CN114702546A - 一种三肽-29的生产工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种三肽‑29的生产工艺，属于生物医药领域，采用依次合成Mca‑Pro‑OH、H‑Gly‑Pro‑OH、Fmoc‑Gly‑Pro‑OH、Fmoc‑Gly‑Pro‑ONp、Fmoc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH，最后将所得Fmoc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH水解得到三肽‑29的工艺路线，采用最小保护，六步反应就可以得到合格的产品，大幅度降低了生产周期，降低了生产成本。

Description

一种三肽-29的生产工艺
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种三肽-29的生产工艺。
背景技术
三肽-29即胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH是一种含有甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸的三肽，由于胶原三肽的分子量很小，因而能够被人体充分吸收，与此同时，胶原三肽还能够极有效的渗入角质层、真皮层和头发根部细胞内，是目前分子量最小的，与皮肤胶原蛋白有相同的基本结构，无需分解，能够被皮肤直接吸收，吸收率高。胶原三肽能促进真皮胶原蛋白生成，真表皮连接层再生，表皮再生和分化，广泛应用于各种高级美容化妆品中，有保湿、滋养、亮肤、紧肤、防皱、修复的功能。
目前常规合成胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH采用如申请号为2017112641452的中国发明专利申请公开的三肽-29的液-固相合成方法，其所使用的原料Fmoc-Hyp(tBu)-OH价格较高，自主合成过程繁杂。具体分析来，该工艺路线使用固相合成，存在如下缺点：其一是原料都是使用Fmoc保护的氨基酸，原料价格昂贵，生产周期长，三废排放量大，而且在固相反应过程中，原料至少使用2当量以上，这就造成原料成本大幅度增加，造成资源的浪费；其二是固相合成必须使用配套的、定制的反应器，该固相反应器成本较高，定制价格昂贵，最关键的是该固相反应器不能做到体积很大，这就造成使用该工艺生产H-Gly-Pro-Hyp-OH批产量低、产能低；其三是固相合成使用的树脂价格昂贵，而且无法重复利用；其四是专利中使用液-固相合成方法，有机溶剂使用量巨大，与当今绿色化学、可持续发展理念不符；其五是专利中使用固相合成得到的是三肽-29的TFA(三氟乙酸)盐，众所周知，TFA(三氟乙酸)盐是不能销售的，因此该工艺不利于产业化。以上五点说明现有技术生产三肽-29成本高、三废多、附加值低。
因此，简单快捷、成本较低的合成方法和H-Hyp-OH保护策略研究对广泛使用于化妆品的胶原三肽有重要意义。
发明内容
本发明针对现有技术中所存在的上述问题提供了一种三肽-29的生产工艺，其要解决技术问题在于：（1）避免固相合成所使用的Fmoc保护的氨基酸；（2）避免Hyp(羟脯氨酸)上的羟基的保护；（3）使生产工艺不受生产场地的限制，易于放大生产；（4）降低有机溶剂的使用量，减小三废排量；（5）中间体易于生产以及后处理。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种三肽-29的生产工艺，其特征在于，以脯氨酸、氯乙酰氯、氨水、Fmoc-Cl、HONP（对硝基苯酚）、DIC（N,N'-二异丙基碳二亚胺）、羟脯氨酸为原料，首先脯氨酸与氯乙酰氯在碱性条件下反应制得中间体-1 Mca-Pro-OH，然后中间体-1与氨水反应制得中间体-2 H-Gly-Pro-OH，再将中间体-2与Fmoc-Cl在碱性条件下反应制得中间体-3 Fmoc-Gly-Pro-OH，中间体-3经与HONP、DIC反应制得中间体-4Fmoc-Gly-Pro-ONp，中间体-4再与羟脯氨酸反应制得中间体-5 Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，最后中间体-5经水解得到三肽-29 H-Gly-Pro-Hyp-OH。
上述反应的反应式如下：
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进一步的，中间体-1的合成如下：向一容器中加入脯氨酸Pro、水、有机溶剂，保持温度-5-0℃，向料液中滴加氯乙酰氯和有机溶剂的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，滴加过程中固体逐渐溶解，反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、干燥，得Mca-Pro-OH。
进一步的，中间体-2的合成如下：向一容器中加入Mca-Pro-OH及浓氨水，搅拌，反应完全后，加热浓缩反应液，得到H-Gly-Pro-OH。
进一步的，中间体-3的合成如下：向一容器中加入H-Gly-Pro-OH及水、有机溶剂,温度保持在0到10℃，滴加Fmoc-Cl的有机溶剂溶液，保持料液pH在8.5-9，反应完全后，加热浓缩去除其中的有机溶剂，然后降温至常温25℃，调节料液pH为2.0±0.2，析料、过滤、烘干，得到Fmoc-Gly-Pro-OH。
进一步的，中间体-4的合成如下：向一容器中加入Fmoc-Gly-Pro-OH、HONP及有机溶剂，温度保持0到10度，滴加DIC的有机溶剂溶液，滴加完后，升温至20-25度，反应完全后，得到Fmoc-Gly-Pro-ONp。
进一步的，中间体-5的合成如下：向Fmoc-Gly-Pro-ONp中加入水、羟脯氨酸，保持内温5-10度，控制料液pH为8.5-9.0，待Fmoc-Gly-Pro-ONp反应完，加热浓缩反应液，然后将料液内温降至0度以下，调节料液pH为2.0±0.2，析料、过滤、烘干，得到Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH。
进一步的，中间体-5的水解反应如下：将Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH 置于一容器中，加入水、有机溶剂，温度保持45-50度，控制料液pH为12.0-12.5，反应完全后，将料液pH调为8.0±0.2，加热浓缩去除有机溶剂，然后将料液pH调为8.5-9.0，加入萃取溶剂萃取杂质，水相pH调至3.0±0.2，加热浓缩反应液，经脱盐后，用结晶溶剂结晶，过滤、烘干，得到三肽-29H-Gly-Pro-Hyp-OH。
更进一步的，中间体-1、中间体-3的合成过程以及中间体-5的水解过程中所用的有机溶剂采用甲苯、乙醇、THF、乙腈、1,4-二氧六环中的至少一种。
更进一步的，中间体-5的水解过程中，所述萃取溶剂采用乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲叔醚、DCM中的至少一种，结晶溶剂采用甲醇与惰性溶剂的混合物，其中惰性溶剂采用乙醚、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、THF中的至少一种；结晶溶剂优选甲醇与乙醚以体积比为2:1的混合物，或甲醇与乙腈以1:2的混合物，或甲醇与乙醇以1:3的混合物，或甲醇与乙酸乙酯以1:1的混合物，或甲醇与THF以1:1的混合物。
本发明的有益效果是：本发明采用常见氨基酸为原料，避免了固相合成所使用的Fmoc保护的氨基酸以及避免了Hyp(羟脯氨酸)上的羟基的保护，通过液相合成方法，采用依次合成Mca-Pro-OH、H-Gly-Pro-OH、Fmoc-Gly-Pro-OH、Fmoc-Gly-Pro-ONp、Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，最后将所得Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH水解得到三肽-29的工艺路线，采用最小保护，六步反应就可以得到合格的产品，大幅度降低了生产周期，降低了生产成本。
具体分析本发明的增益效果，其一，本发明工艺完全避免了固相合成所使用的Fmoc保护的氨基酸，使用的是最为常见的、价格便宜的氨基酸原料，最重要的一点是，本发明还使用了氨基酸的前体，氯乙酰氯这一常见的化工原料，该原料具有价格低廉，货源充足等优点；其二，在合成酰胺的过程中，Hyp(羟脯氨酸)上的羟基也是能够和自身的氨基竞争，参与和羧酸的反应，导致中间体纯度低，纯化困难；传统方法是对Hyp(羟脯氨酸)上的羟基进行上保护基，以避免羟基参与反应，但这必然导致反应步骤增多，原料成本增加，工艺繁琐；本发明工艺完全避免了Hyp(羟脯氨酸)上的羟基的保护，只需使用价格低廉Hyp(羟脯氨酸)即可，所以省去了对Hyp(羟脯氨酸)上的羟基上保护基和脱保护基的步骤，节省了生产步骤，提高了总收率，减少了三废排量，降低了总成本；其三，本发明工艺完全避免了固相合成这一工艺，完全采用液相合成，其优点有对生产场地没有特别的要求，一般的化工、制药生产车间就能满足该工艺，而且液相合成能够实现固相不能实现的公斤级、百公斤级、甚至吨级规模生产；其四，相比上述专利中提到的固相生产，本发明工艺使用的有机溶剂量小，产生的三废量少，符合环保的要求；其五，H-Gly-Pro-Hyp-OH是一个三肽，易溶于水，尤其该三肽含有Hyp(羟脯氨酸)，所以更加易于溶于水，其本身还具有易于吸潮的性质，现有的生产工艺导致生产过程中中间体的收率低，难以纯化，保存，本发明工艺采用了Fmoc保护基保护中间体，由于Fmoc保护基具有三个芳香环，空间位阻巨大，疏水性强，使得本发明工艺生产的中间体易于纯化、后处理简单，只需要加水析出，然后经过滤、洗涤、干燥即可，而且由于Fmoc保护基空间位阻巨大，使得各中间体几乎能够避免消旋的风险，所以采用本工艺得到的H-Gly-Pro-Hyp-OH具有含量高、纯度高、消旋程度极低等优点。
具体实施方式
下面对本发明的原理和特征进行描述，所举实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
步骤一：合成Mca-Pro-OH（中间体-1）
5L三口瓶中，加入270g Pro、540ml水、540ml甲苯，保持温度-5-0℃，向料液中滴加292g的氯乙酰氯和146ml甲苯的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，经TLC检测反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、烘干，得414g Mca-Pro-OH，收率92.3%。
步骤二：合成H-Gly-Pro-OH （中间体-2）
5L三口瓶中，加入Mca-Pro-OH、3L浓氨水，搅拌，经TLC检测反应完全后，加热浓缩反应液，得到H-Gly-Pro-OH。
步骤三：合成Fmoc-Gly-Pro-OH（中间体-3）
5L三口瓶中，加入H-Gly-Pro-OH、1242ml水、1242ml THF ,温度保持在0到10℃，滴加615g Fmoc-Cl的THF(300ml)溶液，同时调节料液pH为8.5-9，经TLC检测反应完全后，加热浓缩掉去除THF，然后降至常温，用浓盐酸调节料液pH为2.0±0.2，料液中析出大量固体，过滤、烘干后，得到760gFmoc-Gly-Pro-OH，收率：89.2%（以Mca-Pro-OH计算）。
步骤四：合成Fmoc-Gly-Pro-ONp（中间体-4）
5L三口瓶中，加入260g Fmoc-Gly-Pro-OH、1300ml THF、101g HONP，温度保持0到10度，滴加DIC（92g）的THF（50ml）溶液，滴完，升温至20-25度，经TLC检测反应完全后，得到Fmoc-Gly-Pro-ONp备用。
步骤五：合成Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5）
向步骤四所得中间体-4中加入1020ml水、96g羟脯氨酸，保持温度5-10度，滴加氢氧化钠控制料液pH为8.5-9.0，经TLC检测中间体-4反应完，加热浓缩反应液，然后将料液温度降至0度，调节料液pH为2.0±0.2，析出大量固体，过滤，滤饼烘干后得到 308g固体Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，收率92%。
步骤六：合成H-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5的水解）
将 300g Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH 置于3L三口瓶中，加入600ml水、600ml THF，内温保持45-50度，用氢氧化钠控制料液pH为12.0-12.5，经TLC检测反应完全，将料液pH调为8.0±0.2，加热浓缩去除THF，然后将料液pH调为8.5-9.0，加入乙酸乙酯萃取杂质，水相再用浓盐酸调为3.0±0.2，加热浓缩反应液，经脱盐后，用甲醇：乙醚=2:1（体积比）的结晶溶剂结晶，过滤，烘干，得到145.2g H-Gly-Pro-Hyp-OH，HPLC纯度99.4%，收率86.1%（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
实施例2
步骤一：合成Mca-Pro-OH（中间体-1）
5L三口瓶中，加入200g Pro、400ml水、400ml乙酸乙酯，保持温度-5-0℃，向料液中滴加216g的氯乙酰氯和108ml乙酸乙酯的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，经TLC检测反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、烘干，得303g Mca-Pro-OH，收率91.1%。
步骤二：合成H-Gly-Pro-OH （中间体-2）
5L三口瓶中，加入Mca-Pro-OH、3L浓氨水，搅拌，经TLC检测反应完全后，加热浓缩反应液，得到H-Gly-Pro-OH。
步骤三：合成Fmoc-Gly-Pro-OH（中间体-3）
5L三口瓶中，加入H-Gly-Pro-OH、600ml水、600ml 甲苯 ,温度保持在0到10℃，滴加450gFmoc-Cl的甲苯(225ml)溶液，同时调节料液pH为8.5-9，经TLC检测反应完全后，加热浓缩掉去除甲苯，然后降至常温，用浓盐酸调节料液pH为2.0±0.2，料液中析出大量固体，过滤、烘干后，得到553gFmoc-Gly-Pro-OH，收率：88.7%（以Mca-Pro-OH计算）。
步骤四：合成Fmoc-Gly-Pro-ONp（中间体-4）
5L三口瓶中，加入200g Fmoc-Gly-Pro-OH、1.0L 甲苯、77.6g HONP，温度保持0到10度，滴加DIC（71g）的甲苯（50ml）溶液，滴完，升温至20-25度，经TLC检测反应完全后，得到Fmoc-Gly-Pro-ONp备用。
步骤五：合成Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5）
向步骤四所得中间体-4中加入780ml水、73.1g羟脯氨酸，保持温度5-10度，滴加氢氧化钠控制料液pH为8.5-9.0，经TLC检测中间体-4反应完，加热浓缩反应液，然后将料液温度降至0度，调节料液pH为2.0±0.2，析出大量固体，过滤，滤饼烘干后得到 232g固体Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，收率90.3%。
步骤六：合成H-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5的水解）
将 230g Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH 置于3L三口瓶中，加入460ml水、4460ml 甲苯，内温保持45-50度，用氢氧化钠控制料液pH为12.0-12.5，经TLC检测反应完全，将料液pH调为8.0±0.2，加热浓缩去除甲苯，然后将料液pH调为8.5-9.0，加入乙酸丁酯萃取杂质，水相再用浓盐酸调为3.0±0.2，加热浓缩反应液，经脱盐后，用甲醇：乙腈=1:2（体积比）的结晶溶剂结晶，过滤，烘干，得到111g H-Gly-Pro-Hyp-OH，HPLC纯度99.3%，收率85.8%（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
实施例3
步骤一：合成Mca-Pro-OH（中间体-1）
5L三口瓶中，加入230g Pro、460ml水、460ml乙腈，保持温度-5-0℃，向料液中滴加249g的氯乙酰氯和150ml乙腈的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，经TLC检测反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、烘干，得357g Mca-Pro-OH，收率93.3%。
步骤二：合成H-Gly-Pro-OH （中间体-2）
5L三口瓶中，加入Mca-Pro-OH、3L浓氨水，搅拌，经TLC检测反应完全后，加热浓缩反应液，得到H-Gly-Pro-OH。
步骤三：合成Fmoc-Gly-Pro-OH（中间体-3）
5L三口瓶中，加入H-Gly-Pro-OH、1071ml水、1071ml乙酸乙酯,温度保持在0到10℃，滴加530g Fmoc-Cl的乙酸乙酯(265ml)溶液，同时调节料液pH为8.5-9，经TLC检测反应完全后，加热浓缩掉去除乙酸乙酯，然后降至常温，用浓盐酸调节料液pH为2.0±0.2，料液中析出大量固体，过滤、烘干后，得到649gFmoc-Gly-Pro-OH，收率：88.3%（以Mca-Pro-OH计算）。
步骤四：合成Fmoc-Gly-Pro-ONp（中间体-4）
5L三口瓶中，加入230g Fmoc-Gly-Pro-OH、1150ml乙酸乙酯、89.5g HONP，温度保持0到10度，滴加DIC（81g）的乙酸乙酯（40ml）溶液，滴完，升温至20-25度，经TLC检测反应完全后，得到Fmoc-Gly-Pro-ONp备用。
步骤五：合成Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5）
向步骤四所得中间体-4中加入900ml水、84g羟脯氨酸，保持温度5-10度，滴加氢氧化钠控制料液pH为8.5-9.0，经TLC检测中间体-4反应完，加热浓缩反应液，然后将料液温度降至0度，调节料液pH为2.0±0.2，析出大量固体，过滤，滤饼烘干后得到 270g固体Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，收率91.5%。
步骤六：合成H-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5的水解）
将 250g Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH 置于3L三口瓶中，加入500ml水、500ml乙醇，内温保持45-50度，用氢氧化钠控制料液pH为12.0-12.5，经TLC检测反应完全，将料液pH调为8.0±0.2，加热浓缩去除乙醇，然后将料液pH调为8.5-9.0，加入甲叔醚萃取杂质，水相再用浓盐酸调为3.0±0.2，加热浓缩反应液，经脱盐后，用甲醇：乙醇=1:3（体积比）的结晶溶剂结晶，过滤，烘干，得到119.9g H-Gly-Pro-Hyp-OH，HPLC纯度99.2%，收率85.3%（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
实施例4
步骤一：合成Mca-Pro-OH（中间体-1）
5L三口瓶中，加入240g Pro、480ml水、480ml 1,4-二氧六环，保持温度-5-0℃，向料液中滴加259g的氯乙酰氯和130ml 1,4-二氧六环的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，经TLC检测反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、烘干，得366g Mca-Pro-OH，收率91.6%。
步骤二：合成H-Gly-Pro-OH （中间体-2）
5L三口瓶中，加入Mca-Pro-OH、3L浓氨水，搅拌，经TLC检测反应完全后，加热浓缩反应液，得到H-Gly-Pro-OH。
步骤三：合成Fmoc-Gly-Pro-OH（中间体-3）
5L三口瓶中，加入H-Gly-Pro-OH、1098ml水、1098ml 1,4-二氧六环,温度保持在0到10℃，滴加544g Fmoc-Cl的1,4-二氧六环(272ml)溶液，同时调节料液pH为8.5-9，经TLC检测反应完全后，加热浓缩掉去除1,4-二氧六环，然后降至常温，用浓盐酸调节料液pH为2.0±0.2，料液中析出大量固体，过滤、烘干后，得到679gFmoc-Gly-Pro-OH，收率：90.1%（以Mca-Pro-OH计算）。
步骤四：合成Fmoc-Gly-Pro-ONp（中间体-4）
5L三口瓶中，加入240g Fmoc-Gly-Pro-OH、1200ml 1,4-二氧六环、93g HONP，温度保持0到10度，滴加DIC（85g）的1,4-二氧六环（44ml）溶液，滴完，升温至20-25度，经TLC检测反应完全后，得到Fmoc-Gly-Pro-ONp备用。
步骤五：合成Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5）
向步骤四所得中间体-4中加入1L水、88g羟脯氨酸，保持温度5-10度，滴加氢氧化钠控制料液pH为8.5-9.0，经TLC检测中间体-4反应完，加热浓缩反应液，然后将料液温度降至0度，调节料液pH为2.0±0.2，析出大量固体，过滤，滤饼烘干后得到 280g固体Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，收率90.8%。
步骤六：合成H-Gly-Pro-Hyp-OH（中间体-5的水解）
将 260g Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH 置于3L三口瓶中，加入520ml水、520ml 1,4-二氧六环，内温保持45-50度，用氢氧化钠控制料液pH为12.0-12.5，经TLC检测反应完全，将料液pH调为8.0±0.2，加热浓缩去除1,4-二氧六环，然后将料液pH调为8.5-9.0，加入DCM萃取杂质，水相再用浓盐酸调为3.0±0.2，加热浓缩反应液，经脱盐后，用甲醇：乙酸乙酯=1:1（体积比）的结晶溶剂结晶，过滤，烘干，得到228g H-Gly-Pro-Hyp-OH，HPLC纯度99.1%，收率84.2%（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
本发明上述实施例的工艺制得的三肽-29纯度达99以上，产品收率达84.2%-86.1%。
对比例1
本对比例的工艺步骤基本同实施例1，所不同的是，步骤六结晶溶剂中不采用惰性溶剂，将其中的乙醚替换为等质量的甲醇，同样结晶环境进行结晶，结果没有析出固体。
原因分析：由于甲醇的极性很大，对产品的溶解度很好，导致同样结晶环境下析不出固体。
对比例2
本对比例的工艺步骤基本同实施例1，所不同的是，将步骤六结晶溶剂中的甲醇替换为等质量的DMF，同样结晶环境进行结晶，得到三肽-29的纯度约为98.3%，收率约为36.4%（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH），收率较低。
原因分析：由于DMF的极性特别大，且对有机物以及部分无机物均具有很好的溶解度，所以同样结晶比例、环境下，结晶收率很低。
对比例3
本对比例的工艺步骤基本同实施例1，所不同的是，步骤六结晶pH控制在为2.5±0.2，得到三肽-29的纯度是99.1%，收率73.7%，（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
原因分析：收率明显降低是由于在该pH（2.5±0.2）条件下，H-Gly-Pro-Hyp-OH形成内盐的比例降低，所以导致其结晶收率低。
对比例4
本对比例的工艺步骤基本同实施例1，所不同的是，步骤六结晶pH控制在3.5±0.2，得到三肽-29的纯度是99.4%，收率69.6%，（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
原因分析：收率明显降低是由于在该pH（3.5±0.2）条件下，H-Gly-Pro-Hyp-OH形成内盐的比例降低，所以导致其结晶收率低。
对比例5
本对比例的工艺步骤基本同实施例1，所不同的是，步骤六结晶pH控制在4.0±0.2，得到三肽-29的纯度是99.4%，收率30.1%，（相对于Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH）。
原因分析：收率明显降低是由于在该pH（4.0±0.2）条件下，H-Gly-Pro-Hyp-OH形成内盐的比例明显降低，所以导致其结晶收率很低。

Claims (10)

1.一种三肽-29的生产工艺，其特征在于，以脯氨酸、氯乙酰氯、氨水、Fmoc-Cl、对硝基苯酚、DIC、羟脯氨酸为原料，首先脯氨酸与氯乙酰氯在碱性条件下反应制得中间体-1 Mca-Pro-OH，然后中间体-1与氨水反应制得中间体-2 H-Gly-Pro-OH，再将中间体-2与Fmoc-Cl在碱性条件下反应制得中间体-3 Fmoc-Gly-Pro-OH，中间体-3经与对硝基苯酚、DIC反应制得中间体-4 Fmoc-Gly-Pro-ONp，中间体-4再与羟脯氨酸反应制得中间体-5 Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，最后中间体-5经水解得到三肽-29 H-Gly-Pro-Hyp-OH。
2.根据权利要求1所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，中间体-1的合成如下：向一容器中加入脯氨酸Pro、水、有机溶剂，保持温度-5-0℃，向料液中滴加氯乙酰氯和有机溶剂的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、干燥，得Mca-Pro-OH。
3.根据权利要求2所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，所述有机溶剂采用甲苯、乙酸乙酯、THF、乙腈、1,4-二氧六环中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，中间体-2的合成如下：向一容器中加入Mca-Pro-OH及浓氨水，搅拌，反应完全后，加热浓缩反应液，得到H-Gly-Pro-OH。
5.根据权利要求1所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，中间体-3的合成如下：向一容器中加入H-Gly-Pro-OH及水、有机溶剂,温度保持在0到10℃，滴加Fmoc-Cl的有机溶剂溶液，保持料液pH在8.5-9，反应完全后，加热浓缩去除其中的有机溶剂，然后降温至常温，调节料液pH为2.0±0.2，析料、过滤、烘干，得到Fmoc-Gly-Pro-OH。
6.根据权利要求5所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，所述有机溶剂采用甲苯、乙酸乙酯、THF、乙腈、1,4-二氧六环中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，中间体-4的合成如下：向一容器中加入Fmoc-Gly-Pro-OH、HONP及有机溶剂，温度保持0到10度，滴加DIC的有机溶剂溶液，滴加完后，升温至20-25度，反应完全后，得到Fmoc-Gly-Pro-ONp。
8.根据权利要求1所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，中间体-5的合成如下：向Fmoc-Gly-Pro-ONp中加入水、羟脯氨酸，保持温度5-10度，控制料液pH为8.5-9.0，待Fmoc-Gly-Pro-ONp反应完，加热浓缩反应液，然后将料液温度降至0度以下，调节料液pH为2.0±0.2，析料、过滤、烘干，得到Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH。
9.根据权利要求1所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，中间体-5的水解反应如下：将Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH 置于一容器中，加入水、有机溶剂，温度保持45-50度，控制料液pH为12.0-12.5，反应完全后，将料液pH调为8.0±0.2，加热浓缩去除有机溶剂，然后将料液pH调为8.5-9.0，加入萃取溶剂萃取杂质，水相pH调至3.0±0.2，加热浓缩反应液，经脱盐后，用结晶溶剂结晶，过滤、烘干，得到三肽-29H-Gly-Pro-Hyp-OH。
10.根据权利要求9所述的三肽-29的生产工艺，其特征在于，所述有机溶剂采用甲苯、乙酸乙酯、THF、乙腈、1,4-二氧六环中的至少一种，萃取溶剂采用乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲叔醚、DCM中的至少一种，结晶溶剂采用甲醇与惰性溶剂的混合物，其中惰性溶剂采用乙醚、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、THF中的至少一种。
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