CN111117966A - 一种利用乳酸的体外细胞培养方法 - Google Patents
一种利用乳酸的体外细胞培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111117966A CN111117966A CN202010135062.9A CN202010135062A CN111117966A CN 111117966 A CN111117966 A CN 111117966A CN 202010135062 A CN202010135062 A CN 202010135062A CN 111117966 A CN111117966 A CN 111117966A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactic acid
- glutamine
- culture method
- cell
- dmem
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 128
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 64
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 43
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 41
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 28
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 26
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 14
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 11
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 38
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 12
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 11
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 claims description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 210000000424 bronchial epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 6
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 abstract description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 5
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 230000003651 pro-proliferative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- KGBSYOXQRFUUFY-DFWYDOINSA-N (2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoic acid;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O KGBSYOXQRFUUFY-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 230000006682 Warburg effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000007946 glucose deprivation Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/005—Protein-free medium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
Abstract
本发明提供一种利用乳酸的体外细胞培养方法，包括如下步骤：（1）含乳酸、含葡萄糖、去谷氨酰胺培养基的制备，包括如下具体步骤：（1‑1）取5g乳酸粉末，加10mL高压后的双蒸水溶解，配成500mg/mL乳酸溶液；（1‑2）取50mL胎牛血清与5mL双抗溶液加入450mL高糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基配置为500mL去谷氨酰胺DMEM完全培养基；（1‑3）取80μL步骤（1‑1）制备的500mg/mL乳酸溶液加入500mL步骤（1‑2）制备的去谷氨酰胺完全培养基，配置为含乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；（2）检测细胞凋亡率或增值率。本发明提供的体外细胞培养方法不仅适用于多种细胞系，而且细胞活力保持较好，更适于需要长期体外培养的研究。
Description
技术领域
本发明属于生物学技术领域，具体涉及一种利用乳酸的体外细胞培养方法。
背景技术
肿瘤细胞的能量代谢方式非常复杂，此前，Warburg效应认为相对于正常的体细胞，肿瘤细胞会更主要利用糖酵解作为其体内能量代谢的主要方式，而三羧酸循环和氧化磷酸化在一定程度上受到抑制。但最近的一些研究发现肿瘤细胞不仅会大量利用葡萄糖进行糖酵解，同时会增加三羧酸循环和氧化磷酸化。已知乳酸是糖酵解的终末产物之一，最近的研究发现乳酸能够作为肿瘤细胞的主要能量来源之一被利用，其对于肿瘤细胞增殖的重要性不亚于葡萄糖，而且和肿瘤的发生发展密切相关。
阐述肿瘤细胞利用的乳酸的机制需要可靠的细胞模型，然而在一般体外培养条件下，由于培养基中含有大量其他营养物质，肿瘤细胞并不利用乳酸进行增值。此前有研究提示肿瘤细胞能够在葡萄糖剥夺的条件下利用乳酸，但我们发现在这种条件下，即使乳酸能被利用，并一定程度上恢复肿瘤细胞的增值，但细胞会在24小时内大量凋亡，这对于研究肿瘤利用乳酸的机制研究带来了一定困难。因此，需要建立一种新的体外细胞培养方法，用于检测和分析肿瘤细胞对乳酸的代谢。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用乳酸的体外细胞培养方法，不仅适用于多种细胞系，而且细胞活力保持较好，更适于需要长期体外培养的研究。
为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种利用乳酸的体外细胞培养方法，包括如下步骤：
（1）含乳酸、含葡萄糖、去谷氨酰胺培养基的制备，包括如下具体步骤：
（1-1）取5g乳酸粉末，加10mL高压后的双蒸水溶解，配成500mg/mL乳酸溶液；
（1-2）取50mL胎牛血清与5mL双抗溶液加入450mL高糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基配置为500mL去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（1-3）取80μL步骤（1-1）制备的500mg/mL乳酸溶液加入500mL步骤（1-2）制备的去谷氨酰胺完全培养基，配置为含乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（2）检测细胞凋亡率或增值率，包括如下具体步骤：
（2-1）在孔板中加入细胞悬液，贴壁4-24h后待细胞量达到40%-60%时，撤去原有培养基，加入步骤（1）制备的含乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（2-2）培养24-96h后，检测细胞凋亡率或细胞增值率。
其中，步骤（1）所用原料包括：高葡萄糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基450mL，胎牛血清50mL，双抗溶液5mL，乳酸粉末400mg。
其中，步骤（2-1）中所用孔板为6孔板或96孔板。
其中，步骤（2-1）中所用细胞悬液为人肺癌细胞株A549或人支气管上皮细胞株BEAS-2B的细胞悬液。
优选的，步骤（2-2）中，利用流式细胞术检测细胞凋亡率或利用CCK8检测细胞增殖率。
本发明的上述技术方案的有益效果如下：本发明提供的体外细胞培养方法不仅适用于多种细胞系，而且细胞活力保持较好，更适于需要长期体外培养的研究。
附图说明
图1为本发明中不同浓度梯度的乳酸对A549细胞增殖的影响图；
图2为本发明中CCK8检测A549细胞在含乳酸的DMEM培养基中与不含乳酸的培养基中的72h增值率示意图；
图3为本发明中CCK8检测BEAS-2B细胞在含乳酸的DMEM培养基中与不含乳酸的培养基中的72h增值率示意图；
图4为本发明中利用流式细胞术检测BEAS-2B细胞在含乳酸的DMEM培养基中与不含乳酸的培养基中的24h凋亡率结果图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
本发明提供了一种利用乳酸的体外细胞培养方法，包括如下步骤：
（1）取高葡萄糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基450mL，胎牛血清50mL，双抗溶液5mL，乳酸粉末400mg制备含乳酸、含葡萄糖、去谷氨酰胺培养基，包括如下具体步骤：
（1-1）取5g乳酸粉末，加10mL高压后的双蒸水溶解，配成500mg/mL乳酸溶液；
（1-2）取50mL胎牛血清与5mL双抗溶液加入450mL高糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基配置为500mL去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（1-3）取80μL步骤（1-1）制备的500mg/mL乳酸溶液加入500mL步骤（1-2）制备的去谷氨酰胺完全培养基，配置为含乳酸（8mM）、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（2）检测细胞凋亡率或增值率，包括如下具体步骤：
（2-1）在6孔板或96孔板中加入人肺癌细胞株A549或人支气管上皮细胞株BEAS-2B的细胞悬液，贴壁4-24h后待细胞量达到40%-60%时，撤去原有培养基，加入步骤（1）制备的含乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（2-2）培养24-96h后，利用流式细胞术检测细胞凋亡率或利用CCK8检测细胞增殖率。
下面以两个实施例进一步阐述本发明的技术方案。
实施例1
本实施例以人肺癌细胞株A549为例，阐述含在乳酸、去谷氨酰胺的培养基中培养人肺癌细胞株A549的使用方案和效果分析；同时比较了乳酸在三种培养条件中（①含葡萄糖，不含谷氨酰胺；②含谷氨酰胺，不含葡萄糖；③不含葡萄糖，不含谷氨酰胺）对细胞增殖的影响，具体包括如下步骤：
S101、收集2×105 A549细胞，加入2mL DMEM完全培养基重悬后，加入18mL DMEM完全培养基重悬，100μL细胞悬液/孔加入至96孔板；
S102、细胞贴壁后撤去DMEM完全培养基，加入去谷氨酰胺DMEM完全培养基和加入含不同浓度的乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
S103、处理72h后弃去培养基，加入10% CCK8溶液，待1-4h后检测OD值，发现4-8mM乳酸对细胞增殖起明显促进作用（如图1所示）；至此，我们确定8mM的是乳酸的最佳浓度。
S104、为了进一步比较在乳酸在不同培养基中对细胞增殖的促进作用，我们收集2×105 A549细胞，加入2mL DMEM完全培养基重悬后，加入18mL DMEM完全培养基重悬，100μL细胞悬液/孔加入至96孔板；
S105、细胞贴壁后撤去DMEM完全培养基，加入三种不同的DMEM完全培养基（①含葡萄糖，不含谷氨酰胺；②含谷氨酰胺，不含葡萄糖；③不含葡萄糖，不含谷氨酰胺），三种培养基中含或不含8mM的乳酸。
S106、处理72h后弃去培养基，加入10% CCK8溶液，待1-4h后检测OD值，发现在含葡萄糖，不含谷氨酰胺的培养基中，细胞活力保持良好，增殖明显，而且乳酸能进一步促进细胞增殖。在含谷氨酰胺，不含葡萄糖的培养基中，细胞增殖显著降低，但乳酸对其仍有一定的促进作用。最后，在不含葡萄糖，不含谷氨酰胺的培养基中细胞不能增殖，乳酸也没有促增殖的作用。（如图2所示）。
实施例2
本实施例以人支气管上皮细胞株BEAS-2B为例，阐述含乳酸、去谷氨酰胺的培养基中培养人支气管上皮细胞株BEAS-2B的使用方案和效果分析，同时比较了乳酸在三种DMEM完全培养条件中（①含葡萄糖，不含谷氨酰胺；②含谷氨酰胺，不含葡萄糖；③不含葡萄糖，不含谷氨酰胺）对细胞增殖的影响，具体包括如下步骤：
S201、收集2×105 BEAS-2B细胞，加入2mL DMEM完全培养基重悬后，加入8mL DMEM完全培养基重悬，100μL细胞悬液/孔加入至96孔板；
S202、细胞贴壁后，撤去DMEM完全培养基，加入三种不同的DMEM完全培养基（①含葡萄糖，不含谷氨酰胺；②含谷氨酰胺，不含葡萄糖；③不含葡萄糖，不含谷氨酰胺），三种培养基中含或不含8mM的乳酸；
S203、处理72h后弃去培养基，加入10% CCK8溶液，待1-4h后检测OD值，发现在含葡萄糖，不含谷氨酰胺的培养基中，细胞活力保持良好，增殖明显，而且乳酸能进一步促进细胞增殖。在含谷氨酰胺，不含葡萄糖的培养基中，细胞增殖显著降低，但乳酸对其仍有一定的促进作用。最后，在不含葡萄糖，不含谷氨酰胺的培养基中细胞不能增殖，乳酸也没有促增殖的作用。（如图3所示）。
S204、为了检测细胞凋亡，收集0.5×106-1.5×106 BEAS-2B细胞，加入2mL DMEM完全培养基重悬后，加入18mL DMEM完全培养基重悬，200μL细胞悬液/孔加入至6孔板，加2mLDMEM完全培养基，贴壁6-24h；
S205、待细胞融合度达到40-60%左右时，撤去DMEM完全培养基，分别加入去谷氨酰胺DMEM完全培养基和含乳酸去谷氨酰胺DMEM完全培养基，处理24h-48h；
S206、撤去培养基，PBS洗涤后使用胰酶消化，10% FPBS吹打收集细胞，1000rpm离心后，PBS洗涤沉淀2-3遍，流式细胞术检测细胞凋亡。
S207、发现24-48h后，经过去谷氨酰胺DMEM完全培养基处理后的BEAS-2B细胞凋亡率明显增加，而乳酸能够明显地抑制去谷氨酰胺后的BEAS-2B细胞凋亡率（如图4所示）。
本发明发现去除培养基中的谷氨酰胺，但保留葡萄糖时，加入乳酸有促进增殖和抑制凋亡的作用。另外，我们通过测试不同浓度的乳酸，确立了一个体外研究肿瘤细胞乳酸代谢的新方法，该方法不仅适用于多种细胞系，而且细胞活力保持较好，更适于需要长期体外培养的研究。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种利用乳酸的体外细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）含乳酸、含葡萄糖、去谷氨酰胺培养基的制备，包括如下具体步骤：
（1-1）取5g乳酸粉末，加10mL高压后的双蒸水溶解，配成500mg/mL乳酸溶液；
（1-2）取50mL胎牛血清与5mL双抗溶液加入450mL高糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基配置为500mL去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（1-3）取80μL步骤（1-1）制备的500mg/mL乳酸溶液加入500mL步骤（1-2）制备的去谷氨酰胺完全培养基，配置为含乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（2）检测细胞凋亡率或增值率，包括如下具体步骤：
（2-1）在孔板中加入细胞悬液，贴壁4-24h后待细胞量达到40%-60%时，撤去原有培养基，加入步骤（1）制备的含乳酸、去谷氨酰胺DMEM完全培养基；
（2-2）培养24-96h后，检测细胞凋亡率或细胞增值率。
2.根据权利要求1所述的体外细胞培养方法，其特征在于，步骤（1）所用原料包括：高葡萄糖、去谷氨酰胺、去丙酮酸钠DMEM培养基450mL，胎牛血清50mL，双抗溶液5mL，乳酸粉末400mg。
3.根据权利要求1所述的体外细胞培养方法，其特征在于，步骤（2-1）中所用孔板为6孔板或96孔板。
4.根据权利要求1所述的体外细胞培养方法，其特征在于，步骤（2-1）中所用细胞悬液为人肺癌细胞株A549或人支气管上皮细胞株BEAS-2B的细胞悬液。
5.根据权利要求1所述的体外细胞培养方法，其特征在于，步骤（2-2）中，利用流式细胞术检测细胞凋亡率。
6.根据权利要求1所述的体外细胞培养方法，其特征在于，步骤（2-2）中，利用CCK8检测细胞增殖率。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010135062.9A CN111117966A (zh) | 2020-03-02 | 2020-03-02 | 一种利用乳酸的体外细胞培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010135062.9A CN111117966A (zh) | 2020-03-02 | 2020-03-02 | 一种利用乳酸的体外细胞培养方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111117966A true CN111117966A (zh) | 2020-05-08 |
Family
ID=70493801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010135062.9A Pending CN111117966A (zh) | 2020-03-02 | 2020-03-02 | 一种利用乳酸的体外细胞培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111117966A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101018567A (zh) * | 2004-07-20 | 2007-08-15 | 先灵公司 | 表达Toll样受体的肿瘤细胞凋亡的诱导 |
| CA2971766A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Sutro Biopharma, Inc. | Hemiasterlin derivatives for conjugation and therapy |
| CN109593717A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-09 | 广州和能生物科技有限公司 | 一种干细胞无血清培养基 |
-
2020
- 2020-03-02 CN CN202010135062.9A patent/CN111117966A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101018567A (zh) * | 2004-07-20 | 2007-08-15 | 先灵公司 | 表达Toll样受体的肿瘤细胞凋亡的诱导 |
| CA2971766A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Sutro Biopharma, Inc. | Hemiasterlin derivatives for conjugation and therapy |
| CN109593717A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-09 | 广州和能生物科技有限公司 | 一种干细胞无血清培养基 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KAREN G ET AL.,: "Lactate in the Regulation of Tumor Microenvironment and Therapeutic Approaches", 《FRONTIERS IN ONCOLOGY》 * |
| LUIGI IPPOLITO ET AL.,: "Lactate: A Metabolic Driver in the Tumour Landscape", 《TRENDS IN BIOCHEMICAL SCIENCES》 * |
| 金征宇等: "《基因与纳米探针-医学分子成像理论与实践》", 30 November 2017, 天津科学技术出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Grisham | Cell types in long‐term propagable cultures of rat liver | |
| CN114292816B (zh) | 肺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法 | |
| CN112048470B (zh) | 一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法 | |
| CN102899288B (zh) | 一种人胰岛来源的胰腺干细胞系的构建及向胰岛素分泌细胞分化的方法 | |
| CN102250829A (zh) | 人脐带间充质干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法 | |
| Danes et al. | Hurler's syndrome: Effect of retinol (vitamin A alcohol) on cellular mucopolysaccharides in cultured human skin fibroblasts | |
| CN111235101B (zh) | 一种人脐带间充质干细胞培养基及人脐带间充质干细胞的培养方法 | |
| CN115896010A (zh) | 化合物在提高脐带间充质干细胞活力中的应用 | |
| CN111117966A (zh) | 一种利用乳酸的体外细胞培养方法 | |
| CN104419659A (zh) | 脂肪干细胞及其干细胞分泌物的培养与量产方法 | |
| CN110592001B (zh) | 一种输卵管上皮细胞的纯化培养体系 | |
| Gehring et al. | A protocol for the isolation and cultivation of brown bear (Ursus arctos) adipocytes | |
| CN116286624B (zh) | 水溶性壳聚糖在干细胞体外培养中的应用 | |
| CN102559531A (zh) | 一种副猪嗜血杆菌5型高密度发酵培养基及应用 | |
| Pan et al. | Development of a tree shrew metabolic syndrome model and use of umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation for treatment | |
| CN115584342A (zh) | 一种延缓间充质干细胞复制性衰老的方法 | |
| CN108034634B (zh) | 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 | |
| CN109385399A (zh) | 一种羊水间充质干细胞分化为神经干细胞的方法 | |
| CN112877286B (zh) | 一种干细胞体外诱导方法 | |
| CN110592007B (zh) | 一种间充质干细胞及其制备方法和应用 | |
| CN111690599A (zh) | 一种促进间充质干细胞分化为成软骨细胞的方法 | |
| CN110192552A (zh) | 甘酪二肽条件培养基在间充质干细胞冻存和制备商品化冻存保护剂方面的应用 | |
| Liu et al. | Comparative study of differentiating human pluripotent stem cells into vascular smooth muscle cells in hydrogel-based culture methods | |
| Bhanothu et al. | Restrictions and supplementations effects of vitamins B6, B9 and B12 on growth, vasculogenesis and senescence of BG01V human embryonic stem cell derived embryoid bodies | |
| JP2014128210A (ja) | 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200508 |