384] Anticorpos foram expressos em uma reação Xpress CF™, da maneira descrita previamentecom as modificações a seguir. O extrato livre de células para este trabalho foi produzido a partir de uma cepa de E. coli OmpT sensível à RF1, atenuada, geneticamente modificada para superexpressar DsbC e FkpA de E. coli, bem como um RNAt ortogonal contendo o anti- códon CUA para decodificar o códon de parada amber. O extrato foi tratado com iodoacetamida 75 μM por 45 min em RT (20°C) e adicionado à uma pré- mistura contendo todos os outros componentes, exceto para DNA de IgG de cadeia pesada e leve. A concentração final na reação de síntese de proteína foi 30 %(v/v) de extrato celular, para-azidometilfenilalanina 2 mM (pAMF) (RSP aminoácidos), RNAt sintetase amino-acila específica para pAMF geneticamente modificado 5uM (variante de FRS), GSSG 2 mM, glutamato de magnésio 8 mM, glutamato de amônio 10 mM, glutamato de potássio 130 mM, piruvato de sódio 35 mM, AMP 1,2 mM, cada um de GMP, UMP, e CMP 0,86 mM, aminoácidos 2 mM (exceto 0,5 mM para Tirosina e Fenilalanina), oxalato de sódio 4 mM, putrescina 1 mM, espermidina 1,5 mM, fosfato de potássio 15 mM, T7 RNAP 100 nM, DNA de cadeia leve de antiCD74 1 μg/mL, e DNA de cadeia pesada de antiCD74 4 μg/mL. A mutagênese sítio direcionada foi usada para introduzir um códon de parada amber (TAG) na sequência de nucleotídeos para codificar o aminoácido não natural pAMF em posições S7 e F404 (cadeias leves e pesadas respectivamente, numeração kabat). As reações sem célula foram iniciadas pela adição de DNA plasmidial e incubadas a 30°C por 16h em placas de Petri de 100x10 mm contendo 10 mL.

[00385] As reações sem célula anti-CD74 foram clarificadas por centrifugação em 10.000 rpms por 30 minutos. O sobrenadante clarificado foi aplicado na proteína A MabSelect SuRe (GE Healthcare) com lavagem padrão e eluição em pH baixo. Impurezas tais como agregados foram removidas por meio de SEC preparatória (Sepax SRT-10C) equilibrada em fosfato de sódio 50nM, arginina 200 mM, pH 6,5. A formulação final da amostra foi realizada em salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS 1x).

[00386] Anticorpos preparados com aminoácidos não naturais em resíduos de cadeia pesada nas posições 404, 241, e 222, de acordo com o esquema de numeração EU, e no resíduo de cadeia leve 7, de acordo com o esquema de numeração Kabat ou Chotia. Um anticorpo compreendia resíduo (56), anterior, na posição 404, e quatro anticorpos compreendiam resíduo (30), anterior, em cada uma das posições 404, 241, 222 (cadeia pesada) e 7 (cadeia leve). Cada anticorpo foi expresso em um rendimento total de pelo menos 400 mg/L, da maneira mostrada na figura 2A, e IgG intacta foi detectada por SDS-PAGE, da maneira mostrada na FIG. 2B.Produção de conjugado anticorpo-PEG4-maitansina

[00387] IgG anti-CD74 purificada contendo resíduo de aminoácido modificado 30 (isto é para-azido-metil-L-fenilalanina, ou pAMF) na posição EU 404 em suas cadeias pesadas foi obtida de acordo com o exemplo 2. A IgG anti-CD74 foi conjugada em uma hemiasterlina, usando um reagente ciclooctina tensionado para render o conjugado A.

[00388] Em resumo, DBCO-val-cit-pAB-hemiasterlina, de acordo com o seguinte:foi dissolvido em DMSO em uma concentração final de 5 mM. O composto foi adicionado à proteína purificada 1 mg/mL em PBS, em uma razão molar de droga para anticorpo de 12 a 1. A mistura de reação foi incubada em RT (20°C) por 17 horas. O excesso de droga livre foi removido por placa Zeba (Thermo Scientific) equilibrada em PBS.

[00389] A análise DAR foi realizada por MALDI-TOF (Bruker AutoFlex Speed). A proteína conjugada foi reduzida por 10 min em 37°C com TCEP 10 mM em água e diluída em uma concentração final de 50 μg/mL em acetonitrila 30 %, ácido trifluoracético 0,1 %. As amostras foram combinadas 1:1 com matriz S-DHB MALDI (50 mg/mL em acetonitrila 50 %, ácido trifluoracético 0,1 %) e 1 uL foi aplicado no alvo MALDI e seco a vácuo. Cada espectro MALDI foi acumulado por 5000 disparos na potência total de laser em modo linear, e a análise DAR final foi calculada comparando os picos relativos elevados em relação às massas conjugadas e não conjugadas tanto para cadeias pesadas quanto leves.

[00390] Pela intensidade do pico, MALDI-TOF mostrou uma razão droga para anticorpo (DAR) de 1,88. Conjugado A, como dois regioisômeros:Exemplo 2a Ensaio de linhagem celular de tumor

Sumário

[00391] Os dois diastereômeros do composto 1, [S,S,S] e [R,S,S] foram ensaiados contra linhagens celulares de câncer de mama que expressam Her2, linhagens celulares que expressam e que não expressam CD74, e linhagens celulares que expressam e que não expressam CD30. As linhagens celulares que expressam Her2 incluem SKBR3, MDA-MB-453, e MDA-MB- 468 que são respectivamente as que expressam muito, médio e pouco Her2. As linhagens celulares que expressam e que não expressam CD74 incluem SU-DHL6 e OPM2, que são respectivamente as que expressam e não expressam CD74. As linhagens celulares que expressam e que não expressam CD30 incluem L540 e células Raji, que são respectivamente as que expressam e que não expressam CD30.

[00392] Observou-se que [S,S,S] composto 1 é 20 vezes mais potente (IC50 média ca 1 nM) contra um painel destas linhagens celulares de tumor quando comparado ao [R,S,S] composto 1.

Métodos

[00393] Efeitos de citotoxicidade de compostos de teste foram avaliados com um ensaio de proliferação celular. Linhagens celulares aderentes de câncer (SKBR3, MDA-MB435, MDA-MB-468, HCT116, HT29, Skco1, e MDA-MB-453) foram obtidas de ATCC e mantidas em meio DMEM/F12 (50/50) com concentração elevada de glicose (Cellgro- Mediatech; Manassas, VA), suplementado com 10 % de soro fetal bovino inativado pelo calor (Hyclone; Thermo Scientific; Waltham, MA), glutamax 2mM (Invitrogen; Carlsbad, CA) e penicilina/estreptomicina 1x (Cellgro- Mediatech; Manassas, VA). As linhagens celulares em suspensão (SU-DHL-6 e OPM-2) foram obtidas de ATCC e mantidas em meio RPMI com elevada concentração de glicose (Cellgro-Mediatech; Manassas, VA), suplementado com 20 % de soro fetal bovino inativado pelo calor (Hyclone; Thermo Scientific; Waltham, MA), glutamax 2mM (Invitrogen; Carlsbad, CA) e penicilina/estreptomicina 1x (Cellgro-Mediatech; Manassas, VA).

[00394] Em relação às células aderentes, um total de 1.000 células em um volume de 40 μL foram semeadas em uma placa de poliestireno branca com o fundo chato na metade da área de 96 poços um dia antes do ensaio. Em relação à suspensão celular, um total de 20.000 células em um volume de 40 μL foram semeadas em uma placa de poliestireno branca com o fundo chato na metade da área de 96 poços no dia do ensaio.

[00395] Os compostos de teste foram formulados em concentração 2x, em meio de cultura, e filtrados por meio de placas com filtro de MultiScreen HTS de 96 poços (Millipore; Billerica, MA). Os compostos esterilizados por filtro foram diluídos serialmente em meio de cultura e 40 μL dos compostos foram adicionados em poços de tratamento. Em relação às células aderentes, as placas foram cultivadas a 37 °C em uma incubadora de CO2 por 96 horas. Em relação à suspensão celular, o tempo de incubação foi 72 horas. Para as avaliações de viabilidade celular, 80 μL de reagente Cell Titer-Glo® (Promega Corp.; Madison, WI) foram adicionados em cada poço, e as placas foram processadas conforme instruções do produto.

[00396] A luminescência relativa foi avaliada em um leitor de placas ENVISION® (Perkin-Elmer; Waltham, MA). As leituras de luminescência relativa foram convertidas em viabilidade percentual usando células não tratadas como controles. Os dados foram ajustados com análise de regressão não linear, usando log(inibidor) vs. resposta, inclinação variável, 4 equações de ajuste de parâmetro usando GraphPad Prism (GraphPad v 5.00, Software; San Diego, CA). Os dados foram expressos como viabilidade celular relativa percentual vs. doses do composto em nM. IC50 de morte celular calculada por Prism foi usada para avaliar a eficiência de cada composto em cada linhagem celular.

Resultados

[00397] Para todas as linhagens celulares de câncer testadas, observou- se que [S,S,S] composto 1 (IC50 de morte celular variou de 0,74 nM a 9,18 nM) é 10 a 20 vezes mais potente quando comparado ao [R,S,S] Composto 1 (IC50 de morte celular variou de 12,21 nM a 91,53 nM).

[00398] Os resultados para conjugados trastuzumab são fornecidos na figura 1 e tabela 1. Os resultados para derivados de hemiasterlina [S,S,S] e [R,S,S] Composto 1, são fornecidos na figuras 2a-c e tabela 2.Tabela 1 - Ensaio de linhagem celular de tumor com conjugados de trastuzumab Tabela 2 - Ensaio de linhagem celular de tumor com derivados de hemiasterlinaExemplo 2b Ensaio de linhagem celular de tumor

[00399] Efeitos de citotoxicidade de compostos testes em células positivas alvo e negativas alvo foram avaliados com um ensaio de proliferação celular. As linhagens celulares de tumor foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC) e mantidas em meio Ham’s F-12 com glicose: DMEM com alta concentração de glicose(50:50) suplementado com 10 % de soro fetal bovino inativado pelo calor, 1 % de penicilina/estreptomicina e L-glutamax 2 mmol/L. As células positivas e negativas alvo (um total de 625 células por poço) foram semeadas em um volume de 25 μL em uma placa de poliestireno branca de fundo chato de 384 poços. As células aderiram naturalmente por toda a noite a 37 °C em uma incubadora de CO2. As variações ADC foram formuladas em concentração 2x em meio DMEM/F12 e filtradas por meio de placas com filtro MultiScreen HTS de 96 poços. ADCs esterilizados com filtro foram diluídas serialmente (1:3) e 25 μL das amostras diluídas foram adicionados em cada poço de tratamento. As placas foram então cultivadas a 37 °C em uma incubadora de CO2 por 120 horas. Para avaliação da viabilidade celular, 30 μL de reagente Cell Titer-Glo® (Promega Corp) foram adicionados em cada poço, e as placas foram processadas conforme instruções do produto. A luminescência relativa foi medida em um leitor de placa ENVISION® (Perkin-Elmer; Waltham, MA). As leituras de luminescência relativa foram convertidas em % de viabilidade usando células não tratadas como controles. Os dados foram ajustados com análise de regressão não linear, usando log(inibidor) vs. resposta, inclinação variável, equação de ajuste de 4 parâmetros usando GraphPad Prism (GraphPad v 5.00, Software; San Diego, CA). Os dados foram expressos como % de viabilidade celular relativa vs. dose de ADC em nM. Resultados Tabela 3 - Ensaio de linhagem celular de tumor com derivados de hemiasterlina Tabela 4 - Ensaio de linhagem celular de tumor com conjugados de anticorpo Exemplo 2c Ligação celular e morte celular Tabela 3 - Ensaio de linhagem celular em tumor com derivados de hemiasterlina Tabela 4 - Ensaio de linhagem celular em tumor com conjugados de anticorpoExemplo 2c Ligação celular e morte celular

[00400] Conjugado A foi avaliado em relação à capacidade de se ligar e matar células que expressam CD74 pelos métodos a seguir. As linhagens celulares testadas incluem células de linfoma B, mieloma múltiplo e leucemia. Os controles incluem anticorpo anti-CD74 não conjugado.

Ensaio de ligação celular

[00401] As linhagens celulares foram mantidas em RPMI, com concentração elevada de glicose (Cellgro-Mediatech; Manassas, VA) suplementado com 20 % de soro fetal bovino inativado pelo calor (Hyclone; Thermo Scientific; Waltham, MA), glutamax 2mM (Invitrogen; Carlsbad, CA) e penicilina/estreptomicina 1x (Cellgro-Mediatech; Manassas, VA). As células foram coletadas e ressuspensas em tampão FACS (tampão DPBS suplementado com 1 % de albumina sérica bovina). Um total de 200.000 células por poço foram incubadas no gelo com diluições seriadas de anti- CD74 ligado a SP7919 sem conjugação, por 60 minutos. As células foram lavadas duas vezes com tampão FACS gelado e incubadas com 5ug/mL de anticorpo IgG anti-humano de burro marcado com Alexa 647 (Jackson Immune-Research) em gelo por mais outros 60 mins. As células não coradas e células coradas apenas com anticorpo secundário foram usadas como controles. As amostras foram então lavadas duas vezes usando tampão FACS e analisadas usando um sistema BD FACS Canto. As intensidades médias de fluorescência foram ajustadas usando análise de regressão não linear com uma equação de ligação sítio específica em GraphPad Prism. Os dados foram expressos como intensidade fluorescente média geométrica vs. Concentração de anticorpo em nM.

Ensaio de morte celular

[00402] Os efeitos de citotoxicidade dos ligadores e conjugados livre de droga foram avaliados com um ensaio de proliferação celular. Um total de 12.500 células em um volume de 25 μL foram semeadas em uma placa de poliestireno branca de fundo chato de 384 poços no dia do ensaio. Os ligadores e conjugados livres de droga foram formulados em concentração inicial 2x (1000nM para ligadores livres de droga e 100nM para ADCs) em meio RPMI e filtrados por meio de placas com filtro MultiScreen HTS de 96 poços (Millipore). As ligações conjugadas esterilizadas por filtro foram diluídas serialmente (1:3) em condições estéreis e adicionadas em poços de tratamento. As placas foram cultivadas a 37°C em uma incubadora de CO2 por 72 horas. Para avaliação da viabilidade celular, 30 μL de reagente Cell Titer-Glo® (Promega Corp.) foram adicionados em cada poço, e as placas foram processadas conforme instruções do produto. A luminescência relativa foi avaliada em um leitor de placas ENVISION® (Perkin-Elmer; Waltham, MA). As leituras relativas de luminescência foram convertidas em % de viabilidade usando células não tratadas como controles. Os dados foram ajustados com análise de regressão não linear, usando log(inibidor) vs. resposta, inclinação variável, equação de ajuste de 4 parâmetros usando GraphPad Prism. Os dados foram expressos como % de viabilidade celular relativa vs. dose de ligador ou conjugado livre de droga em nM.

[00403] Conjugado A foi avaliado em relação à capacidade de se ligar e matar células que expressam CD74. As linhagens celulares testadas incluem linfoma de células B, mieloma múltiplo e leucemia. Os controles incluem anticorpo anti-CD74 não conjugado. Os resultados são resumidos na tabela a seguir:

[00404] Embora o assunto em questão reivindicado tenha sido descrito nos termos de várias modalidades, os versados na técnica entenderão que várias modificações, substituições, omissões e alterações podem ser realizadas sem fugir do espírito do mesmo. Dessa maneira, pretende-se que o scope do assunto em questão reivindicado seja limitado apenas pelo escopo das reivindicações a seguir, incluindo equivalentes do mesmo.

Claims (34)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é de acordo com a Fórmula 1000: ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Ar é uma arila monocíclica, substituída ou não substituída, divalente com seis membros; uma heteroarila monocíclica, substituída ou não substituída, divalente com cinco ou seis membros; uma arila bicíclica fundida, substituída ou não substituída, divalente com nove ou dez membros; ou uma heteroarila bicíclica fundida, substituída ou não substituída, divalente com oito, nove ou dez membros; L é ausente ou -CH2-; W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, estão ausentes ou são um grupo de ligação divalente; EG é ausente ou é um grupo eliminador; cada RT é um grupo de gatilho de liberação, na cadeia principal da Fórmula 1000 ou ligado a EG, em que cada RT é opcional; RT1 é um grupo de gatilho de liberação, ou um ligador clivável, ou RT1 é ausente; HP é uma ligação simples, ausente, ou um grupo hidrofílico divalente; HP1 é uma ligação simples, ausente, um grupo hidrofílico divalente, ou onde RHP é um grupo hidrofílico monovalente; SG é uma ligação simples, ausente, ou um grupo espaçador divalente; e em que R201 é alquila inferior.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é de acordo com a Fórmula I: ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que EG é um grupo eliminador.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é de acordo com a Fórmula 1001 ou 1002: ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que RT1 é um grupo de gatilho de liberação ou um ligador clivável; e RT é um grupo de gatilho de liberação ligado ao EG; e RT é opcional.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R é:

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que R201 é metila, etila, ou propila.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que EG é:em que cada REG é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, bifenila, -CF3, -NO2, -CN, flúor, bromo, cloro, alcoxila, alquilamino, dialquilamino, alquila-C(O)O-, alquilamino- C(O)- e dialquilaminoC(O)-.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que um RT é opcional e RT é um resíduo de um aminoácido natural ou não natural ou um resíduo de um açúcar.

8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que RT é:

9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, caracterizado pelo fato de que RT1 é ausente;valina-alanina; valina-ácido glutâmico; alanina-fenilalanina; fenilalaninalisina; fenilalanina-homolisina; glicina-glicina-glicina;onde aa é um resíduo de aminoácido natural ou não natural; ouonde o anele um anel heterocíclico com 4 a 7 membros compreendendo 3-6 átomos de carbono.

10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que SG compreende alquileno C1-C10, -C(O)-, ou uma combinação dos mesmos.

11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que SG é:

12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, e 4 a 11, caracterizado pelo fato de que HP é:em que m é um número inteiro selecionado de 1 a 12.

13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3, e 11, caracterizado pelo fato de que HP1 é ausente ou onde RHP é em que R é -H ou -CH3 e m é um número inteiro selecionado de 1 a 12 ou RHP é -C1-C6-alquileno-SO3-.

14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que W1, W2, W3, W4, e W5 são cada qual independentemente uma ligação simples, ausente, ou compreendem -C(O)-, -O-, -C(O)NH-, -C(O)NH-alquila-, -OC(O)NH-, -SC(O)NH-, -NH-,-NH-alquila-, -N(CH3)CH2CH2N(CH3)-, -S-, -S-S-, -OCH2CH2O-, ou uma combinação dos mesmos.

15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que W1, W2, W3, W4, e W5 são independentemente ausentes ou uma ligação; ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e 4 a 15, caracterizado pelo fato de que Ar é um é uma arila monocíclica, substituída ou não substituída, divalente com seis membros ou uma heteroarila monocíclica, substituída ou não substituída, divalente com seis membros.

17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e 4 a 15, caracterizado pelo fato de que Ar é uma heteroarila fundida bicíclica, substituída ou não substituída, divalente com nove membros.

18. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e 4 a 15, caracterizado pelo fato de que Ar é qualquer um dos seguintes:

19. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e 4 a 18, caracterizado pelo fato de que L é ausente.

20. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é de acordo com qualquer uma das seguintes fórmulas: ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

21. Composto, caracterizado pelo fato de que éou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

22. Conjugado, caracterizado pelo fato de que compreende um resíduo do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, ligado a um segundo composto por meio de um ligador.

23. Conjugado de acordo com a reivindicação 22,caracterizado pelo fato de que é de acordo com a Fórmula (E1):ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo

24. Conjugado de acordo com a reivindicação 23,caracterizado pelo fato de que R é:

25. Conjugado de acordo com a reivindicação 23,caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo em: ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

26. Conjugado de acordo com a reivindicação 23,caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo em:ou um sal, ou tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

27. Conjugado de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 26, caracterizado pelo fato de que COMP é um resíduo de um polipeptídeo, um resíduo de um anticorpo, ou um resíduo de uma cadeia de anticorpo.

28. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21 ou conjugado como definido em qualquer uma das reivindicações 22 a 27; e um excipiente, carreador, ou diluente farmaceuticamente aceitável.

29. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, conjugado de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 27, ou composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que é para uso em terapia.

30. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, de um conjugado como definido em qualquer uma das reivindicações 22 a 27, ou de uma composição farmacêutica como definida na reivindicação 28, caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento para o tratamento de proliferação celular ou câncer.

31. Uso de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de célula pequena de pulmão, câncer de célula não pequena de pulmão, câncer ovariano, câncer ovariano resistente à platina, adenocarcinoma ovariano, câncer endometrial, câncer de mama, câncer de mama que superexpressa Her2, câncer de mama triplo-negativo, um linfoma, linfoma de célula grande; linfoma histiocítico e linfocítico misto difuso; linfoma de célula B folicular, câncer de cólon, carcinoma de cólon, adenocarcinoma de cólon, adenocarcinoma colorretal, melanoma, câncer de próstata, ou mieloma múltiplo.

32. Método para produção de um conjugado, caracterizado pelo fato de que compreende colocar um composto selecionado do grupo consistindo em: com um segundo composto; em que o segundo composto compreende uma azida.

33. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o segundo composto é um polipeptídeo, um anticorpo, ou uma cadeia de anticorpo.

34. Método de acordo com a reivindicação 32 ou 33, caracterizado pelo fato de que o composto (101) é colocado em contado com o segundo composto compreendendo uma azida.