JP2014128210A - 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 - Google Patents
人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014128210A JP2014128210A JP2012286978A JP2012286978A JP2014128210A JP 2014128210 A JP2014128210 A JP 2014128210A JP 2012286978 A JP2012286978 A JP 2012286978A JP 2012286978 A JP2012286978 A JP 2012286978A JP 2014128210 A JP2014128210 A JP 2014128210A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- ips cells
- hepatocytes
- medium
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】iPS細胞から分化誘導した肝細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群を、血清または血清代替物質を含む組成の培地で培養する工程を含む、該細胞群から実質的に肝肝細胞からなる細胞培養物を分別して得る。
【選択図】なし
Description
(a)RPL19増幅用プライマー:
5'-CGAATGCCAGAGAAGGTCAC(配列番号1)および5'-CCATGAGAATCCGCTTGTTT(配列番号2)((GeneBank Accession Number: BC000530, PCR産物の予想サイズ:157 bp)
(b)GALK1増幅用プライマー:
5'-TGCTGTGCCTGGGGTTTATG(配列番号3)および5'-GCTGCTTGAGAGAGGTAGAAGGTG(配列番号4)(GeneBank Accession Number: NM_000154, PCR産物の予想サイズ:153 bp)
(c)GALK2増幅用プライマー:
5'-TCACGACTTACTGGAGCAGGATG(配列番号5)および5'-CAAAACCAAAGCCCCACCTC(配列番号6)(GeneBank Accession Number: NM_002044, PCR産物の予想サイズ:177 bp)
(d)OTC増幅用プライマー:
5'- GGACATTTTTACACTGCTTGCCC(配列番号7)および 5'-TCCACTTTCTGTTTTCTGCCTCTG(配列番号8)(GeneBank Accession Number: BC107153, PCR産物の予想サイズ:105 bp)
配列番号2:リボソームタンパク質L19遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
配列番号3:ガラクトキナーゼ1遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
配列番号4:ガラクトキナーゼ1遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
配列番号5:ガラクトキナーゼ2遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
配列番号6:ガラクトキナーゼ2遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
配列番号7:オルニチン トランスカルバミラーゼ遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
配列番号8:オルニチン トランスカルバミラーゼ遺伝子の増幅用プライマーとして設計されたオリゴヌクレオチド。
Claims (7)
- 人工多能性幹細胞(induced pluripotent stem cells:以下、iPS細胞と略称する)から分化誘導した肝細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を分別して得る方法であって、該細胞群を、血清または血清代替物質を含む下記表1または表2の組成の培地で培養する工程を含む方法。
- 血清または血清代替物質がノックアウト商標 セラム リプレースメント(knockoutTM serum replacement;以下、KSRと略称する)である請求項1に記載の方法。
- KSRが、最終濃度10%(V/V)となるように添加されたKSRである請求項2に記載の方法に関する。
- 培養する工程が、少なくとも3日間培養する工程である請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- iPS細胞から分化誘導した肝細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群が、iPS細胞から分化誘導した肝前駆細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群である請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- iPS細胞から分化誘導した肝細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群が、ヒトiPS細胞に転写因子FOXA2、GATA4、HEXおよびC/EBPαの各遺伝子を3日毎にトランスフェクションし、増殖促進剤の組合せとしてオンコスタチンM、上皮成長因子、レチノイン酸、デキサメタゾン、インシュリンおよびトランスフェリンを含む培地中で分化誘導を行うことにより得られたヒト肝前駆細胞とヒトiPS細胞とを含む細胞群である請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- 人工多能性幹細胞(induced pluripotent stem cells:以下、iPS細胞と略称する)から分化誘導した肝細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を分別して得る方法であって、iPS細胞から分化誘導した肝細胞と未分化のiPS細胞とを含む細胞群が、ヒトiPS細胞に転写因子FOXA2、GATA4、HEXおよびC/EBPαの各遺伝子を3日毎にトランスフェクションし、増殖促進剤の組合せとしてオンコスタチンM、上皮成長因子、レチノイン酸、デキサメタゾン、インシュリンおよびトランスフェリンを含む培地中で分化誘導を行い、トランスフェクション後8日目に得られたヒト肝前駆細胞と、ヒトiPS細胞とを含む細胞群を、最終濃度10%(V/V)となるように添加されたノックアウト商標 セラム リプレースメントを含む下記表1または表2の組成の培地で少なくとも3日間培養する工程を含む方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012286978A JP6057418B2 (ja) | 2012-12-28 | 2012-12-28 | 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012286978A JP6057418B2 (ja) | 2012-12-28 | 2012-12-28 | 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014128210A true JP2014128210A (ja) | 2014-07-10 |
JP2014128210A5 JP2014128210A5 (ja) | 2016-02-18 |
JP6057418B2 JP6057418B2 (ja) | 2017-01-11 |
Family
ID=51407288
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012286978A Expired - Fee Related JP6057418B2 (ja) | 2012-12-28 | 2012-12-28 | 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6057418B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10006005B2 (en) | 2014-06-27 | 2018-06-26 | National University Corporation Chiba University | Culture medium and method for inducing differentiation of pluripotent stem cells to hepatoblasts |
WO2020075822A1 (ja) | 2018-10-10 | 2020-04-16 | 国立大学法人鳥取大学 | 外来染色体を含むヒト人工多能性幹細胞の製造方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011133599A2 (en) * | 2010-04-20 | 2011-10-27 | International Stem Cell Corporation | Physiological methods for isolation of high purity cell populations |
JP2012080819A (ja) * | 2010-10-12 | 2012-04-26 | Onchip Biotechnologies Inc | 特定の細胞内に選択的に取り込まれる蛍光色素を利用して多種類の細胞から特定の細胞を純化濃縮する方法 |
WO2012105505A1 (ja) * | 2011-01-31 | 2012-08-09 | 独立行政法人国立国際医療研究センター | 多能性幹細胞由来高機能肝細胞とその製造方法及び薬剤代謝毒性試験方法 |
-
2012
- 2012-12-28 JP JP2012286978A patent/JP6057418B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011133599A2 (en) * | 2010-04-20 | 2011-10-27 | International Stem Cell Corporation | Physiological methods for isolation of high purity cell populations |
JP2012080819A (ja) * | 2010-10-12 | 2012-04-26 | Onchip Biotechnologies Inc | 特定の細胞内に選択的に取り込まれる蛍光色素を利用して多種類の細胞から特定の細胞を純化濃縮する方法 |
WO2012105505A1 (ja) * | 2011-01-31 | 2012-08-09 | 独立行政法人国立国際医療研究センター | 多能性幹細胞由来高機能肝細胞とその製造方法及び薬剤代謝毒性試験方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10006005B2 (en) | 2014-06-27 | 2018-06-26 | National University Corporation Chiba University | Culture medium and method for inducing differentiation of pluripotent stem cells to hepatoblasts |
WO2020075822A1 (ja) | 2018-10-10 | 2020-04-16 | 国立大学法人鳥取大学 | 外来染色体を含むヒト人工多能性幹細胞の製造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6057418B2 (ja) | 2017-01-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Avior et al. | Microbial‐derived lithocholic acid and vitamin K2 drive the metabolic maturation of pluripotent stem cells–derived and fetal hepatocytes | |
AU2014310526B2 (en) | Method for producing engineered heart muscle (EHM) | |
Li et al. | Hepatoblast-like progenitor cells derived from embryonic stem cells can repopulate livers of mice | |
AU2011358083B2 (en) | Method for culturing human pluripotent stem cells | |
WO2012105505A1 (ja) | 多能性幹細胞由来高機能肝細胞とその製造方法及び薬剤代謝毒性試験方法 | |
Xu et al. | Three-dimensional culture promotes the differentiation of human dental pulp mesenchymal stem cells into insulin-producing cells for improving the diabetes therapy | |
KR101861171B1 (ko) | 투석된 혈청이 있는 심근세포 배지 | |
US20220056415A1 (en) | Modified mesenchymal stem cell culture medium, bone marrow mesenchymal stem cells and culture methods and use thereof | |
US20230138022A1 (en) | Methods of making pluripotent stem cells and uses thereof | |
WO2020063161A1 (zh) | 肝细胞的体外扩增培养方法及应用 | |
Meng et al. | The differentiation and isolation of mouse embryonic stem cells toward hepatocytes using galactose-carrying substrata | |
Vasanthan et al. | Comparison of fetal bovine serum and human platelet lysate in cultivation and differentiation of dental pulp stem cells into hepatic lineage cells | |
JP6057418B2 (ja) | 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法 | |
US10006005B2 (en) | Culture medium and method for inducing differentiation of pluripotent stem cells to hepatoblasts | |
Katsuda et al. | Hypoxia efficiently induces differentiation of mouse embryonic stem cells into endodermal and hepatic progenitor cells | |
US9243228B2 (en) | Process for obtaining myofibroblasts | |
US20220220445A1 (en) | Preparation of human allogeneic liver-derived progenitor cells | |
WO2011016485A1 (ja) | iPS細胞から肝実質細胞への分化誘導方法 | |
JP2009153383A (ja) | 成熟肝細胞様細胞の製造方法 | |
JP6265385B2 (ja) | アミノ酸製剤による細胞増幅法 | |
JP6486619B2 (ja) | 薬物評価用細胞及び薬物評価方法 | |
JP6807095B2 (ja) | 肝前駆細胞の製造方法 | |
WO2015046315A1 (ja) | 細胞の培養法 | |
JP6917984B2 (ja) | 培地、アルブミン非含有培地用添加剤および多能性幹細胞の培養方法 | |
US20190127692A1 (en) | Production Method For Hepatocyte Lineage Cells, Hepatocyte Lineage Cell Or Culture Product Obtained By The Production Method, And Hepatocyte Differentiation-Inducing Medium |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151225 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20151225 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161114 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161202 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6057418 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |