KR20220108783A - 분자 접합과 관련된 조성물 및 방법 - Google Patents

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KR20220108783A
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박수호
정두환
서동훈
이상광
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이향숙
박옥구
서범석
김세나
설민아
송지나
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Abstract

본 발명은 마이클 공여체 모이어티를 포함하는 생체분자와 접합되어, 혈장-안정성 항체-약물 접합체(ADC)를 제공할 수 있는 활성화된 마이클 수용체(AMA) 화합물에 관한 것이다. ADC의 약제학적 조성물이 또한 개시되어 있다. 또한 상기 조성물이 유용한 다수의 적용(예를 들어, 치료적 적용)이 본 명세서에서 제공된다.

Description

분자 접합과 관련된 조성물 및 방법
관련 출원
본 출원은 2019년 12월 2일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/942,482호에 대한 우선권의 이익을 주장한다. 이 출원의 전체 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
항체-약물 접합체(ADC)는 다양한 암에 걸쳐 효능이 있는 항암제의 강력한 부류로서 부상하고 있다. ADC는 일반적으로 3가지 뚜렷한 특성, 즉, 세포-결합제 또는 표적화 모이어티(항체); 링커; 및 세포독성제(약물)를 포함한다(도 1). 따라서, 항체 생체접합은 생물학 및 의학에 적용하기 위한 신규한 생물학적 활성 접합체의 개발에 중요한 역할을 한다. 항체의 구조, 기능 및 활성을 방해하지 않으면서 변형을 정확하게 설치하기 위해서는 화학선택적이고 온화한 공정이 핵심이다. 아미노산 측쇄의 반응성, 접근성 및 풍부함은 다른 모든 단백질생성 아미노산보다 하나의 특정 잔기의 선택적인 변형을 달성하는 데 필요한 핵심 측면이다. 이 중에서, 시스테인(Cys)은 이의 설프하이드릴 측쇄의 낮은 존재비 및 높은 친핵성으로 인해 선택되는 아미노산으로 남아 있다.
항체 생체접합 분야의 발전에도 불구하고, 말레이미드는 주로 말레이미드 시약의 빠른 역학과 용이한 합성으로 인해 여전히 가장 일반적으로 사용되는 시약이다. 그러나, 이 시약으로부터 형성된 티오-석신이미딜 접합체는 말레이미드의 방출을 야기하는 혈장에 존재하는 티올과 교환 반응을 겪는다. ADC의 경우에, 티올 교환 반응의 생성물이 매우 강력한 세포독성 약물이므로, 티올과의 교환 반응은 세포독성을 야기할 수 있다. 따라서, 서열 내의 특정 부위에서 프로브 및 약물의 부위-선택적이고 비가역적인 설치를 가능하게 하는 방식으로 단백질 및 항체 접합체를 구축하여 의도된 표적 부위에서 약물을 확실하게 방출하는 혈장-안정적 ADC를 생성하는 방법에 대한 절박한 요구가 있다.
단클론성 항체의 사슬간 시스테인 잔기의 티올은 약물 분자에 대한 부착 부위로서 사용될 수 있다. 인간 IgG1에서, 접합 부위로서 사용될 수 있는 4개의 사슬간 이황화 결합이 있다. 4개의 사슬간 이황화 결합은 트리스(2-카복시에틸) 포스핀(TCEP) 또는 다이티오트레이톨(DTT)에 의해 환원될 수 있으며, 이는 약물 분자를 접합하는 데 이용할 수 있는 8개의 티올기를 생성한다. 이 방법을 통해, 상이한 약물 항체 비율(DAR) 접합체를 얻을 수 있다.
고전적으로, 시스테인 잔기는 말레이미드와 같은 친전자체에 대한 티올의 첨가를 통해 변형될 수 있다. 따라서 접합체는 항체의 이황화 결합을 환원시킨 다음 말레이미드와 반응함으로써 제조될 수 있다. 그러나, 말레이미드-기반 항체-약물 접합체는 혈액 순환에서 제한된 안정성을 가지는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 역-마이클 반응에 민감하지 않은 ADC를 생성할 활성 모이어티에 시스테인 잔기를 접합하는 대안적인 방법이 필요하다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 염에 관한 것이며,
Figure pct00001
식 중,
A는
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
또는
Figure pct00005
이고;
M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이고;
각각의 L은 독립적으로 스페이서 모이어티로부터 선택되고;
각각의 Q는 독립적으로 활성 모이어티 또는 반응성 기로부터 선택되고;
X는 -Cl, -Br, 및 -I로부터 선택되고;
J는 표적화 모이어티이고;
R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자-구인성 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R46은 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R42 및 R43은 각각 독립적으로 -OH, 알콕시, -NR44R45, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택되며, 여기서 R44 및 R45는 이들이 부착되는 질소 원자와 함께, 선택적으로 아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합되는, 5 내지 8원 고리를 형성할 수 있고;
R32, R44, 및 R45는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R47은 O-, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴이고;
n은 1 내지 4이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물을 마이클 공여체에 공유 결합된 표적화 모이어티를 포함하는 시약과 반응시켜, 마이클 부가물을 생성하는 단계를 포함하는, 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계, 또는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
도 1은 항체-약물 접합체(ADC)의 개략도를 나타내는 도면.
도 2는 수성 환경에서 시간 경과에 따른 AMA-9c의 안정성을 나타내는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 그래프를 나타내는 도면.
도 3은 화합물 AMA-1, AMA-2, AMA-3, AMA-4, AMA-8, AMA-9c, AMA-10, mMPS-4, 및 PyrMPS-1과 N-Ac-시스테인의 상대 반응 속도를 예시하는 도면.
도 4는 화합물 14와 비교한 화합물 N-Ac-Cys-AMA-10의 상대 안정성을 나타내는 도면.
도 5는 AMA-9c와 인간 혈청 알부민(1), 및 티오-mAb(2)의 접합 반응을 도시하는 반응식을 나타내는 도면.
도 6은 AMA-9c와 티오-mAb의 접합 반응의 분석을 도시한 소수성 상호작용 크로마토그래피-HPLC(HIC-HPLC) 그래프를 나타내는 도면.
도 7은 N-Ac-시스테인을 가지는 AMA 전구체인 pryMPS-1 및 mMPS-4와 비교한 마이클 수용체 전구체 참조 A의 상대 반응 속도를 도시하는 개략도를 나타내는 도면.
본 개시내용의 화합물
특정 양태에서, 본 개시내용은 마이클 공여체 모이어티를 포함하는 생체분자와 접합을 할 수 있는 활성화된 마이클 수용체(AMA) 화합물에 관한 것이다. AMA, 예컨대, 화학식 (II) 및 (III)의 비닐 아릴 케톤은 마이클 공여체와 마이클 첨가 반응을 거쳐 화학식 (IIa) 및 (IIIa)의 접합체를 제공할 수 있다(반응식 1). 특정 양태에서, 본 개시내용은 생체분자와 AMA, 예컨대, 화합물 (IIa) 및 (IIIa)의 접합체에 관한 것이다.
반응식 1.
Figure pct00006
화학식 (II), (III), (IIa), 및 (IIIa)의 화합물에서, L은 스페이서 모이어티이고; Q는 활성 모이어티(이는, 예를 들어, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이 약물 모이어티를 포함할 수 있음) 또는 반응성 기이고; M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이고; J는 표적화 모이어티(이는, 예를 들어, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이 항체를 포함할 수 있음)이고; R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자-구인성 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬이다. 예를 들어, 특정 실시형태에서 R30 및 R31 중 적어도 하나가 존재하고 전자-구인성 기이며; R32는 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 마이클 공여체는 단백질, 예컨대, 항체, 또는 융합 단백질의 Cys 잔기이다.
일부 실시형태에서, 활성 모이어티 Q는 L' 및 Q'을 포함하며, 여기서 L'은 링커이고 Q'은 활성제이다. 본 발명의 일부 양태에서, L'은 커플링 기를 포함하며, 여기서 커플링 기는 L에 커플링된다. 예를 들어, 커플링 기는 -C(=O)NR32-, -C(=O)O-, -C(=NR32)-, -C=NO-, -NR32-C(=O)-NR32-, -OC(=O)O-, -S-S-, -NR32S(=O)2O-, 및 -OS(=O)2O-로부터 선택될 수 있다. 대안적으로, 커플링 기는
Figure pct00007
및
Figure pct00008
으로부터 선택된다.
L'은 절단 가능한 기를 더 포함할 수 있으며, 여기서 절단 가능한 기는 Q'에 커플링된다. 예를 들어, Q'에 커플링된 절단 가능한 기는
Figure pct00009
및
Figure pct00010
으로부터 선택될 수 있으며, 여기서
R49는 수소 또는 -C(=O)R50이고;
R50은 저급 알킬이다.
절단 가능한 기의 추가적인 예는 국제 특허출원 공개 제WO2019/008441호에 개시되어 있으며, 이는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
일부 실시형태에서, L'은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)-, 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 더 포함한다.
특정 실시형태에서, 스페이서 모이어티는 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)-, 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 포함한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 스페이서 모이어티는
Figure pct00011
또는
Figure pct00012
를 포함할 수 있으며, 여기서
a는 M-포함 방향족 고리에 대한 결합이고, b는 L'에 대한 결합이고;
n은 2 내지 20이다.
본 발명의 일부 실시형태에서, Q'은 호르몬, 올리고뉴클레오타이드, 독소, 친화성 리간드, 검출용 프로브, 또는 이들의 조합이다. 예를 들어, Q'은 사이토카인, 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 구충제, 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다.
일부 실시형태에서, 표적화 모이어티는 -S- 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, 표적화 모이어티는 -S- 모이어티를 통해 화학식 (I)의 화합물의 나머지에 커플링된다.
특정 실시형태에서, 표적화 모이어티는 항체, 예컨대, 온전한 다클론성 항체, 온전한 단클론성 항체, 항체 단편, 단일 사슬 Fv(scFv) 돌연변이체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원 결정기 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 다른 변형된 면역글로불린 분자로부터 선택되는 항체를 포함한다. 예를 들어, 표적화 모이어티는 무로모납-CD3, 압식시맙, 리툭시맙, 다클리주맙, 팔리비주맙, 인플릭시맙, 트라스투주맙(허셉틴(herceptin)), 에타너셉트, 바실릭시맙, 젬투주맙 오조가마이신, 알렘투주맙, 이브리투모맙 튜세탄, 아달리무맙, 알레파셉트, 오말리주맙, 에팔리주맙, 토시투모맙-I131, 세툭시맙, 베바시주맙, 나탈리주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 에쿨리주맙, 릴로나셉트, 세톨리주맙 페골, 로미플로스팀, AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, 벨리무맙, TACI-Ig, 2세대 항-CD20, ACZ-885, 토실리주맙, 아틀리주맙, 메폴리주맙, 퍼투주맙, 휴맥스 CD20, 트레멜리무맙(CP-675 206), 티실리무맙(Ticilimumab), MDX-010, IDEC-114, 이노투주맙 오조가마이신, 휴맥스 EGFR, 애플리버셉트, 휴맥스-CD4, Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, 카투막소맙, IGN101, MT-201, 프레고보맙, CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, 모타비주맙, MEDI-524, 에품구맙(Efumgumab), 아우로그랍(Aurograb), 락시바쿠맙, 3세대 항-CD20, LY2469298 및 벨투주맙으로부터 선택되는 항체를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 방법
본 발명은 활성화된 마이클 수용체(AMA) 화합물을 이용하여 활성 모이어티에 단백질을 접합시키는 방법에 관한 것이다. AMA, 예컨대, 화학식 (II) 및 (III)의 비닐 아릴 케톤은 마이클 공여체와 마이클 첨가 반응을 거쳐 화학식 (IIa) 및 (IIIa)의 접합체를 제공할 수 있다(반응식 1).
화학식 (II) 및 (III)의 화합물에서 L은 스페이서 모이어티이고; Q는 활성 모이어티 또는 반응성 기이고; M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이고; J는 표적화 모이어티이고; R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자-구인성 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고; R32는 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
본 발명의 일부 실시형태에서 마이클 공여체는 단백질, 예컨대, 항체, 또는 융합 단백질의 Cys 잔기이다.
특정 실시형태에서, 표적화 모이어티에 공유 결합된 마이클 공여체는 -SH, -NH2, -OH,
Figure pct00013
또는
Figure pct00014
로부터 선택되고; 여기서 R은 C1-3 알킬 또는 C1-3 알콕시이다.
반응식 1.
Figure pct00015
놀랍게도, 본 발명자들은 화학식 (II) 또는 (III)의 아릴 고리의 메타 위치에서 질소 원자 또는 전자-구인성 치환기(원자는 "M"으로 표시됨)를 도입하는 것 및/또는 마이클 수용체 자체 상에 전자-구인성 치환기(기는 "R31"로 표시됨)를 도입하는 것이 마이클 첨가 반응의 속도를 크게 증가시켜 접합체 화합물 (IIa) 및 (IIIa)의 빠르고 깨끗한 형성을 초래한다는 것을 발견하였다. N-Ac-Cys와 깨끗하게 반응하는 AMA 화합물 6의 예는 반응식 2에 나타나 있다.
반응식 2.
Figure pct00016
반응식 3의 반응은 N-Ac-Lys 및 N-Ac-Tyr과의 반응과 비교하여, AMA와 N-Ac-Cys의 반응의 화학선택성을 나타낸다.
반응식 3.
Figure pct00017
Figure pct00018
등몰량의 N-Ac-Cys 및 N-Ac-Lys(반응식 3, 상단 반응) 또는 N-Ac-Cys, N-Ac-Tyr, 및 N-Ac-Lys(반응식 3, 하단 반응)을 포함하는 혼합물에 노출될 때, AMA 화합물 6은 95% 초과의 화학선택성으로 N-Ac-Cys와의 접합체를 생성하였다.
도 2는 수성 환경에서 화학식 (II)의 화합물의 안정성을 나타낸다. 단백질 접합체의 빠르고 깨끗한 형성에 적합한 추가적인 마이클 수용체 화합물은 반응식 4에 나타나 있다.
반응식 4.
Figure pct00019
화학식 (II)의 다양한 화합물에 대한 마이클 추가 반응의 상대 속도뿐만 아니라 N-Ac-Cys를 가지는 다른 마이클 수용체가 도 3에 나타나 있다. 나타낸 바와 같이, 아릴 고리 상의 링커 치환기에 대한 메타 위치에 마이클 수용체 모이어티를 배치하면 반응 속도가 증가한다(화합물 3 대 화합물 4를 참조). 반응 속도는 아릴 고리 상의 마이클 수용체 모이어티 및 링커 모이어티 둘 다에 대한 메타 위치에서 전자-구인성 치환기 또는 질소 원자의 존재 하에 추가로 증가한다(화합물 5 및 6 대 화합물 4).
역-마이클 변환에 대한 ADC 불안정성의 문제를 해결하기 위해, 수성 환경에서 화학식 (IIIa)의 화합물의 안정화에 대한 다양한 접근법이 탐구되었다. 화학식 (IIIa)의 화합물을 수소화물 공급원(예컨대, NaBH4)으로 처리하면 수성 매질에서 안정적인 화학식 (IVa)의 알코올-포함 화합물의 형성을 초래한다(반응식 5). 추가적으로, 본 발명자들은 화학식 (IIIa)의 화합물을 아민-포함 화합물 또는 하이드록실아민으로 처리하면 수성 매질에서 안정적인 화학식 (IVb)(반응식 5)의 이민 또는 옥심의 형성을 초래한다는 것을 발견하였다(반응식 6).
반응식 5.
Figure pct00020
R42는 -OH, 알콕시, -NR44R45, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 여기서 R44 및 R45는 이들이 부착되는 질소 원자와 함께, 선택적으로 아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합되는, 5 내지 8원 고리를 형성할 수 있다.
반응식 6.
Figure pct00021
화학식 (IVa)의 화합물은 인간 및 마우스 혈장뿐만 아니라 PBS pH 7.4 완충액에서 1주일 초과 동안 높은 안정성을 나타내는 반면, 상응하는 화학식 (IIIa)의 화합물은 덜 안정적이다(도 4).
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 추가로 활성화된 마이클 수용체(AMA) 화합물, 예컨대, 반응식 7의 화학식 (Va), (Vb) 및 (Vc)의 화합물에 대한 전구체를 이용하여 단백질을 활성 모이어티에 접합시키는 방법에 관한 것이며, 여기서
X는 -Cl, -Br, 및 -I로부터 선택되고;
R46은 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R47은 O-, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴이고;
n은 1 내지 4이다.
반응식 7.
Figure pct00022
화학식 (Va), (Vb) 및 (Vc)의 화합물의 예는 반응식 8에 나타나 있다. 화학식 (Va), (Vb) 및 (Vc)의 화합물은 마이클 공여체-포함 분자, 예컨대, 단백질과 접합하기에 적합한 마이클 수용체 시약으로 깨끗하게 전환될 수 있다.
반응식 8.
Figure pct00023
추가 연구는, AMA를 포함하는 접합 접근법이 항체, 예컨대, 인간 혈청 알부민 및 티오-mAb(트라스투주맙)로 확장될 수 있음을 나타낸다(도 5 및 6). 생성된 접합체를 NaBH4로 환원시키면 혈장-안정적 ADC가 제공된다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 염에 관한 것이다:
Figure pct00024
식 중, A는
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
또는
Figure pct00028
이고;
M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이고;
각각의 L은 독립적으로 스페이서 모이어티로부터 선택되고;
각각의 Q는 독립적으로 활성 모이어티 또는 반응성 기로부터 선택되고;
X는 -Cl, -Br, 및 -I로부터 선택되고;
J는 표적화 모이어티이고;
R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자-구인성 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R46은 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고 선택되고;
R42 및 R43은 각각 독립적으로 -OH, 알콕시, -NR44R45, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택되며, 여기서 R44 및 R45는 이들이 부착되는 질소 원자와 함께, 선택적으로 아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합되는, 5 내지 8원 고리를 형성할 수 있고;
R32, R44, 및 R45는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R47은 O-, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴이고;
n은 1 내지 4이다.
일부 실시형태에서, M은 N이다.
특정 실시형태에서, M은 CR30이며, 여기서 R30은 전자-구인성 기이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00029
및
Figure pct00030
로부터 선택되며,
여기서 R31은 전자-구인성 기이고, 바람직하게는 L은 아마이드 또는 에스터로부터 선택되는 전자-구인성 기에 의해 C에 커플링된다.
일부 실시형태에서, M은 C(-L-Q)이며, 여기서 L은 전자-구인성 기에 의해 C에 커플링된다.
일부 실시형태에서, R30은 -CO2NR33R34 또는 -CO2R35이고, R33, R34 및 R35는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 각각의 전자-구인성 기는 독립적으로 -NO2, -CN, -할로알킬, -CO2NR33R34, -CO2R35, -C(=O)R36, -S(=O)R37, -S(=O)2OR38, 및 -NR39R40R41로부터 선택되고; R36 , R37, R38, R39 , R40, 및 R41은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 각각의 전자-구인성 기는 독립적으로 -CN, -CONR33R34, 및 -CO2R35로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 각각의 전자 구인성 기는 독립적으로 -CN, -CONH2, 및 -CO2Me로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, Q는 활성 모이어티이다.
일부 실시형태에서, Q는 L' 및 Q'을 포함하며, L'은 링커이고 Q'은 활성제이다.
특정 실시형태에서, L'은 커플링 기를 포함하며, 여기서 커플링 기는 L에 커플링된다.
일부 실시형태에서, 커플링 기는 -C(=O)NR32-, -C(=O)O-, -C(=NR32)-, -C=NO-, -NR32-C(=O)-NR32-, -OC(=O)O-, -S-S-, -NR32S(=O)2O-, 및 -OS(=O)2O-로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 커플링 기는
Figure pct00031
및
Figure pct00032
으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, L'은 절단 가능한 기를 더 포함하며, 여기서 절단 가능한 기는 Q'에 커플링된다.
특정 실시형태에서, Q'에 커플링된 절단 가능한 기는
Figure pct00033
및
Figure pct00034
으로부터 선택되며, 여기서
R49는 수소 또는 -C(=O)R50이고;
R50은 저급 알킬이다.
일부 실시형태에서, L'은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)-, 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 더 포함한다.
특정 실시형태에서, L은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)-, 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 포함한다. 예를 들어, L은
Figure pct00035
또는
Figure pct00036
를 포함하며, 여기서
a는 M-포함 방향족 고리에 대한 결합이고, b는 L'에 대한 결합이고;
n은 2 내지 20이다.
일부 실시형태에서, Q'은 호르몬, 올리고뉴클레오타이드, 독소, 친화성 리간드, 검출용 프로브, 또는 이들의 조합이다.
특정 실시형태에서, Q'은 사이토카인, 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 구충제, 또는 이들의 조합으로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, Q는 반응성 기이다.
일부 실시형태에서, 반응성 기는 -N3,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
, -S(O)2Hal, -NH2, -CO2Hal, -OH, -C(O)H, -SH, -N=C=O, 및 -N=S=C로부터 선택되며, 여기서 Hal은 -Cl, -Br, 또는 -I이다.
특정 실시형태에서, 표적화 모이어티는 -S- 모이어티를 포함한다.
일부 실시형태에서, 표적화 모이어티는 -S- 모이어티를 통해 화학식 (I)의 화합물의 나머지에 커플링된다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00039
또는
Figure pct00040
이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00041
이다.
특정 실시형태에서, R31은 -CN, -CO2NR33R34, 또는 -CO2R35이다.
특정 실시형태에서, A는
Figure pct00042
이다.
일부 실시형태에서, R32는 수소 또는 C1-3 알킬이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00043
이다.
특정 실시형태에서, R46은 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 선택적으로 치환된 C6-C12 아릴, 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00044
이다.
특정 실시형태에서, R47은 O- 또는 C1-3 알킬이다.
특정 실시형태에서, A는
Figure pct00045
이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00046
Figure pct00047
또는
Figure pct00048
이다.
예를 들어, A는
Figure pct00049
또는
Figure pct00050
일 수 있다.
대안적으로, A는
Figure pct00051
일 수 있다.
다른 실시형태에서, A는
Figure pct00052
또는
Figure pct00053
일 수 있다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00054
또는
Figure pct00055
이다.
특정 실시형태에서, R42는 -OH 또는 -NR44R45이다.
일부 실시형태에서, 표적화 모이어티는 나노입자, 면역글로불린, 핵산, 단백질, 올리고펩타이드, 폴리펩타이드, 항체, 항원성 폴리펩타이드의 단편, 또는 리피바디(repebody)를 포함한다. 예를 들어, 표적화 모이어티는 항체, 예컨대, 온전한 다클론성 항체, 온전한 단클론성 항체, 항체 단편, 단일 사슬 Fv(scFv) 돌연변이체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원 결정기 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 변형된 면역글로불린 분자로부터 선택되는 항체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적화 모이어티는 무로모납-CD3, 압식시맙, 리툭시맙, 다클리주맙, 팔리비주맙, 인플릭시맙, 트라스투주맙(허셉틴), 에타너셉트, 바실릭시맙, 젬투주맙 오조가마이신, 알렘투주맙, 이브리투모맙 튜세탄, 아달리무맙, 알레파셉트, 오말리주맙, 에팔리주맙, 토시투모맙-I131, 세툭시맙, 베바시주맙, 나탈리주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 에쿨리주맙, 릴로나셉트, 세톨리주맙 페골, 로미플로스팀, AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, 벨리무맙, TACI-Ig, 2세대 항-CD20, ACZ-885, 토실리주맙, 아틀리주맙, 메폴리주맙, 퍼투주맙, 휴맥스 CD20, 트레멜리무맙(CP-675 206), 티실리무맙, MDX-010, IDEC-114, 이노투주맙 오조가마이신, 휴맥스 EGFR, 애플리버셉트, 휴맥스-CD4, Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, 카투막소맙, IGN101, MT-201, 프레고보맙, CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, 모타비주맙, MEDI-524, 에품구맙, 아우로그랍, 락시바쿠맙, 3세대 항-CD20, LY2469298 및 벨투주맙으로부터 선택되는 항체를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 화학식 (I)의 화합물은
Figure pct00056
Figure pct00057
및
Figure pct00058
로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물을 마이클 공여체에 공유 결합된 표적화 모이어티를 포함하는 시약과 반응시켜, 마이클 부가물을 생성하는 단계를 포함하는, 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 마이클 부가물을 환원시키는 단계를 더 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 표적화 모이어티에 공유 결합된 마이클 공여체는 -SH, -NH2, -OH,
Figure pct00059
또는
Figure pct00060
로부터 선택되며; 여기서
R은 C1-3 알킬 또는 C1-3 알콕시이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 암, 감염성 질환 또는 자가면역 질환으로부터 선택된다.
특징 실시형태에서, 질환 또는 장애는 암이다.
정의
용어 "아실"은 당업계에 인식되어 있고 일반식 하이드로카빌C(O)-, 바람직하게는 알킬C(O)-로 표시되는 기를 지칭한다.
용어 "아실아미노"는 당업계에 인식되어 있고 아실기로 치환된 아미노기를 지칭하며, 예를 들어, 화학식 하이드로카빌C(O)NH-로 표시될 수 있다.
용어 "아실옥시"는 당업계에 인식되어 있고 일반식 하이드로카빌C(O)O-, 바람직하게는 알킬C(O)O-로 표시되는 기를 지칭한다.
용어 "알콕시"는 산소가 부착된 알킬기, 바람직하게는 저급 알킬기를 지칭한다. 대표적인 알콕시기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-뷰톡시 등을 포함한다.
용어 "알콕시알킬"은 알콕시기로 치환된 알킬기를 지칭하고, 일반식 알킬-O-알킬로 표시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "알켄일"은 적어도 하나의 이중 결합을 포함하는 지방족 기를 지칭하고 "비치환된 알켄일" 및 "치환된 알켄일"을 둘 다 포함하는 것으로 의도되며, 이 중 후자는 알켄일기의 하나 이상의 탄소 상에서 수소를 대체하는 치환기를 가지는 알켄일 모이어티를 지칭한다. 이와 같은 치환기는 하나 이상의 이중 결합에 포함되거나 포함되지 않는 하나 이상의 탄소 상에서 일어날 수 있다. 더욱이, 이와 같은 치환기는 안정성이 금지되는 경우를 제외하고, 하기에 논의되는 바와 같이 알킬기에 대해 고려되는 모든 것을 포함한다. 예를 들어, 하나 이상의 알킬, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로아릴기에 의한 알켄일기의 치환이 고려된다.
"알킬"기 또는 "알칸"은 완전히 포화된 직쇄 또는 분지형 비방향족 탄화수소이다. 전형적으로, 직쇄 또는 분지형 알킬기는 달리 정의되지 않는 한 1 내지 약 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 약 10개의 탄소 원자를 가진다. 직쇄 및 분지형 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소-프로필, n-뷰틸, sec-뷰틸, tert-뷰틸, 펜틸, 헥실, 펜틸 및 옥틸을 포함한다. C1-C6 직쇄 또는 분지형 알킬기는 또한 "저급 알킬"기로 지칭된다.
더욱이, 본 명세서, 실시예, 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용되는 바와 같이 용어 "알킬"(또는 "저급 알킬")은 "비치환된 알킬" 및 "치환된 알킬"을 둘 다 포함하는 것으로 의도되며, 이 중 후자는 탄소원자 골격의 하나 이상의 탄소 상에서 하나 이상의 수소를 대체하는 치환기를 가지는 알킬 모이어티를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 이와 같은 치환기는, 예를 들어, 할로겐, 하이드록실, 카보닐(예컨대, 카복실, 알콕시카보닐, 폼일, 또는 아실), 티오카보닐(예컨대, 티오에스터, 티오아세테이트, 또는 티오폼에이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 나이트로, 아지도, 설프하이드릴, 알킬티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설폰일, 헤테로사이클릴, 아랄킬, 구아니디노, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다. 탄소 사슬 상에서 치환된 모이어티가 적절한 경우 그 자체로 치환될 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 예를 들어, 치환된 알킬의 치환기는 아미노, 아지도, 이미노, 아미도, 포스포릴(포스포네이트 및 포스피네이트를 포함함), 설폰일(설페이트, 설폰아미도, 설파모일 및 설포네이트를 포함함), 및 실릴기뿐만 아니라, 에터, 알킬티오, 카보닐(케톤, 알데하이드, 카복실레이트, 및 에스터를 포함함), -CF3, -CN 등의 치환 및 비치환된 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 치환된 알킬은 하기 기재되어 있다. 사이클로알킬은 알킬, 알켄일, 알콕시, 알킬티오, 아미노알킬, 카보닐-치환된 알킬, -CF3, -CN 등으로 추가로 치환될 수 있다.
용어 "Cx-Cy"는 화학적 모이어티, 예컨대, 아실, 아실옥시, 알킬, 알켄일, 알킨일, 또는 알콕시와 함께 사용되는 경우, 사슬에 x 내지 y개 탄소를 포함하는 기를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어 "Cx-Cy알킬"은 할로알킬기, 예컨대, 트라이플루오로메틸 및 2,2,2-트라이플루오로에틸 등을 포함하여, 사슬에 x 내지 y개의 탄소를 포함하는 직쇄 알킬 및 분지형 알킬기를 포함하는 치환 또는 비치환된 포화 탄화수소 기를 지칭한다. C0 알킬은 기가 말단 위치에 있는 경우에 수소를 나타내고, 내부인 경우 결합을 나타낸다. 용어 "C2-Cy알켄일" 및 "C2-Cy알킨일"은 길이가 유사하고 상기 기재된 알킬에 대한 가능한 치환이 유사하지만 각각 적어도 하나의 이중 또는 삼중 결합을 포함하는 치환 또는 비치환된 불포화 지방족 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "알킬아미노"는 적어도 하나의 알킬기로 치환된 아미노기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "알킬티오"는 알킬기로 치환된 티올기를 지칭하며, 일반식 알킬S-로 표시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "알킨일"은 적어도 하나의 삼중 결합을 포함하는 지방족 기를 지칭하고, "비치환된 알킨일" 및 "치환된 알킨일"을 둘 다 포함하는 것으로 의도되며, 이 중 후자는 알킨일기의 하나 이상의 탄소 상에서 수소를 대체하는 치환기를 가지는 알킨일 모이어티를 지칭한다. 이와 같은 치환기는 하나 이상의 삼중 결합에 포함되거나 포함되지 않는 하나 이상의 탄소 상에서 일어날 수 있다. 더욱이, 이와 같은 치환기는 안정성이 금지되는 경우를 제외하고, 위에서 논의된 바와 같이 알킬기에 대해 고려되는 모든 것을 포함한다. 예를 들어, 하나 이상의 알킬, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로아릴기에 의한 알킨일기의 치환이 고려된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "아마이드"는
Figure pct00061
기를 지칭하며, 여기서 각각의 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타내거나, 2개의 R10은 이들이 부착되는 N 원자와 함께 취해져서 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 가지는 헤테로사이클을 완성한다.
용어 "아민" 및 "아미노"는 당업계에 인식되어 있고 비치환 및 치환된 아민 및 이의 염, 예를 들어,
Figure pct00062
으로 표시될 수 있는 모이어티를 지칭하며,
여기서 각각의 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타내거나, 2개의 R10은 이들이 부착되는 N 원자와 함께 취해져서 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 가지는 헤테로사이클을 완성한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "아미노알킬"은 아미노기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "아랄킬"은 아릴기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "아릴"은 고리의 각각의 원자가 탄소인 치환 또는 비치환된 단일-고리 방향족 기를 포함한다. 바람직하게는 고리는 5 내지 7원의 고리, 보다 바람직하게는 6원의 고리이다. 용어 "아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리형 고리를 가지는 다환식 고리 시스템을 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 방향족이고, 예를 들어, 다른 고리형 고리는 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 따라서, 용어 "아릴"은 (C5-C10) 및 (C6-C10) 아릴기를 포함할 수 있다. 아릴기는 벤젠, 나프탈렌, 페난트렌, 페놀, 아닐린 등을 포함한다.
용어 "카바메이트"는 당업계에 인식되어 있고
Figure pct00063
기를 지칭하며,
여기서 R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기, 예컨대, 알킬기를 나타내거나, R9 및 R10은 개재 원자(들)와 함께 취해져서 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 가지는 헤테로사이클을 완성한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "카보사이클" 및 "카보사이클릭"은 고리의 각각의 원자가 탄소인 포화 또는 불포화 고리를 지칭한다. 용어 카보사이클은 방향족 카보사이클 및 비-방향족 카보사이클을 둘 다 포함한다. 비-방향족 카보사이클은 모든 탄소 원자가 포화되어 있는 사이클로알칸 고리, 및 적어도 하나의 이중 결합을 포함하는 사이클로알켄 고리를 둘 다 포함한다. "카보사이클"은 5 내지 7원의 모노사이클릭 및 8 내지 12원의 바이사이클릭 고리를 포함한다. 바이사이클릭 카보사이클의 각각의 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 카보사이클은 1, 2 또는 3개 이상의 원자가 2개의 고리 사이에서 공유되는 바이사이클릭 분자를 포함한다. 용어 "융합된 카보사이클"은 각각의 고리가 다른 고리와 2개의 인접한 원자를 공유하는 바이사이클릭 카보사이클을 지칭한다. 융합된 카보사이클의 각각의 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 예시적인 실시형태에서, 방향족 고리, 예를 들어, 페닐은 포화 또는 불포화 고리, 예를 들어, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 또는 사이클로헥센에 융합될 수 있다. 원자가가 허용하는 한, 포화, 불포화 및 방향족 바이사이클릭 고리의 임의의 조합이 카보사이클릭의 정의에 포함된다. 예시적인 "카보사이클"은 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 1,5-사이클로옥타다이엔, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌, 바이사이클로[4.2.0]옥트-3-엔, 나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 예시적인 융합된 카보사이클은 데칼린, 나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌, 바이사이클로[4.2.0]옥탄, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인덴 및 바이사이클로[4.1.0]헵트-3-엔을 포함한다. "카보사이클"은 수소 원자를 보유할 수 있는 임의의 하나 이상의 위치에서 치환될 수 있다.
"사이클로알킬"기는 완전히 포화된 고리형 탄화수소이다. "사이클로알킬"은 모노사이클릭 및 바이사이클릭 고리를 포함한다. 전형적으로, 모노사이클릭 사이클로알킬기는 달리 정의되지 않는 한 3 내지 약 10개의 탄소 원자, 보다 전형적으로는 3 내지 8개의 탄소 원자를 가진다. 바이사이클릭 사이클로알킬의 제2 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 사이클로알킬은 1, 2 또는 3개 이상의 원자가 2개의 고리 사이에서 공유되는 바이사이클릭 분자를 포함한다. 용어 "융합된 사이클로알킬"은 각각의 고리가 다른 고리와 2개의 인접한 원자를 공유하는 바이사이클릭 사이클로알킬을 지칭한다. 융합된 바이사이클릭 사이클로알킬의 제2 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. "사이클로알켄일"기는 1개 이상의 이중 결합을 포함하는 고리형 탄화수소이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "(사이클로알킬)알킬"은 사이클로알킬기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "카보네이트"는 당업계에 인식되어 있고 -OCO2-R10기를 지칭하며, 여기서 R10은 하이드로카빌기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "카복시"는 화학식 -CO2H로 표시되는 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "에스터"는 -C(O)OR10기를 지칭하며, 여기서 R10은 하이드로카빌기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "에터"는 산소를 통해 다른 하이드로카빌기에 연결된 하이드로카빌기를 지칭한다. 따라서, 하이드로카빌기의 에터 치환기는 하이드로카빌-O-일 수 있다. 에터는 대칭 또는 비대칭일 수 있다. 에터의 예는 헤테로사이클-O-헤테로사이클 및 아릴-O-헤테로사이클을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 에터는 "알콕시알킬"기를 포함하며, 이는 일반 화학식 알킬-O-알킬로 표시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "할로" 및 "할로겐"은 할로겐을 의미하며, 클로로, 플루오로, 브로모, 및 요오도를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "헤테로아랄킬"은 헤테로아릴기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "헤테로알킬"은 탄소 원자 및 적어도 하나의 헤테로원자의 포화 또는 불포화 사슬을 지칭하며, 여기서 어떠한 2개의 헤테로원자도 인접하지 않는다.
용어 "헤테로아릴"은 치환 또는 비치환된 방향족 단일 고리 구조, 바람직하게는 5 내지 7원의 고리, 보다 바람직하게는 5 내지 6원의 고리를 포함하며, 이의 고리 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리형 고리를 가지는 다환식 고리 시스템을 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 헤테로방향족이고, 예를 들어, 다른 고리형 고리는 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 따라서, 용어 "헤테로아릴"은 (C2-C10) 및 (C2-C10) 헤테로아릴기를 포함할 수 있다. 헤테로아릴기는, 예를 들어, 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 싸이아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "헤테로원자"는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 질소, 산소 및 황이다.
용어 "헤테로사이클로알킬", "헤테로사이클" 및 "헤테로사이클릭"은 치환 또는 비치환된 비-방향족 고리 구조, 바람직하게는 3 내지 10원의 고리, 보다 바람직하게는 3 내지 7원의 고리를 지칭하며, 이의 고리 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어 "헤테로사이클로알킬" 및 "헤테로사이클릭"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리형 고리를 가지는 다환식 고리 시스템을 포함하며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 헤테로사이클릭이고, 예를 들어, 다른 고리형 고리는 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 헤테로사이클로알킬기는, 예를 들어, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 몰폴린, 락톤, 락탐 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "(헤테로사이클로알킬)알킬"은 헤테로사이클로알킬기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "하이드로카빌"은 =O 또는 =S 치환기를 가지지 않는 탄소 원자를 통해 결합되고, 전형적으로 적어도 하나의 탄소-수소 결합 및 주로 탄소 골격을 가지지만, 선택적으로 헤테로원자를 포함할 수 있는 기를 지칭한다. 따라서, 메틸, 에톡시에틸, 2-피리딜, 및 트라이플루오로메틸과 같은 기는 본 출원의 목적을 위해 하이드로카빌인 것으로 간주되지만, 아세틸(연결 탄소에 =O 치환기를 가짐) 및 에톡시(탄소가 아닌 산소를 통해 연결됨)와 같은 치환기는 하이드로카빌인 것으로 간주되지 않는다. 하이드로카빌기는 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클, 헤테로사이클릴, 알킬, 알켄일, 알킨일, 및 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "하이드록시알킬"은 하이드록시 기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
아실, 아실옥시, 알킬, 알켄일, 알킨일, 또는 알콕시와 같은 화학적 모이어티와 함께 사용될 때 용어 "저급"은 치환기에 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 비-수소 원자가 있는 기를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, "저급 알킬"은 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알킬기를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 정의된 아실, 아실옥시, 알킬, 알켄일, 알킨일, 또는 알콕시 치환기는 이들이 단독으로 나타나든, 하이드록시알킬 및 아랄킬(이 경우에, 예를 들어, 아릴기 내의 원자는 알킬 치환기의 탄소 원자를 계수할 때 계수되지 않음)의 열거에서와 같이 다른 치환기와 조합되어 나타나든 각각 저급 아실, 저급 아실옥시, 저급 알킬, 저급 알켄일, 저급 알킨일, 또는 저급 알콕시이다.
용어 "폴리사이클릴", "폴리사이클', 및 "다환식"은 2개 이상의 원자가 2개의 인접한 고리에 공통인, 예를 들어, 고리가 "융합된 고리"인 2개 이상의 고리(예를 들어, 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴)를 지칭한다. 폴리사이클의 각각의 고리는 치환되거나 비치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, 폴리사이클의 각각의 고리는 고리에 3 내지 10개, 바람직하게는 5 내지 7개의 원자를 포함한다.
용어 "실릴"은 3개의 하이드로카빌 모이어티가 부착된 규소 모이어티를 지칭한다.
용어 "치환된"은 골격의 하나 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환기를 가지는 모이어티를 지칭한다. "치환" 또는 "~로 치환된"은 이와 같은 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따르고, 치환이, 예를 들어, 재배열, 고리화, 제거 등에 의한 것과 같은 변형을 자발적으로 겪지 않는 안정적인 화합물을 생성한다는 암시적 단서를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용 가능한 치환기를 포함하는 것으로 고려된다. 광범위한 양태에서, 허용 가능한 치환기는 유기 화합물의 비고리형 및 고리형, 분지형 및 비분지형, 카보사이클릭 및 헤테로사이클릭, 방향족 및 비-방향족 치환기를 포함한다. 허용 가능한 치환기는 적절한 유기 화합물에 대해 하나 이상이고 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 질소와 같은 헤테로원자는 수소 치환기 및/또는 헤테로원자의 원자가를 만족하는 본 명세서에 기재된 유기 화합물의 임의의 허용 가능한 치환기를 가질 수 있다. 치환기는 본 명세서에 기재된 임의의 치환기, 예를 들어, 할로겐, 하이드록실, 카보닐(예컨대, 카복실, 알콕시카보닐, 폼일, 또는 아실), 티오카보닐(예컨대, 티오에스터, 티오아세테이트, 또는 티오폼에이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 나이트로, 아지도, 설프하이드릴, 알킬티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설폰일, 헤테로사이클릴, 아랄킬, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어를 포함할 수 있다. 적절한 경우 치환기 자체가 치환될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. "비치환된" 것으로 구체적으로 언급되지 않는 한, 본 명세서에서 화학적 모이어티에 대한 언급은 치환된 변형체를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, "아릴"기 또는 모이어티에 대한 언급은 암시적으로 치환 및 비치환된 변형체를 둘 다 포함한다.
용어 "설페이트"는 당업계에 인식되어 있고 -OSO3H기 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 지칭한다.
용어 "설폰아마이드"는 당업계에 인식되어 있고 일반 화학식
Figure pct00064
으로 표시되는 기를 지칭하며,
여기서 R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌, 예컨대, 알킬을 나타내거나, R9 및 R10은 개재 원자(들)와 함께 취해져서 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 가지는 헤테로사이클을 완성한다.
용어 "설폭사이드"는 당업계에 인식되어 있고 -S(O)-R10기를 지칭하며, 여기서 R10은 하이드로카빌을 나타낸다.
용어 "설포네이트"는 당업계에 인식되어 있고 SO3H기, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 지칭한다.
용어 "설폰"은 당업계에 인식되어 있고 -S(O)2-R10기를 지칭하며, 여기서 R10은 하이드로카빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "티오알킬"은 티올기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "티오에스터"는 -C(O)SR10 또는 -SC(O)R10기를 지칭하며, 여기서 R10은 하이드로카빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "티오에터"는 산소가 황으로 대체된 에터와 동등하다.
용어 "우레아"는 당업계에 인식되어 있고 일반 화학식
Figure pct00065
으로 표시될 수 있으며,
여기서 R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌, 예컨대, 알킬을 나타내거나, R9가 R10 및 개재 원자(들)와 함께 취해져서 고리 구조에 4 내지 8개의 원자를 가지는 헤테로사이클을 완성한다.
"보호기"는 분자 내의 반응성 작용기에 부착될 때, 작용기의 반응성을 차폐하거나 감소시키거나 방지하는 원자 그룹을 지칭한다. 전형적으로, 보호기는 합성 과정 동안 원하는 대로 선택적으로 제거될 수 있다. 보호기의 예는 문헌[Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY 및 Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY]에서 확인할 수 있다. 대표적인 질소 보호기는 폼일, 아세틸, 트라이플루오로아세틸, 벤질, 벤질옥시카보닐("CBZ"), tert-뷰톡시카보닐("Boc"), 트라이메틸실릴("TMS"), 2-트라이메틸실릴-에탄설폰일("TES"), 트라이틸 및 치환된 트라이틸 기, 알릴옥시카보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐("FMOC"), 나이트로-베라트릴옥시카보닐("NVOC") 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 대표적인 하이드록실 보호기는 하이드록실기가 아실화(에스터화)되거나 알킬화된 것, 예컨대, 벤질 및 트라이틸 에터뿐만 아니라, 알킬 에터, 테트라하이드로피라닐 에터, 트라이알킬실릴 에터(예를 들어, TMS 또는 TIPS 기), 글라이콜 에터, 예컨대, 에틸렌 글라이콜 및 프로필렌 글라이콜 유도체 및 알릴 에터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 장애 또는 병태를 "예방하는" 치료제는 통계적 샘플에서 처리되지 않은 대조군 샘플에 비해 처리된 샘플에서 장애 또는 병태의 발생을 감소시키거나, 처리되지 않은 대조군 샘플에 비해 장애 또는 병태의 발병을 지연시키거나 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상의 중증도를 감소시키는 화합물을 지칭한다.
용어 "치료하는"은 예방적 및/또는 치료적 처리를 포함한다. 용어 "예방적 또는 치료적" 처리는 당업계에 인식되어 있고 숙주에게 하나 이상의 대상 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 원치 않는 병태(예를 들어, 숙주 동물의 질환 또는 다른 원치 않는 상태)의 임상적 징후 전에 투여된다면, 처리는 예방적(즉, 이는 원치 않는 병태가 발생하지 않도록 숙주를 보호함)인 반면, 원치 않는 병태의 징후 후에 투여되는 경우 처리는 치료적(즉, 기존의 원치 않는 병태 또는 이의 부작용을 감소시키거나, 개선시키거나, 안정화시키는 것으로 의도됨)이다.
"접합체"는 더 큰 구성물로 공유적으로 연결된 2개 이상의 분자를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 접합체는 하나 이상의 다른 분자, 예컨대 하나 이상의 다른 생체분자 또는 중합체 링커에 공유적으로 연결된 하나 이상의 생체분자(예컨대, 펩타이드, 핵산, 단백질, 효소, 당, 다당류, 지질, 당단백질, 및 지단백질)를 포함한다.
"접합", "연결(joining)", "결합", "커플링" 또는 "연결(linking)"은 직접 또는 간접적으로 더 큰 분자를 만들기 위해 제1 원자 또는 분자를 또 다른 원자 또는 분자에 연결하는 것을 의미하는 데 동의적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체-약물 접합체(ADC)"는, 항체 및 약물의 생물학적 활성을 감소시키지 않으면서, 예를 들어, 링커 모이어티를 통해, 약물 및 항체가 서로 화학적으로 결합된 분자를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 면역글로불린, 면역글로불린 키메라, 또는 면역글로불린-유사 분자(예로서 그리고 비제한적으로 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 포함함), 이들의 조합물, 및 임의의 척추동물(예를 들어, 포유동물, 예컨대, 인간, 염소, 토끼 및 마우스)에서 면역 반응 동안 생성된 유사한 분자 및 관심이 있는 분자(또는 관심이 있는 매우 유사한 분자의 그룹)에 특이적으로 결합하여 다른 분자에 대한 결합을 실질적으로 배제하는 항체 단편을 포함하는 단백질 분자를 지칭한다. 상기 용어는 다클론성 항체, 단클론성 항체, 전장 항체 및 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 단편을 포함하는 것으로 의도된다. 전장 항체는 2개의 전장 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지며, 여기서 각각의 경쇄는 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결된다. 전장 항체는 IgA, IgD, IgE, IgM 및 IgG를 포함하고 IgG의 하위유형은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다. 용어 "항체 단편"은 항원-결합 기능을 가지는 단편을 지칭하고, 재조합 항체 단편(예컨대, sFv 단편, dsFv 단편, 이중특이적 sFv 단편, 이중특이적 dsFv 단편, F(ab)'2 단편, 단일 사슬 Fv 단백질("scFv"), 이황화 안정화 Fv 단백질("dsFv"), 다이아바디, 및 트라이아바디(당업계에 알려진 바와 같음), 및 낙타과(camelid) 항체(예를 들어, 미국 특허 제6,015,695호; 제6,005,079호, 제5,874,541호; 제5,840,526호; 제5,800,988호; 및 제5,759,808호를 참조)를 포함하는 것으로 의도된다. Fab는 경쇄 및 중쇄 가변 영역, 경쇄 불변 영역, 및 중쇄 제1 불변 도메인(CH1)을 포함하고, 하나의 항원-결합 부위를 가진다. Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역을 가진다. F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기 사이에 이황화 결합을 포함한다. Fv는 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역만을 가지는 최소한의 항체 단편을 지칭한다. dsFv는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 이황화 결합에 의해 서로 연결된 구조를 가지고, scFv는 일반적으로 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 펩타이드 링커에 의해 서로 공유적으로 연결되는 구조를 가진다. 이들 항체 단편은 프로테아제를 사용하여 얻을 수 있다(예를 들어, Fab 단편은 전장 항체를 파파인으로 분해함으로써 얻을 수 있고, F(ab')2 단편은 전장 항체를 펩신으로 분해함으로써 얻을 수 있음). 바람직하게는, 이들 항체 단편은 유전자 재조합 기법에 의해 생성될 수 있다.
용어 "항체"는 B 림프구의 단일 클론에 의해 또는 단일 항체의 경쇄 및 중쇄 유전자가 형질감염된 세포에 의해 생성되는 단클론성 항체를 포함한다. 단클론성 항체는, 표준 하이브리도마 기술(예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988), 및 C. A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, N.Y. (2001)] 참조)을 포함하여 당업자에게 알려진 다양한 기법을 사용하여 얻을 수 있다. 단클론성 항체는 또한 EBV-하이브리도마 기술(예를 들어, 문헌[Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2): 361-67 (1984), 및 Roder et al., Methods Enzymol., 121: 140-67 (1986)] 참조), 박테리오파지 벡터 발현 시스템(예를 들어, 문헌[Huse et al., Science, 246: 1275-81 (19891)] 참조), 또는 항체 단편, 예컨대, Fab 및 scFv(단일 사슬 가변 영역)를 포함하는 파지 디스플레이 라이브러리(예를 들어, 미국 특허 제5,885,793호 및 제5,969,108호, 및 국제 특허 출원 공개 WO 제92/01047호 및 WO 제99/06587호를 참조하며, 이들 각각은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용됨)를 포함하여 다른 적합한 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 단클론성 항체는 인간화 단클론성 항체를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "인간화" 항체는 항체의 항원 결합 루프를 형성하는 마우스 단클론성 항체의 상보성-결정 영역(CDR)이 인간 항체 분자의 골격에 이식된 것이다. 마우스와 인간 항체의 골격의 유사성으로 인해, 이러한 접근법은 인간 항체에 항원적으로 동일하지만 CDR 서열이 유래된 마우스 단클론성 항체와 동일한 항원에 결합하는 단클론성 항체를 생성한다는 것이 당업계에서 일반적으로 허용된다. 인간화 항체를 생성하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌[Janeway at al., 상기함], 미국 특허 제5,225,539호, 제5,585,089호 및 제5,693,761호(이들 각각은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용됨), 유럽 특허 제0239400 B1호, 및 영국 특허 제2188638호에 상세하게 기재되어 있다. 인간화 항체는 또한 미국 특허 제5,639,641호(이는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용됨), 및 문헌[Pedersen at al., J. Mol. Biol., 235: 959-973 (1994)]에 기재된 항체 표면 노출 잔기 변형(resurfacing) 기술을 사용하여 생성될 수 있다.
본 발명에 개시된 항체는 천연 항체 또는 재조합 항체일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "천연 항체"는 유전적 변형을 겪지 않은 항체를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "재조합 항체"는 유전적 변형에 의해 부여된 항원-결합 활성 또는 원하는 특징을 가질 수 있는 유전적으로 변형된 항체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "사이토카인"은 수많은 세포에 의해 분비되고 세포간 통신에 광범위하게 사용되는 신호전달 분자의 범주인 소세포-신호전달 단백질 분자를 지칭한다. 사이토카인은 단백질, 펩타이드, 또는 당단백질로 분류될 수 있으며; 용어 "사이토카인"은 다양한 발생학적 기원의 세포에 의해 전신에서 생성되는 크고 다양한 조절제의 패밀리를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "호르몬"은 유기체의 다른 부분에 있는 세포에 대한 신호전달 기능을 수행하는 신체의 한 부분에 있는 세포, 샘, 또는 기관에 의해 방출되는 화학물질에 관한 것이다. 상기 용어는 스테로이드 호르몬, 및 모노아민을 포함하여 펩타이드 호르몬, 지질 및 인지질-유래 호르몬을 포함한다.
"모이어티"는 분자의 단편, 또는 분자, 예를 들어, 접합체의 일부를 지칭한다.
본 발명은 마이클 추가 반응을 겪을 수 있는 작용기를 가지는 화합물을 개시한다. 마이클 추가는, 예를 들어, 문헌[R. T. Morrison and R. N. Boyd in Organic Chemistry, third edition, Allyn and Bacon, 1973]에 교시되어 있다. 상기 반응은 마이클 공여체 모이어티를 포함하는 분자와 마이클 수용체 모이어티를 포함하는 분자 사이에서 일어난다.
표적-지향적 치료
접합체의 표적화 모이어티는 세포를 인식하거나 세포에 의해 인식되어, 소위 표적-지향적 치료를 제공할 수 있다.
일부 실시형태에서, 접합체는 자가면역 질환을 치료하기 위해 표적-지향적 치료에서 사용하기 위한 활성 모이어티 Q를 포함한다. 특정 실시형태에서, 활성 모이어티는 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 마이코페닐레이트 모페틸, 시롤리무스, 타크로리무스, 에나너셉트, 프레드니손, 아자티오프린, 메토트렉세이트 사이클로포스파마이드, 아미노카프로산, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 클로로람부실, DHEA, 다나졸, 브로모크립틴, 멜록시캄, 또는 인플릭시맙으로부터 선택되는 활성제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 화합물은 감염성 질환을 치료하기 위해 표적-지향적 치료에서 사용하기 위한 활성 모이어티 Q를 포함한다. 특정 실시형태에서, Q는 베타-락탐(예를 들어, 페니실린 G, 페니실린 V, 클록사실린, 다이클록사실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 암피실린, 아목시실린, 베캄피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 피페라실린, 티카르실린), 아미노글리코사이드 계열(예를 들어, 아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신), 마크로라이드 계열(아지트로마이신, 클래리스로마이신, 에리트로마이신, 린코마이신, 클린다마이신), 테트라사이클린(예를 들어, 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 테트라사이클린), 퀴놀론(예를 들어, 시녹사신, 날리딕스산), 플루오로퀴놀론(예를 들어, 사이프로플록사신, 에녹사신, 그레파플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 노르플록사신, 오플록사신, 스파르플록사신, 트로바플록시신), 폴리펩타이드(예를 들어, 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B), 설폰아마이드(예를 들어, 설프아이소옥사졸, 설파메톡사졸, 설파다이아진, 설파메티졸, 설파아세타마이드), 항생제, 예컨대, 트라이메토프림, 실파메타졸, 클로람페니콜, 반코마이신, 메트로니다졸, 퀴누프리스틴, 달포프리스틴, 리팜피신, 스펙티노마이신, 또는 나이트로푸란토인, 일반 항바이러스제(예를 들어, 이독수라딘, 비다라빈, 아사이클로비르, 팜시사이클로비르, 펜시사이클로비르, 발라아사이클로비르, 간시사이클로비르, 포스카넷, 리바비린, 아만타딘, 리만타딘, 시도포비르, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 면역글로불린, 인터페론), HIV 감염 치료제(예를 들어, 테노포비르, 엠트리시타빈, 지도부딘, 디다노신, 잘시타빈, 스타부딘, 라미부딘, 네비라핀, 델라비리딘, 사퀴나비르, 리토나비르, 인디나비르, 넬피나비르)로부터 선택되는 활성제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 화합물 및 접합체는 종양을 치료하기 위해 세포에 활성제를 전달하는 방법에서 사용하기 위한 활성 모이어티 Q를 포함하며, 여기서 표적화 모이어티는 표적 세포(즉, 암 세포)와 결합하도록 선택된다. 특히, 본 화합물, 접합체, 및 조성물은 표적 세포가 암 세포이고 표적화 모이어티가 암 세포와 연관된(그리고 건강한 세포와 연관되지 않거나, 적어도 우선적으로 건강한 세포보다는 종양 세포와 연관된) 분자에 결합하도록 선택되는 경우와 같이, 포유동물(예를 들어, 인간)에서 비정상적인 세포 성장을 억제하거나 증식성 장애를 치료하는 데 유용할 수 있다.
특정 실시형태에서, 활성 모이어티 Q는 세포독성 또는 면역조절제, 항암제, 튜불린억제제(anti-tubulin agent), 또는 세포독성제를 포함한다. 바람직하게는, 세포독성 또는 면역조절제는 튜불린억제제, 아우리스타틴, DNA 작은 홈(minor groove) 결합제, DNA 전사 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 항생제, 항엽산, 대사길항물질, 카모듈린 저해제, 화학요법 증감제, 듀오카마이신, 에토포사이드, 플루오린화 피리미딘, 이오노포어, 렉시트롭신, 마이탄시노이드, 나이트로소우레아, 플라티놀, 기공-형성 화합물, 퓨린 대사길항물질, 퓨로마이신, 방사선 증감제, 라파마이신, 스테로이드, 탁산, 토포아이소머라제 저해제, 및 빈카 알카로이드로부터 선택되고; 항암제는 메토트렉세이트, 탁솔, L-아스파라기나제, 머캅토퓨린, 티오구아닌, 하이드록시우레이, 사이타라빈, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 나이트로소우레아, 시스플라틴, 카보플라틴, 미토마이신, 다카르바진, 프로오카비진, 토포테칸, 질소 머스타드, 사이톡산, 에토포사이드, 5-플루오로우라실, BCNU, 이리노테칸, 캄프토테신, 블레오마이신, 독소루비신, 이다리비신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 플리카마이신, 미톡산트론, 아스파라기나제, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 파클리탁셀, 도세탁셀 등으로부터 선택되며; 튜불린억제제는 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀), T67, 빈카 알킬로이드(예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈), 바카틴 유도체, 탁산 유도체, 에포티올론(예를 들어, 에포틸론 A, 에포틸론 B), 노코다졸, 콜히친, 콜시미드, 에스트라무스틴, 크리토파이신, 세마도틴, 마이탄시노이드, 콤브레스타틴, 디스코더몰라이드, 엘류테로빈, 또는 아우리스타틴 유도체(예를 들어, AFP, MMAF, MMAE)를 포함하고; 세포독성제는 안드로겐, 안트라마이신(AMC), 아스파라기나제, 5-아자사이티딘, 아자티오프린, 블레오마이신, 부설판, 부티오닌 설폭시민, 칼리키아마이신, 칼리키아마이신 유도체, 캄프토테신, 카보플라틴, 카무스틴(BSNU), CC-1065, 클로람부신, 시스플라틴, 콜히친, 사이클로포스파마이드, 사이타라빈, 사이티딘 아라비노사이드, 사이토칼라신 B, 다카바진, 닥티노마이신(악티노마이신), 다우노루비신, 데카바진, DM1, DM4, 도세탁셀, 독소루비신, 에토포사이드, 에스트로겐, 5-플루오르데옥시우리딘, 5-플루오로우라실, 젬시타빈, 그라미시딘 D, 하이드록시우레아, 이다리비신, 이포스파마이드, 이리노테칸, 로무스틴(CCNU), 마이탄신, 메클로레타민, 멜팔란, 6-머셉토퓨린, 메토트렉세이트, 미트라마이신, 미토마이신 C, 미톡산트론, 나이트로이미다졸, 파클리탁셀, 팔리톡신, 플리카마이신, 프로카비진, 리족신, 스트렙토조토신, 테노포사이드, 6-티오구아닌, 티오TEPA, 토포테칸, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, VP-16, VM-26으로부터 선택되며; DNA 작은 홈 결합제(예를 들어, 인다인, 렉시트롭신, CBI 화합물), 듀오카마이신, 탁산(예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀), 퓨로마이신, 빈카 알카로이드, CC-1065, SN-38, 토포테칸, 모폴리노-독소루비신, 리족신, 시아노모폴리노-독소루비신, 에키노마이신, 콤브레타스타틴, 네트롭신, 에포틸론 A, 에포틸론 B, 에스트라무스틴, 크립토파이신, 세마도틴, 마이탄시노이드, 디스코더몰라이드, 엘류테로빈, 또는 미톡산트론.
세포 증식 및 아폽토시스
본 명세서에 개시된 화합물 및 접합체는 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법에서 사용될 수 있다.
조절되지 않은 아폽토시스는, 예를 들어, 자가면역 장애(예를 들어, 전신 홍반성 루프스, 류마티스 관절염, 이식편대숙주병, 중증 근무력증, 또는 쇼그렌 증후군), 만성 염증 상태(예를 들어, 건선, 천식 또는 크론병), 과증식성 장애(예를 들어, 유방암, 폐암), 바이러스 감염(예를 들어, 헤르페스, 유두종, 또는 HIV), 및 기타 병태, 예컨대, 골관절염 및 죽상동맥경화증을 포함하여 다양한 질환과 관련이 있다. 본 명세서에 기재된 화합물, 접합체, 및 조성물은 이들 질환 중 임의의 것을 치료하거나 개선시키는 데 사용될 수 있다. 이와 같은 치료는 일반적으로 치료적 이익을 제공하기에 충분한 양의 본 명세서에 기재된 화합물, 접합체, 또는 조성물을 질환을 앓고 있는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 투여되는 화합물, 접합체, 또는 조성물의 항체의 정체는 치료될 질환에 따라 달라질 것이며, 따라서 항체는 저해가 유익할 세포 유형에서 발현되는 세포-표면 항원에 결합하여야 한다. 달성되는 치료적 이익은 또한 치료될 특정 질환에 따라 다를 것이다. 특정 경우에, 본 명세서에서 개시된 화합물 및 조성물은 단일요법으로서 투여될 때, 질환 자체, 또는 질환의 증상을 치료하거나 개선시킬 수 있다. 다른 경우에, 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물은, 저해제 또는 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물과 함께 치료될 질환, 또는 질환의 증상을 치료하거나 개선시키는 다른 작용제를 포함하는 전체 치료 요법의 일부일 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물에 부가적으로, 또는 이와 함께 투여될 수 있는 특정 질환을 치료하거나 개선시키는 데 유용한 작용제는 당업자에게 명백할 것이다.
임의의 치료 요법에서 절대적인 치유가 항상 바람직한 것은 아니지만, 치유를 달성하는 것이 치료 효과를 제공하기 위해 필요한 것은 아니다. 치료적 이익은 질환의 진행을 중단시키거나 늦추는 것, 치유 없이 질환을 퇴행시키는 것, 및/또는 질환의 증상의 진행을 개선시키거나 늦추는 것을 포함할 수 있다. 통계적 평균과 비교하여 연장된 생존 및/또는 개선된 삶의 질은 또한 치료적 이익인 것으로 간주될 수 있다.
조절되지 않은 아폽토시스를 포함하고 전 세계적으로 상당한 건강 부담을 주는 질환의 하나의 특정 부류는 암이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물은 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 암은, 예를 들어, 고형 종양 또는 혈액 종양일 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물로 치료될 수 있는 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 골수암, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 결장직장암, 식도암, 간세포암, 림프모구성 백혈병, 여포성 림프종, T-세포 또는 B-세포 기원의 림프구 악성종양, 흑색종, 골수성 백혈병, 골수종, 구강암, 난소암, 비소세포 폐암, 만성 림프루성 백혈병, 골수종, 전립선암, 소세포 폐암 및 비장암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 항체가 종양 세포를 특이적으로 표적화하여 비접합된 저해제의 전신 투여와 연관될 수 있는 바람직하지 않은 부작용 및/또는 독성을 잠재적으로 피하거나 개선시킬 수 있기 때문에, 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물은 특히 암의 치료에 유익할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은, 치료적 이익을 제공하기에 효과적인 양의 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물을 조절되지 않은 아폽토시스를 수반하는 질환이 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 조절되지 않은 내인성 아폽토시스를 수반하는 질환을 치료하는 방법에 관한 것아며, 여기서 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물의 표적화 모이어티는 내인성 아폽토시스가 조절되지 않는 세포 상의 세포 표면 수용체에 결합한다. 일부 실시형태에서, 암을 치료하는 방법은 치료적 이익을 제공하기에 효과적인 양으로 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물을 암이 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 표적화 모이어티는 암 세포의 표면 상에 발현된 종양 연관 항원 또는 세포 표면 수용체에 결합할 수 있다.
종양형성 암의 맥락에서, 상기에 논의된 효과를 포함하는 것에 추가적으로 치료적 이익은 또한 구체적으로 치료될 암의 유형 및 단계에 대한 통계적 평균과 비교하여 종양 성장의 진행을 중단시키거나 늦추는 것, 종양 성장을 퇴행시키는 것, 하나 이상의 종양을 근절시키는 것 및/또는 환자 생존을 증가시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료될 암은 종양형성 암이다.
본 명세서에 개시된 화합물 및 접합체는 치료적 이익을 제공하기 위해 단일요법으로서 투여될 수 있거나, 다른 화학요법제 및/또는 방사선 요법에 부가적으로, 또는 이와 결합하여 투여될 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물이 부가 요법으로 이용될 수 있는 화학요법제는 표적화(예를 들어, ADC, 단백질 키나제 저해제 등)되거나 비-표적화(예를 들어, 비-특이적 세포독성제, 예컨대, 방사선핵종, 알킬화제 및 끼어들기 약물(intercalating agent))될 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물이 부가적으로 투여될 수 있는 비-표적화 화학요법제는 메토트렉세이트, 탁솔, L-아스파라기나제, 머캅토퓨린, 티오구아닌, 하이드록시우레아, 사이타라빈, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 나이트로소우레아, 시스플라틴, 카보플라틴, 미토마이신, 다카바진, 프로카비진, 토포테칸, 질소 머스타드, 사이톡산, 에토포사이드, 5-플루오로우라실, BCNU, 이리노테칸, 캄프토테신, 블레오마이신, 독소루비신, 이다루비신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 플리카마이신, 미톡산트론, 아스퍼라기나제, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 파클리탁셀, 칼리키아마이신, 및 도세탁셀을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
암을 치료하기 위한 단독요법으로서 효과적이지 않을 수 있는 본 명세서에 개시된 화합물 및 접합체는 치료적 이익을 제공하기 위해 다른 화학요법제 또는 방사선 요법에 부가적으로, 또는 이와 함께 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 화합물 또는 조성물이 표준 화학요법 및/또는 방사선 요법에 대해 종양 세포를 감작화시키기에 효과적인 양으로 투여되는 방법에 관한 것이다. 따라서, 암을 치료하는 맥락에서, "치료적 이익"은 화학요법제 및/또는 방사선 요법에 부가적으로, 또는 이와 함께 본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물을, 화학 및/또는 방사선 요법에 대해 종양을 감작화시키는 수단으로서, 아직 이와 같은 요법을 시작하지 않았거나 이와 같은 요법을 시작하였지만 아직 내성 징후를 나타내지 않은 환자, 또는 내성 징후를 나타내기 시작한 환자에서 투여하는 것을 포함한다.
약제학적 조성물
특정 실시형태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 예컨대, 화학식의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 고체 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은, 본 발명의 임의의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 인간 환자에서 사용하기에 적합한 약제학적 제제를 제공한다. 특정 실시형태에서, 약제학적 제제는 본 명세서에 기재된 바와 같은 병태 또는 질환을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 것일 수 있다. 특정 실시형태에서, 약제학적 제제는 인간 환자에서 사용하기에 적합한 충분히 낮은 발열원 활성을 가진다.
일부 실시형태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 이이 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 선택적으로 화합물을 투여하는 방법에 대한 지침을 포함하는 약제학적 키트에 관한 것이다.
본 발명의 조성물 및 방법은 이를 필요로 하는 개체를 치료하는 데 이용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 개체는 포유동물, 예컨대, 인간, 또는 비인간 포유동물이다. 동물, 예컨대, 인간에게 투여되는 경우, 조성물 또는 화합물은 바람직하게는, 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서 투여된다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 비수성 비히클, 예컨대, 글라이콜, 글리세롤, 오일, 예컨대, 올리브유, 또는 주사 가능한 유기 에스터를 포함한다. 부형제는, 예를 들어, 작용제의 지연 방출에 영향을 미치거나 하나 이상의 세포, 조직 또는 기관을 선택적으로 표적화하도록 선택될 수 있다. 약제학적 조성물은 투약 단위 형태, 예컨대, 정제, 캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 과립, 재구성용 동결건조물, 분말, 좌제 등일 수 있다. 조성물은 또한 경피 전달 시스템, 예를 들어, 피부 패치에 존재할 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 담체는, 예를 들어, 본 발명의 화합물과 같은 화합물을 안정화시키거나 이의 용해도를 증가시키거나 이의 흡수를 증가시키는 작용을 하는 생리학적으로 허용 가능한 작용제를 포함할 수 있다. 이와 같은 생리학적으로 허용 가능한 작용제는, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대, 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란, 산화방지제, 예컨대, 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트제, 저분자량 단백질 또는 기타 안정화제 또는 부형제를 포함한다. 생리학적으로 허용 가능한 작용제를 포함하여 약제학적으로 허용 가능한 담체의 선택은, 예를 들어, 조성물의 투여 경로에 따라 다르다. 제제 또는 약제학적 조성물은 자가유화 약물 전달 시스템 또는 자가미세유화 약물 전달 시스템일 수 있다. 약물 조성물(제제)은 또한, 예를 들어, 본 발명의 화합물이 내부에 혼입될 수 있는 리포솜 또는 기타 중합체 매트릭스일 수 있다. 예를 들어, 인지질 또는 기타 지질을 포함하는 리포솜은 무독성이고, 생리학적으로 허용 가능하며, 제조 및 투여가 비교적 간단한 대사 가능한 담체이다.
어구 "약제학적으로 허용 가능한"은 본 명세서에서 적절한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투약 형태를 지칭하는 데 이용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 어구 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약제학적으로 허용 가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대, 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 양립할 수 있고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용 가능"하여야 한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체로 작용할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: (1) 당, 예컨대, 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대, 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스, 및 이의 유도체, 예컨대 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 부형제, 예컨대, 코코어 버티 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대, 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글라이콜, 예컨대, 프로필렌 글라이콜; (11) 폴리올, 예컨대, 글리세린, 솔비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글라이콜; (12) 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대, 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 에틸 알코올; 및 (17) 약제학적 제형에 이용되는 기타 무독성 상용성 물질.
약제학적 조성물(제제)은, 예를 들어, 경구(예를 들어, 비수성 용액 또는 현탁액에서와 같이 관주(drench), 정제, 캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트); 구강 점막을 통한 흡수(예를 들어, 설하); 항문, 직장 또는 질(예를 들어, 페서리, 크림 또는 포말); 비경구(예를 들어, 멸균 용액 또는 현탁액으로서 근육내, 정맥내, 피하 또는 척추강내); 비강; 복강내; 피하; 경피(예를 들어, 피부에 적용되는 패치로서); 및 국소적(예를 들어, 피부에 적용되는 크림, 연고 또는 스프레이로서, 또는 점안액으로서)인 투여 경로를 포함하여 다수의 투여 경로 중 임의의 것에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 화합물은 또한 흡입용으로 제형화될 수 있다. 적절한 투여 경로 및 이에 적합한 조성물에 대한 상세한 내용은, 예를 들어, 미국 특허 제6,110,973호, 제5,763,493호, 제5,731,000호, 제5,541,231호, 제5,427,798호, 제5,358,970호 및 제4,172,896호뿐만 아니라, 여기에 인용된 특허에서 확인할 수 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
제형은 단위 투약 형태로 편리하게 제공될 수 있고 약학 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단위 투약 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 숙주, 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투약 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로 100% 중에서, 이 양은 약 1% 내지 약 99%의 활성 성분, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 10% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
이들 제형 또는 조성물을 제조하는 방법은 활성 화합물, 예컨대, 본 발명의 화합물을 담체 및 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 본 발명의 화합물을 액체 담체, 또는 미분된 고체 담체, 또는 둘 다와 균일하고 친밀하게 회합시킨 다음, 필요한 경우 생성물을 성형함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 제형은 캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 사셰, 환제, 정제, 로젠지(가향 베이스, 보통 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트를 사용함), 동결건조물, 분말, 과립, 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서, 또는 파스티유(불활성 기제, 예컨대, 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아를 사용함) 등의 형태일 수 있으며, 각각은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물의 미리 결정된 양을 포함한다. 조성물 또는 화합물은 또한 볼루스, 연질약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
경구 투여용 고체 투약 형태(캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 정제, 환제,드라제, 분말, 과립 등)를 제조하기 위해, 활성 성분은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대, 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘, 및/또는 다음 중 임의의 것과 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대, 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 보습제, 예컨대, 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대, 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 및 탄산나트륨; (5) 용액 지연제, 예컨대, 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예컨대, 4차 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예컨대, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 예컨대, 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대, 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글라이콜, 소듐 라우릴 설페이트, 및 이들의 혼합물; (10) 착화제, 예컨대, 변형 및 비변형 사이클로덱스트린; 및 (11) 착색제. 캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 정제 및 환제의 경우, 약제학적 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 락토스 또는 유당뿐만 아니라, 고분자량 폴리에틸렌 글라이콜 등과 같은 부형제를 사용하여 연질 및 경질-충전 젤라틴 캡슐의 충전제로서 이용될 수 있다.
정제는 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축된 정제는 결합제(예를 들어, 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제(예를 들어, 소듐 전분 글라이콜레이트 또는 가교 소듐 카복시메틸 셀룰로스), 표면 활성제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 적합한 기계에서 불활성 액체 희석제로 적신 분말 화합물의 혼합물을 성형함으로써 제조될 수 있다.
정제, 및 약제학적 조성물의 다른 고체 투약 형태, 예컨대, 드라제, 캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 환제 및 과립은 약학-제형화 분야에 잘 알려진 장용 코팅 및 다른 코팅과 같은 코팅 및 쉘로 선택적으로 스코어링되거나 제조될 수 있다. 이는 또한, 예를 들어, 원하는 방출 프로파일, 다른 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 마이크로스피어를 제공하기 위해 다양한 비율로 하이드록시프로필메틸 셀룰로스를 사용하여 내부에 활성 성분의 느린 방출 또는 제어된 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 이는, 예를 들어, 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수, 또는 일부 다른 멸균 주사 가능한 매질에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입함으로써 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 선택적으로 불투명화제를 포함할 수 있고 활성 성분(들)만을, 또는 우선적으로 위장관의 특정 부분에서, 선택적으로 지연된 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물이 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 활성 성분은 또한 적절하다면 하나 이상의 상기-기재된 부형제와 함께 마이크로캡슐화된 형태일 수 있다.
직장, 질, 또는 요도 투여를 위한 약제학적 조성물의 제형은 좌제로 제공될 수 있으며, 이는 하나 이상의 활성 화합물을, 예를 들어, 코코아 버터, 폴리에틸렌 글라이콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 하나 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체화 혼합함으로써 제조될 수 있고, 상기 부형제 또는 담체는 실온에서는 고체이지만 체온에서는 액체이므로, 직장 또는 질강에서 녹아 활성 화합물을 방출할 것이다.
대안적으로 또는 추가적으로, 조성물은 카테터, 스텐트, 와이어, 또는 다른 관내 장치를 통한 전달용으로 제형화될 수 있다. 이와 같은 장치를 통한 전달은 방광, 요도, 요관, 직장, 또는 장으로의 전달에 특히 유용할 수 있다.
질 투여에 적합한 제형은 또한 적절한 것으로 당업계에 알려진 바와 같은 담체를 포함하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 포말 또는 스프레이 제형을 포함한다.
국소 또는 경피 투여를 위한 투약 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께, 그리고 필요할 수 있는 임의의 보존제, 완충제, 또는 추진제와 함께 혼합될 수 있다.
연고, 페이스트, 크림 및 겔은 활성 화합물에 추가적으로, 부형제, 예컨대, 동물 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글라이콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화아연, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
분말 및 스프레이는 활성 화합물에 추가적으로, 부형제, 예컨대, 락토스, 활석, 규산, 수산화알루미늄, 규산칼슘 및 폴리아마이드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있다. 스프레이는 추가적으로 통상적인 추진제, 예컨대, 클로로플루오로탄화수소 및 휘발성 비치환 탄화수소, 예컨대, 부탄 및 프로판을 포함할 수 있다.
경피 패치는 신체로의 본 발명의 화합물의 제어된 전달을 제공하는 추가 이점을 가진다. 이와 같은 투약 형태는 활성 화합물을 적절한 매질에 용해 또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 흡수 증진제는 또한 피부를 가로지르는 화합물이 흐름을 증가시키는 데 사용될 수 있다. 이와 같은 흐름 속도는 속도 제어 막을 제공하거나 중합체 매트릭스 또는 겔에 화합물을 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
안과용 제형, 안 연고, 분말, 용액 등도 또한 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 예시적인 안과용 제형은 미국 공개 제2005/0080056호, 제2005/0059744호, 제2005/0031697호 및 제2005/004074호, 및 미국 특허 제6,583,124호에 기재되어 있으며, 이들의 내용은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다. 원하는 경우, 액체 안과용 제형은 누액, 안방수 또는 유리액과 유사한 특성을 가지거나 이와 같은 유체와 호환 가능하다. 바람직한 투여 경로는 국부 투여(예를 들어, 국소 투여, 예컨대, 점안액, 또는 임플란트를 통한 투여)이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은, 보통 주사에 의한 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 멸균 등장성 비수성 용액, 분산액, 현탁액, 또는 에멀션, 또는 사용 직전에 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합하여 하나 이상의 활성 화합물을 포함하며, 이는 산화방지제, 완충제, 정균제, 제형을 의도된 수용체의 혈액과 등장성으로 만드는 용질, 현탁화제 또는 증점제를 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에 이용될 수 있는 적합한 비수성 담체의 예는 에탄올 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대, 올리브유, 및 주사 가능한 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅 물질, 예컨대, 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아쥬반트, 예컨대, 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 포함할 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로뷰탄올, 페놀 소르브산 등의 포함에 의해 보장될 수 있다. 또한 등장화제, 예컨대, 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 추가적으로, 주사 가능한 약학 형태의 연장된 흡수는 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 작용제의 포함에 의해 야기될 수 있다.
일부 경우에, 약물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는 수용성이 좋지 않은 결정질 또는 비결정성 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 그러면 약물이 흡수 속도는 용해 속도에 따라 달라지며, 이는 결국 결정 크기 및 결정질 형태 형태에 따라 다를 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 오일 비히클에 약물을 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다.
주사 가능한 데포 형태는 폴리락타이드-폴리글라이콜라이드와 같은 생분해성 중합체에서 대상 화합물의 마이크로캡슐화된 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비율, 및 이용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출의 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오쏘에스터) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포 주사 가능한 형태는 또한 신체 조직과 양립 가능한 리포솜 또는 마이크로에멀션에 약물을 포획함으로써 제조된다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위해, 활성 화합물은 그 자체로 제공되거나 또는 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께, 예를 들어, 0.1 내지 99.5%(더 바람직하게는, 0.5 내지 90%)의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물로서 제공될 수 있다.
도입 방법은 또한 충전식 또는 생분해성 장치에 의해 제공될 수 있다. 다양한 서방성 고분자 장치가 개발되어 최근 몇 년 동안 단백질 생물의약품을 포함하여 약물의 제어된 전달을 위해 생체 내에서 테스트되었다. 생분해성 및 비-분해성 중합체를 둘 다 포함하여, 다양한 생체적합성 중합체(하이드로겔을 포함함)를 사용하여 특정 표적 부위에서 화합물의 지속 방출을 위한 임플란트를 형성할 수 있다.
약제학적 조성물 중 활성 성분의 실제 투약량 수준은 환자에 대한 독성 없이, 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양을 얻기 위해 다양할 수 있다.
선택된 투약량 수준은 이용되는 특정 화합물 또는 화합물의 조합물, 또는 이의 에스터, 염 또는 아마이드, 투여 경로, 투여 시간, 이용되는 특정 화합물(들)의 배설 속도, 치료 기간, 이용되는 특정 화합물(들)과 함께 사용되는 기타 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료될 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 이전병력, 및 의학 분야에서 잘 알려진 유사 인자를 포함하여, 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.
당업계의 일반적인 기술을 가지는 의사 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 원하는 치료 효과를 달성하고 원하는 효과가 달성될 때까지 점진적으로 투약량을 증가시키기 위해 필요한 것보다 더 낮은 수준에서 약제학적 조성물 또는 화합물의 투약을 시작할 수 있다. "치료적 유효량"은 원하는 치료 효과를 도출하기에 충분한 화합물의 농도를 의미한다. 일반적으로 화합물의 유효량은 대상체의 체중, 성별, 연령, 및 병력에 따라 달라질 것임이 이해된다. 유효량에 영향을 미치는 다른 인자는 환자 병태의 중증도, 치료될 장애, 화합물의 안정성, 및 원하는 경우 본 발명의 화합물과 함께 투여될 다른 유형의 치료제를 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 더 많은 총 용량은 작용제의 다중 투여에 의해 전달될 수 있다. 효능 및 투약량을 결정하는 방법은 당업자에게 알려져 있다(본 명세서에 참조에 의해 원용된, 문헌[Isselbacher et al. (1996) Harrison's Principles of Internal Medicine 13 ed., 1814-1882]).
일반적으로, 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용되는 활성 화합물의 적합한 1일 용량은 치료 효과를 생성하기에 효과적인 가장 낮은 용량인 화합물의 양일 것이다. 이와 같은 유효 용량은 일반적으로 상기 기재된 인자에 따라 달라질 것이다.
원하는 경우, 활성 화합물의 효과적인 1일 용량은 선택적으로 단위 투약 형태로, 하루 전체에 걸쳐 적절한 간격으로 개별적으로 투여되는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 이상의 하위 용량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 실시형태에서, 활성 화합물은 1일 2 또는 3회 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 활성 화합물은 1일 1회 투여될 것이다.
이 치료를 받는 환자는 영장류, 특히 인간, 및 다른 포유동물, 예컨대, 말, 소, 돼지 및 양; 및 일반적인 가금류 및 애완동물을 포함하여 도움이 필요한 임의의 동물이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 화합물은 단독으로 사용되거나 다른 유형의 치료제와 함께 공동으로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 어구 "공동 투여"는 이전에 투여된 치료 화합물이 신체에서 여전히 효과적인 동안 제2 화합물이 투여되도록 2개 이상의 상이한 치료 화합물의 임의의 형태의 투여를 지칭한다(예를 들어, 2개의 화합물은 환자에서 동시에 효과적이며, 이는 2개 화합물의 상승 효과를 포함할 수 있음). 예를 들어, 상이한 치료 화합물은 동일한 제형 또는 별개의 제형으로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상이한 치료 화합물은 서로 1시간, 12시간, 24시간, 36시간, 48시간, 72시간, 또는 1주 이내에 투여될 수 있다. 따라서, 이와 같은 치료를 받는 개체는 상이한 치료 화합물의 조합된 효과로부터 이익을 얻을 수 있다.
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대 소듐 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미료, 향미제 및 방향제, 보존제 및 산화방지제가 또한 조성물에 존재할 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 산화방지제의 예는 다음을 포함한다: (1) 수용성 산화방지제, 예컨대, 아스코브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 소듐 바이설페이트, 소듐 메타바이설파이트, 소듐 설파이트 등; (2) 유용성 산화방지제, 예컨대, 아스코빌 팔미테이트, 뷰틸화 하이드록시아니솔(BHA), 뷰틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속-킬레이트제, 예컨대, 시트르산, 에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA), 솔비톨, 타타르산, 인산 등.
실시예
이제 본 발명을 일반적으로 기재할 것이며, 본 발명은 단지 본 발명의 특정 양태 및 실시형태의 예시의 목적으로 포함되고, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는 하기 실시예를 참조하여 보다 용이하게 이해될 것이다.
실시예 1. 화합물 L-1의 제조
Figure pct00066
화합물 L-1-1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 THF 중 트라이에틸렌 글라이콜(60.6g, 403.5 m㏖)의 균질한 용액을 60%의 NaH(3.2g, 80.7 m㏖)로 처리하고 15분 동안 교반하였다. 프로파길 브로마이드(10g, 67.25 m㏖)를 적가하고 생성된 혼합물을 밤새 방치하였다. 반응물을 H2O(250㎖)로 반응중지시키고 DCM(250㎖×4)으로 추출하였다. 유기 층을 염수(500㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-1-1(12.5g, 98%)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.73-3.64 (m, 10H), 3.60-3.57 (m, 2H), 2.63 (m, 1H), 2.42 (m, 1H).
화합물 L-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 DCM 중 L-1-1(1.2g, 6.22 m㏖)의 균질한 용액을 TPP(2.45g, 9.34 m㏖)로 처리하고 0℃에서 5분 동안 교반하였다. NBS(1.66g, 9.34 m㏖)를 첨가하고 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 다음 실온까지 1시간 동안 가온하였다. 반응물을 H2O(70㎖)로 반응중지시키고 DCM(80㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 100:1에서 200:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-1(1.3g, 80%, 순도 70%)을 액체로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 251 (M++1).
실시예 2. 화합물 L-2의 제조
Figure pct00067
화합물 L-2-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 DCM 중 L-1-1(2.88g, 15.3 m㏖)의 균질한 용액을 p-TsCl(2.92g, 15.3 m㏖), KOH(3.43g, 61.2 m㏖)로 처리하고 실온까지 3.5시간 동안 가온하였다. 반응물을 H2O(50㎖)로 반응중지시키고 DCM(80㎖×3)으로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 L-2-1(미정제 물질)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.20-4.12 (m, 4H), 3.68-3.58 (m, 10H), 2.44 (s, 3H), 2.42 (m, 1H). EI-MS m/z: 343 (M++1).
화합물 L-2-2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 L-2-1(5.24g, 15.3 m㏖)의 균질한 용액을 NaN3(1.49g, 22.95 m㏖)으로 처리하고 밤새 60℃까지 가열하였다. 반응물을 H2O(100㎖)로 반응중지시키고 EA(120㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(150㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:3)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-2-2(2.39g, 2개 단계에 걸쳐 수율 73%)를 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.19 (d, J = 2 Hz, 2H), 3.69-3.56 (m, 10H), 3.38 (m, 2H), 2.42 (m, 1H). EI-MS m/z: 236 (M++Na).
화합물 L-2의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 EA, 다이에틸 에터 및 5% HCl 중 L-2-2(2.39g, 11.2 m㏖)의 투명한 용액을 TPP(2.94g, 11.2 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 서서히 가온하였다. 반응 혼합물을 다이에틸 에터(50㎖×2)로 세척하고 H2O 층을 진공에서 농축시켰다. 액체를 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 L-2(2.13g, 85%)를 무색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 4.14 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 3.62-3.50 (m, 10H), 2.97-2.93 (m, 2H), 2.50 (m, 1H).
실시예 3. 화합물 L-3 및 L-4의 제조
Figure pct00068
화합물 L-3-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 DCM 중 테트라에틸렌 글라이콜(10g, 51.49 m㏖)의 균질한 용액을 KOH(23.1g, 411.88 m㏖), p-TsCl(19.6g, 102.97 m㏖)로 처리하고 실온까지 2.5시간 동안 가온하였다. 반응물을 H2O(200㎖)로 희석하고 DCM(250㎖×3)으로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 L-3-1(미정제 물질)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.16-4.13 (m, 4H), 3.68-3.65 (m, 4H), 3.59-3.52 (m, 8H), 2.43 (s, 6H); EI-MS m/z: 503 (M++1).
화합물 L-3-2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 L-3-1(25.9g, 51.49 m㏖)의 균질한 용액을 NaN3(10g, 154.46 m㏖)으로 처리하고 60℃까지 밤새 가열하였다. 반응물을 H2O(250㎖)로 반응중지시키고 EA(250㎖×3)로 추출하였다. 유기 층을 염수(350㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:3)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-3-2(10.64g, 2 단계에 걸쳐 85%)를 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.70-3.66 (m, 12H), 3.41-3.37 (m, 4H); EI-MS m/z: 267 (M++Na).
화합물 L-3의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 EA, 다이에틸 에터 및 5% HCl 중 L-3-2(10.64g, 43.56 m㏖)의 투명한 용액을 TPP(11.4g, 43.56 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 서서히 가온하였다. 유기 층을 진공에서 농축시켰다. 잔류물 H2O 상을 DCM(150㎖×2)으로 세척하고 H2O 층을 진공에서 농축시켰다. 액체를 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 L-3(10.78g, 78%)을 무색 오일로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 219 (M++1).
화합물 L-3을 제조하는 것과 유사한 합성 방법을 통해 화합물 L-4를 합성하였다.
화합물 L-4-1의 제조
EI-MS m/z: 591 (M++1).
화합물 L-4-2의 제조
수율 79%, 무색 오일.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3.69-3.66 (m, 20H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 4H); EI-MS m/z: 355 (M++Na).
화합물 L-4의 제조
수율 91%, 무색 오일.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.15 (br s, 2H), 3.93 (t, J = 4.2 Hz, 2H), 3.82-3.66 (m, 18H), 3.49-3.46 (m, 2H), 3.21-3.19 (m, 2H). EI-MS m/z: 307 (M++1).
실시예 4. 화합물 L-5의 제조
Figure pct00069
화합물 L-5-1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 THF 중 테트라에틸렌 글라이콜(20g, 102.97 m㏖)의 균질한 용액을 t-BuOK(54.57㎖, 54.57 m㏖)로 처리하고 실온까지 30분 동안 교반하였다. 프로파길 브로마이드(6.08㎖, 54.57 m㏖)를 적가하고 생성된 혼합물을 15시간 동안 방치하였다. 반응 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, Celite® 플러그를 EA(100㎖ × 2)로 세척하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-5-1(10.98g, 46%)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 3.72-3.59 (m, 16H), 2.56 (m, 1H), 2.43 (m, 1H).
화합물 L-5-2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM 중 L-5-1(10.98g, 47.27 m㏖)의 균질한 용액을 TEA(17.13㎖, 122.90 m㏖), p-TsCl(18.02g, 94.54 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:3에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-5-2(17.06g, 93%)를 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79-7.77 (m, 2H), 7.33-7.30 (m, 2H), 4.20-4.10 (m, 4H), 3.71-3.55 (m, 14H), 2.43-2.40 (m, 4H).
화합물 L-5-3의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 L-5-2(8.22g, 21.27 m㏖)의 균질한 용액을 NaN3(2.07g, 31.90 m㏖)으로 처리하고 60℃까지 밤새 가열하였다. 반응물을 H2O(200㎖)로 반응중지시키고 EA(250㎖×3)로 추출하였다. 유기 층을 염수(350㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:2에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-5-3(2.94g, 54%)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.72-3.60 (m, 14H), 3.40-3.37 (m, 2H), 2.42 (m, 1H).
화합물 L-5의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 EA, 다이에틸 에터 및 5% HCl 중 L-5-3(2.94g, 11.41 m㏖)의 투명한 용액을 TPP(2.99g, 11.41 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 서서히 가온하였다. 유기 층을 진공에서 농축시켰다. 잔류물 H2O 상을 DCM(200㎖×2)으로 세척하고 H2O 층을 진공에서 농축시켰다. 액체를 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 L-5(2.55g, 83%)을 무색 오일로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 232 (M++1).
실시예 5. 화합물 L-6의 제조
Figure pct00070
화합물 L-6-1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 THF 중 헥사에틸렌 글라이콜(7.8g, 27.63 m㏖)의 균질한 용액을 t-BuOK(1.64g, 14.64 m㏖)로 처리하고 실온까지 30분 동안 교반하였다. 프로파길 브로마이드(1.63㎖, 14.64 m㏖)를 적가하고 생성된 혼합물을 밤새 방치하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:MeOH = 97:3)로 정제하여 표제 화합물 L-6-1(4.57g, 52%)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2 Hz, 2H), 3.72-3.59 (m, 24H), 2.65 (m, 1H), 2.42 (m, 1H).
화합물 L-6-2의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 DCM 중 헥사에틸렌 글라이콜(5.6g, 19.83 m㏖)의 균질한 용액을 Ag2O(5.52g, 23.80 m㏖), KI(329㎎, 1.98 m㏖), p-TsCl(4.16g, 21.82 m㏖)로 처리하고 실온까지 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:MeOH = 95:5에서 90:10)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-6-2(7.71g, 89%)를 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.16-4.14 (m, 2H), 3.72-3.57 (m, 22H), 2.65-2.63 (m, 1H), 2.44 (s, 3H).
화합물 L-6-3의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 L-6-2(7.71g, 17.66 m㏖)의 균질한 용액을 NaN3(1.72g, 26.48 m㏖)으로 처리하고 110℃까지 3.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, DMF를 고진공 하에서 제거하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-6-3(4.74g, 87%)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.74-3.58 (m, 22H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.67-2.62 (m, 1H).
화합물 L-6-4의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM 중 L-6-3(4.74g, 15.42 m㏖)의 균질한 용액을 TEA(5.59㎖, 40.10 m㏖), p-TsCl(5.88g, 30.84 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-6-4(6.52g, 92%)를 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.69-3.57 (m, 20H), 3.38 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H).
화합물 L-6-5의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 THF 중 L-6-1(4.53㎎, 14.14 m㏖)의 균질한 용액을 60% NaH(678㎎, 16.96 m㏖)로 처리하고 30분 동안 방치하였다. L-6-4(6.52g, 14.14 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온까지 7시간 동안 가온하였다. 60% NaH(678㎎, 16.96 m㏖)를 첨가하고 밤새 방치하였다. 60% NaH(282.7 ㎎ 7.07 m㏖)를 첨가하고 40℃까지 밤새 가열하였다. 반응물을 0℃에서 냉각시키고, MeOH(100㎖)로 반응중지시킨 다음, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:MeOH = 90:10)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-6-5(7.341g, 85%)를 액체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.19 (m, 2H), 4.70-4.55 (m, 46H), 0.38 (m, 2H), 2.43 (m, 1H).
EI-MS m/z: 610 (M++1).
화합물 L-6의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 EA, 다이에틸 에터 및 5% HCl 중 L-6-5(906.7㎎, 1.49 m㏖)의 투명한 용액을 TPP(390㎎, 1.49 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 서서히 가온하였다. 유기 층을 진공에서 농축시켰다. 잔류물 H2O 상을 DCM(60㎖×3)으로 세척하고 H2O 층을 진공에서 농축시켰다. 액체를 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 L-6(495㎎, 54%)을 무색 오일로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 584 (M++1).
실시예 6. 화합물 L-7의 제조
Figure pct00071
화합물 L-7-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 THF 중 테트레에틸렌 글라이콜(10g, 51.48 m㏖)의 균질한 용액을 NaOH(3g, 77.22 m㏖), p-TsCl(9.8g, 51.48 m㏖)로 처리하고 30분 동안 방치하였다. 반응 혼합물을 실온까지 3시간 동안 가온하였다. 반응물을 H2O(50㎖)로 희석하고 EA(50㎖×3)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:1에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-7-1(3.15g, 18%)을 액체로서 제공하였다.
1H NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ 7.79 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.57 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.12-4.09 (m, 2H), 3.58-3.56 (m, 2H), 3.51-3.44 (m, 10H), 3.42-3.38 (m, 2H), 2.42 (s, 3H); EI-MS m/z: 349 (M++1).
화합물 L-7-2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 L-7-1(3.15g, 9.04 m㏖)의 균질한 용액을 NaN3(3.53g, 54.24 m㏖)으로 처리하고 90℃까지 밤새 가열하였다. 반응물을 H2O(30㎖)로 반응중지시키고 EA(100㎖×3)로 추출하였다. 유기 층을 염수(200㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 L-7-2(1.8g, 91%)를 액체로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 220 (M++1).
실시예 7. 화합물 BCN-PNP의 제조
Figure pct00072
N2 분위기 하에 실온에서 (1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일 메탄올(800㎎, 5.3 m㏖)을 DCM(125㎖)에 용해시켰다. 여기에 피리딘(1.22㎖, 15.9 m㏖) 및 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(1.75g, 8.74 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 동일한 온도에서 4시간 동안 교반한 후, 포화 NH4Cl 용액(100㎖)을 첨가하여 반응물을 반응중지시키고 EA(100㎖×4)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(Hex: EA = 10: 1)에 의해 정제하여 화합물 BCN-PNP(1.34g, 84%)를 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 9 Hz, 2H), 4.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.36 - 2.24 (m, 6H), 1.62 - 1.55 (m, 2H), 1.53 - 1.49 (m, 1H), 1.07 (t, J = 10.2 Hz, 2H).
실시예 8. 화합물 L-8의 제조
Figure pct00073
화합물 L-8-1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 1,4-다이옥산:H2O=1:1(10㎖) 중 L-4(740㎎, 2.16 m㏖) 및 다이-t-뷰틸 다이카보네이트(707㎎, 3.24 m㏖)의 균질한 용액을 NaHCO3(363㎎, 4.32 m㏖)으로 처리하고 실온까지 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(10㎖)로 반응중지시키고 EA(10㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 화합물 L-8-1(809㎎, 96%)을 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
EI-MS m/z: 407 (M+).
화합물 L-8의 제조
H2 분위기 하에 실온에서 무수 MeOH(15㎖) 중 L-8-1(809㎎, 1.99 m㏖)의 균질한 용액을 Pd/C(90㎎, 10 중량%)로 처리하고 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 화합물 L-8(829㎎, 정량적)을 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
EI-MS m/z: 381 (M+).
실시예 9. 화합물 AMA-1의 제조
Figure pct00074
화합물 AMA-1a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 AcOH 중 4-하이드록시아세토펜온(5g, 52.32 m㏖) 및 글라이옥실산 1수화물(7.4g, 54.32 m㏖)의 탁한 혼합물을 밤새 환류 가열하였다. 반응물을 H2O(150㎖)로 반응중지시키고 EA(200㎖×3)로 추출한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플레시 크로마토그래피(EA:HEX = 3:1에서 EA:MeOH = 97:3)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-1a(1.17g, 11%, 혼합물 6.61 g)를 갈색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.86 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.63 (d, J = 15.6 Hz, 1H).
화합물 AMA-1b의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 DMF 중 AMA-1a(457.9㎎, 2.38 m㏖)의 균질한 용액을 DMAP(43.7㎎, 0.36 m㏖), EDCI(456.8㎎, 2.38 m㏖), DIPEA(2.08㎖, 11.91 m㏖) 및 NH4Cl(1.25g, 23.83 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 서서히 가온하였다. 반응물을 포화 시트르산(35㎖), 포화 NaHCO3(35㎖) 및 염수(30㎖)로 반응중지시키고 EA(50㎖)로 세척한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(100% DCM에서 EA:MeOH = 97:3)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-1b(24.4㎎, 5%)를 갈색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.94-7.90 (m, 3H), 7.75 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 7.48 (br s, 1H), 6.88 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H).
화합물 AMA-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 DMF 중 AMA-1b(12㎎, 0.063 m㏖) 및 L-1(31㎎, 0.126 m㏖)의 균질한 용액을 K2CO3(8.7㎎, 0.063 m㏖)으로 처리하고 40℃까지 밤새 가열하였다. 반응물을 H2O(20㎖)로 반응중지시키고 EA(25㎖)로 추출하였다. 유기 층을 염수(20㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 18:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-1(10㎎, 44%)을 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05-7.95 (m, 3H), 7.02-6.94 (m, 3H), 5.73 (br s, 1H), 5.60 (br s, 1H), 4.24-4.19 (m, 4H), 3.92-3.88 (m, 2H), 3.77-3.67 (m, 8H), 2.43-2.42 (m, 1H). EI-MS m/z: 362 (M++1).
실시예 10. 화합물 AMA-2 및 AMA-3의 제조
Figure pct00075
화합물 AMA-2a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 4-아세틸벤조산(306㎎, 1.86 m㏖) 및 L-2(500㎎, 2.24 m㏖)의 균질한 용액을 EDCI(428㎎, 2.24 m㏖), DIPEA(0.81㎖, 4.66 m㏖), HOBt(342㎎, 2.24 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 교반하였다. 반응물을 포화 시트르산(35㎖)으로 반응중지시켰다. 그 다음 혼합물을 포화 NaHCO3(35㎖), EA(40㎖), 및 염수(30㎖)로 추출하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-2a(105㎎, 17%)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.90 (br s, 1H), 4.13 (m, 2H), 3.68 (m, 12H), 2.64 (s, 3H), 2.42 (m, 1H). EI-MS m/z: 334 (M++1).
화합물 AMA-2b의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 AcOH 중 AMA-2a(105㎎, 0.31 m㏖) 및 글라이옥실산 1수화물(58㎎, 0.63 m㏖)의 균질한 용액을 6.5시간 동안 환류 가열하였다. AcOH 용액 중 추가적인 글라이옥실산 1수화물(58㎎, 0.63 m㏖)을 첨가하고 생성된 혼합물을 밤새 방치하였다. AcOH 용액 중 글라이옥실산 1수화물의 세 번째 분량(58㎎, 0.63 m㏖) 및 생성된 혼합물을 첨가하고 6시간 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1에서 9:1에서 7:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-2b(39㎎, 32% 수율, 35 ㎎ SM 회수됨)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 390 (M++1).
화합물 AMA-2의 제조
N2 분위기 하에 -15℃에서 건조 THF 중 AMA-2b(14㎎, 0.036 m㏖)의 균질한 용액을 NMM(5㎕, 0.043 m㏖)으로 처리하고 i-BuCO2Cl(7㎕, 0.054 m㏖)을 적가한 다음 40분 동안 방치하였다. THF(1㎖) 중 암모니아 0.5 M을 첨가하고 40분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(10㎖)로 반응중지시키고 EA(15㎖)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 9:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-2(11㎎, 79%)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 389 (M++1).
화합물 AMA-2를 제조하는 것과 유사한 합성 방법을 통해 화합물 AMA-3을 합성하였다.
화합물 AMA-3a의 제조
수율 40%, 누른 빛깔의 검.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.38 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 1H), 6.95 (br s, 1H), 4.12 (m, 2H), 3.70-3.68 (m, 12H), 2.66 (s, 3H), 2.40 (m, 1H). EI-MS m/z: 334 (M++1).
화합물 AMA-3b의 제조
수율 65%, 누른 빛깔의 검.
EI-MS m/z: 390 (M++1).
화합물 AMA-3의 제조
수율 36%, 누른 빛깔의 검.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.02 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 7.62-7.58 (m, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.00 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.10 (br s, 1H), 5.91 (br s, 1H), 4.11 (m, 2H), 3.72-3.67 (m, 12H), 2.41 (m, 1H). EI-MS m/z: 389 (M++1).
실시예 11. 화합물 AMA-4의 제조
Figure pct00076
화합물 AMA-4a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 톨루엔 중 메틸 5-브로모니코티네이트(3g, 13.89 m㏖), PdCl2(PPh3)2(487㎎, 0.96 m㏖) 및 트라이뷰틸(1-에톡시비닐)주석(5.86㎖, 17.36 m㏖)의 용액을 3시간 동안 환류 가열하였다. 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, MeOH(100㎖)로 세척하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeOH(30㎖)에 용해시키고 N2 분위기 하에 실온에서 10M HCl(30㎖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 방치하였다. 반응물을 포화 Na2CO3(120㎖)으로 반응중지시키고 EA(150㎖×3)로 추출하였다. 유기 층을 염수(250㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA: HEX = 1: 2)에 의해 정제하여 화합물 AMA-4a(2.22g, 89%)를 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.37 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 2.69 (s, 3H).
화합물 AMA-4b의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 MeOH 중 AMA-4a(636㎎, 3.55 m㏖)의 균질한 용액을 1 N NaOH(10.64㎖)로 처리하고 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시킨 후, 반응물을 1N HCl(pH 2)로 반응중지시키고 EA(80㎖×3)로 추출하였다. 유기 층을 염수(150㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시카고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 AMA-4b를 백색 고체로서 제공하였다. 화합물 AMA-4b를 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 2.69 (s, 3H).
화합물 AMA-4c의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF 중 AMA-4b(606㎎, 3.67 m㏖) 및 L-2(985g, 4.40 m㏖)의 균질한 용액을 EDCI(1.06g, 5.50 m㏖), DIPEA(1.92㎖, 11.01 m㏖), HOBt(843㎎, 5.50 m㏖)로 처리하고 실온까지 밤새 교반하였다. 반응물을 추출하고 EA(100㎖×2) 및 염수(80㎖)로 세척한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-4c(880㎎, 2 단계에 걸쳐 수율 74%)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.22 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 4.08 (m, 2H), 3.67-3.60 (m, 12H), 2.66 (s, 3H), 2.38 (m, 1H). EI-MS m/z: 335 (M++1).
화합물 AMA-4d의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 MeOH 중 다이-tert-뷰틸 타트레이트(500㎎, 1.91 m㏖)의 용액을 H2O 용액 중 NaIO4(489㎎, 2.29 m㏖)로 처리하고 1.5시간 동안 방치하였다. 반응물을 H2O(40㎖)로 반응중지시키고 다이에틸 에터(45㎖×3)로 추출한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 AMA-4d를 무색 오일로서 제공하였다. 화합물 AMA-4d를 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
화합물 AMA-4e의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 AcOH 중 AMA-4c(48㎎, 0.14 m㏖) 및 AMA-4d(56㎎, 0.43 m㏖)의 균질한 용액을 밤새 환류 가열하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1에서 9:1에서 7:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-4e(27㎎, 48%)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 391 (M++1).
화합물 AMA-4의 제조
N2 분위기 하에 -15℃에서 건조 THF 중 AMA-4e(27㎎, 0.069 m㏖)의 균질한 용액을 NMM(9.1㎕, 0.083 m㏖)으로 처리하고 i-BuCO2Cl(13.5㎕, 0.104 m㏖)을 적가한 다음 40분 동안 교반하였다. THF(2㎖) 중 0.5 M 암모니아를 첨가하고 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(30㎖)로 반응중지시키고 EA(35㎖)로 추출하였다. 유기 층을 염수(30㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1) 및 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-4(1.2㎎, 4%)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 390 (M++1).
실시예 12. 화합물 pyrMPS-1의 제조
Figure pct00077
화합물 pyrMPS-1a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 EtOH(25㎖) 중 AMA-4c(2.67g, 16.19 m㏖), 피페리딘 HCl(1.97g, 16.19 m㏖) 및 파라폼알데하이드(1.46g, 48.57 m㏖)의 탁한 혼합물을 농축 HCl(178 ㎕)로 처리하고 밤새 환류 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 아세톤(25㎖)으로 반응중지시키고 0℃까지 냉각시킨 다음 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 다이에틸 에터(50㎖×2)로 세척한 다음 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 pyrMPS-1a(1.45g, 30%, 혼합물 3.21 g)를 백색 고체로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 264 (M++1).
화합물 pyrMPS-1b의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 EtOH(15㎖) 및 MeOH(10㎖) 중 pyrMPS-1a(1.45g, 4.85 m㏖) 및 4-메틸벤젠티올(603㎎, 4.85 m㏖)의 탁한 혼합물을 피페리딘(72㎕, 0.73 m㏖)으로 처리하고 밤새 환류 가열하였다. 반응물을 0℃까지 1시간 동안 냉각시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 다이에틸 에터(50㎖×2)로 세척한 다음 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 Int-5-3(154㎎, 11%, 혼합물 1.31 g)을 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO-d6) δ 9.26 (d, J = 2 Hz, 1H), 9.23 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.58 (m, 1H), 7.26 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.46 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.24 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H). EI-MS m/z: 302 (M++1).
화합물 pyrMPS-1c의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 MeOH(8㎖) 및 H2O(8㎖) 중 pyrMPS-1b(154㎎, 0.51 m㏖)의 탁한 혼합물을 옥손(691㎎, 1.12 m㏖)으로 처리하고 실온까지 6.5시간 동안 가온하였다. 반응물을 H2O(30㎖)로 반응중지시키고 CHCl3(50㎖×4)으로 추출하였다. 유기 층을 염수(150㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시카고, 여과하고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 pyrMPS-1c(74g, 43%)를 백색 고체로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 334 (M++1).
화합물 pyrMPS-1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF(5㎖) 중 pyrMPS-1c(74㎎, 0.22 m㏖) 및 L-4(91㎎, 0.27 m㏖)의 균질한 용액을 HBTU(106㎎, 0.27 m㏖), DIPEA(77.4㎕, 0.44 m㏖)로 처리하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(40㎖)로 반응중지시키고 DCM(50㎖×4)으로 추출하였다. 유기 층을 염수(150㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 pyrMPS-1(18㎎, 13%, 혼합물 43 ㎎)을 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 622 (M++1).
실시예 13. 화합물 AMA-5의 제조
Figure pct00078
화합물 AMA-5a의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 THF 중 트라이메틸-1,3,5-벤젠트라이카복실레이트(34.28g, 135.91 m㏖)의 균질한 용액을 THF 중 4M LiBH4(16.99㎖, 67.95 m㏖)로 처리하고 밤새 환류 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 4N HCl(pH 2)로 산성화시키고 H2O(800㎖)로 반응중지시켰다. 혼합물을 EA(800㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:5에서 1:2)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5a(16.75g, 55%, 6.07 g Sm 회수됨)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 (s, 1H), 8.23 (s, 2H), 4.81 (d, J = 6 Hz, 2H), 3.95 (s, 6H), 1.97 (t, J = 5.6 Hz, 1H).
화합물 AMA-5b의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM 중 AMA-5a(16.75g, 74.72 m㏖)의 균질한 용액을 DCC(80.53g, 373.58 m㏖)로 처리하고 밤새 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:3)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5b(13.84g, 83%)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.13 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.72 (s, 2H), 4.00 (s, 6H).
화합물 AMA-5c의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 THF 중 AMA-5b(13.84g, 62.30 m㏖)의 균질한 용액을 다이에틸 에터 중 3 M Me㎎Br(20.77㎖, 62.30 m㏖)로 처리하고 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl(150㎖)로 반응중지시킨 후, 혼합물을 EA(200㎖)로 추출하였다. 유기 층을 염수(150㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:3에서 1:2)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5c(6.6g, 44%)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.57 (s, 1H), 8.24 (s, 2H), 5.05-4.99 (m, 1H), 3.95 (s, 6H), 2.01 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 1.53 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
화합물 AMA-5d의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM 중 AMA-5c(6.6g, 27.70 m㏖)의 균질한 용액을 DCC(29.86g, 138.52 m㏖)로 처리하고 밤새 환류 가열하였다. 반응 혼합물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 1:5)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5d(4.75g, 73%, 혼합물 1.25 g)를 백색 고체로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87 (m, 1H), 8.78 (m, 2H), 4.00 (s, 6H), 2.70 (s, 3H).
화합물 AMA-5e의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 아세톤 중 AMA-5d(4.75g, 20.11 m㏖)의 균질한 용액을 MeOH 용액 중 NaOH(845㎎, 21.11 m㏖)로 처리하고 실온까지 가온하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 후, 혼합물을 진공에서 농축시키고 고진공 하에서 건조시켰다. 잔류물을 H2O에 용해시키고 4N HCl(pH 1 내지 2)로 산성화시켰다. H2O 상을 EA(100㎖×2)로 추출하고 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5e(2.34g, 52%, 혼합물 1.72 g)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.94 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 2.72 (s, 3H).
화합물 AMA-5f의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 DCM 중 AMA-5e(200㎎, 0.9 m㏖) 및 L-5(337㎎, 1.26 m㏖)의 균질한 용액을 EDCI(259㎎, 1.35 m㏖), TEA(376㎕, 2.7 m㏖), HOBt(207㎎, 1.35 m㏖)로 처리하고 실온까지 가온하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 후, 반응물을 H2O(30㎖)로 반응중지시키고 DCMC(35㎖×6)로 추출하였다. 유기 층을 염수(150㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA = 100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5f(248㎎, 63%)를 누른 빛깔의 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.17 (br s, 1H), 4.13 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.71-3.63 (m, 16H), 2.70 (s, 3H), 2.40 (m, 1H).
화합물 AMA-5g의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 AcOH 중 AMA-5f(248㎎, 0.57 m㏖) 및 글라이옥실산 1수화물(410㎎, 4.56 m㏖)의 균질한 용액을 8시간 동안 환류 가열하였다. AcOH 중 글라이옥실란 1수화물(210㎎, 2.28 m㏖)의 5개 추가 분량을 4시간 간격으로 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 농축시킨 후, 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA = 100%에서 DCM:MeOH = 9:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-5g(124㎎, 44%)를 누른 빛깔의 오일로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 492 (M++1).
화합물 AMA-5의 제조
N2 분위기 하에 -15℃에서 건조 THF 중 AMA-5g(124㎎, 0.25 m㏖)의 균질한 용액을 NMM(33 ㎕L, 0.30 m㏖)으로 처리하고 i-BuCO2Cl(49㎕, 0.38 m㏖)을 적가한 다음 40분 동안 교반하였다. 여기에 THF(1㎖) 중 0.5 M 암모니아를 첨가한 후, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 DMSO에 용해시키고 아세트산으로 산성화시켰다. 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-6(28㎎, 23%)을 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.77 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.03 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.79 (br s, 1H), 7.03 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.40 (br s, 1H), 6.13 (br s, 1H), 4.12-4.09 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.75-3.61 (m, 16H), 2.39 (m, 1H). EI-MS m/z: 491 (M++1).
실시예 14. 화합물 AMA-6의 제조
Figure pct00079
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 DMF 중 페놀(24.9㎎, 0.13 m㏖) 및 L-7(43.4㎎, 0.15 m㏖)의 균질한 용액을 K2CO3(27㎎, 0.20 m㏖)로 처리하고 실온까지 가온하였다. 반응물을 2.5시간 동안 교반한 후, K2CO3(9㎎, 0.07 m㏖)의 두 번째 분량을 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 H2O(15㎖)로 반응중지시키고 DCM(20㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1) 및 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-6(5.9㎎, 12%)을 누른 빛깔의 오일로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 393 (M++1).
실시예 15. 화합물 AMA-7의 제조
Figure pct00080
화합물 AMA-7a의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 DMF 중 3-아세틸 벤조산(5g, 30.46 m㏖) 및 L-3(7.76g, 30.46 m㏖)의 균질한 용액을 TBTU(19.56g, 60.92 m㏖), TEA(21.2㎖, 152.3 m㏖)로 처리하였다. 반응물을 실온까지 가온하고 밤새 교반하였다. 혼합물을 EA(500㎖), 1N HCl(350㎖), 및 포화 NaHCO3(350㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 염수(350㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 AMA-7a(7.77g, 70%)을 농갈색 오일로서 제공하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.38-8.37 (m, 1H), 8.10-8.07 (m, 1H), 8.05-8.02 (m, 1H), 7.57-7.53 (m, 1H), 6.94 (br s, 1H), 3.71-3.61 (m, 14H), 3.34 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.66 (s, 3H). EI-MS m/z: 365 (M++1).
화합물 AMA-7b의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 1,4-다이옥산 및 H2O 중 SeO2(365.4㎎, 3.29 m㏖)의 용액을 50℃까지 30분 동안 가열하였다. 여기에 1,4-다이옥산 및 H2O 용액 중 AMA-7a(300㎎, 0.82 m㏖)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 1,4-다이옥산 및 H2O 용액 중 추가 SeO2(182.7㎎, 1.65 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 생성된 혼합물을 밤새 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과한 다음 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM(50㎖×2)으로 추출하고 H2O(35㎖)로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 고진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 AMA-7b(미정제 물질) 누른 빛깔의 오일로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 397 (M++H2O).
화합물 AMA-7의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM 중 AMA-7b(97.6㎎, 0.26 m㏖)의 균질한 용액을 (트라이페닐포스포라닐리덴)아세토나이트릴(77.7㎎, 0.26 m㏖)로 처리하고 밤새 교반하였다. 반응물을 H2O(20㎖)로 반응중지시키고 DCM(30㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:HEX = 2:1에서 3:1에서 5:1에서 DCM:MeOH = 20:1) 및 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-7(9.5㎎, 9%)을 백색 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 402 (M++1).
실시예 16. 화합물 AMA-8의 제조
Figure pct00081
화합물 AMA-8a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF(3㎖) 중 4-하이드록시아세토펜온(87㎎, 0.64 m㏖) 및 L-1(242㎎, 0.96 m㏖)의 균질한 용액을 K2CO3(177㎎, 1.28 m㏖)으로 처리하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물(10㎖)로 반응중지시키고 EA(10㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(15㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:Hex = 1:2)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-8a(120㎎, 62%)를 제공하였다.
EI-MS m/z: 307 (M+).
화합물 AMA-8b의 제조
N2 분위기 하에 AcOH(4㎖) 중 AMA-8a(120㎎, 0.39 m㏖)의 균질한 용액을 글라이옥실산 1수화물(47㎎, 0.51 m㏖)로 처리하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. AcOH 중 글라이옥실란 1수화물(210㎎, 2.28 m㏖)의 5개 추가 분량을 4시간 간격으로 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 진공에서 농축시킨 후, 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 12:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-8b(28㎎, 20%)를 누른 빛깔의 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 363 (M+).
화합물 AMA-8의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF(2㎖) 중 AMA-8b(24㎎, 0.08 m㏖) 및 요오도메탄(14㎕, 0.23 m㏖)의 균질한 용액을 K2CO3(21㎎, 0.15 m㏖)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온까지 3시간 동안 교반하였다. 물(5㎖)을 첨가하여 반응물을 반응중지시키고 EA(5㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(8㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(EA:Hex = 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 AMA-8(16㎎, 65%)을 제공하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.94 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.25-4.22 (m, 4H), 3.92-3.89 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.76-3.75 (m, 2H), 3.71 (s, 6H), 2.44 (s, 1H); EI-MS m/z: 377 (M+).
실시예 17. 화합물 AMA-9의 제조
Figure pct00082
실시예 13의 화합물 AMA-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 AMA-9a, AMA-9b, 및 AMA-9c를 합성하였다.
화합물 AMA-9a의 제조
수율 77%. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.72-3.69 (m, 12H), 2.70 (s, 3H), 2.38 (s, 1H); EI-MS m/z: 392 (M+).
화합물 AMA-9b의 제조
수율 27%. EI-MS m/z: 448 (M+).
화합물 AMA-9c의 제조
수율 27%. EI-MS m/z: 447 (M+).
실시예 15의 화합물 AMA-7의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 AMA-9를 합성하였다.
수율 8%. EI-MS m/z: 429 (M+).
실시예 18. 화합물 AMA-10의 제조
Figure pct00083
화합물 AMA-10a의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 MeOH(50㎖) 중 AMA-5d(1.05g, 4.44 m㏖)의 균질한 용액을 NaOH(356㎎, 8.88 m㏖)로 처리하였다. 혼합물을 최대 실온까지 가온하고 밤새 환류시켰다. 희석된 HCl(10㎖)을 조심스럽게 첨가하여 혼합물을 반응중지시키고 감압 하에서 농축시켰다. 수성 층을 EA(20㎖)로 추출하고, 수득한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 농축 후, 화합물 AMA-10a(984㎎, 100%)를 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
EI-MS m/z: 209 (M+).
실시예 13의 화합물 AMA-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 AMA-10b, AMA-10c, 및 AMA-10을 합성하였다.
화합물 AMA-10b의 제조
수율 84%.
EI-MS m/z: 547 (M+).
화합물 AMA-10c의 제조
수율 22%.
EI-MS m/z: 603 (M+).
화합물 AMA-10c의 제조
수율 32%.
EI-MS m/z: 602 (M+).
실시예 19. 화합물 pyrMPS-2 및 PyrMPS-3의 제조
Figure pct00084
실시예 12의 화합물 pyrMPS-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 pyrMPS-2 및 pyrMPS-3을 합성하였다.
화합물 pyrMPS-2의 제조
수율 22%.
EI-MS m/z: 547 (M+).
화합물 pyrMPS-3의 제조
수율 26%.
EI-MS m/z: 900 (M+).
실시예 20. 화합물 mMPS-1 및 mMPS-2의 제조
Figure pct00085
실시예 12의 화합물 pyrMPS-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 mMPS-1 및 mMPS-2를 합성하였다.
화합물 mMPS-1a의 제조
수율 51%, 백색 고체.
EI-MS m/z: 262 (M+).
화합물 mMPS-1b의 제조
수율 72%, 백색 고체
1H NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ 8.40 (s, 1H), 8.18-8.15 (m, 2H), 7.66-7.63 (m, 1H), 7.26 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 3.40-3.37 (m, 2H), 3.26-3.23 (m, 2H), 2.27 (s, 3H); EI-MS m/z: 301 (M++1).
화합물 mMPS-1c의 제조
수율 47%, 누른 빛깔의 고체.
1H NMR (600 Hz, DMSO-d6) δ 8.37-8.36 (m, 1H), 8.20-8.16 (m, 2H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.66-3.63 (m, 2H), 3.44-3.41 (m, 2H), 2.41 (s, 3H); EI-MS m/z: 333 (M++1).
화합물 mMPS-1의 제조
수율 60%, 백색 고체.
EI-MS m/z: 546 (M++1).
화합물 mMPS-2의 제조
수율 326%, 백색 고체.
EI-MS m/z: 898 (M+).
실시예 21. 화합물 mMPS-3의 제조
Figure pct00086
화합물 mMPS-3a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF(3㎖) 중 mMPS-1c(158㎎, 0.48 m㏖) 및 L-8(297㎎, 0.57 m㏖)의 균질한 용액을 DIPEA(0.25㎖, 1.43 m㏖), HBTU(270㎎, 0.71 m㏖)로 처리하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(10㎖)로 반응중지시키고 EA(15㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 mMPS-3a(377㎎, 정량적)를 제공하였다.
EI-MS m/z: 695 (M+).
화합물 mMPS-3b의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 건조 DCM(3㎖) 중 mMPS-3a(100㎎, 0.14 m㏖)의 균질한 용액을 다이옥산 중 4N HCl(360㎕, 1.44 m㏖)로 처리하고 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시킨 후, mMPS-3b(91㎎, 정량적)를 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
EI-MS m/z: 595 (M+).
화합물 mMPS-3의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 DMF(2㎖) 중 mMPS-3b(91㎎, 0.144 m㏖) 및 BCN-PNP(55㎎, 0.173 m㏖)의 균질한 용액을 DIPEA(75㎕, 0.433 m㏖)로 처리하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(5㎖)로 반응중지시키고 EA(8㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(8㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 mMPS-3(44㎎, 38%)을 제공하였다.
EI-MS m/z: 771 (M+).
실시예 22. 화합물 mMPS-4의 제조
Figure pct00087
실시예 20의 화합물 mMPS-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 mMPS-4를 합성하였다.
화합물 mMPS-4a의 제조
수율 99%.
EI-MS m/z: 511 (M+).
화합물 mMPS-4b의 제조
수율 99%.
EI-MS m/z: 608 (M+).
화합물 mMPS-4c의 제조
수율 50%.
EI-MS m/z: 647 (M+).
화합물 mMPS-4의 제조
수율 8%.
EI-MS m/z: 679 (M+).
실시예 23. 화합물 Mal-1 및 Mal-2의 제조
Figure pct00088
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM 중 N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산카복실레이트(30㎎, 0.09 m㏖) 및 L-2(18㎎, 0.096 m㏖)의 균질한 용액을 DIPEA(16㎕, 0.09 m㏖)로 처리하고 실온에서 45분 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(15㎖)으로 희석하고 1N HCl(10㎖), 염수(10㎖)로 세척한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1) 및 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 Mal-1(14.3㎎, 39)을 백색 검으로서 제공하였다.
EI-MS m/z: 407 (M++1).
화합물 Mal-1에 대해 상기 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 화합물 Mal-2를 합성하였다.
수율 61%, 백색 검.
EI-MS m/z: 4519 (M++1).
실시예 24. Int-TG의 제조
Figure pct00089
N2 분위기 하에 0℃에서 AcOH(20㎖) 중 33% HBr에 β-D-갈락토스 펜타아세테이트(5.0g, 12.81 m㏖)를 용해시켰다. 혼합물을 실온까지 가온하였다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시킨 다음, EA(1000㎖) 및 포화 중탄산나트륨(1000㎖)을 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG(5.2g, 99%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 6.70 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.41 (dd, J = 7.6, 2.8 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 6.4, 4.0 Hz, 1H), 4.49 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.22 - 4.09 (m, 2H), 2.16 - 2.01 (m, 12H).
실시예 25. 화합물 L-9 및 L-10의 제조
Figure pct00090
화합물 L-9-1의 제조
N2 분위기 하에 -78℃에서 건조 THF(300㎖) 중 다이메틸 5-하이드록시아이소프탈레이트(5g, 23.79 m㏖)의 용액에 LAH(3.6g, 95.15 m㏖)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 15% NaOH 용액(4㎖), H2O(8㎖) 및 EA(100㎖)를 첨가한 다음 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-9-1(3.02g, 82%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.21 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.58 (s, 2H), 5.07 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.38 (d, J = 4.6 Hz, 4H).
화합물 L-9-2의 제조
N2 분위기 하에 화합물 L-9-1(2g, 12.97 m㏖)을 HBr(5.0㎖, AcOH 중 33%)에 용해하였다. 60℃에서 18시간 동안 교반한 후, NaHCO3 용액(pH 약 8)을 첨가하여 반응물을 반응중지시켰다. 증류수(50㎖) 및 EA(100㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-9-2(2.9g, 80%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.99 (s, 1H), 6.81 (s, 2H), 4.85 (s, 1H), 4.41 (s, 2H).
화합물 L-9의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DCM(35㎖) 중 화합물 L-1-2(1.0g, 3.57 m㏖)의 용액에 TEA(0.45㎖, 3.21 m㏖)를 첨가하였다. 풍선을 통해 SO2F2 가스를 도입하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(50㎖) 및 물(30㎖)로 세척하였다. 유기 층을 NaHCO3 수용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-2(941.7㎎, 73%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 2H), 4.46 (s, 4H).
화합물 L-10의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 건조 DCM(3㎖) 중 화합물 L-9-2(100㎎, 0.36 m㏖)의 용액에 이미다졸(27㎎, 0.39 m㏖) 및 TBDMS-Cl(59㎎, 0.39 m㏖)을 첨가하였다. 16시간 동안 교반한 후, 증류수(50㎖) 및 EA(100㎖)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-10(110㎎, 79%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.00 (s, 1H), 6.80 (s, 2H), 4.41 (s, 4H), 0.99 (s, 9H), 0.21 (s, 6H).
실시예 26. 화합물 L-11의 제조
Figure pct00091
화합물 L-11-1의 제조
N2 분위기 하에 무수 DCM(178㎖) 중 헥사에틸렌 글라이콜(5.0g, 17.71 m㏖)의 용액에 KI(294㎎, 1.77 m㏖), Ag2O(4.92g, 19.48 m㏖) 및 p-TsCl(3.7g, 19.48 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, Celite® 플러그를 DCM(100㎖)으로 세척하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-1(5.98g, 73%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.71 - 3.58 (m, 22H), 2.88 (br, 1H), 2.45 (s, 3H).
화합물 L-11-2의 제조
N2 분위기 하에 DMF(30㎖) 중 화합물 L-11-1(5.98g, 13.7 m㏖)의 용액에 NaN3(1.34g, 20.55 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-2(4.1g, 97%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 3.72 - 3.60 (m, 22H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.78 (br, 1H).
화합물 L-11-2a의 제조
N2 분위기 하에 화합물 L-11-2(1.9g, 6.18 m㏖)를 DCM(20㎖)에 용해시키고, 여기에 트라이에틸아민(2.0㎖, 14.22 m㏖) 및 p-TsCl(2.4g, 12.36 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-2a(2.58g, 91%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.61 (m, 16H), 3.56 (s, 1H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H).
EI-MS m/z: 462 (M++1).
화합물 L-11-3의 제조
H2 분위기 하에 EtOH(5㎖) 중 화합물 L-11-2(1.0g, 3.25 m㏖)의 용액에 5% Pd/C(1.04g, 0.49 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 Celite®를 통해 여과하여 Pd/C를 제거하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM(25㎖)에 용해시켰다. Boc2O(852.1㎎, 3.9 m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-3(330㎎, 28%)을 생성하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 5.19 (br s, 1H), 3.73 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.67 (s, 12H), 3.63 - 3.60 (m, 6H), 3.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.34 - 3.27 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
EI-MS m/z: 382 (M++1).
화합물 L-11-4의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 THF(10㎖) 중 화합물 L-11-3(450㎎, 1.18 m㏖)의 균질한 용액을 NaH(광유 중 60% 분산액, 47.2㎎, 1.18 m㏖)로 처리하였다. 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 여기에 L-11-2a(544.5㎎, 1.18 m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 최대 실온까지 가온하고 밤새 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, MeOH(5㎖)로 반응중지시킨 다음, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-4(582.9㎎, 74%)를 수득하였다.
화합물 L-11의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM(3㎖) 중 화합물 L-11-4(582.9㎎, 0.87 m㏖)의 용액에 4M HCl(1,4-다이옥산 중, 1㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 화합물 L-11(527.6㎎, 정량적)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 571 (M++1).
실시예 27. 화합물 Int-TG1 및 Int-TG2의 제조
Figure pct00092
화합물 Int-TG1-1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(100㎖) 중 3-폼일-4-하이드록시벤조산(5g, 43.06 m㏖)의 용액에 벤질 브로마이드(5.1㎖, 43.06 m㏖) 및 NaHCO3(2.53g, 43.06 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EA(200㎖×2) 및 증류수(100㎖)로 추출하였다. 수득된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG1-1(2.56g, 39%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 11.41 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 8.34 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 6.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.35 (m, 5H), 7.04 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H).
화합물 Int-TG1-2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 무수 MeCN(30㎖) 중 화합물 Int-TG1-1(1.0g, 3.90 m㏖) 및 화합물 Int-TG(1.6g, 3.90 m㏖)의 용액에 분자 체(8 g) 및 Ag2O(3.62g, 15.61 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, Celite®을 통해 여과하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG1-2(2.1g, 92%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 10.34 (s, 1H), 8.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 5H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.63 - 5.60 (m, 1H), 5.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.16 (dd, J = 7.2, 3.6 Hz, 1H) 4.24 - 4.10 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.10 - 2.03 (m, 9H).
화합물 Int-TG1-3의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM(30㎖) 중 화합물 Int-TG1-2(2.1g, 3.58 m㏖)의 용액에 m-CPBA(2.65g, 10.74 m㏖)를 첨가하였다. 0℃에서 7시간 동안 교반한 후, 포화 중탄산나트륨(40㎖×2)을 첨가하여 혼합물을 반응중지시켰다. 혼합물을 분리하고 유기 층을 염수로 세척한 다음, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM(5㎖)에 용해시키고, N2 분위기 하에 0℃에서 하이드라진-하이드레이트(261㎕, 5.37 m㏖)를 혼합물에 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, EA(30㎖×2) 및 1M HCl 수용액(10㎖)을 첨가하였다. 수득한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 화합물 Int-TG1-3(1.1g, 55%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 574 (M++Na)
화합물 Int-TG1-4의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM(5㎖) 중 화합물 Int-TG1-3(280㎎, 0.49 m㏖)의 용액에 TBDMS-OTf(224㎕, 0.97 m㏖) 및 Et3N(207㎕, 1.46 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 시트르산(20㎖)을 첨가하여 반응중지시켰다. 유기 층을 염수(20㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG1-4(246.3㎎, 68%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 5H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.44 (m, 2H), 5.30 (s, 2H), 5.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 6.8, 3.2 Hz, 1H) 4.20 - 4.11 (m, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.04(s, 3H), 2.01 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.02 (s, 9H), 0.20 (d, J = 15.6 Hz, 6H).
화합물 Int-TG1-5의 제조
H2 분위기 하에 실온에서 EA(5㎖) 중 화합물 Int-TG1-4(283.2㎎, 0.41 m㏖)의 용액에 Pd/C(5%, 87.5㎎, 0.04 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고 Celite®를 통해 여과한 다음, 감압 하에서 농축시켰다. 화합물 Int-TG1-5를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(246㎎, 정량적).
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.45 (m, 2H), 5.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 7.2, 3.6 Hz, 1H) 4.20 - 4.06 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.05(s, 3H), 2.02 (d, J = 7.6 Hz, 6H), 1.01 (s, 9H), 0.21 (d, J = 15.2 Hz, 6H).
화합물 Int-TG1의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(5㎖) 중 화합물 Int-TG1-5(243.2㎎, 0.41 m㏖) 및 11-아지도-3,6,9-트라이옥사운데칸-1-아민(Aldrich, CAS 134179-38-7, 89.5㎎, 0.41 m㏖)의 용액에 PyBOP(275㎎, 0.53 m㏖) 및 DIPEA(176㎕, 1.02 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EA(30㎖×2) 및 증류수(10㎖)로 추출하였다. 수득한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG1(272.8㎎, 84%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.34(s, 1H), 7.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.73(s, 1H), 5.48 - 5.44 (m, 2H), 5.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 6.4, 3.6 Hz, 1H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 4.06 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.66 (s, 14H), 3.38 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.02 (t, J = 8.4 Hz, 9H), 1.00 (s, 9H), 0.20 (d, J = 14.4 Hz, 6H).
EI-MS m/z: 799 (M++1).
화합물 Int-TG2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(3㎖) 중 화합물 Int-TG1-5(246㎎, 0.41 m㏖) 및 L-9(249.5㎎, 0.41 m㏖)의 용액에 PyBOP(278㎎, 0.53 m㏖) 및 DIPEA(179㎕, 1.02 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물에 Prep-HPLC를 적용하여 화합물 Int-TG2(384.6㎎, 81%)를 수득하였다. EI-MS m/z: 1152 (M++1).
실시예 28. 화합물 Int-TG3의 제조
Figure pct00093
화합물 Int-TG3a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DCM(3㎖) 중 4-하이드록시벤즈알데하이드(1g, 8.19 m㏖)의 용액에 Et3N(2.28㎖, 16.38 m㏖)을 첨가하였다. 풍선을 통해 SO2F2 가스를 도입하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(30㎖×3) 및 염수(30㎖)로 세척하고, 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG3a(790㎎, 63%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 10.06 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 2H).
화합물 Int-TG3-1의 제조
무수 MeCN(3㎖) 중 화합물 Int-TG1(100㎎, 0.13 m㏖) 및 화합물 Int-TG3a(26㎎, 0.13 m㏖)의 용액에 DBU(4㎕, 25 μ㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고 증류수(10㎖) 및 EA(15㎖×2)로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG3-1(103㎎, 94%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 869 (M++1).
화합물 Int-TG3-2의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 THF(8㎖) 중 화합물 Int-TG3-1(103㎎, 0.12 m㏖)의 용액에 NaBH4(9㎎, 0.24 m㏖)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2)를 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 화합물 Int-TG3-2(101㎎, 98%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 871 (M++1).
화합물 Int-TG3-3의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM(3 ml) 중 화합물 Int-TG3-2(320.5㎎, 0.0.37 m㏖)의 용액에 DCM 중 1 M PBr3(165㎕, 0.19 m㏖)을 첨가하였다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후. 포화 중탄산나트륨(8㎖×2)을 첨가하여 혼합물을 반응중지시켰다. 혼합물을 분리하고 유기 층을 염수로 세척한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG3-3(202.6㎎, 59%)을 생성하였다.
EI-MS m/z: 934 (M++1).
화합물 Int-TG3의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(1㎖) 중 화합물 Int-TG3-3(10㎎, 0.01 m㏖)의 용액에 다이메틸아민(0.1㎖)을 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Int-TG3(6㎎, 63%)을 수득하였다. EI-MS m/z: 898(M++1).
실시예 29. 화합물 L-12의 제조
Figure pct00094
화합물 L-12-1의 제조
MeOH(700㎖) 중 바닐산(50.0g, 0.30 ㏖)의 용액에 SOCl2(207㎖, 2.85 ㏖)를 적가하고 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 0℃에서 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 포화 NaHCO3 수용액으로 반응물의 pH를 7 내지 8로 조정한 다음, 증류수(100㎖) 및 EA(200㎖×2)로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-12-1(54.2g, 정량적)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (dd, J = 6.4, 1.6 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
화합물 L-12-2의 제조
N2 분위기 하에 DMF(200㎖) 중 화합물 L-12-1(54.2g, 0.30 ㏖)의 용액에 K2CO3(61.6g, 0.45 ㏖) 및 벤질 브로마이드(39.0㎖, 0.33 ㏖)를 첨가하였다. 100℃에서 6시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온까지 냉각시키고 증류수(100㎖) 및 EA(200㎖×2)로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-12-2(79.8g, 98%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.60 (dd, J = 6.4, 2.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.31 (m, 5H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
화합물 L-12-3의 제조
N2 분위기 하에 화합물 L-12-2(79.8g, 0.29 ㏖)를 아세트산 무수물(550㎖)에 용해시킨 다음 0℃까지 냉각시켰다. 질산구리(II) 반-(5수화물)(75.0g, 0.32 ㏖)을 조금씩 첨가하였다. 0℃에서 6시간 동안 교반한 후, 반응물을 얼음물(800㎖)로 반응중지시켰다. 고체를 여과하고 증류수(100㎖) 및 헥산(200㎖×2)으로 세척하여 화합물 L-12-3(85.5g, 92%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (s, 1H), 7.45-7.35 (m, 5H), 7.08 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.91 (s, 3H).
화합물 L-12-4의 제조
THF(800㎖) 및 MeOH(300㎖) 중 화합물 L-12-3(85.5g, 0.27 ㏖)의 용액에 2 N NaOH(404㎖, 0.81 ㏖)를 첨가하였다. 65℃에서 5시간 동안 교반한 후, 반응물을 실온까지 냉각시키고 2N HCl 용액을 첨가하여 pH를 2로 조정한 다음, 증류수(100㎖) 및 EA(300㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류 고체를 수집하고 헥산으로 세척하여 화합물 L-12-4(79.2g, 97%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (s, 1H), 7.47-7.35 (m, 5H), 7.03 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 3.91 (s, 3H).
화합물 L-12의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 THF(500 ㎕) 및 무수 DCM(1.5㎖) 중 화합물 L-12-4(100㎎, 0.33 m㏖)의 용액에 옥살릴 클로라이드(42.4 ㎕) 및 DMF 1 방울을 서서히 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 화합물 L-12를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
실시예 30. 화합물 Mono-1의 제조
Figure pct00095
화합물 Mono-1-1의 제조
증류수(5.0㎖) 중 L-2-티에닐알라닌(500㎎, 2.92 m㏖)의 용액에 농축 HCl(206 ㎕)을 적가하고 N2 분위기 하에 0℃에서 교반한 다음, 여기에 폼알데하이드(37%, 261㎕, 3.5 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 IPA(3.0㎖)에 현탁하고 여기에 4M HCl(1,4-다이옥산 중, 1.0㎖)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 고체를 여과하고 IPA(5㎖), 에터(20㎖)로 세척하여 화합물 Mono-1-1(495.7㎎, 77%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.95 (br s, 1H), 7.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.48-4.44 (m, 1H), 4.28 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.39 (dd, J = 11.6, 5.2 Hz, 1H), 3.17-3.10 (m, 1H). EI-MS m/z: 184 (M++1).
화합물 Mono-1-2의 제조
N2 분위기 하에 화합물 Mono-1-1(495.7㎎, 2.25 m㏖)을 MeOH(10.0㎖)에 용해시킨 다음 0℃까지 냉각시켰다. 0℃에서 SOCl2(491.3㎕, 6.76 m㏖)를 적가하였다. 그 다음 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다이에틸 에터(5㎖×2)로 세척하여 화합물 Mono-1-2(521.5㎎, 99%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.22 (br s, 2H), 7.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.65-4.61 (m, 1H), 4.30 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.19 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.60 (dd, J = 11.6, 5.2 Hz, 1H), 3.21-3.14, (m, 1H). EI-MS m/z: 198 (M++1).
화합물 Mono-1-3의 제조
0℃에서 무수 THF(3.0㎖) 중 화합물 L-12(856.5㎎, 2.66 m㏖)의 용액에 DMF(3.0㎖) 및 DIPEA(772.8㎕, 4.44 m㏖)에 용해시킨 화합물 Mono-1-2(518.5㎎, 2.22 m㏖)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-1-3(888.5㎎, 89%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 483 (M++1).
화합물 Mono-1-4의 제조
N2 분위기 하에 -78℃에서 무수 DCM(5.0㎖) 및 톨루엔(15.0㎖) 중 Mono-1-3(880㎎, 1.82 m㏖)의 용액에 DIBAL(3.6㎖, 3.6 m㏖, 톨루엔 중 1.0M)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. -78℃에서 반응물을 MeOH(5㎖) 및 2N HCl(20.0㎖)로 반응중지시켰다. 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-1-4(701.9㎎, 85%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 453(M++1).
화합물 Mono-1-5의 제조
실온에서 4시간 동안 THF(15.0㎖) 및 증류수(3.0㎖) 중 Mono-1-4(700㎎, 1.55 m㏖)의 용액에 Na2S2O4(2.2g, 12.4 m㏖)를 첨가하였다. 반응이 완료된 후, 반응물을 MeOH(5㎖)로 반응중지시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 톨루엔(20㎖)에 현탁하고 증발시켜 남아 있는 임의의 물을 제거하는 데 도움을 주었다. 고진공에서 밤새 방치하여 수득한 백색 고체를 완전히 건조시켰다. 잔류물을 무수 MeOH(10㎖)에 현탁한 다음 아세틸 클로라이드(1.1㎖, 15.5 m㏖)를 첨가하였다. 15분 후 탁한 용액을 여과하고 무수 MeOH(5㎖×2)로 고체를 세척하였다. 여과액을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 용액(pH 약 7)으로 반응중지시킨 다음, 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-1-5(701.9㎎, 85%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.47 (m, 5H), 7.22 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.26-5.14 (m, 2H), 4.98 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.32-3.26 (m, 1H).
EI-MS m/z: 453 (M++1).
화합물 Mono-1의 제조
0℃에서 무수 DCM(3㎖) 중 Mono-1-5(60㎎, 0.15 m㏖)의 용액에 DCM(2.0㎖) 중 메탄설폰산(700 ㎕)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 용액(pH 약 7)으로 반응중지시킨 다음, 증류수(5㎖) 및 EA(20㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-1(38.3㎎, 82%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.23 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.99 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.10-4.04 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.32-3.26 (m, 1H).
EI-MS m/z: 315(M++1).
실시예 31. 화합물 Mono-2의 제조
Figure pct00096
화합물 Mono-2-1의 제조
-13℃에서 30분에 걸쳐 무수 THF(200㎖) 중 Fmoc-His(Trt)-OH(15.0g, 24.2 m㏖), 및 HOBT(5.0g, 24.2 m㏖)의 용액에 THF(40㎖) 및 MeOH(20㎖) 중 DCC(1.15g, 8 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 교반하면서 실온까지 서서히 가온하였다. 반응이 완료된 후, 증류수(50㎖) 및 DCM(200㎖×2)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-2-1(13.0g, 84%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.75 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.41-7.28 (m, 14H), 7.15-7.06 (m, 7H), 6.54 (s, 1H), 6.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.66-4.59 (m, 1H), 4.38-4.22 (m, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.07 (t, J = 6.4 Hz, 1H). EI-MS m/z: 634 (M++1).
화합물 Mono-2-2의 제조
0℃에서 DMF(50㎖) 중 화합물 Mono-2-1(13g, 20.51 m㏖)의 용액에 메틸 아이오다이드(3.8㎖, 61.54 m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 5시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-2-2(11g, 83%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1H), 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.70-7.60 (m, 2H), 7.46-7.20 (m, 19h), 6.89 (s, 1H), 6.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.70-4.62 (m, 1H), 4.30-4.12 (m, 3H), 4.01 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.50-3.28 (m, 2H). EI-MS m/z: 648 (M++1).
화합물 Mono-2-3의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM(150㎖) 중 화합물 Mono-2-2(11g, 16.95 m㏖)의 용액에 TFA(40㎖) 및 트라이에틸실란(8.12㎖, 50.86 m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온하고 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-2-3(6.25g, 91%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87 (s, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 2H),7.45-7.30 (m, 4H), 7.09 (s, 1H), 5.69 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.64-4.50 (m, 2H), 4.48-4.38 (m, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.51-3.44 (m, 1H), 3.29-3.10 (m, 2H). EI-MS m/z: 407 (M++1).
화합물 Mono-2-4의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM(150㎖) 중 화합물 Mono-2-3(6.25g, 15.37 m㏖)의 용액에 피페리딘(3.0㎖, 30.74 m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 7시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 화합물 Mono-2-4(2.65g, 95%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.51 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 3.78-3.69 (m, 4H), 3.63 (s, 3H), 3.09-2.84 (m, 2H). EI-MS m/z: 184 (M++1).
화합물 Mono-2-5의 제조
N2 분위기 하에 화합물 Mono-2-4(2.65g, 14.46 m㏖)를 증류수(100㎖)에 용해시킨 다음 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시켰다. 농축 HCl(2.5㎖)을 0℃에서 적가한 다음 폼알데하이드(37%, 2.2㎖, 28.93 m㏖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 IPA(20㎖)에 현탁하고 4M HCl(1,4-다이옥산 중, 4.0㎖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고 IPA(5㎖) 및 에터(10㎖×2)로 세척하여 화합물 Mono-2-5(3.14g, 99%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 182 (M++1).
화합물 Mono-2-6의 제조
0℃에서 MeOH(100㎖) 중 Mono-2-5(3.14g, 14.43 m㏖)의 용액에 SOCl2(2.5㎖, 35.15 m㏖)를 적가하였다. 반응 혼합물을 5시간 동안 환류시킨 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 에터(25㎖×2)로 세척하여 화합물 Mono-2-6(2.18g, 65%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 196 (M++1).
화합물 Mono-2-7의 제조
0℃에서 무수 THF(30㎖) 및 DMF(30㎖) 중 화합물 L-12(3.93g, 12.23 m㏖) 및 화합물 Mono-2-6(2.18g, 9.41 m㏖)의 용액에 DIPEA(4.9㎖, 28.22 m㏖)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 증류수(200㎖) 및 EA(1000㎖)로 반응중지시켰다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-2-7(2.81g, 62%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 481 (M++1).
화합물 Mono-2-8의 제조
N2 분위기 하에 -78℃에서 무수 DCM(12.5㎖) 및 톨루엔(37.5㎖) 중 화합물 Mono-2-7(2.5g, 5.20 m㏖)의 용액에 DIBAL(10.4㎖, 10.41 m㏖, 톨루엔 중 1.0M)을 적가하였다. -78℃에서 5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 동일한 온도에서 MeOH(1.0㎖) 및 2N HCl(100㎖)로 반응중지시켰다. 혼합물을 연속하여 물(100㎖) 및 DCM(200㎖)으로 희석한 다음, 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-2-8(1.21g, 52%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 451 (M++1).
화합물 Mono-2-9의 제조
실온에서 THF(100㎖) 및 증류수(70㎖) 중 화합물 Mono-2-8(1.2g, 2.66 m㏖)의 용액에 Na2S2O4(3.7g, 21.31 m㏖)를 첨가하였다. 6시간 동안 교반한 후, 반응물을 MeOH(20㎖)로 반응중지시켰다. 공용매로서 톨루엔을 사용하여 혼합물을 감압 하에서 3회 농축시켜 물을 제거하였다. 수득한 황색 고체를 무수 MeOH(200㎖)에 현탁하고, 여기에 아세틸 클로라이드(1.9㎖, 26.64 m㏖)를 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 8로 조정하고 증류수(250㎖), MeOH(250㎖) 및 DCM(200㎖)으로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mono-2-9(918㎎, 78%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.49-7.27 (m, 5H), 6.84 (s, 1H), 5.26-5.15 (m, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.16 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.22-2.94 (m, 2H). EI-MS m/z: 403 (M++1).
화합물 Mono-2의 제조
0℃에서 무수 DCM(2㎖) 중 화합물 Mono-2-9(50㎎, 0.12 m㏖)의 용액에 DCM(0.2㎖) 중 메탄설폰산(0.1㎖)을 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 8로 조정하였다. 잔류물을 Prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Mono-2(27㎎, 71%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.34 (br s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.77 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 7.6 Hz, 1H ), 4.10-4.02 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.02-2.82 (m, 2H). EI-MS m/z: 313 (M++1).
실시예 32. 화합물 Mono-3의 제조
Figure pct00097
화합물 M-3-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 MeOH(140㎖) 중 (s)-(-)-1, 2, 3, 4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산(5.0g, 28.22 m㏖)의 용액에 SOCl2(2.30㎖, 31.04 m㏖)를 적가하였다. 40℃에서 21시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다이에틸 에터(25㎖×2)로 세척하여 화합물 M-3-1(6.42g, 수율 99%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.02 (s, 2H), 7.27 (s, 4H), 4.60 - 4.56 (m, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.19 - 3.12 (m, 2H); EI-MS m/z: 192 (M++1).
화합물 M-3-2의 제조
0℃에서 무수 THF(50㎖) 중 화합물 L-12(9.07g, 28.22 m㏖)의 용액에 THF(100㎖) 및 TEA(7.9㎖, 56.43 m㏖) 중 화합물 M-3-1(6.42g, 28.22 m㏖)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 증류수(500㎖) 및 EA(800㎖)로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-2(12.01g, 90%)를 수득하였다. EI-MS m/z: 477 (M++1).
화합물 M-3-3의 제조
N2 분위기 하에 -78℃에서 무수 DCM(18㎖) 및 톨루엔(52㎖) 중 화합물 M-3-2(4g, 8.39 m㏖)의 용액에 DIBAL(16.8㎖, 16.79 m㏖, 톨루엔 중 1.0M)을 적가하였다. -78℃에서 4시간 동안 교반한 후, 반응물을 -78℃에서 MeOH(0.4㎖), 2N HCl(25㎖)로 반응중지시켰다. 여기에 증류수(100㎖) 및 EA(500㎖)를 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-3(3.07g, 82%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 447(M++1).
화합물 M-3-4의 제조
실온에서 THF(130㎖) 및 증류수(86㎖) 중 화합물 M-3-3(3g, 6.72 m㏖)의 용액에 Na2S2O4·2H2O(11.3g, 53.76 m㏖)를 첨가하였다. 5시간 동안 교반한 후, 공용매로서 톨루엔을 사용하여 반응물을 감압 하에서 4회 농축시켜 물을 제거하였다. 수득한 황색 고체를 무수 MeOH(220㎖)에 용해하고, 여기에 아세틸 클로라이드(4.8㎖, 67.19 m㏖)를 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 7로 조정하고 증류수(100㎖) 및 EA (250㎖×2)로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-4(2.48g, 93%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (s, 1H), 7.45 - 7.27 (m, 10H), 6.84 (s, 1H), 5.24 - 5.15 (m, 2H), 5.00 (d, J = 15.2, 1H), 4.56 (d, J = 15.6, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.93 - 3.92 (m, 1H), 3.31 - 3.12 (m, 2H).; EI-MS m/z: 399(M++1).
화합물 M-3의 제조
0℃에서 무수 DCM(10㎖) 중 화합물 M-3-4(1g, 2.51 m㏖)의 용액에 DCM(10㎖) 중 메탄설폰산(5㎖)을 첨가하였다. 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaHCO3 용액으로 반응중지시킨 다음 증류수(100㎖) 및 EA(400㎖)로 희석하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3(703㎎, 91%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H), 7.48 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 4H), 6.88 (s, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.00 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.95 - 3.90 (m, 1H), 3.30 - 3.13 (m, 2H).
EI-MS m/z: 309(M++1).
실시예 33. 화합물 D-101의 제조
Figure pct00098
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(1.0㎖) 중 화합물 Mono-2(2.0㎎, 0.005 m㏖) 및 화합물 L-10(3.3㎎, 0.010 m㏖)의 용액에 K2CO3(2.0㎎, 0.012 m㏖)을 적가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 D-101(1.2㎎, 34%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 743 (M++1).
실시예 34. 화합물 D-102의 제조
Figure pct00099
화합물 D-102a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(3㎖) 중 화합물 Mono-1(100㎎, 0.318 m㏖) 및 1,3,5-트리스브로모메틸 벤젠(57㎎, 0.159 m㏖)의 용액에 K2CO3(66㎎, 0.477 m㏖)을 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 D-102a(62㎎, 48%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 824 (M++1).
화합물 D-102의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(1㎖) 중 화합물 D-102a(62㎎, 0.075 m㏖)의 용액에 THF(0.5㎖) 중 1 M 다이메틸아민을 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 D-102(39㎎, 60%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 788 (M++1).
실시예 35. 화합물 D-103의 제조
Figure pct00100
실시예 34에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 화합물 D-103을 합성하였다.
화합물 D-103a의 제조
수율 42%.
EI-MS m/z: 812 (M++1).
화합물 D-103의 제조
수율 17%.
EI-MS m/z: 776(M+).
실시예 36. 화합물 MMAF-OMe의 제조
Figure pct00101
미국 특허 제7,423,116호 및 제7,498,298호, 및 국제 특허 출원 공개 WO 제2002/088172호에 기재된 것과 유사한 합성 방법에 의해 MMAF-OMe를 합성하였으며, 이들 각각은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
실시예 37. 화합물 Int-TG4의 제조
Figure pct00102
화합물 Int-TG4-1의 제조
무수 MeCN(3㎖) 중 화합물 Int-TG1(100㎎, 0.13 m㏖) 및 화합물 Int-TG3a(26㎎, 0.13 m㏖)의 용액에 DBU(4㎕, 25 μ㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2)로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG4-1(103㎎, 94%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 869(M+).
화합물 Int-TG4-2의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 THF(8㎖) 중 화합물 Int-TG4-1(103㎎, 0.12 m㏖)의 용액에 NaBH4(9㎎, 0.24 m㏖)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2)를 첨가하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 화합물 Int-TG4-2(101㎎, 98%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 871(M+).
화합물 Int-TG4의 제조
질소 분위기 하에 실온에서 DMF(2㎖) 중 화합물 Int-TG4-2(47㎎, 54 μ㏖)의 용액에 비스(4-나이트로페닐) 카보네이트(25㎎, 81 μ㏖) 및 DIPEA(14㎕, 81 μ㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2)를 첨가하고, 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG4(53㎎, 94%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 1036(M+).
실시예 38. 화합물 T-Int-1(B-3)의 제조
Figure pct00103
화합물 T-Int-1a의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 DMF(1㎖) 중 화합물 Int-TG4(65㎎, 0.063 m㏖) 및 MMAF-OMe(52㎎, 0.069 m㏖)의 용액에 HOBt(2㎎, 0.013 m㏖), DIPEA(12㎕, 0.069 m㏖), 및 피리딘(330 ㎕)을 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 1N HCl을 이용하여 혼합물의 pH를 2 내지 3으로 조정하고 EA(8㎖×2)로 추출하였다. 유기 층을 증류수(8㎖) 및 염수(12㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물에 칼럼 크로마토그래피를 적용하여 화합물 T-Int-1a(73㎎, 71%)를 수득하였다.
EI-MS m/z: 1644(M+1).
화합물 T-Int-1의 제조
N2 분위기 하에 0℃에서 무수 MeOH(1.5㎖) 중 T-Int-1a(73㎎, 0.044 m㏖)의 균질한 용액을 LiOH(14㎎, 0.333 m㏖) 및 증류수(1.5㎖)로 처리하고 실온까지 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 1N HCl(2㎖)로 반응중지시키고 반응 혼합물을 Prep HPLC 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 T-Int-1(45㎎, 69%)을 제공하였다.
EI-MS m/z: 1462(M+).
실시예 39. 화합물 T-Int-2의 제조
Figure pct00104
화합물 T-Int-2-1의 제조
N2 분위기 하에 30℃에서 DMF(0.6㎖) 중 화합물 Mono-2(14㎎, 0.04 m㏖) 및 화합물 L-9(8.0㎎, 0.02 m㏖)의 균질한 용액에 K2CO3(9.3㎎, 0.07 m㏖)을 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-PLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-2-1(5.4㎎, 29%)을 수득하였다. EI-MS m/z: 825 (M++1).
화합물 T-Int-2-2의 제조
N2 분위기 하에 실온에서 MeCN(0.5㎖) 및 DMF(0.5㎖) 중 화합물 T-Int-2-1(7.5㎎, 0.01 m㏖) 및 화합물 Int-TG1(14㎎, 0.02 m㏖)의 용액에 BEMP(1㎕, 0.004 m㏖)를 첨가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-2-2(67㎎, 83%)를 수득하였다. EI-MS m/z: 1490 (M++1).
화합물 T-Int-2의 제조
N2 분위기 하에 MeOH(1㎖) 및 DCM(0.1㎖) 중 화합물 T-Int-1-2(8.1㎎, 0.01 m㏖)의 용액에 K2CO3(5.6㎎, 0.04 m㏖)을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-2(5.5㎎, 76%)를 수득하였다. EI-MS m/z: 1322 (M++1).
실시예 40. 화합물 T-Int-3의 제조
Figure pct00105
화합물 T-Int-3-1의 제조
N2 분위기 하에 40℃에서 DMF(2㎖) 중 화합물 D-103(22.8㎎, 0.03 m㏖) 및 화합물 Int-TG3-3(27.4㎎, 0.03 m㏖)의 용액에 DIPEA(12㎕, 0.07 m㏖)를 첨가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-3-1(28.9㎎, 71%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 1630 (M++1).
화합물 T-Int-3의 제조
N2 분위기 하에 MeOH(2㎖) 중 화합물 T-Int-3-1(28.9㎎, 0.02 m㏖)의 용액에 K2CO3(12.2㎎, 0.09 m㏖)을 첨가하였다. N2 분위기 하에 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 prep-HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-3(18.4㎎, 71%)을 수득하였다.
EI-MS m/z: 1462 (M++1).
실시예 41. 화합물 T-1 및 T-2의 제조
Figure pct00106
질소 분위기 하에 실온에서 DMSO(4.5㎖) 중 T-Int-1(2㎎, 1.37 μ㏖) 및 AMA-5(2㎎, 4.11 μ㏖)의 균질한 용액에 (BimC4A)3(4.5㎎, 5.48 μ㏖), CuBr(6.42㎎, 44.8 μ㏖)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Prep HPLC 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 T-1(0.4㎎, 15%)을 제공하였다. EI-MS m/z: 954 (M+1/2).
화합물 T-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-2를 합성하였다.
수율 33%, 백색 고체. EI-MS m/z: 976 (M/2++1).
실시예 42. 화합물 T-3의 제조
Figure pct00107
실시예 41의 화합물 T-2의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-3을 합성하였다.
수율 40%, 백색 고체. EI-MS m/z: 906 (M++1).
실시예 43. 화합물 T-4의 제조
Figure pct00108
실시예 41의 화합물 T-2의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-4를 합성하였다.
수율 77%, 백색 고체. EI-MS m/z: 977 (M++1).
실시예 44. 화합물 T-5의 제조
Figure pct00109
N2 분위기 하에 실온에서 DMSO(3461 ㎕) 중 T-Int-1(2.5㎎, 0.0017 m㏖) 및 Mal-1(2.3㎎, 0.0051 m㏖)의 균질한 용액에 DMSO(1368㎕, 0.0068 m㏖) 중 (BimC4A)3으로 처리하고 10분 동안 교반하였다. DMSO 중 CuBr(171㎕, 0.017m㏖)을 반응 혼합물에 첨가하고 생성된 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 0.1% 물 중 폼산/B 완충액 0.1% ACN 중 폼산, 방법 구배, 용매 A: 용매 B 95: 5에서 5: 95, 1시간, 파장 214 ㎚)에 의해 정제하여 화합물 11(2.1㎎, 64%)을 백색 고체로 수득하였다.
EI-MS m/z: 957 (M/2++1).
실시예 45. 화합물 T-6의 제조
Figure pct00110
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-6을 합성하였다.
수율 70%, 백색 고체. EI-MS m/z: 1007 (M/2+1).
실시예 46. 화합물 T-7의 제조
Figure pct00111
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-7을 합성하였다.
수율 53%, 백색 고체. EI-MS m/z: 1181 (M/2+1).
실시예 47. 화합물 T-8의 제조
Figure pct00112
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-8을 합성하였다.
수율 15%, 백색 고체. EI-MS m/z: 935 (M/2+1).
실시예 48. 화합물 T-9의 제조
Figure pct00113
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-9를 합성하였다.
수율 61%, 백색 고체. EI-MS m/z: 957 (M/2+1).
실시예 49. 화합물 T-10의 제조
Figure pct00114
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-10을 합성하였다.
수율 65%, 백색 고체. EI-MS m/z: 963(M/2+1).
실시예 50. 화합물 "BG-SIG"의 제조
Figure pct00115
미국 특허 제10,383,949호에 기재된 것과 유사한 경로에 의해 BG-SIG를 합성하였으며, 상기 특허는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
실시예 51. 화합물 T-Int-4의 제조
Figure pct00116
미국 특허 제10,383,949호에 기재된 것과 유사한 경로에 의해 T-Int-4-1, T-Int-4-2, 및 T-Int-4-3을 합성하였으며, 상기 특허는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
화합물 T-Int-4-1의 제조
수율 82%; EI-MS m/z: 1357 (M+1).
화합물 T-Int-4-2의 제조
수율 76%; EI-MS m/z: 1257 (M+1).
화합물 T-Int-4-3의 제조
수율 75%; EI-MS m/z: 1457 (M+1).
화합물 T-Int-4의 제조
실시예 38의 화합물 T-Int-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-Int-4를 합성하였다.
수율 88X %; EI-MS m/z: 1303 (M+1).
실시예 52. 화합물 T-11의 제조
Figure pct00117
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-11을 합성하였다.
수율 80%, 백색 고체. EI-MS m/z: 846(M/2+1).
실시예 53. 화합물 T-12의 제조
Figure pct00118
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-12를 합성하였다.
수율 71%, 백색 고체. EI-MS m/z: 925(M/2+1).
실시예 54. 화합물 T-13의 제조
Figure pct00119
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-13을 합성하였다.
수율 56%, 백색 고체. EI-MS m/z: 877(M/2+1).
실시예 55. 화합물 T-14의 제조
Figure pct00120
실시예 44의 화합물 T-5의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 T-14를 합성하였다.
수율 70%, 백색 고체. EI-MS m/z: 897(M/2+1).
실시예 56. 화합물 "MPS-1"의 제조
Figure pct00121
실시예 20에 기재된 것과 유사한 방법으로 화합물 MPS-1을 합성하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.04 - 7.99 (m, 4H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.63 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H). EI-MS m/z: 333 (M++1).
실시예 57. 화합물 "참조 A"의 제조
Figure pct00122
실시예 20에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 참조 A를 합성하였다.
EI-MS m/z: 621 (M++1).
실시예 58. 화합물 "N-Ac-Cys-AMA-9c"의 제조
Figure pct00123
N2 분위기 하에 실온에서 PBS 완충액 pH 7.4(2㎖) 및 DMSO(0.2㎖) 중 AMA-9c(11㎎, 0.025 m㏖)의 균질한 용액을 N-Ac-시스테인(4.2㎎, 0.026 m㏖)으로 처리하고 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 LC-질량을 확인한 후 다음 단계를 위해 동일계내(in-situ)에서 사용하였다.
EI-MS m/z: 610 (M+).
실시예 59. 화합물 "N-Ac-Cys-AMA-10"의 제조
Figure pct00124
실시예 59의 화합물 N-Ac-Cys-AMA-9c의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 화합물 N-Ac-Cys-AMA-10을 합성하였다.
생물학적 테스트
실시예 60. 접합체의 제조
접합을 위한 항체의 환원/산화: 시스테인 조작된 단클론성 항체를 1 mM EDTA와 함께 4 mM 트리스 pH 7.3에서 약 20 내지 50배 과량의 TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 또는 DTT(다이티오트레이톨)를 이용하여 37℃에서 1시간 동안 환원시켰다. 환원된 티오맙을 희석하고 PBS 중 PD-10 칼럼에 로딩하였다. 칼럼을 10 mM PBS pH 7.3으로 용리하였다. 용리된 환원된 티오맙을 공기 산화에 의해 재확립하였다. 용액의 280 ㎚에서의 흡광도로부터의 환원된 항체 농도와 DTNB(Aldrich, CAS No D8130)와의 반응 및 412 ㎚에서의 흡광도 결정에 의한 티올의 농도를 결정함으로써 티올/Ab 값을 확인하였다.
접합 방법 1 :
DMSO 중 실시예 41에서 수득한 화합물 T-1(3.80㎕, 3.0 m㏖, 링커-독소 중간체)을 환원되고 재산화된 항체(45㎕, 0.053 m㏖)로 처리하고 실온에서 3시간 동안 부드럽게 교반하였다. 수소화붕소나트륨(3.80㎕, 300 m㏖)을 반응 혼합물의 용액에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하여 가역적 탈접합 반응을 차단하였다. 접합 혼합물을 로딩하고 PD-10 칼럼을 통해 용리하여 과량의 약물-링커 중간체 및 다른 불순물을 제거하였다.
접합 방법 2 :
환원 및 재산화 반응 후, 항체를 PBS에 용해시켰다. DMSO 중 실시예 42, 및 43에서 수득한 화합물 T-3 및 T-4(8.86㎕, 3.0 m㏖, 링커-독소 중간체)의 용액을 환원되고 재산화된 항체(70㎕, 0.053 m㏖)로 처리하고 실온에서 3시간 동안 부드럽게 교반하였다. 하이드록실아민(8.86㎕, 1,500 m㏖)을 반응 혼합물의 용액에 첨가하고 37℃에서 8시간 동안 인큐베이션하여 가역적 탈접합 반응을 차단하였다. 접합 혼합물을 로딩하고 PD-10 칼럼을 통해 용리하여 과량의 약물-링커 중간체 및 다른 불순물을 제거하였다.
문헌에 제시된 방법을 참고하여, 실시예 41, 42 및 43에서 수득한 화합물 T-1, T-3 및 T-4를 사용하여 트라스투주맙(항-HER2)의 조작된 시스테인의 티올기에 대하여 접합 반응을 수행하여, 티오맙 약물 접합체(TDC)로서 각각 T-1-AB, T-3-AB 및 T-4-AB를 제조하였다. [문헌[Nature Biotechnology, 2008, 26, 925-932, Bioconjugate Chem., 2013, 24, 1256-1263, Bioconjugate Chem., 2016, 27, 1324-1331, Bioconjugate Chem. 2014, 25, 460-469] 참조]. 접합된 항체의 DAR(약물 대 항체 비율)을 HIC에 의해 분석하였고, 분석 결과를 표 1에 나타내었다.
접합 방법 3 : 말레이미드 접합 프로토콜.
환원 및 재산화 반응 후, 생성된 항체를 DMSO 중 3 mM 스톡 용액으로서 3.5 당량의 화합물 T-10으로 처리하여 7.5%(v.v)의 총 유기물을 획득하였다. 반응물을 40℃에서 1시간 동안 방치한 다음, PD-10 컬ㄴ럼을 사용하여 과량의 약물-링커 중간체 및 다른 불순물을 제거하였다. 최종 샘플을 약 5 ㎎/㎖ 단백질로 농축시켰다.
Figure pct00125
실시예 61. 항체-약물 접합체의 세포 독성
NCI-N87 암 세포를 100㎕의 배지에 웰당 5,000개 세포의 밀도로 96-웰 플레이트에 파종하고, 24시간 동안 배양하였다. 50nM부터 0.000128nM까지 1:5로 연속 희석하여 T-DM1을 처리하였다. 72시간 인큐베이션한 후, PBS 완충 용액에 용해된 3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-2,5-다이페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT) 염료(5 ㎎/㎖) 0.2㎖를 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 살아있는 세포에서 미토콘드리아 산화환원효소에 의한 MTT 염료의 환원에 의해 형성된 포마잔을 DMSO에 용해시키고, 550 ㎚에서의 흡광도를 사용하여 측정하였다.
실시예 62. AMA-9c와 N-Ac-Cys, N-Ac-Lys 및 N-Ac-Tyr의 반응에 대한 화학선택성 연구.
Figure pct00126
PBS 완충액(870 ㎕) 및 DMSO(90 ㎕) 중 AMA-9c(10㎕, 스톡 용액 10 m㏖)의 균질한 용액에 N-아세틸-L-라이신(10㎕, 스톡 용액 10 m㏖), N-아세틸-L-타이로신(10㎕, 스톡 용액 10 m㏖), 및 N-아세틸-L-시스테인(10㎕, 스톡 용액 10 m㏖)을 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. LC-MS를 사용하여 AMA-9c의 반응에 대한 화학선택성을 확인하였다. N-아세틸-L-라이신, N-아세틸-L-타이로신, 및 N-아세틸-L-시스테인의 등몰 혼합물에서 AMA-9c의 반응은 시스테인의 티올기에 대한 완전한 화학선택성을 보인다.
실시예 63. AMA-9c의 화학적 안정성(수화 안정성) 연구
AMA-9c의 안정성을 확인하기 위해 본 연구를 수행하였다. 화합물 AMA-9c를 DMSO에 용해시키고 PBS(pH 7.4) 완충 용액과 혼합하여 농도가 500μM(5% DMSO)인 용액을 제조하였다. 표준 물질로서 사용된 MPS를 PBS 완충 용액 중 농도가 500μM이도록 용액으로 준비하였다. 420㎕의 완충 용액, 및 140㎕의 화합물 AMA-6 용액 및 140㎕의 MPS 용액을 혼합하여, 총 700㎕의 양으로 반응 혼합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 빛을 차단하면서 실온에서 인큐베이션하였다. 반응 혼합물을 제0일(반응 전), 및 반응 후 제1일, 제2일, 제4일 및 제7일에 분취하였으며, 여기서 각각의 분취량은 70㎕였다. 그 다음, 나머지 화합물 AMA-9c 및 MPS를 HPLC 분석에 의해 정량화하였으며, 이는 PBS 완충액에서 AMA-9c의 안정성을 나타내었다(도 2 참조).
실시예 64. N-Ac-Cys-AMA-10의 혈장 안정성 연구
화합물 N-Ac-Cys-AMA-10 및 메틸 페닐 설폰(표준 물질로 사용됨)을 DMSO에 용해시켜 농도를 30 mM으로 만들었다. 그 다음, 인간 혈장(Biochemed 752PR-SC-PMG) 및 마우스 혈장(Biochemed 029-APSC-MP) 각각을 N-Ac-Cys-AMA-10 및 MPS와 혼합하여 N-Ac-Cys-AMA-10 및 메틸 페닐 설폰의 최종 농도를 300μM로 만들었다. 생성된 혈장 혼합물을 37℃의 수조에서 인큐베이션하였다. 반응 전 및 반응 후 제1일, 제2일, 제4일 및 제7일에 분취량을 취하였으며, 여기서 각각의 분취량은 200㎕였다. 반응을 완료하기 위해, 2배 부피의 아세토나이트릴을 첨가한 다음, 짧게 와동시키고, 혈장 단백질 침전을 위한 원심분리를 수행하였다. 원심분리 후 수득한 각각의 상청액을 수집하고 HPLC에 의해 분석하였다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 최대 7일 동안 마우스 및 인간 혈장에서 화합물을 검출하고 정량화하였다. 연구는 7일 동안 혈장에서 N-Ac-Cys-AMA-10의 높은 안정성을 입증한다.
실시예 65. '참조 A', PyrMPS-1, 및 mMPS-4와 N-Ac-시스테인의 상대 반응 속도
Figure pct00127
PBS 완충액(870 ㎕) 및 DMSO(90 ㎕) 중 '참조 A', PyrMPS-1, 및 mMPS-4(10㎕, 스톡 용액 10 m㏖)의 균질한 용액에 N-아세틸-L-시스테인(10㎕, 스톡 용액 10 m㏖)을 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC/MS를 사용하여 생성된 샘플을 반응 속도에 대하여 확인하였다.
Figure pct00128
메타-치환기의 도입은 화합물의 안정성을 개선시키고 티올기와의 빠른 반응을 가능하게 한다.
참조에 의한 원용
본 명세서에 언급된 모든 간행물 및 특허는 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적이고 개별적으로 참조에 의해 원용되는 것으로 나타내어진 것처럼 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다. 상충하는 경우, 본 명세서의 임의의 정의를 포함하여 본 출원이 우선할 것이다.
균등물
대상 발명의 특정 실시형태가 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적이며 제한적이지 않다. 본 명세서 및 하기 청구범위를 검토하면 본 발명의 많은 변형이 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 전체 범주는 청구범위와 이의 균등물의 전체 범주, 및 명세서와 이와 같은 변형을 참조하여 결정되어야 한다.

Claims (55)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 염:
    Figure pct00129

    식 중,
    A는
    Figure pct00130

    Figure pct00131
    Figure pct00132
    또는
    Figure pct00133
    이고;
    M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이고;
    각각의 L은 독립적으로 스페이서 모이어티로부터 선택되고;
    각각의 Q는 독립적으로 활성 모이어티 또는 반응성 기로부터 선택되고;
    X는 -Cl, -Br, 및 -I로부터 선택되고;
    J는 표적화 모이어티이고;
    R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자-구인성 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
    R46은 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
    R42 및 R43은 각각 독립적으로 -OH, 알콕시, -NR44R45, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 및 헤테로사이클릴로부터 선택되되, R44 및 R45는 이들이 부착되는 질소 원자와 함께, 선택적으로 아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합되는, 5 내지 8원 고리를 형성할 수 있고;
    R32, R44, 및 R45는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
    R47은 O-, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴이고;
    n은 1 내지 4이다.
  2. 제1항에 있어서, M은 N인, 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, M은 CR30이되, R30은 전자-구인성 기인, 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, A는
    Figure pct00134
    및
    Figure pct00135
    로부터 선택되되, R31은 전자-구인성 기인, 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, M은 C(-L-Q)이되, L은 전자-구인성 기에 의해 C에 커플링되고, 바람직하게는 L은 아마이드 또는 에스터로부터 선택되는 전자-구인성 기에 의해 C에 커플링되는, 화합물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R30은 -CONR33R34 또는 -CO2R35이고, R33, R34 및 R35는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되는, 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    각각의 전자-구인성 기는 독립적으로 -NO2, -CN, -할로알킬, -CONR33R34, -CO2R35, -C(=O)R36, -S(=O)R37, -S(=O)2OR38, 및 -NR39R40R41로부터 선택되고;
    R36 , R37, R38, R39 , R40, 및 R41은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되는, 화합물.
  8. 제7항에 있어서, 각각의 전자-구인성 기는 독립적으로 -CN, -CONR33R34, 및 -CO2R35로부터 선택되는, 화합물.
  9. 제8항에 있어서, 각각의 전자-구인성 기는 독립적으로 -CN, -CONH2, 및 -CO2Me로부터 선택되는, 화합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 활성 모이어티인, 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 L' 및 Q'을 포함하되, L'은 링커이고 Q'은 활성제인, 화합물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, L'은 커플링 기를 포함하되, 커플링 기는 L에 커플링되는, 화합물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 커플링 기는 -C(=O)NR32-, -C(=O)O-, -C(=NR32)-, -C=NO-, -NR32-C(=O)-NR32-, -OC(=O)O-, -S-S-, -NR32S(=O)2O-, 및 -OS(=O)2O-로부터 선택되는, 화합물.
  14. 제12항에 있어서, 상기 커플링 기는
    Figure pct00136
    및
    Figure pct00137
    로부터 선택되는, 화합물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, L'은 절단 가능한 기를 더 포함하되, 절단 가능한 기는 Q'에 커플링되는, 화합물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 Q'에 커플링된 절단 가능한 기는
    Figure pct00138
    및
    Figure pct00139
    로부터 선택되되,
    R49는 수소 또는 -C(=O)R50이고;
    R50은 저급 알킬인, 화합물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, L'은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)-, 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 더 포함하는, 화합물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, L은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)-, 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 포함하는, 화합물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, L은
    Figure pct00140
    또는
    Figure pct00141
    를 포함하되,
    a는 M-포함 방향족 고리에 대한 결합이고, b는 L'에 대한 결합이고;
    n은 2 내지 20인, 화합물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Q'은 호르몬, 올리고뉴클레오타이드, 독소, 친화성 리간드, 검출용 프로브, 또는 이들의 조합인, 화합물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, Q'은 사이토카인, 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 구충제, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는, 화합물.
  22. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 반응성 기인, 화합물.
  23. 제22항에 있어서, 상기 반응성 기는 -N3,
    Figure pct00142
    ,
    Figure pct00143
    , -S(O)2Hal, -NH2, -CO2Hal, -OH, -C(O)H, -SH, -N=C=O, 및 -N=S=C로부터 선택되되, Hal은 -Cl, -Br, 또는 -I인, 화합물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 -S- 모이어티를 포함하는, 화합물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 -S- 모이어티를 통해 화학식 (I)의 화합물의 나머지에 커플링되는, 화합물.
  26. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, A는
    Figure pct00144
    또는
    Figure pct00145
    인, 화합물.
  27. 제26항에 있어서, A는
    Figure pct00146
    인, 화합물.
  28. 제27항에 있어서, R31은 -CN, -CO2NR33R34, 또는 -CO2R35인, 화합물.
  29. 제26항에 있어서, A는
    Figure pct00147
    인, 화합물.
  30. 제29항에 있어서, R32는 수소 또는 C1-3 알킬인, 화합물.
  31. 제26항에 있어서, A는
    Figure pct00148
    인, 화합물.
  32. 제31항에 있어서, R46은 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 선택적으로 치환된 C6-C12 아릴, 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴인, 화합물.
  33. 제26항에 있어서, A는
    Figure pct00149
    인, 화합물.
  34. 제33항에 있어서, R47은 O- 또는 C1-3 알킬인, 화합물.
  35. 제26항에 있어서, A는
    Figure pct00150
    인, 화합물.
  36. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pct00151

    Figure pct00152
    및
    Figure pct00153
    로부터 선택되는, 화합물.
  37. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, A는
    Figure pct00154
    Figure pct00155
    또는
    Figure pct00156
    인, 화합물.
  38. 제37항에 있어서, A는
    Figure pct00157
    또는
    Figure pct00158
    인, 화합물.
  39. 제37항에 있어서, A는
    Figure pct00159
    인, 화합물.
  40. 제37항에 있어서, A는
    Figure pct00160
    Figure pct00161
    또는
    Figure pct00162
    인, 화합물.
  41. 제40항에 있어서, A는
    Figure pct00163
    또는
    Figure pct00164
    인, 화합물.
  42. 제41항에 있어서, R42는 -OH 또는 -NR44R45인, 화합물.
  43. 제37항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 나노입자, 면역글로불린, 핵산, 단백질, 올리고펩타이드, 폴리펩타이드, 항체, 항원성 폴리펩타이드의 단편, 또는 리피바디(repebody)를 포함하는, 화합물.
  44. 제43항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 항체, 예컨대, 온전한 다클론성 항체, 온전한 단클론성 항체, 항체 단편, 단일 사슬 Fv(scFv) 돌연변이체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원 결정기 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 변형된 면역글로불린 분자로부터 선택되는 항체를 포함하는, 화합물.
  45. 제44항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 무로모납-CD3, 압식시맙, 리툭시맙, 다클리주맙, 팔리비주맙, 인플릭시맙, 트라스투주맙(허셉틴), 에타너셉트, 바실릭시맙, 젬투주맙 오조가마이신, 알렘투주맙, 이브리투모맙 튜세탄, 아달리무맙, 알레파셉트, 오말리주맙, 에팔리주맙, 토시투모맙-I131, 세툭시맙, 베바시주맙, 나탈리주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 에쿨리주맙, 릴로나셉트, 세톨리주맙 페골, 로미플로스팀, AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, 벨리무맙, TACI-Ig, 2세대 항-CD20, ACZ-885, 토실리주맙, 아틀리주맙, 메폴리주맙, 퍼투주맙, 휴맥스 CD20, 트레멜리무맙(CP-675 206), 티실리무맙, MDX-010, IDEC-114, 이노투주맙 오조가마이신, 휴맥스 EGFR, 애플리버셉트, 휴맥스-CD4, Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, 카투막소맙, IGN101, MT-201, 프레고보맙, CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, 모타비주맙, MEDI-524, 에품구맙, 아우로그랍, 락시바쿠맙, 3세대 항-CD20, LY2469298 및 벨투주맙으로부터 선택되는 항체를 포함하는, 화합물.
  46. 접합체를 제조하는 방법으로서, 제26항 내지 제36항 중 어느 한 항의 화합물을 마이클 공여체에 공유 결합된 표적화 모이어티를 포함하는 시약과 반응시켜, 마이클 부가물을 생성하는 단계를 포함하는, 방법.
  47. 제46항에 있어서, 마이클 부가물을 환원시켜, 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물을 생성하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  48. 제46항 또는 제47항에 있어서, 상기 표적화 모이어티에 공유 결합된 마이클 공여체는 -SH, -NH2, -OH,
    Figure pct00165
    또는
    Figure pct00166
    로부터 선택되되;
    R은 C1-3 알킬 또는 C1-3 알콕시인, 방법.
  49. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 나노입자, 면역글로불린, 핵산, 단백질, 올리고펩타이드, 폴리펩타이드, 항체, 항원성 폴리펩타이드의 단편, 또는 리피바디를 포함하는, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 온전한 다클론성 항체, 온전한 단클론성 항체, 항체 단편, 단일 사슬 Fv(scFv) 돌연변이체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원 결정기 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 변형된 면역글로불린 분자로부터 선택되는 항체를 포함하는, 방법.
  51. 제50항에 있어서, 상기 표적화 모이어티는 무로모납-CD3, 압식시맙, 리툭시맙, 다클리주맙, 팔리비주맙, 인플릭시맙, 트라스투주맙(허셉틴), 에타너셉트, 바실릭시맙, 젬투주맙 오조가마이신, 알렘투주맙, 이브리투모맙 튜세탄, 아달리무맙, 알레파셉트, 오말리주맙, 에팔리주맙, 토시투모맙-I131, 세툭시맙, 베바시주맙, 나탈리주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 에쿨리주맙, 릴로나셉트, 세톨리주맙 페골, 로미플로스팀, AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, 벨리무맙, TACI-Ig, 2세대 항-CD20, ACZ-885, 토실리주맙, 아틀리주맙, 메폴리주맙, 퍼투주맙, 휴맥스 CD20, 트레멜리무맙(CP-675 206), 티실리무맙, MDX-010, IDEC-114, 이노투주맙 오조가마이신, 휴맥스 EGFR, 애플리버셉트, 휴맥스-CD4, Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, 카투막소맙, IGN101, MT-201, 프레고보맙, CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, 모타비주맙, MEDI-524, 에품구맙, 아우로그랍, 락시바쿠맙, 3세대 항-CD20, LY2469298 및 벨투주맙으로부터 선택되는 항체를 포함하는, 방법.
  52. 제37항 내지 제45항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  53. 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 제37항 내지 제45항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 제52항의 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  54. 제54항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암, 감염성 질환 또는 자가면역 질환으로부터 선택되는, 방법.
  55. 제53항에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인, 방법.
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